;

Αφηρημένο

Ιστορικό

G-πρωτεΐνες-υποδοχείς που συνδέονται (GPCRs) είναι οι πρώτοι υποψήφιοι για νέες στρατηγικές πρόληψης και θεραπείας του καρκίνου. Ψάξαμε για διαφορικά εκφράζονται GPCRs στον κόμβο θετική γαστρικά καρκινώματα.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Η διαφορική έκφραση των GPCRs σε τρεις κόμβο θετική εναντίον τριών κόμβων αρνητικό εντερικό τύπο γαστρικά καρκινώματα αναλύθηκε με σειρά γονιδίων τεχνολογία. Η υποψήφια γονίδια CXCL12 και του υποδοχέα της CXCR4 έχουν επικυρωθεί από πραγματικό χρόνο αντίστροφης μεταγραφής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης σε ένα ανεξάρτητο σύνολο 37 γαστρικών καρκινωμάτων. Μετάφραση μελετήθηκε με ανοσοϊστοχημεία σε 347 γαστρικά καρκινώματα χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό, καθώς και σε 61 ταιριάζουν μεταστάσεις λεμφαδένα. έκφραση της πρωτεΐνης συσχετιζόταν με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά των ασθενών και την επιβίωση. 52 GPCRs και GPCR που σχετίζονται με τα γονίδια ήταν επέκτασης ή υποβιβασμού ρυθμίζονται στον κόμβο θετικό καρκίνο του στομάχου, συμπεριλαμβανομένου CXCL12. Διαφορική έκφραση του CXCL12 επιβεβαιώθηκε με RT-PCR και συσχετίζεται με την τοπική ανάπτυξη του όγκου. CXCL12 ανοσοθετικότητα αρνητικά που συνδέονται με απομακρυσμένες μεταστάσεις και βαθμού όγκου. Μόνο το 17% των γαστρικών καρκινωμάτων έδειξε CXCR4 κυττάρων ανοσοθετικές όγκου, η οποία συνδέθηκε με υψηλότερη τοπική επέκταση του όγκου. 29% των γαστρικών καρκινωμάτων έδειξε CXCR4 μικροαγγείων θετική όγκου. αγγειακή έκφραση CXCR4 ήταν σημαντικά σχετίζεται με υψηλότερη τοπική επέκταση του όγκου, καθώς και υψηλότερες UICC-στάδια. Κατά την έκφραση δύο, CXCL12 σε κύτταρα όγκου και CXCR4 σε μικροαγγεία όγκου, αυτοί οι όγκοι επίσης ήταν ιδιαίτερα σημαντική συσχέτιση με υψηλότερα Τ- και UICC-στάδια. Τρεις λεμφαδενικές μεταστάσεις αποκάλυψε την έκφραση του αγγειακού CXCR4, ενώ τα καρκινικά κύτταρα δεν είχαν εντελώς CXCR4 σε όλες τις περιπτώσεις. Η έκφραση του CXCL12 και CXCR4 δεν είχε καμία επίδραση στην επιβίωση των ασθενών.

Συμπεράσματα /Σημασία

Τα αποτελέσματά μας τεκμηριώσει τη σημασία των GPCRs για τη βιολογία του γαστρικού καρκινώματος και παρέχουν αποδείξεις ότι η οδός CXCL12-CXCR4 θα μπορούσε να είναι ένα μυθιστόρημα πολλά υποσχόμενη αντιαγγειογενετικές στόχος για τη θεραπεία των γαστρικών καρκινωμάτων

Παράθεση:. Ingold Β, Simon E, Ungethüm U, Κουμπάν RJ, Müller BM, Lupp A, et al. (2010) Αγγειακό CXCR4 Έκφραση – ένα μυθιστόρημα Αντιαγγειογενής Target στο γαστρικό καρκίνο; PLoS ONE 5 (4): e10087. doi: 10.1371 /journal.pone.0010087

Επιμέλεια: Ειρήνη Oi Lin Ng, Το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 22 Σεπτεμβρίου, 2009? Αποδεκτές: 16, Μαρτίου 2010? Δημοσιεύθηκε: 8 Απριλίου του 2010

Copyright: © 2010 Ingold et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις της Berliner Krebshilfe (Βερολίνο Canceraid). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι ένα από τα πιο κοινούς καρκίνους παγκοσμίως, καταλαμβάνοντας την τέταρτη θέση στην συνολική συχνότητα και τη λογιστική για πάνω από 650.000 θανάτους ετησίως [1]. Η θνησιμότητα του καρκίνου του στομάχου είναι διακρίθηκε μόνο με τον καρκίνο του πνεύμονα. Πρόωρη καρκίνου του στομάχου συχνά δεν προκαλεί συγκεκριμένα συμπτώματα. Η έλλειψη πρώιμα συμπτώματα καθυστερεί την διάγνωση. Κατά συνέπεια, το 80-90% της Δυτικής ασθενείς με γαστρικό καρκίνο παρόν με προχωρημένους όγκους όταν οι τοπικές ή απομακρυσμένες μεταστάσεις είχαν ήδη προκληθεί [1]. Η κατάσταση των λεμφαδένων, ειδικά η αναλογία της μετάστασης-θετικών /αρνητικών μετάστασης στους λεμφαδένες, είναι ο ισχυρότερος προγνωστικός παράγοντας του καρκίνου του στομάχου [2]. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για ασθενείς με μεταστάσεις κόμβο 1-6 λεμφαδένες είναι 44% και τελειώνει με μόνο το 11% σε ασθενείς με περισσότερα από 15 θετικούς λεμφαδένες. Η μερική ή ολική γαστρεκτομή, σε συνδυασμό με ανοσοενισχυτικό ακτινοθεραπεία ή /και χημειοθεραπεία όπως υποδεικνύεται, υπόσχεται την πλήρη ίαση μόνο σε ασθενείς με νόσο πρώιμο στάδιο. Σε μεταστατική νόσο, που χρησιμοποιούνται σήμερα ακτινοθεραπευτικές και χημειοθεραπευτικών αγωγών έχουν φτωχή αποτελεσματικότητα και ανθεκτικά θεραπεία της εξέλιξης της νόσου οδηγεί στο θάνατο εντός λίγων μηνών [3]. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχει καμία ειδική προγνωστική δείκτη όπως HER2 στο καρκίνωμα του μαστού, EGFR σε μη μικροκυτταρικό καρκίνωμα του πνεύμονα ή K-RAS σε ορθοκολικό καρκίνωμα, το οποίο επιτρέπει μια πιο εξατομικευμένη θεραπευτική στρατηγική. Ως εκ τούτου, οι νέες θεραπευτικές προσεγγίσεις μοριακής στόχευσης απαιτείται.

G-πρωτεΐνη υποδοχέων (GPCRs) αντιπροσωπεύουν κατά πολύ το μεγαλύτερο οικογένεια μορίων κυτταρικής επιφάνειας, τα οποία διαβιβάζουν σήματα μέσω πρωτεΐνη σύνδεσης GTP (G-πρωτεΐνη ) -initiated δεύτερη καταρράκτες αγγελιοφόρος εντός του κυττάρου [4]. Οι GPCRs ρυθμίζονται από πολλούς συναγωνιστές, αλλά όλοι μοιράζονται ένα χαρακτηριστικό πυρήνα που αποτελείται από επτά διαμεμβρανικές α-έλικες, οι οποίες συνδέονται μέσω τριών ενδο- και τρεις εξωκυτταρικούς βρόχους. Αυτοί οι υποδοχείς ελέγχουν βασικές φυσιολογικές λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένων νευροδιαβίβαση, ορμονών και την απελευθέρωση του ενζύμου από το ενδοκρινικό και εξωκρινών αδένων, ανοσολογικές αντιδράσεις, σύσπαση των μυών και τη ρύθμιση της πίεσης του αίματος για να αναφέρουμε μερικά [4].

Τα κακοήθη κύτταρα συχνά επισκιάσουν την κανονική φυσιολογική λειτουργίες των GPCRs να επιβιώσουν, πολλαπλασιάζονται αυτόνομα και να αποφύγει το ανοσοποιητικό σύστημα. Επιπλέον GPCRs διαδραματίζουν κεντρικό ρόλο στην προκαλούμενη από όγκο αγγειογένεση και μετάσταση καρκίνου. Πολλοί στερεούς όγκους βασίζονται σε GPCRs να εκμαιεύσει αγγειογενετική απόκριση είτε δρώντας επί των ενδοθηλιακών ή των στρωματικών συνιστωσών άμεσα ή μέσω της ρύθμισης της απελευθέρωσης ή της δραστηριότητας άλλων αγγειογόνων μεσολαβητών όπως αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) ή βασικό παράγοντα ανάπτυξης ινοβλάστης (bFGF) με στρωματικά και τα κύτταρα του ανοσοποιητικού [5]. Τα καρκινικά κύτταρα χειραγωγήσουν GPCRs να προσελκύσει ενδοθηλιακά κύτταρα και να τους οδηγήσει να εισβάλει η μάζα του όγκου, σχηματίζοντας έτσι νέα πλοία για την παροχή θρεπτικών ουσιών και οξυγόνου. Πολλοί καρκίνοι μεταστάσεις σε ειδικά όργανα, τι συχνά προκαλείται από την ανώμαλη έκφραση του GPCRs σε καρκινικά κύτταρα – ειδικά υποδοχείς χημειοκινών – ταυτόχρονη με την απελευθέρωση των χημειοκινών από τα δευτερεύοντα όργανα [6]

χορήγησης φαρμάκων, απεικόνισης όγκου. και βιοδείκτες πρόβλεψη κακοήθειας είναι εφαρμογές των GPCRs να τονίσει: Ράδιο-σημασμένα πεπτίδια που συνδέονται με GPCRs θα μπορούσε να έχει ευρείες εφαρμογές για τη διάγνωση και τη θεραπεία του καρκίνου [7]. Προσδέματα που δεσμεύονται GPCRs έχουν επίσης συζευχθεί σε κυτταροτοξικούς παράγοντες να στοχεύουν ειδικώς κακοήθη κύτταρα που υπερεκφράζουν αυτούς τους υποδοχείς, ως εκ τούτου μειώνοντας τις παρενέργειες [8]. Επιπλέον, GPCRs μπορεί να είναι πολύτιμη βιοδεικτών για τη διάγνωση του καρκίνου, όπως αποδεικνύεται από μελέτες σε καρκίνο του προστάτη [9].

Ως εκ τούτου, έχουμε ως στόχο να (i) την αξιολόγηση που εκφράζονται διαφορικά GPCRs σε κομβικό αρνητική έναντι κομβικό θετική εντερικού τύπου γαστρικού καρκινώματος από τεχνική array GeneChip. (Ii) Η μεταγραφή υποψηφίων γονιδίων ελέγχθηκε από αλυσίδας πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής αντίδραση σε πραγματικό χρόνο (real-time RT-PCR). Αξιολογήσαμε τη μετάφραση και histoanatomical διανομή του CXCL12 χημειοκίνης και αντίστοιχο υποδοχέα χημειοκίνης του CXCR4 σε μια μεγάλη σειρά από 347 δείγματα γαστρικού καρκινώματος ανοσοϊστοχημικά χρησιμοποιώντας τον ιστό μικροσυστοιχιών τεχνολογίας, καθώς και σε 61 ταιριάζουν μεταστάσεις λεμφαδένα σε συμβατικές πλάκες (iii). Εμείς συσχετίζονται τα μεταφραστικά πρότυπα έκφρασης με μια άφθονη δέσμη κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικών του ασθενούς, συμπεριλαμβανομένης της επιβίωσης των ασθενών (iv).

Αποτελέσματα

Διαφορική γονιδιακή έκφραση στον κόμβο αρνητικό και θετικό κόμβο γαστρικό

καρκινικού ιστού

Κατ ‘αρχάς, μελετήθηκε η διαφορική έκφραση του mRNA σε μια σειρά ασθενών τύπου 6 εντερικό γαστρικού καρκίνου (3 με 3 και χωρίς μεταστάσεις λεμφαδένα) χρησιμοποιώντας το GeneChip® Human Genome U133 Plus 2.0 Array από Affymetrix οποία ανιχνεύει 47000 μεταγραφές και οι παραλλαγές καθώς επίσης και 38.500 καλά χαρακτηρισμένο ανθρώπινα γονίδια. mRNA εκχυλίστηκε και μεταγράφηκε μόνο από δείγματα ιστού που λαμβάνονται από πρωτογενείς όγκους. Ένα σύνολο 115 μεταγραφές βρέθηκαν να είναι επάνω και 219 να είναι ρυθμίζεται προς τα κάτω στον κόμβο θετικό καρκίνο του στομάχου σε σύγκριση με τον κόμβο αρνητικό γαστρικών καρκίνων (πίνακας S1). Στη συνέχεια έψαξε για διαφορικά εκφρασμένων GPCRs. Εντοπίσαμε 52 GPCRs και GPCR που σχετίζονται με τα γονίδια, τα οποία ήταν πάνω ή προς τα κάτω-ρυθμίζονται με μια φορές παράγοντα acc=GSE17187).

Real-time αντίστροφη αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μεταγραφάσης

Για σύνθεση cDNA, 2 μg ολικού RNA μεταγράφηκαν ανάστροφα χρησιμοποιώντας το Omniscript RT Kit (Qiagen). Το γονίδιο-ειδικοί εκκινητές σχεδιάστηκαν από την BioTeZ Berlin-Buch GmbH (Βερολίνο, Γερμανία). Primer αλληλουχίες ήταν ως εξής: CXCR4 5 ‘CAG CAG GTA GCA AAG TGA CG, 3’ CAG GGT TCC TTC ATG GAG TC? CXCL12 5 ‘CGA TTC TTC ΟΑΑ AGC CAT GT, 3’CAC TTG TCT GTT GTT GTT CTT CAG?