Αφηρημένο

Στόχος

Πολλές μελέτες έχουν δείξει την προγνωστική και κλινικοπαθολογικών αξία της αφυδρογονάσης αλδεΰδης 1 (ΑΙ_ϋΗ1) σε καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC) ασθενείς παραμένει αμφιλεγόμενη. Έτσι πραγματοποιήσαμε αυτή τη μελέτη να διευκρινιστεί η σχέση μεταξύ της έκφρασης υψηλή ΑΙ_ϋΗ1 στο CRC και τον αντίκτυπό της στην επιβίωση και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά.

Μέθοδοι

Δημοσιεύσεις για σχετικές μελέτες στο Pubmed, η Cochrane Library, Embase, και Υποδομών China National Γνώσης (CNKI) έως τον Απρίλιο 2015 εντοπίστηκαν. συμπεριλήφθηκαν μόνο άρθρα που περιγράφουν αντιγόνο ΑΙ_ϋΗ1 με ανοσοϊστοχημεία σε CRC. Το λογισμικό RevMan 5.1 χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των αποτελεσμάτων, συμπεριλαμβανομένων των 5 ετών συνολική επιβίωση (OS), ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά.

Αποτελέσματα

9 μελέτες με 1203 ασθενείς πληρούν τα κριτήρια που περιλαμβάνονται. Το συνολικό ποσοστό της έκφρασης υψηλής ΑΙ_ϋΗ1 ήταν 46,5% με ανοσοϊστοχημική χρώση. Υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας ήταν σημαντικά σχετίζεται με το 5-ετή OS και DFS (OR = 0,42, 95% CI: 0,26 – 0,68, P = 0.0004? OR = 0.38, 95% CI: 0,24 – 0,59, P & lt ? 0,0001, αντίστοιχα). υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 είχε υψηλή συσχέτιση με τον όγκο (Τ) στάδιο (Τ3 + Τ4 εναντίον Τ1 + Τ2? OR = 2.16, 95% CI: 01.09 – 04.28, Ρ = 0,03), λεμφαδένων (Ν) στάδιο (Ν1 + Ν2 εναντίον N0? OR = 1.8? 95% CI: 1,17 – 2,79, P = 0,008), και τη διαφοροποίηση του όγκου (G3 εναντίον G1 + G2? OR = 1,88? 95% CI: 01.07 με 03.30, Ρ = 0,03). Ωστόσο, η υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 δεν συσχετίστηκε σημαντικά με την ηλικία του ασθενούς (& gt? 60 ετών έναντι του & lt? 60 ετών? OR = 1,11, 95% CI: 0,63 – 1,94, P = 0,72).

συμπεράσματα

έκφραση υψηλής ΑΙ_ϋΗ1 δείχνει μια κακή πρόγνωση σε ασθενείς με CRC. Επιπλέον, η υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίζεται με το στάδιο Τ, Ν στάδιο, και η διαφοροποίηση του όγκου, αλλά όχι με την ηλικία

Παράθεση:. Chen J, Xia Q, Jiang Β, Chang W, Yuan W, Ma Ζ, et al. (2015) προγνωστική αξία της Cancer Stem Cell Marker ΑΙ_ϋΗ1 έκφραση στον καρκίνο του παχέος εντέρου: μια συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση. PLoS ONE 10 (12): e0145164. doi: 10.1371 /journal.pone.0145164

Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 27 Ιουνίου, 2015? Αποδεκτές: 30 Νοεμβρίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 18 Δεκεμβρίου 2015

Copyright: © 2015 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φύση Επιστημών της Κίνας (Νο 81470789). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη συχνότερη όγκων του γαστρεντερικού, παρόλο που η διάγνωση και θεραπείες της CRC έχουν τη βελτίωση γρήγορα, η πρόγνωση των ασθενών με CRC παραμένει φτωχή [1]. Επιπλέον, τα υψηλά ποσοστά υποτροπής, μετάστασης, και η αντίσταση του φαρμάκου είναι κρίσιμα προβλήματα στην CRC ασθενείς με ολοκληρωμένη θεραπεία. Επί του παρόντος, πολλές μελέτες δείχνουν ότι τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ), μια σπάνια υποπληθυσμό καρκινικών κυττάρων, που υπάρχουν σε διάφορους καρκίνους όπως ο καρκίνος του μαστού, ο καρκίνος του πνεύμονα, και CRC, μπορεί να σχετίζεται με τα ανωτέρω προβλήματα. [2] Αρκετοί δείκτες CSC έχουν εντοπιστεί στο CRC και μπορεί να προκαλέσει κακή έκβαση της CRC [3,4]. Πρόσφατα, ΑΙ_ϋΗ1 είναι ένα από υποθετικών δείκτη CSC στο CRC.

Το γονίδιο ΑΙ_ϋΗ1 βρίσκεται στο χρωμόσωμα 12 (12q24.2) και εκφράζει έναν τύπο αποτοξίνωση ένζυμο, το οποίο συμβάλλει στην οξείδωση του ενδοκυτταρικού αλδεϋδών [5] . ΑΙ_ϋΗ1 προσδίδει αντίσταση στην αλκυλιωτικοί χημειοθεραπευτικούς παράγοντες και προστατεύει από την οξειδωτική βλάβη καταλύοντας την μη αναστρέψιμη οξείδωση των κυτταρικών αλδεϋδών [6]. ΑΙ_ϋΗ1 εμπλέκεται στο μεταβολισμό της ρετιναλδεϋδη στο ρετινοϊκό οξύ, ένα μόριο σηματοδότησης που συμβάλλει στην κυτταρική διαφοροποίηση και πολλαπλασιασμό [7]. ΑΙ_ϋΗ1-θετικών κυττάρων με ιδιότητες CSC, όπως η διαφοροποίηση, η αυτο-ανανέωση και ογκογονικότητα, έχουν υψηλότερη χωρητικότητα σε ξενομεταμόσχευση και χημειοραδιοθεραπεία αντίσταση και συσχετίζονται με κακή πρόγνωση του καρκίνου του μαστού [8]. Επιπλέον, η δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ1 έχει δειχθεί να προσδιορίσει CSC κύτταρα που μοιάζουν στο κεφάλι και το λαιμό νεόπλασμα [9]. ΑΙ_ϋΗ1 φαίνεται να είναι ένα βιο-δείκτη που μπορεί να εφαρμοστεί για την απομόνωση του πληθυσμού CSC σε όγκους που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος ή CRC [7,10]. Επιπλέον, ΑΙ_ϋΗ1 δρα ως προαγωγός, επάγοντας επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) σε καρκινικά κύτταρα [11]. EMT προωθεί επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα για να ληφθεί βλαστική ικανότητα και συσχετίζεται με την εισβολή και μετάσταση όγκου [12]. Τα τελευταία χρόνια, πολλές μελέτες έχουν αναφέρει ότι η έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίζεται με μία φτωχή κλινική πρόγνωση σε πνεύμονα, του προστάτη, του παγκρέατος, και γαστρικούς καρκίνους, καθώς και σε CRC [2,13]. Ωστόσο, μεταξύ των πολυάριθμων ανεξάρτητες μελέτες, η προγνωστική αξία των ΑΙ_ϋΗ1 για CRC παραμένει αμφιλεγόμενη. Πολλές μελέτες έχουν αναφέρει ότι ΑΙ_ϋΗ1 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης που σχετίζεται με τα χαρακτηριστικά κλινικοπαθολογικά και φτωχών OS σε CRC [14,15]. Ωστόσο, ορισμένες μελέτες δείχνουν ότι ΑΙ_ϋΗ1 δεν σχετίζεται με το στάδιο του όγκου ή την ηλικία του ασθενούς [16]. Έτσι, αυτή η συστηματική αναθεώρηση διεξήχθη για να αξιολογηθεί η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και OS, DFS καθώς κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά της CRC.

Μέθοδοι

στρατηγική αναζήτησης

Όλες οι δημοσιεύσεις ήταν προσδιορίζονται στις ακόλουθες ηλεκτρονικές βάσεις δεδομένων: Cochrane Library, Pubmed, EMBASE, και η Κίνα CNKI μέχρι τον Απρίλιο του 2015. Οι όροι αναζήτησης που περιλαμβάνονται «ΑΙ_ϋΗ1», ή «αφυδρογονάση αλδεΰδη 1» με «καρκίνο του παχέος εντέρου», «καρκίνος του ορθού,» ή «παχέος Καρκίνος». άρθρα ανασκόπησης και λίστες αναφοράς από τα σχετικά άρθρα ελέγχθηκαν επίσης για τον εντοπισμό πρόσθετων σχετικών μελετών. Πρώτον, εξαιρούνται τα άσχετα μελέτες προσεκτικά την περιήγηση στο τίτλο και την περίληψη της κάθε δημοσίευσης. Συμπεριλήφθηκαν μόνο μελέτες που ανίχνευσε την έκφραση του ΑΙ_ϋΗ1 με ανοσοϊστοχημική χρώση σε CRC. Στη συνέχεια, το πλήρες κείμενο των υπόλοιπων πιθανών δημοσιεύσεις αναθεωρήθηκαν για να ελέγξει αν πληρούνται τα κριτήρια επιλογής.

Τα κριτήρια επιλογής

Οι μελέτες που αξιολόγησαν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και την πρόγνωση της CRC ήταν περιλαμβάνεται. Τα κριτήρια για την ένταξη ήταν τα εξής: 1. Η διάγνωση του CRC αποδείχθηκε με ιστοπαθολογική μεθόδους? 2. δημοσιεύσεις με πλήρη κείμενο που προσδιορίζει το ΑΙ_ϋΗ1-υψηλή έκφραση με ανοσοϊστοχημεία? 3. αξιολόγηση της συσχέτισης μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1, 5-ετή ποσοστό OS /DFS ή κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά? 4. δημοσιεύσεις με επαρκή στοιχεία για τον υπολογισμό του λόγου πιθανοτήτων (OR) της αποτελεσματικής δείκτη? 5. Μελέτες και πρωτότυπα ερευνητικά άρθρα που δημοσιεύθηκαν στα αγγλικά ή στα κινέζικα. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν τα εξής: 1. σχόλια λογοτεχνία, σχόλια, επιστολές, ή διπλές εκδόσεις? 2. Δεν υπάρχουν επαρκή στοιχεία για να εκτιμηθεί η OR και 95% CI? ή 3. το πλήρες κείμενο δεν θα μπορούσε να ανακτηθεί.

Για να ελέγξετε αυτή τη μετα-ανάλυση, εξετάσαμε την ποιότητα των εκδόσεων περιλαμβάνονται σύμφωνα με ένα αυστηρό σύστημα αξιολόγησης που προβλέπεται από το Cochrane Center. Τα κριτήρια αξιολόγησης της ποιότητας ήταν τα εξής: 1. Ο πληθυσμός της μελέτης και της χώρας ήταν σαφώς καθορισμένα? 2. Ο σχεδιασμός της μελέτης και την αξιολόγηση αποτελέσματος ήταν σαφώς καθορισμένα? 3. Η μέθοδος αξιολόγησης και αποκοπής για την έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 έχουν καθοριστεί με σαφήνεια? και 4. επαρκής χρόνος παρακολούθησης επιτεύχθηκε.

Δεδομένα εξόρυξη

Δύο επαγγελματίες αναθεωρητές ανεξάρτητα εξάγονται τα σχετικά στοιχεία από κείμενα, πίνακες και σχήματα. Τυχόν διαφωνίες στην εξόρυξη δεδομένων επιλύθηκαν μέσω της συζήτησης μεταξύ των τριών συγγραφέων. Τα ακόλουθα δεδομένα συλλέχθηκαν: συγγραφέας, που δημοσιεύθηκε το έτος, η χώρα των συμμετεχόντων στη μελέτη, ο αριθμός των ασθενών, ηλικιακή κατανομή, κατανομή κατά φύλο, τη μέθοδο ανίχνευσης, οριακή τιμή της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1, το ποσοστό της υψηλής έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1, κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά (στάδιο Τ, Ν στάδιο και η διαφοροποίηση του όγκου), την ώρα παρακολούθησης, 5-ετούς επιτοκίου OS /DFS. Δεδομένου ότι ορισμένα δημοσιεύματα που παρέχονται δεδομένα OS /DFS με καμπύλες Kaplan-Meier, αλλά όχι ο ρυθμός άμεσα, το λογισμικό GetData Γράφημα Digitizer 2,25 χρησιμοποιήθηκε για να εξαγάγετε τα δεδομένα.

Η στατιστική ανάλυση

Λογισμικό RevMan 5.1 εφαρμόστηκε για τον υπολογισμό του OR με το αντίστοιχο 95% CI ,. Η ετερογένεια μεταξύ των μελετών που περιλαμβάνονται αξιολογήθηκε από Q και I

2 δοκιμές, και P-value & lt? 0,1 ή I

2 & gt? 50% ανέφερε την ύπαρξη της ετερογένειας. Μια τυχαία ή σταθερό μοντέλο επιπτώσεις εφαρμόστηκε, ανάλογα με την ανάλυση της ετερογένειας. Η δοκιμή σταθμισμένης παλινδρόμησης Egger και Begg τεστ rank συσχέτιση εφαρμόστηκαν για την αξιολόγηση προκατάληψη δημοσίευση. Μια τιμή P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Αποτελέσματα αναζήτησης

Αρχικά, συνολικά 125 δημοσιεύσεις αναζήτηση σύμφωνα με τη στρατηγική αναζήτησης που περιγράφονται παραπάνω. Στη συνέχεια, 104 δημοσιεύσεις εξαιρέθηκαν επειδή οι μελέτες δεν έγιναν στον άνθρωπο, δεν ήταν αρχικές μελέτες (π.χ., αξιολόγηση, επιστολή), ή δεν ήταν CRC που σχετίζονται με μελέτες, μετά την περιήγηση τους τίτλους και περιλήψεις. Τέλος, 12 δημοσιεύσεις αποκλείστηκαν λόγω της έλλειψης των κλινικοπαθολογοανατομικών δεδομένων ή ποσοστό OS /DFS με την ανάγνωση του πλήρους κειμένου. Ως εκ τούτου, συμπεριλήφθηκαν συνολικά 9 δημοσιεύσεις (8 στα Αγγλικά και 1 στα κινέζικα) με 1203 ασθενείς. Όλες αυτές οι μελέτες αξιολόγησαν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και την πρόγνωση του CRC με ανοσοϊστοχημεία (Εικόνα 1).

Εννέα μελέτες με 1203 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν σε αυτή την μετα-ανάλυση. Όλες αυτές οι μελέτες εξέτασαν τη σχέση μεταξύ της έκφρασης της ΑΙ_ϋΗ1 και την πρόγνωση του CRC με ανοσοϊστοχημεία.

Η

χαρακτηριστικά Μελέτη

Τα κύρια χαρακτηριστικά των εννέα περιλαμβάνονται μελέτες συνοψίζονται στον Πίνακα 1 . περιελήφθησαν: συνολικά 1203 ασθενείς με διάμεση τιμή των 98 (21 με 309 εύρος). Έξι εκδόσεις προήλθε από την Ασία (τέσσερις από την Κίνα, δύο από την Κορέα), δύο από τις αμερικανικές χώρες (το ένα από τις ΗΠΑ, μία από τη Βραζιλία), και μία από την Ευρώπη (Ολλανδία). Το 5-ετή OS ερευνήθηκε σε τέσσερις μελέτες, και το ποσοστό DFS αναλύθηκε σε πέντε μελέτες με τη μέθοδο Kaplan-Meier. Πέντε μελέτες ανέφεραν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά. Το στάδιο Τ αξιολογήθηκε σε πέντε μελέτες? διάμεση 35,7% (εύρος: 10,4 – 54,7%) των ασθενών ήταν σταδίου Τ1 /2, ενώ το άλλο 64,3% (εύρος: 45,3 – 89,6%) των ασθενών ήταν σταδίου Τ3 /4. Το στάδιο Ν και ο βαθμός της διαφοροποίησης των όγκων αξιολογήθηκαν σε τέσσερις μελέτες? περίπου 53,9% (εύρος: 40,8 – 64,3%) των ασθενών που αναγνωρίστηκαν ως λεμφαδένα μετάσταση στάδιο N1 /2, ενώ το 29,2% (εύρος: 6,3 – 41,8%) των ασθενών προσδιορίστηκαν ως φτωχά διαφοροποιημένα (G3) όγκους. Σε μια μελέτη [17], 135 ασθενείς έλαβαν θεραπεία με ακτινοχημειοθεραπεία (RCT) συν τη χειρουργική επέμβαση, και 74 ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μόνο χειρουργική επέμβαση. Σε μια άλλη μελέτη [14], 21 ασθενείς με τοπικά προχωρημένο ορθού αδενοκαρκίνωμα υποβλήθηκε σε τυποποιημένη RCT εισαγωγική και την ποιότητα αξιολογηθεί θεραπευτική επέμβαση ΤΜΕ. Επιπλέον, 51 ασθενείς με μέση και κάτω καρκίνο του ορθού υποβλήθηκαν σε θεραπεία με προεγχειρητική RCT [18]. Σε μια πρόσθετη μελέτη, 23 από 231 ασθενείς είχαν χαρακτηριστεί ως έχοντες βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα, και όλες οι περιπτώσεις που έλαβε χειρουργική επέμβαση ή τη μετεγχειρητική RCT [19]. Η διάμεση ποσοστό (& gt? 1,6%) των κυττάρων όγκου με ΑΙ_ϋΗ1 θετικά χρησιμοποιήθηκε ως τιμή αποκοπής της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 σε μια άλλη μελέτη, και 76 309 ασθενείς έλαβαν προεγχειρητική εισαγωγική χημειοθεραπεία [16]. Οι ασθενείς, των υπολοίπων τεσσάρων μελέτες υποβλήθηκαν σε θεραπεία με χειρουργική επέμβαση ή μετεγχειρητική RCT, αλλά δεν προεγχειρητική εισαγωγική RCT (Πίνακας 1) [20,21,22,23].

Η

Επιπτώσεις της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 για το 5 -year OS και DFS της CRC

Τέσσερις από τις μελέτες που περιλαμβάνονται αξιολόγησε τη σχέση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και OS, ενώ πέντε μελέτες ανέλυσε τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και DFS. Η αξία ή μετρήθηκε με λογισμικό RevMan 5.1. Η ανάλυση ετερογένεια δεν ήταν σημαντική μεταξύ των επιλέξιμων μελέτες, και ένα σταθερό μοντέλο εφαρμόστηκε για τον υπολογισμό του συγκεντρώνονται Ή. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίστηκε σημαντικά με μια κακή OS και DFS (Σχήμα 2, OR = 0,42, 95% CI: 0,26 – 0,68, P = 0.0004? Σχήμα 3, OR = 0.38, 95% CI: 0,24 – 0,59, P & lt? 0,0001, αντίστοιχα). Στην πραγματικότητα, όλοι οι συμπεριλαμβάνονται μελέτες κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι η υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 είναι κακό προγνωστικό παράγοντα για την CRC, εκτός από τη μελέτη YEOP Ω

et al

. [18].

Τέσσερις περιλαμβάνονται μελέτες διερεύνησαν η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και OS. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 είχε υψηλή συσχέτιση με μια κακή OS (OR = 0,42, 95% CI: 0,26 – 0,68, P & lt? 0,0004, σταθερές επιδράσεις μοντέλο).

Η

Πέντε περιλαμβάνονται μελέτες διερευνήθηκε η συσχέτιση μεταξύ ΑΙ_ϋΗ1 έκφρασης και DFS. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 είχε υψηλή συσχέτιση με μια κακή DFS. (OR = 0,38, 95% CI: 0,24 – 0,59, P & lt? 0,0001, σταθερές επιδράσεις μοντέλο)

Η

Συσχέτιση της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά

Πέντε περιλαμβάνονται μελέτες διερευνήθηκε η συσχέτιση της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με το στάδιο Τ. Η δοκιμή ετερογένειας ήταν σημαντική μεταξύ των πέντε μελετών, και ένα τυχαίο μοντέλο επιπτώσεις εφαρμόστηκε για τη μέτρηση της Ή. έκφραση υψηλού ΑΙ_ϋΗ1 ήταν συσχετίζεται στενά με το στάδιο Τ (Σχήμα 4Α, Τ3 + Τ4 έναντι Τ1 + Τ2? OR = 2.16, 95% CI: 01.09 – 04.28, Ρ = 0,03). Για να εξαλειφθεί η ανομοιογένεια μεταξύ των παραπάνω πέντε περιλαμβάνονται μελέτες, έγινε μια ανάλυση υποομάδας. Μια μελέτη μεταξύ των δυτικών πληθυσμών αποκλείστηκε και οι άλλες τέσσερις μελέτες μεταξύ των ανατολικών πληθυσμών έγιναν μια ανάλυση υποομάδας. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι η ετερογένεια εξαφανίστηκε μεταξύ των τεσσάρων μελετών, και ένα σταθερό μοντέλο εφαρμόστηκε για τον υπολογισμό του συγκεντρώνονται Ή. Υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 μεταξύ των ανατολικών πληθυσμών συσχετίστηκε με το στάδιο Τ (Σχήμα 4Β, Τ3 + Τ4 εναντίον Τ1 + Τ2? OR = 2.88, 95% CI: 1,59 – 5,21, P = 0.0005)

Α: Πέντε περιλαμβάνονται μελέτες διερευνήθηκε η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και το στάδιο Τ. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 είχε υψηλή συσχέτιση με το στάδιο Τ (Τ3 + Τ4 εναντίον Τ1 + Τ2, OR = 2,16, 95% CI: 01.09 – 04.28, Ρ = 0,03, τυχαίες επιδράσεις μοντέλο). Β: Μια ανάλυση υποομάδων ανά εθνικότητα μεταξύ των ανατολικών πληθυσμών. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 είχε υψηλή συσχέτιση με το στάδιο Τ (Τ3 + Τ4 εναντίον Τ1 + Τ2, OR = 2.88, 95% CI: 1,59 – 5,21, P = 0.0005, σταθερές επιδράσεις μοντέλο)

Η

Εν τω μεταξύ, , τέσσερις μελέτες διερευνήθηκε η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και το στάδιο Ν, καθώς και το βαθμό διαφοροποίησης. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίστηκε με ένα στάδιο θετική Ν (N1 /2) και την κακή διαφοροποίηση (G3), με αποτέλεσμα την ή τις αξίες του 1,8 (95% CI: 1,17 – 2,79, P = 0,008, σχήμα 5) και 1,88 (95% CI : 01.07 – 03.30, Ρ = 0,03, Σχήμα 6). Ωστόσο, η έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 δεν συσχετίστηκε με την ηλικία του ασθενούς (Εικόνα 7, OR = 1,11, 95% CI: 0,63 – 1,94, P = 0,72) μεταξύ των τριών περιλαμβάνονται μελέτες

Τέσσερις μελέτες εξέτασαν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1. και το στάδιο Ν. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίστηκε επίσης με ένα στάδιο θετική Ν (N1 /2) (Ν1 + Ν2 εναντίον N0, OR = 1.80, 95% CI: 1,17 – 2,79, P = 0,008, σταθερές επιδράσεις μοντέλο).

Τέσσερις μελέτες εξέτασαν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και του βαθμού διαφοροποίησης. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίστηκε επίσης με την κακή διαφοροποίηση (G3) (G3 εναντίον G1 + G2, OR = 1.88, 95% CI: 01.07 – 03.30, Ρ = 0.03, σταθερό μοντέλο εφέ).

Η

τρεις μελέτες διερευνήθηκε η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και την ηλικία. υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 δεν σχετίζεται με την ηλικία (& gt? 60 ετών έναντι του & lt? 60 ετών, OR = 1,11, 95% CI: 0,63 – 1,94, P = 0,72, σταθερά αποτελέσματα μοντέλο)

Η

Πραγματοποιήσαμε επίσης ανάλυση υποομάδας με βάση την εθνικότητα (δυτική και ανατολική πληθυσμοί), τη θέση του όγκου (του παχέος εντέρου και του ορθού) μεταξύ όλων περιλαμβάνονται μελέτες. Σημαντική συσχέτιση ανιχνεύθηκε σε όλα τα στρωματοποιημένη ανάλυση (Πίνακας 2). Το αποτέλεσμα της ανάλυσης υποομάδας έδειξε ότι η υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 σε ασθενείς ανατολική CRC και καρκίνου του παχέος εντέρου συσχετίστηκε με κακή OS (OR = 0,29, 95% CI: 0,15 – 0,57, P = 0,0003? OR = 0,33, 95% CI: 0,15 – 0,69, P = 0,003, αντίστοιχα), το στάδιο Τ (Τ3 + Τ4) (OR = 2,88, 95% CI: 1,59 – 5,21, P = 0.0005? OR = 2.39, 95% CI: 1,19 – 4,80, P = 0,01, αντίστοιχα), Ν στάδιο (N1 /2) (OR = 1,8, 95% CI: 1,17 – 2,79, P = 0,008? OR = 2.14, 95% CI: 1,31 – 3,48, P = 0,002, αντίστοιχα), τα οποία ήταν σύμφωνα με τα αποτελέσματα που προκύπτουν από συνολική ανάλυση. έκφραση υψηλού ΑΙ_ϋΗ1 επίσης συσχετίστηκε με κακή διαφοροποίηση CRC ασθενείς ανατολικό (OR = 1.88, 95% CI: 01.07 – 03.30, Ρ = 0,03), αλλά όχι σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (OR = 1.57, 95% CI: 0,81 – 3,02, Ρ = 0,18). υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίστηκε με κακή DFS στο CRC ασθενείς δυτική (OR = 0,41, 95% CI: 0,24 – 0,71, P = 0,001), αλλά όχι στην ανατολική CRC ασθενείς (OR = 0,43, 95% CI: 0,05 – 3,46, P = 0,43).

η

Δημοσίευση προκατάληψη

προκατάληψη Δημοσίευση αναλύσεις μεταξύ των περιλαμβάνονται μελέτες που πραγματοποιήθηκαν από το συνδυασμό των οικοπέδων χοάνη των RevMan 5.1 με Begg και δοκιμές Egger χρησιμοποιώντας το λογισμικό Stata. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το σχήμα των αγροτεμαχίων χοάνης ήταν σχεδόν συμμετρική (Σχήματα 8 και 9). Και όλοι οι Ρ τιμές & gt? 0,05 σε Begg και δοκιμές Egger (πίνακας 3), αντίστοιχα. Έτσι, δεν υπήρχε καμία ένδειξη που υποδηλώνει μεροληψία δημοσίευση σε αυτή τη μελέτη.

Το σχήμα των οικοπέδων χοάνη ήταν σχεδόν συμμετρική, υποδεικνύοντας ότι δεν υπήρχε καμία ένδειξη για μεροληψία δημοσίευσης μεταξύ των δημοσιεύσεις που περιγράφουν το ποσοστό OS 5 ετών.

Η

το σχήμα των οικοπέδων χοάνη ήταν σχεδόν συμμετρική, υποδεικνύοντας ότι δεν υπήρχε καμία ένδειξη για μεροληψία δημοσίευσης μεταξύ των δημοσιεύσεις που περιγράφουν το ποσοστό DFS 5 ετών.

Η

Συζήτηση

Στη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών, πιστεύεται ότι οι όγκοι διατηρούνται από τη δική τους ΚΕΠ, τα οποία είναι υπεύθυνα για τη μετάσταση του καρκίνου και στην επανάληψη [24,25]. Ως εκ τούτου, οι δείκτες CSC χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση ΚΕΠ για να μελετήσει τις επιπτώσεις τους στην εμφάνιση και την ανάπτυξη των όγκων [10]. ΑΙ_ϋΗ1 είναι ένας από τους δυνητικούς δείκτες CSC που έχει ταυτοποιηθεί τα τελευταία χρόνια. Αυτή η μελέτη είναι η πρώτη που διερευνήσει συστηματικά τη συσχέτιση της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με την πρόγνωση σε CRC. Προηγούμενες μελέτες επικεντρώθηκαν κυρίως στην προγνωστική αξία της ΑΙ_ϋΗ1 σε ασθενείς με καρκίνωμα του μαστού, της κεφαλής και του αυχένα [13] [9].

ΑΙ_ϋΗ1 είναι ένας τύπος αποτοξίνωση ένζυμο, το οποίο συμβάλλει στην οξείδωση του ενδοκυτταρικού αλδεϋδών [26] . Η αποτοξινωτική ικανότητα του ΑΙ_ϋΗ1 μπορεί να βασίζεται η αναγνωρισμένη μακροζωία των ΚΕΠ, προστατεύοντας τον εαυτό τους από την οξειδωτική βλάβη [10]. Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι ΑΙ_ϋΗ1 εκφράζεται σε διαφορετικούς βαθμούς σε σχεδόν όλους τους ιστούς του καρκίνου [7,9,13]. Επιπλέον, ΚΕΠ του μαστού με υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 παρουσιάζουν υψηλό ογκογόνο ικανότητα και είναι σε θέση να σχηματίζουν όγκους με 20 κύτταρα [27].

Emina

κ.ά.

. [10] έχουν δείξει ότι ΑΙ_ϋΗ1 δραστηριότητα εφαρμόζεται για την απομόνωση ΚΕΠ από CRC ιστών, καθώς και από άλλα καρκινώματα, συμπεριλαμβανομένων των πνευμόνων και του καρκίνου του μαστού, και βρήκαν ότι η αναλογία των κυττάρων που εκφράζουν ΑΙ_ϋΗ1 ήταν 3,5 ± 1,0% σε CRC. Η μελέτη τους έδειξε επίσης ότι η ΑΙ_ϋΗ1-θετικών πληθυσμός είναι ένα υποσύνολο του CD133-θετικό πληθυσμό. έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 ήταν η υψηλότερη στην περινεοπλαστικό κύτταρα κρύπτης, και ΑΙ_ϋΗ1-θετικών κυττάρων αυξήθηκε περισσότερο αποτελεσματικά από ό, τι ΑΙ_ϋΗ1-αρνητικά κύτταρα. Η μελέτη μας έδειξε ότι η έκφραση των δεικτών CSC όπως Lgr5, CD133, και ΑΙ_ϋΗ1 αυξήθηκε σε σφαιρικά κύτταρα με ιδιότητες βλαστικών-σαν από DLD-1 κύτταρα [28]. κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την κινητικότητα μειώθηκαν όταν χτυπήσει κάτω ΑΙ_ϋΗ1 από siRNA. Αντιθέτως, η υψηλή έκφραση του ΑΙ_ϋΗ1 αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αντίσταση σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, και ογκογένεση [29].

Αν και πολλές μελέτες έχουν αναφέρει τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και τα αποτελέσματα των ασθενών CRC, η προγνωστική σημασία της ΑΙ_ϋΗ1 για CRC παραμένει αμφιλεγόμενη. Σε αυτό μελέτες, ΑΙ_ϋΗ1 φάνηκε να έχει ένα μεσαίο ρυθμό έκφρασης του 46,5% (εύρος: 18,2 – 76,5%) με ανοσοϊστοχημεία σε ασθενείς CRC. Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι ΑΙ_ϋΗ1-υψηλή έκφραση συσχετίζεται με κακή έκβαση, ιδιαίτερα σε καρκίνο του μαστού και του προστάτη [30,31,32]. Αντιστρόφως, έχει δειχθεί ότι η χαμηλή έκφραση του ΑΙ_ϋΗ1 υποδεικνύει μία κακή έκβαση σε παγκρεατικού καρκίνου [33]. Συμπεράσματα σχετικά με τη σχέση μεταξύ ΑΙ_ϋΗ1 και CRC είναι επίσης διαφορετικές.

ΑΙ_ϋΗ1 έκφραση του σταδίου ΙΙΙ του καρκίνου του ορθού παρουσιάζει μια πιο επιθετική λειτουργία και μπορεί να στρωματοποιημένη σε διαφορετικές ομάδες επιβίωσης [18]. Έχει επίσης προταθεί ότι ΑΙ_ϋΗ1 αποτελεί προγνωστικό δείκτη για ασθενείς με καρκίνο του ορθού σε στάδιο ΙΙ-ΙΙΙ μετά τη θεραπεία με RCT [14]. Η έκφραση της ΑΙ_ϋΗ1 είναι υψηλότερη στην φάση ΙΙΙ-IV αδενοκαρκινώματα του παχέος εντέρου [21]. Μια μελέτη που περιλαμβάνει 98 ασθενείς κατέδειξαν ότι ΑΙ_ϋΗ1-υψηλή έκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με το στάδιο ΤΝΜ, βαθμός όγκου, μετάσταση λεμφαδένα, και ο χρόνος επιβίωσης [20]. Επιπλέον, ΑΙ_ϋΗ1 θεωρείται ότι είναι ένα πολύτιμο δείκτη για να προβλέψουμε την βιολογική συμπεριφορά και τάση του CRC μετάστασης. Ωστόσο, οι ασθενείς με υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 έδειξε μια κακή έκβαση και έκφραση CD133 συσχετίστηκε με την κατάσταση των λεμφαδένων, αλλά ΑΙ_ϋΗ1 δεν ήταν [21]. Εν τω μεταξύ, η έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 έδειξε μία κακή πρόγνωση και χημειοθεραπεία αντίσταση σε ασθενείς αρνητικούς λεμφαδένες καρκίνο του ορθού [17]. Επιπλέον, ΑΙ_ϋΗ1 έχει έντονα συνδέεται με το OS, αλλά όχι με την ηλικία, τη φυλή, τάξη, ή τον αριθμό των μεταστάσεων στους λεμφαδένες [34]. Ωστόσο, μια άλλη μελέτη διαπίστωσε ότι δεν υπάρχει σχέση μεταξύ έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 και χρόνο επιβίωσης [35]. Ομοίως, μια μελέτη από Lugli έδειξε ότι το ποσοστό έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1-υψηλό ήταν 23,3% και ότι είχε σχέση με το βαθμό του όγκου, αλλά όχι σε διαφορές στο χρόνο επιβίωσης [36]. Έτσι, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να σχεδιάσετε ένα οριστικό συμπέρασμα.

Η τρέχουσα μετα-ανάλυση έδειξε ότι η υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας ήταν σημαντικά σχετίζεται με το λειτουργικό σύστημα και τα ποσοστά DFS, το στάδιο Τ, Ν στάδιο, και διαφοροποίηση του όγκου, αλλά όχι με την ηλικία του ασθενούς. Τα αποτελέσματα αυτά συμφωνούν με προηγούμενες μελέτες [20,21]. ΑΙ_ϋΗ1 ως δείκτη CSC αυξάνει την ικανότητα του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και εισβολής? Ως εκ τούτου, οι ΑΙ_ϋΗ1-θετικούς ασθενείς που σχετίζονται με μεγαλύτερο βάθος της εισβολής, λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, και την κακή διαφοροποίηση, η οποία μπορεί να αντανακλά την βιολογική συμπεριφορά των όγκων.

Εν τω μεταξύ, βρήκαμε ότι η έκφραση του ΑΙ_ϋΗ1 είναι ασταθής και ποικίλει μεταξύ διαφορετικών πληθυσμών. Αλλά δεν είναι σαφές πώς σταθερή η έκφραση των δεικτών CSC είναι και πώς επηρεάζονται από κάποιο πολύπλοκο μηχανισμό. Πιστεύεται ευρέως ότι οι διαφορές έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 και πρόγνωση υπάρχει σε CRC μεταξύ των δυτικών και των ανατολικών λαών [13]. Στη μελέτη μας, υπήρχαν 537 ασθενείς από ανατολικές χώρες και 666 ασθενείς από τις δυτικές χώρες. Επιπλέον, ο ρυθμός έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 μεταξύ των δυτικών πληθυσμών ήταν υψηλότερη από ότι μεταξύ των ανατολικών λαών (P & lt? 0,00001), που ήταν 52,4% (349/666) και 39,1% (210/537), αντίστοιχα. Η μελέτη μας έδειξε ότι η υψηλή έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίστηκε με κακή OS στο CRC ασθενείς ανατολική και με κακή DFS στο CRC ασθενείς δυτική. Αυτό μπορεί να είναι ένας πιθανός παράγοντας που οδηγεί σε διαφορετικά αποτελέσματα μεταξύ των δυτικών και ανατολικών CRC πληθυσμούς.

Η έκφραση της ΑΙ_ϋΗ1 μπορεί να ρυθμίζεται προς τα πάνω μετά την εισαγωγική RCT. Για παράδειγμα, YEOP Ω

et al

. [18] ανέφεραν ότι η υψηλή έκφραση για ΑΙ_ϋΗ1 ήταν 20,4% πριν από την εισαγωγική θεραπεία και 41,2% μετά την εισαγωγική RCT. Εξήγησαν ότι η διαφορά αυτή μπορεί να σχετίζεται με τη δραστηριότητα της αντοχής στα φάρμακα από ΑΙ_ϋΗ1-θετικά κύτταρα. ΑΙ_ϋΗ1 επίσης να ρυθμίζεται προς τα πάνω λόγω της φλεγμονής ή υποξία. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι ΑΙ_ϋΗ1-υψηλή έκφραση είναι αυξημένη σε φλεγμονώδη νόσο του εντέρου (IBD), υποδεικνύοντας ένα σημαντικό ρόλο για ΚΕΠ στην εξέλιξη της CRC σε ασθενείς με IBD [37].

Επιπλέον, ΑΙ_ϋΗ1 ως CSC δείκτης συνήθως συνεκφράζεται με άλλους δείκτες CSC (π.χ., CD24, CD44, και CD133), καθώς και τα αντι-αποπτωτικά μόρια Bcl-2 και ABCG2 [38-39]. Επιπλέον, ο συνδυασμός αυτών των δεικτών μπορεί να παρέχει μια καλύτερη επιλογή από ΚΕΠ [40]. Για παράδειγμα, συνδυάζοντας ΑΙ_ϋΗ1, EpCAM, και survivin τόσο ισχυρή προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση έχει διερευνηθεί σε CRC [16]. Έτσι, ο προτεινόμενος συνδυασμός βιο-δείκτη θα πρέπει να μελετηθούν περαιτέρω για την εφαρμογή στην κλινική πράξη.

Ωστόσο, υπάρχουν ορισμένοι περιορισμοί στη μελέτη αυτή. Πρώτον, ο αριθμός των συμπεριληφθούν μελετών και δειγμάτων περίπτωση σε κάθε μελέτη είναι σχετικά μικρές, γεγονός που μπορεί να μειώσει την ισχύ και την ακρίβεια της ανάλυσης υποομάδας. Δεύτερον, οι τιμές αποκοπής υψηλής έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 με ανοσοϊστοχημεία είναι διαφορετικά μεταξύ τους περιλαμβάνονται οι μελέτες, που κυμαίνονται από & gt? 1,3% έως & gt? 50% θετικά χρωματισμένων κυττάρων. Επιπλέον, οι διαφορές των τιμών αποκοπής μπορεί να συμβάλλει στην παρατηρούμενη ανομοιογένεια. Έτσι, την τυποποίηση της τιμής αποκοπής και ενοποιώντας τη μέθοδο ανίχνευσης για να χαρακτηρίσει το επίπεδο της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 ως «υψηλή» ή «χαμηλή» χρειάζονται. Τέλος, οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπεία CRC και διερευνήθηκε σε διαφορετικές χρονικές στιγμές και έλαβε διάφορες θεραπείες.

Η πιθανή προκατάληψη δημοσίευση είναι αναπόφευκτη. Πρέπει να εξετάσουμε το γεγονός ότι οι μελέτες με θετικά αποτελέσματα είναι εύκολα αποδεκτή, ενώ μελέτες με αρνητικά αποτελέσματα είναι συχνά απορρίπτονται. Παρά το γεγονός ότι είχε προσπαθήσει να συλλέξει όλα τα σχετικά στοιχεία, ορισμένα στοιχεία έλειπαν. Οι μελέτες που περιλαμβάνονται σε μας μετα-ανάλυση περιορίζονταν μόνο σε άρθρα που έχουν δημοσιευτεί στα αγγλικά ή στα κινέζικα, και ο αριθμός ήταν σχετικά μικρή. Χρησιμοποιώντας ενιαία μέθοδος για την ανίχνευση της πόλωσης δημοσίευση θα είναι περιορισμένη. Ως εκ τούτου, είμαστε σε συνδυασμό διαφόρων μεθόδων (οικόπεδα χοάνη, Begg και δοκιμή Egger) για την ανίχνευση της πόλωσης δημοσίευση για να αυξηθεί η αξιοπιστία του αποτελέσματος. Ωστόσο, η σχετική περιορισμός σε αυτή τη μελέτη μπορεί ακόμη να μειώσει τη δύναμη και την ακρίβεια της ανάλυσης υποομάδας. Μπορεί να υπερβάλλουν αποτέλεσμα της θεραπείας ή την ένταση της σχετιζόμενους παράγοντες κινδύνου. Οι παραπάνω περιορισμοί μπορούν να επηρεάσουν μερικώς τη σημασία της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 στην επιβίωση και τις κλινικοπαθολογοανατομικές αναλύσεις. Ως εκ τούτου, οι μεγαλύτερες προοπτικές μελέτες που απαιτούνται για την επικύρωση των αποτελεσμάτων μας.

Εν ολίγοις, αυτή η μετα-ανάλυση δείχνει ότι ΑΙ_ϋΗ1 ως ένα δείκτη CSC είναι ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης της κακής αποτέλεσμα και την εξέλιξη της CRC. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η έκφραση υψηλού ΑΙ_ϋΗ1 συσχετίζεται με κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά του CRC, όπως το στάδιο Τ, Ν στάδιο, και η διαφοροποίηση του όγκου, αλλά όχι με την ηλικία του ασθενούς. Επιπλέον, ΑΙ_ϋΗ1 είναι ένας ανεξάρτητος παράγοντας που σχετίζεται με μειωμένη επιβίωση. Έτσι, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες ΑΙ_ϋΗ1 και του δυνητικού ρόλου της ως δείκτη CSC για CRC πρόγνωση χρειάζεται.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 PRISMA Checklist. PRISMA Λίστα ελέγχου

doi:. 10.1371 /journal.pone.0145164.s001

(DOC)

S1 πίνακα. Χαρακτηριστικά των περιλαμβάνονται μελέτες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0145164.s002

(DOC)

Πίνακας S2. Η ανάλυση υποομάδων των μελετών που αναφέρουν την προγνωστική αξία της έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 σε OS /DFS /T στάδιο /N στάδιο /Διαφοροποίηση /Age of CRC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0145164.s003

(DOC)

S3 πίνακα. προκατάληψη δημοσίευση αναλύει μεταξύ περιλαμβάνονται μελέτες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0145164.s004

(DOC)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ Σονγκ Tong και ο Δρ Miao Yu για τις εποικοδομητικές προτάσεις τους και Medjaden Bioscience Limited (Χονγκ Κονγκ, Κίνα) για διορθώσεις αυτό το χειρόγραφο.