Ασθενής

Αφηρημένο

Ιστορικό

Η τοποϊσομεράση Ι (Top1) είναι ο στόχος του αναστολέα Top1 χημειοθεραπεία. Η

TOP1

γονίδιο, που βρίσκεται στο 20q12-q13.1, συχνά ανιχνεύεται σε υψηλές αριθμούς αντιγράφων σε καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC). Η παρούσα μελέτη διερευνά το μηχανισμό, τη συχνότητα και την προγνωστική επίδραση των

TOP1

γονίδιο εκτροπές στο στάδιο ΙΙΙ CRC και πώς αυτά μπορούν να ανιχνευθούν από φθορίζοντα in situ υβριδισμού (FISH).

Μέθοδοι

Εννέα CRC κυτταρική σειρά spreads μετάφαση αναλύθηκαν με FISH με ένα

TOP1

καθετήρα σε συνδυασμό με έναν καθετήρα αναφοράς που θα καλύπτει είτε το κεντρομερική περιοχή του χρωμοσώματος 20 (CEN-20) ή χρωμοσώματος 2 (CEN-2) . τομές ιστών από 154 ασθενείς σταδίου ΙΙΙ λάβει προηγούμενη χημειοθεραπεία, CRC, προηγουμένως μελετηθεί με

TOP1 /

CEN-20, αναλύθηκαν με

TOP1 /

CEN-2. Σχέσεων μεταξύ της κατάστασης των βιοδεικτών και τη συνολική επιβίωση (OS), ο χρόνος μέχρι την υποτροπή (ΤΤΡ) στο CRC και χρόνο για να τοπικής υποτροπής (LR? Καρκίνο του ορθού μόνο). Προσδιορίστηκαν

Αποτελέσματα

TOP1

εκτροπές παρατηρήθηκαν σε τέσσερις μεταφάσεις κυτταρική γραμμή. Σε όλες τις κυτταρικές σειρές CEN-2 βρέθηκε να αντανακλά τα επίπεδα πλοειδίας χρωμοσωμική και ως εκ τούτου η

TOP1

/CEN-2 συνδυασμός ανιχνευτή επιλέχθηκε για τον εντοπισμό

κέρδη TOP1

γονίδιο

(TOP1 /

CEN-2≥1.5). Εκατόν τρεις ασθενείς (68,2%) είχαν

TOP1

κέρδος, εκ των οποίων 15 ασθενείς (14,6%) έτρεφε μια ενίσχυση (

TOP1 /

CEN-20≥2.0).

TOP1

γονίδιο κέρδος δεν έχει καμία σχέση με κλινικά σημεία, ενώ

TOP1

ενίσχυση έδειξε μια μη σημαντική τάση προς μεγαλύτερη TTR (HR πολλών μεταβλητών: 0,50, p = 0,08). Μόλις ενισχύεται περιπτώσεις διαχωρίζονται από άλλες περιπτώσεις κέρδος γονιδίου, μη ενισχυμένο αυξήσεις γονίδιο (

TOP1

/CEN-2≥1.5 και TOP1 /CEN-20 0.8) παρατηρήθηκαν.

Η

3.3.1 Προσδιορισμός

TOP1

κατάσταση.

Για την αναγνώριση δείγματα που φιλοξενούν ένα

TOP1

γονίδιο αύξηση του αριθμού αντιγράφων, ένας

TOP1

/CEN-2 αναλογία cut-off 1,5 εφαρμόστηκε. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3, τα δείγματα που παράγουν αναλογίες ίσες ή πάνω από αυτό το cut-off έλαβε το

TOP1

καθεστώς «Κέρδος», ενώ εκείνοι κάτω ονομάστηκαν «

TOP1

Normal». Αρχικά, 103 ασθενείς (68,2%) έχουν χαρακτηριστεί ως «Κέρδος» χρησιμοποιώντας αυτό το cut-off.

Κόκκινη γραμμή δηλώνει

TOP1

γονίδιο σήματος και πράσινη κουκκίδα δηλώνει κεντρομερική σήμα. Τα παραδείγματα βασίζονται σε CRC αποτελέσματα κυτταρική σειρά εταφάσεως – τρισωμία (SW620), pentasomy (Colo-205), 20q isochromosome σχηματισμό (ΗΤ-29) και 20q κέρδος (KM12)

Η

Μόλις δείγματα όγκων που φιλοξενούν. ένα επιπλέον αντίγραφο του

TOP1

εντοπίστηκαν, τα στοιχεία για

TOP1

/CEN-20 χρησιμοποιήθηκε για να διαλευκανθεί ο μηχανισμός της

TOP1

αύξηση αντίγραφο γονιδίου. Με την εφαρμογή ενός

TOP1

/CEN-20 δείκτης αποκοπής των 2.0 να γίνει διάκριση μεταξύ των δειγμάτων όπου

TOP1

γονίδιο κέρδος συμβαίνει ανεξάρτητα από το CEN-20 (

TOP1

/CEN -20≥2.0) από εκείνες όπου το κέρδος του γονιδίου συμβαίνει λόγω aneusomies ή 20q isochromosome σχηματισμό (

TOP1

/CEN-20 2.0), δείγματα με

TOP1

κέρδος θα μπορούσε να διχοτομήθηκε περαιτέρω σε ενισχυμένο και μη ενισχυμένο υποομάδες. Ως εκ τούτου, τα δείγματα που παράγουν ένα

TOP1

/CEN-2 αναλογία ίση ή μεγαλύτερη από 1,5 και

TOP1

/CEN-20 αναλογία ίση ή μεγαλύτερη των 2,0 ονομάστηκαν «

TOP1

ενίσχυση », ενώ για τα άτομα κάτω των 2,0 δόθηκε μια«

TOP1

μη-ενισχυμένο καθεστώς Κέρδος »(βλ. Σχήμα 3). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, η πλειοψηφία (58,4%) των δειγμάτων του όγκου έλαβε

TOP1

μη ενισχυμένο κατάσταση Gain. Όλα τα δείγματα που ταξινομούνται ως

TOP1

Ενίσχυση βρέθηκαν επίσης παράγουν ένα

TOP1

/CEN-2 αναλογία άνω του 2,0 (βλέπε Πίνακα 3).

Η

Για να βεβαιωθείτε ότι η κατηγοριοποίηση των δειγμάτων σε υποομάδες, σημαίνει CEN-2 και CEN-20 σήματα σε πυρήνες όγκου συγκρίθηκαν με αντίστοιχα μέσα τους σε ανεπηρέαστη βλεννογόνο του παχέος εντέρου, τα αποτελέσματα των οποίων παρατίθενται στον πίνακα 2. τα δείγματα με μέση CEN-2 και CEN-20 σε η διπλοειδή φάσμα ανήκε σε 21/34 (61,8%) περιπτώσεις στο

TOP1

Κανονική κατηγορία. Κοντά-τριπλοειδείς και CEN-20 aneusomic περιπτώσεις συναντάται συχνότερα στα δείγματα που ταξινομούνται ως

TOP1

μη-ενισχυμένο Gain. CEN-2 ανευσωμίας παρατηρήθηκε σε 19 (12,6%) περιπτώσεις.

3.3.2 Σύνδεσης με την έκβαση των ασθενών.

Η σχέση μεταξύ της κατάστασης των βιοδεικτών και την έκβαση των ασθενών είχε διερευνηθεί και στις δύο μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική μοντέλα . Σε αυτή την ομάδα ασθενών, υπήρξαν 112 θάνατοι από όλες τις αιτίες και 88 υποτροπές συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου-ειδικών θάνατοι μέσα σε πέντε χρόνια [15].

TOP1

αντιγράψετε τον αριθμό, από μόνη της, δεν συσχετίστηκε σημαντικά με το OS, TTR ή LR (βλέπε Πίνακα 4). Υψηλότερες CEN-2 αριθμούς αντιγράφων σχετίστηκαν με καλύτερη πρόγνωση με το OS ως κλινικό τελικό σημείο στην πολυπαραγοντική ανάλυση (HR: 0,38, 95% CI: 0,15 – 0,98, p = 0,04), ενώ μόνο μια τάση παρατηρήθηκε στην μονοπαραγοντική ανάλυση (HR : 0,49, βλέπε πίνακα 4)

Η

Αρχικά, οι ασθενείς που φέρουν

TOP1

αυξήσεις (

TOP1

Gain, βλέπε σχήμα 3), σε σύγκριση με εκείνους που δεν έχουν (..

TOP1

Normal). Κέρδος του

TOP1

δεν συσχετίστηκε σημαντικά με το OS ή TTR τόσο στην μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση (βλέπε Πίνακα 4). Οι ασθενείς με

TOP1

ενισχύσεις (

TOP1

/CEN-20≥2.0) αρχικά σε σύγκριση με μη ενισχυμένο περιπτώσεις (

TOP1

Κανονική και

TOP1

μη ενισχυμένο Gain υποομάδες συνδυάζονται). Ενίσχυση του

TOP1

δεν συσχετίστηκε σημαντικά με το OS ή TTR, αν και πλησίασε σημασία για TTR στην πολυπαραγοντική ανάλυση (HR: 0,50, 95% CI: 0,23 – 1,09, p = 0,08). Ανάλυση του

TOP1

ενισχύσεις σε σχέση με την LR απέτυχε λόγω ενός πολύ περιορισμένου αριθμού των γεγονότων. Πρόσθετες cut-offs για τους δύο συνδυασμούς ανιχνευτή ερευνήθηκαν και τα αποτελέσματα παρατίθενται στον Πίνακα 4.

Μετά την αρχική ανάλυση των δεδομένων, δείγματα ταξινομήθηκαν σε υποομάδες ανάλογα με την παρουσία και το είδος των

TOP1

αύξηση (βλέπε Εικ. 3, που παρατίθενται στον πίνακα 3). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 5, δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ του

TOP1

Κανονική,

TOP1

μη ενισχυμένο Gain και

TOP1

Ενίσχυση υποομάδες με λειτουργικό σύστημα ως τελικό σημείο τόσο η μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Με TTR ως κλινική παράμετρο,

TOP1

μη ενισχυμένα κέρδη παρουσίασαν μια τάση προς μικρότερη TTR (HR: 1,57, 95% CI: 0,97 – 2,55, p = 0,07) στην μονοπαραγοντική ανάλυση, και μια παρόμοια, αλλά ασθενέστερη, τάση που παρατηρήθηκε στην πολυπαραγοντική ανάλυση (HR: 1,49).

TOP1

ενισχύσεις δεν παρουσιάζει καμία σημαντική σχέση προς TTR σε σύγκριση με το

TOP1

Κανονική βασική υποομάδα. Ένα οικόπεδο Kaplan-Meier για αυτές τις σχέσεις μπορούν να προβληθούν στο Σχ. 4Β

Α (αριστερά):. OS, Β (δεξιά):. TTR

Η

Οδηγίες βαθμολόγησης 3.4 TOP1

Η δυνατότητα βαθμολόγησης λιγότερους πυρήνες στον προσδιορισμό του

TOP1

κατάσταση παρουσιάζει μια ευκαιρία να μειωθεί ο φόρτος εργασίας του παρατηρητή. Για να προσδιορίσετε αν αυτό ήταν δυνατό, την κατάσταση των

TOP1

/CEN-2 και

TOP1

/CEN-20 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας 10 ή 20 πυρήνες και σε σύγκριση με την κατάσταση αναλογία μετά την ένταξη όλων σχετικές πυρήνες. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, σκοράροντας ένα μειωμένο αριθμό των πυρήνων, όπως μόνο 10 ή 20 πυρήνων για να καθορίσει

TOP1

/CEN-2 κατάσταση (cut-off 1,5) που κατατάσσονται δείγματα με μέτρια συμφωνία (0.76 και 0.91, αντίστοιχα), οι οποίες αυξήθηκαν με την εισαγωγή των οριακά χρονικά διαστήματα, όπου θα πρέπει να σημειωθούν επιπλέον πυρήνες (βλέπε παράγραφο 2.5.1). Για την ανίχνευση του

TOP1

ενισχύσεις (cut-off: 2.0), συμφωνία ήταν σχετικά υψηλό (10 πυρήνες: 0,96, 20 πυρήνες: 0,99) και δεν είχε βελτιωθεί με τη χρήση οριακά χρονικά διαστήματα. Επιπλέον, οι εναλλακτικές cut-offs ερευνήθηκαν, τα αποτελέσματα της οποίας παρατίθενται στον Πίνακα 6.

Η

Συζήτηση

4.1 Μηχανισμοί TOP1 Αριθμός αντιγραφής Αύξηση

Σε αυτό το μελέτη, εντοπίστηκαν τέσσερις διαφορετικούς μηχανισμούς

TOP1

αντιγράψετε αύξηση αριθμού. Στην κυτταρική σειρά μηχανισμών πίνακα αφορούν

TOP1

και CEN-20 (Colo-205, ΗΤ29 και SW620), καθώς και ένας μηχανισμός όπου

TOP1

αποκτήθηκε ανεξάρτητα από το CEN-20 (KM12) , παρατηρήθηκαν. Σε Colo-205 και SW620, χρωμοσώματος 20 ανευσωμίας παρατηρήθηκε, σε συμφωνία με το NCI και SKY NCBI του /M-FISH και CGH Database (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sky/skyweb.cgi). Αυτή η μορφή αύξησης αποκαλυφθεί λόγω της ανώμαλο διαχωρισμό χρωμοσωμάτων κατά τη διάρκεια της μίτωσης, με αποτέλεσμα ένα μη φυσιολογικό αριθμό χρωμοσωμάτων? ένα κράτος καρυοτυπικής ονομάζεται «ανευπλοειδία».

Σε ΗΤ29,

TOP1

κέρδος συνέβη με τρόπο που υποδηλώνουν το σχηματισμό ενός isochromosome, σύμφωνα με άλλα αποτελέσματα [20]. Αυτός ο μηχανισμός του

TOP1

γονίδιο αντίγραφο αύξηση αριθμού συμβαίνει λόγω μιας misdivision του κεντρομεριδίου (εγκάρσια θραύση, και όχι κατά μήκος) κατά τη διάρκεια του διαχωρισμού των χρωμοσωμάτων, με αποτέλεσμα ένα χρωμόσωμα με δύο πανομοιότυπα όπλων. Σε KM12, ένα πρόσθετο

TOP1

σήμα παρατηρήθηκε σε ένα χρωμόσωμα που δεν φιλοξενούν ένα σήμα CEN-20. Στη Βάση Δεδομένων NCI και SKY /M-FISH NCBI και CGH, αυτή η κυτταρική σειρά φαίνεται να φιλοξενούν ένα χρωμόσωμα συγχώνευση των 22q και ένα επιπλέον αντίγραφο του 20q, όπου CEN-20 (ή τουλάχιστον τα άλφα-δορυφόρου ακολουθίες στοχευμένη, το Κέντρο 20 ανιχνευτής) δεν αποκτήθηκε μαζί με την υπόλοιπη 20q. Αυτό το είδος του κέρδους μπορεί να είναι το προϊόν του χρωμοσώματος 20 ανευσωμίας ακολουθείται από ένα κατά Robertson περίπτωση μετάθεσης.

Ενώ η αύξηση αριθμού αντιγράφων γονιδίου μπορεί να προκληθεί από τα γεγονότα που αφορούν τα μεγαλύτερα χρωμοσωμικές περιοχές, όπως είναι η αύξηση του σωματικού ολόκληρων χρωμοσωμάτων ή χρωμοσωμική όπλων , μπορεί επίσης να προκληθεί από την ενίσχυση του γονιδίου. Η γονιδιακή ενίσχυση έχει προταθεί να συμβεί μέσω διαφόρων μηχανισμών, συμπεριλαμβανομένων των σφαλμάτων στην αντιγραφή του DNA και επανειλημμένους κύκλους θραύση-σύντηξης-γέφυρα λόγω της διπλής έλικας του DNA διακοπή ή δυσλειτουργία των τελομερών [21] – [23]. Μια χρωμοσωμική περιοχή προτίμηση αποκτήθηκε μέσω ενίσχυσης οροθετείται ένας «αμπλικόνιο», μια Mb DNA θραύσμα περίπου 0.5-10 σε μήκος, και συνήθως περιλαμβάνει γονίδιο (-α) που εμπλέκονται στην προώθηση της ανάπτυξης του όγκου [24]. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι ολόκληρο το χρωμόσωμα ή βραχίονα του χρωμοσώματος αλλοιώσεις γενικά εμφανίζονται πιο συχνά, αλλά σε μικρότερη έκταση από ό, τι στις μικρότερες χρωμοσωμικές μεταβολές [25].

Στην παρούσα μελέτη,

TOP1

γονίδιο ενίσχυσης ορίστηκε ως

TOP1

/CEN 20-αναλογία ίση ή μεγαλύτερη από 2,0. Ο ορισμός αυτός σημαίνει ότι

TOP1

υπάρχει σε επίπεδα διπλάσια από αυτή του χρωμοσώματος ξενιστή του. Ως εκ τούτου, αυτός ο τύπος αύξησης αντίγραφο γονιδίου είναι πιθανόν να οφείλεται στην αύξηση του αριθμού αντιγράφων ενός amplicon και όχι βραχίονα μήκους χρωμοσωμικές περιοχές, αφού ο μηχανισμός της αύξησης αριθμού αντιγράφων είναι ανεξάρτητη του CEN-20. Δεν

TOP1

επιμηκύνσεις παρατηρήθηκαν στις κυτταρικές γραμμές εννέα ερευνηθεί, αλλά ανιχνεύθηκε στο 10% των δειγμάτων του όγκου. Αυτό θα μπορούσε να σημαίνει ότι είτε ο μηχανισμός αυτός είναι ειδικά για τον ασθενή ή ότι αυτός ο μηχανισμός δεν ήταν παρούσα σε περιορισμένο αριθμό μας κυτταρικών σειρών διερευνηθεί. Ενίσχυση του

TOP1

γονίδιο έχει επίσης αναφερθεί σε μελάνωμα [26] και του γαστρικού καρκίνου [27].

Αν και κάθε μία από τις προαναφερθείσες μηχανισμών του

TOP1

αριθμού αντιγράφων γονιδίου αυξάνουν εμφανίζονται ως ενιαία γεγονότα σε κυτταρικές γραμμές, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι μπορούν να συμβαίνουν ταυτόχρονα σε δείγματα όγκων. Σε 4/15 (26,7%) περιπτώσεις ενίσχυσης (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), CEN-20 ανευσωμίας ανιχνεύθηκε, ενδεικτικό του έναν μηχανισμό ενίσχυσης, καθώς και ένα εκ των οποίων ανευσωμίας ή isochromosome σχηματισμού. Σε δείγματα που ταξινομούνται ως

TOP1

Μη ενισχυμένο Gain, είναι πιθανό ότι αμφότερες οι 20q ισοχρωμοσώματα και επιπλέον αντίγραφα του χρωμοσώματος 20 είναι παρόντα. Ωστόσο, είναι δυνατή μόνο για την ταξινόμηση των δειγμάτων σύμφωνα με κυρίαρχο μηχανισμό.

4.2 Ρόλος του 20q

ευαισθησία του χρωμοσώματος 20 ή 20q έχει αναφερθεί ευρέως ως ένα επαναλαμβανόμενο χρωμοσωμική ανωμαλία σε καρκίνο του παχέος εντέρου [11 ], [28] – [33], υποστηρίζοντας την υψηλή συχνότητα

TOP1

μη ενισχυμένα κέρδη που παρατηρείται σε αυτήν την μελέτη. In vitro μοντέλα δείχνουν ότι 20q κέρδος παίζει αίτιο ρόλο στην ογκογένεση, καθώς και στην αύξηση της κυτταρικής ρυθμούς πολλαπλασιασμού [34]. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, 20q πιστεύεται ότι παίζει ένα ρόλο στην ορθοκολικού αδενώματος μέχρι την πρόοδο καρκινώματος [10] – [13] και παρατηρείται συχνά σε όγκους που παρουσιάζουν τον μικροδορυφόρο σταθερές ή /και χρωμοσωμικές φαινοτύπων αστάθεια [32], [35], [36 ].