Αφηρημένο

Συστηματική διαλογή με βάση την δομική ομοιότητα των ναρκωτικών, όπως η κολχικίνη και ποδοφυλλοτοξίνη οδήγησε για ταυτοποίηση νοσκαπίνη, ενός παράγοντα μικροσωληνίσκων στοχευμένη που εξασθενεί τη δυναμική αστάθεια των μικροσωληνίσκων, χωρίς να επηρεάζεται η συνολική μάζα του πολυμερούς των μικροσωληνίσκων. Αναφέρουμε μια νέα γενιά παραγώγων νοσκαπίνης ως δεσμευτικός αντικαρκινικών παραγόντων δυναμικό τουμπουλίνης. Μοριακή πειράματα μοντελοποίηση αυτών των παραγώγων 5α, 6α-ι απέδωσε την καλύτερη βαθμολογία σύνδεσης (-7,252 έως -5,402 kcal /mol) από τη μητρική ουσία, νοσκαπίνη (-5.505 Kcal /mol) και των υφιστάμενων παράγωγά του (-5,563 έως -6,412 kcal /mol). Ελεύθερη ενέργεια (Δ

G

δεσμεύουν

) υπολογισμοί βασίζονται στην ενέργεια γραμμικής αλληλεπίδρασης (LIE) εμπειρική εξίσωση χρησιμοποιώντας Surface Γενικευμένη Born (SGB) συνεχές μοντέλο διαλύτη προβλέψει τις συγγένειες σύνδεσης τουμπουλίνης για τα παράγωγα 5α, 6α-j (που κυμαίνονται από -4.923 έως -6.189 kcal /mol). Η ένωση 6f έδειξε υψηλότερη συγγένεια σύνδεσης με τουμπουλίνη (-6.189 Kcal /mol). Η πειραματική αξιολόγηση αυτών των ενώσεων επιβεβαιώνονται με θεωρητικές μελέτες. Ν- (3-brormobenzyl) νοσκαπίνη (6f) συνδέεται τουμπουλίνη με υψηλότερη συγγένεια δέσμευσης (Κ

D, 38 ± 4,0 μΜ), η οποία είναι ~ 4,0 φορές υψηλότερη από εκείνη της μητρικής ένωσης, νοσκαπίνη (K

D , 144 ± 1,0 μΜ) και είναι επίσης περισσότερο ισχυρές από εκείνη της πρώτης γενεάς κλινικό υποψήφιο EM011, 9-bromonoscapine (K

D, 54 ± 9,1 μΜ). Όλες αυτές οι ενώσεις παρουσίασαν σημαντική κυτταροτοξικότητα προς τα καρκινικά κύτταρα, με IC

50 τιμές που κυμαίνονται από 6,7 μΜ έως 72.9 μΜ? ένωση 6f έδειξε εξέχοντα αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου με IC

50 τιμές που κυμαίνονται από 6,7 μΜ έως 26,9 μΜ σε καρκινικά κύτταρα διαφόρων ιστών προέλευσης. Οι ενώσεις αυτές διαταράσσονται τη σύνθεση του DNA, καθυστέρησε την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου σε G2 /M φάση, και που προκαλείται από αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε καρκινικά κύτταρα. Συλλογικά, η μελέτη ανέφερε εδώ προσδιορίζονται ισχυρός, noscapinoids τρίτης γενιάς ως νέα αντι-καρκινικοί παράγοντες.

Παράθεση: Manchukonda NK, Naik PK, Santoshi S, M Lopus, Joseph S, Sridhar Β, et al. (2013) Ορθολογική Σχεδιασμός, Σύνθεση και Βιολογική Αξιολόγηση της τρίτης γενιάς α-Νοσκαπίνη Ανάλογα όπως Ισχυροί τουμπουλίνης Δεσμευτική Anti-Cancer Πράκτορες. PLoS ONE 8 (10): e77970. doi: 10.1371 /journal.pone.0077970

Επιμέλεια: Chandra Verma, Ινστιτούτο Βιοπληροφορικής, Σιγκαπούρη

Ελήφθη: 23 Φεβρουαρίου του 2013? Αποδεκτές: 6 Σεπ 2013? Δημοσιεύθηκε: 21 Οκτώβρη 2013

Copyright: © 2013 Manchukonda et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οικονομική βοήθεια μέσω MLP 0002 & amp? CSIR 12η πέντε έργα έτους (CSC0108-ΠΡΟΕΛΕΥΣΗΣ & amp? CSC0205 – DENOVA). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

σε αντίθεση με την τρέχουσα δεσμευτικός χημειοθεραπευτικά φάρμακα όπως η πακλιταξέλη και Vinca αλκαλοειδή που διαταράσσεται από επιπλοκές με ανεπιθύμητες παρενέργειες όπως συστηματική τοξικότητα, νοσκαπίνη [1-3], ένα over-the-counter αλκαλοειδές αντιβηχικό [4 τουμπουλίνης 5], είναι προικισμένο με καλύτερο προφίλ αντι-καρκίνου [6-8] και ασφαλέστερη προφίλ τοξικότητας [9-11]. Μηχανιστικά, νοσκαπίνη συνδέεται τουμπουλίνη με μια στοιχειομετρία ενός (0,95 ± 0,02) νοσκαπίνη μόριο ανά διμερή τουμπουλίνης, μεταβάλλει τουμπουλίνης διαμόρφωση κατά τη δέσμευση [12] αλλά επιτρέπει τον πολυμερισμό της τουμπουλίνης σε μικροσωληνίσκους (MTS) [13,14]. Νοσκαπίνη, ωστόσο, προκαλεί ελάσσονα καταστολή της δυναμικής αστάθειας των μικροσωληνίσκων [13,14]. Ως αποτέλεσμα, νοσκαπίνη μπλοκ μίτωση στο προμεταφασικά, και ίσως λόγω προσβεβλημένων σημείων ελέγχου, τα καρκινικά κύτταρα επιλεκτικά να δεσμευτεί σε αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο αφήνοντας τα φυσιολογικά κύτταρα σώος [6-14]. Από μια φαρμακολογική σκοπιά, νοσκαπίνη έχει πολλά πλεονεκτήματα ως παράγοντας μικροσωληνίσκων δέσμευσης [1]. Είναι αποτελεσματικό κατά των πολυανθεκτικά καρκινικές κυτταρικές σειρές, επηρεάζει τα καρκινικά κύτταρα διαφορετικά από τα κανονικά διαιρούμενα κύτταρα [15,16], έχει καλύτερη φαρμακοκινητικό προφίλ [17,18] και δεν βλάπτει τους φυσιολογικούς ιστούς (έτσι στερούνται τοξικών παρενεργειών) [ ,,,0],19,20]. Ακόμα κι αν νοσκαπίνη έχει βρεθεί ότι είναι κυτταροτοξική έναντι ευρέος φάσματος των καρκινικών κυττάρων στην δημόσια βιβλιοθήκη του National Cancer Institute, USA (οθόνη 60-κυττάρων NCI), το IC παραμένει

50 τιμές στις υψηλές μικρο μοριακή εύρη ( ~ 21,1 έως 100 μΜ) [12]. Ως αποτέλεσμα, οι διάφορες νοσκαπίνη παράγοντες με βάση τουμπουλίνης στοχευμένες έχουν αναπτυχθεί με τροποποιήσεις ως επί το πλείστον στο Α, θέσεις Β και C (Σχήμα 1Α) στο ικρίωμα νοσκαπίνη [21-28]. Αυτές οι ενώσεις αναφέρονται ως noscapinoids (Σχήμα 2). Τα ανάλογα πρώτης γενιάς που συντίθεται από την χημική χειρισμού σε σημείο ποικιλομορφία A στο σύστημα δακτυλίου ισοκινολίνης νοσκαπίνης (Σχήμα 1Α) που περιλαμβάνεται νιτρο [21], αζιδο [22], αμινο [23,24] και αλογονωμένων [25-27] ( φθόριο, χλώριο, βρώμιο και ιώδιο) αναλόγων α-νοσκαπίνη, και εμφανίζεται ανώτερη αντικαρκινική δράση. Με βάση αυτές τις πληροφορίες, ο δακτύλιος λακτόνης της βενζοφουρανόνης (διαφορετικότητα σημείο Β, Σχήμα 1Α) μειώθηκε στο κυκλικό ανάλογο αιθέρας της [28] (για παράδειγμα 4α) και εξετάστηκαν για δραστικότητα της ως παράγοντες σύνδεσης τουμπουλίνης [29]. Περαιτέρω διαφοροποίηση στο σημείο C (Σχήμα 1Α) επί του συστήματος δακτυλίου βενζοφουρανόνης νοσκαπίνης έχει αναφερθεί για να δώσει την δεύτερη γενιά O-αλκυλιωμένο [30] /ακυλιωμένες [31] noscapinoids, συμπεριλαμβανομένου και του παραγώγου υδροξύλιο, το οποίο είναι πιο ισχυρό από το γονικό νοσκαπίνη. Οι εκθέσεις αυτές δείχνουν ότι η χημική ελιγμούς που ενσωματώνονται λειτουργικές ομάδες νοσκαπίνης έχει σημαντικό αντίκτυπο στην βιολογική δράση της. Σε συνέχιση των προσπαθειών μας για τον σχεδιασμό νέων παραγώγων νοσκαπίνη, αποφασίσαμε να εισαγάγει τροποποίηση στο σημείο ποικιλομορφία D (Εικόνα 1Β) από ενεργοποιήσεως της «Ν» στο ισοκινολίνης μονάδα φυσικού α-νοσκαπίνη (καλούμε τους τρίτης γενιάς α-νοσκαπίνη αναλόγων ) που είναι πιθανόν να ενισχύσει την βιολογική δραστηριότητα. Οι εκθέσεις που περιγράφονται στην λειτουργοποίηση στο «Ν» είναι μέσω δεσμών τύπου ουρίας [32] και πολύ δεν έχει διερευνηθεί για βιολογική αποτελεσματικότητα της. Πιστεύουμε ότι ο τύπος ουρίας σύνδεση μπορεί να μην είναι η σωστή επιλογή, καθώς θα διαταράξει την πυκνότητα ηλεκτρονίων σε ισοκινολίνης Ν μέσω της μετεγκατάστασης. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, έχουμε υιοθετήσει για την εισαγωγή λειτουργικών ομάδων διατηρώντας το ηλεκτρονικό περιβάλλον για Ν ως επί το πλείστον ανέπαφη (δηλαδή να κρατήσει το αποτέλεσμα της ομάδας μεθυλίου ανέπαφη). Ως εκ τούτου, το «Η» στο Ν-CH

3 είναι ο στόχος για τροποποίηση. Όλα τα παράγωγα που περιγράφονται και συντίθεται συνάδουν με αυτή τη στρατηγική του σχεδιασμού (Σχήμα 3).

(Α) Διάφορα σημεία της πολυμορφίας για υποκατάσταση της α-νοσκαπίνη και τη στρατηγική του σχεδιασμού (Β) για τα νέα ανάλογα α-νοσκαπίνη (βασική σκελετό και στερεοχημεία είναι ίδια όπως στο φυσικό α-νοσκαπίνη)

η

Οι συνθήκες αντίδρασης: (i):.

m

CPBA, DCM? b: 2Ν HCl? γ: FeSO

4.7H

2O? (Ii) R-Br, ΚΙ, Κ

2CO

3, ακετόνη.

Η

Εδώ αναφέρουμε την τρίτη γενιά ομοειδών νοσκαπίνη 6α-ι που διαφέρουν ως προς το υποκατάστατο συνδεδεμένο με ισοκινολίνη » Ν ‘των φυσικών α-νοσκαπίνη.

Στο silico

υπολογισμούς μοριακής μοντελοποίησης αυτών των αναλόγων με πολύπλοκες τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνήσει συγγένεια σύνδεσης τους με βάση την εύλογη μοντέλο πρόβλεψης. Τα νέα ανάλογα, nornoscapine 5α και 6α-j συντέθηκαν χημικά και εξετάσθηκαν για πρόσδεση τουμπουλίνης ιδιότητές τους, και για τις επιδράσεις τους στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα σε ταχέως διαιρούμενα καρκινικά κύτταρα με τη χρήση αντιπροσωπευτικών ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές πνεύμονα, μυέλωμα, του μαστού και του τραχήλου της μήτρας.

Υλικά και Μέθοδοι

Α:. Υπολογιστική μεθοδολογία

προετοιμασία ρίζας

Μοριακή δομές των νέων παραγώγων νοσκαπίνης 5α, 6α-j (Σχήμα 3) μαζί με τις αναφερόμενες noscapinoids 1, 2α-f (Σχήμα 2) χτίστηκαν με τη χρήση μοριακών οικοδόμος του Maestro (έκδοση 9.2, Schrödinger). Όλες αυτές οι δομές ήταν ενέργεια ελαχιστοποιείται χρησιμοποιώντας Macromodel (έκδοση 9.9, Schrödinger) και OPLS 2005 το πεδίο ισχύος με αλγόριθμο PRCG (1000 βήματα της ελαχιστοποίησης και της ενέργειας κλίση 0,001). Κατάλληλη σειρά ομολόγων για κάθε δομή ανατέθηκε χρησιμοποιώντας Ligprep (έκδοση 2.5, Schrödinger). Πλήρη γεωμετρική βελτιστοποίηση των δομών αυτών πραγματοποιήθηκε με τη χρήση υβριδικών πυκνότητας λειτουργική θεωρία με δυνατότητες ανταλλαγής τριών παραμέτρων Becke και την αντιστοιχία Lee-Yang-Parr λειτουργικό (B3LYP) [33,34] με βάση τη ρύθμιση 3-21G * [35-37] . Jaguar (έκδοση 7.7, Schrödinger, LLC) χρησιμοποιήθηκε για τη γεωμετρική βελτιστοποίηση των προσδεμάτων.

παρασκεύασμα πρωτεΐνης

Η συν-κρυσταλλώνεται κολχικίνη-τουμπουλίνης σύνθετη δομή (ΠΠ ID: 1SA0, ανάλυση 3.58Å). [38] χρησιμοποιήθηκε για τη μοριακή βάση σύνδεσης και αναβαθμολόγησης. Multi-βήμα παρασκεύασμα πρωτεΐνης οδηγός του Schrödinger (PPrep) χρησιμοποιήθηκε για την τελική προετοιμασία της πρωτεΐνης. Λείπει άτομα υδρογόνου προστέθηκαν στη δομή χρησιμοποιώντας τη διεπαφή Maestro (έκδοση 9.2, Schrödinger). Όλα τα μόρια του νερού απομακρύνθηκαν από το συγκρότημα και να βελτιστοποιηθεί το δίκτυο δεσμών υδρογόνου με χρήση οδηγού PPrep. Τα λείπουν αμινοξέα από 37 έως 47 (Α-αλυσίδα) και 275 να 284 (Β-αλυσίδα) στο συν-κρυσταλλώνεται δομή πληρώθηκαν χρησιμοποιώντας ομολογία που βασίζεται τεχνική μοντελοποίησης που βασίζονται σε διαφορετικά πρότυπα, όπως ΠΣΠ ID: 3DU7 (C-αλυσίδα ) και ΠΣΠ ID: 3RYC (D-αλυσίδα) αντίστοιχα, χρησιμοποιώντας Prime (έκδοση 3.0, Schrödinger). Η δομή που λήφθηκε ήταν ενέργεια ελαχιστοποιείται χρησιμοποιώντας OPLS 2005 το πεδίο ισχύος με Polak-Ribiere Συζυγών Κλίσεων (PRCG) αλγόριθμο. Η ελαχιστοποίηση διεκόπη είτε μετά 5000 βήματα ή μετά την ενεργειακή μεταβολή συγκλίνει κάτω από 0.001 kcal /mol. Όλα άτομο μοριακή δυναμική (MD) προσομοίωση της δομής πρωτεΐνης σε ρητή νερό διεξήχθη με τη χρήση του λογισμικού GROMACS 4.5.4 [39] και το πεδίο ισχύος GROMOS96 για χρόνο κλίμακα από 10 ns. επιβλήθηκαν τρισδιάστατο περιοδικές συνοριακές συνθήκες, που περικλείει το μόριο σε ένα δωδεκάεδρο στερεό διάλυμα με το μοντέλο νερού SPC216 που παρέχονται στο πακέτο GROMACS και την ενέργεια ελαχιστοποιείται με τη χρήση 1000 βήματα απότομη κάθοδο. Το σύστημα εξουδετερώθηκε με 32 Na

+ αντι-ιόν και τοπικά ελαχιστοποιηθεί με τη χρήση 100 βήματα από απότομη κάθοδο. Η ηλεκτροστατική όρος αυτός περιγράφεται χρησιμοποιώντας το σωματίδιο Mesh Ewald αλγόριθμο [40]. Οι LINCS [41] αλγόριθμος χρησιμοποιήθηκε για να περιορίσουν όλα τα μήκη δεσμού και αποκοπής αποστάσεις για τον υπολογισμό των κουλόμπ και van der Waals αλληλεπιδράσεις σε 1.0 nm. Το σύστημα εξισορροπήθηκε με 100 ps του MD τρέχει με περιορισμούς θέση σχετικά με την πρωτεΐνη για να επιτραπεί η χαλάρωση των μορίων του διαλύτη στους 300 Κ και κανονική πίεση. Το σύστημα συνδέεται με το εξωτερικό λουτρό με θερμοστάτη Berendsen με χρόνο σύζευξης 0,1 ps με προεπιλεγμένη ρύθμιση. Οι τελικοί υπολογισμοί MD έγιναν για 10,0 ns υπό τους ίδιους όρους με χρονικό βήμα 2 fs. Η συνολική ποιότητα του μοντέλου που λαμβάνονται, στερεοχημική αξίες και μη συνδεδεμένα αλληλεπιδράσεις εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας PROCHECK [42], ERRAT [43] και VERIFY3D [44]. Τα αποτελέσματα έδειξαν PROCHECK 94,8% των γωνιών σπονδυλική στήλη είναι σε επιτρεπόμενες περιοχές με G-παράγοντες – 0,12. Ramachandran Οικόπεδο [45] ανάλυση αποκάλυψε μόνο το 1,6% των καταλοίπων στην περιοχή αρθεί και το 2,3% των καταλοίπων σε απλόχερα επιτρεπόμενες περιοχές. ERRAT είναι ένα πρόγραμμα υπολογιστή «συνολικός συντελεστής ποιότητας» για μη συνδεδεμένα ατομικές αλληλεπιδράσεις. Το αποδεκτό εύρος στο ERRAT είναι 50 και υψηλότερες βαθμολογίες δείχνουν την ακρίβεια του μοντέλου. Στην περίπτωση της τουμπουλίνης, το σκορ ERRAT ήταν 88.402 που είναι μέσα στο φάσμα υψηλής ποιότητας μοντέλο. Ομοίως, η ΕΠΑΛΗΘΕΥΣΗ 3D βαθμολογία 95,25% δείχνει ένα καλό πρότυπο ποιότητας.

Μοριακή σύνδεσης των υποκαταστατών και τον υπολογισμό των δεσμευτικών ελεύθερες ενέργειες.

Το αρχείο υποδοχέα-πλέγμα δημιουργήθηκε στο κέντρο βάρους του noscapinoid θέση δέσμευσης [46] χρησιμοποιώντας Glide (έκδοση 5.7, Schrödinger). Ένα πλαίσιο οριοθέτησης του μεγέθους 12Α x 12A x 12α ορίστηκε σε τουμπουλίνης και με επίκεντρο το κέντρο μάζας της θέσης πρόσδεσης, προκειμένου να περιοριστεί το κέντρο μάζας του ελλιμενίστηκε συνδέτη. Το μεγαλύτερο κουτί που περικλείει το μέγεθος 12Α x 12A x 12Α που κατέλαβαν όλα τα άτομα των αγκυροβολημένο θέτει επίσης οριστεί. Ο συντελεστής κλίμακας του 0.4 για νβη der Waals ακτίνες εφαρμόστηκε σε άτομα πρωτεΐνης με απόλυτη μερική επιβαρύνσεις μικρότερη ή ίση με 0,25. Όλες οι συνδέτες στη συνέχεια αγκυροβολημένο στη θέση δέσμευσης χρησιμοποιώντας Glide XP (επιπλέον ακρίβεια) και αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Glide XP

λειτουργία Σκορ [47,48]. Επιπλέον, οι αγκυροβολημένο συγκροτήματα αυτών των συνδετήρων ήταν ελαχιστοποιημένης ενέργειας βασίζεται σε υβριδική προσομοίωση Monte Carlo και δεσμευτική ελεύθερη ενέργεια τους (Δ

G

δεσμεύουν

) πάνω τουμπουλίνης είχε προβλεφθεί με τη βοήθεια γραμμικής ενέργειας αλληλεπίδρασης μέθοδο (LIE) με επιφάνεια γενικευμένη Γεννήθηκε το μοντέλο ενυδάτωσης (SGB) συνεχές. Το μοντέλο ΨΕΜΑ-SGB εκτιμά τις συγγένειες δέσμευσης για μια σειρά νέων ενώσεων χρησιμοποιώντας τα δεδομένα πειραματικών συγγένεια σύνδεσης ενός συνόλου σύνολο εκπαίδευσης. Σε αυτή τη μελέτη έχουμε χρησιμοποιήσει την αρχική διατύπωση του SGB-ΨΕΜΑ (εξίσωση 1) προτείνει Jorgensen [49] και υλοποιείται στο πακέτο Συνδέσμου (έκδοση 5.6, Schrödinger, LLC) χρησιμοποιώντας το OPLS-2005 δύναμης field.

Δ

G

b

i

n

d

=

α

(

〈

U

v

d

w

b

〉

−

〈

U

v

d

w

f

〉

)

+

β

(

〈

U

e

l

e

c

b

〉

−

〈

U

e

l

e

c

f

〉

)

+

γ

(

〈

U

c

a

v

b

〉

−

〈

U

c

a

v

f

〉

)

(1)

Here ⟨⟩ Αντιπροσωπεύουν το σύνολο μέσο όρο,

b

αντιπροσωπεύει την δεσμευμένη μορφή του συνδέτη,

f

αντιπροσωπεύει την ελεύθερη μορφή του συνδέτη, και α, β, και γ είναι οι συντελεστές.

U

VDW

,

U

ηλεκ

, και

U

CAV are Κίνα ο van der Waals, οι όροι ηλεκτροστατική, και κοιλότητα ενέργειας στο συνεχές SGB μοντέλο διαλύτη. Ο όρος κοιλότητα ενέργεια,

U

CAV

, είναι ανάλογη με την εκτεθειμένη επιφάνεια του συνδετήρα. Διάφορες παράμετροι ενέργειας που περιλαμβάνεται στην εξίσωση 1 υπολογίστηκαν από το συνδεδεμένο σύμπλοκο που αντιστοιχεί σε κάθε αναλογικό χρησιμοποιώντας πακέτο Συνδέσμου όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Οι μέσες όροι ΨΕΜΑ ενέργειας χρησιμοποιήθηκαν για την κατασκευή του μοντέλου συγγένεια δέσμευσης και εκτίμηση των δεσμευτική ελεύθερες ενέργειες των παραγώγων νοσκαπίνη. Η α

,

β, και γ ψέμα τοποθέτηση παράμετροι προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας Minitab στατιστικό πακέτο (έκδοση 16.0, Minitab Inc.) με προσαρμογή των πειραματικών συγγένειες δέσμευσης του συνόλου εκπαίδευσης μορίων. Ένα σύνολο δεδομένων που αποτελείται από 7 παραγώγων νοσκαπίνης (ενώσεις: 1, 2a-f? Σχήμα 2) με γνωστούς πειραματικούς συγγένειες δέσμευσης χρησιμοποιήθηκε ως ένα σύνολο εκπαίδευσης.

Β:. Πειραματική μεθοδολογία

Χημική σύνθεση παραγώγων νοσκαπίνης

Αντιδραστήρια και όλες οι διαλύτες ήταν αναλυτικά καθαρό και χρησιμοποιήθηκαν χωρίς περαιτέρω καθαρισμό. Όλες οι αντιδράσεις διεξήχθησαν σε ξηρανθείσα σε κλίβανο φιάλες με μαγνητική ανάδευση. Όλα τα πειράματα παρακολουθήθηκαν με αναλυτική χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (TLC) πραγματοποιήθηκε σε προ-επικαλυμμένες πλάκες GF254 πυριτική πηκτή. Μετά την έκλουση, οι πλάκες οπτικοποιήθηκαν υπό φωτισμό UV στα 254 nm για UV δραστικά υλικά. Χρώση με PMA και απανθράκωση σε ένα ζεστό πιάτο επιτευχθεί περαιτέρω απεικόνιση. Οι διαλύτες απομακρύνθηκαν

σε κενό

και θερμάνθηκε σε υδατόλουτρο στους 35 ° C. Silica gel λεπτότερο από 200 mesh χρησιμοποιήθηκε για χρωματογραφία στήλης. Στήλες συσκευάστηκαν ως πολτό από σιλικαζέλ σε εξάνιο και εξισορροπείται με το μίγμα κατάλληλο διαλύτη /διαλύτη πριν από τη χρήση. Οι ενώσεις φορτώθηκαν σκέτο ή ως ένα συμπυκνωμένο διάλυμα χρησιμοποιώντας το κατάλληλο σύστημα διαλύτη. Ασκώντας πίεση με αντλία αέρος συνέδραμε την έκλουση. Οι αποδόσεις αναφέρονται σε χρωματογραφιχά και φασματοσκοπικά ομοιογενή υλικά, εκτός αν ορίζεται διαφορετικά. Κατάλληλα ονόματα για όλες τις νέες ενώσεις δόθηκαν με τη βοήθεια των ChemBioOffice 2010. Τα σημεία τήξεως μετρήθηκαν με μία συσκευή σημείου τήξεως Fischer-Johns και είναι μη διορθωμένα. Καθαρότητα όλων των ενώσεων (& gt? 96%) χρησιμοποιούνται για τον βιολογικό έλεγχο προσδιορίστηκαν με αναλυτική HPLC (SPD-M20A, κάνουν: Shimadzu) χρησιμοποιώντας στήλη ODS με έκλουση με διαβάθμιση ακετονιτριλίου-νερού. Φασματοσκοπία υπερύθρου φάσματα (IR) καταγράφηκαν ως αμιγή υγρά ή KBr σφαιρίδια και απορροφήσεις αναφέρονται σε cm

-1. Πυρηνικού μαγνητικού συντονισμού (NMR) καταγράφηκαν σε 300 (Bruker) και 500 MHz (Varian) φασματόμετρα σε κατάλληλους διαλύτες χρησιμοποιώντας τετραμεθυλοσιλάνιο (TMS) ως εσωτερικό πρότυπο ή τα σήματα διαλύτη ως δευτερογενής πρότυπα και οι χημικές μετατοπίσεις δείχνονται σε δ κλίμακες. Οι πολλαπλότητες των σημάτων NMR ορίζονται ως s (απλή), d (διπλή), t (τριπλή), q (τετραπλή), br (ευρεία), m (πολλαπλή, για ανεπίλυτα γραμμές), κλπ

φάσματα 13C NMR ήταν καταγράφονται σε φασματόμετρο 75 MHz. Τα φάσματα μάζας υψηλής ανάλυσης (HRMS) ελήφθησαν με τη χρήση ESI-QTOF φασματομετρία μάζας. Οπτικές περιστροφές μετρήθηκαν με ένα Roudolph Digipol 781 Πολωσίμετρο στους 25 ° C. Εμπορικά διαθέσιμα διαλύτες εξάνιο, CH

2Cl

2, και EtOAc χρησιμοποιήθηκε ως έχει χωρίς περαιτέρω καθαρισμό. Φυσικά α-νοσκαπίνη αγοράστηκε από την Sigma-Aldrich και χρησιμοποιείται ως τέτοια. Η συνθετική προσέγγιση για την παρασκευή των παραγώγων νοσκαπίνη, 6α-j απεικονίζεται στην Εικόνα 3. Όλα αυτά τα παράγωγα συντέθηκαν από nornoscapine 5α ως αρχικό υλικό, το οποίο με τη σειρά του συντέθηκε από noscapine.

(S)-6,7-dimethoxy-3-((R)-4-methoxy-5,6,7,8-tetrahydro[1,3]dioxolo[4,5-

g

]isoquinolin-5-yl)isobenzofuran-1(3H)-one (5α): Σε ένα διάλυμα των φυσικών νοσκαπίνης α- (2,0 g, 4,84 mmol) σε διχλωρομεθάνιο (15 mL) προστέθηκε mCPBA (1.66 g, 9.7 mmol) κατά μερίδες στους 0 ° C. Το μίγμα της αντίδρασης αναδεύτηκε για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, αραιώνεται με διχλωρομεθάνιο (20 mL), περίσσεια υπεροξειδίου σβήστηκε με 1Μ υδατ. διάλυμα NaHSO

3 (15 mL), η οργανική στιβάδα στη συνέχεια διαχωρίζεται, ξηραίνεται με άνυδρο Na

2SO

4 και συμπυκνώθηκε. Το ακατέργαστο υπόλειμμα διαλύθηκε σε μεθανόλη (20 mL), οξινίστηκε σε ρΗ 1.0 χρησιμοποιώντας 2Ν HCI, αναδεύτηκε για 5 λεπτά και διηθείται. Το διήθημα συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση, διαλύθηκε εκ νέου σε διχλωρομεθάνιο (20 mL), ξηραίνεται με άνυδρο Na

2SO

4, φιλτράρεται και συμπυκνώνεται. Το ωχρό κίτρινο στερεό α- νοσκαπίνη Ν-oxide.HCl άλας που λήφθηκε έτσι διαλύθηκε σε μεθανόλη (20 mL), προστέθηκε FeSO

4.7H

2O (2,69 g, 9,68 mmol). Μετά από ανάδευση του μίγματος σε θερμοκρασία δωματίου για 12 ώρες, το μίγμα της αντίδρασης συμπυκνώθηκε και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 25% υδατική αμμωνία για να πάρετε ρΗ 10, εκχυλίζεται με διχλωρομεθάνιο (3 χ 10 mL), ξηραίνεται με άνυδρο Na

2SO

4 , και εξατμίστηκαν υπό μειωμένη πίεση. Το ακατέργαστο υπόλειμμα υποβλήθηκε σε τριαιθυλ χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής αντιμετωπίζονται αμίνη και εκλούστηκε με 3: 7 οξεικό αιθυλεστέρα: εξάνιο (2: 3) gave(S)-6,7-dimethoxy-3-((

R

)-4-methoxy-5,6,7,8-tetrahydro[1,3]dioxolo[4,5-

g

]isoquinolin-5-yl)isobenzofuran-1(3H)-one (5α) (0,92 g, 48%) ως λευκό στερεό. mp 170 ° C? [Α]

D

25 = -105,6 (c = 1, μεθανόλη), Απόδοση: 48% IR ν

max (cm

-1): 3360, 2942, 1759, 1624, 1501 , 1280, 1119, 1074, 1042, 1023, 932, 796, 679

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3): δ 6.94 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 6,33 (s, 1Η), 5.99-5.89 (m, 4Η), 4,85 (d, J = 4,53 Hz, 1Η), 4,09 (s, 3Η), 4,07 (s, 3Η), 3,85 (s, 3Η), 2.69-2.58 (m , 1Η), 2.54-2.42 (m, 1Η), 2,36-2,23 (m, 1Η), 2.22 – 2.9 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 168,5, 152,1 , 148.3,147.8, 141.0, 140.4, 134.1, 131.9, 119.6, 118.3, 117.5, 116.9, 103.1, 100.7, 20.6, 62.2, 59.4, 56.6, 52.7, 39.5, 29.7 MS (ESI)

m

/

z

400 [Μ + Η]

+? HRMS (ESI) υπολογισμένη για C

21H

22NO

7: 400.1396, βρέθηκε:.. 400.1401

Γενική διαδικασία για την παρασκευή της 6α-j

Για να το διάλυμα (

S

)-6,7-dimethoxy-3-((

R

)-4-methoxy-5,6,7,8-tetrahydro[1,3]dioxolo[4,5-

g

]isoquinolin-5-yl)isobenzofuran-1(3H)-one 5a (200 mg, 0.50 mmol) σε ακετόνη (5 mL), προστέθηκε ανθρακικό κάλιο (1.10 mmol), ιωδιούχο κάλιο (0,5 mmol) και αλκυλο βρωμίδιο (0.55 mmol) και αναδεύτηκε σε θερμοκρασία δωματίου (RT) για 1 h. Ακατέργαστο μείγμα αντίδρασης διηθήθηκε, το διήθημα εξατμίστηκε υπό κενό, νερό (5 mL) και διχλωρομεθάνιο (2 Χ 10 mL) προστέθηκε, οργανική στιβάδα διαχωρίστηκε, πλύθηκε με Η

2O, ξηραίνεται πάνω από άνυδρο Ν &

2SO

4 και διηθείται. Το υπόλειμμα που λήφθηκε έτσι χρωματογραφήθηκε σε στήλη πήγματος πυριτικού οξέος κατεργάζεται τριαιθυλαμίνη έκλουση με εξάνιο /οξικό αιθυλεστέρα (70:30) για να δώσει 6α-j ως στερεά προϊόντα

(S) -3 -. ((

R

) -6-βενζυλο-4-μεθοξυ-5,6,7,8-τετραϋδρο- [1,3] διοξολο [4,5

g

] ισοκινολιν-5-υλ) – 6,7-dimethoxyisobenzofuran-1 (3Η) -όνη (6α): Απόδοση: 93%? mp 64 ° C? [Α]

D

25 = 1,3 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3503, 2490, 2837, 1759, 1621, 1595, 1569, 1498, 1271, 1212, 1039, 891, 785, 695

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) 7.33-7.15 (m, 5Η), 6,98 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 6,33 (s, 1Η), 6,17 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 5.94 ( s, 2Η), 5,66 (d, J = 3,96 Ηz, 1Η), 4,62 (d, J = 3,96 Hz, 1Η), 4.15 – 4.6 (m, 4Η), 4,02 (s, 3Η), 3,86 (s, 3Η ), 3,66 (d, J = 13,21 Hz, 1Η), 2,51 – 2,36 (m, 2Η), 2,35-2,15 (m, 1Η), 2,06 – 1,91 (m, 1Η)

13.CNMR (75 MHz, ΟϋΟ

3) δ 168,1, 152,2, 148,4, 147,8, 141,3, 140,5, 139,0, 133,9, 131,9, 128,7, 126,9, 119,8, 118,2, 117,7, 116,9, 102,4, 100,7, 81,7, 61,5, 59,6, 56,7, 59,6 , 62.3, 45.1, 26.5. MS (ESI)

m

/

z

490 [M+H]

+

5(S)-3-((R)-6-(4-bromobenzyl)-4-methoxy-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-yl)-6,7-dimethoxyisobenzofuran-1(3H)-one (6β): Απόδοση: 95%? mp 76 ° C? [Α]

D

25 = -146,0 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3493, 2939, 2837, 1759, 1622, 1596, 1497, 1479, 1271, 1213, 1115, 1079, 971, 789, 711, 644, 479, 811 , 746

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) δ 7,37 (d, J = 8,30 Ηz, 2Η), 7,12 (d, J = 8,30 Ηz, 2Η), 6,92 (d, J = 8,30 Ηz, 1Η), 6,28 (s, 1Η), 6,04 (bs, 1Η), 5,94 (s, 2Η), 5,59 (bs, 1Η), 4,57 (d, J = 3,77 Ηz, 1Η), 4,14 – 3,89 ( m, 7Η), 3,85 (s, 3Η), 3,57 (d, 1Η), 2,46 – 2,09 (m, 3Η), 2.00-1.84 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 168,1, 152,2, 148,5, 147,8, 141,0, 140,4, 138,0, 133,9, 131,8, 131,2, 130,4, 120,6, 119,8, 118,1, 117,7, 116,6, 102,4, 100,7, 81,5, 62,3, 61,0, 59,4, 59,3, 56,7 , 45.3, 26.6.MS (ESI)

m

/

z

568 [Μ + Η]

+. HRMS (ESI) υπολ για C

28Η

27NO

7: 568.0970, βρέθηκε: 568.0946.

(S)-6,7-dimethoxy-3-((R)-4-methoxy-6-(4-nitrobenzyl)-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-yl)isobenzofuran-1(3H)-one (6γ): Απόδοση: 94%? mp 154 ​​° C? [Α]

D

25 = 68.0 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3490, 3078, 2931, 2901, 2837, 1751, 1620, 1520, 1499, 1389, 1343, 1274, 1213, 1080, 972, 852, 733, 610

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) δ 8,13 (d, J = 8,49 Ηz, 2Η), 7,40 (d, J = 8,49 Ηz, 2Η), 6,93 (d, J = 8.30Hz, 1Η), 6,30 (s, 1Η), 6.01-5.92 (m, 3Η), 5.62 (d, J = 3,77 Ηz, 1Η), 4,61 (d, J = 3.77Hz, 1Η), 4,27 (d, J = 14,35 Ηz, 1Η), 4,10 (s, 3Η), 4,09 (s, 3Η), 3,87 (s, 3Η), 3,74 (d, J = 14,35 Ηζ, 1Η), 2,44-2,28 (m, 2Η), 2.23 με 2.13 (m, 1Η), 2,00-1,85 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 168,1, 152,3, 148,6, 147,8, 147,1, 147,0, 140,6, 140,3, 134,0, 131,7 , 129.0, 123.4, 119.9, 118.1, 117.7, 116.3, 102.4, 100.8, 81.4, 62.3, 61.4, 59.5, 59.4, 56.6, 46.0, 27.0. MS (ESI)

m

/

z

557 [Μ + Η]

+? HRMS (ESI) υπολ για C

28Η

26Ν

2O

9ΝΑ: 557.1536, βρέθηκε: 557.1557.

(S)-6,7-dimethoxy-3-((R)-4-methoxy-6-(4-methoxybenzyl)-5,6,7,8-tetrahydro[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-yl)isobenzofuran-1(3H)-one (6δ): Απόδοση: 92%? mp 66 ° C? [Α]

D

25 = 6.66 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3492, 2936, 2836, 1759, 1613, 1511, 1269, 1115, 1013, 970, 821, 713, 517 cm

-1 1.HNMR ( 300 ΜΗζ,

3) 7.15 (d, J = 8,49 Ηz, 2Η), 6,92 (d, J = 8,12 Hz, 1Η), 6,76 (d, J = 8,49 Ηz, 2Η), 6,28 (s, 1 ), 6,12 (d, J = 8.12Hz, 1Η), 5,93 (s, 2Η), 5,58 (d, J = 3,58 Hz, 1Η), 4,55 (d, J = 3,55 Hz, 1Η), 4,10 (s, 3Η ), 4,03 (m, 4Η), 3,85 (s, 3Η), 3,76 (s, 3Η), 3,55 (d, J = 12,84 Hz, 1Η), 2,50 – 2,13 (m, 3Η), 2,04 – 1,83 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 168,1, 158,5, 152,1, 148,4, 147,7, 141,2, 140,5, 133,9, 131,7, 130,0, 119,7, 118,1, 117,8, 113,4, 116,6, 102,4 , 100.6, 81.5, 62.3, 60.7, 59.3, 59.2, 56.7, 55.1, 44.8, 26.2.MS (ESI)

m

/

z

520 [Μ + Η]

+ ? HRMS (ESI) υπολ για C

29Η

29 ΝΟ

8Na: 542.1790, βρέθηκε: 542.1817.

(S)-3-((R)-6-(3-chlorobenzyl)-4-methoxy-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-yl)-6,7-dimethoxyisobenzofuran-1(3H)-one (6ε): Απόδοση: 92%? mp 62 ° C? [Α]

D

25 = 36.0 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3395, 3022, 2925, 2849, 1728, 1603, 1486, 1302, 1261, 1186, 1058, 811, 747

1.HNMR (300 MHz, ΟϋΟ

3) δ 7.29 έως 7.12 (m, 4Η), 6,99 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 6,34 (s, 1Η), 6,14 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 5,95 (s , 2Η), 5,67 (d, J = 3,77 Ηz, 1Η), 4,61 (d, J = 3,77 Hz, 1Η), 4.17 – 4.8 (m, 4Η), 4.05 (s, 3Η), 3,87 (s, 3Η) , 3,63 (d, J = 13,59 Hz, 1Η), 2.49-2.37 (m, 2Η), 2.31 – 2.16 (m, 1Η), 2,06-1,93 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 168,1, 152,2, 148,5, 141,2, 140,9, 140,4, 133,9, 131,8, 129,4, 128,4, 127,0, 126,7, 119,7, 118,1, 117,7, 116,6, 102,3, 100,7, 81,7, 64,3, 62,4, 61,2, 59.5, 59.3, 56.6, 45.5, 26.8. MS (ESI)

m

/

z

524 [M+H]

+.

(S)-3-((

R

)-6-(3-bromobenzyl)-4-methoxy-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-yl)-6,7-dimethoxyisobenzofuran-1(3H)-one (6στ): Απόδοση: 97%? mp 65 ° C? [Α]

D

25 = 52.0 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3503, 2940, 2837, 1759, 1621, 1498, 1387, 1271, 1212, 1039, 891, 785, 695

1.HNMR: (300 MHz , ΟϋΟ

3) δ 7,40-7,30 (m, 2Η), 07.24 – 07.09 (m, 2Η), 6,99 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 6,34 (s, 1Η), 6,15 (d, J = 8.30 Hz, 1Η), 5,95 (s, 2Η), 5,66 (d, J = 3,96 Hz, 1Η), 4,60 (d, J = 3,96 Hz, 1Η), 4.17 – 4.6 (m, 4Η), 4,04 (s , 3Η) 3,87, (s, 3Η), 3,63 (d, J = 13,78 Hz, 1Η), 2,50 – 2,37 (m, 2Η), 2.32-2.19 (m, 1Η), 2,07 – 1,92 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) 168.1, 152.2, 148.5, 147.9, 141.5, 140.4, 134.0, 131.8, 131.4, 130.0, 129.7, 127.3, 122.2, 118.1, 117.7, 116.6, 102.4, 100.7 , 81.6, 81.1, 62.5, 61.1, 59.5, 59.3, 56.7, 45.4, 26.8. MS (ESI) m /z 568 [M+H]

+.

(S)-6,7-dimethoxy-3-((R)-4-methoxy-6-(3-methoxybenzyl)-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g] ισοκινολιν-5-υλ) ισοβενζοφουραν-1 (3Η) -όνη (6 g): Απόδοση: 94%? mp 60 ° C? [Α]

D

25 = -144,01 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3501, 2941, 2836, 1760, 1620, 1598, 1497, 1387, 1268, 1212, 1012, 933, 786, 693

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) δ 07.21 – 07.11 (t, 1Η), 7,00-6,89 (m, 2Η), 6,84 – 6,72 (m, 2Η), 6,33 (s, 1Η), 6,14 (d, J = 8,30 Ηz, 1Η), 5,95 (s, 2Η), 5,67 (d, 4,53, 1Η), 4,62 (d, J = 4,53 Ηz, 1Η), 4,10 (s, 3Η), 4.03 (s, 3Η), 3.88-3.80 (m, 7Η), 3,63 (d, J = 12,84 Hz, 1Η), 2,51 – 2,33 (m, 2Η), 2,33 – 2,16 (m, 1Η), 2.03-1.87 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 168,1, 159,6, 152,2, 148,4, 147,8, 141,2, 140,7, 140,5, 133,9, 131,9, 128,8, 120,9, 119,9, 118,2, 117,7, 116,8, 113,6, 113,0, 102,4, 100,7 , 81.5, 62.3, 61.6, 59.4, 59.3, 56.7, 55.2, 45.2, 26.4. MS (ESI) m /z 520 [M+H]

+.

(S)-6,7-dimethoxy-3-((R)-4-methoxy-6-(2-oxopropyl)-5,6,7,8-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-g] ισοκινολιν-5-υλ) ισοβενζοφουραν-1 (3Η) -όνη (6Η): Απόδοση: 98%? mp 179 ° C? [Α]

D

25 = -34,0 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3393, 2957, 2904, 2840, 1764, 1706, 1624, 1500, 1482, 1387, 1364, 1275, 1223, 1041, 1010, 941, 897, 828 , 710, 693, 538.cm

-1 1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) 6.90 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 6,28 (s, 1Η), 6,00 – 5,88 (m , 3Η), 5,51 (d, J = 3,58 Ηz, 1Η), 4,61 (d, J = 3,58 Hz, 1Η), 4,08 (s, 3Η), 4,01 (s, 3Η), 3,85 (s, 3Η), 3.64 (d, J = 4,15 Ηz, 2Η), 2.50-2.39 (m, 2Η), 2,37 – 2,29 (m, 1Η), 2,09 (s, 3Η), 1.91-1.76 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 167,7, 153,2, 148,5, 140,3, 140,2, 131,8, 120,2, 118,0, 117,7, 116,8, 102,4, 100,7, 96,0, 81,8, 67,6, 62,1, 59,4, 59,0, 56,6, 47,3 , 29.6, 28.2, 27.2. MS (ESI)

m

/

z

456 [Μ + Η]

+? HRMS (ESI) υπολογισμένη για C

24H

25NO

8Na: 478.1477, βρέθηκε: 478.1470

Methyl. 2-((R)-5-((S)-4,5-dimethoxy-3-oxo-1,3-dihydroisobenzofuran-1-yl)-4-methoxy-7,8-dihydro-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-6(5H)-yl)acetate (6θ): Απόδοση: 97%? mp 155 ° C? [Α]

D

25 = -66,6 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3488, 3006, 2947, 2919, 2851, 1755, 1627, 1590, 1484, 1387, 1265, 1214, 1085, 1017, 894, 789, 735, 696 , 546

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) δ 6,96 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 6,31 (s, 1Η), 6,03 (d, J = 8,30 Hz, 1Η), 5.95 (d, J = 3,21 Ηz, 2Η), 5,52 (d, J = 3,96 Ηz, 1Η), 4,86 ​​(d, J = 3,96 Hz, 1Η), 4,10 (s, 3Η), 4.04 (s, 3Η), 3.86 (s, 3Η), 3,80 (d, J = 15,86 Hz, 1Η), 3,65 (s, 3Η), 3,54 (d, J = 15,86 Hz, 1Η), 2,81 – 2,53 (m, 2Η), 2,40 – 2,23 (m, 1Η), 1,94 – 1,74 (m, 1Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 171,7, 167,8, 152,1, 148,3, 147,5, 140,2, 140,1, 134,2, 131,8, 120,1 , 117,9, 117,7, 117,3, 102,3, 100,7, 82,2, 62,1, 59,4, 58,2, 58,1, 56,6, 51,1, 47,3, 28.9.MS (ESI) m /z 494 [Μ + Η]

+.

Ethyl 2-((R)-5-((S)-4,5-dimethoxy-3-oxo-1,3-dihydroisobenzofuran-1-yl)-4-methoxy-7,8-dihydro-[1,3]dioxolo[4,5-

g

]isoquinolin-6(5H)-yl)acetate (6ι): Απόδοση: 98%? mp 92 ° C? [Α]

D

25 = -174,68 (c = 1, διχλωρομεθάνιο)? IR ν

max (cm

-1): 3511, 2945, 2921, 2839, 1763, 1727, 1625, 1481, 1389, 1270, 1203, 1111, 1032, 931, 817, 790, 703, 614

1.HNMR (300 ΜΗζ,

3) δ 6,90 (d, J = 8,12 Hz, 1Η), 6,27 (s, 1Η), 6,01 – 5,82 (m, 3Η), 5.44 (d, J = 3,96 Hz, 1Η), 4,84 (d, J = 3,96 Hz, 1Η), 4,19 – 4,00 (m, 8Η), 3,85 (s, 3Η), 3.83 (d, 1Η), 3,49 (d, J = 17,56 Hz , 1Η), 2,75 – 2,54 (m, 2Η), 2.38-2.20 (m, 1Η), 1,91 – 1,71 (m, 1Η), 1,24 (t, 3Η)

13.CNMR (75 ΜΗζ,

3) δ 171.2, 167.7, 152.1, 148.3, 147.5, 140.3, 140.1, 134.2, 131.9, 120.2, 117.8, 117.7, 117.4, 102.3, 100.7, 96.0, 82.2, 62.2, 60.1, 59.4, 58.1, 56.6, 47.3, 29.0, 14.1. MS (ESI) m /z 486 [Μ + Η]

+? HRMS (ESI) υπολογισμένη για C

25Η

27 ΟΧΙ

9ΝΑ: 508.1583, βρέθηκε:. 508.1578 δεδομένων

ακτίνων Χ κρυσταλλογραφική ανάλυση

X-ray για το. οι ενώσεις 6h και 6i συλλέχθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου χρησιμοποιώντας ένα Bruker Smart Apex CCD περιθλασίμετρο με γραφίτη μονοχρωματική ακτινοβολία MoKα (λ = 0.71073Å) χρησιμοποιώντας ω-σάρωση μέθοδο [50]. Προκαταρκτική παράμετροι πλέγματος και μήτρες προσανατολισμός ελήφθησαν από τέσσερα σύνολα των πλαισίων. Ένταξη και την κλιμάκωση των δεδομένων έντασης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα SAINT. Οι δομές των 6h και 6i επιλύθηκαν με απευθείας μεθόδους χρησιμοποιώντας SHELXS97 και τελειοποίηση διεξήχθη με τεχνική πλήρους μήτρας ελαχίστων τετραγώνων χρησιμοποιώντας SHELXL97 [50]. παράμετροι Ανισοτροπικό μετατόπισης συμπεριλήφθηκαν για όλα τα άτομα μη-υδρογόνου. Όλα τα άτομα Η συνδέονται με C και Ν βρίσκονταν σε διαφορά χάρτες Fourier και οι γεωμετρικά βελτιστοποιημένες και αφέθηκαν για όσο άτομα ιππασία, με CH = 0,93 – 0,97 Α, ΝΗ = 0,86 Α, με U

ισο (H) = 1.5U

eq (C) για μεθύλιο Η ή 1.2U

eq (C, N). Οι ομάδες μεθυλίου είχαν τη δυνατότητα να περιστρέφεται αλλά όχι να ανατρέψει τα δεδομένα

κρύσταλλο για 6 ώρες:. C

24H

25NO

8,

Μ

= 455.45, άχρωμο πλάκα, 0,17 x 0,15 x 0,07 χιλιοστά

3, ορθορομβικό, χώρος ομάδα

P

2

12

12

1 (Νο 19),

μια

= 8,7173 (12),

β

= 12.8144 (17),

γ

= 19.436 (3),

V

= 2171,2 (5)

3

Z

= 4,

D

c = 1.393 g /cm

3, F

000 = 960, CCD Περιοχή ανιχνευτή, MoKα ακτινοβολία, λ = 0,71073 Α,

T

= 294 (2) Κ, 2

θ

max = 50.0 °, 21015 αντανακλάσεις συλλέγονται, 2200 μοναδικό (R

int = 0,0227). Τελική βλάκας = 1.045,

R1

= 0.0279,

wR2

= 0,0774,

R

δείκτες που βασίζονται σε 2086 ανακλάσεις με το I & gt? 2σ (Ι) (φινέτσα στο F

2), 302 παραμέτρους, 0 περιορισμούς, μ

= 0,105 χιλιοστά

-1. CCDC 914991 περιέχει συμπληρωματικές κρυσταλλογραφικά δεδομένα για τη δομή. Η λεπτομερής διαλεύκανση της κρυσταλλικής δομής και της ανάλυσης θα δημοσιευθεί αλλού δεδομένων

Κρυστάλλινα για 6i:. C

24H

25NO

9,

Μ

= 471.45, άχρωμο βελόνα , 0,18 0,12 0,08 χιλιοστών

3, τετράγωνος, χώρος ομάδα

P

4

32

12 (Νο 96),

μια

=

b

= 11.6748 (4),

γ

= 32,753 (2) Α,

V

= 4464,3 (4) A

3

Z

= 8,

D

c = 1,403 g /cm

3, F

000 = 1984, CCD Περιοχή ανιχνευτή, MoKα ακτινοβολία, λ = 0,71073 Α,

T

= 294 ( 2) Κ, 2

θ

max = 50.0 °, 43048 αντανακλάσεις συλλέγονται, 2346 μοναδικό (R

int = 0,0252). Τελική βλάκας = 1.051,

R1

= 0.0396,

wR2

= 0,1095,

R

δείκτες που βασίζονται σε 2198 ανακλάσεις με το I & gt? 2σ (Ι) (φινέτσα στο F

2), 311 παραμέτρους, 0 περιορισμούς,

μ

= 0,108 χιλιοστά

-1. CCDC 914990 περιέχει συμπληρωματικές κρυσταλλογραφικά δεδομένα για τη δομή. Η λεπτομερής διαλεύκανση της κρυσταλλικής δομής και της ανάλυσης θα δημοσιευθεί αλλού.

τουμπουλίνης καθαρισμό.

τουμπουλίνης άνευ μικροσωληνίσκους σχετίζονται πρωτεΐνες (MAPs) καθαρίστηκε από βόειο εγκέφαλο με κύκλους πολυμερισμού εξαρτάται από τη θερμοκρασία 0.072⟨

U

vdw

⟩−0.006⟨

U

elec

⟩−0.951⟨

U

cav

⟩. 0.7-5.6916a-5.997-62.8167.520.820-5.707–6b-6.918-60.2557.270.988-5.622–6c-6.087-63.6841.560.846-5.63991 8.0-5.5186d-6.882-64.8535.950.865-5.708–6e-6.907-61.8579.0910.972-5.852–6f-7.252-62.6276.071.287-6.18938 4.0-6.0366g-5.767-61.3464.560.445-5.227–6h-7.196-65.0855.791.033-6.003–6i-5.712-62.1241.140.723-5.40779 0.072⟨

U

vdw

⟩−0.006⟨

U

elec

⟩−0.951⟨

U

cav

⟩. hours

Sub-G

1

G

0/G

1

S

G

2/M

Sub-G

1

G

0/G

1

S

G

2/M

Sub-G

1

G

0/G

1

S

G

2/M

Noscapine0.2958.8510.2424.297.2419.484.1962.3830.6219.058.5337.365a0.2763.3712.9319.458.4613.474.0866.3741.5710.747.0839.256a1.4467.069.5320.178.1216.284.9463.1844.829.067.3937.726b0.7455.3912.1728.797.3719.424.1664.4243.1811.387.5335.846c0.8260.6611.4924.298.0820.724.8563.4936.7315.388.2738.416d0.5256.8212.2828.397.2722.734.6259.4145.388.297.8336.186e0.8762.5711.9323.158.1712.844.5768.4245.427.026.8338.526f1.0464.269.5122.479.4711.826.2967.4850.446.384.7237.296g0.6263.3212.9221.3710.8620.944.0862.2840.2912.768.0737.936h0.3561.1612.2925.0911.3712.255.9268.5848.737.196.2836.186i0.4657.4111.0827.1412.2519.574.6263.3840.1814.376.4337.156j0.3959.159.4724.358.2925.713.0966.1727.2422.168.6339.48Table