κύτταρα

Αφηρημένο

Ιστορικό

Φύση φονείς (ΝΚ) διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην ανοσοθεραπεία κατά των όγκων. Αλλά ανέφερε ότι τα καρκινικά κύτταρα επηρέασαν ενδεχομένως στις κανονικές λειτουργίες των ΝΚ κυττάρων μέσω κάποιων μηχανισμών μόρια στο μικροπεριβάλλον του όγκου.

Υλικά και μέθοδοι

Η μελέτη μας ανέλυσε η αλλαγή για τα κύτταρα ΝΚ επιφάνεια δείκτες (ΝΚ κύτταρα υποδοχείς ) μέσω ανοσοφθορισμού, κυτταρομετρία ροής και σε πραγματικό χρόνο PCR, ο σκότωσε λειτουργία από σπλήνα ποντικού ΝΚ κυττάρων και των ανθρωπίνων υψηλή /χαμηλή κυτταρική σειρά καρκίνου του πνεύμονα με συν-καλλιέργεια. Επιπλέον, έχουμε πιστοποιηθεί το παραπάνω αποτέλεσμα με το μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα του ποντικού SCID.

Αποτελέσματα

Δείξαμε ότι η διείσδυση των ΝΚ κυττάρων στην περιφέρεια του όγκου που σχετίζονται με την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα ». Και ο αριθμός των ΝΚ κυττάρων που διηθούν στον ιστό του καρκίνου του πνεύμονα είναι στενά συνδεδεμένη με την παθολογική τύπους, το μέγεθος του πρωτογενούς καρκίνου, το ιστορικό καπνίσματος και την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα. Η έκφραση των ΝΚ κυττάρων αναστολέα υποδοχέων αυξηθεί εντυπωσιακά σε όγκο μικρο-περιβάλλον, το αντίθετο, η έκφραση των κυττάρων ΝΚ ενεργοποιούνται οι υποδοχείς μειώνουν θαυμάσια.

Συμπεράσματα

Ο χρόνος επιβίωσης του πνεύμονα ασθενής με καρκίνο είχε θετικά που σχετίζονται με ΝΚ βαθμού κυτταρική διήθηση στον καρκίνο του πνεύμονα. Έτσι, η ρύθμιση προς τα κάτω του NKG2D, Ly49I και η αυξητική ρύθμιση του NKG2A μπορεί να υποδεικνύει το ανοσοποιητικό μηχανισμό ανοχή και τη διευκόλυνση της μετάστασης σε περιβάλλον του όγκου. Η έρευνά μας θα προσφέρει περισσότερες θεωρία για την κλινική στρατηγική για την ανοσοθεραπεία όγκου

Παράθεση:. Jin S, Ντενγκ Υ, Hao J-W, Li Υ, Liu Β, Yu Υ, et al. (2014) ΝΚ κυττάρων φαινοτυπική διαφοροποίηση σε καρκίνο του πνεύμονα Περιβάλλοντος. PLoS ONE 9 (10): e109976. doi: 10.1371 /journal.pone.0109976

Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: May 17, 2014? Αποδεκτές: 13 Σεπτεμβρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 9 Οκτ 2014

Copyright: © 2014 Jin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τους νέους Ταμείο Έρευνας από τις επιδοτήσεις που η Εθνική Ενδέκατη-πενταετές Key Task Έργα της Κίνας (Αρ 2006BAI02A01) , η Εθνική 973 Πρόγραμμα (Αρ 2010CB529405), Tianjin Επιστημονικό Πρόγραμμα Καινοτομίας συστήματος (Αρ 07SYSYSF05000, 07SYSYJC27900), το Ίδρυμα Κίνας-Σουηδίας Συνεταιρισμός (Αρ 09ZCZDSF04100), η επιχορήγηση Εθνικό Φυσικό Επιστημονικό Ίδρυμα της Κίνας (αριθ 81201828), Νέοι Ίδρυμα άνθρωποι Ίδρυμα Heilongjiang επαρχιακού της Κίνας (Όχι QC2012C013), Τμήμα Υγείας της Heilongjiang επαρχιακού της Κίνας (αριθ 2011-124) και Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο Αντικαρκινικό Νοσοκομείο μεγάλο έργο (No: JJZ-2010-01). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθεις όγκους στον κόσμο, η οποία έχει υψηλή νοσηρότητα και θνησιμότητα και αντιπροσωπεύει περίπου το 25,4% όλων των όγκων. Έχει μια ανοδική τάση του ποσοστού επίπτωσης τα τελευταία χρόνια [1] – [4]. Τα απελευθερωμένα American Cancer Society δεδομένα δείχνουν ότι 222.520 περιπτώσεις καρκίνου του αναπνευστικού και 157.300 περιπτώσεις θανάτου το 2010, η οποία είναι στην πρώτη θέση της νοσηρότητας και της θνησιμότητας όλων των κακοήθων όγκων [5]. Μια κλινική στατιστικές του σταδίου IV NSCLC στην Κίνα έδειξε ότι το ποσοστό επιβίωσης 1-, 2-, 3-, 4- και 5-χρόνου ήταν 44%, 22%, 13%, 9% και 6% αντίστοιχα [6]. Επί του παρόντος, η χειρουργική εκτομή εξακολουθεί να είναι η κύρια μέθοδος για να παρατείνει τον χρόνο επιβίωσης του καρκίνου του πνεύμονα, αλλά η εισβολή και η μετάσταση του καρκίνου του πνεύμονα είναι το μεγαλύτερο εμπόδιο για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας της πρόγνωση του καρκίνου του πνεύμονα. Για την εις βάθος μελέτη του καρκίνου του πνεύμονα κακοήθη συμπεριφορά και να επικεντρωθεί στην ολοκληρωμένη θεραπεία του μεταστατικού καρκίνου του πνεύμονα, είναι αναγκαίο να θεσπιστούν κατάλληλες ζωικό μοντέλο για τη μελέτη των πνευμόνων υποτροπής του καρκίνου και μετάσταση και ολοκληρωμένη θεραπεία του.

Φυσικό φονείς (ΝΚ ) κυττάρων, επίσης γνωστή ως μεγάλα κοκκώδη λεμφοκύτταρα, είναι ένα ανεξάρτητο και μη ειδική ανοσολογική κύτταρο. Δεν έχει καμία MHC περιορισμός να στοχεύουν αναγνώριση κυττάρων και την καταστροφή, και αυτό μπορεί να σκοτώσει άμεσα τα καρκινικά κύτταρα και κύτταρα-στόχους μολυσμένα με ιό χωρίς αντιγόνο προ-ευαισθητοποιημένα [7], [8]. Επίσης, μπορεί να παράγει ένα μεγάλο αριθμό από ανοσο-δραστικών κυτοκίνες για την ενίσχυση ή την επέκταση αντικαρκινική δράση του, η οποία μπορεί να θεωρηθεί ως η πρώτη γραμμή του συστήματος άμυνας του ξενιστή [9]. Αρκετές πειραματικές αποδείξεις αποδείξει το σημαντικό ρόλο των κυττάρων ΝΚ στην εξάλειψη των καρκινικών κυττάρων. Vivier et al αναφέρουν ότι μια χαμηλή κυτταροτοξικότητα ΝΚ κυττάρων στο περιφερικό αίμα συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του [10]. Επιπλέον, τα κύτταρα ΝΚ διεισδύοντας στον ιστό του όγκου συσχετίστηκε με καλή πρόγνωση σε ορθοκολικό [11], γαστρικό [12], και του πνεύμονα [13] καρκίνων.

Με την ανάπτυξη του σχηματισμού όγκων, κακοήθων κυττάρων όγκου και διηθητικά κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος αλληλεπιδρούν και αποτελείται από τον όγκο μικρο-περιβάλλον. Οι περισσότερες από τις μελέτες που δημοσιεύτηκαν έδειξαν ότι ένας μεγάλος αριθμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού που διηθούν σε καρκινικό ιστό έπαιξε σημαντικό ρόλο στη βελτίωση της πρόγνωσης του όγκου [14], [15]. Αλλά όπως όλοι γνωστοί, η πρόγνωση του πνεύμονα που σχετίζεται με κακοήθειες είναι πολύ φοβερό, ακόμα και αν υπάρχουν πολλά κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στον πνεύμονα. Θέλουμε να ξέρουμε αν υπάρχει μια διαφορά σύνθεση του ανοσοποιητικού κυττάρων διεισδύσει σε κακοήθεις και μη κακοήθεις περιοχές ιστό των πνευμόνων, ακόμα και θα μπορούσε ενδεχομένως να συμβάλει προς αυτή την κατεύθυνση. Esendagli G et.al βρεθεί ότι σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), οι ασθενείς, τα κύτταρα ΝΚ δεν σχεδόν βρίσκονται στις κακοήθεις περιοχές ιστού, μη-κακοήθεις ομολόγους επιλεκτικά κατοικείται από ΝΚ κύτταρα και τα κύτταρα ΝΚ έδειξαν ισχυρή κυτταροτοξική δραστικότητα ex vivo [16].

Έτσι, η επίδραση της έκφρασης του υποδοχέα των κυττάρων ΝΚ και η λειτουργία μπορεί να είναι διαφορετική προκαλείται από την αλληλεπίδραση μεταξύ των κυττάρων ΝΚ και των όγκων στον όγκο μικρο-περιβάλλον. Με τη διερεύνηση κύτταρα ΝΚ στο σώμα ή /και καρκίνου του πνεύμονα μικρο-περιβάλλον, συζητούν τη διανομή του, έκφραση του υποδοχέα, λειτουργική κατάσταση με εισβολή καρκίνου του πνεύμονα, μετάσταση και την πρόγνωση, να αποσαφηνίσει τον μηχανισμό των κυττάρων ΝΚ εμπλέκονται στον καρκίνο του πνεύμονα μικρο-περιβάλλον από το κυτταρικό και μοριακή επίπεδα.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα όγκων και Δεοντολογίας Δήλωση

Αυτή η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Όλα τα δείγματα όγκων που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη ελήφθησαν από την Tianjin Lung Cancer Institute και το τμήμα της παθολογίας στο Πανεπιστήμιο του Γενικού Νοσοκομείου Tianjin Medical. Όλοι οι ασθενείς παρέχεται γραπτή συγκατάθεση για τη συλλογή των δειγμάτων και την επακόλουθη ανάλυση. Και η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Δεοντολογίας της Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο Γενικό Νοσοκομείο.

παραφίνες δειγμάτων και κατεψυγμένα προέλευσης των ιστών του καρκίνου του πνεύμονα

Οι ασθενείς θα είναι επιλέξιμες για συμμετοχή στη φάση επαγωγής του μελετήσει εάν έχουν: ιστολογική ή κυτταρολογική διάγνωση ΜΜΚΠ (συμπεριλαμβανομένων πλακώδες καρκίνωμα, αδενοκαρκίνωμα και μεγάλο καρκίνωμα)? καμία προηγούμενη συστηματική χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία και η βιοθεραπεία για τον καρκίνο του πνεύμονα πριν από τη χειρουργική επέμβαση? καμία άλλη ιστορία του καρκίνου? και ≤80 ετών.

δείγματα παραφίνες δείγματος συλλέχθηκαν από 84 ασθενείς που διαγνώστηκαν με καρκίνο του πνεύμονα μεταξύ January1st 2008 και 31 Ιανουαρίου 2011 (64 άνδρες και 20 γυναίκες). Η διάμεση ηλικία των ασθενών ήταν 60,7 ± 7,9 έτη (εύρος 40 έως 78 ετών). Υπάρχουν διάφοροι τύποι παθολογία: 37 ασθενείς πλακώδες καρκίνωμα, αδενοκαρκίνωμα 37 ασθενείς και 10 ασθενείς καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου. Κατά τη στιγμή της διάγνωσης, οι ασθενείς αξιολογήθηκαν σύμφωνα με την AJCC /UICC έκτη έκδοση ταξινόμησης ως εξής: στάδιο ΙΙΑ-1 ασθενείς, το στάδιο IIB- 4 ασθενείς, το στάδιο IIIA-58 ασθενείς, το στάδιο ΙΙΙΒ-12 ασθενείς, το στάδιο IV-9 ασθενείς. Τα δείγματα εφαρμόστηκαν από το Τμήμα Παθολογίας Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο.

Τα κατεψυγμένα δείγματα ιστού παράχθηκαν από 66 χειρουργικές δείγματα με καρκίνο του πνεύμονα μεταξύ January1st 2008 και January1st 2011. Υπάρχουν συμπεριλαμβανομένων 52 άνδρες και 14 γυναίκες. Η διάμεση ηλικία των ασθενών ήταν 60,5 ± 8,4 χρόνια (εύρος 40-78 έτη). Υπήρχαν συμπεριλαμβανομένων των διαφόρων τύπων παθολογία: 28 ασθενείς πλακώδες καρκίνωμα, αδενοκαρκίνωμα 28 ασθενείς και 10 ασθενείς καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου. Οι ασθενείς αξιολογήθηκαν σύμφωνα με την AJCC /UICC την έκτη έκδοση ταξινόμησης ως εξής: στάδιο ΙΙΑ-1 ασθενείς, το στάδιο ΙΙ Β-4 ασθενείς, το στάδιο IIIA-45 ασθενείς, το στάδιο ΙΙΙΒ-9 ασθενείς σταδίου IV-7 ασθενείς. Τα δείγματα εφαρμόστηκαν από Tianjin Lung Cancer Research Institute.

ανοσοφθορισμού

ανοσοφαινότυπους ανάλυση των CD56 και CD16 έγιναν ως εξής. Εν συντομία, οι, ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές σταθεροποιημένο με φορμαλίνη (4 μm) θερμάνθηκαν με σκεύη για 45 λεπτά, στη συνέχεια αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε διαβαθμισμένη σειρά διαλυμάτων αιθανόλης. Οι τομές στη συνέχεια βυθίζεται σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου (ρΗ 7) και μικροκύματα σε υψηλή φωτιά για 5 λεπτά, χαμηλή φωτιά για 15 λεπτά, και φυσική ψύξη σε θερμοκρασία δωματίου για να ανακτήσει την αντιγονικότητα. Η ενδογενής υπεροξειδάση αποσβέστηκε με 3% Η

2O

2 για 30 λεπτά. Μετά από πλύση με PBS, οι τομές επωάστηκαν με 2% BSA για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια επωάστηκαν με CD56 και CD16 αντίσωμα (Santa Cruz, αραιωμένο σε 1:100) όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Οι τομές επωάστηκαν με αντι-κατσίκας ποντικού και αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού φθορισμού (Santa Cruz, αραιωμένο σε 1:200) για 35 λεπτά και το DAPI για 5 λεπτά. Μετά την πλύση με PBS τέταρτη φορές, οι τομές στερέωσης με γλυκερίνη (ρΗ 9.0). Το κόκκινο φθορισμό εξέφρασε CD56

+, το πράσινο φθορισμό εξέφρασε CD16

+, το μπλε φθορισμό εξέφρασε πυρήνα του κυττάρου. Μπορούμε να βρούμε το CD56

+ ή /και CD16

+ εκφράζοντας στο κύτταρο ΝΚ. Το λογισμικό ανάλυσης SPOT εικόνα που χρησιμοποιείται στη διαδικασία ανάλυσης. Το ποσοστό των CD56 ή /και CD16 θετικών κυττάρων προσδιορίστηκε με μέτρηση ανά τμήμα. Ο αριθμός των ΝΚ κυττάρων ανά οπτικό πεδίο βαθμολογήθηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: +, οι μετρήσεις κυττάρων ΝΚ ανά οπτικό πεδίο & lt? 10? ++, Οι μετρήσεις των κυττάρων ΝΚ ανά οπτικό πεδίο & gt? 10, & lt? 20? +++, Οι μετρήσεις των κυττάρων ΝΚ ανά οπτικό πεδίο & gt? 20. υπολογίστηκαν Όλα τα πεδία σε κάθε τμήμα σε τρία ανεξάρτητα πειράματα.

εκχύλιση RNA, σύνθεση cDNA, και DNA απομόνωση

Το συνολικό RNA εκχυλίστηκε με το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το συνολικό RNA υπεβλήθη σε πέψη με R Nase ελεύθερο D Nase-Ι (Promega, Madison, USA) και χρησιμοποιήθηκαν για τη σύνθεση cDNA με το σύστημα αντίστροφης μεταγραφάσης (Takara Biotech, Dalian, Κίνα).

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Η σύνθεση cDNA έγινε όπως περιγράφεται παραπάνω. Το συγκεκριμένο έναυσμα του πειράματος RT ήταν ως εξής: NK1.1: 5′-TCTCTTGAATAAACACACAGCAT -3 ‘, NKG2A: 5′-CTGAGAAGGATTTTG -3′, NKG2D: 5’-TTCTCACAGTTCCTCT -3 ‘, LY49I: 5’-TTCTATTCTTGCTTTAG -3 ‘. Τα ζεύγη εκκινητών ζεύγη εκκινητών και GAPDH χρησιμοποιήθηκαν για την Q-PCR με το SYBR Προμίγματα Ex Taq RT-PCR Kit (Takara, Dalian, Κίνα) σε ένα ΑΒΙ PRISM 7900 πραγματικού χρόνου συστήματος (Bio-Rad) με τους ακόλουθους όρους: 95 ° C για 30 s, 40 κύκλους ενίσχυσης (95 ° C για 5 s και 60 ° C για 30 s) και έναν κύκλο τήξης από 60 ° C έως 95 ° C. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ΑΒΙ PRISM 7900 Manager. Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν με τρεις τεχνικές επαναλήψεις.

τηλέφωνα

Οι υψηλές και χαμηλές μετάσταση μεγάλο πνεύμονα καρκινικές κυτταρικές σειρές L9981-Luc και NL9980-Luc από Tianjin πνεύμονα Ινστιτούτο Καρκίνου [17], [ ,,,0],18] διατηρήθηκαν σε RPMI 1640 (Hyclone, Αμερική) που περιέχει 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη (Hyclone, Αμερική) σε ένα πλήρως υγρανθέντα επωαστή (Nuaire, US Autoflow) στους 37 ° C με 5% CO

2. Τα κύτταρα διατηρούνται σε μία εκθετική φάση ανάπτυξης κατά τη διάρκεια των πειραμάτων.

μοντέλο SCID

SCID (σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια) ποντίκια αγοράστηκαν από την Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών ζώων ιδρύματα στεγάστηκαν σε άνευ παθογόνου ζώων εγκαταστάσεις. Θηλυκά ποντίκια που χρησιμοποιήθηκαν ήταν 5-7 εβδομάδων από την ηλικία κατά την έναρξη του πειράματος. Θηλυκά ποντίκια SCID (16 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα) εμβολιάσθηκαν υποδορίως στην δεξιά inguen με 2 * 10

6 κύτταρα αιωρούνται σε 150 υΐ PBS. Εννέα ζώα στην ομάδα ελέγχου δεν είχε καμία εμβολιασμό. Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν κάθε 7 ημέρες και η ένταση του φθορισμού τους μετρήθηκε με πραγματική ουσία της Αμερικής διαβίωσης σύστημα απεικόνισης (Xenogen IVIS200). Μετά από 6 εβδομάδες παρατήρησης, ανατομή διεξήχθη και εξαχθέντα καρκινώματα, τους πνεύμονες και σπλήνα αφαιρέθηκαν για την περαιτέρω ανάλυση. Αυτά τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον δύο φορές για να επιβεβαιωθούν τα αποτελέσματα. Τα πειραματικά πρωτόκολλα των ζώων εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ηθικής των πειραμάτων σε ζώα και τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές για τα πειράματα σε ζώα στην Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο Cancer Research Center.

λεμφοκυττάρων συλλέγουν και κυτταρομετρία ροής ανιχνεύσει

Οι πνεύμονες και σπλήνες γυαλισμένο σε κομμάτια. Στη συνέχεια, τα λεμφοκύτταρα συλλέγουν εκχυλίζονται με τη διαχωρισμού λεμφοκυττάρων Medium (Shenzhen, Κίνα) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Τα ποσοστά των κυττάρων ΝΚ αξιολογήθηκε και διαχωρίστηκαν με κυτταρομετρία ροής με χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων (MoAbs) αντι-CD3

– FITC /ΝΚ1.1

+ PE (BD Phamingen, San Di εγώ, CA). Κατά τη διάρκεια της ανάλυσης, η CD3

– /NK1.1

+ πληθυσμό. Για να προσδιοριστεί η επιφανειακή έκφραση των κυτταρικών προσδεμάτων ΝΚ σε κύτταρα ΝΚ, τα κύτταρα στη συνέχεια χρωματίστηκαν με το αντι-ποντικού κατσίκας ΝΚ1.1-FITC, CD3- Alexa Fluor 647, NKG2A-FITC, NKG2D-ΡΕ, Ly49I-ΡΕ (Βϋ Phamingen, San Di εγώ, CA) για 30 λεπτά στους 37 ° C στο σκοτάδι. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε για τη FACS Ταξινόμηση (Becton Dickinson, Mountain View, CA) με τη χρήση του λογισμικού Cell Quest (Becton Dickinson) και την έκφραση κυτταρικής επιφάνειας ποσοτικοποιήθηκε με την αξία των εντάσεων φθορισμού μέση λαμβάνονται με τις συγκεκριμένες mAbs.

συν-καλλιέργεια

Καθαρισμένα ΝΚ1.1

+ /CD3

– ΝΚ κύτταρα (ενεργοποιημένα με 100U /ml IL-2 κατά τη διάρκεια 2 h) από σπλήνα ποντικού συν-καλλιεργήθηκαν με καρκίνο του πνεύμονα κυτταρική γραμμή L9981-Luc /NL9980-Luc ως (Α) 0.25:1, (Β) 0.5:1, (C) 1:01 και (D) 2:01 για 24, 48, 72 ώρες. Μετά την συν-καλλιέργεια, η ένταση φθορισμού των κυττάρων ΝΚ μετρήθηκε με την αληθινή ουσία της Αμερικής ζουν σύστημα απεικόνισης.

Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

RNA απομονώθηκε από εκφυτευμένη όγκους μέσω ΤπζοΙ και αντιστροφής μεταγράφηκε χρησιμοποιώντας ειδικές πλήρωσης (Invitrogen). Ποσοτική RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα ΑΒΙ PRISM 7900 μέσου, χρησιμοποιώντας πράσινο SYBR προσδιορισμούς. Οι ειδικοί εκκινητές παρατίθενται στον παρακάτω (Πίνακας 1). Η ενίσχυση πραγματοποιήθηκε ως ακολούθως. Μετά την αρχική βαθμίδα μετουσίωσης στους 95 ° C για 30 δευτερόλεπτα, υποδείγματα μετουσιώθηκαν στους 95 ° C για 5 δευτερόλεπτα, εκκινητές ανοπτήθηκαν και επέκταση του DNA διεξήχθη στους 60 ° C για 30 δευτερόλεπτα (κάθε κύκλος επαναλήφθηκε 40 φορές). Η έκφραση των γονιδίων στόχων αντισταθμίστηκε χρησιμοποιώντας την έκφραση του GAPDH και παρουσιάζεται από την αναλογία μεταξύ έκφραση μη κατεργασμένα κύτταρα ελέγχου και κατεργασμένα κύτταρα.

Η

Στατιστική ανάλυση

Τα πειράματα διεξήχθησαν τρεις φορές. Η Data παρουσιάζονται ως μέσες τιμές ± SD. Η στατιστική αξιολόγηση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μονόδρομης τεστ ANOVA ή η δοκιμή rank-sum όταν τα δεδομένα μέτρησης είναι Gaussian κατανομή με το σύστημα SPSS Λογισμικού, έκδοση 17.0. Εάν τα δεδομένα είναι δεδομένα απαρίθμηση, χρησιμοποιήθηκε Chi-square test.

P

τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές. Συνολικό ποσοστό επιβίωσης σε σύγκριση με την καμπύλη επιβίωσης Kaplan-Meier, δοκιμασία log-rank rank-sum χρησιμοποιήθηκε μεταξύ των ομάδων.

Αποτελέσματα

εντόπιση των κυττάρων ΝΚ και χαρακτηριστική μορφολογία στον καρκίνο του πνεύμονα μικρο-περιβάλλον

Τα διεισδύσει ΝΚ κυττάρων στον ιστό καρκίνου του πνεύμονα επικεντρώθηκαν κυρίως στο στρώμα του όγκου, που αποτελούν τον όγκο μικρο-περιβάλλον (Σχήμα 1). Σε ιστούς NSCLC, CD56

+ ΝΚ κυττάρων με 1, 2 και 3 βαθμός διείσδυσης ήταν 44,0%, 22,6%, 33,3%, CD16

+ ΝΚ κυττάρων ήταν 45,2%, 22,6%, 32,1%, και CD56

+ CD16

+ ΝΚ κυττάρων ήταν 45,2%, 23,8%, 31,0%, αντίστοιχα. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά (

σ

& gt? 0,05). μεταξύ των ΝΚ κυττάρων με CD56 και μόνο θετική, CD16 και μόνο θετική και CD56CD16 διπλά θετικά στον ιστό καρκίνου του πνεύμονα (Πίνακας 1)

Η διεισδύσει κύτταρα ΝΚ στον ιστό καρκίνου του πνεύμονα συμπυκνώθηκαν κυρίως στο στρώμα του όγκου. κύτταρα ΝΚ δείχνει με CD56 μόνο θετικό (πράσινο φθορισμό), CD16 και μόνο θετικό (ερυθρός φθορισμός) και CD56CD16 διπλό θετικό (κίτρινο φθορισμό) στον ιστό του καρκίνου του πνεύμονα στρώμα.

Η

κύτταρο διήθηση ΝΚ και των πνευμόνων ασθενών με καρκίνο κλινική παθολογία φυσιολογική λειτουργία

Το 1, 2 και 3 μοιρών με CD56

+ CD16

+ διείσδυση των κυττάρων ΝΚ ήταν 24,3%, 32,4%, 43,2% το ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα, και 62,2%, 16,2 %, 21,6% το αδενοκαρκίνωμα και 50,0%, 10,0%, 40,0% σε μεγάλες καρκίνο του πνεύμονα, αντίστοιχα. Υπήρχε σημαντική διαφορά των CD56

+ CD16

+ ΝΚ βαθμού κυτταρική διείσδυση μεταξύ των διαφόρων παθολογικών τύπων καρκίνου του πνεύμονα (

σ

= 0,019) (Εικόνα 2, Πίνακας 2). Η έκφραση των κυττάρων ΝΚ σε καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι σε αδενοκαρκίνωμα και καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου. Ο βαθμός 1, 2 και 3 με διήθηση κυττάρων ΝΚ ήταν 48,1%, 3,7%, 48,1% σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα χωρίς ιστορικό καπνίσματος, ήταν 42,1%, 31,7% και 26,3% σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος. ιστορικό καπνίσματος των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα σχετίζεται με ΝΚ βαθμού κυτταρική διήθηση (

σ

= 0,011). Ο βαθμός 1, 2 και 3 με διήθηση των κυττάρων ΝΚ ήταν 60,6%, 18,4%, 21,1% στον καρκίνο Τ1-Τ2, και 42,1%, 31,7%, 43,5% στον καρκίνο Τ3-Τ4, αντίστοιχα. Μια σημαντική διαφορά των ΝΚ κυττάρων βαθμού διείσδυσης βρέθηκε μεταξύ των διαφόρων μέγεθος του όγκου (

σ

= 0,019) (Πίνακας 3).

Α. Πνεύμονα πλακώδες καρκίνωμα? αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα Β? Γ καρκίνος μεγάλων κυττάρων του πνεύμονα. Η έκφραση των ΝΚ κυττάρων σε καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι σε αδενοκαρκίνωμα και μεγάλο καρκίνωμα.

Η

Η

κυτταρική διείσδυση ΝΚ και των πνευμόνων ασθενών με καρκίνο πρόγνωση

Η χρόνος επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα ήταν θετικά με την ΝΚ κυττάρων βαθμό διείσδυσης στον καρκίνο του πνεύμονα. Όσο περισσότερο διείσδυση των κυττάρων ΝΚ υπήρχε, τόσο μεγαλύτερος ο χρόνος επιβίωσης των ασθενών έκαναν (

σ

= 0.030) (Σχήμα 3, Πίνακας 4).

Ο χρόνος επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα ήταν θετικά με την ΝΚ κυττάρων βαθμό διείσδυσης στον καρκίνο του πνεύμονα. Όσο περισσότερο διείσδυση των κυττάρων ΝΚ υπήρχε, τόσο μεγαλύτερος ο χρόνος επιβίωσης των ασθενών έκανε. Οι ασθενείς στην ομάδα επιπέδου 3 έχουν το μεγαλύτερο χρόνο επιβίωσης. Μεταξύ των τριών ομάδων στατιστική σημαντικότητα είναι έξοδο. (

σ

= 0,030)

Η

Real-time PCR επιβεβαίωση ΝΚ κυττάρων διείσδυση βαθμό στον καρκίνο του πνεύμονα

Οι διαφορές των υποδοχέων των κυττάρων ΝΚ CD56 και CD16 mRNA έκφραση μεταξύ διαφόρων παθολογικών τύποι καρκίνου του πνεύμονα ανιχνεύθηκε και επιβεβαιώθηκε με PCR πραγματικού χρόνου. Βρήκαμε ότι τα κύτταρα ΝΚ φαινότυπο mRNA σε διαφορετικό τύπο ιστολογική του καρκίνου του πνεύμονα έχουν στατιστική σημασία (Σχήμα 4). Αυτό είναι σε σύμφωνα με το αποτέλεσμα της ιστολογίας.

ΝΚ κύτταρα υποδοχείς CD56 και CD16 φαινότυπο mRNA σε διαφορετικούς ιστολογική τύποι καρκίνου του πνεύμονα έχουν στατιστική σημασία.

Η

μεταμοσχευμένων όγκων-μετάσταση στους πνεύμονες μοντέλα ιδρύθηκε

τα μεταμοσχευμένα μοντέλα μετάστασης όγκων-πνεύμονα επιτυχημένη ιδρύθηκε το SCID ποντίκι με μεταστατικό ανθρώπινο μεγάλες κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα υψηλή (L9981) /χαμηλή (NL9980). Η μακρινή μετάσταση του όγκου ξενομοσχεύματος ανιχνεύθηκε με φθορισμό απεικόνισης in vitro (Σχ.5 Α). Σε σύγκριση με χαμηλό μεταστατικό ομάδα (6,84 × 10

6 ± 3.26 × 10

6), ο πνεύμονας μεταστάσεις τιμή φθορισμού των ποντικών σε υψηλής μεταστατικού ομάδα (30.97 × 10

6 ± 14,3 × 10

6) ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε χαμηλό μεταστατικό ομάδα (

σ

= 0,035) (ΕΙΚΟΝΑ 5Β, C, D)

Α:. Ζώντας απεικόνισης φθορισμού ανίχνευση μοντέλο ποντικού ( η αριστερά είναι το σωστό inguen υποδόρια όγκου για 1 εβδομάδα και το μεσαίο είναι για 6 εβδομάδες μετά την ένεση, η δεξιά είναι οι μεταστάσεις όγκων στους πνεύμονες σε έξι εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό), Β:. καμπύλη ανάπτυξης της υποδορίως όγκου μεταμόσχευση σε SCID ποντικιού, C: πνεύμονα μεταστάσεις φωταύγεια απεικόνιση του όγκου που φέρει ποντικού in vitro, D:. Η σύγκριση της αξίας φωταύγειας μεταξύ μεταμοσχευμένων όγκων και μεταστάσεων του πνεύμονα με υψηλή (L9981) /χαμηλή (NL9980) μεταστατική ανθρώπινη μεγάλο πνεύμονα κυτταρικές γραμμές καρκίνου

Η

διαφοροποίηση των κυττάρων ΝΚ φαινοτυπική στον καρκίνο του πνεύμονα μικρο-περιβάλλον

NK1.1

+ CD3

– ΝΚ κυττάρων στους πνεύμονες του υψηλού μεταστατικού ομάδα (3.40 ± 0.90) ήταν σημαντικά υψηλότερο από εκείνο στη σπλήνα (0,10 ± 0,06) (

σ

= 0,003). NK1.1

+ CD3

– ΝΚ κυττάρων στη σπλήνα της ομάδας υψηλού μετάσταση (0.10 ± 0.06) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα χαμηλής μετάστασης (1,66 ± 0,82) και την ομάδα ελέγχου (3.80 ± 2.05) (

σ

= 0.017,

σ

= 0,025) (Σχήμα 6)

NK1.1

+ CD3

-. ΝΚ κυττάρων στους πνεύμονες των υψηλών -metastatic ομάδας ήταν σημαντικά υψηλότερο από εκείνο στο σπλήνα (

σ

= 0,003). NK1.1

+ CD3

– ΝΚ κυττάρων στη σπλήνα της ομάδας υψηλού μετάσταση (0.10 ± 0.06) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα χαμηλής μετάστασης (

σ

= 0,017) και τον έλεγχο ομάδα (

σ

= 0,025).

η

NKG2D επίπεδο έκφρασης των ΝΚ κυττάρων από σπλήνα στην ομάδα υψηλού μετάσταση (4.17 ± 0.85) ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα ελέγχου (7,80 ± 2,67) (

σ

= 0,034) και η ομάδα χαμηλής μετάστασης (6.00 ± 0.96) (

σ

= 0,040) (Σχήμα 7Β)

Α:. NKG2A επίπεδο έκφρασης των ΝΚ κυττάρων από πνεύμονα σε υψηλού μεταστατικού ομάδα L9981 ήταν σημαντικά υψηλότερα από ότι στην NL9980 ομάδα και την ομάδα ελέγχου χαμηλής μεταστατικό (

σ

= 0.000). επίπεδο έκφρασης Ly49I από τον πνεύμονα στην ομάδα L9981 και η ομάδα NL9980 ήταν σημαντικά υψηλότερο από ότι στην ομάδα ελέγχου (

σ

= 0.000) Β: NKG2D επίπεδο έκφρασης των ΝΚ κυττάρων από σπλήνα στην ομάδα L9981 (4.17 ± 0.85) ήταν αξιοσημείωτα χαμηλότερη από ότι στην ομάδα ελέγχου (

σ

= 0,034) και η ομάδα NL9980 (

σ

= 0,040). επίπεδο έκφρασης Ly49I στην ομάδα NL9980 ήταν σημαντικά υψηλότερες από ότι στην ομάδα L9981 (

σ

= 0,010) και την ομάδα ελέγχου (

σ

= 0,004). C: επίπεδο έκφρασης NKG2A των κυττάρων ΝΚ από πνεύμονα ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη από σπλήνα σε υψηλά μεταστατικού ομάδα L9981 (

σ

= 0.007) και στο επίπεδο έκφρασης Ly49I από πνεύμονα ήταν αξιοσημείωτα τα πάνω ρυθμισμένη από εκείνο στο σπλήνα (

σ

= 0,003) D: Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά απ ‘όλα το επίπεδο υποδοχέων έκφραση των κυττάρων ΝΚ υπήρχε στην ομάδα χαμηλού μετάσταση NL9980. Ε: Το επίπεδο έκφρασης Ly49I των ΝΚ κυττάρων από τον πνεύμονα ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη από την σπλήνα στην ομάδα ελέγχου (

σ

= 0.033)

Η

επίπεδο έκφρασης NKG2A των ΝΚ κυττάρων. από πνεύμονα (5.13 ± 2.36) ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη από σπλήνα (1,47 ± 0,68) σε υψηλού μεταστατικού ομάδα (

σ

= 0,007) (Fig.7C). επίπεδο έκφρασης NKG2A των κυττάρων ΝΚ από πνεύμονα σε υψηλής μεταστατικό ομάδα (5.13 ± 2.36) ήταν σημαντικά υψηλότερα από ότι σε χαμηλό μεταστατικό ομάδα (4.70 ± 1.96) και ομάδα ελέγχου (0.73 ± 0.26) (

p =

0.000) (Σχήμα 7Α).

επίπεδο έκφρασης Ly49I των ΝΚ κυττάρων από πνεύμονα σε υψηλού μεταστατικού ομάδα (4.82 ± 1.78) ήταν εντυπωσιακά up-ρυθμίζεται από εκείνο στο σπλήνα (1.50 ± 0.10) (

p

= 0,003) (Fig.7C). Το επίπεδο έκφρασης Ly49I των ΝΚ κυττάρων από τον πνεύμονα (2.79 ± 0.40) ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη από την σπλήνα (1,13 ± 0,40) στην ομάδα ελέγχου (

σ

= 0,033) (Fig.7E). επίπεδο Ly49I έκφραση των κυττάρων ΝΚ από τον πνεύμονα σε υψηλής μεταστατικό ομάδα (4.82 ± 1.78) και χαμηλή μεταστατική ομάδα (6.11 ± 2.23) ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη στην ομάδα ελέγχου (2,79 ± 0,40) (

ρ

= 0.000) (Σχήμα 7Α). επίπεδο έκφρασης Ly49I των κυττάρων ΝΚ από σπλήνα σε συνθήκες χαμηλού μεταστατικού ομάδα (3.40 ± 1.00) ήταν σημαντικά υψηλότερες από ότι σε υψηλής μεταστατικό ομάδα (1.50 ± 0.10) (

σ

= 0.010) και της ομάδας ελέγχου (1,13 ± 0,40) (

σ

= 0,004) (Σχήμα 7Β).

ΝΚ κυττάρων θανατηφόρο επίδραση στον καρκίνο του πνεύμονα μικρο-περιβάλλον

NK1.1

+ CD3

– ΝΚ κύτταρα ενεργοποιούνται από την IL-2 in vitro έχουν σημαντική κυτταροτοξική δραστικότητα σε υψηλή /χαμηλή μεταστατικό καρκίνο του πνεύμονα μεγάλα κύτταρα. Μια σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ των διαφορετικών αναλογία τελεστή-στόχου (

σ

= 0.005,

σ

= 0,017). κύτταρα ΝΚ είχαν υψηλότερα κυτταροτοξική δραστικότητα να NL9980 από αυτό με το L9981 με την ίδια αναλογία τελεστή-στόχου (

σ

= 0.035) (Πίνακας 5).

Η

mRNA του υποδοχέα κυττάρων ΝΚ που εκφράζουν σε υποδορίως μεταμοσχευθεί όγκου των

ποντικιού

Στους μεταμοσχευμένους όγκους της ομάδας που φέρει τον όγκο, NKG2D επίπεδο έκφρασης των κυττάρων ΝΚ σε ομάδα υψηλού μετάσταση ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη στην ομάδα χαμηλής μετάστασης (

p

= 0.018), και το επίπεδο έκφρασης Ly49I των ΝΚ κυττάρων σε ομάδα υψηλού μετάσταση ήταν επίσης αξιοσημείωτα υψηλότερη από ομάδα χαμηλής μετάστασης (

σ

= 0,001). Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική διαφορά στο επίπεδο έκφρασης ΝΚ1.1 και NKG2A των κυττάρων ΝΚ υπήρχε μεταξύ υψηλών και χαμηλών ομάδα μετάσταση (

σ

& gt? 0,05) (Σχήμα 8)

NKG2D. επίπεδο έκφρασης των ΝΚ κυττάρων στην ομάδα L9981 υψηλής μετάστασης ήταν σημαντικά υψηλότερο από εκείνο στην ομάδα NL9980 χαμηλής μετάστασης (

σ

= 0.018), και το επίπεδο έκφρασης Ly49I των ΝΚ κυττάρων στην ομάδα L9981 ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερες από NL9980 ομάδα (

σ

= 0.001). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά του επιπέδου έκφρασης ΝΚ1.1 και NKG2A των κυττάρων ΝΚ υπήρχε μεταξύ υψηλών και χαμηλών ομάδα μετάσταση.

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη έδειξε ότι τα κύτταρα ΝΚ διήθηση και ΝΚ κυττάρων αλλαγή της έκφρασης του υποδοχέα στο περιβάλλον του όγκου NSCLC. Από την έρευνά μας βρήκαμε ότι τα κύτταρα ΝΚ διεισδύσει κυρίως στο στρώμα του όγκου, που αποτελεί τον όγκο μικρο-περιβάλλον. Αυτές οι παρατηρήσεις είναι σε συμφωνία με προηγούμενες παρατηρήσεις αποδεικνύοντας ότι πνεύμονα όγκου μικρο-περιβάλλον [16]. Επιπλέον, πήραμε την έκπληξη ότι ο αριθμός των ΝΚ κυττάρων που διηθούν σε ιστό καρκίνου του πνεύμονα είναι στενά συνδεδεμένη με τις παθολογικές τύπους, το μέγεθος του πρωτογενούς καρκίνου, το κάπνισμα ιστορία και την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα.

Προηγούμενη λογοτεχνία εννοηθεί ότι μερικά μόρια που εκφράζουν στον όγκο και κάποια μέσα απελευθερώθηκε από καρκινικά συνήθως οδήγησε σε μηχανισμούς διαφυγής όγκου από ΝΚ κυττάρων ανοσολογική επιτήρηση [19], [20]. Υπάρχουν υψηλά επίπεδα μη κλασική μοριακό HLA MHC Ι – Ε και HLA – G στην επιφάνεια των καρκινικών κυττάρων. Ήταν ΝΚ CD94 κυτταρικής ενεργοποίησης /NKG2A υποδοχέα και κυτταρικής επιφάνειας άνοση σφαιρίνη μεταγραφή δείγμα μοριακό 2 (ILT2) ανασταλτική συνδετήρα, το οποίο μπορεί να συγκρατήσει ΝΚ λειτουργία κυτταρική βλάβη [21] – [23]. Ταυτόχρονα, τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να εκκρίνουν κάποια όγκου παράγοντες καταστολής αναστολής της λειτουργίας των κυττάρων ΝΚ, όπως IL-10 [24] και ΤΟΡ-β [25]. Που περιβάλλει τον όγκο διείσδυση ΝΚ κυττάρων, κάποιες ιδιαίτερες αλλαγές σε ορισμένους άλλους ανθρώπινους όγκους είχαν ερευνηθεί. Σε καρκίνο του νεφρού, το κύτταρο ΝΚ εντός του όγκου μόνο ενεργοποιήθηκε από την IL-2 διέγερση θα μπορούσε να έχει τη συνάρτηση λύση κυττάρου-στόχου. Και στους ίδιους ασθενείς υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ του φαινοτύπου των κυττάρων ΝΚ περιφερικού αίματος με όγκο στο [26] – [28]. Ο υποδοχέας επιφανείας κυττάρου ΝΚ DNAM-1, 2Β4, έκφραση CD16 μειώνονται στον καρκίνο των ωοθηκών, η οποία μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την συνάρτηση ενεργοποίησης κυττάρων ΝΚ έχουν υποστεί τεράστιες ζημιές [29].

εντολών αποτέλεσμα έρευνά μας ότι το ενεργοποιημένο υποδοχέα ΝΚ κύτταρα ρυθμίζεται προς τα κάτω και ανασταλτικές του υποδοχέα των κυττάρων ΝΚ είναι πάνω ρυθμισμένα στο μεταμοσχευμένο όγκου και τα μακρινά μεταστατικών βλαβών του ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα μεγάλου κυτταρικές γραμμές κυττάρων, το οποίο θα μπορούσε να είναι ο κύριος λόγος που οδηγεί σε ικανότητα θανατώσεως κυττάρων ΝΚ μειώνεται.

NKG2D είναι ένας υποδοχέας για τα μόρια α και Β MHC τάξης Ι αλυσίδα που σχετίζονται, οι οποίες συχνά εκφράζονται από επιθηλιακούς καρκίνους. Η πρόσδεση του NKG2D επάγει αντι-ογκική τελεστικές λειτουργίες στις δύο κύτταρα ΝΚ και Τ. NKG2D αναγνώριση διαδραματίζει έναν σημαντικό ρόλο στην ανοσολογική επιτήρηση του όγκου [30] και ότι NKG2D δρα κυρίως για να προκαλέσει περφορίνης απόπτωση που διαμεσολαβείται [31]. Η έρευνά μας επαληθεύσει ότι NKG2D επίπεδο έκφρασης των ΝΚ κυττάρων από σπλήνα στην ομάδα υψηλού μετάσταση ήταν αξιοσημείωτα χαμηλότερη από ότι στην ομάδα ελέγχου (

σ

= 0,034) και η ομάδα χαμηλής μετάστασης (

p =

0.040). Σε μεταμοσχευμένων όγκων της ομάδας που φέρει τον όγκο, το επίπεδο έκφρασης NKG2D mRNA των κυττάρων ΝΚ στην ομάδα υψηλού μετάσταση ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη στην ομάδα χαμηλής μετάστασης (

σ

= 0,018).

NKG2A είναι ένας ανασταλτικός υποδοχέας ΝΚ που έχει αναφερθεί για τον σχηματισμό συνδεδεμένα με δισουλφίδιο ετεροδιμερή με αμετάβλητες CD94. Ο συνδετήρας NKG2A έχει ταυτοποιηθεί ως HLA-E, ένα μη κλασσικό b μόριο MHC τάξης-Ι που είναι ευρέως κατανεμημένο μεταξύ διαφόρων ιστών, εκθέματα σχετικά χαμηλή επιφανειακή έκφραση, και έχει περιορισμένες πολυμορφισμό [32]. Η ανασταλτική CD94 υποδοχέα /NKG2A παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ΝΚ κυτταρική λύση με τη μεσολάβηση ενεργοποιημένων CD4

+ Τ κύτταρα [33]. επίπεδο έκφρασης NKG2A των ΝΚ κυττάρων από πνεύμονα ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη από την σπλήνα σε υψηλού μεταστατικού ομάδα (

σ

= 0,007). επίπεδο έκφρασης NKG2A των ΝΚ κυττάρων από πνεύμονα σε υψηλού μεταστατικού ομάδας ήταν σημαντικά υψηλότερα από ότι στην ομάδα και ομάδα ελέγχου χαμηλής μεταστατικό (

σ

= 0.000). Έτσι, η ρύθμιση προς τα κάτω του NKG2D και η αυξητική ρύθμιση του NKG2A μπορεί να υποδεικνύει το ανοσοποιητικό μηχανισμό ανοχή και τη διευκόλυνση της μετάστασης σε περιβάλλον του όγκου.

Αλληλεπίδραση MHC τάξης Ι με τους υποδοχείς Ly49 εμποδίζει την ενεργοποίηση των κυττάρων ΝΚ και με αυτόν τον τρόπο η λύση του κυττάρου-στόχου. Έτσι, τα κύτταρα ΝΚ χρησιμοποιούν τους υποδοχείς Ly49 να διαφοροποιήσει ‘εαυτό «από» λείπει-εαυτό ». Απώλεια MHC τάξης Ι μόρια επί κυττάρων στόχων ανακουφίζει το ΝΚ κύτταρο του Ly49 μεσολάβηση αναστολή, επιτρέποντας έτσι τα κύτταρα ΝΚ να μεσολαβούν κυτταροτοξικότητα [34]. Το επίπεδο έκφρασης Ly49I των ΝΚ κυττάρων από τον πνεύμονα ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη από τον σπλήνα σε ομάδα ελέγχου (

σ

= 0,033). επίπεδο έκφρασης Ly49I των κυττάρων ΝΚ από τον πνεύμονα σε υψηλού μεταστατικού ομάδα και χαμηλού μεταστατικού ομάδα ήταν σημαντικά υψηλότερο από ότι στην ομάδα ελέγχου (

σ

= 0,000). Στα μεταμοσχευμένων όγκων της ομάδας που φέρει τον όγκο, το επίπεδο έκφρασης του mRNA Ly49I των ΝΚ κυττάρων στην ομάδα υψηλής μετάστασης ήταν επίσης αξιοσημείωτα υψηλότερη από ομάδα χαμηλής μετάστασης (

σ

= 0,001).

Επιπλέον, μια υψηλότερη ανθεκτικό σε κυτταροτοξική δραστικότητα των ΝΚ κυττάρων υπάρχουν στο ανθρώπινο υψηλής μεταστατικό μεγάλο πνεύμονα κυτταρική σειρά καρκίνου L9981, το οποίο είναι πολύ υψηλότερο από ότι στο μεγάλο πνεύμονα κυτταρική σειρά καρκίνου χαμηλού μεταστατικού NL9980. Επιπλέον, είναι πιθανό ότι άλλοι υποδοχείς κυττάρων ΝΚ αλλάξει περιβάλλον του όγκου. Στο μελάνωμα, κύτταρα ΝΚ θα μπορούσε να αυξήσει σημαντικά την έκφραση του CD86, και απολίνωση του CD86 με CTLA4Ig αυξήθηκε σημαντικά την ικανότητα των κυττάρων ΝΚ να σκοτώσουν τα καρκινικά κύτταρα [35].