Αφηρημένο

Ιστορικό

Wnt5a είναι ένα μη-κανονικό εκκρίνεται γλυκοπρωτεΐνη της οικογένειας Wnt που παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου. Προηγούμενες μελέτες αναφέρουν ότι Wnt5a υπερεκφράζεται στον καρκίνο του προστάτη και πρότεινε ότι Wnt5a επηρεάζει τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων του όγκου του προστάτη. Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να αξιολογήσει την προγνωστική αξία της πρωτεϊνικής έκφρασης Wnt5a στον ιστό του καρκίνου του προστάτη και τη δυνατότητά του να προβλέψει την έκβαση μετά από ριζική προστατεκτομή σε ασθενείς με εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη.

Μεθοδολογία και Αποτελέσματα

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των μια μικροσυστοιχία ιστό που περιέχει δείγματα προστάτη από 503 ασθενείς με εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη έδειξαν σημαντικά υψηλότερη έκφραση πρωτεΐνης Wnt5a σε καρκίνο σε σύγκριση με καλοήθη πυρήνες από τους ίδιους τους ασθενείς (ρ & lt? 0,0001). Ασθενείς με υψηλή έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a είχαν σημαντικά καλύτερο αποτέλεσμα από την άποψη του χρόνου να βιοχημικής υποτροπής σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης (p = 0,001, 95% CI 1,361 έως 3,570, δείκτης επικινδυνότητας για 2.204). Ένας συνδυασμός υψηλής έκφρασης Wnt5a με χαμηλά επίπεδα έκφρασης του υποδοχέα Ki-67 ή ανδρογόνων είχαν ακόμη καλύτερα αποτελέσματα σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η έκφραση Wnt5a συσχετίζεται σημαντικά με VEGF και με Ki-67 και υποδοχέα ανδρογόνων έκφρασης, αν και δεν είναι ιδιαίτερα σημαντική. In vitro, αποδείξαμε ότι η ανασυνδυασμένη Wnt5a μειώθηκε εισβολή των 22Rv1 και DU145 κύτταρα και ότι siRNA νοκ ντάουν της ενδογενούς πρωτεΐνης Wnt5a οδήγησε σε αυξημένη εισβολή των κυττάρων 22Rv1 και LNCaP.

Συμπέρασμα

Έχουμε αποδείξει ότι οι κονσέρβες υπερέκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a σε ασθενείς με εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη προβλέπει ένα ευνοϊκό αποτέλεσμα μετά την επέμβαση. Αυτό βρει, μαζί με in vitro δεδομένα μας καταδεικνύουν την ικανότητα του Wnt5a να βλάψουν τις επεμβατικές ιδιότητες των καρκινικών κυττάρων του προστάτη, υποδεικνύει έναν όγκο κατασταλτικό αποτέλεσμα του Wnt5a σε εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι Wnt5a μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστική δείκτη και ότι επίσης είναι ένας εύλογος θεραπευτικός στόχος για τη θεραπεία του εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Syed Khaja AS, Helczynski L, Edsjö Α, Ehrnström R, Lindgren Α, D Ulmert, et al. (2011) αυξημένα επίπεδα της πρωτεΐνης Wnt5a σε εντοπισμένη Καρκίνος του προστάτη ιστών σχετίζεται με καλύτερη έκβαση. PLoS ONE 6 (10): e26539. doi: 10.1371 /journal.pone.0026539

Επιμέλεια: Αλάνα Λ Welm, Huntsman Cancer Institute, University of Utah, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 17 Απρ του 2011? Αποδεκτές: 28 Σεπτεμβρίου, 2011? Δημοσιεύθηκε: 24, Οκτώβρη του 2011

Copyright: © 2011 Syed Khaja et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίχθηκε από το Ίδρυμα σουηδική Καρκίνου (AB και TA), το Συμβούλιο Έρευνας της Σουηδίας (AB και TA), τα θεμέλια Söderberg (TA), το Πανεπιστήμιο Malmö Νοσοκομείο Ερευνητικά ιδρύματα (AB και TA), Ίδρυμα Καρκίνου του Gunnar Nilsson του (AB και TA ) και 6ο πλαίσιο της Ευρωπαϊκής Ένωσης (P-Mark), αριθμός Grant LSHC-CT-2004 με 503.011. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν διαβάσει την πολιτική του περιοδικού και έχουν τα ακόλουθα συγκρούσεις: η αίτηση για δίπλωμα ευρεσιτεχνίας έχει έχουν υποβληθεί με Anders Bjartell και Tommy Andersson ως εφευρέτες στην οποία, με βάση τα παρόντα αποτελέσματα, προτείνουν για τη θεραπεία ασθενών με καρκίνο του προστάτη με όγκους με χαμηλή ενδογενή έκφραση Wnt5a με μια ουσία που ανασυνθέτει Wnt5a σηματοδότησης στους όγκους του προστάτη των ασθενών αυτών. Η εφαρμογή αυτή δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η κορυφαία καρκίνου που επηρεάζει άνδρες όλων των φυλών και η δεύτερη πιο κύρια αιτία θανάτου στις ανεπτυγμένες χώρες [1]. Τα ανδρογόνα και τον υποδοχέα ανδρογόνων (AR) παίζουν κρίσιμους ρόλους όχι μόνο στην φυσιολογική ανάπτυξη, αύξηση και τη λειτουργία του αδένα του προστάτη, αλλά και στην καρκινογένεση και της εξέλιξης του προστάτη [2]. Αρχικά, τα κύτταρα του προστάτη είναι συνήθως εξαρτώνται AR για την ανάπτυξη και την επιβίωσή τους, και ως εκ τούτου ανταποκρίνεται σε θεραπεία στέρησης ανδρογόνων (ADT), αλλά σε μεταγενέστερα στάδια κύτταρα προστάτη γίνει ανδρογόνου αναίσθητη, και μοιραία ευνουχισμός ανθεκτικών καρκίνου του προστάτη (CRPC) αναπτύσσει [3] . Οι μοριακοί μηχανισμοί που ευθύνονται για τη μετάβαση σε CRPC είναι ελάχιστα κατανοητές, ωστόσο, η πιο συνεπής αλλαγή που σχετίζεται με ευνουχισμό ανθεκτικά αύξηση σε προφίλ έκφρασης παγκόσμια γονίδιο του προστάτη ξενομοσχεύματα ήταν μια αύξηση στα επίπεδα AR mRNA [4]. Η αυξημένη έκφραση του AR θεωρείται ότι είναι ένα βασικό χαρακτηριστικό του CRPC και έχει αποδειχθεί ως συνέπεια είτε μετάλλαξη ή ενίσχυση του AR ή από την αυξημένη έκφραση που προκαλείται από την απορυθμισμένη αυξητικούς παράγοντες ή διάφορες συν-ρυθμιστές [5]. Παρά το γεγονός ότι έχουμε πρόσβαση σε προγνωστικούς παράγοντες για την ΣΕΣ, συμπεριλαμβανομένου του Gleason βαθμό, το στάδιο TNM, χειρουργικά επίπεδα καθεστώς περιθωρίου και PSA στον ορό, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ταυτοποίηση νέων βιοδεικτών, η οποία μπορεί να βελτιώσει σημαντικά, είτε μόνη της είτε σε συνδυασμό των άλλων βιοδεικτών, μας την ικανότητα να προβλέψουμε το αποτέλεσμα σε ασθενείς ΣΕΣΣ. Προηγούμενες μελέτες έχουν προτείνει μια πιθανή σχέση μεταξύ AR και Wnt-β-κατενίνης οδούς σηματοδότησης κατά την ανάπτυξη και την πρόοδο της προστάτη [6], [7].

Πρόσφατα, η προσοχή έχει προσοχή στο ρόλο των πρωτεϊνών Wnt και Wnt σηματοδότησης στην ΣΕΣΣ. Το όνομα προέρχεται από Wnt «site ένταξη MMTV χωρίς φτερά που σχετίζονται με» και είχε αρχικά προταθεί από Nusse και συν-εργαζομένων το 1991 [8]. Wnt πρωτεΐνες αποτελούν μια οικογένεια δεκαεννέα εκκρίνεται γλυκοπρωτεϊνών που παίζουν σημαντικό ρόλο κατά την ανάπτυξη και στις προδιαγραφές μοίρα των κυττάρων, μετανάστευση κυττάρου και κυττάρου πολικότητα [9], [10]. Wnt πρωτεΐνες μπορούν να ταξινομηθούν σε τουλάχιστον δύο υποοικογένειες? κανονική Wnts που προωθούν β-κατενίνης με τη μεσολάβηση της μεταγραφής και μη κανονικών Wnts. Σηματοδότηση Wnt συμβαίνουν σε αυτο- ή παρακρινή τρόπο μέσω δέσμευσης του εκκρινόμενα μόρια Wnt έως επτά διαμεμβρανικές πρωτεΐνες υποδοχέων frizzled (Fz) απουσία ή παρουσία συν-υποδοχείς όπως LRP 5/6 και ROR [10]. Αρκετές συστατικά σηματοδότησης Wnt έχουν επίσης ενοχοποιηθεί σε γένεση των ανθρώπινων καρκίνων? υπερέκφραση του Wnt-1 παρατηρήθηκε σε επιθηλιακά μαστικό αδενοκαρκίνωμα [11] και σε αρκετές κυτταρικές σειρές προστάτη και τους ιστούς του προστάτη. Wnt-1 έκφραση συσχετίζεται θετικά με το σκορ Gleason, β-κατενίνης και με τα επίπεδα του PSA στον ορό [12]. Επιπλέον, με βάση τον προσδιορισμό των επιπέδων Wnt5a mRNA σε όγκους του προστάτη έχει προταθεί ότι η ανώμαλη έκφραση της μη κανονικής Wnt5a εμπλέκεται σε PCa [13].

Wnt5a, ένα από τα πλέον μελετημένα μη κανονική Wnts, αποτελεί ουσιαστικό Wnt πρωτεΐνη στην επαγωγή και τον έλεγχο της πολικότητας Wnt /επίπεδες κύτταρο (PCP) και η Wnt /Ca

2+ οδών [14], [15]. Επιπλέον, Wnt5a όχι μόνο έχει αποδειχθεί για να εξουδετερώσει την οδό /β-κατενίνης Wnt, αλλά επίσης, σε συγκεκριμένα πλαίσια, για να ενεργοποιήσετε αυτή την οδό [16]. Η δυνατότητα Wnt5a να προκαλέσει διάφορες εκδηλώσεις κατάντη σηματοδότησης μπορεί τουλάχιστον εν μέρει να εξηγήσει την παρουσία των εκθέσεων που υποδηλώνει μια διφορούμενη φύση της Wnt5a? που έχουν είτε ένα ογκοκατασταλτικό ή όγκου προώθηση της λειτουργίας ανάλογα με το περιεχόμενο και τον τύπο του όγκου [16]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι Wnt5a ρυθμίζεται μειωτικά σε ορισμένες κακοήθειες συμπεριλαμβανομένου του ορθοκολικού καρκίνου (έκφραση πρωτεΐνης) [17], νευροβλάστωμα (επίπεδα mRNA) [18], διηθητικά καρκινώματα πορογενές μαστού (έκφραση πρωτεΐνης) [19], [20] και λευχαιμίες (mRNA τα επίπεδα) [21], υποδηλώνοντας έναν όγκο κατασταλτικό αποτέλεσμα του Wnt5a. Είναι ενδιαφέρον, άλλες εκθέσεις έχουν αντί προτείνει ένα ογκογόνο δράση του Wnt5a κυρίως βασίζονται σε ρύθμιση προς τα πάνω σε καρκινικά κύτταρα του μαστού (επίπεδα mRNA) [22], γαστρικό καρκίνο (έκφραση πρωτεΐνης) [23], το μελάνωμα (έκφραση πρωτεΐνης) [24], ο καρκίνος του πνεύμονα και του καρκίνου του προστάτη (έκφραση του mRNA) [13]. Παρεκκλίνουσα γονιδίων και πρωτεϊνών έκφραση Wnt5a σε προστάτη και πιθανή υποκείμενη μοριακοί μηχανισμοί έχουν περιγραφεί σε προηγούμενες εκθέσεις [13], [25], [26], [27]. Σε μια πρόσφατη μελέτη, με βάση τις μελέτες Affymetrix των κανονικών γραμμών επιθηλιακών προστάτη και κυττάρων καρκίνου, Wang et al έδειξαν ότι αυξημένη μεταγραφή του γονιδίου της ΣΕΣΣ με Wnt5a οφειλόταν σε υπομεθυλίωση? υποδηλώνοντας ότι επιγενετική ρύθμιση της έκφρασης Wnt5a μπορεί να έχει σημασία σε προστάτη εξέλιξη [28]. Κάθε συμπέρασμα που συνάγεται από τα δεδομένα από την ανάλυση Affymetrix χωρίς ταυτόχρονη ανάλυση της έκφρασης της πρωτεΐνης Wnt5a είναι επικίνδυνη, δεδομένου ότι το mRNA Wnt5a έχει μακρά μεταγραφεί 3′-περιοχή ανοιχτά για μεταφραστική ρύθμιση. Τα δεδομένα που υποστηρίζουν μια τέτοια μεταφραστική ρύθμιση έκφρασης πρωτεΐνης Wnt5a έχει προηγουμένως αναφερθεί [19], [29].

Πρόσφατες μελέτες δεικνύεται αυξημένα επίπεδα Wnt5a και πρωτεΐνης σε προστάτη συγκριτικά με καλοήθη ιστό [25], [26] . Yamamoto et al κατέδειξαν

in vitro

ότι knockdown του Wnt5a μείωσε τις επεμβατικές ιδιότητες των DU145, και υπερ-έκφραση του Wnt5a διεγερμένα διήθηση των PC3 κυττάρων [25]. Σε αντίθεση, ο Wang Q και συνεργάτες απέδειξαν ότι η ανασυνδυασμένη Wnt5a δεν προκάλεσε αυξημένη κινητικότητα στα ίδια κύτταρα PC3 [26]. Επιπλέον, έχει δειχθεί με ανοσοϊστοχημεία (IHC) ότι Wnt5a έκφραση συσχετίζεται με Gleason στείλει ≥8 σε 24 ασθενείς από κοόρτη 98 ασθενών προστάτη που είχαν υποβληθεί σε ριζική προστατεκτομή. Αυτό θα μπορούσε να δείξει ότι Wnt5a προωθεί την επιθετικότητα, αφού οι ασθενείς με χαμηλά επίπεδα Wnt5a είχε μια καλύτερη ελεύθερη υποτροπής επιβίωση σε σύγκριση με ασθενείς με υψηλά επίπεδα Wnt5a [25].

Αντικρουόμενες εκθέσεις σχετικά με το ρόλο των Wnt5a σε προστάτη της εξέλιξης και αραιή πληροφορίες σχετικά με την έκφραση Wnt5a σε σχέση με την κλινική έκβαση, μας προέτρεψε να διερευνήσει πρωτεΐνη έκφραση Wnt5a σε ένα μεγάλο μέρος του πληθυσμού με βάση κοόρτης και ο ρόλος της να προβλέψει την έκβαση μετά από χειρουργική επέμβαση για την τοπική και κυρίως χαμηλού βαθμού (91%) του προστάτη. Η έρευνα αυτή συμπληρώθηκε με

in vitro

πειράματα για να διερευνήσει τους πιθανούς λόγους για την ικανότητα του να δρα Wnt5a ως προγνωστική βιοδείκτη σε αυτή την κατηγορία ασθενών. Στην παρούσα μελέτη επιβεβαίωσε ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης Wnt5a ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε προστάτη συγκριτικά με καλοήθη ιστό, αλλά διαπιστώσαμε ότι η αυξημένη έκφραση Wnt5a πρωτεΐνη είχε θετική επίδραση στην έκβαση σε ασθενείς ΣΕΣ, όπως οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα πρωτεΐνης Wnt5a είχε ένα καλύτερο αποτέλεσμα σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλά επίπεδα Wnt5a μετά από ριζική προστατεκτομή. Σε καλή συμφωνία, βρήκαμε επίσης ότι αυτή η ικανότητα του Wnt5a να επηρεάσει θετικά αποτελέσματα σε ασθενείς με προστάτη μπορεί να οφείλεται στην ικανότητά του να αναστέλλει την εισβολή των κυττάρων του προστάτη, χωρίς αρχικά επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό τους

in vitro

. Προσθήκη Foxy5 (α Wnt5a μιμείται πεπτίδιο) μειώθηκε επίσης εισβολή, αλλά όχι τον πολλαπλασιασμό αυτών των κυττάρων.

Αποτελέσματα

Η ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση της Wnt5a, AR, Ki-67 και VEGF

Μια μικροσυστοιχία ιστού (TMA) κατασκεύασμα με διπλές πυρήνες καλοήθεις και κακοήθεις ιστούς από 503 ασθενείς (χαρακτηριστικά των ασθενών στον πίνακα 1) που είχαν υποβληθεί σε ριζική προστατεκτομή, η ανοσοχρώση για Wnt5a, AR, Ki-67 και VEGF (Σχ. 1 Α- ΦΆ). έκφραση πρωτεΐνης Wnt5a ανιχνεύθηκε στο κυτταροπλασματικό διαμέρισμα των επιθηλιακών κυττάρων και περιστασιακά σε στρωματικά κύτταρα τόσο του καρκίνου και δείγματα καλοήθη ιστό. καρκινικούς ιστούς από τους περισσότερους ασθενείς (82%) έδειξε ένα ομογενές ισχυρό κυτταροπλασματική ανοσοχρώση, ενώ η πλειοψηφία των καλοήθων ιστούς (65%) έδειξαν ασθενή ανοσοαντίδρασης υποστηρίζοντας ότι μια άνω ρύθμιση του Wnt5a πρωτεΐνης λαμβάνει χώρα σε καρκινικό ιστό. Τα αποτελέσματα από το εγχειρίδιο βαθμολόγησης των κυτταροπλασματικών εντάσεις χρώσης σε κακοήθεις και καλοήθεις επιθηλιακών κυττάρων που απεικονίζεται στο Σχ. 1G-I. Η διαφορά μεταξύ Wnt5a εντάσεων χρώση σε καρκίνο και καλοήθη δείγματα βρέθηκε να είναι σημαντική (ρ & lt? 0,0001) όταν συνδυάζεται Wilcoxon δοκιμή Rank Sum εκτελέστηκε. Σε σχεδόν το 80% των ασθενών που βρήκαμε ισχυρή ένταση χρώσης Wnt5a (αυθαίρετη μονάδα 2 ή 3) σε πυρήνες του καρκίνου, ενώ μόνο το 35% των ασθενών εμφανίζεται έντονη χρώση σε δείγματα καλοήθη ιστό. Περισσότερες λεπτομέρειες για τα στοιχεία βαθμολόγησης από Wnt5a, AR, Ki-67 και VEGF βάφονται πυρήνες δίνονται στον Πίνακα 2.

amp A &? Β) Τα πάνελ παρουσιάζουν αντιπροσωπευτικά ανοσοκηλιδώσεις Wnt5a σε καλοήθη και τον καρκίνο περιοχές ιστού από τον ίδιο ασθενή C & amp? Δ) Τα πάνελ παρουσιάζουν αντιπροσωπευτικά ανοσοκηλιδώσεις πυρηνική AR σε περιοχές καλοήθη και καρκίνου του ιστού Ε & amp? ΣΤ) Η πάνελ περίγραμμα VEGF ανοσοχρώση σε καλοήθη και τον καρκίνο περιοχές ιστού από τον ίδιο ασθενή. Όλα τα ένθετα στα πάνελ απεικονίζουν μεγέθυνση (40 φορές) εικόνες της περιοχής που υποδεικνύεται από το βέλος στην μεγαλύτερη εικόνα παρατηρήθηκε σε 15 × μεγέθυνση. G, H & amp? Ι) Οι πίνακες περιγράφουν γραφικές απεικονίσεις των Wnt5a, AR και εκφράσεις πρωτεΐνης VEGF σε καλοήθεις και τον καρκίνο δείγματα σε ασθενείς ΣΕΣΣ. Το μπαρ σε κάθε πίνακα περιγράφει τα 100 μm.

Η

Η

χρώση υποδοχέα ανδρογόνων ήταν κατά κύριο λόγο πυρηνική όπως αναμενόταν και γενικά πιο έντονη σε καρκίνο σε σύγκριση με καλοήθη δείγματα ιστού όπως παρουσιάζεται στον πίνακα 2. Εβδομήντα τοις εκατό των πυρήνων όγκου έντονα χρωματισμένο σε σύγκριση με το 53% των καλοήθων πυρήνων.

Πυρηνική Ki-67 έκφραση χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης πολλαπλασιασμού (Σχήμα S1A, B, C, D). Υπήρχαν σημαντικές διαφορές στο Ki-67 χρώση μεταξύ του καρκίνου και καλοήθεις πυρήνες, καθώς το 14% των καλοήθων πυρήνων ήταν αρνητικά για Ki-67, ενώ μόνο το 5% των πυρήνων των καρκίνων ήταν Ki-67 αρνητικές. Όσον αφορά τη θετική πυρηνική χρώση Ki-67, σχεδόν το 9% των πυρήνων του καρκίνου είχαν χρώση σκοράρει περισσότερα από 2, ενώ ο αντίστοιχος αριθμός για τους καλοήθεις πυρήνες ήταν μόνο 2,5% (Πίνακας 2).

έκφραση του VEGF, όπως ένας υποκατάστατος δείκτης για την αγγειογένεση, παρατηρήθηκε στο κυτταρόπλασμα των δύο κακοήθεις και καλοήθεις επιθηλιακών κυττάρων, με χώρους καρκίνο δείχνουν υψηλότερα χρώση σε σύγκριση με καλοήθη. Περισσότερο από το 73% των πυρήνων του καρκίνου έδειξαν ισχυρή ανοσοχρώση VEGF, ενώ μόνο το 51% των καλοήθων πυρήνων έδειξε ισχυρή ανοσοαντίδραση (Πίνακας 2).

Η διαφορά μεταξύ του AR, Ki-67 και χρώση VEGF εντάσεις στον καρκίνο έναντι καλοήθης πυρήνες ήταν στατιστικά σημαντική (p & lt? 0.0001). όταν Wilcoxon τεστ rank sum έγινε (Πίνακας 2)

Συσχέτιση της έκφρασης ιστού Wnt5a με AR, Ki-67 και VEGF

στην παρούσα κοόρτη έκφραση Wnt5a έδειξαν θετική και στατιστικά σημαντική συσχέτιση με την έκφραση VEGF (rho Spearman του (ρ) = 0.396, ρ & lt? 0,0001), αδύναμο αλλά ακόμη στατιστικώς σημαντικές συσχετίσεις με έκφραση AR (ρ = 0,159, p = 0,007) και Ki-67 έκφραση (ρ = 0.233, ρ & lt? 0.0001) (Πίνακας 3). Οι περισσότεροι από τους ασθενείς (220/365, 60%) με ισχυρή ανοσοχρώση Wnt5a σε καρκινικούς ιστούς παρουσίασε επίσης έντονη χρώση AR (Πίνακας 4). Μια παρόμοια τάση παρατηρήθηκε όταν συγκρίθηκαν Wnt5a και VEGF? 65% (219/339) των πυρήνων καρκίνο εμφάνισε ισχυρή χρώση για τόσο Wnt5a και VEGF. Εμείς δεν βρήκε διαφορές στην Wnt5a ανοσοχρώση ένταση όταν συγκρίναμε τις ομάδες των ασθενών με διαφορετικές βαθμολογίες Gleason. Μεταξύ των ασθενών με παθολογικές Gleason στείλει μέχρι 3 + 4 ( «χαμηλής ποιότητας»), το 81% είχαν αυξημένα έκφρασης πρωτεΐνης Wnt5a σε σύγκριση με 86% των ασθενών με υψηλότερα σκορ Gleason (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ομοίως, δεν παρατηρήθηκε συσχέτιση μεταξύ της χρώσης Wnt5a και παθολογικών στάδιο Τ, κλινικό στάδιο Τ, το καθεστώς χειρουργική περιθώριο ή των σπερματοδόχων κυστιδίων εισβολή (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a και πρόβλεψη της κλινικής έκβαση

στη συνέχεια, θα αξιολογηθεί αν η έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a σε καρκινικούς ιστούς που αναλύθηκαν μετά από ριζική προστατεκτομή για εντοπισμένο προστάτη θα μπορούσε να προβλέψει την κλινική έκβαση, όπως μετράται από το χρόνο για να βιοχημική υποτροπή (BCR), με τη χρήση του PSA & gt? 0,2 ng /mL στο αίμα δείγματα με επιβεβαιωτική αξία ως υποκατάστατος δείκτης. έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a όπως απεικονίζεται με ανοσοϊστοχημεία ήταν σημαντικά υψηλότερα στις περιοχές του καρκίνου σε σύγκριση με καλοήθη περιοχές (Εικ. 1, Πίνακας 2). Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν καμπύλη Kaplan-Meier απεικονίστηκε γραφικά μεταξύ έκφρασης πρωτεΐνης Wnt5a και BCR ελεύθερο χρόνο, ένα ευνοϊκό αποτέλεσμα (ρ = 0.001) ήταν εμφανής σε ασθενείς με υψηλή έκφραση πρωτεΐνης Wnt5a σε σύγκριση με ασθενείς με χαμηλή έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a (Εικ. 2Α). Όπως ήταν αναμενόμενο, η χαμηλή έκφραση του AR (Σχήμα S2C) και του Ki-67 (Σχήμα S2B) συνδέθηκε με ευνοϊκό αποτέλεσμα ενώ η έκφραση VEFG δεν συσχετίστηκε σημαντικά με BCR ελεύθερο χρόνο (Σχήμα S2D).

Όλες οι περιπτώσεις καρκίνου διαχωρίστηκαν σε 2 ομάδες με βάση τις εντάσεις χρώσης Wnt5a, Ki-67, AR και VEGF. Οι χαμηλές ομάδες περιλαμβάνονται οι όγκοι με σκορ 0 ή 1 και τις ομάδες υψηλού περιλαμβάνονται όγκων με σκορ 2 ή 3. Α) Ο πίνακας δείχνει τις καμπύλες επιβίωσης σχεδιάζονται μεταξύ της έκφρασης υψηλή ή χαμηλή πρωτεΐνη Wnt5a και BCR ελεύθερο χρόνο. Β) Ο πίνακας δείχνει τις καμπύλες επιβίωσης σχεδιάζονται μεταξύ υψηλή ή χαμηλή Wnt5a και υψηλής και χαμηλής Ki-67 εκφράσεις πρωτεΐνης. Κατά συνέπεια, οι όγκοι διαιρούνται στις ακόλουθες 4 ομάδες? Wnt5a χαμηλή & amp? Ki-67 χαμηλό, Wnt5a χαμηλή & amp? Ki-67 υψηλής, Wnt5a υψηλή & amp? Ki-67 χαμηλή και υψηλή Wnt5a & amp? Ki-67 σε υψηλά επίπεδα. C Ο πίνακας δείχνει τις καμπύλες επιβίωσης σχεδιάζονται μεταξύ υψηλή ή χαμηλή Wnt5a και υψηλής και χαμηλής εκφράσεις πρωτεϊνών AR. Κατά συνέπεια, οι όγκοι διαιρούνται στις ακόλουθες 4 ομάδες? Wnt5a χαμηλή & amp? AR χαμηλή, Wnt5a χαμηλή & amp? AR υψηλή, Wnt5a υψηλή & amp? AR χαμηλή και υψηλή Wnt5a & amp? AR υψηλή. Δ) Ο πίνακας δείχνει τις καμπύλες επιβίωσης σχεδιάζονται μεταξύ υψηλή ή χαμηλή Wnt5a και υψηλής και χαμηλής εκφράσεις πρωτεΐνης VEGF. Κατά συνέπεια, οι όγκοι διαιρούνται στις ακόλουθες 4 ομάδες? Wnt5a χαμηλή & amp? VEGF χαμηλή, Wnt5a χαμηλή & amp? VEGF υψηλή, Wnt5a υψηλή & amp? VEGF χαμηλή και υψηλή Wnt5a & amp? VEGF υψηλή. Σε όλους τους πίνακες υψηλή έκφραση μίας πρωτεΐνης υποδεικνύεται από ↑ ενώ ↓ δείχνει χαμηλή έκφραση. Κάθε βήμα στις καμπύλες αντιπροσωπεύουν υποτροπής στην ΣΕΣΣ. Οι δοθείσες τιμές p στο κάτω δεξιά πλευρά του πάνελ δείχνουν σημαντικές διαφορές στο αποτέλεσμα μεταξύ των πιο ευνοϊκή ομάδας και του ασθενέστερου ομάδα (βλέπε Πίνακα 4 για περισσότερες πληροφορίες).

Η

Επιπλέον, εξετάσαμε εάν η έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a επίσης θα μπορούσε να προβλέψει το αποτέλεσμα όταν συνδυάζεται με οποιαδήποτε από τις άλλες βιοδεικτών ιστού. Το καλύτερο μοντέλο πρόβλεψης λήφθηκε όταν η έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a συνδυάστηκε είτε με AR ή Ki-67 έκφρασης (Σχήμα 2Β, Γ.), Καθώς οι ασθενείς με υψηλή Wnt5a και χαμηλή AR ή χαμηλή έκφραση Ki-67 έδειξε καλύτερη υποτροπής επιβίωση χωρίς (p & lt? 0,0001), ενώ οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση Wnt5a και υψηλής AR ή υψηλή έκφραση Ki-67 είχαν την χειρότερη έκβαση μετά από χειρουργική επέμβαση. Ασθενείς με υψηλή έκφραση VEGF Wnt5a και χαμηλής είχαν καλύτερη έκβαση σε σύγκριση με άλλες ομάδες (p = 0,003) ή κάθε δείκτη μόνον. Ωστόσο, ο συνδυασμός των υψηλών Wnt5a και χαμηλής VEGF ήταν κατώτερη όταν Wnt5a αναλύθηκε σε συνδυασμό με AR ή Ki-67 υποδεικνύοντας ότι ο VEGF δεν είναι τόσο ισχυρή όσο AR ή Ki-67 για να προβλέψει το αποτέλεσμα σε συνδυασμό με Wnt5a στο παρόν πλαίσιο ( Σχ. 2D). Cox αρνητική, ανάλυση χρησιμοποιήθηκε για την πολυμεταβλητή ανάλυση και αποκάλυψε ότι η έκφραση Wnt5a, Gleason σκοράρει και παθολογικές στάδιο Τ ήταν ανεξάρτητοι παράγοντες που επηρεάζουν την υποτροπή ελεύθερης νόσου επιβίωσης στον προστάτη (Πίνακας 4).

έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a και τις επιπτώσεις της στην εισβολή και πολλαπλασιασμό του προστάτη κυτταρικές σειρές

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι οι ασθενείς με την έκφραση της πρωτεΐνης υψηλής Wnt5a έχουν πιο ευνοϊκό αποτέλεσμα σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλή έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a. Για την καλύτερη κατανόηση αυτού του ευρήματος έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a σε ένα SV40 απαθανάτισε φυσιολογικά επιθηλιακά προστάτη ανθρώπινη κυτταρική σειρά (ΡΝΤ2) και τέσσερις διαφορετικές κυτταρικές σειρές του προστάτη εξετάστηκαν. κύτταρα ΡΝΤ2 είχε μια χαμηλή έκφραση του ενδογενούς πρωτεΐνης Wnt5a ενώ υπήρχε σημαντική έκφραση Wnt5a στις κυτταρικές σειρές προστάτη LNCaP και 22Rv1 (Εικ. 3Α). Αυτά τα στοιχεία είναι σε καλή συμφωνία με τα ευρήματά μας της έκφρασης της πρωτεΐνης Wnt5a στο παρόν αναλύονται ομάδα του προστάτη και μια πρόσφατη μελέτη που πραγματοποιήθηκε, επίσης, σε φυσιολογικά επιθηλιακά προστάτη και κυτταρικές σειρές προστάτη [26]. Ωστόσο, αναλύσεις των δύο πιο επιθετικές κυτταρικές σειρές προστάτη (PC3 και DU145) αποκάλυψε πολύ χαμηλή έκφραση του Wnt5a πρωτεΐνης, συγκρίσιμη με εκείνη της κανονικής ΡΝΤ2 προστάτη επιθηλιακή κυτταρική σειρά (Σχ. 3Α). Το ενδιαφέρον είναι ότι, τα επίπεδα της πρωτεΐνης Wnt5a συνδυάζεται με την πρωτεΐνη AR εκφράσεις σε αυτές τις κυτταρικές σειρές (Εικ. 3Α).

Α) Αυτός ο πίνακας δείχνει την ενδογενή έκφραση Wnt5a και AR σε τέσσερις υποδεικνύεται κυτταρικές σειρές προστάτη (LNCaP, 22Rv1 , DU145 και PC3 κύτταρα) και σε μία αθανατοποιημένη ανθρώπινου προστάτη επιθηλιακή κυτταρική γραμμή (κύτταρα ΡΝΤ2). πρωτεϊνική ζώνη Wnt5a ταυτοποιήθηκε με το τρέξιμο rWnt5a παράλληλα στο ίδιο πήκτωμα. Οι κηλίδες ανιχνεύθηκαν και πάλι για β-ακτίνη ως έλεγχος φόρτωσης. Τα παρουσιάζονται κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά 4 χωριστών πειραμάτων. Β) Ο πίνακας περιγράφει τη σχετική εισβολή των κυτταρικών σειρών PC3 LNCaP, 22Rv1, DU145 και μετά από 24 ώρες εν απουσία ή παρουσία rWnt5a (0,4 μg /ml) στη δοκιμασία που περιγράφεται στο τμήμα Υλικά και Μέθοδοι. Τα αποτελέσματα δίνονται ως μέσοι ± SEM από 5 ξεχωριστά πειράματα. Οι διαφορές στην εισβολή μεταξύ των κυττάρων σε επεξεργασία με μόνο ή με rWnt5a όχημα αξιολογήθηκαν για στατιστική σημασία (ρ = 0.0001 για 22Rv1 και ρ & lt? 0,0001 για DU145). Γ) Ο πίνακας περιγράφει τον πολλαπλασιασμό των κυτταρικών σειρών PC3 LNCaP, 22Rv1, DU145 και μετά από 24 ώρες εν απουσία ή παρουσία rWnt5a (0,4 μg /ml). Τα αποτελέσματα δίνονται ως μέσοι ± SEM από 5 ξεχωριστά πειράματα. Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στον πολλαπλασιασμό μεταξύ ελέγχου και rWnt5a επεξεργασμένα κύτταρα. Δ) Ο πίνακας αντιπροσωπεύει το σχετικό εισβολή των κυττάρων 22Rv1 και DU145 μετά από 24 ώρες εν απουσία ή παρουσία Foxy5 (100 μΜ) χρησιμοποιώντας την ίδια δοκιμασία όπως στο πάνελ Β Οι διαφορές στην εισβολή μεταξύ των κυττάρων που έλαβαν θεραπεία με όχημα μόνο ή με Foxy5 ήταν αξιολογήθηκαν για στατιστική σημασία (ρ = 0.01 για 22Rv1 και ρ = 0,0003 για DU145). Ε) Ο πίνακας απεικονίζει τις επιπτώσεις των siRNA νοκ ντάουν της Wnt5a σε LNCaP και 22Rv1. Οι κηλίδες ανιχνεύθηκαν και πάλι για α-τουμπουλίνης ως έλεγχος φόρτωσης. Τα παρουσιάζονται κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά 4 χωριστών πειραμάτων. ΣΤ) Ο πίνακας περιγράφει τη σχετική εισβολή των κυττάρων LNCaP και 22Rv1 μετά τη θεραπεία με Wnt5a si-RNA (Wnt5a knockdown) ή ως κωδικοποιημένο siRNA (έλεγχος), στην ίδια δοκιμασία που χρησιμοποιήθηκε προηγουμένως στον πίνακα Β Τα αποτελέσματα δίνονται ως μέσοι ± SEM από 5 ξεχωριστά πειράματα. Η διαφορά στην εισβολή μεταξύ ομελέτα και si-Wnt5a γκρέμισε τα κύτταρα ήταν στατιστικά σημαντική και για τις δύο κυτταρικές σειρές (p & lt? 0.0001).

Η

Χρησιμοποιήσαμε τις τέσσερις κυτταρικές σειρές καρκίνου (LNCaP, 22Rv1, PC3 και DU145 ) για τα επόμενα πειράματα εισβολή μας. Η προσθήκη ανασυνδυασμένου Wnt5a (rWnt5a) μείωσε τη διεισδυτική συμπεριφορά των δύο 22Rv1 και DU145 καρκινικά κύτταρα (Σχ. 3Β). Ούτε η LNCaP, ούτε τα κύτταρα PC3 δεν ανταποκρίνονται σε rWnt5a με μια αλλαγή στην επεμβατική συμπεριφορά τους. Το αποτέλεσμα με τα κύτταρα PC3 είναι σύμφωνα με μια πρόσφατα δημοσιευμένη έκθεση από τον Wang et al [26], στην οποία τα κύτταρα PC3 δεν ανταποκρίνονται στις προσθήκη rWnt5a σε δοκιμασία το μηδέν μετανάστευσης πληγή. Τα κύτταρα LNCaP γνωστό ότι έχουν μια πολύ χαμηλή δραστικότητα εισβολή, και αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει γιατί τα κύτταρα αυτά δεν ανταποκρίνονται όταν προστέθηκε rWnt5a. Ωστόσο, όταν η έκφραση Wnt5a σε κύτταρα LNCaP χτυπήθηκε κάτω χρησιμοποιώντας SI-RNAs (Σχ. 3Ε), υπήρξε μια σημαντική αύξηση στην επεμβατική συμπεριφορά των κυττάρων LNCaP (Σχ. 3F). Επιπλέον, Wnt5a knockdown από si-RNA σε καρκινικά κύτταρα 22Rv1 επίσης ως αποτέλεσμα την αύξηση της εισβολής των κυττάρων αυτών (Σχ. 3Ε-F και Σχήμα S4).

Για να μάθετε αν η μείωση στην εισβολή των 22Rv1 και DU145 κυτταρικές γραμμές με την προσθήκη rWnt5a οφειλόταν σε μείωση του πολλαπλασιασμού αυτών των κυτταρικών σειρών, ερευνήσαμε το ρυθμό πολλαπλασιασμού σε κυτταρικές σειρές PCa. Προσθήκη rWnt5a δεν είχε καμία σημαντική επίδραση στον πολλαπλασιασμό σε αυτές τις κυτταρικές σειρές κατά τη διάρκεια των 24 ωρών που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό εισβολής (Σχ. 3C).

Από rWnt5a μείωσε την εισβολή των 22Rv1 και DU145 κύτταρα, δοκιμασία εισβολή ήταν εκτελείται επίσης σε αυτές τις κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας Foxy5 το οποίο είναι ένα εξαπεπτίδιο που προέρχεται από την αλληλουχία αμινοξέων της πρωτεΐνης Wnt5a και προηγουμένως δείξει ότι αναστέλλει την κινητικότητα των καρκινικών κυττάρων του μαστού, όπως rWnt5a [30]. Foxy5 πράγματι καταπιεσμένη επεμβατική ικανότητες αυτών των δύο κυτταρικών σειρών PCa (Εικ. 3D), και αυτή η μείωση στην εισβολή δεν προκλήθηκε από μείωση του πολλαπλασιασμού ως Foxy5 δεν επηρέασε την κατάσταση πολλαπλασιασμού σε αυτές τις κυτταρικές σειρές (δοκιμασία BrdU, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

για τις γνώσεις μας, αυτό τώρα μόνο μία μελέτη με περιορισμένο αριθμό ασθενών κατέδειξε ένα ρόλο Wnt5a πρωτεΐνης για να προβλέψει την κλινική έκβαση σε προστάτη [25]. Αυτό μας παρότρυνε να εκτελέσει μια μελέτη σχετικά με την έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a σε μια μεγαλύτερη ομάδα από καλά καθορισμένες ασθενείς του προστάτη με εντοπισμένο και κυρίως χαμηλού βαθμού νόσου και αφορούν τα αποτελέσματα με την έκφραση των άλλων βιοδεικτών γνωστών ιστού και το πιο σημαντικό με την BCR. Η παρούσα μελέτη συμμετείχαν μια συνεχόμενη σειρά 503 ασθενών προστάτη που είχαν υποβληθεί σε ριζική προστατεκτομή κατά τη διάρκεια του 1988-2003 στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Skåne, Malmö, Σουηδία, με μέσο χρόνο παρακολούθησης των 41,6 μηνών (εύρος 1,51 – 205,90). Αυτή η ομάδα ασθενών είναι μεγάλη, με βάση τον πληθυσμό, και οι ασθενείς είναι καλά χαρακτηρισμένες (Πίνακας 1). Στο TMA ολισθαίνει καλοήθεις και κακοήθεις ιστούς από τον ίδιο ασθενή είναι παρούσες σε διπλότυπα. Βασισμένο σε Gleason ποιότητες του υλικού ασθενών που χαρακτηρίστηκε περαιτέρω σε καρκίνους του χαμηλού βαθμού (Gleason σκορ μέχρι 3 + 4) και υψηλού βαθμού καρκίνους (Gleason 4 + 3 ή υψηλότερη). Σχεδόν το 89% των ασθενών που είχαν χαρακτηριστεί ως καρκίνους χαμηλής ποιότητας, η οποία πρέπει να αναμένεται σε μια ομάδα ασθενών με εντοπισμένο προστάτη κατάλληλο για ριζική προστατεκτομή. Ως έλεγχος των κλινικών υλικό μας, διαπιστώσαμε ότι υπήρχε μια στατιστικά σημαντική διαφορά στην κλινική έκβαση μεταξύ των ασθενών με χαμηλής ποιότητας και του καρκίνου υψηλής ποιότητας χρησιμοποιώντας Kaplan-Meier αναλύσεις BCR-free επιβίωση (Σχήμα S2A). Περαιτέρω έλεγχος του κλινικού υλικού αποκάλυψε επίσης ότι το ίδιο ίσχυε και όταν πολλαπλασιασμό μελετήθηκε από την έκφραση Ki-67, επικυρωμένη βιοδείκτη ιστού προστάτη [31]. Ασθενείς με υψηλή έκφραση Ki-67 είχε μειώσει την υποτροπή ελεύθερο χρόνο επιβίωσης σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλό αριθμό των Ki-67 που εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα (Σχήμα S2B).

Στην παρούσα μελέτη TMA χρησιμοποιήσαμε ένα καλά χαρακτηρίζεται από το -House αντίσωμα ειδικό για Wnt5a όπως περιγράφηκε προηγουμένως στις μελέτες του καρκίνου του μαστού [20]. Εδώ, εκτελέσαμε επίσης ανταγωνισμό με rWnt5a για να επιβεβαιωθεί η εξειδίκευση του αντισώματος στα τμήματα προστατικό ιστό (Εικόνα S3). Η ένταση χρώσης μειώθηκε από αντίσωμα μόνο όταν χρησιμοποιήθηκαν αντίσωμα και rWnt5a και ήδη σε γραμμομοριακή αναλογία 1:10 βρήκαμε μια σαφή μείωση του ανοσοχρώση. Επιπλέον, θα πραγματοποιηθεί ανοσοκυτταροχημεία (Συμπληρωματικές Υλικά και Μέθοδοι S1) του Wnt5a στον καρκίνο του προστάτη κυτταρικές γραμμές (LNCaP, 22Rv1 και DU145) μετά από προεπεξεργασία με είτε κωδικοποιημένα είτε Wnt5a si-RNA (Σχήμα S4A, B, C, D, E) . Πρώτον, παρατηρήσαμε κυτοσολικά χρώση των Wnt5a παρόμοια με αυτή που παρατηρείται στον ιστό καρκίνου του προστάτη και, δεύτερον, η ένταση του Wnt5a ανοσοχρώση μειώθηκε σημαντικά στα κύτταρα που υπέστησαν κατεργασία SI-RNA Wnt5a σε σύγκριση με εκείνους που έλαβαν θεραπεία με περιπλεγμένο si-RNA. Η θεραπεία με Wnt5a siRNA μείωσε το βαθμό Wnt5a ανοσοχρώση σε ένα επίπεδο παρόμοιο με εκείνο που παρατηρήθηκε στις κηλίδες Western (Σχ. 3Ε). Ανάλυση TMA μας δείχνουν σαφώς ότι η έκφραση Wnt5a πρωτεΐνη ήταν αυξημένη σε εντοπισμένες PCa σε σύγκριση με καλοήθη ιστό από τους ίδιους ασθενείς, μια επίδραση που παρουσίασαν ισχυρή στατιστική σημαντικότητα (ρ & lt? 0,0001? Σχ. 1 Α, Β & amp? G, Πίνακας 2 ). Αυτά τα αποτελέσματα είναι σε καλή συμφωνία με τα πρόσφατα ευρήματα προέρχονται από μια μικρότερη ομάδα [25]. Η κλινική συμπέρασμα ότι η έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a είναι αυξημένη σε εντοπισμένες PCa ιστό σε σύγκριση με φυσιολογικό /καλοήθη ιστό ενισχύεται επίσης από την ανάλυσή μας των διαφορετικών κυτταρικών γραμμών ανθρώπινου προστάτη. Παρατηρήσαμε με σαφήνεια ότι η κυτταρική γραμμή ΡΝΤ2, ένα SV40 αθανατοποιημένη κυτταρική σειρά που προέρχεται από φυσιολογικό επιθήλιο ανθρώπινου προστάτη εκφράζουν πολύ χαμηλά επίπεδα ενδογενούς πρωτεΐνης Wnt5a, ενώ η έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a ήταν υψηλή στις κυτταρικές σειρές προστάτη LNCaP και 22Rv1. Οι πιο επιθετική κυτταρικές σειρές, PC3 και DU145, είχε μια πολύ χαμηλή έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a. Αυτό είναι σύμφωνο με το λιγότερο ευνοϊκό αποτέλεσμα παρατηρήθηκε σε Wnt5 χαμηλή όγκους. Ωστόσο, στο υλικό TMA, Wnt5a δεν ήταν μειωτικά στην υψηλής ποιότητας (Gleason βαθμολογία & gt? 4 + 3) περιπτώσεις ΣΕΣΣ. Εάν αυτές οι φαινομενικά αντιφατικές αποτελέσματα δείχνουν ένα βαθμό-άσχετη λειτουργία της Wnt5a ούτε αντικατοπτρίζουν μόνο τα ατομικά χαρακτηριστικά των δύο όγκων από τα οποία προέρχονται οι κυτταρικές σειρές είναι δύσκολο να πω. Ως εναλλακτική εξήγηση, ο αριθμός των υψηλής ποιότητας προστάτη στην παρούσα κοόρτης (n = 41), μπορεί να είναι πολύ μικρή για να ανιχνεύσει ένα βαθμό σχετίζεται Wnt5a ρύθμιση προς τα κάτω.

Βρήκαμε επίσης αυξημένη έκφραση του AR, πρωτεΐνες Ki-67 και VEGF σε εντοπισμένες PCa ιστό σε σύγκριση με καλοήθη ιστό (Εικ. 1 C-F, Η-Ι, Πίνακας 2). Για να αποκτήσετε μια πρώτη εικόνα για τους πιθανούς μηχανισμούς για το πώς λειτουργεί Wnt5a σε προστάτη, πραγματοποιήσαμε στατιστική ανάλυση των πιθανών συσχετίσεων μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης Wnt5a και του AR, Ki-67 και VEGF, και τα τρία γνωστά να ρυθμίζεται προς τα πάνω σε προοδευτική ΣΕΣΣ. Wnt5a συσχετίζεται σημαντικά με VEGF, ένα δείκτη για την αγγειογένεση, υποδεικνύοντας ότι Wnt5a ενδέχεται να σχετίζονται με την ανάπτυξη του όγκου (Πίνακας 3). Από την άποψη αυτή τα δεδομένα μας είναι κάπως διαφορετικές από εκείνες που αναφέρθηκαν από τις αναλύσεις του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα όπου Wnt5a δεν σχετίζεται με την έκφραση του VEGF στον καρκινικό ιστό αλλά με VEGF στον περιβάλλοντα στρωματικό ιστό [32]. Επιπλέον, η έκφραση Wnt5a σε PCa ιστού στη μελέτη μας ασθενώς αλλά σημαντική συσχέτιση με την έκφραση AR (Πίνακας 3). ανάλυση έκφρασης πρωτεΐνης με στύπωμα Western έδειξε ότι τα επίπεδα Wnt5a και έκφραση AR σε ένα αθανατοποιημένο προστάτη επιθηλιακή κυτταρική γραμμή και 4 διαφορετικές κυτταρικές σειρές προστάτη συνδυάζεται με το άλλο, υποδεικνύοντας μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ Wnt5a και AR σε PCa (Εικ. 3Α). Παρά αυτά τα δεδομένα, έχει δειχθεί προσφάτως ότι Wnt5a αναστέλλει τη δράση μεταγραφικής AR σε κύτταρα 22Rv1 όταν αυτά τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με ένα πλασμίδιο Wnt5a [33]. Τέλος, η έκφραση της πρωτεΐνης Wnt5a ασθενώς αλλά σημαντική συσχέτιση με Ki-67 έκφραση (Πίνακας 3). Αυτό το αποτέλεσμα είναι σύμφωνο με την έκθεση για τον καρκίνο του πνεύμονα μη μικρών κυττάρων, όπου εντός του όγκου έκφραση Wnt5a συσχετίζεται σημαντικά με δείκτη Ki-67 πολλαπλασιασμού [32], αλλά σε αντίθεση με τη μελέτη για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα όπου Wnt5a έχει έναν όγκο κατασταλτικό αποτέλεσμα και απώλεια Wnt5a έχει μια ισχυρή συσχέτιση με υψηλό δείκτη πολλαπλασιασμού Ki-67 [34]. Όλα μαζί αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι ο ρόλος της Wnt5a σηματοδότησης στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων είναι αβέβαιο.

Στην παρούσα έρευνα δεν κατάφερε να βρει τον συσχετισμό μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης Wnt5a και το σκορ Gleason, αν και το τελευταίο μπορεί είναι η καλύτερη διαθέσιμη προγνωστικός δείκτης της έκβασης προστάτη [35]. Ωστόσο, Gleason βαθμολόγησης έχει τα όριά της, λόγω μεταξύ παρατηρητών μεταβλητότητα μεταξύ των παθολόγων και ως εκ τούτου υπάρχει ανάγκη για συμπληρωματική δείκτες.