Abstract

Ο υποδοχέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) είναι ένα μέλος της οικογένειας ErbB υποδοχέων-κινασών τυροσίνης. EGFR ενεργοποιείται με την δέσμευση σε π.χ. του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF), που οδηγεί σε κυτταρική επιβίωση, τον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση. EGFR υπερενεργοποίηση σχετίζεται με την εξέλιξη του όγκου. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι το χαμηλό φωτισμό UVB δόση των καρκινικών κυττάρων που υπερεκφράζουν EGFR πριν από την προσθήκη EGF σταμάτησε τον EGFR μονοπάτι σηματοδότησης. Εμείς εδώ δείχνουν ότι φωτισμό UVB της εξωκυττάριας περιοχής του EGFR (sEGFR) επάγει διαμορφωτικές αλλαγές πρωτεΐνη, δισουλφιδίου θραύση γέφυρα και το σχηματισμό των φωτοπροϊόντων τρυπτοφάνης και τυροσίνης όπως dityrosine, Ν-formylkynurenine και κυνουρενίνης. φασματοσκοπία φθορισμού, κυκλική διχρωισμού και θερμικές μελέτες επιβεβαιώνουν την εμφάνιση διαμορφωτικές αλλαγές. Μια ανοσολογική δοκιμή επιβεβαίωσε ότι το φως UVB προκαλεί διαρθρωτικές αλλαγές στην θέση πρόσδεσης του ΕΤΠ. Ένα μονοκλωνικό αντίσωμα που ανταγωνίζεται με EGF για σύνδεση sEGFR χρησιμοποιήθηκε. Αναφέρουμε σαφείς αποδείξεις ότι το φως UVB προκαλεί δομικές αλλαγές στο EGFR που παρεμποδίζει τη σωστή σύνδεσης ενός ειδικού αντισώματος EGFR που ανταγωνίζεται με EGF για σύνδεση EGFR, επιβεβαιώνοντας ότι η 3D δομή της περιοχής δέσμευσης EGFR που υπέστη διαμορφωτικές μεταβολές μετά το φωτισμό UV. Η ακτινοβολία που χρησιμοποιείται είναι της ίδιας τάξης μεγέθους με την ολοκληρωμένη ένταση του ηλιακού φάσματος UVB. Η νέα τεχνολογία φωτονική απενεργοποιεί ένα κλειδί υποδοχέα και είναι πολύ πιθανό να εφαρμοσθεί στην αγωγή των διαφόρων τύπων καρκίνου, μόνο του ή σε συνδυασμό με άλλες θεραπείες

Παράθεση:. Correia Μ, Thiagarajan V, Coutinho Ι, Gajula GP, Petersen SB, Neves-Πέτερσεν MT (2014) η διαμόρφωση της δομής του EGFR με υπεριώδες φως: Νέες δυνατότητες στο Cancer Therapy. PLoS ONE 9 (11): e111617. doi: 10.1371 /journal.pone.0111617

Επιμέλεια: Federico Quaini, Πανεπιστήμιο-Νοσοκομείο της Πάρμα, Ιταλία

Ελήφθη: May 18, 2014? Αποδεκτές: 6 Οκτωβρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 11 Νοεμβρίου 2014

Copyright: © 2014 Correia et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. MC αναγνωρίζει την υποστήριξη από το «Fundaço para a Επιστημών e Tecnologia» (FCT) για τη χορήγηση διδακτορικό (SFRH /BD /61012/2009) υποστηρίζεται από «Programa Operacional δυνητικών Humano «(POPH) στο πλαίσιο της» Quadro de Referência Estratégica Nacional »(QREN) και συγχρηματοδοτείται από το Ευρωπαϊκό Κοινωνικό Ταμείο (« Fundo Κοινωνικής Europeu «, FSE). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η οικογένεια ErbB υποδοχέων-κινασών τυροσίνης (RTKs) παίζει ένα ρόλο κλειδί στη ρύθμιση φυσιολογικές κυτταρικές διεργασίες όπως κυτταρική επιβίωση, τον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση [1], [2], και έχουν ένα κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη και την πρόοδο των καρκίνων [3]. Ο υποδοχέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR? ErbB1) είναι ένα μέλος αυτής της οικογένειας [4]. σύνδεση προς συνδετήρες όπως του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) ή παράγοντα μετασχηματισμού άλφα ανάπτυξης (ΤΟΡ-α) EGFR οδηγεί σε διμερισμό υποδοχέα και την ενεργοποίηση του ενδοκυτταρική περιοχή κινάσης τυροσίνης [1], [2]. Η εξωκυτταρική περιοχή του EGFR (sEGFR, διαλυτή εξωκυτταρική περιοχή του EGFR) περιλαμβάνει 4 υπο-τομείς: 2 μεγάλα ομόλογες περιοχές δέσμευσης (Ι και III), καθώς και 2 ομόλογες περιοχές πλούσιες σε φουρίνη όπως κυστεΐνη (II και IV). Τομείς Ι, II και III έχουν βρεθεί να εμπλέκονται άμεσα στο σχηματισμό διμερούς σύνδεσης συνδετήρα και που προηγούνται του μηχανισμού μεταγωγής σήματος από RTKs [1], [5], [6]. εξέλιξης του καρκίνου έχει συσχετιστεί με την αύξηση του αριθμού των μορίων EGFR στην επιφάνεια των κυττάρων [7]. Υψηλή έκφραση του EGFR γενικά συνδέεται με εισβολή, μετάσταση, τελικού σταδίου νόσο, αντίσταση χημειοθεραπεία, ορμονική θεραπεία αντίσταση και την κακή γενική θεραπευτικό αποτέλεσμα. υπερέκφραση EGFR έχει βρεθεί να είναι ένας ισχυρός προγνωστικός δείκτης στο κεφάλι και το λαιμό, των ωοθηκών, του τραχήλου της μήτρας, της ουροδόχου κύστης και του οισοφάγου καρκίνων, μια μέτρια προγνωστικός δείκτης στο μητρικό, του παχέος εντέρου, του στομάχου και του καρκίνου του ενδομητρίου και ένα ασθενές προγνωστικό δείκτη σε μη μικρού κυττάρου πνεύμονα καρκίνο [7]. EGFR είναι ο στόχος πολλών χημειοθεραπευτική προσεγγίσεις λόγω αποτελέσματα ενεργοποίηση EGFR σε κύτταρο καταρράκτες που προωθούν την ανάπτυξη του όγκου σηματοδότησης. Η αναστολή της λειτουργίας EGFR είναι επομένως μια ορθολογική προσέγγιση θεραπείας. Τυπικοί παράγοντες είναι chemotherapeutical EGFR αναστολείς κινάσης τυροσίνης που ανταγωνίζονται με ΑΤΡ κατά την ενδοκυτταρική περιοχή κινάσης τυροσίνης, και μονοκλωνικά αντισώματα (mAbs) που εμποδίζουν σύνδεσης συνδετήρα ή υποδοχέα διμερισμού. Εμποδίζοντας την σύνδεση του EGF στον EGFR μπορεί να καταργήσει τον πολλαπλασιασμό του καρκίνου, εισβολή, μετάσταση, αγγειογένεση και την αναστολή της απόπτωσης [8].

Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι το φωτισμό UVB (280 nm, 0,35 W /m

2 για 30 λεπτά) των καρκινικών κυττάρων που υπερεκφράζουν EGFR οδήγησε στη σύλληψη του μονοπατιού σηματοδότησης EGFR [9]. Απόδειξη της ιδέας έχει τεκμηριωθεί στις γραμμές Α431 κυττάρων (κύτταρα ανθρώπινου επιδερμοειδούς καρκινώματος) και Cal39 (προέρχεται από ανθρώπινα κύτταρα αιδοίου πλακώδες καρκίνωμα). Η ακτινοβολία που χρησιμοποιήθηκε ήταν χαμηλότερο από το συνολικό UVB ηλιακή ακτινοβολία [10]. UVB εμπόδισε EGF προκάλεσε ενεργοποίηση του EGFR, καταργώντας φωσφορυλίωση της ενδοκυτταρικής περιοχής του EGFR και άλλων βασικών κατάντη πρωτεΐνες σηματοδότησης όπως ΑΚΤ (Protein Kinase Β) και των ενεργοποιημένων από μιτογόνο κινασών πρωτεΐνης (ERK1 και 2). ΑΚΤ παίζει καθοριστικό ρόλο στην π.χ. το μεταβολισμό της γλυκόζης, την απόπτωση, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη μεταγραφή και τη μετανάστευση των κυττάρων. ΑΚΤ εμπλέκεται σε οδούς κυτταρικής επιβίωσης μέσω αναστολής αποπτωτικών διεργασιών [11] – [16]. Οι κινάσες ΕΚΚ δρουν σε έναν καταρράκτη σηματοδότησης που ρυθμίζει κυτταρικές διαδικασίες όπως πολλαπλασιασμό, διαφοροποίηση, και την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου [17].

Ένας από τους πιθανούς λόγους για την επαγόμενη παρατηρείται το υπεριώδες φως σύλληψη του μονοπατιού σηματοδότησης EGFR είναι η UVB επαγόμενη φωτοχημεία, οδηγώντας σε αλλαγές στην διαμόρφωση EGFR που πιθανότατα εμποδίζουν τη σωστή σύνδεση προς EGF. προηγούμενη εργασία μας για την επαγόμενη από UVB φωτοχημεία σε πρωτεΐνες (μήκη κύματος χρησιμοποιείται 275-295 nm) [18] – [22] υποστηρίζει αυτή την υπόθεση. UVB διέγερση των αρωματικών υπολειμμάτων σε πρωτεΐνες οδηγεί στη διάσπαση των δισουλφιδικών γεφυρών και στο σχηματισμό φωτοπροϊόντα, όπως Ν-formylkynurenine (NFK), κυνουρενίνης (Kyn) [23], [24] και dityrosine (DT) [25] – [27] (βλέπε σχήμα 1). Τέτοιες αντιδράσεις θα προκαλέσει πιθανότατα δομικές αλλαγές σε πρωτεΐνες οι οποίες μπορεί να εξασθενίσει τη δραστηριότητα τους [22]. Πρωτεΐνες που είναι πλούσια σε αρωματικά κατάλοιπα και δισουλφιδικές γέφυρες είναι πιθανό να έχουν δομή τους σημαντικά μειωμένη μετά από παρατεταμένες διέγερση UVB. sEGFR είναι εξαιρετικά πλούσια σε δισουλφιδικές γέφυρες σε σύγκριση με το φυσικό μέσο αφθονία των γεφυρών δισουλφιδίου σε πρωτεΐνες δομές του μεγέθους του sEGFR, όπως θα φανεί στην ενότητα αποτελέσματα. Η% δισουλφιδικών γεφυρών σε sEGFR είναι περίπου 13 φορές υψηλότερο από το αναμενόμενο για μια πρωτεΐνη του μεγέθους του. Τα αναμενόμενη μέση αποτελέσματα έχουν αναφερθεί στο παρελθόν από την ομάδα μας μετά από μια ολοκληρωμένη ανάλυση των χαρακτηριστικών των γεφυρών δισουλφιδίου υπάρχει σε 131 μη ομόλογες δομές μοναδική πρωτεΐνη αλυσίδα [28]. Επιπλέον, η εξωκυτταρική περιοχή του sEGFR έχει 40 αρωματικά κατάλοιπα και 25 δισουλφιδικών γεφυρών ανά μονομερές και πολλά από τα αρωματικά υπολείμματα είναι σε στενή γειτνίαση με γέφυρες δισουλφιδίου (βλέπε Σχήμα 2). Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι ο φωτισμός UV αυτής της πρωτεΐνης θα οδηγήσει σε δισουλφιδικού γέφυρα θραύση και να φωτοπροϊόντα. Αυτή η υπόθεση θα εξεταστεί στο παρόν έγγραφο μας.

Η

(Α) Κρυσταλλική δομή του EGFR εξωκυτταρική περιοχή (1ivo.pdb, αλυσίδα Α) [1]. Οι δισουλφιδικές γέφυρες και τα άτομα αρωματικά υπολείμματα εμφανίζεται ως CPK: γέφυρες SS σε κίτρινο, Trp στο πράσινο, Tyr σε βιολετί (Προσπαθήστε 246 και Tyr 251 εμφανίζονται σε ροζ) και Phe σε κυανό. Μόνο 18 από 25 γέφυρες SS, 5 από 6 υπολείμματα Trp, 13 από τα 16 υπολείμματα Tyr και 17 από τα 18 υπολείμματα Phe εμφανίζονται αφού μερικά υπολείμματα λείπουν από το αρχείο pdb. δομή (Β) κρυστάλλου ενός 1:01 συμπλόκου μεταξύ ανθρώπινης EGF και τη διμερή μορφή του EGFR εξωκυτταρική περιοχή (1ivo.pdb, αλυσίδα Α και Β και 2 EGF μόρια [1]). EGF εμφανίζεται με κόκκινο χρώμα. (C) Μεγέθυνση στην περιοχή διεπαφής που υπάρχουν στο διμερές του EGFR (εξωκυτταρικών περιοχών). Αποστάσεις μεταξύ μερικά από τα αρωματικά κατάλοιπα και τα κοντινά δισουλφιδικές γέφυρες εμφανίζονται επίσης. δομή (D) κρυστάλλου ενός 1:01 συμπλόκου μεταξύ ανθρώπινης EGF και τη διμερή μορφή του EGFR εξωκυτταρικής περιοχής. (1ivo.pdb, αλυσίδα Α και Β και 2 ΕΤΠ μόρια [1]) EGF εμφανίζεται με κόκκινο χρώμα. Στο δεξιό πίνακα όλα τα άτομα που εμφανίζονται ως CPK. EGF σύνδεσης με sEGFR περιλαμβάνει εκτεταμένη μη-ομοιοπολικούς επαφές.

Η

ότι οι κίνδυνοι της υπερβολικής έκθεσης στην ηλιακή ακτινοβολία έχουν καλά δημοσιότητα, λιγότερη προσοχή έχει δοθεί στα οφέλη για την υγεία από έκθεση σε UV ακτινοβολία. Οι επιδράσεις της υπεριώδους φωτός επί βιομόρια, κύτταρα και ιστούς θα εξαρτάται από την ενέργεια που απελευθερώνεται ανά μονάδα επιφάνειας. UVB (280-315 nm) ακτινοβολία είναι η κύρια συμβολή στην παραγωγή της βιταμίνης D, η οποία έχει μια προστατευτική επίδραση στο παχύ έντερο, προστάτη και του καρκίνου του μαστού [29], [30]. Η έκθεση στο φως του ήλιου σε χαμηλές δόσεις έχει επίσης συνδεθεί με τη βελτίωση των ποσοστών επιβίωσης του καρκίνου [31], [32]. Υπεριώδες φως έχει χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία με επιτυχία ραχίτιδα, ψωρίαση, vulgaris λύκο, λεύκη, ατοπική δερματίτιδα και εντοπισμένη σκληροδερμία και ίκτερο (Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας Οι γνωστές συνέπειες για την υγεία των UV

Ultrav Radiat INTERSUN Πρόγραμμα -….. FAQ

στο https://www.who.int/uv/faq/uvhealtfac/en/index1.html). Δεν υπάρχει άμεση και πειστικά στοιχεία που να υποδηλώνουν αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του δέρματος από τις θεραπείες UVB για την ψωρίαση εφόσον τηρούνται δόσεις ακτινοβολίας. Υπεριώδες φως αυτή τη στιγμή χρησιμοποιείται για τη θεραπεία δερματικών Τ-κυτταρικό λέμφωμα (American Cancer Society, 2011 στις https://www.cancer.org). Αυτή η θεραπεία έχει βελτιωθεί από την Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA, USA). Τα προστατευτικά αποτελέσματα της έκθεσης στον ήλιο τακτική σαββατοκύριακο έχουν αναφερθεί, ιδιαίτερα στην περίπτωση των όγκων των άκρων [33]. Το μελάνωμα είναι πιο συχνή μεταξύ των ανθρώπων με εσωτερική επαγγέλματα από ό, τι μεταξύ των ανθρώπων που έχουν υπαίθριες δραστηριότητες (χωρίς ηλιακό έγκαυμα), όπως αγρότες, ψαράδες, και τα παιδιά που παίζουν σε εξωτερικούς χώρους [34], [35]. Ο καρκίνος του δέρματος είναι ακόμα σε άνοδο, αλλά αυτό είναι ένα αποτέλεσμα της έκθεσης σε υπεριώδη ακτινοβολία τόσο από οξεία υπερδοσολογία (που προκαλεί τα ηλιακά εγκαύματα) και τη δια βίου αθροιστική έκθεση [36]. Είναι κυρίως η UVB κλάσμα της ηλιακής ακτινοβολίας που δίνει ερύθημα, μελανογένεση (παραγωγή μελανίνης, η οποία ενεργεί ως αντηλιακό προστασία από φωτογήρανσης DNA και ερύθημα), σύνθεση βιταμίνης D, και καρκίνο του δέρματος μη-μελανώματος, ενώ το μελάνωμα είναι πιθανό να προκληθεί από UVA [37]. Jones et al (1987) βρήκαν ότι μεταξύ των μηκών κύματος UVA, 365 nm είχε το υψηλότερο μεταλλαξιογόνο δράση [38]. ποσοστά ευχέρεια UVA είναι πολλές φορές υψηλότερο για τις ξαπλώστρες από ό, τι στην περίπτωση της άμεσης ηλιακής ακτινοβολίας [39]. Τα παραπάνω παραδείγματα τεκμηριώνουν ότι οι επιπτώσεις στην υγεία από έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία είναι δόσης και εξαρτάται από το μήκος κύματος.

Ο στόχος της παρούσας εργασίας είναι να διερευνηθεί αν μια χαμηλή δόση του φωτός UVB μπορεί να προκαλέσει διαρθρωτικές αλλαγές στην ΕΤΠ θέση σύνδεσης του EGFR ότι θα μπορούσε να βλάψει τη σωστή σύνδεση του μόρια, ένα τέτοιο ειδικό αντίσωμα που είναι γνωστό ότι ανταγωνίζονται με EGF για σύνδεση EGFR. Εάν παρατηρηθεί, αυτό θα μας δώσει διορατικότητα γιατί φωτισμό UVB (280 nm) των καρκινικών κυττάρων που υπερεκφράζουν EGFR οδήγησε στη σύλληψη του μονοπατιού σηματοδότησης EGFR [9]. Η ακτινοβολία UVB που χρησιμοποιείται είναι της ίδιας τάξης μεγέθους με τη συνολική ακτινοβολία του ηλιακού UVB. φασματοσκοπίας φθορισμού και μελέτες κυκλικού διχρωϊσμού πραγματοποιήθηκαν για τον εντοπισμό UVB που προκαλούνται διαμορφωτικές αλλαγές. Οι μελέτες Θερμική εκτυλίσσεται έχουν γίνει προκειμένου να καθοριστεί το σημείο τήξης της πρωτεΐνης πριν και μετά το φωτισμό. Φως που προκαλείται θραύση των γεφυρών δισουλφιδίου έχει ποσοτικοποιηθεί και ο σχηματισμός Trp /Tyr φωτοπροϊόντα έχει ανιχνευθεί. Μία ανοσοδοκιμασία πρόσδεσης διεξάγονται προκειμένου να συναγάγει τα αποτελέσματα φωτισμού UVB για τη δομή της θέσης δέσμευσης EGF. Η μελέτη μας επιβεβαιώνει ότι τα χαμηλά UVB δόση (280 nm) το φωτισμό των sEGFR που επάγεται δομικές αλλαγές στο πεδίο σύνδεσης EGFR που εξασθενημένη η σύνδεση ενός ειδικού αντισώματος που είναι γνωστό ότι ανταγωνίζονται με EGF για σύνδεση EGFR σε αυτό το συγκεκριμένο τομέα. Απευθυνόμαστε τα ευεργετικά αποτελέσματα του υπεριώδους φωτός, παρούσα εφαρμογή του στη θεραπεία των ασθενειών και του δυναμικού του υποθετικού νέου φωτονικών θεραπεία μας για τη θεραπεία της εντοπισμένους όγκους που συνδέονται με την υπερέκφραση του UV ευαίσθητων κυτταρικών υποδοχέων.

Αποτελέσματα

τρισδιάστατη δομή των μονομερών και διμερών sEGFR

στο Σχήμα 2Α απεικονίζεται η 3D δομή του μονομερούς sEGFR (1ivo.pdb, αλυσίδα Α) συνδέεται με επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (EGF, με κόκκινο) . sEGFR περιέχει 25 γέφυρες SS, 6 υπολείμματα Trp, 16 υπολείμματα Tyr, και 18 κατάλοιπα Phe, εμφανίζεται ως CPK: SS γέφυρες σε κίτρινο, Trp στο πράσινο, Tyr σε βιολετί (Tyr246 και Tyr251 σε ροζ) και Phe σε κυανό. Μόνο 18 από 25 γέφυρες SS, 5 από 6 υπολείμματα Trp, 13 από τα 16 υπολείμματα Tyr και 17 από τα 18 υπολείμματα Phe εμφανίζονται αφού μερικά υπολείμματα λείπουν από το αρχείο pdb. Πολλά αρωματικά υπολείμματα που βρίσκονται σε στενή χωρική εγγύτητα των SS ομολόγων.

Στο Σχήμα 2Β απεικονίζεται η δομή 3D του διμερούς EGFR (1ivo.pdb, αλυσίδες Α και Β) που σχηματίζονται κατά τη δέσμευση EGF (σε κόκκινο). Η διεπαφή διμερές είναι πλούσια σε δισουλφιδικές γέφυρες και αρωματικά υπολείμματα (Εικ. 2Β). Υπολείμματα Tyr246 και Tyr251 (Σχήμα 2Β, σε ροζ) από μία αλυσίδα, είναι συνυφασμένες με τα ίδια υπολείμματα από την άλλη αλυσίδα. Ένα zoom σε μία από τις αλυσίδες εμφανίζεται στο Σχήμα 2C και αποστάσεις μεταξύ αρωματικά κατάλοιπα και γέφυρες δισουλφιδίου δείχνεται. EGF σύνδεσης με EGFR εμφανίζεται στο Σχήμα 2Δ (μονομερές EGFR). Η αλληλεπίδραση μεταξύ του EGFR και EGF φαίνεται να εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από Van der Waals αλληλεπιδράσεις. Ορισμένες από αυτές τις αλληλεπιδράσεις είναι π-π αλληλεπιδράσεις, όπως η αλληλεπίδραση μεταξύ Phe357 (κυανό) του sEGFR και Tyr13 (βιολετί) του EGF (5 Α).

Protein Bioinformatics

το Σχήμα 3 εμφανίζεται το κλάσμα δισουλφιδικών γεφυρών που υπάρχουν στο sEGFR και την εξάρτηση της μέσης κλάσμα δισουλφιδικών γεφυρών με το μήκος της αλυσίδας πρωτεΐνη [28]. Η αναμενόμενη μέση κλάσμα δισουλφιδικών γεφυρών για πρωτεΐνες με μήκος αλληλουχία 600-650 υπολειμμάτων είναι ~ 0,3%, ενώ σε sEGFR (622 αα) είναι ~ 4%, επιβεβαιώνοντας ότι αυτή η πρωτεΐνη είναι εξαιρετικά πλούσια σε γέφυρες δισουλφιδίου. Τα αναμενόμενα αποτελέσματα κατά μέσο όρο έχει αναφερθεί στο παρελθόν από την ομάδα μας μετά από να κάνει μια ολοκληρωμένη ανάλυση των χαρακτηριστικών των γεφυρών δισουλφιδίου υπάρχει σε 131 μη ομόλογες πρωτεϊνικές δομές ενιαία αλυσίδα [28].

Το κλάσμα των γεφυρών δισουλφιδίου υπολογίσθηκε καθώς ο αριθμός των δισουλφιδικών γεφυρών που βρέθηκαν σε μία πρωτεΐνη διαιρούμενο με το μήκος της αλληλουχίας της πρωτεΐνης (αριθμός αμινοξέων) χ 100. εμφανίζεται το κλάσμα των δισουλφιδικών γεφυρών που υπάρχουν στο μονομερείς εξωκυτταρική περιοχή του EGFR.

Η

σταθερή κράτος φθορισμού

Η φθορισμού ένταση εκπομπών της sEGFR στα 350 nm μειώνεται κατά συνεχή 280 nm διέγερση (Εικόνα 4Α). Η κινητική ίχνος καλύτερα εξοπλισμένο από ένα δι-εκθετικό μοντέλο (Σχήμα 4Α και μεθόδους). Η ρίζα του μέσου τετραγωνικού σφάλματος R

2 ήταν 0,99774. Οι τιμές που ανακτώνται από την τοποθέτηση για C1 και C2 ήταν 367.240,44 ± 1182,23 και 208.449,95 ± 1.054,90, αντίστοιχα. Οι σταθερές ρυθμού εκπομπή φθορισμού ένταση μείωση Κ1 και Κ2 εφοδιασμένο τιμές ήταν 117,63 ± 0,71 min-1 και 12,20 ± 0,10 min-1, αντίστοιχα.

κινητική ένταση (Α) Η εκπομπή φθορισμού στα 350 nm του ανθρώπινου EGFR εξωκυττάριας (sEGFR) δείγμα κατά την διάρκεια 75 λεπτών φωτισμό υπεριώδους στα 280 nm. (Β) Τα φάσματα εκπομπής φθορισμού των δειγμάτων sEGFR λαμβάνεται κατά 295 nm διέγερση μετά 280 nm για το φωτισμό 0 λεπτά, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 60 λεπτά και 75 λεπτά. (Γ) φθορισμού διεγέρσεως φάσματα των δειγμάτων sEGFR που καταγράφονται με εκπομπή καθορίζεται σε 334 nm διέγερση 280 nm μετά το φωτισμό για 0 ​​λεπτά, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 60 λεπτά και 75 λεπτά.

Η

Εκπομπή Spectra (διέγερση 280 nm και 295 nm).

φάσματα εκπομπής sEGFR καταγράφηκαν κατά 280 nm διέγερση πριν και μετά την συνεχή φωτισμό 280 nm (15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά και 75 λεπτά σε 2,5 W /m

2) (δεν φαίνεται). Μια μείωση στην ένταση της εκπομπής φθορισμού στα ~337 nm, όπου Trp και Tyr εκπέμπουν, παρατηρείται οφείλεται σε συνεχή φωτισμό. Η ένταση εκπομπής στα 337 nm μειώνεται κατά 43% και 74% μετά από 15 λεπτά και 75 λεπτά από συνεχή φωτισμό 280 nm, αντίστοιχα. Το μήκος κύματος της πιο έντονης κορυφής με κέντρο το 337 nm παραμένει σταθερή.

Τα φάσματα εκπομπής καταγράφηκαν sEGFR κατόπιν 295 nm διέγερση πριν και μετά από συνεχή φωτισμό 280 nm (15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά και 75 λεπτά ) δείχνονται στην Εικόνα 4Β. Μια μείωση στην ένταση της εκπομπής φθορισμού στα ~337 nm, όπου Trp εκπέμπει, παρατηρείται. Η ένταση εκπομπής sEGFR σε 337 nm μειώνεται κατά 42% και 77% μετά από 15 λεπτά και 75 λεπτά από συνεχή φωτισμό 280 nm, αντίστοιχα. Το μήκος κύματος της πιο έντονης κορυφής με κέντρο το 337 nm παρατηρείται σε κόκκινο-στροφή σε 343 nm μετά από 75 λεπτά φωτισμού.

διέγερσης Spectra (εκπομπή 334 nm).

Στην Εικόνα 4C είναι εμφανίζεται τα φάσματα διέγερσης του sEGFR με εκπομπής φθορισμού καθορίζεται σε 334 nm, πριν και μετά από συνεχή φωτισμό 280 nm της πρωτεΐνης για διαφορετικές χρονικές περιόδους: 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 60 λεπτά και 75 λεπτά. Trp και απορρόφηση Tyr συμβάλλουν σε αυτό το φάσμα. Συνεχής 280 nm φωτισμός οδηγεί σε μια προοδευτική μείωση στην ένταση διέγερσης φθορισμού. Μετά από 15 λεπτά και 75 λεπτά του φωτισμού, η ένταση διέγερσης στα 282 nm μειώνεται κατά 40% και 71%, αντίστοιχα. Ο ανταποκριτής φάσματα κανονικοποιημένη διέγερσης (δεν φαίνεται) δεν δείχνουν μετατόπιση στο μήκος κύματος στη μέγιστη ένταση διέγερσης (~282 nm).

θερμική μελέτες εκδίπλωση φθορισμού με βάση πρωτεΐνη.

Η ένταση εκπομπής φθορισμού στα 330 nm (χωρίς Φ.Π.Α.. 295 nm) ενός φρέσκου δείγματος sEGFR (μη Illum.) και φωτίζεται το δείγμα sEGFR (75 λεπτά στα 280 nm) παρακολουθούνταν από 4 ° C έως 90 ° C και από 90 ° C έως 4 ° C (βλέπε Σχ. 5). Για τα δύο δείγματα, η ένταση εκπομπής φθορισμού μειώνεται κατά τη θέρμανση. Μια μετάβαση μεταξύ 65-75 ° C παρατηρείται για τη μη φωτιζόμενη sEGFR. Δεδομένων έχει τοποθετηθεί χρησιμοποιώντας μια τροποποιημένη συνάρτηση Boltzmann (βλέπε μεθόδους). Η ρίζα του μέσου τετραγωνικού σφάλματος για τον εξοπλισμό R

2 ήταν 0,99774. Οι τιμές που ανακτώνται από την τοποθέτηση για το

Μια

1,

Β

1,

Μια

2,

Β

2 και

DX

ήταν 1.06202 ± 0,0014, 0.45482 ± 0,02255, -0,00426 ± 5.41E-04, -0,00296 ± 2.72E-04 και 1,74 ± 0,17, αντίστοιχα. Το ανακτημένο παράμετρος

x

0 (69,7 ° ± 0,24 ° C C) αντιστοιχεί στο μεσαίο σημείο της μετάβασης, δηλαδή με τη θερμοκρασία τήξης της πρωτεΐνης. Η τιμή αυτή είναι σε συμφωνία με τις τιμές που σημείο καμπής που λαμβάνεται από τη δεύτερη παράγωγο των τοποθετημένων στοιχείων (δεν φαίνεται). Το δεύτερο παράγωγο είναι μηδέν (σημείο καμπής) μέσα στο διάστημα 68,3 – 69,2 ° C. Τέτοια μετάβαση δεν παρατηρείται για το φωτισμένο δείγμα. Επιπλέον, δεν παρατηρείται μετάπτωση για αμφότερα τα δείγματα κατά την ψύξη της πρωτεΐνης από 90 ° C έως 4 ° C.

Μη φωτίζεται (μη Illum.) Και UV φωτίζεται (Illum. Επί 75 λεπτά) ανθρώπινο εξωκυτταρικό EGFR (sEGFR ) δείγματα θερμάνθηκαν από 4 ° C έως 90 ° C. Εξοπλισμένο τιμές (μη-φωτιζόμενη δείγμα) λήφθηκαν χρησιμοποιώντας μια τροποποιημένη συνάρτηση Boltzmann (βλέπε ενότητα Αποτελέσματα). Η μετάβαση μεσαίο σημείο που ανακτάται από την τοποθέτηση ήταν 69,72 ± 0,24 ° C.

Η

φθορισμό συν τω χρόνω.

Οι χρόνοι φθοράς (τ

i) και προ-εκθετική παράγοντες (

f

i) ανακτάται από τη στιγμή επιλυθεί ένταση διασπάται για το δείγμα ελέγχου sEGFR (75 λεπτά στο σκοτάδι, αρνητικός έλεγχος, NC) και το φωτισμένο δείγμα sEGFR (Illum. για 75 λεπτά σε 280 nm) σε ρΗ 7.5 δίδονται στον πίνακα 1. το Σχήμα 6 δείχνει τα πειραματικά δεδομένα, την προσαρμογή και κατάλοιπα υποθέτοντας τρία διάρκεια ζωής διασπάται για δείγμα ελέγχου sEGFR (NC). Η αξία των χ

2 μειώθηκε σημαντικά όταν προχωρεί από ένα συστατικό μια ζωή ταιριάζει με δύο και τρεις συνιστώσες. Ο φθορισμός μέση διάρκεια ζωής του sEGFR παρουσιάζεται στον Πίνακα 1. Τα μη φωτιζόμενο sEGFR εμφανίζει τρεις χρόνους ζωής: 1.04 ns, 2,74 ns και 6,23 ns με κλάσματα ένταση του 25,6%, 53,1% και 21,1%, αντίστοιχα. Κατά φωτισμός, η συμβολή της μικρότερης έζησε 1,04 ns ειδών αυξήθηκε από 25,6% σε 30,6%, η συμβολή των 2,74 ειδών ns διατηρήθηκε σταθερή και η συμβολή των πλέον έζησε ειδών μειώθηκε από 21,1% σε 16,4%. Επιπλέον, η διάρκεια ζωής του είναι πλέον έζησε συστατικό αυξήθηκε από 6,2 ns έως 7,0 ns, ενώ η διάρκεια ζωής των άλλων δύο συστατικών παρέμεινε σταθερή.

δεδομένα Time-επιλυθεί αποσύνθεση ένταση, προσαρμογή καμπύλης και υπολειμμάτων που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας τη ρουτίνα ISS για το δείγμα sEGFR ελέγχου (φυλάσσεται στο σκοτάδι για 75 λεπτά, αρνητικός έλεγχος, NC).

η

διέγερσης Spectra (εκπομπή 400 nm).

στο Σχήμα 7Α εμφανίζονται τα φάσματα διέγερσης (εκπομπή στα 400 nm) που ελήφθη πριν και μετά από συνεχή φωτισμό 280 nm (0 λεπτά, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 62 λεπτά και 75 λεπτά). Φάσματα καταγράφηκαν προκειμένου να εξακριβωθεί η παρουσία της NFK, dityrosine και Kyn (Εικ. 1). Στον Πίνακα 2 εμφανίζονται απορρόφησης και φθορισμού ιδιότητες εκπομπής τους. Στα 0 λεπτά, μία κορυφή διέγερσης παρατηρούνται με κέντρο ~281 nm. Η έντασή της διασπάται κατά την υπεριώδη φωτισμό της sEGFR, μείωση 52% μετά από 75 λεπτά. Ωστόσο, ο φωτισμός του sEGFR οδηγεί σε αύξηση του διέγερση φθορισμού πάνω από 305 nm. Μετά από 75 min, φθορίζουσα ένταση διέγερσης αυξήθηκε 115% στα 315 nm, όπου dityrosine απορροφά μέγιστα (Abs

max σε 316 nm, [40], βλέπε Πίνακα 2), 149% στα 322 nm, όπου NFK απορροφά μέγιστα (Abs

max σε 321 nm, [23], βλέπε πίνακα 2) και 173% στα 360 nm, όπου Kyn απορροφά μέγιστα (Abs

max σε 360 nm, [23], βλέπε πίνακα 2).

(Α) φθορισμού φάσματα εκπομπής της ανθρώπινης εξωκυτταρικής EGFR (sEGFR) δείγματα που καταγράφονται κατά 320 nm διέγερση μετά 280 nm για το φωτισμό 0 λεπτά, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 60 λεπτά και 75 λεπτά. Τα φάσματα εκπομπής (Β) φθορισμού του sEGFR καταγράφονται κατά 360 nm διέγερση μετά το φωτισμό 280 nm για 0 ​​λεπτά, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά και 75 λεπτά. (Γ) φθορισμού διεγέρσεως φάσματα ελήφθησαν με sEGFR εκπομπή φθορισμού καθορίζεται σε 400 nm μετά 280 nm για το φωτισμό 0 λεπτά, 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 60 λεπτά και 75 λεπτά.

Η

εκπομπών Spectra (διέγερση 320 nm).

για να επαληθευθεί ο σχηματισμός dityrosine (DT) και NFK, φάσματα εκπομπής ελήφθησαν κατά 320 nm διέγερση πριν και μετά από 280 φωτισμό nm (Εικ. 7Β). παρατηρείται μια αύξηση στην ένταση εκπομπής φθορισμού στα 400-405 nm (χωρίς Φ.Π.Α.. 320 nm). Η μέγιστη εκπομπή φθορισμού είναι επικεντρωμένη ~ 400 nm, που αντιστοιχεί στο μέγιστο εκπομπής του DT (Εμ

max σε 400-409 nm, [25], [40], βλέπε Πίνακα 2) και σε μία φασματική περιοχή όπου NFK μπορεί επίσης εκπέμπουν (για NFK, Em

max σε 400-440 nm [23], Πίνακας 2). Μετά από 75 λεπτά, φθορισμού ένταση εκπομπής στα 400 nm αυξάνεται κατά 129%. Μία μικρή κορυφή εκπομπής στα ~368 nm παρατηρείται στα φάσματα που λαμβάνονται σε 0 λεπτά και 15 λεπτά φωτισμού λόγω της συμβολής Raman του νερού. Raman φασματική διορθώσεις δεν καταργήσετε εντελώς αυτό αιχμής.

Εκπομπή φάσματα (διέγερση 360 nm).

Για να εξακριβωθεί η παρουσία της κυνουρενίνης (Kyn) (Abs

max σε 360 nm , [23], Πίνακας 2) σε sEGFR, φάσματα εκπομπής ελήφθησαν κατόπιν 360 nm διέγερση πριν και μετά από 15 λεπτά, 30 λεπτά, 45 λεπτά, 60 λεπτά και 75 λεπτά από 280 nm φωτισμού (Σχ. 7C). Kyn απορροφά μέγιστα σε 360-365 nm και φθορίζει σε μέγιστο βαθμό στα ~434-480 nm ([23], Πίνακας 2). Συνεχή φωτισμό UVB του sEGFR οδηγεί σε αύξηση του φθορισμού με κέντρο ~430-435 nm. Η ένταση του φθορισμού στα 430 nm αυξήθηκε 53% και 172 μετά από 15 λεπτά και 75 λεπτά φωτισμό, αντίστοιχα.

ομάδας θειόλης ποσοτικοποίηση

Για να επιβεβαιώσετε ότι το φωτισμό UV της sEGFR έχει οδηγήσει σε διατάραξη SS , η συγκέντρωση του διαλύτη προσβάσιμες ομάδες θειόλης έχει προσδιορισθεί με δοκιμασία του Ellman για ένα δείγμα ελέγχου sEGFR διατηρούνται στο σκοτάδι για 75 λεπτά (αρνητικός έλεγχος, NC) και για ένα δείγμα φωτίζεται προηγουμένως στα 280 nm για 75 λεπτά. Η ανιχνεύεται συγκέντρωση των ελεύθερων ομάδων θειόλης είναι 2,9 φορές υψηλότερη στην φωτισμένη δείγμα (Εικ. 8). Ελεύθερης θειόλης ομάδες στο φωτισμένο sEGFR είναι ~ 1 μΜ.

Το δείγμα ελέγχου του sEGFR κρατήθηκε στο σκοτάδι για 75 λεπτά (αρνητικός έλεγχος, NC). Οι ελεύθερες θειόλης ομάδες έχουν ανιχνευθεί χρησιμοποιώντας δοκιμασία του ΕΠπιαηη’δ.

Η

Εγκύκλιος μελέτες διχρωϊσμού

Στο Σχήμα 9Α εμφανίζονται το CD φάσματα των νωπών sEGFR (μη-Illum.) και φωτίζεται sEGFR ( 75 λεπτά στα 280 nm). Το άπω-υν CD φάσμα του μη φωτιζόμενου sEGFR εμφανίζει μερικές από τις κλασικές άπω-υν χαρακτηριστικά της δευτεροταγούς δομής της πρωτεΐνης, με την παρουσία ενός διπλού ελάχιστο στα 208-210 nm και 220-222 nm, χαρακτηριστικό του α-έλικας περιεχόμενο . β-φύλλο διαρθρωτικές περιεχόμενο (χαρακτηριστικό ελάχιστο στο ~218 nm) μπορεί επίσης να συμβάλει για το δεύτερο ελάχιστο στο 220-222 nm [41]. Παρατεταμένη διέγερση με φως UVB οδηγεί σε μείωση στην ένταση ελλειπτικότητας σε 205-225 nm και σε μία φασματική μετατόπιση. Η ελλειπτικότητα σε 207,5 nm και στα 220 nm μειώθηκε κατά 9% και 20%, αντίστοιχα. Επιπλέον, η πρώτη αρνητική κορυφή έχει μετατοπιστεί από 207,5 nm έως 203 nm.

(Α) Άπω UV CD φάσματα καταγράφηκαν για μια λύση φρέσκο ​​sEGFR (μη Illum.) Και ένα δείγμα sEGFR που είχε προηγουμένως φωτίζεται σε 280 nm (Illum. επί 75 λεπτά). (Β) Κυκλική dichroim θερμική εκδίπλωση καμπύλες φρέσκου sEGFR (μη Illum.) Και UVB φωτίζεται sEGFR (Illum για 75 λεπτά.) Ελήφθησαν κατά τη θέρμανση από 4 ° C έως 90 ° C (1 ° C.min

– 1). Το σήμα ελλειπτικότητα ήταν υπό συνεχή παρακολούθηση στα 220 nm. Η θερμοκρασία τήξης του μη φωτίζεται sEGFR, το οποίο αντιστοιχεί στην μετάβαση μεσαίο σημείο της καμπύλης, ανακτήθηκε κατά την τοποθέτηση του καμπύλη με μια συνάρτηση Boltzmann (βλέπε μεθόδους).

Η

Circular διχρωϊσμού βάση πρωτεΐνη θερμικής ξεδίπλωμα μελετών.

Η ένταση ελλειπτικότητας σε 220 nm φρέσκου sEGFR (μη Illum.) και του φωτίζεται sEGFR (75 λεπτά στα 280 nm) παρακολουθούνταν συνεχώς από 4 ° C έως 90 ° C (Σχ. 9Β). Για τα δύο δείγματα, η ένταση ελλειπτικότητα στα 220 nm μειώνεται κατά τη θέρμανση. Μια μετάβαση με μέσο σημείο μεταξύ 60-70 ° C παρατηρείται για το δείγμα μη-φωτιζόμενο sEGFR. Δεδομένων έχει τοποθετηθεί από μια συνάρτηση Boltzmann (βλέπε μεθόδους). Η ρίζα του μέσου τετραγωνικού σφάλματος για τον εξοπλισμό R

2 ήταν 0,99921. Οι τιμές που ανακτώνται από την τοποθέτηση για το

Μια

1,

Μια

2 και

DX

ήταν -0,96 ± 9.97E-4, -0.83 ± 0,002 και 2,59 ± 0,08 , αντίστοιχα. Η θερμοκρασία του μέσα μετάβασης

x

0 εφοδιασμένα τιμή ήταν 64.70 ± 0.07 ° C, που αντιστοιχεί στη θερμοκρασία τήξης της πρωτεΐνης. Η τιμή αυτή είναι σε συμφωνία με την τιμή ανακτήθηκε με φασματοσκοπία φθορισμού εμφανίζεται στο Σχήμα 5. Οι εν λόγω μετάβαση δεν παρατηρείται για το φωτισμένο δείγμα.

ανοσοδοκιμασία δέσμευσης EGFR

Μια ανοσοδοκιμασία πρόσδεσης χρησιμοποιήθηκε για να εμμέσως πρόσβαση οι επιδράσεις της υπεριώδους φωτισμού επί της δομής της θέσης σύνδεσης sEGFR προς EGF /TGF-α. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται στο σχήμα 10 δείχνουν ότι η μη φωτιζόμενη sEGFR δεσμεύει LA1 αντι-EGFR (λωρίδες «No-UV», φρέσκο ​​δείγμα? Και «NC», αρνητικός έλεγχος, δείγμα διατηρούνται στο σκοτάδι για 75 λεπτά). sEGFR δείγμα φωτίζεται με 280 nm φως για 75 min πλέον δεσμεύει LA1 αντι-EGFR, επιβεβαιώθηκε από την πλήρη εξαφάνιση της μπάντας sEGFR (Σχήμα 10, λωρίδες «UV»). Δύο σετ των εις διπλούν δείγματα αναλύθηκαν. Τα προφίλ ένταση του σήματος κατά μήκος των πρωτεϊνών μπάντες εμφανίζονται. Η ένταση που παρατηρείται στις περιοχές όπου φωτίζεται sEGFR ήταν παρούσα ( «UV» λωρίδες) είναι εντός του παρατηρείται επίπεδο θορύβου (ένταση του θορύβου από ~0.02 έως 0,2).

Σε κάθε φρεάτιο, ακριβώς 1.4 μg μη φωτίζονται ( «Όχι-UV»), UV φωτίζεται για 75 λεπτά ( «UV») και αρνητικού ελέγχου ( «NC») φορτώθηκε δείγματα sEGFR. Τα δείγματα φορτώνονται σε καλά 1-3 είναι αντίγραφα των δειγμάτων 4-6, αλλά αντιμετωπίστηκαν ανεξάρτητα από φωτισμό UV. Το προφίλ της έντασης κατά μήκος των πηγαδιών δείχνει ότι το σήμα παρατηρείται στα πηγαδάκια με τις μη φωτίζονται πρωτεΐνη, αλλά δεν υπάρχει σήμα στις κοιλότητες που περιέχουν UV φωτεινές δείγματα πρωτεΐνης.

Η

Συζήτηση

UVB διέγερση των αρωματικών υπολειμμάτων οδηγεί στο σχηματισμό του φωτοπροϊόντων. Τρυπτοφάνη μπορούν να σχηματίσουν τρυπτοφανύλιο ρίζα κατιόν, Ν-formylkynurenine (ΝΚΡ) και κυνουρενίνης (Kyn) (Εικ. 1). NFK και Kyn έχουν ιδιαίτερη σημασία καθώς είναι φωτοευαισθητοποιητές που μπορεί να δημιουργήσει δραστικά είδη οξυγόνου (ROS) κατά την απορρόφηση υν [42], συμβάλλοντας περαιτέρω στην πρωτεΐνη δομική βλάβη. κατάλοιπα τυροσίνης είναι γνωστό ότι μετατρέπονται σε π.χ. τυροσιλ ρίζες, dityrosine, trityrosine και pulcherosine (Εικ. 1). Αυτές οι αντιδράσεις είναι πιθανό να οδηγήσει σε αλλαγές ή πλήρη απώλεια της δομής των πρωτεϊνών και τη λειτουργία [22], [43]. UVB διέγερση οδηγεί επίσης σε ηλεκτρονίων εκτίναξη από τις πλευρικές αλυσίδες των αρωματικών υπολειμμάτων [20], [24], [44] – [46]. Το ηλεκτρόνιο μπορεί να συλληφθεί με δισουλφιδικές γέφυρες, που οδηγεί στο σχηματισμό ενός παροδικής δισουλφιδίου ηλεκτρόνιο προσαγωγού RSSR

• – (βλέπε σχήματα 1-8, [49]), το οποίο κατά την διάσπαση θα σχηματίζουν ελεύθερες ομάδες θειόλης (σχήμα 9, [ ,,,0],47]). Φύση έχει κρατήσει αρωματικά υπολείμματα σε χωρική εγγύτητα προς γέφυρες δισουλφιδίου (SS) σε πρωτεΐνες [19], [28], καθιστώντας την διάσπαση των SS μια πιθανή περίπτωση κατά την UV διέγερση. Οι παρακάτω σχήματα συνοψίζουν ορισμένα από τα φωτοπροϊόντα που σχηματίζονται που συμβάλλουν στην διάσπαση SS, οδηγώντας σε αλλαγές στη διαμόρφωση που μπορεί να οδηγήσει σε απώλεια της λειτουργίας της πρωτεΐνης. Για περισσότερες λεπτομέρειες παρακαλούμε δείτε αναφέρεται βιβλιογραφία [21], [22], [24]. (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9)

Πρωτεΐνες πλούσια σε αρωματικά κατάλοιπα και δισουλφιδικές γέφυρες είναι πιο ευάλωτα σε φωτοχημεία και ζημιές. sEGFR είναι μια τέτοια πρωτεΐνη. Έχει συνολικά 6 Trp, Tyr 16, 18 υπολείμματα Phe και 25 δισουλφιδικών γεφυρών (Σχήμα 2Α). Είναι ενδιαφέρον, αρωματικά κατάλοιπα και δισουλφιδικές γέφυρες παίζουν ένα κρίσιμο δομικό ρόλο στη διαχωριστική επιφάνεια του διμερούς (Σχήματα 2Β, 2C, 2D και) υποδεικνύοντας ότι επάγεται UVB φωτοχημεία πιθανότατα θα επηρεάσει διμερισμό EGFR. Η στενή εγγύτητα μεταξύ αρωματικά κατάλοιπα και τις γέφυρες δισουλφιδίου (Σχήμα 2C) προάγει την μεταφορά ηλεκτρονίων από τα αρωματικά κατάλοιπα στις γέφυρες, που οδηγεί σε διακοπή τους. UV που προκαλείται από την απενεργοποίηση της πρωτεΐνης περιλαμβάνει τη μεταφορά ηλεκτρονίων γρήγορη και μικρής εμβέλειας μεταξύ φωτοδιεγείρεται αρωματικά κατάλοιπα και τα κοντινά δισουλφιδικές γέφυρες [20], [44], [45], [48]. Zhi Li et al.