Αφηρημένο

Σκοπός

Ριζικές αλλαγές τόσο στην έκφραση και την γλυκοζυλίωση μοτίβο διαμεμβρανικών βλεννινών έχουν έχουν παρατηρηθεί σε διάφορες κακοήθειες. Εμείς και άλλοι έχουν δείξει ότι η MUC1 και MUC4, δύο διαμεμβρανικές βλεννινών, παίζουν ρόλο φρουρού στο κελί σηματοδότηση γεγονότων που οδηγούν πολλά επιθηλιακά κακοήθειες. Στην παρούσα μελέτη, μελετήθηκε η έκφραση του προφίλ MUC 1 και MUC4 στο μη νεοπλασματικής ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης, σε διάφορα κακοήθη νεοπλάσματα του ουροδόχου κύστης και σε κυτταρικές γραμμές καρκινώματος της ουροδόχου κύστης.

Υλικά και Μέθοδοι

Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε σε τομές ιστών από το ουροποιητικό βιοψίες κύστη, τα δείγματα εκτομή και μικροσυστοιχίες ιστού (TMAs) με μονοκλωνικά αντισώματα ειδικά για MUC1 και MUC4. Ερευνήσαμε επίσης την έκφραση τους σε κυτταρικές σειρές καρκινώματος ουροδόχου κύστης με RT-PCR και ανοσοκηλίδωση.

Αποτελέσματα

MUC1 εκφράζονται στην κορυφαία επιφάνεια ή σε ομπρέλα κύτταρα της κανονικής μη νεοπλασματικών ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης. Ισχυρή έκφραση του MUC 1 παρατηρήθηκε επίσης σε καρκίνωμα ουροθηλίου (UC). χρώση MUC1 αυξήθηκε από κανονικό ουροθήλιο (n = 27, 0,35 ± 0,12) σε ουροθηλιακό καρκίνωμα (UC, n = 323, H-score, 2.4 ± 0.22, p≤0.0001). Σε αντίθεση με MUC1, MUC4 εκφράστηκε σε όλα τα στρώματα του μη νεοπλασματικών ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης (n = 14, 2,5 ± 0,28), τόσο στην κυτταρική μεμβράνη και κυτόπλασμα. Σε σύγκριση με μη νεοπλαστικά ουροθηλίου, η απώλεια της έκφρασης MUC4 παρατηρήθηκε κατά την διάρκεια ουροθηλιακό καρκίνωμα (n = 211, 0,56 ± 0,06). Ωστόσο, η εκ νέου έκφραση MUC4 παρατηρήθηκε σε ένα υποσύνολο του μεταστατικού περιπτώσεις καρκινώματος ουροφόρων (μέση H-σκοράρει 0,734 ± 0.9).

Συμπέρασμα

Η έκφραση της MUC 1 είναι αυξημένη, ενώ εκείνη του MUC4 μειώθηκε σε UC σύγκριση με την κανονική μη νεοπλασματικών ουροθήλιο. Έκφραση των δύο MUC1 και MUC4, ωστόσο, είναι σημαντικά υψηλότερη σε ουροθηλιακά περιπτώσεις μεταστατικό καρκίνωμα σε σύγκριση με εντοπισμένη UC. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν διαφορική έκφραση των MUC1 και MUC4 κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκίνου της ουροδόχου κύστης

Παράθεση:. Kaur S, Momi Ν, Chakraborty S, ΓΔ Wagner, Χορν AJ, Lele SM, et al. (2014) αλλαγμένη έκφραση διαμεμβρανικών μουκίνες, MUC1 και MUC4, στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης: Παθολογική Επιπτώσεις στη διάγνωση. PLoS ONE 9 (3): e92742. doi: 10.1371 /journal.pone.0092742

Επιμέλεια: Rajvir Dahiya, UCSF /VA Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 13 Ιανουαρίου του 2014? Αποδεκτές: 25, Φεβρουαρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 26 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Kaur et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τις επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (RO1 CA 138791, U54 CA163120, UO1 CA111294, και Ρ50 CA127297). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνου της ουροδόχου κύστης (BCA) είναι η πέμπτη κοινή κακοήθεια στις Ηνωμένες Πολιτείες που αντιπροσωπεύουν σχεδόν 72.570 νέες περιπτώσεις και 15.210 θάνατοι σχετίζονται με τον καρκίνο κατά τη διάρκεια του 2013 [1]. Το καρκίνωμα ουροθηλίου (UC) είναι ο πιο κοινός τύπος του ιστολογική BCA που αντιπροσωπεύει & gt? 90% των νέων περιπτώσεων. UCS κατά τη στιγμή της διάγνωσης εύρος από επιφανειακές χαμηλού βαθμού αλλοιώσεις θηλώδες (που σχετίζεται με καλύτερη πρόγνωση) έως εξαιρετικά επεμβατική κακοήθη καρκινώματα (εξαιρετικά επιθετική με χαμηλή επιβίωση). Περίπου 70-80% των νεοδιαγνωσθέντων UCS είναι «μη-επεμβατική μυς» όπου η νόσος περιορίζεται στο βλεννογόνο της κύστης ή υμένα (στάδιο Ta /Τ1 σύμφωνα με την ταξινόμηση TNM) [2]. Περίπου το 10% -30% των όγκων αυτών προχωρήσετε στο «μυς-διεισδυτικής νόσου» ( «υψηλής ποιότητας» UC) (στάδιο Τ2 /Τ3) [2]. Χαμηλής ποιότητας θηλώδες καρκίνοι είναι γενικά μη επεμβατικές (μόνο & lt? 15% εισβάλλουν στο τοίχωμα της ουροδόχου κύστης) και έτσι επιδέχονται χειρουργική εκτομή. Ωστόσο, οι περιπτώσεις υψηλού βαθμού διηθητικό καρκίνωμα που συνδέεται με υψηλή πιθανότητα μετάστασης και θνησιμότητας [3], [4]. Κυτταρολογική εξέταση και κυστεοσκόπηση με βιοψία ιστού παραμένουν οι πιο ακριβείς διαθέσιμες μέθοδοι για την ανίχνευση BCA μέχρι σήμερα. Κυτταρολογία είναι εξαιρετικά ειδικό για το καρκίνωμα ουροθηλίου υψηλής ποιότητας, αλλά όχι για το καρκίνωμα χαμηλού βαθμού ουροθηλιακό.

Τα τελευταία χρόνια, παρεκκλίνουσα αλλαγές στην έκφραση και γλυκοσυλίωση βλεννινών έχουν αναφερθεί σε φλεγμονώδεις, προκαρκινικές και κακοήθεις συνθήκες [5 ] – [10]. Οι βλεννίνες είναι γλυκοπρωτεΐνες που χαρακτηρίζονται από την παρουσία υψηλού βαθμού Ο- και Ν-γλυκοζυλίωσης μαζί με εξαιρετικά επαναλαμβανόμενο βραχείες εκτάσεις των υπολειμμάτων αμινοξέων (που ονομάζεται ως «διαδοχικές επαναλήψεις») [9]. Αυτά είναι σε γενικές γραμμές χωρίζονται σε δύο κατηγορίες δηλαδή δεσμεύεται μεμβράνη βλεννών και εκκρίνεται /βλεννών σχηματισμού γέλης. Σημαντικά, MUC1 και MUC4 αντιπροσωπεύουν τις καλά χαρακτηρισμένο trans-μεμβράνης βλεννίνες παίζουν σημαντικούς ρόλους στην κυτταρική φυσιολογία. Λόγω της δομής τους και βιοχημική σύνθεση Αυτές οι βλεννίνες συμμετέχει σε λίπανση και ενυδάτωση της κυτταρικών επιφανειών, η προστασία από μικροοργανισμούς (βακτήρια και ιούς) και αποικοδομητικά ένζυμα [11]. Μεταβολή στην έκφραση και γλυκοσυλίωση μοτίβο MUC1 και MUC4 έχει παρατηρηθεί σε αρκετές επιθηλιακές κακοήθειες συμπεριλαμβανομένων του παγκρέατος, του μαστού, του παχέος εντέρου, του προστάτη και του καρκίνου του πνεύμονα [7], [9], [12], [13]. Έχουν δειχθεί ότι παίζουν έναν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη του όγκου, η ενδοκυτταρική και εξωκυτταρική σηματοδότηση, τις αλληλεπιδράσεις όγκου-στρωματικών, μετάσταση, και την αντίσταση σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες και στην ανοσολογική επιτήρηση [7], [11], [12], [14]. Η διαθεσιμότητα των ιδιαίτερα ειδικών αντιδραστηρίων (

π.χ.

Μονοκλωνικά αντισώματα), ορισμένες ικανά να αναγνωρίζουν μεταβληθεί γλυκομορφών κατέστησε βλεννίνες ελκυστικοί στόχοι για την έγκαιρη διάγνωση των επιθηλιακών κακοηθειών. Αλλοιωμένη έκφραση και ο εντοπισμός μοτίβο της MUC1 έχουν παρατηρηθεί κατά τη διάρκεια της εξέλιξης των κακοήθων νεοπλασμάτων της ουροδόχου κύστης [15] – [18], ωστόσο, μέχρι σήμερα υπάρχει έλλειψη πληροφοριών σχετικά με την κατάσταση της MUC4. Θεωρώντας προστατευτικά και λιπαντικά ρόλους τους, είναι σημαντικό να αξιολογηθεί λειτουργίες τους στην υγιή κύστη και τη μεταβολή στην έκφραση τους κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκινώματος ουροθηλιακό.

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε τα μοτίβα έκφρασης MUC1 και MUC4 σε μη νεοπλασματικά ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης και κακοήθη νεοπλάσματα των ιστών ουροδόχου κύστης σε μικροσυστοιχίες ιστού (ΤΜΑ) και τα τμήματα του ιστού από το ουροποιητικό βιοψίες κύστη και εκτομή δειγμάτων. Περαιτέρω, η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης αυτών των βλεννών και του βαθμού του όγκου (βαθμοί 1-4) εξετάστηκε για τον καθορισμό της διάγνωσης και φυσιολογική σημασία του TM βλεννινών κατά την παθογένεια της UC.

Υλικά και Μέθοδοι

Γραμμές των καρκινικών κυττάρων και δείγματα ιστών

Αρχείο φορμόλη σταθερά δείγματα ιστού BCA ελήφθησαν Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο τράπεζα ιστών. Το διοικητικό συμβούλιο αναθεώρηση βρήκε αυτή τη μελέτη, με αποχαρακτηριστούν βάση δεδομένων του, να εξαιρούνται από τη θεσμική αναθεώρηση συμβούλιο επιθεώρησης. Κύστη TMA αγοράστηκαν από US Biomax για χρώση MUC1 (cat # BL802), Accumax για MUC4 (cat # A215II) και της ουροδόχου κύστης ΤΜΑ (2004) (ένα ευγενές δώρο από τον Dr. Henry Frierson από το Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια Charlottesville VA). χρώση IHC πραγματοποιήθηκε με τη χρήση mAb HMFG2 (αντι-MUC1 αντίσωμα, ένα είδος δώρο από τον Dr. Gendler, Mayo Κλινικές) και mAb8G7 (αντι-MUC4 αντίσωμα, που δημιουργείται εναντίον διαδοχική επανάληψη πεπτιδίου, STGDTTPLPVTDTSSV στο εργαστήριό μας και που αντιδρούν με αμφότερα φυσική πρωτεΐνη και πεπτίδιο) [19]. κυτταρικές γραμμές καρκινώματος της ουροδόχου κύστης [Τ24 και ΗΤ1376, (που προέρχεται από την κύστη μεταβατικό κυτταρικό καρκίνωμα), TCCSup (που προέρχεται από ένα anaplatic καρκίνωμα μεταβατικού κυττάρου) scaber (προερχόμενο από την κύστη καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων) διατηρήθηκαν στην American Type Culture Collection (ATCC) που καθορίζεται καλλιέργεια μέσα συμπληρωμένα με 10% FBS και 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Gibco BRL, Grand Island, ΝΥ). Μέσα ανάπτυξης άλλαξε σε εναλλασσόμενες ημέρες και τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν σε 70% συρροή.

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Για την ανάλυση έκφρασης MUC 1 και MUC4 σε κακοήθη νεοπλάσματα του ουροδόχου κύστης, IHC διεξήχθη όπως περιγράφεται προηγουμένως για ΤΜΑ και ιστού τομές των δειγμάτων από την ουροδόχο κύστη [7]. Βιοψία και εκτομή δειγμάτων καρκινώματος ουροφόρων εξετάστηκαν από τους παθολόγους (δρχ. S Lele, AH Χορν, και ΓΔ Wagner σε UNMC) για να επιβεβαιώσετε τις διαγνώσεις και επιλέξτε αντιπροσωπευτικό μπλοκ για ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις. Για ιστός IHC, 4 μm τομές πάχους κόπηκαν από τεμάχια ιστού εμπεδωθεί με παραφίνη χρησιμοποιώντας μικροτόμο ιστού και τηρήθηκαν στους φορτισμένων γυάλινες διαφάνειες. Κύστη ΤΜΑ και τομές ιστών επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 56 ° C που ακολουθείται από αποπαραφινώσεως χρησιμοποιώντας επανειλημμένες πλύσεις ξυλολίου (5 λεπτά το καθένα) ακολουθούμενη από επανυδάτωση των ιστών με διαβαθμισμένη αλκοόλη. Μετά την επανυδάτωση, οι ιστοί επωάστηκαν με μεθανολικό διάλυμα 3% Η

2O

2 για απόσβεση της ενδογενούς ενεργότητας υπεροξειδάσης. επαγόμενη από θερμότητα ανάκτησης αντιγόνου διεξήχθη θέρμανση του δείγματος σε 0.01 Μ κιτρικού (ρΗ 6,0, 95 ° C) ρυθμιστικό διάλυμα για 15 λεπτά σε φούρνο μικροκυμάτων. Μετά ανάκτηση αντιγόνου, οι τομές δεσμεύτηκαν με ορό αλόγου (κιτ αντίσωμα ImmPRESS καθολική? Vector Laboratories) για 3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Οι πλάκες περαιτέρω επωάστηκαν με αντι-MUC 1 (HMFG2 σε 1:05 αραίωση του εμπλουτισμένου υπερκειμένου σε PBS), MUC4 αντίσωμα 8G7 (1:2000 αραίωση ενός 1,8 mg αποθέματος /ml σε PBS) [20] επί μία νύκτα στους 4 ° C. Μετά από τέσσερις εκπλύσεις με PBS-T (PBS που περιέχει 0.05% Tween 20), οι τομές επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα αντι-ποντικού (σετ αντίσωμα ImmPRESS καθολική? Vector Laboratories) για 30 λεπτά. και στη συνέχεια, το χρώμα αναπτύχθηκε με προσθήκη διαλύματος 3,3′-διαμινοβενζιδίνης (DAB kit υπόστρωμα? Vector Laboratories). Καστανοκόκκινο ίζημα έδειξε θετική ανοσο-αντιδραστικότητα. Τα πλακίδια βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη του Gill (Vector Laboratories), αφυδατώθηκαν σε διαβαθμισμένη αιθανόλη ακολουθούμενη από ξυλένιο και τοποθετήθηκαν με μέσο Vecta-mount στερέωσης (Vector Laboratories). Όλα τα πλακίδια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Nikon Eclipse Ε400 μικροσκόπιο (Nikon Corporation, Tokyo, Japan).

Κάθε πυρήνας ιστού αξιολογείται με τις uropathologists στο UNMC να εκτιμηθεί η παρουσία του όγκου και βαθμολόγησης της χρώσης. Εν συντομία, κάθε κηλίδα της συστοιχίας ιστού βαθμολογήθηκε με βάση την ένταση της χρώσης με κλίμακα από το 0 έως 3 (0-καθόλου χρώση, 1-ασθενή χρώση, 2-ενδιάμεσο χρώση, και 3-ισχυρή χρώση). Το ποσοστό των θετικών κυττάρων με μια δεδομένη ένταση για κάθε δείγμα προσδιορίσθηκε από τους παθολόγους. Το H-score [εύρος: 0 (καμία χρώση σε οποιοδήποτε κύτταρο) έως 3 (όλα τα κύτταρα χρώση με την υψηλότερη (3) Ένταση] υπολογίστηκε ως το άθροισμα του προϊόντος του χρώση ένταση (εύρος: 0-3) και ποσοστό χρώση των κυττάρων (εύρος: 0-1? 0-δεν κυττάρων βάφονται και 1-100% των κυττάρων βάφονται). Όπως ανά H-score εστιακή αντιδραστικότητα αντιστοιχεί στο σκορ H του ≤0.1, ήπια αντίδραση (Η βαθμολογία & gt? 0.1, αλλά μικρότερη ή ίσο με 1.0), μέτρια αντιδραστικότητα (H βαθμολογία & gt? 1.0 αλλά ≤2.0) και έντονη αντίδραση (Η βαθμολογία & gt?. 2.0) σε περίπτωση βιοψίες ιστού λόγω του περιορισμένου αριθμού κάθε τύπο ιστού (καλοήθης, καρκίνωμα in-situ και καρκίνωμα) παρόντες στη διαφάνεια βαθμολογήθηκε από την ένταση βαθμολογία μόνο. ​​σε μεταστατικό περιπτώσεις, τμήματα βαθμολογήθηκαν για την H-βαθμολόγησης παρόμοιο με κηλίδες ιστού.

Στατιστικές αναλύσεις

τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας MedCalc για την έκδοση των Windows 9.6.4.0 λογισμικού. Για τους σκοπούς της ανάλυσης, κάθε κηλίδα θεωρήθηκε ως ένα μεμονωμένο δείγμα. Ένταση της βλεννίνης έκφρασης θεωρήθηκαν ως συνεχείς μεταβλητές, ωστόσο το είδος της παθολογίας [UC, πλακώδες καρκίνωμα (SCC), αδενοκαρκίνωμα ή θηλώδες καρκίνωμα] , ο βαθμός του καρκίνου θεωρήθηκαν ως κατηγορικές μεταβλητές. Μία τιμή ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Απομόνωση ολικού RNA και ανάστροφη μεταγραφάση-πολυμεράσης

Αλυσιδωτή Αντίδραση

κυτταρικό RNA από τα καλλιεργημένα κύτταρα εκχυλίζεται με κιτ RNeasy σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (. Qiagen, Hilden, Germany). Ολικό RNA ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο υπεριώδους (Peqlab ND-1000? Peqlab, Erlangen, Germany) και την ποιότητα και την ακεραιότητα των δειγμάτων αξιολογήθηκαν σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 1,5%. 2 μg ολικού RNA από κάθε κυτταρική γραμμή BCA μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το πρώτου κλώνου κιτ σύνθεσης cDNA (Perkin Elmer, Branchburg, NJ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR διεξήχθη για MUC1, MUC4, και β-ακτίνη χρησιμοποιώντας ακόλουθα ζεύγη εναρκτήρα: MUC1 (εμπρόσθιος εκκινητής 5′-GAACTACGGGCAGCTGGACATC’-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής 5′-GCTCTCTGGGCCAGTCCTCCTG-3’), MUC4 (εμπρόσθιος εκκινητής 5 «-CGCGGTGG TGGAGGCGTTCTT-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής 5′-GAAGAATCCTGACAGCCTTCA-3′), και β-ακτίνης προς τα εμπρός εκκινητή (5’-TGGACATCCGCAAAGACCTG-3 ‘) και αντίστροφος εκκινητής (5′-CCGATCCACA CGGAGTACTT-3’) (IDT Cor -. alville, ΙΑ, ΗΠΑ)

Western-Blot ανάλυση

η ολική πρωτεΐνη εκχυλίζεται από κυτταρικές γραμμές BCA, επιλύονται και αναλύθηκαν με ανοσοστύπωση σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο. Εν συντομία, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ψυχρό-PBS, ξύνεται σε ρυθμιστικό RIPA (100 mM Tris, 5 mM EDTA, 5% ΝΡ40, ρΗ 8.0) που περιέχει κοκτέιλ αναστολέων πρωτεάσης (διαγνωστικά Roche, Mannheim, Germany) και αφέθηκε να λύουν για τουλάχιστον 30 λεπτά σε πάγο με διαλείπουσα περιδίνηση. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε περαιτέρω λύση από ένα κύκλο ψύξης-απόψυξης και φυγοκεντρήθηκαν στις 14.000 για 30 λεπτά στους 4 ° C. Τα υπερκείμενα απομακρύνθηκαν προσεκτικά και οι συγκεντρώσεις πρωτείνης προσδιορίστηκαν με Bio-Rad DC-kit εκτίμησης πρωτεΐνης. Για βλεννίνης ανοσοστύπωση, ηλεκτροφόρηση διεξήχθη επί 2% πηκτή SDS-αγαρόζης χρησιμοποιώντας ίσες ποσότητες δειγμάτων πρωτεΐνης υπό αναγωγικές συνθήκες. Για την β-ακτίνη, SDS-PAGE (10%) είχε τρέξει κάτω από παρόμοιες συνθήκες. Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF και ανιχνεύθηκαν με αντι-MUC 1 (1:05 ​​αραιωμένο υπερκείμενο mAbHMFG2 σε PBS) και MUC4 (1:1,000 αραίωση mAb8G7) αντισωμάτων. Μετά την επώαση με δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση αρμορακίας ποντικού (Amersham Biosciences Buckinghamshire, UK), σήμα ανιχνεύθηκε με ένα σετ αντιδραστηρίων ηλεκτροχημειοφωταύγειας (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).

Αποτελέσματα

Σε αυτό μελέτη, ερευνήσαμε το προφίλ έκφρασης του διαμεμβρανικού βλεννινών (MUC1 και MUC4) σε τομές ιστών καρκινώματος ουροθηλιακά και τρία ιστού TMAs. Περαιτέρω, τα επίπεδα έκφρασης αυτών των βλεννινών αξιολογήθηκαν σε κυτταρικές σειρές καρκινώματος ουροδόχου κύστης.

MUC1 Αναλύσεις έκφρασης κατά τη διάρκεια της κακοήθη νεοπλάσματα του Κύστης

έκφραση MUC1 στη μη νεοπλασματικών ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης.

Η πλειοψηφία των μη νεοπλασματικών ιστών κύστης κηλίδες από TMA (16/27 ή 59%) ήταν αρνητικά για την έκφραση MUC1 (βαθμολογία H = 0). Μικρά χρώση εστιακό παρατηρήθηκε σε ορισμένες περιπτώσεις 4/27 (15%). Στις υπόλοιπες θέσεις, ήπια θετικότητα παρατηρήθηκε (7/27 μέση H-στείλει 0,58 ± 0,29 σε μια κλίμακα από 0-3) (Εικ. 1Α). Συνολικά, η μέση H-score όλων των περιπτώσεων μαζί βρέθηκε να είναι 0,15 ± 0,1 (Πίνακας 1). Στις περισσότερες περιπτώσεις, έντονη χρώση MUC1 περιορίστηκε σε ομπρέλα κυττάρων με ασθενή χρώση στην υπόλοιπη κύτταρα του ουροθηλίου (Εικ. 1Α, κεφαλή βέλους). Ωστόσο, σε μερικές περιπτώσεις, μια έντονη χρώση MUC1 (4/27 ή 15%) παρατηρήθηκε επιφανειακό στρώμα του ουροθηλίου (Εικ. 1 Β, απεικονίζεται από το βέλος). Σε γενικές γραμμές, η χρώση ήταν ιδιαίτερα έντονη στα επιφανειακά κύτταρα ομπρέλα σε σχέση με τα άλλα στρώματα /κυττάρων των ουροφόρων οδών. Ένα παρόμοιο εύρημα ήταν γνωστή για τομές ιστών που συλλέγονται σε UNMC η οποία αποκάλυψε μέτρια έως έντονη χρώση για MUC1 (Ν = 3, μέση ένταση 1,7 ± 0,58, σημαίνει H-σκοράρει 1,7 ± 0,58), η οποία περιορίστηκε σε επιφανειακά κύτταρα στρώματος ή ομπρέλα.

τομές ιστών ουροδόχου κύστης όγκου ή κηλίδες ανιχνεύθηκαν με αντι-MUC 1 mAb (HMFG2) μετά από μη ειδική μπλοκάρισμα με ορό αλόγου. Όλες οι τομές εξετάστηκαν υπό μικροσκόπιο και η ανοσοαντιδραστικότητα αξιολογήθηκε με καφεκόκκινο χρώση. Αντιπροσωπευτικά μικροφωτογραφίες δείχνονται για MUC1 βάφτηκαν μη νεοπλασματικές ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης (amp A &? Β), χαμηλού βαθμού θηλώδες καρκίνωμα (C), καρκίνωμα της ουροδόχου κύστης in situ (D), και υψηλού βαθμού διηθητικό καρκίνο (Ε & amp? F). Σε κανονικό ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης, η έκφραση MUC1 περιορίστηκε στην ομπρέλα κύτταρα (φαίνεται από βέλος στον πίνακα Α και το μεγεθύνεται ένθετο) στην πλειοψηφία των δειγμάτων. Σε μερικά δείγματα, μια θήκη της MUC1 βλεννίνης παρατηρήθηκε πάνω ουροδόχου κύστης (βέλος στην 1Β). Σε θηλώδες καρκίνωμα χαμηλής ποιότητας, έντονη χρώση του MUC 1 παρατηρήθηκε στην επιφάνεια του αυλού των ουροφόρων οδών και χαμηλότερη ένταση της χρώσης παρατηρήθηκε στα άλλα στρώματα του ουροθηλίου (C). Σε ουροθηλιακό καρκίνωμα in situ, η έκφραση MUC 1 παρατηρήθηκε σε όλα τα στρώματα του ουροθηλίου, ωστόσο, χρώση ήταν συγκριτικά ισχυρότερη σε κύτταρα πιο κοντά στο αυλού συνόρων (D). Σε διηθητικό καρκίνωμα ουροθηλιακό υψηλής ποιότητας, η χρώση MUC1 παρατηρήθηκε σε κύτταρα που εισβάλλουν μεμονωμένα (Ε) ή ως μικρές ομάδες μέσα στον ίδιο υμένα (F).

Η

έκφραση MUC1 σε μη επεμβατικές θηλώδη ουροθηλιακά . καρκίνωμα και ουροθηλίου καρκίνωμα in situ (CIS)

θηλώδες καρκίνοι είναι γενικά μη επεμβατικές (μόνο & lt? 15% εισβάλλουν στο τοίχωμα της ουροδόχου κύστης) και έτσι επιδέχονται χειρουργική εκτομή. Για MUC1, περιπτώσεις θηλώδες καρκίνωμα περιορίστηκαν σε τομές ιστού και μόνο, καθώς δεν κηλίδα ιστού σε TMA αντιστοιχούσε σε επεμβατική ή μη επεμβατική θηλώδες καρκίνωμα. Μέτρια έως έντονη χρώση MUC 1 παρατηρήθηκε σε χαμηλή και υψηλή ποιότητας θηλώδες καρκίνωμα ουροθηλίου τόσο από τομές ιστών (μέση ένταση 2,9 ± 0,1 και η μέση H-στείλει 2,1 ± 0,83 σε μια κλίμακα από 0-3, Σχ. 1C). Έντονη χρώση παρατηρήθηκε MUC1 στην επιφάνεια του αυλού του uroepithelium σε χαμηλής ποιότητας θηλώδες καρκίνωμα ουροθηλιακό. Ένταση χρώσης και το ποσοστό θετικότητας αυξήθηκε από κύτταρα σε βασικά στρώματα για κορυφαία στρώματα της uroepithelium (Εικ. 1C, που απεικονίζεται με το βέλος). Περαιτέρω, τα κύτταρα επιφανειακό στρώμα έδειξαν περισσότερο έντονη χρώση σε σύγκριση με τα κύτταρα κάτω από ουροεπιθηλιακά στρώμα, επιδεικνύοντας μια ανομοιόμορφη κύτταρο σε πρότυπο χρώσης των κυττάρων (Εικ. 1 C). Σε περίπτωση καρκίνωμα in situ, χρώση έντονη MUC1 (μέση ένταση 2,9 ± 0,1 και η μέση H-στείλει 2,48 ± 0,74) παρατηρήθηκε (Ν = 10) στα τμήματα του ιστού (Εικ. 1ϋ).

έκφραση MUC1 στην πρωτοβάθμια και μεταστατικό καρκίνωμα ουροφόρων.

στις περιπτώσεις καρκινώματος ουροφόρων, χρώση MUC1 κυμαινόταν από καμία αντίδραση (Ν = 38 ή 12%), εστιακή αντιδραστικότητα (Ν = 12 ή 4%, σημαίνει H-σκοράρει 0.057 ± 0.01 ) έως μέτρια (Ν = 147 ή 46%, μέσος όρος Η-στείλει 1.02 ± 0.05) και έντονη ανοσοαντιδραστικότητα (Ν = 117 ή 37%, μέσος όρος Η-βαθμολογία 2.86 ± 0.02) (Εικ. 1 Ε και 1 F). Σε επεμβατική περιπτώσεις, η χρώση MUC1 παρατηρήθηκε σε εστίες (μονή ή φωλιά των κυττάρων) που υπάρχει εντός του θηλώδους πυρήνα ή στο ίδιο υμένα (Εικ. 1 Ε και 1 F), η κατανομή των MUC1 είναι τόσο μεμβρανώδη και κυτταροπλασματική.

έκφραση MUC 1 παρατηρήθηκε στο 66% (8/12) των μεταστάσεων από ένα πρωτεύον UC σε διάφορες τοποθεσίες

δηλαδή

. κοιλιακό τοίχωμα, πίσω, οι κόμβοι των οστών, του εγκεφάλου και της λέμφου (Σχ. 2Ε και F). Σε περίπτωση τμημάτων μεταστατικού ιστού (n = 28), η απόλυτη έκφραση της MUC 1 παρατηρήθηκε σε όλες τις περιπτώσεις μεταστατικού με μέσες H-βαθμολογία 1.91 ± 0.15 και η μέση ένταση του 2.72 ± 0.45. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα αυτά, κανένα έκφραση MUC 1 παρατηρήθηκε σε περιοχή κανονικής λεμφαδένα ενώ μεταστατικών κυττάρων εντός του λεμφαδένα έχουν θετική αντιδραστικότητα (Σχ. 2Ε). Η παρατηρούμενη έκφραση MUC1 μπορούν να ταξινομηθούν σε τρεις διαφορετικές μορφές χρώσης του αυλού της μεμβράνης (στη στιβάδα ομπρέλα κύτταρο) μόνο, του αυλού συν κυτταροπλασματική χρώση (σε ενδιάμεσα και βασικά στρώματα), ή χρώση μόνο απομονωμένα κύτταρα ή ομάδες κυττάρων.

Αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες δείχνονται για χρώση MUC1 σε πλακώδες καρκίνωμα (Α), κεράτινη μαργαριτάρια (Β), βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα αδενοκαρκίνωμα (Γ) (Δ), μετάσταση στα οστά (Ε), μεταστατικό καρκίνωμα ουροθηλίου σε λεμφαδένα (F). Ισχυρή μεμβρανώδη έκφραση της MUC 1 παρατηρήθηκε καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (Α) και επίσης σε κερατίνη μαργαριτάρια εντός του πλακώδους καρκινώματος (Β). Τόσο βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα (C) και το αδενοκαρκίνωμα έδειξαν ασθενή χρώση (D) για MUC1. Ισχυρή έκφραση του MUC 1 παρατηρήθηκε σε μεταστατικό καρκίνωμα ουροθηλίου σε οστό (Ε) και λεμφαδένα (F). Άποψη υψηλής μεγέθυνσης έδειξε ότι MUC1 εντοπίζεται τόσο κυτταρόπλασμα και μεμβράνη στις μεταστάσεις (ένθετο του Ε & amp? F).

Η Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, παρατηρήθηκε

σημαντική διαφορά σε H-score της χρώσης MUC1 από το βαθμό 1 (0,51 ± 0,1) βαθμού 2 όγκους (1,62 ± 0,155). Περαιτέρω H-score για χρώση MUC1 αυξήθηκε από βαθμού 3 σε βαθμό 4 όγκων.

Η

έκφραση MUC1 στο πλακωδών κυττάρων καρκίνωμα (SCC), αδενοκαρκίνωμα και βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα της ουροδόχου κύστης.

Μέτρια για παρατηρήθηκε έντονη χρώση σε SCC (Ν = 33, 65% των περιπτώσεων) με τη μέση H-στείλει 2,33 ± 0,16 (Εικ. 2Α), ενώ άλλοι έδειξαν μόνο ήπια θετικότητα για MUC1 (Ν = 18 ή 35%, η μέση H -score 0,66 ± 0,11, η μέση ένταση 1,3 ± 0,11). Μέτρια χρώση για MUC1 παρατηρήθηκε σε κερατίνη μαργαριτάρια που είναι ιδιαίτερο χαρακτηριστικό του βαθμού 1 πλακώδες καρκίνωμα (Σχ. 2Β, απεικονίζεται με το βέλος). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην ένταση χρώσης μεταξύ βαθμού 2 (Ν = 6, σημαίνει H-score 2 ± 0,3) και βαθμού 3 SCC (Ν = 12, μέση H-score 3.0 ± 0.7). Από τις 12 αδενοκαρκινώματα κηλίδες που εξετάστηκαν, 7 έδειξαν ασθενή χρώση MUC1 (Σχ. 2C), ενώ σε άλλες η έκφραση ήταν εντελώς απούσα. Πλειοψηφία των κηλίδων ιστού από βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα ήταν ελαφρώς θετικά για MUC1 (μέση H-score, 0,62 ± 0,14) (Εικ. 2D).

Αναλύσεις Έκφραση MUC4 κατά τη διάρκεια κακόηθες νεόπλασμα της ουροδόχου κύστης

έκφραση MUC4 στην μη-νεοπλασματικές ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης.

Όταν αναλύθηκαν σε φυσιολογικούς ιστούς (Ν = 14), υψηλή έκφραση MUC4 παρατηρήθηκε στο ουροθήλιο της μη νεοπλασματικών ουροδόχου κύστης (Σχ. 3Α, η μέση ένταση 2,54 ± 0,21 και σημαίνει H-σκοράρει 2,54 ± 0,21) (Πίνακας 3). Η έκφραση του MUC4 (στην κανονική ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης) παρατηρήθηκε τόσο στην μεμβράνη και κυτόπλασμα των κυττάρων επιθηλίου με ισχυρότερη έκφραση στις κυτταρικές μεμβράνες από κυτταρόπλασμα. Ωστόσο, σε αντίθεση με MUC1, η χρώση για MUC4 ήταν ομοιόμορφη μέσα από όλα τα στρώματα του ουροθηλίου (Εικ. 3Α). Είναι ενδιαφέρον ότι, μια ισχυρή έκφραση του MUC4 παρατηρήθηκε ακόμη και σε invaginated συσσωματώματα ουροθηλιακά κύτταρα γνωστά ως «φωλιές von Brunn το» (Εικ. 3Β, που απεικονίζεται με το βέλος).

τομές ιστού της ουροδόχου κύστης και του όγκου μικροσυστοιχιών ιστού διερευνήθηκαν με αντι -MUC4 mAb (8G7) μετά από μη ειδική μπλοκάρισμα με ορό αλόγου. Όλες οι τομές εξετάστηκαν υπό μικροσκόπιο και η ανοσοαντιδραστικότητα αξιολογήθηκε με καφεκόκκινο χρώση. Αντιπροσωπευτικά μικροφωτογραφίες δείχνονται για MUC4 βάφονται κανονική μη νεοπλασματικά ουροθηλίου (Α), φωλιές von Brunn του (Β), μη επεμβατική θηλώδες καρκίνωμα ουροθηλίου (C), ουροθηλιακά καρκίνωμα in situ (D), χαμηλής (Ε) και υψηλού βαθμού καρκίνωμα ουροθηλιακό (ΦΆ). Ισχυρή θετικότητα του MUC4 παρατηρήθηκε σε διάφορες ουροθήλιο στρώμα ουροδόχου κύστης (Α). Μεγεθυμένη εικόνα δείχνει ότι η κατανομή των MUC4 είναι τόσο μεμβρανώδη και κυτταροπλασματική. Κύτταρα σε κύτταρα φωλιά von Brunn έδειξε ισχυρή μεμβρανική χρώση MUC4 (Β). Η απώλεια της έκφρασης MUC4 παρατηρήθηκε κατά μη επεμβατικό θηλώδες καρκίνωμα (C), και καρκίνωμα in situ (D). Τόσο καρκίνωμα ουροθηλιακά χαμηλού και υψηλού βαθμού έδειξαν απώλεια της έκφρασης MUC4 (amp Ε &? F)

Η

έκφραση MUC4 σε μη επεμβατικές και επεμβατικές θηλώδες καρκίνωμα ουροθηλιακά και ουροθηλιακά καρκίνωμα in situ (CIS)..

Αν και περιορισμένες περιπτώσεις (Ν = 6) των μη-επεμβατική θηλώδες καρκίνωμα ήταν παρόντες σε σημεία ιστού, η πλειοψηφία των οποίων ήταν εντελώς αρνητική (Ν = 4, ένταση-score 0), ενώ άλλα έχουν μερική θετικότητα (Ν = 2, μέση ένταση-score 2.5). Επεμβατική θηλώδες καρκίνωμα (Ν = 2) έδειξε πλήρη απώλεια της έκφρασης MUC4 (Intensity-score = 0). Περαιτέρω, πλήρης απώλεια της έκφρασης MUC4 παρατηρήθηκε σε αμφότερα μη επεμβατικές (Εικ. 3C) και επεμβατική περιπτώσεις θηλώδους καρκινώματος (Ν = 10, μέση ένταση 0,8 ± 0,41? Μέση H-στείλει 0,31 ± 0,39). έκφραση MUC4 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε CIS από ΤΜΑ (Ν = 4, μέση H-score 0, πίνακας 3), καθώς και σε περίπτωση τομές ιστών (Ν = 10? μέση ένταση 0,3 ± 0,1? ρ = 0,02 και η μέση H-score 0.12 ± 0.06) σε σύγκριση με το μη νεοπλασματικών ουροθηλίου (Σχ. 3D). Συνολικά, η απώλεια της έκφρασης MUC4 παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια επεμβατικών και μη επεμβατικών θηλώδες καρκίνωμα.

έκφραση MUC4 σε διηθητικό καρκίνωμα ουροθηλιακό και μετάσταση.

πλειονότητα των περιπτώσεων, παρατηρήθηκε εστιακός έκφραση του MUC4 σε καρκίνωμα ουροφόρων (Ν = 122 ή ​​58%, σημαίνει Η-βαθμολογία, η μέση ένταση 0), ενώ άλλες περιπτώσεις έδειξε ήπια θετικότητα (Ν = 89 ή 42% των περιπτώσεων, σημαίνει H-σκοράρει 0,68 ± 0,14, η μέση ένταση 0,91 ± 0,19). Συνολικά, η απώλεια της έκφρασης MUC4 παρατηρήθηκε σε τόσο χαμηλές και υψηλού βαθμού καρκίνωμα επεμβατική ουροθηλιακό (Σχ. 3Ε και 3F). έκφραση MUC4 ήταν σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται σε κύτταρα καρκινώματος σε σύγκριση με την μη-νεοπλαστική ουροθηλίου (μέση H-score στο μη νεοπλασματικών ουροθήλιο της ουροδόχου κύστης και UC είναι 2,54 ± 0,21 [ρ & lt? 0,0001], και 0,47 ± 0,05 αντίστοιχα) (δεδομένα από TMA). Είναι ενδιαφέρον ότι, σε σύγκριση με το ουροθηλιακό καρκίνωμα που δεν διαθέτει την έκφραση MUC4, υψηλότερο ποσοστό των μεταστατικών περιπτώσεων βρέθηκαν να είναι θετικά για MUC4. Μεταξύ όλων (Ν = 28) μεταστατικό περιπτώσεις, 57% των περιπτώσεων (Ν = 16) έδειξε ασθενές σε ήπια χρώση MUC4 (μέση H-στείλει 1,27 ± 0,27) (Εικ. 4D-F), ενώ κανένας να εστιακή έκφραση παρατηρήθηκε στο 43% των περιπτώσεων (Ν = 12? μέση ένταση = 0 και μέση H-σκοράρει 0,025 ± 0,02). Τόσο κυτταροπλασματική μεμβράνη και χρώση MUC4 παρατηρήθηκε σε διάφορες μεταστατικό περιπτώσεις (4D-F).

Αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες δείχνονται για χρώση MUC4 σε καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (Α), αδενοκαρκίνωμα (Β), βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα (C) και μεταστατικό ουροθηλιακό καρκίνωμα λεμφικό κόμβο (D & amp? Ε), και πνεύμονα καρκίνωμα μεταστατικό urothelial (F). περιπτώσεις Πλακώδες καρκίνωμα έδειξαν μέτρια έκφραση του MUC4 ενώ MUC4 βρέθηκε να είναι απούσα σε αδενοκαρκίνωμα. Εστιακή έως μέτρια έκφραση του MUC4 παρατηρήθηκε σε μεταστατικό καρκίνωμα ουροθηλίου στα διάφορα όργανα. Υψηλή άποψη ισχύος έδειξε ότι χρώση μοτίβο είναι τόσο μεμβρανώδη και κυτταροπλασματική κατά τη διάρκεια της μετάστασης.

Η

Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4, καμία σημαντική διαφορά στην H-score της χρώσης MUC4 παρατηρήθηκε από βαθμού 2 (0,66 ± 0,17) με βαθμό 4 όγκων (0,58 ± 0,19).

η

έκφραση MUC4 στο πλακώδες καρκίνωμα (SCC) και το αδενοκαρκίνωμα της ουροδόχου κύστης.

από τα 51 σημεία SCC που εξετάστηκαν (σε η TMA), εστιακή θετικότητα παρατηρήθηκε στο 38% των περιπτώσεων (Ν = 19, μέση H-σκοράρει 0,061 ± 0,009), ήπια θετικότητα στο 42% των περιπτώσεων (Ν = 21, μέση H-σκοράρει 0,59 ± 0,09) και έντονη αντιδραστικότητα σε 20 % των περιπτώσεων (Ν = 10, μέση H-στείλει 2,24 ± 0,13) (Σχ. 4Α). Ισχυρή μεμβρανώδης χρώση παρατηρήθηκε σε πλειονότητα των κυττάρων με λίγα κύτταρα που δείχνουν κυτταροπλασματική χρώση. Σε MUC4 θετικές περιπτώσεις, όλα επεμβατική εστίες SCC μέσα στο χόριο έδειξαν ομοιόμορφη χρώση (Εικ. 4Α). Καμία σημαντική συνεργασία σχέση θα μπορούσε να αξιολογηθεί μεταξύ της έκφρασης MUC4 και την ποιότητα του ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα οφείλεται σε περιορισμένες πληροφορίες σχετικά με βαθμό του όγκου των υποθέσεων. Αν και ο αριθμός των τμημάτων ιστού ήταν περιορισμένος για αδενοκαρκίνωμα (Ν = 8), καθόλου ή δεν παρατηρήθηκε εστιακή αντιδραστικότητα MUC4 (μέση H-στείλει 0.4 ± 0.22) (Εικ. 4Β). Ομοίως, βλεννώδες αδενοκαρκινώματα βρέθηκαν επίσης να είναι αρνητικά για έκφραση MUC4 (Εικ. 4C).

Έκφραση MUC1 και MUC4 στην κύστη Καρκίνωμα Κυτταρικές Γραμμές

Μετά την ανάλυση της έκφρασης του βλεννινών σε διάφορες παθολογίες κύστη με ανοσοϊστοχημεία, η έκφραση της MUC 1 και MUC4 αναλύθηκε σε mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές καρκινώματος ουροδόχου κύστης (Σχ. 5, πάνελ Α-C). Ο πίνακας περιλαμβάνει τέσσερις κύστης κυτταρικές γραμμές καρκινώματος-Τ24, TCCSup, ΗΤ1376 και scaber. Ποσοτική RT-PCR για MUC1 και MUC4 αποκάλυψε ότι όλες οι κυτταρικές σειρές εκτός Τ24 εκφράζεται MUC1 και MUC4 (Σχήμα 5Α & amp?. Β). Μελέτες ανοσοκηλίδωση χρησιμοποιώντας αντι-MUC 1 αντισωμάτων (HMFG2) και αντι-MUC4 αντίσωμα (8G7) έδειξε διαφορική έκφραση των MUC 1 και MUC4 σε TCCSup, κυτταρικές σειρές ΗΤ1376 scaber και (Εικ. 5C). Αριθ έκφραση της MUC 1 και MUC4 παρατηρήθηκε σε Τ24 κύστη κυτταρική γραμμή καρκινώματος. Περαιτέρω, οι διαφορετικές γλυκομορφές του MUC4 παρατηρήθηκαν σε πλακώδη κυτταρική γραμμή καρκινώματος σε σύγκριση με κυτταρικές σειρές TCC.

αναλύσεις Ποσοτική RT-PCR του MUC 1 (Α) και MUC4 (Β) έδειξε ότι όλοι κυτταρική γραμμή καρκινώματος κύστης εκτός Τ24 εκφράζει MUC1 και MUC4. Υψηλότερη έκφραση και των δύο MUC1 και MUC4 παρατηρήθηκε στην κυτταρική σειρά όγκου ΗΤ1376. Για τις αναλύσεις έκφρασης βλεννίνης MUC 1 και MUC4 σε επίπεδο πρωτεΐνης, η πρωτεΐνη λύματα από όλες τις κυτταρικές σειρές καρκινώματος ουροδόχου κύστης αναλύθηκαν επί πήγματος αγαρόζης 2% και ανιχνεύθηκαν με αντι-MUC 1 (HMFG2) και αντι-MUC4 (8G7) αντισώματα (Πίνακας C) . β-ακτίνη διαχωρίστηκαν σε 10% SDS-PAGE χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος φόρτωσης (Πίνακας C). Αριθ έκφρασης οποιουδήποτε βλεννίνης MUC 1 και MUC4 παρατηρήθηκε σε Τ24 ενώ άλλες κυτταρικές γραμμές εξέφρασαν τόσο τα βλεννίνες. (D) σε μορφή πίνακα παραστάσεις της έκφρασης MUC1 και MUC4 κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκινώματος της ουροδόχου κύστης. Σημαντικές αλλαγές στην έκφραση και των δύο MUC1 και MUC4 παρατηρήθηκαν κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκινώματος ουροθηλιακό. Προοδευτική αύξηση στην έκφραση MUC1 παρατηρήθηκε από διάφορα στάδια και τους βαθμούς του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, ενώ η έκφραση του MUC4 μειώθηκε με την εξέλιξη της νόσου. Σε ένα υποσύνολο του μεταστατικού καρκινώματος περιπτώσεις ουροθηλιακά, η έκφραση του MUC4 ανιχνεύθηκε.

Η

Συνολικά, βλεννίνη MUC1 και MUC4 αναλύσεων σε TMA καρκίνο της ουροδόχου κύστης και τομές ιστών έδειξε ότι η έκφραση του MUC 1 είναι αυξημένη ενώ εκείνη του MUC4 μειώθηκε σε UC σύγκριση με την κανονική μη νεοπλασματικών ουροθήλιο. Έκφραση των δύο MUC1 και MUC4, ωστόσο, είναι σημαντικά υψηλότερη σε περιπτώσεις μεταστατικό καρκίνωμα ουροθηλίου σύγκριση με εντοπισμένη UC (Σχ. 5D).

Συζήτηση

ανώμαλη έκφραση, ο εντοπισμός και η γλυκοζυλίωση βλεννινών είναι χαρακτηριστικές εκδηλώσεις πολλαπλών κακοήθειες (παγκρέατος, των ωοθηκών, του προστάτη και του στομάχου, του πνεύμονα, και μαστού). Μεταξύ των διαφόρων μελών της οικογένειας, MUC1 και MUC4 εμπλέκονται στην αύξηση του όγκου, ενδοκυτταρικών και εξωκυτταρικών σηματοδότηση, τις αλληλεπιδράσεις όγκου-στρωματικών, μετάσταση, και την αντίσταση σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες και σε ανοσία [10], [12]. Αναλυτικές πληροφορίες σχετικά με την έκφραση αυτών των βλεννινών λείπει σε καρκίνωμα ουροφόρων. Η παρούσα μελέτη εξέτασε την έκφραση των ΤΜ βλεννινών MUC1 και MUC4 στην κύστη μικροσυστοιχιών ιστό, τομές ιστού και κυτταρικές γραμμές καρκινώματος της ουροδόχου κύστης. Ενώ παρατηρήθηκαν παρεκκλίνουσα αλλαγές στην έκφραση και εντοπισμός μοτίβο MUC1 μεταξύ καλοήθων και κακοήθων περιπτώσεων, σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω της MUC4 παρατηρήθηκε κατά την διάρκεια καρκίνωμα ουροθηλίου σύγκριση με τις κανονικές ή /και καλοήθεις ιστούς ουροδόχου κύστης.

MUC 1 είναι μία δεσμευμένη σε μεμβράνη

O

γλυκοπρωτείνη που εκφράζεται στο βασικό επίπεδο στα περισσότερα επιθηλιακά κύτταρα [21]. Η απορρύθμιση της έκφρασης του MUC 1 είναι ένα σημαντικό χαρακτηριστικό των διαφόρων τύπων καρκίνου και φλεγμονωδών νόσων.