Αφηρημένο

Ιστορικό

Τα microRNAs (miRNAs), ενδογενούς μικρά μη-κωδικοποίησης RNAs, είναι σταθερά ανιχνεύεται στο ανθρώπινο πλάσμα. Η έγκαιρη διάγνωση του καρκίνου του στομάχου (GC) είναι πολύ σημαντικό να βελτιωθεί η επίδραση της θεραπείας και να παρατείνει την επιβίωση των ασθενών. Έχουμε ως στόχο να προσδιορίσει κατά πόσον τέσσερις miRNAs (miR-223, miR-21, miR-218 και miR-25) που συνδέονται στενά με την ογκογένεση ή μετάστασης του GC μπορεί να χρησιμεύσει ως νέο δυναμικό βιοδεικτών για την ανίχνευση GC.

Μεθοδολογία

Εμείς υπολογίζονται αρχικά τα επίπεδα των τεσσάρων miRNAs πλάσματος σε 10 ασθενείς GC και 10 υγιείς μάρτυρες από ποσοτική ανάστροφης μεταγραφής αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qRT-PCR), και στη συνέχεια, σε σύγκριση με τα αποτελέσματα miRNA πλάσματος με τις εκφράσεις σε καρκινικούς ιστούς από οκτώ ασθενείς GC. Τέλος, η παρουσία του miR-223, miR-21 και miR-218 στο πλάσμα ελέγχθηκε σε 60 ασθενείς GC και 60 υγιείς μάρτυρες, και αναλύθηκαν οι περιοχές κάτω από το χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) καμπύλη αυτών των miRNAs.

Αποτελέσματα

Βρήκαμε ότι τα επίπεδα πλάσματος του miR-223 (

P

Στο μικροπεριβάλλον GC, πολλά που σχετίζονται με όγκους κύτταρα, όπως τα μακροφάγα, μυελοειδή κύτταρα, δενδριτικά κύτταρα και Τ κύτταρα, έχουν την ικανότητα να απελευθερώνουν εξωσώματα, η οποία shuttle τόσο mRNA και microRNA σε άλλα κύτταρα ή κυκλοφορία [26]. Για πρώιμου σταδίου GC, miR-223 μπορεί να είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε μερικά κύτταρα που σχετίζονται με όγκους και να παραδοθεί στο περιφερικό αίμα μέσω exosmes. Πρόσφατα στοιχεία έδειξαν ότι miR-223 που απελευθερώνονται από τα μακροφάγα ήταν μπαλάκι σε κύτταρα καρκίνου του μαστού και ρυθμίζεται η διεισδυτικότητα των καρκινικών κυττάρων του μαστού [27]. Έχει αποδειχθεί ότι η αποκατάσταση του miR-218 καταστέλλει έκφραση Robo1 και αναστέλλει γαστρική εισβολή των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση

in vitro

και

in vivo

[17]. Η υπερέκφραση του miR-218 οδήγησε σε μία σημαντικά μειωμένη δραστηριότητα κυτταρικής ανάπτυξης και κυτταρικής εισβολής των κυττάρων AGS σε σύγκριση με εκείνη του ελέγχου [20]. Gao C et al [21] ανέφεραν ότι τα επίπεδα έκφρασης του miR-218 μειώθηκαν σημαντικά σε ιστούς GC, σε H. pylori λοίμωξη από γαστρικό βλεννογόνο, και H. pylori-μολυσμένα κύτταρα AGS. Στη μελέτη μας, τα επίπεδα του miR-218 στο πλάσμα δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ασθενών GC με λοίμωξη Hp και εκείνων που δεν έχουν, ή μεταξύ υγιών ατόμων ελέγχου με λοίμωξη Hp και εκείνους που δεν έχουν. Τα επίπεδα του miRNAs θα μπορούσε να είναι διαφορετική μεταξύ του πλάσματος και GC γαστρικό βλεννογόνο. MiR-21 υπερεκφράζεται σε διάφορους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [28], ο καρκίνος του πνεύμονα [29], καρκίνος του παχέος εντέρου [30], και GC [18], [19]. Παρά το γεγονός ότι Tsujiura et al [12] ανέφεραν ότι τα επίπεδα του miR-21 στο πλάσμα ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με GC, τα επίπεδα της στο πλάσμα ασθενών GC σε διαφορετικές ελάφια ΤΝΜ δεν έχουν ταυτοποιηθεί.

Αύξηση του αριθμού των εγγράφων που αναφέρονται ότι κυκλοφορούν miRNAs μπορούν να χρησιμεύσουν ως μη επεμβατική βιοδεικτών για την ανίχνευση GC. Πρόσφατα, Hanshao Liu αναφερθεί ότι ορός miR-378 ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με GC στάδιο TNM Ι, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτή η υπογραφή miRNA μπορεί να χρησιμεύσει ως μια νέα μη επεμβατική βιοδείκτη για την έγκαιρη ανίχνευση του GC [31]. Αλλά το καθεστώς μόλυνσης Hp στους ασθενείς GC και υγιείς μάρτυρες δεν αναφέρθηκαν. Είναι καλά γνωστό ότι η μόλυνση Hp είναι μία από τις κύριες αιτίες του GC, συμπεριλαμβανομένων του αδενοκαρκινώματος του στομάχου, γαστρικό λέμφωμα MALT. Αν τα επίπεδα των συγκεκριμένων κυκλοφορούντων miRNAs πλάσματος /ορού δυσρυθμισμένη μόνο σε ασθενείς GC με λοίμωξη Hp αλλά όχι σε αυτούς χωρίς, τα miRNAs θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως βιοδείκτες για την ανίχνευση των ασθενών με λοίμωξη Hp αντί την ανίχνευση ασθενών με GC.

σε αυτή τη μελέτη, αν και αναλύσαμε τα επίπεδα του miR-223, miR-21 και miR-218 στο πλάσμα σε ασθενείς με GC σε διαφορετικά στάδια ΤΝΜ, ο αριθμός των δειγμάτων GC πρώιμου σταδίου ήταν μέτρια. Ο αριθμός των miRNAs πλάσματος δοκιμάζονται σε σύνολο εκπαίδευσης ήταν περιορισμένη. Στο μέλλον έρευνα, που μπορούν να έχουν πρόσβαση περισσότερο τον αριθμό των δειγμάτων GC σε πρώιμο στάδιο για να αξιολογήσει το ρόλο της στο πλάσμα miR-223, miR-21, miR-218 ή άλλη miRNAs στο πλάσμα σχετίζονται με GC στην έγκαιρη ανίχνευση του GC.

για τους σκοπούς της αναζήτησης αποτελεσματικών βιοδεικτών με βάση το αίμα για ανίχνευση GC να παρατείνει την επιβίωση των ασθενών με πρώιμη GC, πολλοί ερευνητές έχουν επικεντρωθεί στην κυκλοφορούσα miRNAs, τα οποία έχουν πρόσφατα αναφερθεί για να χρησιμεύσει ως ένα αποτελεσματικό και μη επεμβατική βιοδείκτη για την ανίχνευση διάφορες μορφές καρκίνου ή άλλων ασθενειών [32] – [35]. Παρά το γεγονός ότι η ευαισθησία και η ειδικότητα των κυκλοφορούντων miRNA βιοδεικτών για την ανίχνευση GC είναι πολύ υψηλότερη από εκείνη των βιοδεικτών του ορού (CA19-9 και CEA) που χρησιμοποιούνται σήμερα, είναι μια πολύ δρόμο να διανύσει πριν κυκλοφορεί miRNAs ως κλινική διάγνωση χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση GC , επειδή τα επίπεδα του κυκλοφορούντος miRNA μπορεί να είναι σημαντικά υψηλότερα ή χαμηλότερα σε διάφορες ασθένειες. Μελλοντικές μελέτες των κυκλοφορούντων miRNA βιοδεικτών μπορεί να επικεντρωθεί σε συνδυασμό των προφίλ έκφρασης των κυκλοφορούντων miRNAs από όλες τις κοινές ασθένειες για την απόκτηση των συγκεκριμένων βιοδεικτών για τη μοναδική ανίχνευση της νόσου. Παρά το γεγονός ότι Jianning Song [36] συνιστάται miR-16 και miR-93 ως κατάλληλα γονίδια αναφοράς για την ανάλυση των miRNAs ορού για ασθενείς GC και υγιείς μάρτυρες, το μέγεθος του δείγματος είναι μέτρια. Οι μέθοδοι κανονικοποίησης που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των επιπέδων των κυκλοφορούντων miRNAs πρέπει να ενοποιηθούν.

Εν κατακλείδι, εντοπίσαμε ότι τρία miRNAs πλάσματος (miR-223, miR-21 και miR-218) μπορεί δυνητικά να χρησιμεύσει ως νέα μη επεμβατική βιοδείκτες για την ανίχνευση GC. Είτε miR-223 και miR-21 έχουν την ικανότητα να ανιχνεύσει σε πρώιμο στάδιο GC θα προσδιοριστούν σε μελλοντικές μελέτες.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Επικύρωση των επιπέδων πλάσματος του miR-25 σε ασθενείς με GC και υγιείς μάρτυρες. Κουτί διαγράμματα των συγκεντρώσεων στο πλάσμα του miR-25 σε ασθενείς GC (GC, n = 70) και των υγιών μαρτύρων (NC, n = 70). Οι γραμμές μέσα στα κουτιά υποδηλώνουν τις διαμέσους. Τα μουστάκια των οικοπέδων κουτί: Ελάχιστα στο Max. Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των ασθενών GC και υγιείς μάρτυρες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0041629.s001

(ΔΕΘ)

Πίνακα S1.

η ώριμη microRNAs και συμφωνημένα εκκινητών /ανιχνευτών AB ID δοκιμασία τους.

doi: 10.1371 /journal.pone.0041629.s002

(DOCX)

Πίνακας S2.

τιμές των συγκεντρώσεων των τεσσάρων miRNAs μετρήθηκαν στο πλάσμα των υποκειμένων.

doi:. 10.1371 /journal.pone.0041629.s003

(XLSX)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Yun Zhao για την τεχνική υποστήριξη