Αφηρημένο

Ιστορικό

προέρχεται Gut παράγοντες των λιπιδίων έχουν εμπλέκονται στη συστηματική τραυματισμό και φλεγμονή, αλλά οι ακριβείς μονοπάτια που εμπλέκονται είναι άγνωστες. Επιπλέον, διαιτητική πρόσληψη λίπους και η παχυσαρκία είναι ανεξάρτητοι παράγοντες κινδύνου για την ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου. Εδώ μελετήσαμε την σοβαρότητα της πειραματικής κολίτιδας και της ανάπτυξης των κολίτιδα σχετιζόμενη καρκίνου (CAC) σε ποντικούς με ένα επαγώγιμο μπλοκ στην έκκριση χυλομικρών και δυσαπορρόφηση λίπους, μετά έντερο-ειδική απαλοιφή της μικροσωματικής πρωτεΐνης μεταφοράς τριγλυκεριδίων (

Mttp-ΙΚΟ

).

Μεθοδολογία Κύρια Ευρήματα /

Mttp-IKO

ποντίκια εμφάνισαν πιο σοβαρό τραυματισμό με θνησιμότητα περίπου 90% μετά από δεξτράνη θειικού νατρίου (DSS) που προκαλείται από κολίτιδα, σε σύγκριση με & lt? 20% στους ελέγχους. Εντερική διαπερατότητα αυξήθηκε στο

Mttp-IKO

ποντίκια σε σύγκριση με τους μάρτυρες, τόσο κατά την έναρξη και μετά τη χορήγηση του DSS, σε συνδυασμό με τα αυξημένα επίπεδα κυκλοφορούντων του TNFα. θεραπεία DSS αυξημένη έκφραση του mRNA του κόλου της IL-1β και IL-17Α όσο και inflammasome έκφρασης και στις δύο γονότυπους, αλλά η αφθονία του ΤΝΡα επιλεκτικά αυξημένη σε DSS θεραπεία

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς. Υπήρξε μια 2-πλάσια αύξηση του κόλου φορτίο όγκου σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς μετά αζοξυμεθάνιο θεραπεία /DSS, η οποία σχετίζεται με αυξημένη κολονική φλεγμονή, καθώς και μεταβολές στην έκφραση κυτοκίνης. Για την εξέταση των οδών με τις οποίες οι μεταβολές στην αφθονία των λιπαρών οξέων μπορεί να αλληλεπιδρά με κυτοκίνη σηματοδότησης για τη ρύθμιση του κόλου επιθηλιακά ανάπτυξη, χρησιμοποιήσαμε πρωτογενείς μυοϊνοβλάστες ποντικού για να αποδειχθεί ότι επάγεται παλμιτικό έκφραση αμφιρεγουλίνη και επιρεγουλίνη και επαυξημένης την αύξηση και στις δύο αυτές μεσολαβητών ανάπτυξη όταν προστίθενται σε IL-1βor να TNFα.

Συμπεράσματα

Οι μελέτες αυτές αποδεικνύουν ότι

Mttp-IKO

ποντίκια, παρά απορροφά σχεδόν καθόλου το διατροφικό λίπος, εμφανίζουν αυξημένο λιπαρών οξέων εξαρτώνται από τη σηματοδότηση που με τη σειρά επιδεινώνει τραυματισμό του εντέρου και αυξάνει το σχηματισμό όγκων

Παράθεση:. Xie Υ, Matsumoto Η, Nalbantoğlu Ι, Kerr ΤΑ, Luo J, Rubin DC, et al. (2013) Έντερο-Ειδικές Mttp διαγραφή Αυξάνει τη σοβαρότητα της Πειραματικής Κολίτιδα και οδηγεί σε μεγαλύτερη επιβάρυνση του όγκου σε ένα μοντέλο κολίτιδα σχετιζόμενη με τον καρκίνο. PLoS ONE 8 (6): e67819. doi: 10.1371 /journal.pone.0067819

Επιμέλεια: Josep Bassaganya-Riera, Virginia Tech, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 14 του Μαρτίου του 2013? Αποδεκτές: 22η Μαΐου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 21, Ιούνη 2013

Copyright: © 2013 Xie et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη χρηματοδότηση από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (τα HL 38180, DK-56260 και το Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον Πεπτικού Disease Research Πυρήνας Κέντρο DK-52574, ιδιαίτερα το μυϊκό και πυρήνες μορφολογία) σε NOD. DR υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις DK-46122 και DK-61216. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η συνεχιζόμενη επιδημία της παχυσαρκίας και των συναφών συνοσηρότητα της έχει στρέψει το ενδιαφέρον στην κατανόηση των μονοπατιών και των μεσολαβητών που εμπλέκονται, ιδίως σε σχέση με τη φλεγμονή και τον καρκίνο. Η παχυσαρκία και σχετιζόμενες μεταβολικές επιπλοκές της έχει αποδειχθεί ότι παίζουν ένα ρόλο σε έναν αριθμό καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων του ορθοκολικού καρκίνου (CRC) και, κατά συνέπεια, διαιτητική τροποποίηση και το βάρος του ελέγχου θεωρούνται ως βασικοί τροποποιήσιμων παραγόντων κινδύνου [1]. Ωστόσο, οι ακριβείς μηχανισμοί και τα μονοπάτια με τα οποία η παχυσαρκία συμβάλλει στην CRC κίνδυνος είναι ακόμα ανεπαρκώς κατανοητές και είναι πιθανό να περιλαμβάνουν μεταβολές στη συστηματική φλεγμονή και σηματοδότησης κυτοκινών, η αντίσταση στην ινσουλίνη καθώς και των τοπικών και συστηματικών επιδράσεων της διαταραγμένης πρόσληψης θρεπτικών συστατικών συμπεριλαμβανομένων των λιπαρών οξέων, χοληστερόλης και χολικών οξέων [2]. Λόγω της σημασίας του ως πηγή ενέργειας, διαιτητική πρόσληψη λίπους έχει ένα στόχο για την παρέμβαση ως μια στρατηγική για να μετριάσει τις επιπτώσεις της παχυσαρκίας και φλεγμονής στο CRC κινδύνου [3].

Εκτός από το ρόλο για την παχυσαρκία και πρόσληψη λίπους στη ρύθμιση της φλεγμονής και τον κίνδυνο CRC, εκεί αναδύεται πληροφορία που υποδηλώνει ότι το μικρό έντερο παίζει σημαντικό ρόλο ως μεσολαβητής στην φλεγμονώδη απόκριση σε συστημική σήψη [4], [5]. Σε αυτό το σενάριο, έχει προταθεί ότι το μικρό έντερο εκκρίνει προϊόντα λιπιδίων που προέρχονται από αυλού πέψη, τα οποία στη συνέχεια μεταφέρονται σε μεσεντερικούς λεμφαγγεία, όπου επάγουν ανεπάρκεια οργάνων σε απομακρυσμένες θέσεις [6], [7]. Άλλη εργασία έχει ενισχύσει αυτή την έντερο-λέμφου υπόθεση αποδεικνύοντας ότι η απολίνωση του μεσεντερικής αγωγού (εξαλείφοντας έτσι την παράδοση των χυλομικρών από το έντερο στη συστημική κυκλοφορία) καταργεί τις συστημικές επιδράσεις του σοκ, ευρήματα που δείχνουν τη σημασία της λιπιδικών μεσολαβητών που προκύπτουν από την έντερο στην παθογένεση της συστηματικής φλεγμονής [8], [9]. Άλλη εργασία έχει ενοχοποιηθεί λιποπρωτεΐνες ως οχήματα για τη μεταφορά αυξητικών παραγόντων και μορφογόνων, συμπεριλαμβανομένων Wnt3 θηλαστικών, γεγονός που υποδηλώνει μια πιο θεμελιώδη ρόλο για την μεταφορά λιπιδίων στη ρύθμιση της επιθηλιακής ανάπτυξης και του πολλαπλασιασμού [10].

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε εξέτασαν το ρόλο της εντερικής έκκρισης χυλομικρών, προκειμένου να κατανοήσουν το ρόλο της εντερικής μεταφορά λιπιδίων στην παθογένεια του παχέος φλεγμονής και κολίτιδα συνεργάτης του καρκίνου (CAC). Εμείς πρόσφατα έδειξαν ότι τα ποντίκια με όρους έντερο ειδικά διαγραφή μικροσωματική πρωτεΐνη μεταφοράς τριγλυκεριδίων (

Mttp-IKO

) αναπτύσσουν σχεδόν πλήρη μπλοκ της εντερικής απορρόφησης [11] και παρουσιάζουν ένα πλεονέκτημα επιβίωσης όταν προκλήθηκαν με

Pseudomonas aeruginosa

, η πιο κοινή αιτία της αρνητικής κατά gram πνευμονίας [12]. Οι διαπιστώσεις αυτές έθεσε την πιθανότητα ότι το κλείδωμα εντερική έκκριση χυλομικρών μπορεί επίσης να μετριάσει τις επιπτώσεις της επαγόμενης χημικών πειραματική κολίτιδα και με τη σειρά της να καταργήσει παχέος ανάπτυξης καρκίνου μετά από αζοξυμεθάνιο /δεξτράνη θειικού νατρίου πρόκληση (/DSS ΑΟΜ) [13]. Τα ευρήματά μας, ωστόσο, αποκάλυψε ότι

Mttp-IKO

ποντίκια ανέπτυξαν χειρότερο τραυματισμό του εντέρου και την αυξημένη επιβάρυνση του όγκου. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η σηματοδότηση αλλοιωμένη λιπαρών οξέων μπορεί να διαδραματίσει καίριο ρόλο στην προώθηση αυτών των φαινοτύπων.

Υλικά και Μέθοδοι

Ζώα

Mttp

Flox /Flox villin- Cre-ER

T2 (

Mttp-IKO

) ποντικούς (μαζί με τους ελέγχους της ίδιας γέννας) χρησιμοποιήθηκαν για αυτές τις μελέτες, σε ένα φόντο από -75% C57BL /6 και ~ 25% 129 /SVJ. έκφραση ανασυνδυάση Cre σε λάχνης επιθηλιακά κύτταρα προκλήθηκε από πέντε ημερήσιες ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις mg tamoxifen 1 (Sigma), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11]. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν σε ποντίκια που κατανάλωσαν ένα κανονικό χαμηλά λιπαρά τρωκτικά. Πειραματική κολίτιδα προκλήθηκε με χορήγηση 2,5% θειικό νάτριο δεξτράνης (DSS) (ΜΒ 40.000-50.000, Cat # 9011-18-1, Affymetrix, Inc., Cleveland, Ohio.), Για τους υποδεικνυόμενους χρόνους στις λεζάντες σχήμα και ζυγίζονται καθημερινά . CAC προκλήθηκε με ένεση ηλικίας 8 εβδομάδων ποντικιών με 10 mg /kg αζοξυμεθάνιο σωματικού βάρους (ΑΟΜ, Sigma) που ακολουθείται από τρεις κύκλους (5 ημέρες) από DSS που ξεκινούν από 5

ου (2%), 26

ου (2,5%) και 46

ου (2,5%) ημέρα μετά την ένεση ΑΟΜ, μικρές τροποποιήσεις του πρωτοκόλλου που χρησιμοποιείται από άλλους [14]. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν στις 9 εβδομάδες μετά την ένεση και ιστών ΑΟΜ συλλέγεται για ανάλυση. Όλες οι μελέτες σε ζώα εγκρίθηκαν από το ζώο Σπουδών Επιτροπές του Washington University School of Medicine (# 20100146) και διεξήχθησαν αυστηρά σύμφωνα με τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας κατευθυντήριων γραμμών για τη χρήση των πειραματόζωων.

αναλύει ιστομορφολογικά

δείγματα του λεπτού εντέρου και του παχέος εντέρου σταθεροποιήθηκαν και ενσωματωμένα για τεμαχισμό και αιματοξυλίνη και εοσίνη (Η &? Ε) χρώση. Όπου ενδείκνυται, εντερικές τομές βάφτηκαν για σταγονίδια λιπιδίων χρησιμοποιώντας τετροξείδιο οσμίου όπως περιγράφεται [12] Η ιστολογική βαθμολόγηση των DSS τραυματισμού αναλήφθηκε και ποσοτικά με τη χρήση των παραμέτρων που περιγράφηκαν [15]. Εντερική πολλαπλασιασμός εξετάστηκε σε ποντικούς που ενέθηκαν με 5-βρωμο-2’δεοξυουριδίνη (BrdU) (200 μΙ όγκο, 5 mg /ml αραιωμένο σε φυσιολογικό ορό? Sigma), 2 ώρες πριν από την θυσία. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για χρώση BrdU όπως περιγράφεται [12]. Ανάλυση της επιβάρυνσης του όγκου του παχέος εντέρου πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας δείγματα σταθεροποιούνται σε 10% φορμαλίνη (Sigma) και καρφώθηκε για τη βαθμολόγηση από έναν ερευνητή τύφλωσε με γονότυπο. Κάθε δείγμα φωτογραφήθηκε χρησιμοποιώντας ένα τεμαχίζοντας μικροσκόπιο Nikon SMZ800 και μια φωτογραφική μηχανή Photometrics CooLSNAPcf (Imaging Υπηρεσίες επεξεργασίας). Το εμβαδόν κάθε τμήματος προσδιορίσθηκε και το μέγεθος των όγκων ποσοστώθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό Metavue (Molecular Devices). H & amp?. Τμήματα Ε επίσης αναθεωρηθεί από έναν παθολόγο (IN), τυφλωμένοι με γονότυπο

Εντερική διαπερατότητα και προσδιορισμούς κυτοκινών

Εντερική διαπερατότητα προσδιορίστηκε μετά την ένεση του FITC επισημασμένου δεξτράνης (FD-4, ΜΒ 4000, Sigma). Έλεγχος και

Mttp-ΙΚΟ

ποντικοί καθετηριάστηκαν με FD-4 (400 mg /kg σωματικού βάρους), πριν και 7 ημέρες μετά από 2,5% DSS θεραπεία και οροί συλλέχθηκαν 4 ώρα αργότερα. Ορός FITC μετρήθηκε σε ένα φθορόμετρο (Synergy ΗΤ, ​​BioTek®) στους 485/20 διέγερση, 528/20 εκπομπών. Για LPS προσδιορισμούς, οι οροί αραιώθηκαν 1:10 και θερμάνθηκε στους 70 ° C για 15 λεπτά για να ανενεργό αναστολέων. LPS συνέχεια μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το LAL χρωμογόνου κιτ ενδοτοξίνη ποσοτικοποίηση σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (ThermoScientific, Rockford, IL). Ορός TNFa και IL-1β μετρήθηκαν με ELISA χρησιμοποιώντας κιτ που αγοράζονται από την BD Biosciences (San Jose, CA) ή R &?. Συστήματα D (Minneapolis, ΜΝ) σύμφωνα με τις οδηγίες των κατασκευαστών

σε πραγματικό χρόνο αλυσιδωτής αντίδρασης ποσοτικής πολυμεράσης

Ολικό RNA απομονώθηκε από εντερικούς ιστούς χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ είτε υπό τυπικά πρωτόκολλα ή για δείγματα που έλαβαν θεραπεία με DSS, χρησιμοποιώντας την τροποποίηση που περιγράφεται από τους Kerr και συνεργάτες [16]. Τα RNA ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ζεύγη εκκινητών (αλληλουχίες διαθέσιμο κατόπιν αιτήσεως) σχεδιάστηκε από Primer Express λογισμικό (Applied Biosystems). Σχετική αφθονία mRNA εκφράζεται σε σχέση με τους ποντικούς ελέγχου χωρίς θεραπεία DSS, κανονικοποιημένη για GAPDH.

Παχέος λιπιδίων περιεχόμενο, κοπράνων περιεχόμενο λιπιδίων και η έκφραση πρωτεΐνης

Τα ολικά λιπίδια εκχυλίστηκαν από κόπρανα καθώς και από το εγγύτερο του παχέος εντέρου, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11]. Τριγλυκερίδια (TG), της ολικής χοληστερόλης (TC) και ελεύθερα λιπαρά οξέα (FFA) μετρήθηκαν ενζυματικά με τη χρήση Wako κιτ (Wako Chemicals, Richmond, VA). Κηλίδωση Western διεξήχθη στο πρότυπο αντισώματα μόδας χρήση των οποίων η πηγή υποδεικνύεται στο σχετικό σχήμα μύθο. Για κολονικής δείγματα περιεχόμενο TNFa και IL-1β από κατιόντος κόλου ομογενοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό που περιέχει 20 mM Tris (ρΗ 7.4), 1 mM ορθοβαναδικό νάτριο, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton, φθοριούχο 50 mM νάτριο, 50 mM β-γλυκεροφωσφορικό και 1 χ Complete mini κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης (Roche, Mannhein, Germany). Τα επίπεδα του TNFa και IL-1β μετρήθηκαν σε υπερκείμενα αποσαφηνιστεί χρησιμοποιώντας τα κιτ ELISA που περιγράφεται παραπάνω και ομαλοποιήθηκε ως προς συγκέντρωση πρωτεΐνης.

Πρωτογενής εντερική μυοϊνοβλάστες ποντικού

μυοϊνοβλάστες απομονώθηκαν από ποντίκια C57BL /6 φυσικού τύπου όπως περιγράφεται [ ,,,0],17] και 1 × 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο εμβολιάστηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων και καλλιεργήθηκαν όλη τη νύκτα. Ο φαινότυπος αυτών των κυττάρων επιβεβαιώθηκε με θετική χρώση για λείου μυός ακτίνη και βιμεντίνη και αρνητική χρώση για δεσμίνη και κυτοκερατίνη [13], [17]. Αυτά μυοϊνοβλάστες κύτταρα στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν για 12 ώρες σε ϋΜΕΜ που περιείχε 0,25% FBA και 0,6% λιπαρό οξύ αλβουμίνη ελεύθερη βόειου ορού (BSA, A8806, Sigma), συμπληρώθηκαν είτε με ρυθμιστικό μόνο (BSA, Control), 200 μΜ παλμιτική-BSA (PAL ), TNFa στα 100 ng /ml (TNFa) (R &? D), IL-1β στα 10 ng /ml (IL-1β) (R &? D) ή συνδυασμοί 200 μΜ παλμιτική-BSA συν ΤΝΡα 100 ng /ml (TNFα + PAL) ή 200 μΜ παλμιτικό-BSA και IL-1β 10 ng /ml (IL-1β + PAL), όπως αναφέρεται στο μύθο. Αυτές οι μελέτες πραγματοποιήθηκαν σε όλα μυοϊνοβλάστες στο πέρασμα 6-8. παλμιτικό νάτριο συζεύχθηκε με BSA χωρίς λιπαρά οξέα σε αναλογία 2:01 (Παλμιτική: BSA), για να κάνει μια 3 mM διαλύματος παλμιτικής-BSA. Ολικό RNA εξήχθη από μεμονωμένα δείγματα και mRNAs ποσοτικά όπως περιγράφεται παραπάνω.

Στατιστική Ανάλυση

Πολλαπλές συγκρίσεις ομάδα συνεχών συνόλων δεδομένων πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση μονόδρομης ανάλυσης της διακύμανσης ακολουθούμενη από post-hoc t -test χρησιμοποιώντας Prism 4.0 (GraphPad Software, San Diego, CA) και το Microsoft Excel. Τα δεδομένα αναφέρονται ως μέσο ± SEM. μελέτες επιβίωσης αναλύθηκαν μέσω του τεστ log-rank. Μια τιμή p & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Η αυξημένη σοβαρότητα των DSS κολίτιδας σε Mttp-IKO ποντίκια

Σας χορηγείται 2,5% DSS στο πόσιμο νερό. για 12 ημέρες, προκειμένου να αξιολογηθεί η επίπτωση στη συνολική επιβίωση ανάλογα με το γονότυπο. Τα ευρήματά μας αποκάλυψε ότι

Mttp-IKO

ποντίκια παρουσιάζουν επιταχυνόμενη θανάτου και σημαντικά μειωμένη επιβίωση (1/10) σε σύγκριση με τα ποντίκια ελέγχου (9/11) Σχήμα 1Α. Η επαυξημένη φαινότυπος των τραυματισμών στο

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια συσχετίστηκε με μεγαλύτερη απώλεια βάρους σε μικρότερες (7 ημέρες) πειράματα (Σχήμα 1 C) και μια καθυστερημένη επιστροφή στη βασική γραμμή βάρους (Εικόνα 1Β), μαζί με μειωμένο μήκος του παχέος εντέρου ( Σχήμα 1 D, Ε). Υπήρχε επίσης πιο σοβαρή ιστολογική ζημία, όπως αποδεικνύεται από την αυξημένη φλεγμονή lamina propria και κρύπτη drop-out στο κατιόν κόλον σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια σε αμφότερες τις 5 ημέρες (Σχήμα 2Α, Β, Ε) και στις 7 ημέρες (Σχήμα 2C, D, E) και μείωσε τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, όπως αποδεικνύεται από μειωμένη ενσωμάτωσης BrdU (σχήμα 2 F).

A. Μειωμένη επιβίωση του

Mttp-IKO

(n = 10) έναντι των ελέγχων της ίδιας γέννας (n = 12). 8-10 εβδομάδες τα ποντίκια τρέφονται 2,5% DSS στο πόσιμο νερό για 12 ημέρες και ακολούθησε μέχρι 25 ημέρες. ** P & lt? 0,01. καμπύλη ανάκαμψη Β Βάρος μετά από ένα κύκλο των DSS. Οι ποντικοί (η = 4 ποντικοί ανά ομάδα) τροφοδοτήθηκαν 2,5% DSS για 7 ημέρες και ζυγίζονται κάθε 1-3 ημέρες μέχρι και 25 ημέρες μετά την 1

ης ημέρας της θεραπείας DSS. * P & lt? 0,05. απώλεια βάρους Γ μετά τη θεραπεία 7 ημερών DSS, n = 10-12 ποντίκια ανά γονότυπο. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM% του αρχικού βάρους. * P & lt? 0,05, ** p & lt? 0.01 Δ Εκπρόσωπος εικόνες του ακαθάριστου εμφάνιση του παχέος εντέρου από τον έλεγχο και

Mttp IKO

ποντίκια μετά από 7 ημέρες DSS θεραπείας. Ε μήκος Colon σε 0, 5 και 7 ημέρες σε 2,5% DSS. Τα δεδομένα είναι μέσος όρος ± SE από 4-9 ποντίκια ανά ομάδα * p & lt?.. 0.05

Η

Α. και Β Εκπρόσωπος ιστολογικές εικόνες συγκρίσιμες περιοχές της άπω κόλον από τον έλεγχο (Α) και

Mttp-IKO

ποντίκια (Β) μετά από 5 ημέρες θεραπείας DSS. Πίνακες Α και Β δείχνουν αυξημένη βλεννογόνου τραυματισμό στο

Mttp-IKO

ποντίκια που χαρακτηρίζεται από αυξημένη φλεγμονή υμένος επέκταση στον υποβλεννογόνιο με απώλεια κρύπτες. Γ και Δ Εκπρόσωπος ιστολογική εικόνες συγκρίσιμες περιοχές της φθίνουσα παχέος εντέρου από τον έλεγχο (Γ) και

Mttp-IKO

ποντίκια (Δ) μετά από 7 ημέρες DSS θεραπείας. Πίνακες Γ και Δ δείχνουν αύξηση της φλεγμονής υμένος, εστιακή cryptitis χαρακτηρίζεται από ουδετεροφιλική διήθηση και εστιακό κρύπτη εγκατάλειψης στο

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια. Μπάρες δείχνουν 100 μm. Ε ποσοτική εκτίμηση της ιστολογικής βλάβης (η = 5-7 ποντικοί ανά ομάδα). ΣΤ BrdU θετικά κρύπτη κυττάρων στο βλεννογόνο του ορθού. Τα δεδομένα ήταν η μέση τιμή ± SEM από η = 5-6 ποντικούς ανά ομάδα. * P & lt?. 0.05

Η

χορήγηση DSS δεν επάγει μακροσκοπικές μικρή εντερική βλάβη σε ποντίκια Mttp-IKO και δεν σχετίζεται με την παχέος λιπιδίων συσσώρευση

προηγούμενες μελέτες μας απέδειξαν ότι η αναστολή της έκκρισης χυλομικρών από το έντερο του

Mttp-IKO

ποντίκια οδηγεί σε μαζική λιπιδίων διόγκωση με παραμόρφωση λάχνης [11], αυξάνοντας την πιθανότητα ότι η υψηλή θνησιμότητα που ανέκυψαν μετά από DSS διοίκηση μπορεί να αντανακλά ακαθάριστο βλάβες στο λεπτό έντερο των ποντικών αυτών. Ωστόσο, αυτό δεν ήταν η περίπτωση. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3 AD, παρατηρήσαμε την αναμενόμενη συσσώρευση λιπιδίων σε μικρές εντερικών λαχνών σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς, αλλά δεν υπήρχε μεικτό ή ιστολογική ένδειξη εξέλκωσης σε οποιαδήποτε περιοχή του λεπτού εντέρου εξής 7 ημέρες DSS θεραπεία. Επιπλέον, δεδομένου ότι Mttp εκφράζεται στο κόλον ποντικών (αν και σε χαμηλά επίπεδα [18], [19]) διερευνήσαμε την πιθανότητα η συσσώρευση του παχέος λιπιδίων θα μπορούσε να συμβάλει στην φαινότυπο που παρατηρείται σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια . Ωστόσο, αυτό πάλι δεν ήταν η περίπτωση. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Ε-H, ενώ εντοπίσαμε συσσώρευση λιπιδίων άφθονη σταγονιδίων στο λεπτό έντερο του

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια (όπως σημειώθηκε προηγουμένως [11]) υπήρχαν μόνο σπάνια, διάσπαρτα όσμιο σταγονίδια λιπιδίων χρώση φαίνεται στο το παχύ έντερο του

Mttp-IKO

ποντίκια και δεν υπήρχε συσσώρευση τριγλυκεριδίων, χοληστερόλης ή των ελεύθερων λιπαρών οξέων στο βλεννογόνο του παχέος εντέρου, όπως ανιχνεύσιμο με ενζυματική δοκιμασία (Σχήμα 3θ).

AD. Αντιπροσωπευτικά Η &? Ε χρώση του λεπτού εντέρου από Ελέγχου και

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς είτε χωρίς επεξεργασία DSS (Α Control-0 και Β-Mttp IKO-0) ή μετά από 7 ημέρες DSS θεραπεία (C. Έλεγχος -7 και Δ Mttp-IKO-7). Λεπτό έντερο από

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια (Β και D) δείχνει την συσσώρευση λάχνης λιπίδιο (κενοτοπικής δομή στην Η &? Χρώση Ε), αλλά καμία σημαντική βλάβη ή φλεγμονή μετά από 7 ημέρες DSS θεραπείας (D vs Β). E-H. Αντιπροσωπευτικά χρώση Όσμιο τετραοξείδιο του σταγονίδια λιπιδίων στο λεπτό έντερο (Ε και F) και Colon (G και Η) χωρίς θεραπεία DSS. Λιπιδίων σταγονίδια εμφανίζονται ως καφέ εικόνων (βέλη). Σημειώστε τα σταγονίδια πλούσια λιπιδίων στο

Mttp-IKO

λεπτού εντέρου εντεροκύτταρα (F), σε αντίθεση με μόνο διάσπαρτα σταγονίδια λιπιδίων στο

Mttp-IKO

επιθηλιακά κύτταρα του κόλου (H). I. Παχέος λιπίδια εξήχθησαν από τον έλεγχο και

Mttp-IKO

ποντίκια χωρίς είδη θεραπείας DSS και των λιπιδίων (TG, TC και FFA) μετρήθηκαν. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM 4-5 ποντικών ανά ομάδα.

Η

Η αυξημένη εντερική διαπερατότητα σε ποντίκια Mttp-IKO και ο ρόλος της προσαρμοστικής αντίδρασης στο στρες

Ενώ η ανωτέρω διαπιστώσεις υποδηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ακαθάριστα μεταβολές στην ακεραιότητα λαχνών στο

Mttp-IKO

ποντίκια, εμείς διερευνηθεί η δυνατότητα που πιο λεπτές αλλαγές μπορεί να σχετίζονται με δυσλειτουργία του φράγματος. Για την αντιμετώπιση αυτής της δυνατότητας, χορηγήσαμε FITC επισημασμένο δεξτράνης με καθετηριασμό σε ποντικούς και των δύο γονότυπων, είτε πριν είτε μετά από 7 ημέρες χορήγησης DSS. Τα ευρήματά μας αποκάλυψαν ότι τα επίπεδα FITC ορού ήταν σημαντικά υψηλότερα σε

Mttp-IKO

ποντίκια κάτω από δύο προϋποθέσεις (Εικόνα 4Α). Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι υπάρχει μεταβολή της λειτουργίας του φραγμού κατά την έναρξη σε

Mttp-IKO

ποντίκια που γίνεται περαιτέρω απομείωση κατά τον καθορισμό των DSS τραυματισμού. Εμείς επόμενη εξέτασε την πιθανότητα ότι η αυξημένη εντερική διαπερατότητα φαινότυπο σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια μπορούσαν εν μέρει να αντανακλά αλλαγές στην έκφραση του ακέραιες πρωτεΐνες μεμβράνης που εμπλέκονται σε στενές συντήρηση διασταύρωση και των οποίων η αλλαγμένη έκφραση έχει συνδεθεί με ανωμαλίες στο ανθρώπινο φλεγμονώδης νόσος του εντέρου [20], [21]. Βρήκαμε ότι η έκφραση του HNF4α, ΖΟ-1 και Lamb1 μειώθηκε στη βασική γραμμή στο λεπτό έντερο του

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια και μειώθηκε εξής DSS θεραπεία, ιδιαίτερα σε ποντικούς ελέγχου (Σχήμα 4Β). Υπήρξε μια αντίστοιχη μείωση στην ΖΩ-1 έκφραση του παχέος εντέρου μετά από θεραπεία DSS με παρόμοιες απαντήσεις σε έλεγχο και

Mttp-IKO

ποντίκια (Σχήμα 4C).

Α.

Mttp-IKO

και τον έλεγχο ποντίκια είτε πριν Σ.Α.Τ. ή 7 ημέρες μετά τη θεραπεία DSS χορηγήθηκαν από το στόμα επίπεδα FITC-δεξτράνη και ορό μετρήθηκαν 4 ώρες αργότερα. Τα δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SEM από 7-8 ποντικών ανά ομάδα * Ρ & lt?. 0.05. Β και C. mRNA έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με το στρες ER και επιθηλιακών functioin φράγμα στο λεπτό έντερο και κόλον. έκφραση mRNA μετρήθηκε με QPCR και εκφράζεται ως φορές μεταβολής σε σύγκριση με μη-DSS αγωγή ποντικούς ελέγχου μετά κανονικοποιήθηκαν προς εσωτερικού ελέγχου GAPDH. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως η μέση τιμή ± SEM 4-5 ποντικών ανά ομάδα. Δ Η επίδραση της TUDCA στο ποσοστό επιβίωσης Ελέγχου και

Mttp-IKO

ποντίκια στο ΣΑΤ. 8-10 εβδομάδων ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με TUDCA ή αλατόνερο ενδοπεριτοναϊκά κατά την διάρκεια ταυτόχρονης χορήγησης του DSS (2,5%) σε πόσιμο νερό για 12 ημέρες. n = 5-9 κάθε ομάδα. * P & lt?. 0.05

Η

Θα εξεταστούν επίσης οι παράμετροι της εκτυλίχθηκε απόκρισης πρωτεΐνης (UPR) και ολοκληρωμένη μονοπάτια αντίδραση στο στρες στο λεπτό έντερο και του παχέος εντέρου και των δύο γονότυπων και τις επιπτώσεις της έκθεσης DSS. Τα εν λόγω ευρήματα έδειξαν αυξημένη βασική έκφραση της Grp78 και Τσοπ στο λεπτό έντερο του

Mttp-IKO

ποντίκια (Εικόνα 4Β), όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [22]. Ωστόσο, η θεραπεία DSS απέτυχε να παράγει μια περαιτέρω αύξηση σε οποιοδήποτε από αυτούς τους δείκτες στρες, αλλά μάλλον έτεινε να μειώσει την έκφραση του Grp78 και Κόβουμε στο λεπτό έντερο του

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια (Σχήμα 4Β). Αντίθετα, δεν υπήρξαν αλλαγές στη βασική γραμμή UPR mRNAs στο κόλον του

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια, αλλά η θεραπεία DSS οδήγησε σε αυξημένη αφθονία του Xbp-1s στα δύο γονότυπους (Σχήμα 4C). Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι δεν υπάρχει βασική UPR απάντηση στο παχύ έντερο του

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια. Για να εξεταστεί η πιθανότητα ότι μια προσαρμοστική απόκριση ER στρες θα μπορούσαν να επηρεάσουν τον φαινότυπο που παρατηρείται σε τραυματισμό

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια, υποβάλλαμε σε αγωγή ποντικούς με τη χημική συνοδό ταυροουρσοδεοξυχολικό οξύ (TUDCA) αφού προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η στρατηγική αυτή εξασθενεί το UPR σε μεταβολικές συνθήκες στρες σε ποντικούς [22], [23]. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι η θεραπεία TUDCA απέτυχε να σώσει το σοβαρό φαινότυπο του DSS αντιμετωπίζονται

Mttp-IKO

ποντίκια και αν μη τι άλλο οδήγησε σε επιτάχυνση του θανάτου σε αυτά τα ζώα (Σχήμα 4D). Αυτά τα ευρήματα μαζί μας οδηγούν στο συμπέρασμα ότι τα χαρακτηριστικά της ER στρες και το UPR σημειώνεται στο λεπτό έντερο του

Mttp-IKO

ποντίκια είναι προσαρμοστική στη φύση και ότι η κατάργηση αυτής της απάντησης οδηγεί σε χειρότερα τραυματισμών.

Ενισχυμένη κολονική φλεγμονή σε Mttp-ΙΚΟ ποντίκια σε απόκριση προς τις DSS τραυματισμό

Παρατηρήσαμε την αναμενόμενη αύξηση στην έκφραση διαφόρων κυτοκινών mRNAs στο κόλον του DSS αγωγή ποντικούς, περιλαμβανομένων των IL-1β, IL-17Α και NLRP3, με συγκρίσιμα επαγωγή στις δύο γονότυπους (Σχήμα 5Α). Ωστόσο παρατηρήσαμε μια μεγαλύτερη αύξηση στην έκφραση του TNFa στο κόλον του DSS θεραπεία

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Σχήμα 5Α). Εξετάσαμε επίσης τα επίπεδα στον ορό του LPS, IL-1β και TNFa, οι οποίες έχουν προηγουμένως συνδέεται με εντερική βλάβη σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DSS [14], [24]. Οι διαπιστώσεις αυτές αποκάλυψαν ότι τα επίπεδα του TNFa στον ορό ήταν αυξημένα με συνέπεια σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς, τόσο κατά την έναρξη και μετά από DSS θεραπεία, ενώ τα επίπεδα του LPS και IL-1β στον ορό ήταν περισσότερο μεταβλητή (Σχήμα 5Β-D).

Α. mRNA έκφραση των γονιδίων που σχετίζονται με τη φλεγμονή κατά φθίνουσα παχέος εντέρου ελέγχου και

Mttp-IKO

ποντίκια πριν και μετά από 7 ημέρες DSS θεραπείας. mRNA μετρήθηκε με QPCR και εκφράζονται ως φορές αλλαγές σε σύγκριση με μη-DSS-αγωγή ποντικούς ελέγχου μετά κανονικοποιήθηκαν προς GAPDH. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως η μέση τιμή ± SEM από 5-9 ποντικών ανά ομάδα. * P & lt? 0,05. B.-D. κυτοκινών του ορού σε έλεγχο και

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια. Το αίμα συλλέχθηκε από τον έλεγχο και την

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς πριν ή 7 ημέρες μετά την αγωγή DSS. Ορός LPS (Β), IL-1β (C) και τα επίπεδα (D) ΤΝΡα μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στις Μεθόδους. Τα δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SEM 8-10 ποντικών ανά ομάδα. * P & lt?. 0.05

Η

Παχέος τραυματισμό και φλεγμονή σχετίζεται με αυξημένη ευαισθησία σε CAC σε ποντίκια Mttp-IKO

Ένα σημαντικό σώμα της στοιχεία δείχνουν ότι η φλεγμονή είναι μια σημαντική κινητήρια δύναμη της ογκογένεσης και το έργο προτείνει μια αιτιώδη σύνδεσμο με τη μεσολάβηση μέσω οδών που περιλαμβάνουν φλεγμονώδη σηματοδότηση κυτοκίνης [25], [26]. Δεδομένης της τάσης του

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς να εμφανίζουν μία πιο σοβαρό φαινότυπο σε απόκριση προς τις DSS μεσολάβηση τραυματισμό, αναρωτηθήκαμε εάν αυτή η αυξημένη κολονική φλεγμονή που σχετίζεται με μια αλλαγμένη του κόλου καρκινικό φορτίο μετά από χορήγηση αζοξυμεθάνιο που ακολουθείται από τρεις κύκλους του DSS (Σχήμα 6Α). Τα ευρήματα αποκαλύπτουν μεγαλύτερη πολλαπλότητα των όγκων (Εικόνα 6Β) και τη συνολική επιβάρυνση του όγκου (Σχήμα 6C, D) (επαληθεύεται από παθολογική εξέταση από έναν παθολόγο τύφλωσε να γονότυπος) στο

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια σε συνδυασμό με την αύξηση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, όπως αποδεικνύεται από BrdU ενσωμάτωση (Σχήμα 6Ε, F).

Α. Άνω πίνακα: Σχηματική επισκόπηση του πρωτοκόλλου ΑΟΜ /DSS (λεπτομέρεια στο Μέθοδοι). Οι ποντικοί θυσιάστηκαν 12 ημέρες μετά τον τελευταίο κύκλο της DSS. n = 13-15 ποντίκια σε κάθε ομάδα. Κάτω πίνακας: αλλαγή βάρους τοις εκατό κατά τη διάρκεια της θεραπείας ΑΟΜ-DSS. Β Εκπρόσωπος του παχέος φωτογραφίες. C. Αριθμός ορθοκολικών όγκων ανά ποντικό που προκαλείται από θεραπεία ΑΟΜ-DSS. Δ όγκων επιβάρυνση ΑΟΜ-DSS θεραπεία ελέγχου και

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια. Τα δεδομένα από πίνακες D. εκφράζονται ως μέσο ± SEM περιοχής όγκου ρυθμίζεται σύμφωνα με την συνολική έκταση του κόλου, η = 9-10 ποντικοί σε κάθε ομάδα. Ε και ΣΤ αυξημένο πολλαπλασιασμό των πολυπόδων με χρώση BrdU. (Ε) είναι μια αντιπροσωπευτική φωτογραφία, άνω πάνελ είναι ένας πολύποδας ελέγχου, κάτω πάνελ είναι από ένα

Mttp-ΙΚΟ

πολύποδα. (F) είναι το ραβδόγραμμα της μέσης ± SEM (η = 5-6 ποντικοί ανά ομάδα). * P & lt?. 0.05

Η

Φλεγμονώδεις σήματα σε συνδυασμό με σηματοδότηση αλλαγμένη λιπαρό οξύ μονάδα αύξησης της έκκρισης μεσολαβητής σε ποντίκια Mttp-IKO

Για να κατανοήσουμε σε βάθος τους μηχανισμούς που διέπουν την πολλαπλασιαστική φαινότυπο παρατηρήθηκαν στο κόλον του

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς σε απόκριση προς ΑΟΜ /DSS, εξετάσαμε και πάλι τα πρότυπα έκφρασης της IL-1β και TNFa. Παρατηρήσαμε αυξημένη mRNA αφθονία της IL-1β σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια (Σχήμα 7Α) και μια τάση στην αυξημένη IL-1β έκφραση της πρωτεΐνης (Σχήμα 7Β). Η έκφραση του TNFa mRNA ήταν συγκρίσιμη με τον γονότυπο, αλλά παρατηρήσαμε μια σημαντική αύξηση στα επίπεδα της πρωτεΐνης ΤΝΡα σε κολικό ιστό από

Mttp-ΙΚΟ

ποντίκια (Σχήμα 7Β). Τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν πάλι την υπόθεση ότι μια αλλοιωμένη φλεγμονώδης απόκριση πιθανόν συμβάλλει στην αύξηση της επιβάρυνσης του όγκου παρατηρήθηκε σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς.

A. Altered mRNA έκφραση των γονιδίων που σχετίζονται με την φλεγμονή και την ανάπτυξη. Η γονιδιακή έκφραση σε ΑΟΜ /DSS επεξεργασμένο κατιόν κόλον μετρήθηκε με QPCR και εκφράζεται ως φορές μεταβολής σε σχέση με τα ποντίκια ελέγχου μετά από κανονικοποίηση προς GAPDH. Τα δεδομένα είναι μέσες ± SEM (n = 4 σε κάθε ομάδα). * P & lt? 0,05. B. Περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες της IL-1β και TNFα σε ομογενοποιημένα της φθίνουσα παχέος εντέρου από ΑΟΜ /DSS επεξεργασμένο έλεγχο και

Mttp-IKO

ποντίκια μετρήθηκε με ELISA. Τα δεδομένα είναι μέσες ± SEM (n = 4 σε κάθε ομάδα). * P & lt? 0,05. Γ ανάλυση Western blot των αμφιρεγουλίνη (Areg), (1:1000 αραίωση του πρωτογενούς αντισώματος από Thermo Fisher Scientific, Cat # RB-258)? Akt (1:1000 πρωτογενούς αντισώματος από τη Cell Signaling, Cat # 9272)? ρ-Akt (1:1000 πρωτογενούς αντισώματος από τη Cell Signaling, Cat # 9271) σε ομογενοποιήματα των δειγμάτων παρασκευάστηκε (Μέθοδοι) από ιστούς σημειώνεται παραπάνω στο Β Δ κηλίδα Western ποσοτικοποιήθηκε με σταθμό εικόνας Kodak 440 και λογισμικό Carestream ΜΙ SE. γράφημα Bar αντικατοπτρίζει τη μέση τιμή ± SEM από σχετική έκφραση σε σύγκριση με τον έλεγχο μετά από κανονικοποίηση προς GAPDH. Ε κοπράνων λιπιδίων ειδών σε chow-τρέφονται ελέγχου και

Mttp-IK

ποντίκια O. Σύνολο κοπράνων λιπίδια εκχυλίστηκαν και χοληστερόλη (Chol), τριγλυκερίδια (TG), φωσφολιπίδια (PL), και ελεύθερα λιπαρά οξέα (FFA) ποσοτικοποιείται ενζυματικά. Λιπιδίων περιεχόμενο παρουσιάζεται ως μg /g κοπράνων και το περιεχόμενο FFA παρουσιάζεται επίσης ως μmol /g κοπράνων (ένθετο). Τα δεδομένα είναι μέσες ± SEM (η = 4-5 ανά ομάδα) ** ρ & lt? 0,01. ΣΤ mRNA αφθονία Areg και ereg στην πρωτοβάθμια εντερική μυοϊνοβλάστες μετά την αναφερόμενη διέγερση. Μυοϊνοβλάστες διεγέρθηκαν με υποδεικνυόμενη παράγοντες επί 12 ώρες. Gene (mRNA) έκφραση μετρήθηκε με QPCR και εκφράζεται ως φορές μεταβολής σε σχέση με τα κύτταρα ελέγχου μετά από κανονικοποίηση προς GAPDH. Τα πειράματα διεξήχθησαν δύο φορές με τριπλότυπα για κάθε πείραμα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. Η διαφορά μεταξύ των τιμών ανά ομάδα υποδεικνύεται από ένα διαφορετικό γράμμα για να υποδείξει στατιστική σημασία (ρ & lt? 0,05 ή μεγαλύτερο). ανάλυση κηλίδος Γ Western της πρωτεϊνικής έκφρασης Areg στον εντερικό βλεννογόνο ομογενοποιημένων από τον έλεγχο και

Mttp-IKO

ποντίκια στη δυτική διατροφή για 2 εβδομάδες.

Η

Για να διερευνήσουν τους μηχανισμούς στο παιχνίδι σε αυτό το απάντηση, αναλάβαμε την εξέταση των πιθανών μεσολαβητών της φιλο-πολλαπλασιαστικές φαινότυπο. Μεταγραφή προφίλ δεν αποκάλυψε σημαντικές αλλαγές στην έκφραση του mRNA του αρκετές υποψήφιες μεσολαβητών (Σχήμα 7Α), αλλά υπήρχε μια τάση προς αυξημένη έκφραση της πρωτεΐνης αμφιρεγουλίνη και αύξηση του φωσφο-Ακί αφθονία (Σχήμα 7C, D). Αυτά τα ευρήματα μας πρότεινε ότι η έκκριση μεσολαβητών από εντερικό μυοϊνοβλάστες θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα ρόλο στην διαμόρφωση της ανάπτυξης μέσω οδών παρακρινούς. Προς υποστήριξη αυτής της δυνατότητας δεν υπάρχει δουλειά που δείχνει ένα ρόλο για την παραγωγή στρωματικά μυοϊνοβλάστη της αμφιρεγουλίνη και επιρεγουλίνη στην προώθηση της ανάπτυξης των όγκων του παχέος εντέρου στη ρύθμιση της φλεγμονή του παχέος εντέρου του ανθρώπου [27]. Η προσέγγισή μας καθοδηγήθηκε από προηγούμενα ευρήματα καταδεικνύουν ότι οι μικρές εντερικά επιθηλιακά κύτταρα από το

Mttp-IKO

ποντίκια υποβάλλονται lipotoxic τραυματισμό ακόλουθες βραχυπρόθεσμες υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά διατροφή των [22]. Με βάση αυτές τις παρατηρήσεις, έχουμε την υποψία ότι η βιώσιμη ανάπτυξη προωθώντας επιπτώσεις της εντερικής

Mttp

διαγραφή είχαν ενδεχομένως διαμεσολαβείται από μυοϊνοβλάστες.

Για να διερευνήσουν τη δυνατότητα αυτή με περισσότερες λεπτομέρειες, στραφήκαμε σε πρωτογενή ποντικού εντερική μυοϊνοβλάστες προκειμένου να εξετάσει την αμφιρεγουλίνη και ρύθμιση επιρεγουλίνη. Αρχικά διαπιστώθηκε ότι κοπράνων λιπιδικό περιεχόμενο αυξήθηκε ως αποτέλεσμα της κακής απορρόφησης λίπους σε

Mttp-ΙΚΟ

ποντικούς, όπως αποδεικνύεται προηγουμένως [11]. Συγκεκριμένα, διαπιστώθηκε αυξημένη κοπράνων ελεύθερα λιπαρά οξέα (FFA) αφθονίας, καθώς και αυξημένη περιεκτικότητα της χοληστερόλης και φωσφολιπιδίων στο

Mttp-IKO

ποντίκια (Σχήμα 7Ε). Προσδιορίσαμε ότι η συγκέντρωση κοπράνων FFA σε ποντίκια ελέγχου (-60 μmol /g) ήταν παρόμοια με αυτή που αναφέρθηκε πρόσφατα [28]. Εστιάσαμε την προσοχή μας στα άφθονα κορεσμένα λιπαρά οξέα, επιλέγοντας το παλμιτικό οξύ ως αρχικό στόχο για να εξετάσει τη ρύθμιση των δύο αμφιρεγουλίνη και επιρεγουλίνη [29]. Τα ευρήματά μας καταδεικνύουν εντυπωσιακή ανοδική ρύθμιση των αμφιρεγουλίνη και επιρεγουλίνη mRNA σε πρωτογενή εντερική μυοϊνοβλάστες ποντικού από 200 μΜ παλμιτικό (Σχήμα 7Ε). Επιπλέον, η γνωστή πρόκληση αμφιρεγουλίνη και επιρεγουλίνη από TNFa και IL-1β [30] ενισχύθηκε περαιτέρω με την συμπερίληψη του παλμιτικού (Σχήμα 7Ε). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι τα λιπαρά οξέα παίζουν ένα ρόλο στην τροποποίηση αποκρίσεις ανάπτυξης σε συνδυασμό με άλλες γνωστές μεσολαβητές. Σύμφωνα με την πρόταση αυτή δείξαμε αυξημένη λεπτού εντέρου έκφραση της έκφρασης αμφιρεγουλίνη στο

Mttp-IKO

ποντίκια μετά από έκθεση σε υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά δυτική διατροφή (Σχήμα 7F, G). Στο σύνολό τους, τα ευρήματα υποδεικνύουν έντονα ότι η αυξημένη διαθεσιμότητα του παχέος λιπαρό οξύ, που παράγεται από ελαττωματικά μικρό συγκρότημα εντερική χυλομικρών και την επακόλουθη μπλοκ στην κανονική απορρόφηση των λιπιδίων, επιδεινώνει φλεγμονώδεις και άλλες προσαρμοστικές οδοί που αυξάνουν παχέος πολλαπλασιασμό.

Συζήτηση