Αφηρημένο

Ο υποδοχέας ανδρογόνων (AR) εκφράζεται σε ένα υποσύνολο των στρωματικών κυττάρων του προστάτη και λειτουργική στρωματικών κυττάρων AR απαιτείται για την κανονική αναπτυξιακές προστάτη και επηρεάζει την ανάπτυξη των όγκων του προστάτη. Παρά το γεγονός ότι είναι σε μεγάλο βαθμό γνωρίζουν τις ιδιαιτερότητες των γονιδιωματικής ενέργειες των AR σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη, σχετικά λίγα είναι γνωστά σχετικά με τους στόχους του γονιδίου της λειτουργικής AR στα στρωματικά κύτταρα του προστάτη. Εδώ, περιγράφουμε μία νέα μοντέλο ανθρώπινων κυττάρων στρωματικά προστάτη που μας επέτρεψε να μελετήσει τα αποτελέσματα της AR στη γονιδιακή έκφραση σε αυτά τα κύτταρα. Το μοντέλο περιλαμβάνει ένα γενετικά τροποποιημένο παραλλαγή αθανατοποιημένα ανθρώπινα κύτταρα στρωματικά WPMY-1 του προστάτη που υπερεκφράζει AR άγριου τύπου (WPMY-AR) σε επίπεδο συγκρίσιμο με τα κύτταρα LNCaP και αποκρίνεται σε διυδροτεστοστερόνη (DHT) διέγερση. Χρήση των κυττάρων WPMY-AR για προφίλ γονιδιακής έκφρασης έδειξε ότι η παρουσία του AR, ακόμη και εν απουσία του DHT, μεταβάλλεται σημαντικά το πρότυπο έκφρασης γονιδίων των κυττάρων σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου (WPMY-Vec). Η κατεργασία των κυττάρων WPMY-AR, αλλά όχι WPMY-Vec κύτταρα ελέγχου, με DHT οδήγησε σε περαιτέρω αλλαγές που επηρέασαν την έκφραση των γονιδίων με 141 2-πλάσια ή μεγαλύτερη σε σύγκριση με WPMY-AR κύτταρα που έλαβαν φορέα. Αξίζει να σημειωθεί ότι, DHT μειωτικά σημαντικά περισσότερα γονίδια από ό, τι ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω, αλλά πολλές από αυτές τις αλλαγές αντιστρέφονται οι πρώτες επιπτώσεις της AR υπερέκφραση μόνο του σε μεμονωμένα γονίδια. Τα γονίδια πιο ιδιαίτερα πραγματοποιηθεί με κατεργασία DHT ταξινομήθηκαν με βάση την ρόλου τους στα μονοπάτια του καρκίνου ή σε μονοπάτια κυτταρικής σηματοδότησης (αυξητικός παράγοντας μεταμόρφωσης-β, Wnt, Hedgehog και ΜΑΡ κινάση) πιστεύεται ότι εμπλέκεται σε στρωματικά-επιθηλιακά στιχομυθία κατά την διάρκεια του προστάτη ή καρκίνο του προστάτη ανάπτυξη. θεραπεία DHT κυττάρων WPMY-AR ήταν επίσης αρκετή για να μεταβάλει παρακρινή δυναμικό τους για τον καρκίνο του προστάτη, όπως κύτταρα ρυθμισμένο μέσο από DHT επεξεργασμένο WPMY-AR σημαντικά αυξημένη ανάπτυξη των κυττάρων LNCaP σε σύγκριση με DHT επεξεργασμένο WPMY-Vec ρυθμισμένο μέσο κυττάρων.

Παράθεση: Tanner MJ, Welliver RC Jr, ο Τσεν M, Shtutman M, Godoy Α, Smith G, et al. (2011) Επιδράσεις των ανδρογόνων υποδοχέων και ανδρογόνων στο Gene Expression στον προστάτη στρωματικά ινοβλάστες και παρακρινή Σηματοδοσίας σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 6 (1): e16027. doi: 10.1371 /journal.pone.0016027

Επιμέλεια: Παρασκευή Γιαννακάκου, Weill Cornell Medical College του Πανεπιστημίου Cornell, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Οκτωβρίου 2010? Αποδεκτές: 2 του Δεκ του 2010? Δημοσιεύθηκε: 18 Γενάρη, 2011

Copyright: © 2011 Tanner et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Ίδρυμα Ισημερία και το Ίδρυμα Ιατρικής Έρευνας του Albany, Νέα Υόρκη. MT ήταν μια Αμερικανική Ουρολογική Εταιρεία (URA) Ίδρυμα Research Fellow. MC και AG είναι αποδέκτες του Υπουργείου Άμυνας (DoD) Καρκίνος του προστάτη Πρόγραμμα Έρευνας (PCRP) Μεταδιδακτορική Έρευνα Υποτροφίες (W81XWH-10-100125 [να MC] και W81XWH-09-1-0330 [να AG]). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο αδένας του προστάτη απαιτεί ανδρογόνα στεροειδή για την ανάπτυξη, τη συντήρηση των ενηλίκων και τη λειτουργία. Τα αρσενικά με αδρανοποίησης μεταλλάξεων σε γονίδια που απαιτούνται κλειδί για το μεταβολισμό των ανδρογόνων αναπτυχθεί μόνο μια στοιχειώδη προστάτη αδένα [1] και τα αρσενικά με αδρανοποίηση μεταλλάξεις στον υποδοχέα ανδρογόνων (AR), το γονίδιο που μεσολαβεί τις επιδράσεις των ανδρογόνων, δεν αναπτύσσουν προστάτες [2]. Τα ανδρογόνα και δράση AR διαδραματίζουν επίσης σημαντικό ρόλο στην καρκινογένεση του προστάτη. Φάρμακα που αναστέλλουν τη βιοσύνθεση των ανδρογόνων έχουν χημειοπροφυλακτική επιδράσεις που μειώνουν σημαντικά τον κίνδυνο για ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη στους άνδρες [3] και ανδρογόνων θεραπείες αφαίρεσης παρέχει τις πιο κλινικά χρήσιμο μέσο για την παρηγορητική τον έλεγχο της νόσου, όταν ο καρκίνος του προστάτη ανιχνευτεί σε προχωρημένο στάδιο [4]. Αυτά τα κλινικά δεδομένα προσδιορίζουν τη σημασία των ανδρογόνων σηματοδότησης για τη βιολογία του προστάτη και την καρκινογένεση και την έρευνα αυτοκίνητο προσπάθειες για να χαρακτηρίσει τις συνέπειες της σηματοδότησης των ανδρογόνων στα κύτταρα του προστάτη.

Επειδή η πρωτεΐνη AR είναι μια εκτεταμένη μέλος του παράγοντα πυρηνικής μεταγραφής που υπό όρους ρυθμίζει την έκφραση των γονιδίων [5], είναι λογικό να αναμένει κανείς ότι η διαθεσιμότητα ενός πλήρους καταλόγου των ανδρογόνων ρυθμιζόμενα γονίδια στα κύτταρα του προστάτη θα μπορούσε να συμβάλει σημαντικά στη γνώση μας για δράση ανδρογόνων στον προστάτη. Για το σκοπό αυτό, η χρήση της γονιδιακής έκφρασης σύγχρονης μάζα προφίλ τεχνολογία, ιδίως με τη συμμετοχή γονίδιο μικροσυστοιχίες για Chips, έχει ήδη επεκταθεί σε μεγάλο βαθμό τη λίστα των γνωστών γονιδίων που ρυθμίζονται από ανδρογόνο σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [6] – [9]. Μελέτες που χρησιμοποιούν αυτή την προσέγγιση στήριξαν η ενδεχόμενη ταυτοποίηση νέων γενετικών ανωμαλιών (γονίδιο ETS αναδιατάξεις) [10] – [12] και συνέβαλαν στον προσδιορισμό μονοπατιών ασυνήθιστα ενεργό σηματοδότησης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [13], [14] που έχουν μεταφραστικό δυναμικό βελτίωση του καρκίνου του προστάτη ή διαγνωστική αγωγή στρατηγικές. Αυτό το είδος της τεχνολογίας, ωστόσο, δεν έχει ακόμη χρησιμοποιηθεί για το χαρακτηρισμό των ανδρογόνων /επιδράσεις AR επί της έκφρασης γονιδίων σε στρωματικά κύτταρα του προστάτη, παρά την εκτεταμένη μαρτυρία ότι τα κύτταρα από το στρώμα του προστάτη συμμετάσχουν ενεργά στις διαδικασίες μέσω των οποίων τα ανδρογόνα ρυθμίζουν φυσιολογικές ή κακοήθη ανάπτυξη του προστάτη [15] – [19]. Ο κύριος λόγος για αυτό το έλλειμμα είναι η έλλειψη κατάλληλων καλλιεργημένων μοντέλων ανθρώπινων κυττάρων στρωματικά προστάτη που σθεναρά εκφράζουν την πρωτεΐνη AR και είναι αποδεδειγμένα αποκρίνονται στην παρουσία των ανδρογόνων όπως υποδεικνύεται από τις αλλαγές στη γονιδιακή έκφραση όταν καλλιεργούνται σε ένα μέσο που περιέχει ανδρογόνο. Εδώ, περιγράφουμε την εμπειρία μας στις δοκιμές ορισμένα διαθέσιμα (καλοήθης) μοντέλα ανθρώπινου προστάτη στρωματικών κυττάρων για την ικανότητά τους να ανταποκρίνονται ανδρογόνα

in vitro

και στην ανάπτυξη ενός συγκεκριμένου μοντέλου ανθρώπινου στρωματικών κυττάρων του προστάτη που αποκρίνονται στο ανδρογόνο (κύτταρα WPMY-AR) που είχε προφίλ για AR-και ανδρογόνων που προκαλείται από αλλαγές στην έκφραση γονιδίων χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες Chip ανθρώπινο γονίδιο. Επιπλέον, χρησιμοποιήσαμε αυτό το σύστημα μοντέλου κυττάρων για να δοκιμαστεί η ιδέα ότι τα ανδρογόνα μεταβάλλουν το παρακρινή περιβάλλον σηματοδότηση ενός όγκου του προστάτη επηρεάζοντας την παραγωγή εκκρινόμενων παραγόντων από ινοβλάστες στρωματικών προστάτη.

Αποτελέσματα

υποδοχέα ανδρογόνων έκφραση και δραστικότητα σε καλλιεργημένα στρωματικά κύτταρα ανθρώπινου προστάτη

Δύο διαθέσιμες αθανατοποιημένες στρωματικών ανθρώπινες κυτταρικές σειρές του προστάτη, μη-αθανατοποιημένων πρωτογενούς ανθρώπινου προστάτη μυοϊνοβλάστες στρωματικών κυττάρων PS-30 και WPMY-1, και αξιολογήθηκαν για έκφραση AR και την ανταπόκριση σε ανδρογόνα. Κανένα από αυτά τα κύτταρα απαιτούν ανδρογόνων για

in vitro

ανάπτυξη, ωστόσο, τα κύτταρα WPMY-1 είχαν προηγουμένως αναφερθεί να αυξηθεί ελαφρώς ταχύτερη σε παρουσία συνθετικού ανδρογόνου, R1881 [20]. έκφραση AR αξιολογήθηκε σε αυτά τα κύτταρα με ποσοτική RT-PCR (qPCR) και διαδικασίες στυπώματος Western και συγκρίθηκε με καλλιεργημένα πρωτογενείς ινοβλάστες ανθρώπινης στρωματικών προστάτη (pRSC) και στα καρκινικά κύτταρα LNCaP του προστάτη που είναι μοντέλα για τη δράση AR σε καρκίνο προστάτη (Σχήμα 1Α ). Των ερωτηθέντων κύτταρα, κύτταρα LNCaP εξέφρασαν τα υψηλότερα επίπεδα AR mRNA. AR mRNA εκφράστηκε σε μόλις 3,4% αυτού του επιπέδου σε κύτταρα PS30, 1,1% το pRSC και σε ελαφρώς πάνω από το 0,1% αυτού του επιπέδου σε κύτταρα WPMY-1. Αυτό το πρότυπο ήταν σύμφωνη με τα δεδομένα Western blot μας, όπου δεν μπορέσαμε να ανιχνεύσει μια ζώνη που αντιστοιχεί σε AR σε εκχυλίσματα είτε από τα αθανατοποιημένα κύτταρα ή σε pRSC αν και ανιχνεύθηκε εύκολα στο εκχύλισμα από τα κύτταρα LNCaP (Εικ. 1Β). Ομοίως, όταν τα γονικά κύτταρα WPMY-1 επιμολύνθηκαν με ένα ανδρογόνο αποκρίνεται φορέα αναφοράς, που δεν έδειξε στοιχεία αυξημένη έκφραση του ανταποκριτή (λουσιφεράσης) σε απόκριση αυξανόμενες ποσότητες DHT (Εικ. 1 C). Ωστόσο, όταν τα κύτταρα WPMY-1 συν-επιμολύνθηκαν με τον ανταποκριτή ανδρογόνων, μαζί με έναν φορέα έκφρασης AR, η έκφραση του ανταποκριτού αυξήθηκε σημαντικά με την παρουσία του DHT (Εικ. 1 C). Συνοπτικά, η χαμηλή ενδογενή έκφραση AR σε αυτές στρωματικά ανθρώπινες κυτταρικές σειρές προστάτη και απάθεια τους να ανδρογόνων διέγερση υποδεικνύει ότι είναι φτωχοί μοντέλα για τη μελέτη της δράσης ανδρογόνων στο στρωματικά κύτταρα, αλλά εξωγενή έκφραση του AR, τουλάχιστον στην WPMY-1 κύτταρα, ανατίθενται τα κύτταρα αυτά ένα ανδρογόνο-απόκρισης φαινότυπο που θα μπορούσε να είναι πιο ευνοϊκό για τη μελέτη της δράσης των ανδρογόνων.

(Α) επίπεδα AR mRNA σε PS30, πρωτογενή στρωματικά προστάτη (pRSC), WPMY-1 (W ), WPMY-Vec (W-Vec), WPMY-AR (W-AR) ή LNCaP κύτταρα που εντοπίστηκε με πραγματικού χρόνου qPCR του RNAs που εξάγονται από τα κύτταρα. Τα επίπεδα έκφρασης στο ευρετήριο για την έκφραση της GAPDH σε κάθε κυτταρική σειρά. (Β) πρωτεΐνη AR (άνω λωρίδες) σε PS30, pRSC, W, W-Vec, W-AR ή LNCaP κύτταρα ανιχνεύθηκαν με στύπωμα Western. Η κηλίδα ανιχνεύθηκε εκ νέου για την πρωτεΐνη GAPDH (κατώτερο λωρίδες) ως έλεγχο. έκφραση ανταποκριτή (C) λουσιφεράσης σε κύτταρα WPMY-1 συν-επιμολυσμένα με τον φορέα ARE-Ιυο ανταποκριτή και ελέγχου (άδειο) φορέα (Vector) ή τον φορέα pLenti6.2-Har (AR). Λουσιφεράσης επίπεδα κανονικοποιούνται για GFP φθορισμό στον ίδιο εκχύλισμα ως δείκτη έλεγχος επιμόλυνσης. (D) χρώση ανοσοφθορισμού για AR σε κύτταρα W-AR που καλλιεργούνται για 72 ώρες απουσία (αριστερά) ή παρουσία (δεξιά) 10 ηΜ DHT. Τα κύτταρα συν-χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ να εντοπιστούν πυρήνες. (Ε) δραστηριότητα λουσιφεράσης σε W-AR κύτταρα επιμολυσμένα με ARE-Luc και GFP υπό την απουσία ή παρουσία 10 ηΜ DHT. Η δραστικότητα λουσιφεράσης ομαλοποιήθηκε σε σύγκριση με τα επίπεδα GFP στο ίδιο εκχύλισμα. (ΦΆ). Η ανάπτυξη του W-Vec ή W-AR κυττάρων απουσία ή παρουσία 10 ηΜ DHT όπως μετράται με τη δοκιμασία WST-1.

Η

Για να WPMY-1 κύτταρα πιο επιδεκτικά για τη μελέτη ανδρογόνου επιδράσεις στην γονιδιακή έκφραση, έχουμε υποστεί μεταγωγή των κυττάρων με ανθρώπινα άγριου τύπου φακοϊό έκφραση AR και στη συνέχεια χρησιμοποιείται επιλογή αντιβιοτικού για να ληφθεί ένα σταθερό πληθυσμό του AR κύτταρα που υπερεκφράζουν WPMY-1 (WPMY-AR). Άλλα κύτταρα WPMY-1 μετήχθησαν με άδειο φακοϊό και επιλεγμένα κάτω από τις ίδιες συνθήκες για να ληφθεί ένα κυτταρικό πληθυσμό ελέγχου (WPMY-Vec). κύτταρα WPMY-AR εκφράζουν AR mRNA και της πρωτεΐνης σε επίπεδο συγκρίσιμο με ανδρογόνο ευαίσθητου καρκίνου του προστάτη LNCaP κύτταρα (Σχ. 1Α, Β). χρώση ανοσοφθορισμού χρησιμοποιώντας αντίσωμα αντι-AR κατέδειξε ότι AR ήταν ως επί το πλείστον στο κυτταρόπλασμα όταν αυτά τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε απουσία DHT, αν και υπήρχε φως χρώση ανοσοφθορισμού πυρηνική στα περισσότερα κύτταρα (Σχ. 1D). Σε αντίθεση, όταν τα κύτταρα WPMY-AR αναπτύχθηκαν σε μέσο που περιέχει DHT, AR ανοσοχρώση ήταν αποκλειστικά πυρηνικό. Η AR εκφράζεται στα κύτταρα σταθερά WPMY-AR ήταν λειτουργικό για γονιδιωματική ενεργοποίηση της γονιδιακής έκφρασης. Όταν αυτά τα κύτταρα μορφομετατράπηκαν με το ανδρογόνο-ρεπόρτερ, δραστικότητα λουσιφεράσης αυξήθηκε σημαντικά με θεραπεία με DHT ενώ DHT δεν επηρέασε την έκφραση λουσιφεράσης σε WPMY-Vec κύτταρα ελέγχου ρεπόρτερ-επιμολυσμένα (Εικ. 1 Ε). Διαφορετικά, τα κύτταρα WPMY-AR δεν έδειξε άλλες εμφανείς φαινοτυπικές διαφορές σε σύγκριση με WPMY-Vec κύτταρα ελέγχου? ήταν δυσδιάκριτες από τη μορφολογία υπό μικροσκοπική παρατήρηση (δεν φαίνεται) και έχουν παρόμοια ποσοστά αύξησης τόσο ανδρογόνα ελεύθερο και μεσαίου ανδρογόνου που περιέχει (Σχ. 1 F).

συγκριτικό γονιδιακής έκφρασης του προστάτη στρωματικά κυττάρων παραλλάγματα Καλλιεργείται σε η παρουσία ή απουσία της DHT

WPMY-Vec και WPMY1-AR κύτταρα τοποθετήθηκαν σε ίσο αριθμό στο ανδρογόνο μέσο ελεύθερο για προσάρτηση στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε φρέσκο ​​μέσο, ​​με ή χωρίς συμπληρωματικό 10 ηΜ DHT για 72 ώρες. RNAs που εξάγονται από βιολογική διπλότυπα αυτών των καλλιεργειών σημάνθηκαν τότε προφίλ επί Affymetrix Human Gene ST 1.0 Array Gene Chips. Τα δεδομένα έκφρασης μικροσυστοιχιών αναλύθηκαν για τον προσδιορισμό των εν λόγω γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ ενός δεδομένου κυττάρου υπό διαφορετικές συνθήκες (- /+ DHT) ή μεταξύ των δύο τύπων κυττάρων (WPMY-Vec vs WPMY-AR) υπό ισοδύναμες συνθήκες. Χρησιμοποιώντας μια αποκοπής των αλλαγών 1,5-φορές στην έκφραση RNA, WPMY-Vec κύτταρα ελέγχου είχαν μόνο 8 γονίδια που εκφράζονται διαφορικά σε παρουσία DHT και τη γραφική παράσταση που δείχνει το φάσμα αυτών των μεταβολών των γονιδίων που παράγεται από το πρόγραμμα GeneSpring και φαίνεται στο Σχήμα 2Α. Προσπαθήσαμε να επιβεβαιώσει διαφορική έκφραση αυτών των γονιδίων 8 σε WPMY-Vec /-untreated κύτταρα DHT-θεραπεία χρησιμοποιώντας σε πραγματικό χρόνο qPCR να αξιολογήσει την έκφραση κάθε γονιδίου σε μια νέα ομάδα δειγμάτων βιολογικού διπλούν, αλλά τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές στην έκφραση για οποιονδήποτε από αυτούς τη χρήση αυτής της μεθόδου (που δεν φαίνεται). Η σύγκριση των προφίλ γονιδιακής έκφρασης της DHT επεξεργασμένου /-untreated κύτταρα WPMY-AR, ωστόσο, δεν έδειξαν πολύ πιο εντυπωσιακό και ισχυρή αλλαγές στην έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με τη θεραπεία DHT. DHT επηρέασε την έκφραση των 172 μεμονωμένων γονιδίων κατά 1,5 φορές ή μεγαλύτερη (σχ. 2Β). Ωστόσο, η πλειονότητα αυτών των αλλαγών (141 ή 81,9%) ήταν στο επίπεδο του 2-πλάσια ή μεγαλύτερη. Στην τελευταία αυτή κατηγορία, περισσότερα γονίδια ρυθμίστηκαν προς τα κάτω με DHT (85 γονίδια) από ό, τι ήταν προς τα πάνω ρυθμισμένη (56 γονίδια). Τα γονίδια που άλλαξαν κατά 2-φορές ή μεγαλύτερη προσδιορίζονται στον Πίνακα S2 και S3 Πίνακα. Στη συνέχεια επέλεξε 10 διαφορετικά γονίδια από αυτούς τους καταλόγους, συμπεριλαμβανομένων 6 ρυθμίζεται προς τα πάνω και 4 μειωτικά γονίδια, για περαιτέρω επικύρωση από πραγματικό χρόνο qPCR σε μια νέα ομάδα των RNAs που προέρχονται από βιολογικά δείγματα εις διπλούν. Καθένα από αυτά τα επιλεγμένα γονίδια επιβεβαιώθηκε να είναι σημαντικά πάνω ή προς τα κάτω ρυθμισμένα από την παρουσία του DHT με τον ίδιο τρόπο όπως τα αποτελέσματα της ανάλυσης έκφρασης μικροσυστοιχιών (Σχ. 3Α). Τέλος, ο κατάλογος των γονιδίων (πάνω και κάτω-ρυθμιζόμενες) που άλλαξαν κατά 2-φορές ή μεγαλύτερη με την παρουσία του DHT ήταν λειτουργικά αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα

λογισμικό

Διαδρομή Express (http: //δίνη. cs.wayne.edu/projects.htm) [21], που εκχωρεί γονιδίων σε ειδικές λειτουργικές πορείες KEGG και, στη συνέχεια, τις διαφορετικές οδούς KEGG σχετίζονται με αυτά τα γονίδια ποσοτικά προτεραιότητα από είτε δύο διαφορετικών παραμέτρων: 1) τον αριθμό των γονιδίων εισόδου που είναι ανατεθεί σε ένα συγκεκριμένο μονοπάτι KEGG? ή 2) το ποσοστό των μεμονωμένων γονιδίων οδού KEGG που ήταν παρόντα στο σετ γονίδιο εισόδου (Πίνακας 1). Οι top 10 KEGG βαθμολογίες οδού χρησιμοποιώντας τις δύο διαφορετικές παραμέτρους από κοινού τις κατηγορίες, Pathways στον Καρκίνο, κυτοκίνες κυτοκίνης Receptor Αλληλεπίδραση, TGF-β Διαδρομή περιπάτου, Wnt Διαδρομή περιπάτου, και Hedgehog μονοπάτι σηματοδότησης αλλά και άλλα μονοπάτια σηματοδότησης εξέχοντα κυττάρων εκπροσωπήθηκαν σε μια κατάταξη ή η άλλα

(Α) GeneSpring δημιουργείται οικόπεδο γραμμή σημαντικές. (P & lt? 0.05) διαφορές της γονιδιακής έκφρασης είναι μεγαλύτερη από 1,5 φορές σε WPMY Vec-κύτταρα υποβάλλονται σε θεραπεία για 72 ώρες με 10 nM DHT. (Β) GeneSpring δημιουργείται οικόπεδο γραμμή σημαντική (Ρ & lt? 0,05) διαφορές γονιδιακή έκφραση είναι μεγαλύτερη από 1,5 φορές σε κύτταρα WPMY-AR σε θεραπεία για 72 ώρες με 10 ηΜ DHT. (C) GeneSpring δημιουργείται οικόπεδο γραμμή σημαντική (Ρ & lt? 0,05) διαφορές γονιδιακή έκφραση είναι μεγαλύτερη από 1,5 φορές μεταξύ WPMY-Vec και τα κύτταρα WPMY-AR καλλιεργούνται χωρίς DHT. (D) πλοκή γραμμή GeneSpring δημιουργείται δείχνει επίδραση της θεραπείας DHT σε γονίδια που είχαν διαφορικά αυξητικά κατά 2-φορές ή μεγαλύτερη από την έκφραση AR μόνο (όχι DHT). (Ε) GeneSpring δημιουργείται οικόπεδο γραμμή δείχνει την επίδραση των θεραπεία DHT σε γονίδια που ήταν διαφορικά τα κάτω ρυθμισμένα με 2-πλάσια ή μεγαλύτερη από την έκφραση AR μόνο (όχι DHT) και ήταν στη συνέχεια πάνω ρυθμισμένα κατά 2-φορές με την παρουσία του DHT. (F) GeneSpring δημιουργείται οικόπεδο γραμμή δείχνει την επίδραση των θεραπεία DHT σε γονίδια που ήταν διαφορικά τα κάτω ρυθμισμένα με 2-πλάσια ή μεγαλύτερη από την έκφραση AR μόνο (όχι DHT) και ήταν στη συνέχεια περαιτέρω προς τα κάτω-ρυθμίζονται από 2-πλάσια ή μεγαλύτερη υπό την παρουσία της DHT.

Η

(Α). Αξιολόγηση των επιμέρους αλλαγών της γονιδιακής έκφρασης που συνδέονται με τη θεραπεία DHT κυττάρων WPMY-AR με qPCR. Έξι από τα γονίδια σε αυτό το πλαίσιο (SFRP-5, IGF-1, Wnt-16, AQP3, FKBP5 και RERG) ταυτοποιήθηκαν ως DHT-up-ρυθμιζόμενα γονίδια στην ανάλυση γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών και τέσσερα γονίδια (ΒΜΡ-4, FST , IL7R και FGF5) ταυτοποιήθηκαν ως DHT-κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια στην ανάλυση γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών και οι αλλαγές αυτές επιβεβαιώθηκαν στη δοκιμασία qPCR. Όλες οι αλλαγές που ανιχνεύεται από qPCR ήταν σημαντικές αλλαγές (Ρ & lt? 0,05). (Β) Αξιολόγηση των ατομικών αλλαγών της γονιδιακής έκφρασης που συνδέονται με τη θεραπεία DHT κυττάρων PS30 παροδικά επιμολυσμένα με pLenti6.2-Har με qPCR. Μέτρηση των αλλαγών στην SRBP5, IGF1, Wnt-16, AQP3, FKBP5, RERG και FGF5 ήταν σημαντικές (P & lt? 0,05) ενώ οι μεταβολές στις ΒΜΡ-4, FST και IL7R δεν ήταν σημαντικές (P & gt? 0,05).

για να προσδιοριστεί καλύτερα αν αυτές οι αλλαγές γονιδίων που σχετίζονται με τη θεραπεία DHT ήταν ειδικά για τα κύτταρα WPMY-AR ή αν θα μπορούσαν επίσης να εμφανιστούν και σε άλλα ανθρώπινα στρωματικά κύτταρα προστάτη με επαρκή έκφραση AR, έχουμε παροδικά επιμολυσμένα PS30 κύτταρα με το AR φορέας έκφρασης ή ένα κενό φορέα ελέγχου συνέχεια κατεργάζεται αυτά τα κύτταρα με ή χωρίς 10 ηΜ DHT για 72 ώρες. RNAs που εξάγονται από αυτά τα κύτταρα ελέγχθηκαν με ανάλυση σε πραγματικό χρόνο qPCR για την έκφραση του AR και για την έκφραση των ίδιων γονιδίων 10 που επιλεκτικά αναλύθηκαν σε κύτταρα WPMY-AR. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η AR εκφράστηκε 923 φορές περισσότερο σε AR-επιμολυσμένα από τον έλεγχο-επιμολυσμένα κύτταρα PS30. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Β, η έκφραση των 6 των άλλων 10 γονίδια άλλαξαν με τον ίδιο τρόπο όπως για τα κύτταρα WPMY-AR υποβάλλεται σε επεξεργασία με DHT, ενώ 4 από τους 10 γονίδια δεν μεταβλήθηκαν σημαντικά μεταξύ untreated- ή DHT-επεξεργασμένα κύτταρα . Τέλος, οι πρωτογενείς ινοβλάστες ανθρώπινου κυττάρου του προστάτη ήταν επίσης καλλιεργήθηκαν σε μέσο με ή χωρίς DHT για 72 ώρες και RNAs εκχυλίσθηκαν για ανάλυση σε πραγματικό χρόνο qPCR. Τα cDNA από τα κύτταρα αυτά στη συνέχεια αναλύθηκαν για επιδράσεις DHT στην έκφραση των 5 διαφορετικών γονιδίων από τον πίνακα μας. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι SFRP5 και IGF1 ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω από 1.67- να 1.73- φορές από DHT (p & lt? 0,05) και FGF5 ήταν μειωτικά κατά 1,5 φορές (p & lt? 0,05) σε σύγκριση με το no-DHT ελέγχους ενώ η έκφραση της FST και Wnt16 δεν ήταν άλλαξε σημαντικά με επεξεργασία DHT αυτών των κυττάρων.

γονιδιακής έκφρασης αλλαγές που σχετίζονται με υπερέκφραση του AR σε WPMY-1 κύτταρα

Για να καθοριστεί εάν η έκφραση AR (απουσία συνδέτη) επηρεάζονται γονιδιακή έκφραση σε τα κύτταρα WPMY, συγκρίναμε επίσης τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης μεταξύ WPMY-Vec και τα κύτταρα WPMY-AR που καλλιεργούνται χωρίς θεραπεία DHT. Αξίζει να σημειωθεί ότι 443 γονίδια βρέθηκαν να εκφράζονται διαφορικά μεταξύ αυτών των κυττάρων σε ένα επίπεδο από 1,5-πλάσια ή μεγαλύτερη (σχ. 2C) και 374 αυτών των γονιδίων εκφράζονται διαφορετικά κατά 2-φορές ή μεγαλύτερη μεταξύ αυτών των κυττάρων. Σε αυτή την τελευταία υποομάδα, 55 γονίδια επιλεκτικά απορυθμίζεται και 319 γονίδια επιλεκτικά κατιούσα ρύθμιση στα κύτταρα AR-εκφράζουν. Ήταν περαιτέρω ενδιαφέρον να προσδιοριστεί πώς αυτές οι δύο κατηγορίες γονιδίων επηρεάστηκαν συνέχεια με κατεργασία DHT. Πρώτον, επιλέγονται εκείνα τα γονίδια (55) που ρυθμίζεται προς τα πάνω από την υπερέκφραση του AR (τουλάχιστον 2-φορές) σε απουσία DHT. Εξήντα τοις εκατό από αυτά τα γονίδια (33 γονίδια) στη συνέχεια ρυθμίζεται προς τα κάτω (με 2-πλάσια ή μεγαλύτερη) και πάλι με την παρουσία του DHT (Σχ. 2D) ενώ το υπόλοιπο 40% ήταν είτε αμετάβλητα ή μεταβάλλονται λιγότερο από 2 φορές με DHT και, Ως εκ τούτου, εξαιρούνται από την ανάλυση μας. Για εκείνα τα 319 γονίδια που ρυθμίστηκαν προς τα κάτω κατά 2-φορές ή μεγαλύτερη από μόνα AR υπερέκφραση, 21 γονίδια (6,58%) στη συνέχεια ρυθμίζεται προς τα πάνω κατά 2-φορές ή μεγαλύτερο με την προσθήκη της DHT (Σχήμα 2Ε) ενώ 21 γονίδια (6,58%) ήταν περαιτέρω ρυθμίζεται προς τα κάτω κατά 2-φορές ή μεγαλύτερο με την προσθήκη της DHT (Σχήμα 2F). Τα υπόλοιπα γονίδια σε αυτή την κατηγορία (277 ή 86,8%) ήταν είτε αμετάβλητα με την προσθήκη της DHT ή άλλαξαν λιγότερο από 2 φορές και αποκλείστηκαν από την ανάλυση μας. Δεν γονίδια απορυθμίζεται με έκφραση AR τότε αυξητικά περαιτέρω από DHT ακόμη και σε εκείνους που επηρεάστηκαν από DHT & lt? 2- έως 1,5 φορές. Συνοπτικά, AR υπερέκφραση μόνο του στην απουσία συνδέτη μπορεί να επάγει αλλά κυρίως καταστέλλουν τα γονίδια έκφραση σε κύτταρα WPMY-1, αλλά οι ενέργειες αυτές ήταν μερικές φορές αντιστρέφεται με την παρουσία συνδέτη. Ωστόσο, ορισμένες αλλαγές γονιδιακή έκφραση που επάγεται από την υπερέκφραση AR (downregulations γονίδιο) έχουν περαιτέρω αυξηθεί με την κατεργασία με το συνδετήρα ανδρογόνων σε αυτά τα κύτταρα.

άμεσες ή έμμεσες ρύθμιση των γονιδίων με DHT

περιγράφηκε εδώ μεταβάλλονται πρότυπα γονιδιακής έκφρασης σε στρωματικά κύτταρα του προστάτη που προκαλείται από υπερέκφραση AR, με ή χωρίς συνδετήρα, που υπολογίζεται με μετρήσεις των επιπέδων mRNA. Επιδιώξαμε επίσης να αξιολογήσει ένα μικρό υποσύνολο των γονιδίων αυτών DHT-ρυθμίζονται για να προσδιοριστεί αν τα αποτελέσματα της DHT απαιτούμενη σύνθεση ενδιάμεσων πρωτεΐνης. Για το σκοπό αυτό, σε επεξεργασία με θρυψίνη κύτταρα WPMY-AR αφέθηκαν να προσκολληθούν όλη τη νύκτα και στη συνέχεια κατεργάζεται για λίγο (30 λεπτά) με κυκλοεξιμίδιο υψηλή δόση (40 μgs /ml) για να εμποδίσει την πρωτεϊνική σύνθεση και εν συνεχεία αλλαγή σε μέσο με ή χωρίς DHT (10 ηΜ) σε η παρουσία του κατώτερου κυκλοεξιμιδίου δόσης (10 μgs /ml) για 24 ώρες. Κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία παρομοίως εκτός του ότι δεν περιελήφθη cyclohexmide ανά πάσα στιγμή. RNAs που εξάγονται από αυτά τα κύτταρα στη συνέχεια αξιολογήθηκαν για έκφραση επιλεγμένων DHT-ρυθμίζεται προς τα πάνω (RERG, Wnt16 και SFRP5) ή DHT-ρυθμισμένα προς τα κάτω (FST, FGF5 και ΒΜΡ4) γονίδια. Τα αποτελέσματά μας (Σχήμα 4) έδειξε ότι η επίδραση DHT επί της έκφρασης αλλάζει για τέσσερα από αυτά τα γονίδια (RERG, WNT16, SFRP5, και FST) δεν άλλαξαν με κυκλοεξιμίδιο θεραπεία, ενώ οι επιπτώσεις DHT για ΒΜΡ4 και εκφράσεις FGF5 είχαν μπλοκαριστεί από κυκλοεξιμίδιο. κύτταρα

WPMY-AR προ-επεξεργασία στη συνέχεια κατεργάζεται με κυκλοεξιμίδιο απουσία ή παρουσία 10 ηΜ DHT για 24 ώρες. RNAs αναλύθηκαν με qPCR για την έκφραση RERG, FST ή FGF5, όπως υποδεικνύεται και τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιήθηκαν σε επίπεδα έκφρασης GAPDH.

Η

Επιδράσεις της DHT Διεγειρόμενης WPMY1-AR Ρυθμισμένα μέσα στη LNCaP κυττάρων Growth

Τέλος, επιδιώξαμε να δοκιμάσει εάν η δράση της DHT στο μοντέλο κύτταρα WPMY-AR μπορεί να επηρεάσει την παραγωγή εκκρίνονται παράγοντες από αυτά τα κύτταρα που επηρεάζουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Τρεις ημέρες ρυθμισμένο μέσο από 10 ηΜ DHT επεξεργασμένου WPMY-Vec ή WPMY-AR κυττάρων αραιώθηκε 1:01 με φρέσκο ​​μέσο (με 10 ηΜ DHT) και στη συνέχεια προστέθηκε σε φρέσκα κύτταρα LNCaP μονοστιβάδες και τα κύτταρα παρακολουθήθηκαν για 9 ημέρες με μέσον αντικατάσταση κάθε 3 ημέρες. Η ανάπτυξη κατά την περίοδο αυτή μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία WST-1 και τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχήμα 5. Η θεραπεία με το ρυθμισμένο μέσο από τα DHT-κατεργασμένων κυττάρων WPMY-AR βρέθηκε να είναι σημαντικά μεγαλύτερη ανάπτυξη διεγερτική για LNCaP σύγκριση με την θεραπεία με κατάλληλα προετοιμασμένο μέσο από DHT-επεξεργασμένα κύτταρα WPMY-Vec.

Σχετική αριθμούς κυττάρων σε διαφορετικές ημέρες εκτιμήθηκαν από WST-1 δοκιμασία. Χρήση ρυθμισμένου μέσου από κύτταρα WPMY-AR DHT-αγωγή διεγείρονται σημαντικά την ανάπτυξη (Ρ & lt? 0,01, αμφίδρομη ANOVA) των κυττάρων LNCaP σε σύγκριση με ρυθμισμένο μέσο από WPMY-Vec κύτταρα DHT-θεραπεία. Κλίσεις των δύο καμπυλών ανάπτυξης ήταν επίσης σημαντικά διαφορετικές (Ρ = 0,0181, Γραμμική Ανάλυση Παλινδρόμησης).

Η

Συζήτηση

Όπως και σε άλλους ιστούς, ο προστάτης αποτελείται από ένα μείγμα ετερόκλητων κυτταρικοί τύποι που είναι σε γενικές γραμμές διαχωρίζονται σε ένα επιθηλιακό ή ενός διαμερίσματος στρωματικά βασίζεται εντοπισμός τους σε σχέση με τη βασική μεμβράνη. Ο καρκίνος του προστάτη κύτταρα που προέρχονται από το προστατικό επιθήλιο έχουν παράσχει ιστορικά τα μοντέλα για τη μελέτη πώς ανδρογόνων δράση επηρεάζει την έκφραση του γονιδίου κύτταρο προστάτη. Ωστόσο, διάφοροι τύποι κυττάρων εντός του στρώματος του προστάτη είναι επίσης γνωστό ότι εκφράζουν AR

in vivo

[22] – [24] και να συμβάλλουν στη διαδικασία (ες) διαμέσου της οποίας τα ανδρογόνα ρυθμίζουν την ανάπτυξη του προστάτη και της νόσου ακόμη γνωρίζουμε πολύ λίγο σχετικά με τις επιδράσεις του ανδρογόνων επί της έκφρασης γονιδίων σε αυτούς τους τύπους κυττάρων. Οι προσπάθειες για το σκοπό αυτό παρεμποδίζεται από την έλλειψη κατάλληλων μοντέλων καλλιεργημένων στρωματικών κυττάρων, ειδικά αυτοί που εκφράζουν AR σε επαρκή επίπεδα για να επιτραπεί η χρήση της σύγχρονης γονιδιακής έκφρασης τεχνικές μαζικής προφίλ. Εδώ, προσπαθήσαμε να χαρακτηρίσουμε την έκφραση AR και τη δραστηριότητα σηματοδότησης ανδρογόνων σε δύο διαθέσιμες απαθανάτισε στρωματικών προστάτη κυτταρικές σειρές, PS30 και WPMY-1, που έχουν αναφερθεί στο παρελθόν για να εκφράσει AR [20], [25] για να εκτιμήσει κατά πόσον θα μπορούσαν να παρέχουν μοντέλα για τη μελέτη ανδρογόνων ρυθμισμένη έκφραση γονιδίου. Αυτά τα κύτταρα και οι δύο ταξινομηθεί ως μυοϊνοβλάστες βάση τη μορφολογία τους σε καλλιέργεια και συν-έκφραση των βιμεντίνη και ακτίνη των λείων μυών. Βρήκαμε ότι και οι δύο τύποι κυττάρων εκφράζουν εξαιρετικά χαμηλά επίπεδα AR mRNA και πρωτεΐνης και ούτε τύπου κυττάρου ανταποκρίθηκαν στη θεραπεία DHT μετά από επιμόλυνση με ένα φορέα αναφοράς λουσιφεράσης που αποκρίνονται στο ανδρογόνο ώστε ούτε είναι πιθανό ένα καλό μοντέλο για τη μελέτη ανδρογόνων έκφραση ρυθμίζεται γονιδίου. Ωστόσο, όταν ο φορέας των ανδρογόνων ρεπόρτερ συν-επιμολύνθηκε με ένα φορέα έκφρασης άγριου τύπου AR, τα κύτταρα WPMY-1 ήταν τότε σε θέση να ανταποκριθεί στη θεραπεία DHT με προς τα πάνω ρύθμιση έκφρασης ρεπόρτερ που αποκρίνονται στο ανδρογόνο. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι τα κύτταρα WPMY-1 θα μπορούσε να γίνει δεκτική για τη μελέτη της γονιδιακής έκφρασης των ανδρογόνων ρυθμίζεται όταν παρέχεται με εξωγενή AR. Μεταγωγή από ένα φακοϊό AR-έκφραση αντιβιοτικό-επιλέξιμο μας επέτρεψε στη συνέχεια να αντλήσει μια σταθερή κυτταρική γραμμή, WPMY-AR, που εκφράζεται AR mRNA και της πρωτεΐνης σε ένα επίπεδο συγκρίσιμο με κύτταρα LNCaP που συχνά χρησιμοποιούνται για την μοντελοποίηση απόκριση ενός καρκίνου του προστάτη κυττάρων να ανδρογόνα. Τα κύτταρα WPMY-AR μεταφέρθηκε πρωτεΐνη AR στον πυρήνα με την παρουσία του DHT και ρυθμίζει αυξητικά κατάλληλα έκφραση λουσιφεράσης από ένα φορέα ρεπόρτερ ανδρογόνο ρυθμίζονται μετά τη θεραπεία DHT προσδιορισμό ότι έχουν ένα λειτουργικό σύστημα σηματοδότησης ανδρογόνων που είναι συνεπής με την χρήση τους στην γονιδιακή προφίλ έκφρασης πειράματα. Ήταν αξιοσημείωτο ότι τα WPMY-AR κύτταρα ήταν μορφολογικά οι ίδιοι από τη γονική ή ελέγχου μεταχθέντα κύτταρα (WPMY-Vec) και ότι σχετικό ρυθμό ανάπτυξης τους (με την παρουσία ή απουσία ανδρογόνων) δεν επηρεάστηκε σημαντικά από AR υπερέκφραση, ειδικά αφού AR είναι είναι γνωστό ότι επηρεάζουν προστάτη ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, είτε όταν εκφράζεται ενδογενώς ή εξωγενώς [26], [27].

Τα κύτταρα WPMY-Vec και WPMY-AR ακολούθως προφίλ για τη συνολική προτύπων έκφρασης γονιδίου και για τις αλλαγές σε αυτά τα σχέδια που σχετίζονται με τη θεραπεία DHT χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση μικροδέσμης γονίδιο Chip. προκαταρκτική προσπάθεια μας αφορούσε μια πιο παρατεταμένη αγωγή με DHT (72 ώρες) από ό, τι συνήθως χρησιμοποιείται σε μελέτες κυττάρων καρκίνου του προστάτη, αλλά ελπίζαμε ότι αυτή η μεγαλύτερη περίοδος θεραπείας θα επέτρεπε επίσης την ανίχνευση των πιθανών αλλαγών έκφρασης δευτερεύον γονίδιο που μπορεί να είναι σχετικές με τις πτυχές της cross-talk μεταξύ στρωματικών προστάτη και επιθηλιακά κύτταρα που επηρεάζουν την ανάπτυξη του προστάτη ή την ανάπτυξη των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη. Για τους WPMY-Vec κύτταρα ελέγχου, η θεραπεία DHT μεταβληθεί σημαντικά την έκφραση των γονιδίων μόνο 8 (από 28.712 σετ ανιχνευτή γονιδίου για την Chip) και αυτές οι αλλαγές ήταν σχετικά χαμηλές, που κυμαίνονται από την αλλαγή 1.62- σε 1,74 φορές σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα WPMY -Vec κύτταρα. Καμία από αυτές τις γονιδιακές αλλαγές στη συνέχεια επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας ένα πραγματικό χρόνο προσέγγιση qPCR. Θεωρούμε λοιπόν, ότι αυτές οι μικρές αλλαγές στα κύτταρα μας ελέγχου (+/- DHT) ανιχνεύεται με χρήση της προσέγγισης ψηφίδα μικροσυστοιχίας γονίδιο αντιπροσωπεύουν το «θόρυβο» του συστήματος και ότι αυτός ο θόρυβος είναι εξαιρετικά χαμηλή και εύκολα να διηθείται με το δευτερεύον προσέγγιση qPCR. Σε πλήρη αντίθεση, η αγωγή των κυττάρων WPMY-AR με DHT μετέβαλε την έκφραση των 141 διαφορετικών γονιδίων κατά 2-φορές ή μεγαλύτερο. Η συντριπτική πλειοψηφία αυτών των αλλαγών (60,2%) που συμμετέχουν έκφραση γονιδίου κάτω τους κανονισμούς που σχετίζονται με τη θεραπεία DHT. Λαμβάνοντας υπόψη ότι μεταγραφικά ενεργή (liganded) AR είναι πιο συχνά θεωρείται ως ένας επαγωγέας της έκφρασης του γονιδίου, αυτό είναι ένα εξαιρετικά υψηλό αριθμό δυνητικά ανδρογόνο καταπιεσμένη γονίδια. Ωστόσο, /ανδρογόνων καταστέλλεται γονίδια AR έχουν περιγραφεί προηγουμένως σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη [8] και μία έκθεση που περιγράφει τις επιδράσεις των ανδρογόνων επί της έκφρασης γονιδίου σε κύτταρα LNCaP απέδειξε ότι ανδρογόνο θεραπεία κατέστειλε σχεδόν τόσο πολλά γονίδια, όπως προκλήθηκαν σε αυτά τα κύτταρα [9 ] έτσι παρατήρηση μας υποστηρίζεται από παρατηρήσεις σε άλλα συστήματα κυττάρων του προστάτη. Ήταν επίσης ενδιαφέρον ότι η σύγκριση της DHT-άλλαξε λίστες γονίδιο στρωματικών κυττάρων μας με ήδη γνωστά γονίδια ανδρογόνο ρυθμίζονται συναρμολογούνται σε έναν πόρο ιστοσελίδα (https://argdb.fudan.edu.cn/index_info.php, [28] έδειξε ότι περίπου 21% των γονιδίων που υπάρχουν στις λίστες μας (πίνακες S1 και S2) έχουν περιγραφεί προηγουμένως για να είναι «ανδρογόνων ρυθμίζεται» με βάση ρωτήθηκαν βιβλιογραφικές πηγές που αφορούν κυρίως μελέτες κυττάρων καρκίνου του προστάτη. Η παρουσία αυτού του σημαντικού ποσοστού που περιγράφηκε προηγουμένως «ανδρογόνων ρυθμίζονται «γονίδια στις λίστες μας υποστηρίζει την ιδέα ότι είμαστε εντοπισμό πολλών γονιδίων που μπορεί να ρυθμίζεται συνήθως από liganded AR σε πολλούς τύπους κυττάρων του προστάτη, καθώς και γονίδια που μπορεί να επηρεαστούν επιλεκτικά από AR /ανδρογόνα σε στρωματικά κύτταρα του προστάτη.

όσον αφορά την φύση αυτών των γονιδίων στρωματικών κυττάρων DHT-ρυθμίζονται, υπήρχαν λίγες, εάν υπάρχουν γονίδια που είναι λειτουργικά ταξινομούνται ως ρυθμιστές του πολλαπλασιασμού διεργασίες κυττάρου ή απόπτωση και αυτό είναι συνεπές με τις παρατηρήσεις μας ότι ανδρογόνων αγωγή δεν επηρέασε σημαντικά WPMY -AR ανάπτυξης. Η αξιολόγηση της λειτουργίας των γονιδίων για τα πάνω ρυθμισμένα /κάτω-ρυθμιζόμενα γονίδια στις λίστες μας βασίζεται KEGG ονομασία της οδού ήταν αξιοσημείωτη δεδομένου ότι εντόπισε μια επικράτηση των γονιδίων που εμπλέκονται στην γενική «μονοπάτια του καρκίνου» που θα μπορούσαν να σχετίζονται με τα ευρήματά μας που κλιματιζόμενο μέσο από DHT-διεγερμένα κύτταρα WPMY-AR επηρεάζονται ανάπτυξης LNCaP κυττάρων. Ομοίως, η παρουσία πολλαπλών γονιδίων στην λίστα μας ταξινομούνται ως τελεστές της σηματοδότησης υποδοχέα κυτοκίνης-κυτοκίνης, ΤΟΡ-β, WNT, Hedgehog ή ΜΑΡ Κινάσης οδούς σηματοδότησης θα στηρίξει προηγούμενες δημοσιευμένες μελέτες υποδηλώνουν ότι αυτά τα συγκεκριμένα μονοπάτια σηματοδότησης που εμπλέκονται στην πολλαπλή συζήτηση που λαμβάνει χώρα μεταξύ των στρωματικών του προστάτη και του προστάτη επιθηλιακά /καρκινικών κυττάρων σε ανάπτυξη ή ασθένειας [29] – [31]. Κατηγοριοποίηση των γονιδίων στον κατάλογο βασίζεται Γονιδιακή Οντολογία (GO) αναθέσεις έγιναν επίσης χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα Δαβίδ και το αποτέλεσμα έδειξε παρόμοιες κατηγορίες με εκείνες που έχουν ανατεθεί στο πλαίσιο της KEGG Διαδρομής (δεν φαίνεται). Τέλος, η περιορισμένη έρευνα μας για την επίδραση της κυκλοεξιμιδίου για τις αλλαγές γονίδιο DHT που προκαλείται δεν υποστηρίζει την ιδέα ότι πολλές από τις γονιδιακές αλλαγές που παρατηρούνται σχετίζονται κατά κύριο λόγο με την AR λειτουργική δραστηριότητα. Ωστόσο, η ικανότητά μας να εντοπίσει κάποια DHT που πλήττονται από τα γονίδια στα κύτταρα WPMY-AR που δεν άλλαξαν όταν κυκλοεξιμίδιο συμπεριλήφθηκε με τη θεραπεία DHT δείχνει επίσης ότι υπάρχουν γονίδια στις λίστες μας, που δευτερογενώς ρυθμίζονται από κάποια άλλη πρωτεΐνη που επηρεάζονται από DHT όπως έχουμε υποψία. Χρήση της WPMY-AR κύτταρα με μια μικρότερη περίοδο θεραπείας DHT μπορεί να μας βοηθήσει να λύσουμε το πρωτογενές επηρεάζεται εναντίον των δευτερευόντων επηρεάζονται γονίδια και θα προσπαθήσουμε στο μέλλον.

Για σκοπούς επαλήθευσης, είχαμε επιλέξει ένα πάνελ