Αφηρημένο

Ιστορικό

Τ κυττάρων ανοσοσφαιρίνης βλεννίνη-3 (Tim-3), έχει αναγνωριστεί ως αρνητικός ρυθμιστής της ανοσίας κατά των όγκων. Πρόσφατες μελέτες αναδεικνύουν το σημαντικό ρόλο του Tim-3 στο CD8

+ Τ εξάντληση των κυττάρων που λαμβάνει χώρα σε τόσο ανθρώπινα και ζωικά μοντέλα καρκίνου. Ωστόσο, η φύση της έκφρασης Tim-3 στο κύτταρο του όγκου και ο μηχανισμός με τον οποίο αναστέλλει αντικαρκινικής ανοσίας είναι ασαφείς. Αυτή η παρούσα μελέτη έχει ως στόχο να καθορίσει Tim-3 εκφράζεται σε τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα και να αξιολογηθεί ο ρόλος του Tim-3 σε τραχήλου της εξέλιξης του καρκίνου.

Μεθοδολογία

Ένα σύνολο των 85 δειγμάτων τραχηλικού ιστού, συμπεριλαμβανομένων 43 ανθρώπινου καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, 22 τραχηλικής ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας (CIN) και 20 χρόνια τραχηλίτιδα ενεπλάκησαν. Tim-3 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα ανιχνεύθηκε και βρέθηκε να συσχετίζεται με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους. Εν τω μεταξύ, η έκφραση της Tim-3 εκτιμήθηκε με RT-PCR, Western Blot και συνεστιακή μικροσκοπία σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές, HeLa και SiHa. Το δυναμικό της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων Hela αξιολογήθηκε μετά την αναστολή Tim-3 έκφραση με ADV-αντίθετης φοράς Tim-3.

Συμπεράσματα

Βρήκαμε ότι ο Tim-3 εκφράστηκε σε υψηλότερο επίπεδο σε οι κλινικές του τραχήλου της μήτρας καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με το CIN και χρόνιες ελέγχους τραχηλίτιδα. Υποστηρίξαμε αυτό το εύρημα, επιβεβαιώνοντας την παρουσία του Tim 3-mRNA και πρωτεϊνών στις κυτταρικές γραμμές του τραχήλου της μήτρας. Tim-3 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα συσχετίζεται με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους. Ασθενείς με υψηλή έκφραση του Tim-3 είχε σημαντικό μεταστατικό δυναμικό, προηγμένες βαθμούς καρκίνο και μικρότερη συνολική επιβίωση από αυτούς με χαμηλότερη έκφραση. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι Tim-3 έκφραση ήταν ένας ανεξάρτητος παράγοντας για την πρόβλεψη της πρόγνωσης καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Σημαντικά, τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης του Tim-3 πρωτεΐνη ανέστειλε τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων Hela. Η μελέτη μας δείχνει ότι η έκφραση του Tim-3 σε κύτταρα όγκου μπορεί να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Επιπλέον, Tim-3 έκφρασης μπορεί να προωθήσει μεταστατικό δυναμικό σε καρκίνους του τραχήλου

Παράθεση:. Cao Υ, Zhou Χ, Huang Χ, Li Q, Gao L, Jiang L, et al. (2013) Tim-3 Έκφραση στον Καρκίνο του Τραχήλου της Μήτρας Προωθεί μετάσταση όγκου. PLoS ONE 8 (1): e53834. doi: 10.1371 /journal.pone.0053834

Επιμέλεια: Pierre Busson, Ινστιτούτο θέματα καρκίνου Gustave Roussy, Γαλλία

Ελήφθη: 27 του Σεπτεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 6 Δεκέμβρη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 15 Ιανουαρίου του 2013

Copyright: © 2013 Cao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το άρθρο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας (Νο 81001049) και το Εθνικό Ταμείο Επιστημών Διακεκριμένου νέους επιστήμονες της Κίνας (Νο 81025011). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Οι τρέχουσες μελέτες συνεχίζουν να καταδεικνύουν μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ Tim-3 έκφρασης και σχετίζονται με τον όγκο ανοσοκαταστολή [1] – [3]. Sakuishi et al [4] βρήκαν ότι Tim-3 εκφράζεται επί CD8

+ λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο (TILs) σε ποντίκια που φέρουν στερεούς όγκους. Όλα Tim-3

+ TILs συνεκφράζουν PD-1, και αυτό το είδος των TILs αντιπροσωπεύει το κυρίαρχο κλάσμα των Τ κυττάρων που διηθούν όγκους. Tim-3

+ PD-1

+ TILs έκθεμα η πιο σοβαρή εξαντληθεί φαινότυπο, όπως ορίζονται από την αποτυχία να πολλαπλασιάζονται και παράγουν IL-2, TNF και IFN-γ. Συνδυασμένη στόχευση των Tim-3 και PD-1 οδούς είναι πιο αποτελεσματική για την αποκατάσταση ανοσίας κατά του όγκου από τη στόχευση είτε οδού μόνο. Zhou et al [5] ανιχνεύεται το ίδιο φαινόμενο σε ποντικούς με διάχυτη οξεία μυελογενή λευχαιμία. Ακόμη και σε ασθενείς με μελάνωμα, προς τα πάνω ρύθμιση του Tim-3 και PD-1 έκφραση είναι επίσης βρέθηκε να σχετίζεται με όγκο αντιγόνου-ειδικά CD8

+ δυσλειτουργία Τ κυττάρου [6]. Σε προηγούμενη μελέτη μας, βρήκαμε ότι Tim-3 εκφράζεται κατά προτίμηση στα ενδοθηλιακά κύτταρα λεμφώματος προερχόμενων και κατέστειλε την ενεργοποίηση των CD4

+ Τ λεμφοκύτταρα μέσω της ενεργοποίησης της ιντερλευκίνης-6-STAT3 οδό. Tim-3 διευκόλυνε επίσης την ίδρυση του λεμφώματος ανοσολογικής ανοχής [7]. Ωστόσο, αν ο Tim-3 εκφράζεται επίσης σε καρκινικά κύτταρα και σε άλλα μη αιματολογικές καρκίνους παραμένει ένα ανοιχτό ερώτημα.

Ο καρκίνος του τραχήλου είναι ένας όγκος που κατέχει ξεχωριστή όγκων που σχετίζονται με αντιγόνα (ΤΑΑ). Οι ιοί ανθρώπινου θηλώματος (HPVs) έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί προοδευτικές αλλαγές στο τραχηλικό επιθήλιο, οδηγούν σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Περισσότερο από 99% του τραχήλου της μήτρας κακοηθειών λιμάνι HPV (κυρίως HPV-16 και HPV-18). Ε6 και Ε7 είναι οι δύο πρωτεΐνες που εκφράζονται από τον ιό που είναι απαραίτητες για την έναρξη και την πρόοδο του καρκίνου του [8]. Αρκετές μελέτες [9], [10] δείχνουν ότι υπάρχουν άλλες πιθανές ρόλους όπως Fas-FasL συστήματος και την απώλεια του HLA τάξης Ι για ανοσολογική διαφυγή στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Επειδή πολλά μονοπάτια δυνητικά εμπλέκονται στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, αναρωτηθήκαμε εάν Tim-3, ένα αντιγόνο που έχει ενοχοποιηθεί για την ανάπτυξη διαφόρων καρκίνων, θα μπορούσε επίσης να παίξει ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Επιπλέον, προηγούμενη μελέτη μας διαπίστωσε ότι Tim-3 υπερεκφράζεται σε επιθηλιακούς καρκίνους. Οι λόγοι αυτοί συνδυάστηκαν μας έκανε να ενδιαφέρονται για τη διερεύνηση του ρόλου των Tim-3 σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Δύο πρόσφατες μελέτες [11], [12] έχουν προσδιορίσει Tim-3 έκφραση σε λευχαιμικά βλαστικά κύτταρα (LSC) σε ασθενείς με οξεία μυελοειδή λευχαιμία (AML). Tim-3

+ κυττάρων AML ήταν σε θέση να ανασυστήσει AML και αντι-ανθρώπινο αντίσωμα Tim-3 μπλοκαριστεί AML εμφύτευση σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος. Παρά το γεγονός ότι αντι-Tim-3 αντισώματα φαίνεται να μειώνουν την μεταστατικό δυναμικό των καρκινικών κυττάρων, ο μηχανισμός δράσης δεν είναι πλήρως κατανοητή. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε ADV-αντινόημα Tim-3 να μειορυθμίζουν Tim-3 στο καρκίνο του τραχήλου Hela κυτταρική γραμμή και στη συνέχεια αξιολογείται η ικανότητα των καρκινικών κυττάρων να μεταναστεύουν και εισβάλλουν.

Τα αποτελέσματά μας από αυτό μελέτη επιβεβαίωσε την έκφραση επίπεδο mRNA και πρωτεΐνης Tim-3 σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές και αποκάλυψε για πρώτη φορά ότι Tim-3 εκφράζεται κατά προτίμηση σε κλινικές πρωτογενείς τραχήλου καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με το CIN και χρόνιες τραχηλίτιδα. Επιπλέον, οι ασθενείς με υψηλή έκφραση του Tim-3 είχαν σημαντικά μεγαλύτερη μεταστατικό δυναμικό και προηγμένες βαθμούς καρκίνου και μικρότερη συνολική επιβίωση από εκείνους με χαμηλότερη έκφραση Tim-3. Ως εκ τούτου, Tim-3 μπορεί δυνητικά να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Βρήκαμε επίσης ότι η ADV-αντινόημα Tim-3 μπορούν να αναστείλουν τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων Hela. Σε συνδυασμό με προηγούμενη μελέτη μας, με την οποία βρήκαμε ότι Tim-3 ενεργοποιεί τον IL-6-STAT3 μονοπάτι για να καταστείλουν την ενεργοποίηση των CD4

+ Τ λεμφοκύτταρα, η μελέτη μας προσφέρει τη δυνατότητα ότι ο Tim-3 μπορεί να προάγει την μετάσταση μέσω της ενεργοποίησης IL-6-STAT3 οδό.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς

δείγματα 43 τραχήλου καρκινικούς ιστούς, 22 ιστούς CIN και 20 χρόνια ιστοί τραχηλίτιδα προήλθαν από ασθενείς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε πρωτογενή χειρουργική επέμβαση για την αυχενική ασθένειες του Τμήματος Γυναικολογικής Ογκολογίας στο Tongji Νοσοκομείο (Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας, Wuhan, Κίνα) από το 2004-2006. Όλα τα επιλεγμένα τραχήλου της μήτρας καρκινικούς ιστούς πληρούνται τα ακόλουθα κριτήρια ένταξης: χωρίς ιστορικό οποιοδήποτε άλλο είδος κακοήθους όγκου, χωρίς εισαγωγική θεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν πληροφορημένη γραπτής συγκατάθεσης για την ανάλυση των ιστών τους για ερευνητικούς σκοπούς. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του νοσοκομείου Tongji για την ανάλυση των ανθρώπινων ιστών. Οι ασθενείς είχαν ηλικία 27-67 ετών (μέση ηλικία, 39 ετών). Η ιστολογική εξέταση των αποκοπέντων τραχήλου ιστών διεξήχθησαν ακολουθώντας αιματοξυλίνη Σε προηγούμενη εργασία μας, έχουμε διαπιστώσει ότι ο Tim-3 μπορεί να ενεργοποιήσει την IL-6-STAT3 οδού. Tim-3 έκφραση αύξησε την ΕΚ προερχόμενο παραγωγή της IL-6 με σχεδόν 10-φορές, και η προσθήκη της IL-6 αύξησε σημαντικά το επίπεδο της φωσφορυλιωμένης STAT3 (ρ-STAT3). Σύμφωνα με δημοσιευμένες μελέτες [16] – [19], η IL-6-STAT3 οδός παίζει σημαντικό ρόλο στη μετάσταση του όγκου. STAT3 μπορεί να προωθήσει το σχηματισμό προ-μεταστατικούς θέση και μεταστατικά κύτταρα μπορεί να ξεφύγει από τις προ-αποπτωτικά αποτελέσματα του TNF-α μέσω της αυξημένης αυτοκρινούς IL-6-STAT3 σηματοδότησης. Επιπλέον, η αναστολή της ρ-STAT3 ενισχύει την αποτελεσματικότητα της ΙΡΝ-α έναντι μεταστατικού μελανώματος σε ένα μοντέλο ποντικού. Με βάση αυτά τα προηγούμενα ευρήματα και τα αποτελέσματά μας από αυτή τη μελέτη, υποθέτουμε ότι ο Tim-3 θα μπορούσε να διευκολύνει τη μετάσταση των όγκων μέσω της οδού της IL-6-STAT3. Επειδή μακρινή μετάσταση είναι ένας σημαντικός παράγοντας για την επιβίωση των ατόμων με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, Tim-3 μπορεί να είναι ένα κρίσιμο προγνωστικός δείκτης για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Στο σύνολό τους, η μελέτη μας δείχνει ότι ο Tim-3 ρυθμίζει όχι μόνο αρνητικά αντι -tumor ανοσία, αλλά επηρεάζει επίσης την ανάπτυξη του καρκίνου απευθείας μέσω της έκφρασής του σε καρκινικά κύτταρα. Για πρώτη φορά, έχουμε σχετίζεται την έκφραση του Tim-3 σε κύτταρα όγκου με χειρότερη κλινική παθολογική παραμέτρους στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η αναστολή της έκφρασης πρωτεΐνης Tim-3 μπορεί να αποτρέψει μετάσταση των όγκων. Έτσι, είναι λογικό για μελλοντικά πειράματα για να διερευνήσει Tim-3 σαν ένας στόχος για αντικαρκινική θεραπεία, ανοσοθεραπεία όγκου, και στον έλεγχο των μεταστατικών παθήσεων.