Abstract

μυελό των οστών προερχόμενα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα (MSCs) είναι σε θέση να μεταναστεύσουν σε όγκους, όπου προωθούν ογκογένεση και τον καρκίνο της μετάστασης. Ωστόσο, το μοριακό φαινότυπος των MSCs προσλαμβάνονται στο μικροπεριβάλλον του όγκου και των γενετικά προγράμματα υποκείμενες το ρόλο τους στην εξέλιξη του καρκίνου παραμένει σε μεγάλο βαθμό άγνωστος. Με τη χρήση ενός τρισδιάστατου περιστροφικό σύστημα συγκαλλιέργειας σκάφος τοιχώματος στην οποία τα ανθρώπινα MSCs αναπτύχθηκαν μόνο του ή σε στενή επαφή με κυτταρικές σειρές LNCaP, C4-2 ή καρκίνο του προστάτη PC3, ιδρύσαμε

σε

vitro

ζεύγη κανονικών και σχετίζονται με τον καρκίνο των παραγώγων MSC για να μελετηθεί η απόκριση στρωματικά των MSCs σε καρκίνο του προστάτη. Παρατηρήσαμε ότι καρκίνο του προστάτη που σχετίζεται με MSCs απέκτησε ένα υψηλότερο δυναμικό για αδιπογονική διαφοροποίηση και επέδειξε μία ισχυρότερη ικανότητα να προάγει τη μετανάστευση κυττάρων του καρκίνου του προστάτη και εισβολή σε σύγκριση με την κανονική MSCs τόσο

in vitro

και σε πειραματικά μοντέλα ζώων. Η αυξημένη λιπογένεση και οι φιλο-μεταστατικές ιδιότητες που απορρέουν από τα υψηλά επίπεδα της IL-6 έκκριση από τον καρκίνο που σχετίζεται με MSCs και ήταν αναστρέψιμα με λειτουργικά αναστολή της IL-6. Βρήκαμε επίσης ότι η IL-6 είναι ένας άμεσος γονίδιο-στόχο για την let-7 microRNA, η οποία ρυθμίζεται προς τα κάτω στον καρκίνο που σχετίζεται με MSCs. Η υπερέκφραση του ας-7 μέσω της επιμόλυνση των προδρόμων ας-7 μειώθηκαν IL-6 έκφραση και καταστέλλεται η αδιπογονική δυναμικού και μετάστασης δραστικότητα προαγωγής του καρκίνου που σχετίζεται με MSCs, η οποία ήταν σύμφωνη με την αναστολή της IL-6 δραστικότητα λουσιφεράσης 3’UTR . Αντίθετα, η θεραπεία των φυσιολογικών στρωματικών κυττάρων μυελού με let-7 αναστολείς οδήγησε σε αποτελέσματα παρόμοια με εκείνα που παρατηρούνται με την IL-6. Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι MSCs συν-εξελίσσονται με καρκίνο του προστάτη κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου, και η προς τα κάτω ρύθμιση ας-7 με τον καρκίνο που σχετίζεται με MSCs ρυθμίζει προς τα πάνω IL-6 έκφραση. Αυτή η προς τα πάνω ρύθμιση ενεργοποιεί αδιπογένεσης και διευκολύνει εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη. Τα ευρήματα αυτά δεν παρέχουν μόνο βασικές γνώσεις σχετικά με τη μοριακή βάση των αλληλεπιδράσεων όγκου-στρώματος, αλλά και να ανοίξει το δρόμο για νέες θεραπείες για τον μεταστατικό καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Sung SY, Liao CH, Wu HP, Χσιάο WC, Wu IH, Jinpu, et al. (2013) Απώλεια Let-7 microRNA ρυθμίζει προς τα πάνω IL-6 στο μυελό οστών μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα Διέγερση ένα Reactive στρωματικά απάντηση σε καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 8 (8): e71637. doi: 10.1371 /journal.pone.0071637

Επιμέλεια: Ching-Ping Tseng, Chang Gung Πανεπιστήμιο, την Ταϊβάν

Ελήφθη: 18, Απρ, 2013? Αποδεκτές: 30 Ιουν 2013? Δημοσιεύθηκε: 19 Αυγούστου, 2013

Copyright: © 2013 Sung et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις NSC 101-2314-B-039-007, NSC 99 με 2.320-B-039-029-my3 και NSC 99 έως 2.632-B-039-001-my3 από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Ταϊβάν, να χορηγούν DOH102 -TD-C-111-005 από το Τμήμα Ταϊβάν Υγείας, και το Ίδρυμα του Πανεπιστημίου του καρκίνου μέσω SINF του MD Anderson Cancer Center, USA. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Bone είναι η δεύτερη πιο κοινή ιστοσελίδα της ανθρώπινης μετάστασης του καρκίνου [1], και επίσης συμβάλλει άμεσα στην θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη και νοσηρότητας, με πάνω από το 85% των ασθενών που πεθαίνουν από καρκίνο του προστάτη έχουν οστικές μεταστάσεις [2] , [3]. Η ποιότητα της ζωής των ασθενών με καρκίνο του προστάτη μπορεί να τεθεί σε κίνδυνο σημαντικά από σκελετικές μεταστάσεις μέσω της ανάπτυξης του πόνου των οστών, που σχετίζεται με καρκίνο κατάγματα οστών και σπονδυλικής συμπίεσης, των οστών-μετάσταση-προκλητών κρανιακή νευροπάθεια από τη βάση του συνδρόμων κρανίου, αναιμία και λοίμωξη [4] , [5]. Παρά τις σοβαρές επιπλοκές του καρκίνου του προστάτη σκελετικών μετάσταση, υπήρξαν λίγες προόδους στη θεραπευτική αρένα για να αποτρέψουν ή να μειώσουν αυτές τις βλάβες [6]. Είναι ζωτικής σημασίας ότι μια σταθερή κατανόηση της παθοφυσιολογίας του καρκίνου του προστάτη σκελετικό μεταστατική διαδικασία έχει αναπτυχθεί για να παρέχει τη βάση για τη δημιουργία στρατηγικών για την πρόληψη ή να μειώσουν την εμφάνισή τους και των συναφών επιπλοκών.

Η έρευνα απέδειξε ότι όγκου-μικροπεριβάλλον αλληλεπιδράσεις είναι ζωτικής σημασίας για την ογκογένεση και εξέλιξης του καρκίνου, όπως περιγράφηκε για πρώτη φορά το 1889 από τον Paget ο οποίος πρότεινε ότι η σπορά των μεταστατικών καρκινικών κυττάρων εξαρτάται από το μικροπεριβάλλον του οργάνου υποδοχής (ο «σπόρος και το έδαφος» έννοια) [7]. Αν και τα περισσότερα κύτταρα-ξενιστές στο στρώμα διαθέτουν ορισμένες ικανότητες καταστολής όγκου, η εξέλιξη των καρκινωμάτων σε υψηλού βαθμού κακοήθειες συνοδεύεται από βαθιές ιστολογικές μεταβολές στον όγκο που σχετίζεται με στρώμα. Αυτές οι αλλαγές περιλαμβάνουν στρωματικά μεταγωγή κυττάρων φαινοτυπικές, εξωκυττάρια μήτρα αναδιαμόρφωση και επαγωγή αγγειογένεσης [8], [9]. Η ανάπτυξη μιας αλλαγμένης στρωματικών μικροπεριβάλλον σε απόκριση σε καρκίνωμα είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό πολλών όγκων και είναι πιθανό να προωθήσει ογκογένεση. Κατά τη διαδικασία εισβολής του καρκίνου του προστάτη, για παράδειγμα, ο καρκίνος των επιθηλιακών κυττάρων έχουν την ικανότητα να προωθήσει την λεγόμενη «αντιδραστικά» απόκριση στρώμα μέσω της δια-κανονικών ινοβλαστών στο αντιδραστικό φαινότυπο μυοϊνοβλάστη. Σε αντίθεση με τους φυσιολογικούς ινοβλάστες, αντιδραστική μυοϊνοβλάστες οδηγούν περαιτέρω γενετικές και γονιδιακή έκφραση αλλαγές στα καρκινικά κύτταρα προστάτη, που επιτρέπει την ανάπτυξη και την επιβίωση του όγκου και τη διάδοση σε απομακρυσμένα όργανα με θανατηφόρα αποτελέσματα [10] – [13]. Γονιδιακή έκφραση προφίλ των κλινικών δειγμάτων αποκάλυψε ταυτόχρονη και ανεξάρτητη γενετικές μεταβολές στα επιθηλιακά κύτταρα του στρώματος και του καρκίνου [14], [15], επιβεβαιώνοντας το συν-εξέλιξη του καρκίνου και των στρωματικών κυτταρικών αποκρίσεων. Κλινικοπαθολογοανατομικές μελέτες έχουν επίσης αποδειχθεί ένα κρίσιμο ρόλο για την αντιδραστική στρώμα στην μετεγχειρητική έκβαση των ασθενών [16] – [18]. Η περίπλοκη ενδοκυτταρική επικοινωνία μεταξύ των στοιχείων επιθηλιακών και στρωματικών υποδηλώνει τη σημασία των επιγενετικών οδών στη διευκόλυνση της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη και όχι μια άμεση διαδικασία απλά και μόνο αποδίδεται σε καρκινικά κύτταρα.

Σε μοντέλα ποντικού, καθώς και σε ανθρώπους έχουν αναφερθεί ότι στρωματικά κύτταρα όγκου μπορεί να προέρχονται από μυελό οστών τα προγονικά κύτταρα τα οποία μπορούν να κινητοποιηθούν στην κυκλοφορία, μεταναστεύουν προς όγκους, ενσωματώσει στο μικροπεριβάλλον του όγκου, και να συμβάλλει στην ανάπτυξη διαφόρων όγκων [19] – [21]. Μυελό των οστών προερχόμενα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα (MSCs) είναι πολυδύναμα πρόδρομα μεσεγχυματικά κύτταρα που συμβάλλουν στην διατήρηση και την αναγέννηση μιας ποικιλίας συνδετικών ιστών, συμπεριλαμβανομένων των οστών, λιπώδη, των χόνδρων, των μυών και [22]. Πρόσφατα, κυκλοφορεί MSCs έχουν δειχθεί να ενταχθούν σε και επιμένουν στο στρώμα του όγκου [23], παρέχοντας μία νέα πλατφόρμα για την επιλεκτική

in vivo

παράδοση των αντικαρκινικών παραγόντων σε επεμβατικές και μετάσταση όγκων [24] – [27] . Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ των MSCs και καρκινικά κύτταρα δεν περιορίζονται σε παλιννόστησης αλλά επίσης φαίνεται να προκαλεί πιο δυσμενείς επιπτώσεις. Πολλές παρατηρήσεις δείχνουν ότι, στο μικροπεριβάλλον του όγκου, MSCs έχουν αρκετές λειτουργίες ανάπτυξης όγκου προώθηση, συμπεριλαμβανομένης της έκφρασης των αυξητικών παραγόντων [28], η προώθηση του σχηματισμού σκάφους όγκου [29] και τη δημιουργία του κόγχες καρκινικού κυττάρου βλαστικών [30]. Ωστόσο, το μοριακό φαινότυπος των MSCs προσλαμβάνονται στο μικροπεριβάλλον του όγκου και των γενετικά προγράμματα υποκείμενες ιδιοκτησία τους στην εξέλιξη του καρκίνου παραμένει κυρίως άγνωστος. Η κατανόηση του πώς οι νεοπροσλαμβανόμενοι MSCs μεταβάλλεται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου και πώς μπορούν αμοιβαία να επηρεάσουν νεοπλασματική εξέλιξη μπορεί να οδηγήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπειών που στοχεύουν στη μείωση του σχηματισμού μεταστάσεων.

Στην παρούσα μελέτη, επικεντρώνεται στον καθορισμό εάν MSCs μυελού των οστών «συν-εξελίσσονται» με τα επιθηλιακά κύτταρα του καρκίνου του προστάτη μέσω της αμοιβαίας αλληλεπίδρασης όγκου-στρωματικών. Ο ρόλος και οι συγκεκριμένες μοριακούς μηχανισμούς των αντιδραστικών MSCs στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη ήταν επίσης διευκρινιστεί.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Οι μελέτες σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σε αυστηρή συμφωνία με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση της Κίνας Ιατρικού Πανεπιστημίου (IACUC # 101-76-Ν). Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις διεξήχθη υπό Zoletil (τιλεταμίνη-ζολαζεπάμη) αναισθησία σε δόση 20 mg /kg με ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

κυτταρικές σειρές και Cell Culture

Όλα τα μέσα κυτταρικής καλλιέργειας και τα αντιδραστήρια αγοράστηκαν από την Invitrogen (Carlsbad, CA). Τα καρκίνου του προστάτη κυτταρικές γραμμές LNCaP, C4-2 και PC3 χρησιμοποιήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες [13], [31] και αναπτύχθηκαν σε μέσο Τ συμπληρωμένο με ορό 5% εμβρυϊκό ορό (FBS). MSCs ανθρώπινου μυελού των οστών που προέρχεται από (hMSCs) και φυσιολογικά ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα προστάτη (PrEC) αγοράστηκε από την Lonza (Rockland, ΜΕ) διατηρήθηκαν σε MSCGM ™ και PrEGM ™, αντίστοιχα, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Lonza). Το MSC κυτταρική γραμμή που προέρχονται από μυελό των οστών 3Α6 ανθρώπινο [32] διατηρήθηκε σε μέσο DMEM-LG που έχει συμπληρωθεί με 10% FBS. Για τρισδιάστατο (3-D) συγκαλλιέργεια, 1 × 10

7 3Α6 κύτταρα αναπτύχθηκαν μόνο ή αναμεμιγμένο με ίσους αριθμούς LNCaP, C4-2 ή κύτταρα PC3 εντός ενός δοχείου περιστροφικό τοίχωμα (RWV) Συστήματα (Synthecon, Χιούστον , TX) ακολουθώντας προηγουμένως καθιερωμένο πρωτόκολλο [33] με μικρές τροποποιήσεις. Εν συντομία, το εναιώρημα μεμονωμένων κυττάρων προσετέθη σε πλοία τα οποία στη συνέχεια γεμίζεται με 10 ml μέσου που αποτελείται από μέσο Τ και DMEM-LG (1:01). Η περιστροφή των σκαφών που ορίστηκε αρχικά στο 15-20 στροφές ανά λεπτό και στη συνέχεια αυξάνεται για να διατηρήσει συσσωματώματα κυττάρων σε ελεύθερη ανάρτηση. Το μέσο αλλάχθηκε κάθε 3 ημέρες. Για την απομόνωση 3Α6 κυττάρων από 3-D χιμαιρικό tumoroids, κυτταρικών συσσωματωμάτων συλλέχθηκαν από την RWV και διαχωριστεί με 0,25% θρυψίνη μετά από 2 εβδομάδες συγκαλλιέργειας. 3Α6 κύτταρα επελέγησαν με επιλογή αντιβιοτικού με 800 μg /ml G418 για 1 εβδομάδα.

Διαφοροποίηση των MSC

3Α6 κύτταρα MSC σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων σε μια πυκνότητα των 10

4 κύτταρα /cm

2 για την επαγωγή οστεογένεσης και αδιπογονική διαφοροποίηση υπό ειδικές συνθήκες καλλιέργειας. Για οστεογονική διαφοροποίηση, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε οστεογόνο μέσο διαφοροποίησης που αποτελείται από DMEM-LG με 10% FBS, 10 ηΜ δεξαμεθαζόνη, 50 μg /ml ασκορβικό οξύ, και 10 mM β-γλυκεροφωσφορικό για 14 ημέρες και στη συνέχεια υποβάλλεται σε χρώση αλιζαρίνης Red S, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [32]. Για αδιπογονική διαφοροποίησης, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε αδιπογονική μέσο διαφοροποίησης που αποτελείται από DMEM-LG συμπληρωμένο με 10% FBS, 100 ηΜ δεξαμεθαζόνη, 0,45 mM 3-ισοβουτυλο-1-μεθυλξανθίνη, 10 μg /ml ινσουλίνη, και 50 μg /ml ινδομεθακίνης επί 21 ημέρα, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε χρώση Οίΐ Red Ο. Ο σχηματισμός των λιποκυττάρων παρακολουθήθηκε από την εμφάνιση των σταγονιδίων λιπιδίου κάτω από ένα μικροσκόπιο. Για την ποσοτικοποίηση χρώση, Oil Red-O εκχυλίζεται με ισοπροπανόλη περιέχουσα 4% Nonidet Ρ-40 και μετρήθηκε ως απορρόφηση σε μήκος κύματος 510 nm. Όλα τα χημικά αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ).

πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR

Ολικό κυτταρικό RNA και εμπλουτίζεται μικρά είδη RNA που περιέχει microRNA (miRNA) απομονώθηκαν από καλλιεργημένα κύτταρα χρησιμοποιώντας την mirVana miRNA κιτ απομόνωσης (Ambion, Austin, ΤΧ) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. cDNA συνετέθη από εμπλουτισμένο μικρό RNA και το ολικό RNA ανοπτήθηκαν με stem-loop αντίστροφη μεταγραφική (RT) εκκινητές και τυχαίων εκκινητών, αντίστοιχα, και αντίστροφη μεταγραφεί με MMLV ανάστροφης μεταγραφάσης (Invitrogen). Ποσοτική PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του LightCycler 480 TaqMan κύριος kit με miRNA- ή γονίδιο-ειδικούς εναρκτήρες και τον αντίστοιχο ανιχνευτή καθολική Probe Library (Roche Applied Science, Mannheim, Germany). Οι εκκινητές stem-loop RT, οι PCR εκκινητές, και ανιχνευτές σχεδιάστηκαν και οι αλληλουχίες φαίνονται στον Πίνακα S1. Η αντίδραση PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και περιγράφηκε σε προηγούμενη μελέτη [34]. U6 μικρά πυρηνικά RNA και θερμικού σοκ 90 κϋ πρωτείνη 1, βήτα (HSPCB) χρησιμοποιήθηκαν ως γονίδια housekeeping για την ομαλοποίηση της έκφρασης του κάθε miRNA και του γονιδίου, αντίστοιχα.

Array Cytokine αντισωμάτων και ELISA

Τα επίπεδα έκφρασης διαφόρων κυτοκινών σε ρυθμισμένο μέσο μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Array Human Cytokine Antibody C Series 2000 κιτ (RayBiotech, Norcross, GA) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. Ανθρώπινη ιντερλευκίνη 6 (IL-6) τα επίπεδα πρωτεΐνης στο ρυθμισμένο μέσο ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας εμπορικά κιτ ELISA (eBioscience, San Diego, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Oligonucleotide Επιμόλυνση

3Α6 κυττάρων ήταν σπάρθηκαν σε 2 × 10

5 κύτταρα πλάκες /φρεάτιο σε 6-φρεατίων και επωάζονται όλη τη νύκτα. Τα κύτταρα επιμολυσμένα με είτε προ-miRNAs (προ-miR αρνητικό έλεγχο και προ-miR-ας-7c) (Ambion, Austin, TX) ή οι αναστολείς LNA ™ miRNA (αντι-miR αρνητικού ελέγχου και αντι-miR-ας-7 ) (Exiqon, Vedbaek, Denmark) σε τελική συγκέντρωση 10 ηΜ ή 30 ηΜ, αντίστοιχα, χρησιμοποιώντας DharmaFECT αντιδραστηρίου επιμόλυνσης (Dharmacon, Lafayette, CO) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Vectors Reporter και δοκιμασία λουσιφεράσης

Τα ολιγονουκλεοτίδια του στοιχείου αναγνώρισης υποθετικό ας-7c, είτε το άγριου τύπου ή τη μεταλλαγμένη αλληλουχία, στα νουκλεοτίδια 316-322 της 3′-μη μεταφραζόμενη περιοχή (3′-UTR) του ανθρώπινου IL-6 γονίδιο σχεδιάστηκαν με πλευρικές θέσεις Hindlll και δρβΙ και συντεθεί. Μετά τη συγκόλληση των με νόημα και αντινόημα ολιγονουκλεοτίδια, τα προκύπτοντα θραύσματα DNA κλωνοποιήθηκαν εντός του φορέα pMir-REPORT-Luc (Ambion) μετά από ΗίηάΙΙΙ και Spel πέψη. Τα προκύπτοντα πλασμίδια pMir-REPORT-Luc αναμίχθηκαν με pCMV-β-gal (γαλακτοσιδάση) σε μοριακή αναλογία 5:01 και συν-επιμολύνθηκαν με το προ-miRNAs σε ΗΕΚ 293 κύτταρα. Μετά από 24 ώρες επώασης, τα κυτταρικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν για αναλύσεις δραστικότητας λουσιφεράσης και β-gal χρησιμοποιώντας το σύστημα δοκιμασίας λουσιφεράσης και β-γαλακτοσιδάσης ενζυματικό σύστημα ανάλυσης (Promega, Madison, WI). Η σχετική δράση της λουσιφεράσης υπολογίζονται διαιρώντας τα λουσιφεράσης σχετικές μονάδες φωτός από την αντίστοιχη τιμή για τη δραστηριότητα της β-gal που υπάρχει σε κάθε δείγμα.

In vitro

τη Μετανάστευση και την εισβολή Δοκιμασία

hMSCs ή 3Α6 παράγωγα (2 × 10

5 κύτταρα) αναπτύχθηκαν στον κάτω θάλαμο του transwells με ελεύθερο ορού RPMI-1640 (Invitrogen). Μετά από 24 ώρες επώασης, τα καρκινικά κύτταρα 2 × 10

5 προστάτη σε ελεύθερο ορού RPMI-1640 προστέθηκαν στον άνω θάλαμο που περιέχει ένα φίλτρο πολυανθρακικού 8-μm-πόρου που επενδύεται με (εισβολή) ή χωρίς (μετανάστευση) Matrigel (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Μετά από 16 ώρες επώαση, τα κύτταρα στην κάτω επιφάνεια της μεμβράνης βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες και μετρήθηκαν κάτω από ένα Zeiss Axiovert 200 μικροσκόπιο φθορισμού (Carl Zeiss MicroImaging, Thornwood, ΝΥ) με ένα αντικειμενικό φακό 10Χ.

Animal Studies

Έξι εβδομάδων αρσενικά γυμνά ποντίκια (BALB /cAnN.Cg-Foxn1nu /CrlNarl) ελήφθησαν από το Εθνικό Εργαστήριο του Κέντρου ζώων (Ταϊπέι, Ταϊβάν). 1 × 10

6 κύτταρα PC3, είτε μόνο του ή αναμεμειγμένο με ίσο αριθμό 3Α6

RWV ή 3Α6

PC3 κύτταρα σε 100 μΙ PBS, εγχύθηκαν υποδορίως στα πλευρά των ποντικών (

n =

10 σε κάθε ομάδα). μετρήσεις όγκου των όγκων ελήφθησαν εβδομαδιαία. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία 10 εβδομάδες μετά τον ενοφθαλμισμό των κυττάρων, και οι όγκοι ενθουσιασμένος για ιστοπαθολογική εξέταση.

Ανοσοϊστοχημεία

Ειδικά πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε σε τομές όγκων χρησιμοποιώντας ένα Novolink Polymer σύστημα ανίχνευσης (Leica Microsystems, Newcastle Upon Tyne , UK) ακολουθώντας τις οδηγίες του κιτ, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [35]. Τα μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού κατά του Ki-67 και CD31 αγοράστηκαν από την Leica Microsystems και αραιώνονται 1:100 και 1:200, αντίστοιχα. Για την ανίχνευση των λιπιδίων, slides ιστού αφυδατώθηκαν με απόλυτη προπυλενογλυκόλη για 5 λεπτά και χρωματίστηκαν με διάλυμα ελαίου 0,5% κόκκινο O για 48 ώρες. Τομές ιστού βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη.

Στατιστική Ανάλυση

Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD εκτός αν ορίζεται διαφορετικά. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το δίπλευρη του Student

t-test

ή μονόδρομη ANOVA για πολλαπλές συγκρίσεις. Ένα

σ

-τιμή μικρότερη από 0,05 ορίστηκε ως στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Ίδρυση ζεύγη των φυσιολογικών και καρκινικών που σχετίζονται MSC από Χιμαιρικά προστάτη Tumoroids Σύμφωνα με 3- Δ Προϋποθέσεις RWV

σε συμφωνία με αρκετές προηγούμενες αναφορές ότι MSCs έχουν εγγενή προνομιακή μεταναστευτικών δυνατότητα σε ορισμένες επιθηλιακών όγκων, αποδείξαμε την ικανότητα μετανάστευσης των MSCs που λαμβάνονται από μυελό των οστών του ανθρώπου προς καρκινικά κύτταρα του προστάτη αλλά όχι φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη σε ένα

in vitro

συγκαλλιέργεια μοντέλο κυττάρων (Εικ. 1Α). Για να κατανοήσουμε περαιτέρω εάν οι προσλαμβάνονται MSCs που λαμβάνονται από μυελό οστού ανθρώπου «συν-εξελίσσονται» με καρκίνο του προστάτη κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου, μια αθανατοποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά MSC 3Α6 [32] καλλιεργήθηκε μόνος του ή με ανδρογόνο-εξαρτώμενη LNCaP, του ανεξάρτητου από ανδρογόνα C4-2 υπογραμμή, ή των οστών μεταστατικό καρκίνο του προστάτη PC3 κύτταρα που είχαν καθοριστεί προηγουμένως συνθήκες RWV καλλιέργειας 3-D, ανακεφαλαιώνοντας το

in vivo

μικροπεριβάλλον του όγκου [13]. Βρήκαμε ότι τα κύτταρα, είτε σε μονοκαλλιέργεια ή σε συνθήκες συγκαλλιέργεια, που σχηματίζεται 3-D-σφαίρα σαν συσσωματώματα αυθόρμητα (Εικ. 1Β). Αξίζει να σημειωθεί ότι, ενώ 3Α6 συγκαλλιέργεια με LNCaP (3Α6 /LNCaP) ή C4-2 κύτταρα (3Α6 /C4-2) σχηματίζονται μεγαλύτερα συσσωματώματα από την μονοκαλλιέργεια 3Α6 (3Α6 /3Α6), ένα σημαντικά μειωμένο αριθμό και το μέγεθος των αδρανών παρατηρήθηκαν στην καλλιέργεια ομάδα 3Α6 και PC3 κύτταρα (3Α6 /PC3). Για τον προσδιορισμό των κυτταρικών τύπων που υπάρχουν στα συσσωματώματα, μερικά από τα κυτταρικά συσσωματώματα υποβλήθηκαν σε ανάλυση ιστομορφολογική. Έντονη χρώση του πυρήνα του κυττάρου χρωματίνη πλούσια (Σχήμα 1C?. Η &? Ε) και θετική ανοσοδραστικότητα του επιθηλιακού κυτταρικό δείκτη Ε-καδερίνης (Εικ 1C?. IHC) ανιχνεύθηκαν σε συσσωματώματα που συλλέχθηκαν από 3Α6 /LNCaP, 3Α6 /C4- 2 και 3Α6 /PC3 ομάδες πολιτισμού, αλλά όχι σε συσσωματώματα 3Α6 κύτταρα που αναπτύσσονται μόνα τους. Αυτό το εύρημα επιβεβαιώθηκε η ανάπτυξη 3-D χιμαιρικών tumoroids αποτελείται από κύτταρα καρκίνου προστάτη και MSCs κάτω από αυτές τις συνθήκες συν-καλλιέργειας.

(Α) μεταναστευτική απόκριση των ανθρώπινων MSCs στο μέσο, ​​η κανονική επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη (PrEC) και του προστάτη καρκινικές κυτταρικές σειρές (DU145, PC3 και LNCaP). Κύτταρα που μετανάστευσαν μέσω της μεμβράνης του transwells βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες 8 ώρες μετά κύτταρο επιμετάλλωσης. Η κάτω επιφάνεια της μεμβράνης φωτογραφήθηκε (100Χ), και μια αντιπροσωπευτική εικόνα από κάθε συνθήκη δείχνεται στην κορυφή. Τα ποσοτικά δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD του αριθμού των κυττάρων ανά πεδίο υψηλής ισχύος (100Χ) σε πειράματα εις τριπλούν. (Β) Η μακροσκοπική (άνω) και μικροσκοπική (κάτω) ενόψει των κυτταρικών αδρανών υλικών υπό συνθήκες καλλιέργειας 3-D RWV των 3Α6 κυττάρων μόνο (3Α6 /3Α6) ή να αναμιχθεί με LNCaP (3Α6 /LNCaP), C4-2 (3Α6 /C4- 2) ή PC3 (3Α6 /PC3) κύτταρα. (C) Ανίχνευση των μικτών κυτταρικών συστατικών στις 3-D tumoroids καλλιεργημένα προστάτη με Η &? Ε και ανοσοϊστοχημική χρώση Ε-καδερίνης (Ε-Cad) στο συνολικό τμήματα κύτταρο

Η

περαιτέρω απομονωμένη. τα 3Α6 κυττάρων από συσσωματώματα μονοκαλλιέργεια και το καθένα από τα χιμαιρικά tumoroids προστάτη (3Α6 /LNCaP, 3Α6 /C4-2 και 3Α6 /PC3). Οι προκύπτουσες 3Α6 παράγωγα που αντιπροσωπεύουν τα γενετικά σχετικές κανονική MSC και καρκίνο του προστάτη που σχετίζεται με κυτταρικές σειρές MSC ορίστηκαν ως 3Α6

RWV και 3Α6

LNCaP, 3Α6

C4-2 και 3Α6

PC3, αντίστοιχα. Η καθαρότητα αυτών των παραγώγων 3Α6 επιβεβαιώθηκε με αξιολόγηση επιφανειακούς δείκτες MSC, συμπεριλαμβανομένων CD105, CD166, CD44 και CD29. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης βρέθηκαν σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα 3Α6 που αναπτύχθηκαν σε πλαστικά πιάτα μεταξύ όλων των 15 περάσματα (Σχ. 2Α, 2Β και Πίνακας S2). Η απουσία μολυσματικών κυττάρων καρκίνου του προστάτη επίσης καταδεικνύεται από την έλλειψη Ε-καδερίνης που εκφράζουν κύτταρα (Σχ. 2C). Αυτά τα ζεύγη κανονικά και καρκίνο του προστάτη που σχετίζεται με κυτταρικές γραμμές MSC χρησιμοποιήθηκαν για περαιτέρω χαρακτηρισμό.

(Α) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των αντιγόνων κυτταρικής επιφάνειας του γονικού 3Α6 και των παραγώγων του που απομονώνονται από 3-D συσσωματώματα καλλιεργημένο κύτταρο RWV. Τα ιστογράμματα εμφανίζουν τα προφίλ φθορισμού του 3Α6 παραγώγων χρωματίστηκαν με αντισώματα έναντι των αντιγόνων που αναφέρονται και το αντίστοιχο αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου (μαύρη γραμμή). Τα επίπεδα έκφρασης των μεμονωμένων αντιγόνων προσδιορίστηκαν ποσοτικά ως ο λόγος του μέσου φθορισμού διαύλου του αντισώματος ελέγχου και ειδικό αντίσωμα. Οι ράβδοι σφάλματος δεικνύουν SD τριπλών μετρήσεων. (Β) Ανάλυση ανοσοαποτύπωσης, της έκφρασης CD105 στα παράγωγα 3Α6. Οι EF1-α επίπεδα πρωτεΐνης φαίνεται να ποικίλλει σε ποσότητες φόρτωσης. (Γ) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της επιθηλιακής δείκτη Ε-καδερίνης σε 3Α6 παράγωγα και τα αντίστοιχα τους συνεργάτες συγκαλλιέργεια τους κυτταρικών σειρών καρκίνου του προστάτη. Μαύρες γραμμές αντιπροσωπεύουν ισοτόπου ελέγχους.

Η

Καρκίνος του προστάτη επηρεάζει την Lineage Δέσμευση των οστών Barrow-προέρχεται MSCs Μετά από συγκαλλιέργεια Επικοινωνία

Πρέπει πρώτα διερευνηθεί κατά πόσο ο καρκίνος του προστάτη έχει τη δυνατότητα να κατευθύνει τις τύχες της διαφοροποίησης του μυελού των οστών που προέρχονται MSC μετά από μακροχρόνια σωματική επαφή. Βρήκαμε ότι η 3-D καλλιεργήθηκαν 3Α6 παράγωγα, ανεξάρτητα από το αν απομονώθηκαν από ομοτυπική κυτταρικά συσσωματώματα ή χιμαιρικά tumoroids προστάτη, διατήρησε τις ιδιότητες MSC και ήταν σε θέση να διαφοροποιούνται σε οστεοβλάστες και λιποκύτταρα κατόπιν καλλιέργειας στα κατάλληλα μέσα διαφοροποίηση (Σχ. 3) . Ωστόσο, μία αυξημένη τάση προς αδιπογονική διαφοροποίηση, η οποία υποδεικνύεται από ενισχυμένη συσσώρευση λιπιδίων (Εικ. 3Α, Σχ. S1A) και υψηλότερη έκφραση του λιποκύτταρα ειδικοί δείκτες αδιπονεκτίνης (ADIPOQ) και απόζευξη πρωτεΐνη 1 (UCP1) (Σχ. 3Β) ήταν βρέθηκαν σε όλες τις τρεις σχετίζονται με τον καρκίνο των παραγώγων 3Α6 με υπέρτατη πρόκληση φαίνεται στο 3Α6

PC3 σε σύγκριση με την κανονική 3Α6

RWV ή γονικών κυττάρων 3Α6. Από την άλλη πλευρά, αν και το ερυθρό της αλιζαρίνης χρώση S για ανοργανοποίηση μήτρας (Σχ. 3C, το Σχ. S1B) ταυτόχρονα με οστεοβλαστών-ειδικά γονίδια αλκαλική φωσφατάση (ALP) και οστεοκαλσίνη (OC) (Σχ. 3D) έκφραση έδειξε μια μικρή αύξηση του οστεογονική δραστικότητα του καρκίνου που σχετίζεται με τα παράγωγα 3Α6, μια αντίστροφη τάση μεταξύ οστεογονική και αδιπογονική διαφοροποίηση βρέθηκε μεταξύ αυτών των κυτταρικών σειρών. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο ρυθμό ανάπτυξης μεταξύ 3Α6

RWV και σχετίζονται με τον καρκίνο των παραγώγων 3Α6 (Εικ. S2), το οποίο μπορεί να αποκλείσει το ενδεχόμενο ότι το τροποποιημένο δυναμικό διαφοροποίησης είναι μια συνέπεια της αλλαγμένης ικανότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων.

3Α6 παράγωγα καλλιεργήθηκαν σε οστεογονικές ή αδιπογονική μέσο για την αξιολόγηση σε πολλαπλές δυνατότητες διαφοροποίησης τους. Γονικά κύτταρα 3Α6 αναπτύχθηκαν απουσία του μέσου διαφοροποίησης (-DM) χρησιμοποιήθηκαν ως μη επαγόμενη ελέγχου. Αντιπροσωπευτικά χρώση (Α) χρώση O Oil κόκκινο για να προσδιοριστεί περιεκτικότητα σε λιπίδια σταγονιδίων μετά από 21 ημέρες της διαφοροποίησης και (Γ) το ερυθρό της αλιζαρίνης S για την ανίχνευση ανοργανοποίησης οστού 14 ημέρες μετά την καλλιέργεια σε οστεογονικές-επαγωγή των μέσων ενημέρωσης. Μεγέθυνση: 100χ. (Β) ανάλυση qRT-PCR της έκφρασης δεικτών κοινών αδιπογένεσης και γονίδια δείκτες (D) οστεοβλαστών. Οι τιμές εκφράζονται ως κανονικοποιημένη ποσότητες mRNA σε σχέση με το γονίδιο housekeeping HSPCB, και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,05? **

P

& lt?. 0.001 μεταξύ της κανονικής 3Α6

RWV και του καρκίνου που σχετίζονται με παράγωγα 3Α6

Η

MSCs του καρκίνου που σχετίζονται με ασκούν μια μεγαλύτερη ικανότητα να επιταχυνθεί καρκίνο του προστάτη την ανάπτυξη και την εξέλιξη από Normal MSCs

επόμενο αναλύεται και συγκρίνεται το βιολογικό αποτέλεσμα που αντιστοιχεί στην προ-μεταστατικό δυναμικό των κανονικών 3Α6 με καρκίνο που σχετίζεται 3Α6 στον καρκίνο του προστάτη. Το μεταναστευτικό και επεμβατική ικανότητα των LNCaP, C4-2 και PC3 κύτταρα καρκίνου του προστάτη σε απάντηση νύξεις από την αντίστοιχη του καρκίνου που σχετίζονται με 3Α6

LNCaP, 3Α6

C4-2 και 3Α6

PC3, αντίστοιχα, ή η κανονική 3Α6

κύτταρα RWV, αξιολογήθηκε μέσω δοκιμασιών θάλαμο Boyden. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, και οι τρεις καρκινο-συναφές παράγωγα 3Α6 που ασκείται σημαντικά υψηλότερη προ-μεταστατικό αποτελέσματα με την προώθηση της μετανάστευσης του προστάτη καρκινικών κυττάρων (Σχ. 4Α) και την εισβολή (Εικ. 4Β) με μέσο 2- και 3-πλάσια αύξηση στην αριθμός των κυττάρων κινείται προς το θάλαμο πυθμένα, αντίστοιχα, σε σύγκριση με εκείνη των κανονικών 3Α6

κύτταρα RWV.

Μετανάστευσης (Α) και την εισβολή (Β) των υποδεικνυόμενων κυττάρων καρκίνου του προστάτη προς το κανονικό 3Α6

RWV και οι αντίστοιχες καρκινο-συναφές παράγωγα 3Α6 αναλύθηκαν με Transwell δοκιμασία μετά από 8 ώρες και 20 ώρες επώασης, αντίστοιχα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD του αριθμού των κυττάρων ανά πεδίο υψηλής ισχύος (100Χ) σε πειράματα εις τριπλούν. **

P

& lt? 0.001. Ο εκπρόσωπος εικόνα από κάθε κατάσταση εμφανίζεται στο κάτω μέρος.

Η

Για να επικυρώσετε περαιτέρω την προηγμένη όγκο προώθηση συμπεριφορά του καρκίνου που σχετίζονται με τα MSC για τον καρκίνο του προστάτη

in vivo

, εμείς υποδόρια ένεση PC3 κύτταρα μόνο του ή αναμεμειγμένο με φυσιολογικά 3Α6

RWV (3Α6

RWV /PC3) ή σχετίζονται με τον καρκίνο 3Α6

PC3 κύτταρα (3Α6

PC3 /PC3) σε γυμνά ποντίκια και αξιολογείται ο αντίκτυπος των 3Α6 κυττάρων σε όγκους PC3. Σε μια παράλληλη μελέτη, 3Α6

RWV και 3Α6

PC3 κύτταρα εγχύθηκαν μόνο, και το αποτέλεσμα επιβεβαίωσε την μη καρκινογενής ιδιότητα του 3Α6 παραγώγων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρά το γεγονός ότι και οι δύο 3Α6

RWV και 3Α6

PC3 δεν είχε καμία επίδραση στην ανάπτυξη των κυττάρων PC3

in vitro

(Εικ. S3), παρατηρήθηκε μία σημαντική αύξηση του όγκου του όγκου σε 3Α6

PC3 /PC3 αλλά όχι 3Α6

RWV /PC3 ξενομοσχεύματα (Εικ. 5Α). Η πλειονότητα των όγκων PC3 εν απουσία 3Α6 παρέμεινε δέσμια, ενώ PC3 όγκοι αναπτύσσονται μαζί με 3Α6

RWV ή 3Α6

PC3 εμφανίζεται μια διηθητική πρότυπο ανάπτυξης, με εισβολή στον περιβάλλοντα στρώμα και το υποκείμενο μυ (Σχ. 5Β, H & amp? Ε). Τα υψηλά πολλαπλασιαστική και διηθητική καρκινικά κύτταρα επιβεβαιώθηκε με Ki-67 έκφρασης και συσχετίστηκαν με υψηλή πυκνότητα μικροαγγείων (Εικ. 5Β, CD31). Αυτές οι επεμβατικές χαρακτηριστικά οι περισσότεροι προφανώς δει στα 3Α6

ξενομοσχευμάτων PC3 /PC3. Αξιοσημείωτα, 1 από 10 ποντικούς που λαμβάνουν το 3Α6

PC3 /ξενομοσχεύματα PC3 αναπτύχθηκαν μεταστάσεις στους πνεύμονες (Εικ. 5C), ενώ δεν μεταστάσεις παρατηρήθηκαν είτε στην ομάδα με όγκους από κύτταρα PC3 μόνο ή σε αυτούς με κύτταρα PC3 αναμιγνύεται με φυσιολογικό 3Α6

κύτταρα RWV. Επιπλέον, σύμφωνα με το

in vitro

εύρεση ότι ο καρκίνος που σχετίζεται με τα παράγωγα 3Α6 έχουν υψηλότερα αδιπογονική διαφοροποίησης δυναμικό από το κανονικό 3Α6

RWV, χρώση με ερυθρό ελαίου Ο αποκάλυψαν μία αυξημένη ποσότητα συσσώρευση λιπιδίων στα τμήματα του όγκου του 3Α6

PC3 /PC3 σε σύγκριση με εκείνη του 3Α6

RWV /PC3 (Εικ. 5Β, ερυθρό ελαίου Ο).

Γυμνοί ποντικοί εμφυτεύθηκαν υποδορίως με καρκίνο του προστάτη PC3 κύτταρα, είτε μόνα (PC3) ή να αναμιχθεί με φυσιολογικό 3Α6

RWV (PC3 + ​​3Α6

RWV) ή σχετίζονται με τον καρκίνο 3Α6

PC3 κυττάρων (PC3 + ​​3Α6

PC3) στο πλευρό (

n =

10 για κάθε ομάδα). (Α) κινητική ανάπτυξη των όγκων μετρήθηκαν επί 10 εβδομάδες παρακολούθησης και παρουσιάζονται ως οι φορές μεταβολές σε σύγκριση με την εβδομάδα 1 μετά την εμφύτευση των κυττάρων. *

σ

& lt? 0,05 έναντι ομάδας ελέγχου PC3. (Β) Αντιπροσωπευτικά πάνελ της ιστολογικής Η &? Χρώση Ε, ανοσοϊστοχημική χρώση για το CD31 δείκτη δείκτη πολλαπλασιασμού των κυττάρων Ki-67 και αγγειακές, και ερυθρά χρωστική Ο ελαίου για κενοτόπια λιπιδίων (κόκκινο) των τμημάτων υποδόριου όγκου. μεταστάσεις (C) του πνεύμονα παρατηρήθηκε με ιστολογική Η &? Ε χρώση τομών ιστού (40χ) από 3Α6

PC3 συν-εμβολιασμένα ζώα PC3. περιοχή του όγκου ήταν σε κύκλο και να επισημαίνονται.

Η

IL-6 Συμβάλλει στην Αντιδραστική στρωματικά φαινότυπο των MSCs του καρκίνου που σχετίζονται με

Για τον εντοπισμό υποψήφιων παραγόντων που ευθύνονται για τις αντιδραστικές δραστηριότητες στρωματικά του καρκίνου που σχετίζονται με MSCs, συστοιχίες ανθρώπινο αντίσωμα κυτοκίνης χρησιμοποιήθηκαν για να συγκρίνουν τα προφίλ έκφρασης κυτοκίνης του ρυθμισμένου μέσου που συλλέγονται από την κανονική 3Α6

RWV και σχετίζονται με τον καρκίνο 3Α6

LNCaP, 3Α6

C4-2 και 3Α6

PC3 κύτταρα. Μεταξύ 174 κυτοκίνες δοκιμάστηκαν, IL-6, ήταν σημαντικά υψηλότερη σε όλα τα τρία από τα σχετίζονται με τον καρκίνο των παραγώγων 3Α6 σε σύγκριση με 3Α6

RWV (Σχ. 6Α). Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από μια δοκιμασία ELISA (Σχ. 6Β) επιβεβαίωσε τα αυξημένα επίπεδα της πρωτεΐνης IL-6 σε 3Α6

LNCaP, 3Α6

C4-2 και 3Α6

κύτταρα PC3 που αντιστοιχεί σε αύξηση 145%, 204% και 1,403%, αντίστοιχα, πάνω από εκείνη του 3Α6

RWV (112 pg /ml).

(Α) προφίλ έκφρασης κυτοκίνης του ρυθμισμένου μέσου που λαμβάνεται από το κανονικό 3Α6

RWV και ο καρκίνος του προστάτη -associated 3Α6

LNCaP, 3Α6

C4-2, και 3Α6

PC3 αναλύθηκε με τη χρήση ενός Array Ανθρωπίνων κυτοκίνης αντισωμάτων C Series 2000. Το αυτοραδιογράφημα ενός συνόλου Array VI περιέχει IL-6 σημεία (ορθογώνια κουτιά) παρουσιάζεται. (Β) Ποσοτική ανίχνευση του επιπέδου έκφρασης της IL-6 με ανάλυση προσδιορισμού ELISA. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SD από τριπλό προσδιορισμό. (Γ) χημειοτακτική απόκριση των κυττάρων PC3 που προκαλείται από ανθρώπινη ανασυνδυασμένη IL-6 (IL-6). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD του αριθμού των κυττάρων ανά πεδίο υψηλής ισχύος (100Χ) σε πειράματα εις τριπλούν. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0.001

vs

ελεύθερο ορού μέσο και μόνο.. (D) Αναστολή της μετανάστευσης PC3 κυττάρων προς 3Α6

PC3 ρυθμισμένο μέσο από το αντίσωμα αντι-IL-6. Ρυθμισμένο μέσο από 3Α6

PC3 κύτταρα προ-αγωγή με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του αντι-IL-6 αντισώματος ποντικού και στη συνέχεια φορτώνονται στο κάτω θάλαμο του transwells. Η αγωγή με 30 μg /ml του ποντικού IgG (mIgG) ήταν ένας αρνητικός έλεγχος. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0.001

vs

IgG ποντικού.. (Ε) Επαγωγή αδιπογένεσης του 3Α6

κύτταρα RWV με ανθρώπινη ανασυνδυασμένη IL-6, και (F) αναστολή της αδιπογένεσης του 3Α6

κύτταρα PC3 με αντι-IL-6 αντισώματος στην υποδεικνυόμενη συγκέντρωση. Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με ερυθρό ελαίου Ο για να απεικονίσει σταγονίδια λιπιδίων μετά από 21 ημέρες επώασης. Η αντιπροσωπευτική εικόνα (100Χ) της κάθε κατάστασης εμφανίζεται στο πάνω μέρος. Τα χρωματισμένα κύτταρα μετρήθηκαν με μία μέθοδο εκχύλισης βαφή και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως το μέσο ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. **

P

& lt? 0.001

vs

ομάδα ελέγχου IgG ποντικού

Η

Εμείς εξέτασε κατά πόσον η IL-6 εμπλέκεται στην επαγωγή του προστάτη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων.. από τον καρκίνο που σχετίζεται με 3Α6. Βρήκαμε ότι η εξωγενής ανθρώπινη IL-6 (IL-6) προκάλεσε μια δοσοεξαρτώμενη αύξηση στη μετανάστευση transwell των κυττάρων PC3 (Εικ. 6C). Επιπλέον, ο αριθμός των κυττάρων PC3 που μετανάστευσαν προς το 3Α6

PC3 ρυθμισμένο μέσο στον κάτω θάλαμο αναστάλθηκε κατά 23% και 36% όταν το ρυθμισμένο μέσο προ-επεξεργασία με ένα αντίσωμα εξουδετέρωσης της IL-6 σε συγκεντρώσεις 10 μg /ml και 30 μg /ml, αντίστοιχα (Εικ. 6D).

Ο ρόλος της IL-6 στην ενισχυμένη αδιπογένεσης του καρκίνου που σχετίζεται με MSCs επίσης εκτιμήθηκε. Κανονική 3Α6

κύτταρα RWV επάχθηκαν να διαφοροποιηθούν σε κύτταρα αδιπογονική με ή χωρίς επιπλέον rIL-6. *

P

& lt? 0,05? *

P

& lt? 0,05?