Αφηρημένο

μικροπεριβάλλον σκλήρυνση διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση. Ενώ filopodia είναι γενικά πιστεύεται ότι είναι ένα από τα κυψελοειδή mechanosensors για ανίχνευση περιβαλλοντικών ακαμψία, τα αποτελέσματα της περιβαλλοντικής ακαμψία για filopodial δραστηριότητες των καρκινικών κυττάρων παραμένουν ασαφείς. Σε αυτό το έργο, ερευνήσαμε τα filopodial δραστηριότητες των κυττάρων αδενοκαρκινώματος ανθρώπινου πνεύμονα CL1-5 καλλιεργούνται σε υποστρώματα ρυθμιζόμενους ακαμψία χρησιμοποιώντας μια νέα πλατφόρμα. Η πλατφόρμα αποτελείται από ένα οπτικό σύστημα που ονομάζεται δομημένο φωτισμό νανο-προφιλομέτρησης, η οποία επιτρέπει χρόνο έληξαν οπτικοποίηση των filopodial δραστηριότητες χωρίς επισήμανση φθορισμού. Τα υποστρώματα καλλιέργειας αποτελούνταν από πολυβινυλοχλωρίδιο αναμιγνύεται με ένα φιλικό προς το περιβάλλον πλαστικοποιητή για να δώσουν μέτρο Young που κυμαίνονται από 20 έως 60 kPa. Μελέτες κυτταρικής βιωσιμότητας έδειξαν ότι η βιωσιμότητα των κυττάρων που καλλιεργούνται επί των υποστρωμάτων ήταν παρόμοιες με εκείνες που καλλιεργήθηκαν σε μια ευρέως χρησιμοποιούμενη ελαστομερή όπως πολυδιμεθυλοσιλοξάνιο. εικόνες ζωντανών κυττάρων χρόνου έληξαν αποκτήθηκαν και οι filopodial δραστηριότητες σε απάντηση σε υποστρώματα με διάφορους αναλύθηκαν βαθμούς ακαμψίας. Οι στατιστικές αναλύσεις αποκάλυψαν ότι ο καρκίνος του πνεύμονα κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί μαλακότερο υποστρώματα φάνηκε να έχει πλέον filopodia, υψηλότερη filopodial πυκνότητες σε σχέση με τον κυτταρικό περίμετρο, και πιο αργή filopodial ρυθμούς συστολής. Παρ ‘όλα αυτά, η χρονική ανάλυση των filopodial δραστηριοτήτων αποκάλυψε ότι αν ένα filopodium αποφασίζει να παρατείνει ή να ανακαλέσει είναι καθαρά μια στοχαστική διαδικασία, χωρίς εξάρτηση από την ακαμψία του υποστρώματος. Η απόκλιση των filopodial δραστηριοτήτων μεταξύ καρκινικά κύτταρα πνεύμονα καλλιεργήθηκαν σε υποστρώματα με διαφορετικούς βαθμούς ακαμψίας εξαφανίστηκε όταν οι δραστηριότητες μυοσίνης II ανεστάλησαν με κατεργασία των κυττάρων με blebbistatin, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι filopodial δραστηριότητες συνδέονται στενά διαμορφώνονται από την δύναμη προσκόλλησης των κυττάρων. Τα δεδομένα μας αφορούν ποσοτικά filopodial δραστηριότητες των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα με την περιβαλλοντική δυσκαμψία και θα πρέπει να ρίξει φως στην κατανόηση και τη θεραπεία της εξέλιξης του καρκίνου και της μετάστασης

Παράθεση:. Liou YR, Torng W, Kao YC, Sung KB, Lee CH , Kuo PL (2014) Υπόστρωμα Δυσκαμψία Ρυθμίζει Filopodial Δραστηριότητες σε κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (2): e89767. doi: 10.1371 /journal.pone.0089767

Επιμέλεια: Chih-Hsin Tang, η Κίνα Ιατρικού Πανεπιστημίου, Ταϊβάν

Ελήφθη: 13 Ιούνη του 2013? Αποδεκτές: 26 Ιαν, 2014? Δημοσιεύθηκε: 27 Φεβρουαρίου 2014

Copyright: © 2014 Liou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς είναι ευγνώμων για τη χρηματοδοτική στήριξη στο πλαίσιο αριθμούς επιχορήγηση NSC 100-2112-M-001-022-my3 και NSC101-2220-Ε-002-011 που παρέχονται από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Ταϊβάν (https://web1.nsc.gov. tw /) και χορηγεί αριθμό 101 ΕΚ-17-Α-19-S1-174 που παρέχονται από το Υπουργείο Οικονομικών Υποθέσεων της Ταϊβάν (https://www.moea.gov.tw/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μικροπεριβάλλον ακαμψία διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου. Ακαμψίας του εξωκυτταρική μήτρα που προκύπτει από την αυξημένη διασταυρούμενη σύνδεση του κολλαγόνου εμφανίζεται κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης [1], [2]. Το ενισχυτικό πλέγμα επηρεάζει την κυτταρική κινητικότητα, κατευθύνει την μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων, και μπορεί περαιτέρω να σχετίζεται με μετάσταση οργάνου-ειδική [3]. Άκαμπτη μήτρα προάγει την σταθερότητα των κυτταρικών εστιακών προσκόλλησης, η οποία ενισχύει την ενδοκυτταρική σηματοδότηση αυξητικού παράγοντα και με τη σειρά του αυξάνει τη μεταμόρφωση κυττάρου όγκου και την ανάπτυξη [2], [4]. Για παράδειγμα, δείχθηκε πρόσφατα ότι αρκετές καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές αναπτύχθηκαν καλύτερα σε σκληρότερο υποστρώματα [5], και ότι η μείωση του stifferening μήτρας αναστέλλοντας την λυσυλο οξειδάση μεσολάβηση εγκάρσιας σύνδεσης του κολλαγόνου παρακωλύεται εξέλιξης του όγκου [6]. Η κατανόηση του πώς τα καρκινικά κύτταρα νόημα και να ανταποκριθούν στις περιβαλλοντικές δυσκαμψία θα πρέπει να παρέχουν πολύτιμες πληροφορίες για τις περιπλοκές της εξέλιξης του καρκίνου και να βοηθήσει στην βελτίωση των στρατηγικών θεραπείας.

filopodia, δάχτυλο-όπως προεξοχές στις άκρες των κυττάρων, παρατηρούνται γενικά σε πολύ μεταστατικά καρκινικά κύτταρα, όπως CL1-5, μια ιδιαίτερα επεμβατική κύτταρα ανθρώπινου αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα [7], [8]. Η μοναδική μορφολογία και πολύ δυναμικές δραστηριότητες filopodia τους κάνουν εγγενώς κατάλληλο οργανίδια για την διερεύνηση των περιβαλλοντικών ακαμψία. Filopodia τυπικά εκτείνεται και να συστέλλεται εντός χρονικού κλίμακα δεκάδων δευτερολέπτων, ενώ μεγάλο μήκος τους και την υψηλή αναλογία επιφάνειας προς όγκο επιτρέψει μια οικεία αλληλεπίδραση με το μικροπεριβάλλον. Filopodial συστολής περιλαμβάνει την ανάδρομη ροή του F-ακτίνης καθοδηγείται κυρίως από συστολή μυοσίνης II [9], ενώ οι δραστηριότητες μυοσίνη συσχετίζονται θετικά με την ακαμψία του υποστρώματος [4], [10]. Ετσι πιστεύεται ότι filopodia μπορεί να δρα ως κυτταρικός mechanosensors με διερεύνηση των περιβαλλοντικών ακαμψία στο συστολής. Πρόσφατα, το υπόστρωμα δυσκαμψία ευαίσθητη δυναμική της τΊΙοροάίβ αποδείχθηκε σε νευρικά κώνους ανάπτυξης και εξηγείται από ένα στοχαστικό μοντέλο βασίζεται στην υπόθεση «μοτέρ-συμπλέκτη» [11], [12]. Το μοντέλο προβλέπει ότι ο ρυθμός ανάδρομη ροή της μυοσίνης με γνώμονα τις αυξήσεις F-ακτίνης και των filopodial δύναμη έλξης μειώνεται με την αύξηση της ακαμψίας του υποστρώματος. Τα πειραματικά αποτελέσματα επιβεβαίωσαν ότι η filopodia αποκολληθεί από το υπόστρωμα συχνότερα με υψηλότερες ακαμψία υπόστρωμα. Εάν αυτές οι προβλέψεις και οι παρατηρήσεις μπορεί να γενικευθεί για καρκινικά κύτταρα, μπορεί κανείς να αναμένει ότι οι συνολικές filopodial δραστηριότητες ενός καρκινικού κυττάρου, όπως η διανομή των filopodial μήκος και πυκνότητα θα ήταν επίσης να ρυθμίζεται με υπόστρωμα ακαμψία. Αυτό είναι σημαντικό δεδομένου ότι η παρουσία και οι δραστηριότητες των filopodia σε καρκινικά κύτταρα πιστεύεται ότι συσχετίζεται με την ικανότητα του καρκινικού κυττάρου να σπίτι στα αιμοφόρα αγγεία και να εισβάλουν ιστών [7], [13] – [15].

Ωστόσο , τα αποτελέσματα της δυσκαμψίας του υποστρώματος για τις filopodial δραστηριότητες των καρκινικών κυττάρων παραμένουν ασαφή λόγω αρκετούς περιορισμούς τεχνική. Οι διάμετροι των filopodia τυπικά κυμαίνεται μεταξύ ενός και τρία εκατοντάδες νανόμετρα, τα οποία βρίσκονται στο περιθώριο του ορίου επίλυση των συμβατικών οπτική μικροσκοπία. Κατά συνέπεια, οι περισσότερες εικόνες ζωντανών κυττάρων σχετικά filopodial δραστηριότητες ελήφθησαν από φθορίζουσα πρωτεΐνη εμβρυονικών νευρώνων-ακτίνης-μορφομετατραπέντα, τα οποία έχουν μεγάλο filopodia σε κώνους ανάπτυξης. Ωστόσο, η αυξημένη έκφραση του επιμολυσμένα φθορισμού σύμπλοκο πρωτεΐνης-ακτίνης μπορεί να μεταβάλλει filopodial δραστηριότητες, ενώ η φωτοτοξικότητα που ασκήθηκε από το φως διέγερσης μπορεί να επηρεάσει τις δραστηριότητες των κυττάρων και να αλλάξει τη δυναμική των filopodia [16], [17].

σε αυτό το έργο, ερευνήσαμε τις επιπτώσεις της δυσκαμψίας υπόστρωμα για τις filopodial δραστηριότητες των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα CL1-5 χρησιμοποιώντας μια τεχνική που αναπτύχθηκαν πρόσφατα απεικόνισης που ονομάζεται δομημένη-φωτισμό νανο-προφιλομέτρησης (SINAP), η οποία χρησιμοποιεί τοπογραφική ευαισθησία για να ενισχύσει την αντίθεση της εικόνας της ένα filopodium σε επίπεδες επιφάνειες και επιτρέπει την ετικέτα χωρίς, χρόνος-έληξαν οπτικοποίηση των filopodial δραστηριότητες σε ρυθμό καρέ έως και 0,2 Hz [18], [19]. Για να βελτιωθεί η αντίθεση εικόνας μεταξύ filopodia και του περιβάλλοντος μέσου, πολυβινυλοχλωρίδιο (PVC) με βάση τα υλικά με υψηλούς δείκτες διάθλασης και συντονίσιμα ακαμψία προσαρμόστηκαν για καλλιέργεια κυττάρων. Η βιοσυμβατότητα των υποστρωμάτων με βάση το PVC αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία ΜΤΤ [20]. Εμείς ποσοτικά τις filopodial δραστηριότητες των μεμονωμένων κυττάρων μέσω μέτρησης της filopodial πυκνότητα (δηλαδή, ο αριθμός των filopodia ανά μονάδα μήκους των κυτταρικών περιφέρειες), η μέση filopodial μήκους, τα filopodial ποσοστά επέκταση και η αναδίπλωση, και η πιθανότητα επέκταση /ανάσυρση των μεμονωμένων filopodia , η οποία ορίζεται ως το κλάσμα του χρόνου που ένας filopodium δαπανηθεί για επέκταση /ανάσυρση. Για να καθοριστεί εάν η επίδραση της δυσκαμψίας του υποστρώματος για τις filopodial δραστηριότητες εξαρτάται από τις δραστηριότητες μυοσίνη ΙΙ, μετρήσαμε επίσης την αλλαγή των filopodial δραστηριοτήτων όταν τα κύτταρα καλλιεργούνται σε υποστρώματα με διαφορετικούς βαθμούς ακαμψίας υποβλήθηκαν σε θεραπεία με blebbistatin, έναν αναστολέα της μυοσίνης II.

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός των PVC με βάση υποστρώματα

τα υποστρώματα καλλιέργειας έγιναν από ένα μίγμα PVC και ένα φιλικό προς το περιβάλλον, καρβοξυλική τύπου πλαστικοποιητής, δι (ισοεννεάνο) κυκλοεξάνιο-1, 2-dicardoxylate (DINCH). Η ακαμψία του μίγματος συντονισμένοι με ρύθμιση της αναλογίας του PVC στον πλαστικοποιητή, ενώ οι μεγαλύτερες αναλογίες κατέληξαν σε πιο σκληρή σύνθετα υλικά. συντελεστές του Young των συνθέτων υλικών από PVC, όπως μετράται με εφαρμογή διαδοχικής συμπίεσης των χύδην υλικών, ήταν 20,2 ± 2,5 kPa (

n

= 6), 35,7 ± 0 kPa (

n = 1

), και 61,1 ± 12,9 kPa (

n

= 6) για το PVC 1:01, PVC 2:01, και PVC 3:01 αντίστοιχα. Εδώ το PVC 1:01, 2:01 και 3:01 ανατρέξτε στα σύνθετα υλικά PVC με αναλογίες PVC με πλαστικοποιητή είναι 1:01, 2:01 και 3:01 αντίστοιχα. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ακαμψία των συνθέτων υλικών PVC είναι εντός της περιοχής από τους περισσότερους ιστούς σε κακοήθεις συνθήκες [21].

Η αρχή λειτουργίας του SINAP απαιτεί ότι το υπόστρωμα καλλιέργειας έχει διαφορετικό δείκτη διάθλασης από εκείνη των κυττάρων σε βελτιώσει τον λόγο σήματος προς θόρυβο των εικόνων. Οι δείκτες διάθλασης των σύνθετων υλικών PVC προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το νέο ψηφιακό ολογραφική μικροτομογραφία όπως περιγράφεται πρόσφατα [22]. Οι μετρηθείσες δείκτες διάθλασης του PVC και του πλαστικοποιητή ήταν 1.53-1.57 και 1.47, αντίστοιχα. Έτσι, οι προκύπτουσες δείκτες διάθλασης του σύνθετου PVC κυμαινόταν από 1,47 έως 1,53, η οποία είναι πολύ κοντά σε εκείνη του γυαλιού (-1.5) και υψηλότερο από εκείνο των κυττάρων (~1.36) [23].

δοκιμή κυτταρικής βιωσιμότητας χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί αν η βιοσυμβατότητα των σύνθετων υλικών PVC είναι συμβατή με άλλες συμβατές υποστρώματα που χρησιμοποιούνται συνήθως για καλλιέργεια κυττάρων. Διενεργήσαμε δοκιμασίες ΜΤΤ για κύτταρα αδενοκαρκινώματος ανθρώπινου πνεύμονα CL1-5 καλλιεργήθηκαν σε γυαλί, τα σύνθετα PVC, πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου (ΡΑ), και πολυ (διμεθυλο) σιλοξάνη (PDMS). Το Σχήμα 1 δείχνει χαρακτηριστικές εικόνες των κυττάρων που καλλιεργήθηκαν για τα διάφορα υποστρώματα. Η δοκιμασία ΜΤΤ ποσοτικοποιεί μεταβολικά δραστικών κυττάρων ως η οπτική πυκνότητα (OD) στα 570 nm. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2, τα κύτταρα καλλιεργούνται στο γυαλί και ΡΑ γέλη είχε τη μεγαλύτερη βιωσιμότητα σε σύγκριση με άλλα ελαστομερή υποστρώματα. Οι μέσες βιωσιμότητες των κυττάρων καλλιεργείται στις σύνθετα PVC και ότι από τα υποστρώματα PDMS ήταν παρόμοια. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στη βιωσιμότητα των κυττάρων μεταξύ του PVC 3:01, 2:01, και 1:01. Αυτό υποδεικνύει ότι η βιοσυμβατότητα των σύνθετων υλικών PVC είναι παρόμοια με εκείνη των άλλων που χρησιμοποιούνται συνήθως ελαστομερή υποστρώματα και δεν επηρεάζονται από μεταβολή της αναλογίας PVC προς τον πλαστικοποιητή.

Το PVC 1:01, 2:01, και 3 :1 αναφέρονται στα σύνθετα υλικά PVC με αναλογίες PVC με πλαστικοποιητή είναι 1:01, 2:01 και 3:01 αντίστοιχα? ΡΑ και PDMS είναι σύντμηση για πολυακρυλαμιδίου και πολυ (διμεθυλο) σιλοξάνιο αντίστοιχα. Κλίμακα ράβδου = 100 μm.

Η

Η βαφή έχει ένα πορφυρό χρώμα και ποσοτικοποιήθηκε από την οπτική απορρόφηση στα 570 (

n

= 8, 5, 4, 4, 3, και 3 για το γυαλί, PVC 3:01, PVC 2:01, PVC 1:01, PA τζελ, και PDMS υποστρώματος αντίστοιχα).

η

Επιδράσεις της δυσκαμψίας υπόστρωμα για filopodial το μήκος και την πυκνότητα

Για να καθοριστεί εάν οι filopodial δραστηριότητες επηρεάζονται από την ακαμψία του υποστρώματος, τα CL1-5 κύτταρα σπάρθηκαν πάνω στο PVC 1:01, PVC 3:01, και το γυαλί υποστρώματα. Τα υποστρώματα επικαλύφθηκαν με ινωδονεκτίνη πριν κύτταρο σπορά για τη διευκόλυνση της προσκόλλησης των κυττάρων. Η ανοσοχρώση έναντι του επικαλυμμένου ινωδονεκτίνης επιβεβαίωσε ότι η απορροφούμενη φιμπρονεκτίνη είχε παρόμοιες συγκεντρώσεις επιφάνεια κατά μήκος των τριών ειδών υποστρώματα? οι αναλογίες της μέσης έντασης φθορισμού του βάφονται φιμπρονεκτίνης προς το φόντο υπόστρωμα ήταν 1,64, 1,59, και 1,41 για το PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινα υποστρώματα αντίστοιχα. συντελεστές του Young των σύνθετων PVC ήταν περίπου 60 kPa και 20 kPa για το PVC 3:01 και 1:01 αντίστοιχα, ενώ ο συντελεστής Young του γυαλιού είναι της τάξης των GPa. εικόνες ζωντανών κυττάρων αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα SINAP. Τυπικές SINAP εικόνες για τα καρκινικά κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο PVC 1:01, 3:01 PVC, και υπόστρωμα γυαλιού που φαίνεται στο Σχ. 3, στην οποία φιλοπόδια χαρακτηρίζονται ως λεπτή, φωτεινό προεξοχές με διάφορα μήκη σε κυτταρικό περιφέρειες.

bar Κλίμακα = 5 μm.

Η

Παρατηρήσαμε ότι ο αριθμός των filopodia ανά κύτταρο κυμαίνονταν από 50 έως 70. για τα μεμονωμένα κύτταρα, εντοπίσαμε όλα τα ορατά τΊΙοροάίβ και υπολογίζεται η πυκνότητα και το μέσο μήκος των filopodia, που αναφέρεται ως

στ

δ και

στ

L αντίστοιχα. Η filopodial πυκνότητας ορίζεται ως ο λόγος του αριθμού filopodia στην περίμετρο του κυττάρου. Το Σχήμα 4Α δείχνει τη μεταβολή της

f

d δείγμα από κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινα υποστρώματα, αντιστοίχως. Τα κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο PVC 1:01 είχε το μεγαλύτερο

f

d (μέσος όρος = 0,55 μm

-1, αριθμός κυττάρων = 33), που ακολουθείται από τα κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο PVC 3: 1 (μέσος όρος = 0,31 μm

-1, αριθμός κυττάρων = 18) και ότι καλλιεργούνται στη γυάλινη επιφάνεια (μέσος όρος = 0,31 μm

-1, αριθμός κυττάρων = 43). Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι υπάρχουν σημαντικές διαφορές μεταξύ των αποτελεσμάτων από το PVC 1:01 και 3:01 (

σ

= 4,4 × 10

-9), και το PVC 1:01 και το γυαλί (

σ

= 1,1 × 10

-9), ενώ δεν υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ των αποτελεσμάτων του PVC 3:01 και το γυαλί (

σ

= 0,75). Σταθερά, όπως φαίνεται στο Σχ 4Β, η

f

L των κυττάρων που καλλιεργούνται για το PVC 1:01 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη των κυττάρων που καλλιεργούνται για το PVC 3:01 (

p

= 8.8 × 10

-4) και το γυαλί (

σ

= 2.2 × 10

-4), ενώ δεν υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ εκείνου του PVC 3:01 και το γυαλί (

σ

= 0,67). Τα μέσα

στ

L ήταν 3,77, 3,08 και 3,03 μm για το PVC 1:01, PVC 3:01, και το γυαλί αντίστοιχα. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι όταν τα καρκινικά κύτταρα καλλιεργούνται σε ελαστομερή υποστρώματα, τα κύτταρα αναπτύσσονται σε μαλακότερο υπόστρωμα έχουν περισσότερες και πλέον filopodia.

Η filopodial πυκνότητα ορίστηκε ως ο αριθμός των filopodia ανά μονάδα μήκους της κυτταρικής περίμετρο. Το filopodial μήκους κατά μέσο όρο από όλα τα ορατά filopodia του κυττάρου. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο των μεταβλητών και τα λάθη δηλώνουν τις τυπικές αποκλίσεις υπολογίζονται από 33, 18, και 43 κυττάρων για την PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινα υποστρώματα αντίστοιχα. Σημαντικές διαφορές βρέθηκαν μεταξύ των στοιχείων του PVC 1:01 και 3:01, και PVC 1:01 και γυαλί με αυτό ** υποδεικνύει

σ

& lt?. 0.01

Η

Εφέ ακαμψίας υποστρώματος στη δυναμική των filopodial επέκτασης και σύμπτυξης

Σας ρώτησε αν η τΊΙοροάίβ έχουν διαφορετικά ποσοστά και πιθανότητες να επεκτείνουν ή να υποχωρούν όταν τα καρκινικά κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε υποστρώματα διαφόρων βαθμών ακαμψίας. Συγκεκριμένα, εμείς αιτιολογημένη ότι η τΊΙοροάίβ των καρκινικών κυττάρων που καλλιεργούνται σε σκληρή υποστρώματα μπορεί να έχουν μεγαλύτερη τάση να υποχωρούν, γεγονός που οδηγεί σε μικρότερη

στ

D και ένα μικρότερο

στ

L, όπως φαίνεται στο Σχ. 4. Για την ανάλυση της επανατύλιξης και την παράταση της δυναμικής των μεμονωμένων filopodia, χρονικά άνευ αντικειμένου SINAP εικόνες των ζωντανών κυττάρων πάρθηκαν ένα πλαίσιο κάθε 10 δευτερόλεπτα για πέντε λεπτά. Μόνο τΊΙοροάίβ διήρκεσε περισσότερο από ένα λεπτό (δηλαδή, εμφανίζεται στις 6 συνεχόμενα καρέ) έχουν παρακολουθούνται και οι στιγμιαίες filopodial μήκη μετρήθηκαν από μεμονωμένα καρέ. Ένα αντιπροσωπευτικό μήκος χρονική προφίλ μιας παρακολουθούνται filopodium απεικονίζεται στο Σχ. 5. Η filopodium είχε αρχικό μήκος 0,92 μm κατά την έναρξη της παρακολούθησης, συνεχώς επεκτείνεται για 100 δευτερόλεπτα, και ανασυρθεί σε 1,02 μm στο τέλος της λήψης εικόνας. Υπολογίσαμε τα ποσοστά μεταβολής μήκος μεταξύ δύο διαδοχικών πλαισίων και αναφέρεται θετικές αλλαγές ως επέκταση και αρνητική, καθώς τα ποσοστά ανάκλησης. Αυτό απέδωσε ένα σύνολο συντελεστών επέκταση /ανάσυρση σχετίζονται με διάφορες filopodial μήκη. Για παράδειγμα, τα ποσοστά επέκτασης για το filopodium φαίνεται στο Σχ. 5 είναι 0,004, 0,04, και 0,001 μm⋅s

-1 στο filopodial μήκος 0,92, 1,14 και 1,79 μm αντίστοιχα. Εμείς παρακολουθούνται 51, 59, και 34 filopodia για τα κύτταρα που καλλιεργούνται επί του PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινα υποστρώματα αντίστοιχα. Υποθέσαμε ότι τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στο ίδιο είδος υποστρωμάτων έχουν παρόμοια filopodial δυναμική και συγκεντρώθηκαν τα δεδομένα ρυθμού ανάλογα με τον τύπο των υποστρωμάτων καλλιέργειας. Για να διευκολυνθεί η σύγκριση των δεδομένων ρυθμού σε διάφορα μήκη filopodial, εμείς ανάμικτες τα δεδομένα με μια σειρά από κλίμακες μήκους που χωρίζονται από την ίδια θέση. Εμείς επιλέξαμε πρώτα 2 μm όπως το χάσμα? δηλαδή μεταξύ 1 αναφέρεται filopodial μήκος ≥0 και & lt? 2 μm, εύρος 2 αναφέρεται filopodial μήκος ≥2 μm και & lt? 4 μm, και ούτω καθεξής. Το σχήμα 6 συνόψισε τη διακύμανση των δεδομένων ρυθμού από τον καθορισμένο κλίμακες μήκους για τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί τα τρία είδη υποστρωμάτων. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο των δεδομένων ρυθμού ανάμικτες στο εύρος μήκους και τα σφάλματα δηλώνουν τα τυπικές αποκλίσεις. Σε γενικές γραμμές, τα ποσοστά επέκταση παρουσίασαν μια τάση να μειώνεται καθώς το filopodial μήκος αυξηθεί, ενώ τα ποσοστά συστολής φάνηκε να αυξάνει καθώς το μήκος αυξάνεται, με ένα τοπικό μέγιστο σε μήκος 11, 7, και 7 μm για τα κύτταρα που καλλιεργούνται επί του PVC 1:01, PVC 3:01, και το γυαλί υποστρώματα αντίστοιχα. Παρατηρήσαμε παρόμοιες τάσεις όταν assorting τα δεδομένα χρησιμοποιώντας διαφορετικά κενά όπως 1 ή 0.5 μm για τις κλίμακες μήκους. Σημειώστε ότι στο Σχ. 6, τα δεδομένα ποσοστό των κυττάρων σε μαλακότερο υποστρώματα διευρυμένοι μεγαλύτερες κλίμακες μήκους, η οποία είναι συνεπής με τα ευρήματα φαίνεται στο Σχ. 4Β.

Το κύτταρο καλλιεργήθηκε σε γυάλινο υπόστρωμα. Το filopodial μήκος ήταν 0.92 μm κατά την έναρξη της λήψης εικόνας, συνεχώς επεκτείνεται σε 1,81 μm, και ανασυρθεί σε 1,02 μm στο τέλος της λήψης εικόνας. Οι εικόνες SINAP που αντιστοιχούν στα δεδομένα μήκους σημειώνονται με κύκλους που φαίνονται στη δεξιά και σχολιάζονται με το χρόνο εγγραφής. Η παρακολουθούνται filopodium τονίστηκε από το βέλος στο 1

ου εικόνας.

Η

(Α), (Β) και (Γ) αναπαριστά τη σχέση μεταξύ των συντελεστών επέκτασης και filopodial μήκη για το κύτταρα καλλιεργούνται στην PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινο υπόστρωμα αντίστοιχα? (D), (Ε), και (F) δείχνουν παραλλαγή των συντελεστών συστολής σε σχέση με διάφορα μήκη filopodial για τα κύτταρα που καλλιεργούνται επί του PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινο υπόστρωμα αντίστοιχα. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο των δεδομένων ρυθμού ανάμικτες στις κλίμακες μήκους και τα σφάλματα δηλώνουν τα τυπικές αποκλίσεις. Τα δεδομένα ανάμικτες σε ένα σύνολο κλίμακες μήκους που χωρίζονται από 2 μm. Οι αριθμοί των filopodia παρακολουθούνται για τη μέτρηση του ρυθμού είναι 51, 59, και 34 για το PVC 1:01, PVC 3:01, και υποστρώματα γυαλιού, αντίστοιχα.

Η

Το υπόστρωμα ακαμψία επηρεάζεται σημαντικά τα ποσοστά ανάκλησης όταν filopodial μήκος υπερβεί μια ορισμένη κλίμακα. Βρήκαμε ότι η σημασία εμφανίστηκε όταν η κλίμακα ορίστηκε να είναι 4 μm, το οποίο είναι γύρω από τα μέσα της

f

L φαίνεται στο Σχ. 4Β. Για κάθε παρακολουθούνται filopodium, θα εξεταστούν από τα δεδομένα ρυθμού μετράται σε filopodial μήκος ≥4 μm και υπολογίζονται τα μέσα. Εμείς που αναφέρονται στα μέσα της επέκτασης και τα ποσοστά ανάκλησης ως

V

Ε και

V

R αντίστοιχα. Εμείς συγκεντρώθηκαν το

V

Ε και

V

R υπολογίζεται από κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο ίδιο είδος του υποστρώματος και ανάμικτες τα δεδομένα σε ένα σύνολο εύρος του ποσοστού που ήταν εξίσου διαχωρίζονται από 0,02 μm⋅s

-1. Η συμβαίνουν πιθανότητα μιας συγκεκριμένης σειράς ρυθμό Έτσι υπολογίστηκε με τον υπολογισμό του κλάσματος των δεδομένων ανάμικτες στο ενδιαφέρει φάσμα. Το Σχήμα 7 απεικονίζει την κατανομή πιθανοτήτων των συντελεστών επέκτασης και συστολής εκτιμήθηκε για τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί τα τρία είδη υποστρωμάτων. Τα στερεά, διακεκομμένες, και διακεκομμένες γραμμές αντιπροσωπεύουν την κανονική κατανομή ταιριάζει με τα στοιχεία του γυαλιού, PVC 3:01, και PVC 1:01 αντίστοιχα. Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ του

V

E για τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί τρεις υποστρώματα (

σ

= 0,17). Τα μέσα

V

Ε ήταν 0.052, 0.064, και 0.054 μm⋅s

-1 για τα κύτταρα που καλλιεργούνται επί του PVC 1:01, 3:01 PVC, και το γυάλινο υπόστρωμα αντίστοιχα . Ωστόσο, η

V

R για κύτταρα καλλιεργημένα στην PVC 1:01 ήταν σημαντικά βραδύτερη από εκείνη του γυαλιού (

σ

= 0.02), ενώ οι διαφορές του

V

R μεταξύ των κυττάρων που καλλιεργούνται επί του PVC 1:01 και το 3:01 PVC (

σ

= 0,31), και ότι το PVC 3:01 και υάλου (

p

= 0.05) δεν ήταν σημαντικές. Τα μέσα

V

R ήταν 0.059, 0.063, και 0.069 μm⋅s

-1 για τα κύτταρα που καλλιεργούνται επί του PVC 1:01, 3:01 PVC, και το γυάλινο υπόστρωμα αντίστοιχα . Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η τΊΙοροάίβ των κυττάρων που καλλιεργούνται σε μαλακότερο υποστρώματα φαίνεται να υποχωρούν πιο αργά όταν η filopodial μήκος υπερβαίνει το μέσο μήκος.

Τα στοιχεία ανάμικτες σε μια σειρά από περιοχές ρυθμό που ήταν εξίσου χωρίζονται από 0,02 μm⋅s

-1. Τα στερεά, διακεκομμένες, και διακεκομμένες γραμμές αντιπροσωπεύουν την κανονική κατανομή ταιριάζει με τα στοιχεία του γυαλιού, PVC 3:01, και PVC 1:01 αντίστοιχα. Οι συντελεστές προσδιορισμού (δηλαδή,

R-

τετράγωνο) για τα τρία εξαρτήματα είναι & gt?. 0.9

Η

Για να ποσοτικοποιηθεί η τάση της filopodial ανάκλησης όταν τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε υποστρώματα ιδιαίτερη δυσκαμψία, ορίσαμε την πιθανότητα ότι ένα filopodium προτιμά να ανακαλέσει, όπως (1) όπου

t

Ε και

t

R υποδηλώνουν τα κλάσματα του χρόνου ότι η filopodium δαπανηθεί για επέκτασης και σύμπτυξης αντίστοιχα. Δεδομένου ότι ήμασταν ενδιαφέρονται κυρίως για τις filopodial δυναμική που επηρεάζουν τα μέσα του

στ

L, μόνο τα διαχρονικά δεδομένα μετά την filopodial μήκος που υπερβαίνει θεωρήθηκαν 4 μm και οι περίοδοι που η filopodial μήκους παρέμεινε στάσιμη εξαιρέθηκαν . Σημειώστε ότι η επέκταση και ανάσυρση πιθανότητα της filopodium είναι το ίδιο αν

P

R είναι ίσο με 0,5. Το σχήμα 8 δείχνει την κατανομή της πιθανότητας της

P

R υπολογίζεται από τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί τρεις τύπους υποστρωμάτων. Πάλι, τα στερεά, διακεκομμένες, και διακεκομμένες γραμμές αντιπροσωπεύουν κανονική κατανομή ταιριάζει με τα στοιχεία από γυαλί, PVC 3:01, και PVC 1:01 αντίστοιχα. Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ του

P

R των κυττάρων που καλλιεργούνται για τα τρία είδη υποστρώματος (

σ

= 0,54). Τα μέσα

P

R ήταν 0,48, 0,48 και 0,47 για το PVC 1:01, PVC 3:01, και το γυαλί αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι αν ένα filopodium αποφασίζει να παρατείνει ή να ανακαλέσει είναι καθαρά μια στοχαστική διαδικασία, χωρίς εξάρτηση από την ακαμψία του υποστρώματος. Έτσι, η διακύμανση του

στ

L μεταξύ των υποστρωμάτων διαφόρων βαθμών ακαμψίας προέκυψε κυρίως από τις ποικίλες ποσοστά filopodial ανάκλησης, η οποία προήλθε κυρίως από τη συστολή μυοσίνη ΙΙ και εξαρτάται από την ακαμψία του υποστρώματος.

η τάση συστολής ορίστηκε ως το κλάσμα χρόνου που ο filopodium δαπανηθεί για σύμπτυξη. Τα στερεά, διακεκομμένες, και διακεκομμένες γραμμές αντιπροσωπεύουν την κανονική κατανομή ταιριάζει με τα στοιχεία του γυαλιού, PVC 3:01, και PVC 1:01 αντίστοιχα. Οι συντελεστές προσδιορισμού (δηλαδή,

R-

τετράγωνο) για τα τρία εξαρτήματα είναι & gt?. 0.9

Η

θεραπεία Blebbistatin μεταβάλλει filopodial δραστηριότητες

Από την ακαμψία του υποστρώματος ρυθμίζει τη δύναμη της προσκόλλησης των κυττάρων και μυοσίνης δραστηριότητες II [10], αναρωτηθήκαμε αν η παρατηρούμενη διαφορά των filopodial μήκος και την πυκνότητα των κυττάρων που καλλιεργούνται σε υποστρώματα από διαφορετικούς βαθμούς σκληρότητας εξαφανίζεται όταν ανεστάλησαν οι δραστηριότητες της μυοσίνης. Εξετάσαμε τα πρώτα βιωσιμότητες και filopodial δραστηριότητες των καρκινικών κυττάρων σε επεξεργασία με blebbistatin διαφόρων συγκεντρώσεων. Τα κύτταρα CL1-5 καλλιεργήθηκαν πάνω σε γυάλινα υποστρώματα για 24 ώρες και εκτέθηκαν σε διαλύματα που περιέχουν 10-30 μΜ blebbistatin για 1 ώρα για να αναστείλει τις δραστηριότητες μυοσίνη, όπως αναφέρεται σε πρόσφατη βιβλιογραφία [24]. Μελέτες βιωσιμότητας κυττάρων με χρήση της ανάλυσης ΜΤΤ αποκάλυψε ότι η κατεργασία του 10-30 μΜ blebbistatin δεν έφερε το CL1-5 κύτταρα σημαντική τοξικότητα (Εικ. 9), ενώ η filopodial πυκνότητα και το μέσο μήκος αυξάνεται με την αύξηση blebbistatin συγκεντρώσεις (σχ. 10) . Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι η filopodial πυκνότητα των καρκινικών κυττάρων που έλαβαν θεραπεία με 30 μΜ blebbistatin ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από αυτή που έλαβαν θεραπεία με 0 (

σ

= 0.006) και 10 μΜ blebbistatin (

σ

= 0,03), αλλά δεν υπήρχε καμία σημαντική διαφορά μεταξύ αυτού του κατεργασμένου με 0 και 10 μΜ (

σ

= 0,1). Ομοίως, η filopodial μήκος των καρκινικών κυττάρων που έλαβαν θεραπεία με 30 μΜ blebbistatin ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη που αντιμετωπίζονται με 0 (

σ

= 3.2 × 10

-5) και 10 μΜ blebbistatin (

p

= 0,02), και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ εκείνου που έλαβαν θεραπεία με 0 και 10 μΜ (

σ

= 0,01).

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν πάνω σε γυάλινα υποστρώματα για 24μM DMSO ή blebbistatin για 1 ώρα (

n

= 5 για κάθε συγκέντρωση). Οι οπτικές πυκνότητες των κυττάρων χωρίς εφαρμογή των αντιδραστηρίων που αναφέρονται ως έλεγχο (

n

= 8). Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο των μεταβλητών και τα λάθη υποδηλώνουν τις τυπικές αποκλίσεις.

Η

Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο των μεταβλητών και τα λάθη δηλώνουν τις τυπικές αποκλίσεις υπολογίζονται από 43, 24, και 31 κύτταρα επεξεργασμένα με 0, 10, και 30 μΜ blebbistatin αντίστοιχα. Το σήμα * υποδηλώνει

σ

& lt?. 0.05

Η

Για την επίτευξη σημαντικής δέσμευσης των δραστηριοτήτων της μυοσίνης, καλλιεργήσαμε τις CL1-5 κύτταρα στο PVC 1:01, 3:01 PVC , και τα υποστρώματα γυαλιού και κατεργασία των κυττάρων με ένα διάλυμα 30 μΜ blebbistatin για 1 ώρα. Το Σχήμα 11 δείχνει την αντιπροσωπευτική φωτεινό πεδίο και ανοσοχρώση εικόνες των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε αγωγή και δεν αντιμετωπίζεται με blebbistatin. Υπολογίσαμε τον αριθμό των χρωματισμένων βινκουλίνης ανά κύτταρα. Φαίνεται ότι blebbistatin θεραπεία αυξημένη κυτταρική στρογγυλοποίηση σε όλα τα τρία είδη των υποστρωμάτων και ενισχυμένη filopodial επιμήκυνση και διακλάδωση, αλλά μείωσε τον αριθμό των εστιακών συμφύσεων για κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πιο σκληρή υποστρώματα. Η μέση και τυπική απόκλιση του αριθμού βινκουλίνης ανά κύτταρο ήταν 53,2 ± 28,3, 93,6 ± 30,3, και 155,8 ± 35,5 για τα κύτταρα τα καλλιεργημένα στην PVC 1:01 (

n

= 5), PVC 3:01 (

n

= 5), και υπόστρωμα γυαλιού (

n

= 8) χωρίς bleddistain θεραπεία. Μετά bleddistain έκθεση, οι αριθμοί αλλάζουν προς 40,5 ± 13,6, 51,7 ± 19,5, και 101,6 ± 22,3 για τα κύτταρα τα καλλιεργημένα στην PVC 1:01 (

n

= 3), PVC 3:01 (

n

= 4), και υπόστρωμα γυαλιού (

n

= 9).

(Α), (Β), και (C) είναι φωτεινές εικόνες πεδίο κύτταρα κατεργασμένα με κανονικό μέσο καλλιέργειας ως έλεγχος? (D), (Ε), και (F) είναι αντίστοιχες εικόνες ανοσοφθορισμού τους πυρήνα (μπλε) και βινκουλίνης (πράσινο)? (G) – (L) δείχνουν το φωτεινό πεδίο και αντίστοιχες εικόνες immunofluroresence των κυττάρων σε επεξεργασία με 30 μΜ blebbistatin για μία ώρα για να αναστείλει μυοσίνης δραστηριότητες II. μπαρ κλίμακας = 10 μm.

Η

Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι μετά εκτέθηκαν σε 30 μΜ blebbistatin για μία ώρα, η διαφορά των

στ

D μεταξύ των κυττάρων που καλλιεργούνται για το PVC 1:01 και 3:01 PVC έγινε ασήμαντη (

σ

= 0,11), και το

σ

αξία για τη σημασία του

στ

D διαφορά μεταξύ εκείνου σχετικά με το PVC 1:01 και το γυαλί μειώθηκαν (

σ

= 0,0069) σε σύγκριση με ότι χωρίς τη θεραπεία blebbistatin (

σ

= 1,1 × 10

-9). Επιπλέον, blebbistatin θεραπεία αυξήθηκε σημαντικά

στ

D, με μια πιο σημαντική αύξηση σε κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο PVC 3:01 (

σ

= 0,046 για το PVC 1:01,

σ

= 2.1 × 10

-6 για την PVC3:1, και

σ

= 0,006 για το γυαλί). Οι αριθμοί των κυττάρων στο δείγμα ήταν 10, 13, και 31 για την PVC 1:01, 3:01 PVC, και το γυάλινο αντίστοιχα. Σχήμα 12Α συνοψίζει την αλλαγή του

f

D για κύτταρα που εκτίθενται σε blebbistatin για μία ώρα. Σημειώστε ότι τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ. 4Α απεικονίσθηκαν δίπλα σε αυτές τις ράβδους για σύγκριση

Οι λευκές ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο των δεδομένων που μετράται από τα κύτταρα χωρίς θεραπεία blebbistatin (δηλαδή, τα δεδομένα στο Σχ. 4).? οι γκρίζες μπάρες υποδηλώνουν τα μέσα των στοιχείων που μετρήθηκαν από τα κύτταρα με blebbistatin θεραπεία? και λάθη καθορίζουν τις τυπικές αποκλίσεις των δεδομένων. Οι αριθμοί των κυττάρων που έλαβαν θεραπεία με blebbistatin είναι 10, 13, και 31 για την PVC 1:01, 3:01 PVC, και γυάλινα υποστρώματα αντίστοιχα. # Και ## δηλώνουν

σ

& lt? 0,05 και

σ

& lt? 0,01, αντίστοιχα, για τη διαφορά μεταξύ των δεδομένων που προέρχονται από το ίδιο είδος των υποστρωμάτων με και χωρίς blebbistatin θεραπεία? * Και ** είναι σχολιασμένο για

σ

& lt? 0,05 και

σ

& lt? 0,01, αντίστοιχα, για τη διαφορά μεταξύ των δεδομένων που προέρχονται από διαφορετικό είδος των υποστρωμάτων με και χωρίς blebbistatin θεραπεία. Να σημειωθεί ότι για τα κύτταρα, χωρίς να blebbistatin θεραπεία, βρέθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των στοιχείων του PVC 1:01 και PVC 3:01, και μεταξύ εκείνου του PVC 1:01 και γυαλί? για τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με blebbistatin, βρέθηκε σημαντική διαφορά μόνο μεταξύ των στοιχείων του PVC 1:01 και γυαλί.

Η

Το

στ

L των κυττάρων που καλλιεργούνται σε υποστρώματα διαφορετικούς βαθμούς ακαμψίας παρουσίασαν παρόμοια μεταβολή μετά την επεξεργασία 30 μΜ blebbistatin (Σχ. 12Β). Και πάλι, τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ. 4Β απεικονίσθηκαν δίπλα σε αυτούς μετά την blebbistatin θεραπεία για σύγκριση. Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι η θεραπεία blebbistatin αύξησε σημαντικά το

στ

L για τα κύτταρα στο PVC 3:01 (

σ

= 0,005) και το γυαλί (

p

= 3.2 × 10

-5)? ενώ η αλλαγή του

στ

L δεν ήταν σημαντικό για τα κύτταρα στο PVC 1:01 (

σ

= 0,48). Οι μέσοι όροι του

f

L ήταν 4,32 μm, 3,95 μm, και 4,98 μm για την PVC 1:01, 3:01 PVC, και το γυάλινο αντίστοιχα. Η διαφορά του

στ

L μεταξύ των κυττάρων που καλλιεργούνται σε υποστρώματα από διαφορετικούς βαθμούς σκληρότητας έγινε ασήμαντο μετά τη θεραπεία blebbistatin (

σ

= 0,12). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η παρατηρούμενη υπόστρωμα δυσκαμψία ευαίσθητες δραστηριότητες του filopodia ήταν τουλάχιστον εν μέρει διαμορφωμένο από τη δραστηριότητα μυοσίνη ΙΙ.

Συζήτηση

Σε αυτό το έργο, έχουμε ποσοτικά τη σχέση μεταξύ των filopodial δραστηριότητες πνεύμονα καρκινικά κύτταρα και ακαμψία υπόστρωμα χρησιμοποιώντας μία τεχνική απεικόνισης ετικέτα-free. Βρήκαμε ότι η ακαμψία του υποστρώματος ρυθμίζεται το filopodial μήκος και πυκνότητα σε καρκινικά κύτταρα πιθανώς μέσω επηρεάζουν την filopodial ποσοστό ανάκλησης, η οποία κατά κύριο λόγο διαμορφώνεται από ποικίλες δραστηριότητες μυοσίνης.