Αφηρημένο

βλαστοκύτταρα pluripotency, αγγειογένεση και επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) έχει αποδειχθεί να απορυθμίζεται σημαντικά σε πορογενές αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDAC) και πολλές άλλες επιθετικές μορφές καρκίνου. Η απορρύθμιση των διαδικασιών αυτών πιστεύεται ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στην έναρξη του όγκου, της προόδου και της μετάστασης, και είναι ανταποδοτικού να PDAC είναι η τέταρτη κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους στις ΗΠΑ. Το ογκοκατασταλτικό miRNA

miR-145

ρυθμίζει προς τα κάτω κρίσιμους παράγοντες pluripotency και ογκογονίδια και τα αποτελέσματα στην καταπιεσμένη μεταστατικό δυναμικό σε PDAC. Επιπλέον, η

miR-200

οικογένεια ρυθμίζει αρκετές αγγειογόνους παράγοντες που έχουν συνδεθεί με μετάσταση σε πολλούς συμπαγείς όγκους. Έχουμε αποδείξει προηγουμένως ότι προς τα κάτω ρύθμιση DCLK1 μπορεί upregulate κρίσιμη miRNAs τόσο

in vitro

και

in vivo

μοντέλα καρκίνου και τα αποτελέσματα σε προς τα κάτω ρύθμιση της c-myc, KRAS, Notch 1 και ΕΜΤ-σχετίζονται μεταγραφή παράγοντες. Μια πρόσφατη έκθεση έδειξε επίσης ότι Dclk1 μπορούν να διακρίνουν μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών βλαστικών κυττάρων σε

Αρο

min /+

ποντίκια και ότι η κατάλυση της Dclk1

+ κυττάρων οδήγησε σε υποχώρηση εντερικών πολυπόδων χωρίς να επηρεάζει την ομοιόσταση. Εδώ δείχνουμε ότι το knockdown του DCLK1 χρησιμοποιώντας πολυ (λακτίδιο-συν-γλυκολίδιο) -encapsulated-DCLK1-siRNA αποτελέσματα AsPC1 ανάπτυξη του όγκου σύλληψης. Η εξέταση των όγκων ξενομοσχεύματος αποκάλυψε, (α) αυξήθηκε

miR-145

η οποία οδηγεί σε μειωμένη πλειοδυναμία παράγοντες συντήρησης Oct4, SOX2, Nanog, KLF4 καθώς KRAS και RREB1? (Β) αυξήθηκε γράμ-

7α

η οποία οδηγεί σε μειωμένη παράγοντα pluripotency LIN28B? και (γ) αύξηση της

miR-200

που οδηγεί σε μειωμένη VEGFR1, VEGFR2 και EMT που σχετίζονται με παράγοντες μεταγραφής ZEB1, ZEB2, σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα. Ιδιαιτερότητα της DCLK1 μετα-μεταγραφική ρύθμιση των κατάντη στόχους του

miR-145

,

miR-200

και γράμ-

7α

επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία ανταποκριτή λουσιφεράσης-based . Καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι DCLK1 διαδραματίζει σημαντικό κύριο ρυθμιστικό ρόλο σε παγκρεατικά ογκογένεση μέσω της ρύθμισης των πολλαπλών ογκοκατασταλτικών miRNAs και κατάντη pro-ογκογόνο μονοπάτια τους. Αυτή η νέα έννοια της στόχευσης DCLK1 μόνη της έχει πολλά πλεονεκτήματα σε σχέση με στόχευση μοναδική οδός ή θεραπείες miRNA με βάση για PDAC

Παράθεση:. Sureban SM, Μάιος R, Qu D, Weygant Ν, Chandrakesan P, Αλί Ν, κ.ά. . (2013) DCLK1 Ρυθμίζει pluripotency και αγγειογενετικών παραγόντων

μέσω

microRNA-εξαρτώμενοι μηχανισμοί σε καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (9): e73940. doi: 10.1371 /journal.pone.0073940

Επιμέλεια: Chunming Liu, το Πανεπιστήμιο του Κεντάκι, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 22, Απριλίου του 2013? Αποδεκτές: 23, Ιουλίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Sureban et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από Εθνικά Ινστιτούτα επιχορηγήσεων Υγείας και το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου: CA-137482 (CWH)? Οκλαχόμα Κέντρο για την Προώθηση της Επιστήμης και της Τεχνολογίας, και Οκλαχόμα Κέντρο Ενηλίκων Έρευνα των Βλαστικών Κυττάρων (CWH). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. CWH είναι συνιδρυτής της COARE Βιοτεχνολογίας Inc., και αυτό δεν αλλάζει τους συντάκτες «προσήλωση σε όλες τις πολιτικές PLoS ONE και ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDAC) είναι η τέταρτη κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο σχετίζονται στις ΗΠΑ κάθε χρόνο με 5 % ποσοστό επιβίωσης 5 ετών. Παρά περισσότερα από 10 χρόνια από την FDA εγκεκριμένες θεραπευτικές αγωγές και σημαντικές βελτιώσεις στην ιατρική και χειρουργική φροντίδα, έχει παρατηρηθεί καμία σημαντική επίπτωση στο PDAC επιβίωση των ασθενών [1]. Πρόσφατα, ένα υποσύνολο των κυττάρων με βλαστικά κύτταρα του καρκίνου (CSC) ιδιότητες έχει ταυτοποιηθεί σε PDAC [2] που είναι ικανά απεριόριστης αυτοανανέωσης και οδηγούν σε περισσότερο διαφοροποιημένες και πιο επιθετική απογόνων, τα οποία είναι συχνά ανθεκτικά στα συμβατικά χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία [2,3]. Η αδυναμία για την εξάλειψη αυτών των ΚΕΠ ως δεδομένο ότι είναι ένας λόγος για την υποτροπή του όγκου, μετάσταση και το θάνατο μετά την αρχική ανταπόκριση στη θεραπεία [4]. Ένα άλλο κρίσιμο εμπόδιο στην καταπολέμηση συμπαγών καρκίνων σε γενικές γραμμές είναι η ετερογένεια των κυτταρικών τύπων στο μικροπεριβάλλον του όγκου [5] και το εξαιρετικά δεσμοπλαστικού θέση του όγκου [6]. Αυτή η ετερογένεια περιπλέκεται ακόμη περισσότερο από τα επιθηλιακά μεσεγχυματικά να μετάβασης (ΕΜΤ), μια διαδικασία που παίζει καθοριστικό ρόλο στην εισβολή καρκίνου και μετάσταση [7,8]. Πολλοί από τους παράγοντες μεταγραφής ΕΜΤ-επαγωγής όπως SNAI1 (ΣΑΛΙΓΚΑΡΙΟΥ), SNAI2 (Slug), ZEB1, ZEB2, TWIST1, FOXC2 και Goosecoid έχουν συσχετιστεί με εισβολή και μετάσταση όγκου [9]. Πρόσφατα, μια σειρά από εκθέσεις έχουν εντοπίσει το microRNA (miRNA)

miR-200

οικογένεια ως θεμελιώδη δείκτες και ρυθμιστές της EMT [10-12]. miRNAs είναι μικρά, 19-22 νουκλεοτιδίων μακρά, μη-κωδικοποιητικές RNAs που αναστέλλουν την έκφραση του γονιδίου σε μετα-μεταγραφικό επίπεδο [13]. Μια ισχυρή σύνδεση μεταξύ miRNA απορρύθμισης και της ανθρώπινης καρκίνου έχει αποδειχθεί [14]. Κατά συνέπεια, έχουν miRNAs αποδειχθεί ότι δρουν είτε ως ογκογονίδια (π.χ.,

miR-155

,

miR-17-5p

και

miR-21

) [15,16] ή καταστολείς των όγκων (π.χ.,

miR-34

,

miR-15a

,

miR-16-1

και γράμ-

7

) [17 -20]. Ωστόσο, οι ακριβείς ρυθμιστικές λειτουργίες που ανατρέπουν την ισορροπία προς φαινότυπο του καρκίνου σε σχέση με ογκοκατασταλτικά έναντι ογκογόνο έκφραση miRNA είναι ελάχιστα κατανοητές.

πλειοδυναμία είναι η ικανότητα ενός κυττάρου να διαφοροποιηθούν σε οποιονδήποτε τύπο κυττάρου και είναι ένα μοναδικό χαρακτηριστικό των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων (ΟΚΕ). παράγοντες μεταγραφής πλειοδυναμία όπως Oct4, SOX2, Nanog και KLF4 αποτελούν ρυθμιστικών δικτύων και επηρεάζουν ένα ευρύ φάσμα των κατάντη γονιδίων. Η υπερέκφραση αυτών των παραγόντων μπορεί αποδιαφοροποιούνται ανθρώπου και ποντικού σωματικά κύτταρα σε πολυδύναμα βλαστοκύτταρα (iPSCs) [21]. Ο επαναπρογραμματισμός παράγοντες Oct4, SOX2, Nanog, KLF4, c-myc, και LIN28 έχουν επίσης προταθεί ότι είναι ογκογονίδια και μπορεί να εμπλέκονται στην ανάπτυξη διαφόρων καρκίνων [21-26]. Πολλαπλές μελέτες έχουν δείξει ότι αυτοί οι παράγοντες μεταγραφής ρυθμίζεται, τουλάχιστον εν μέρει, από miRNAs [21,27,28].

miR-145

αναστέλλει ειδικά τους προαναφερθέντες παράγοντες πλειοδυναμία με τη δέσμευση του 3 ‘αμετάφραστη περιοχή (UTR) του mRNA, η οποία οδηγεί σε αναστολή της ΟΚΕ, αυτο-ανανέωση, και επαγωγή της διαφοροποίησης. Επιπλέον, η απώλεια του

miR-145

βλάπτει τη διαφοροποίηση και εξυψώνει Oct4, SOX2 και KLF4 [21]. Επιπλέον, έχει αποδειχθεί ότι το

miR-145

υποστηρικτής δεσμεύεται και καταστέλλεται από Oct4 στην ΟΚΕ. Αυτό δείχνει (α) η ύπαρξη άμεσης σχέσης μεταξύ των βασικών παραγόντων επαναπρογραμματισμό και

miR-145

, και (β) η παρουσία ενός διπλού αρνητική αλληλεπίδραση που αφορούν Oct4, SOX2, KLF4, και

miR-145

[21]. Στον καρκίνο,

miR-145

ρυθμίζεται προς τα κάτω και έχει αποδειχθεί ότι διαθέτει όγκου ιδιότητες καταστολέα. Η απώλεια του

miR-145

(

miR-143/145

cluster) παρατηρείται σε KRAS μεταλλαγμένο καρκίνους του παγκρέατος, και θεραπευτική αποκατάσταση αυτών των miRNAs καταργεί ογκογένεση [29,30]. Επιπλέον, Ras-απόκρισης πρωτεΐνη που δεσμεύεται με το στοιχείο 1 (RREB1) καταστέλλει

miR-143

/

miR-145

δραστηριότητα υποκινητή, γεγονός που δείχνει ότι η καταστολή είναι ένα πρώιμο γεγονός στην έναρξη του καρκίνου του παγκρέατος και της εξέλιξης [ ,,,0],29]. Επιπλέον, KRAS και RREB1 είναι στόχοι του

miR-143/145

, επιδεικνύοντας ένα μηχανισμό τροφοδοσίας προς τα εμπρός που ενισχύει RAS σηματοδότηση με τη μεσολάβηση της προόδου των όγκων PDAC [29]. Έχει πρόσφατα καταδειχθεί ότι η έκτοπη έκφραση του

miR-143/145

αποτελέσματα καταπιεσμένη μετάσταση και αυξημένη προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος [30]. Αυτά τα δεδομένα μαζί δείχνουν ότι

miR-145

είναι ένας κύριος ρυθμιστής της iPSCs παράγοντες στην ΟΚΕ και ΚΕΠ και μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην αναστολή της έναρξης του καρκίνου του παγκρέατος, της εξέλιξης και της EMT.

Αγγειακό ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) σηματοδότηση διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην αγγειογένεση των όγκων. τα μέλη της οικογένειας VEGF μεσολαβούν την κρίσιμη σηματοδότηση μέσω σύνδεσης σε δύο υποδοχείς κινάσης τυροσίνης, VEGFR1 και VEGFR2. VEGFR1 απαιτείται για την επιβίωση των ενδοθηλιακών κυττάρων? λαμβάνοντας υπόψη ότι, VEGFR2 απαιτείται για την αγγειογενετική και την αγγειακή διαπερατότητα δραστηριότητα μεσολάβηση υποδοχέα [31-33]. Πρόσφατα έχει αποδειχθεί ότι αυτοί οι αγγειογόνοι παράγοντες (VEGFR1 και 2) που συμμετέχουν στη μετάσταση του όγκου των νεφρών και του παχέος εντέρου κύτταρα καρκινώματος [34]. σηματοδότηση VEGF είναι γνωστό ότι προάγει την αγγείωση όγκου και πολλαπλασιασμό των ενδοθηλιακών κυττάρων σε PDAC. Μελέτες που χρησιμοποιούν διαλυτές VEGFR1 και VEGFR2 (αναστολή του VEGFR-μεσολάβηση σηματοδότηση σε έναν κυρίαρχο-αρνητικό τρόπο) ή τους αναστολείς της κινάσης της τυροσίνης VEGFR οδήγησε σε αναστολή του όγκου αγγειογένεσης, της ανάπτυξης και μετάστασης σε μοντέλα ποντικών PDAC [35-38].

DCLK1 (παλαιότερα γνωστό ως DCAMKL-1) είναι ένα υποθετικό εντερική και του παγκρέατος δείκτη βλαστικών κυττάρων και ρυθμίζεται αυξητικά στο στρώμα και επιθήλιο του PDAC. Εχει επίσης πρόσφατα περιγραφεί ως ένας δείκτης της σχετικά ακαθόριστων κύτταρο τούφα /βούρτσα στο πάγκρεας και το έντερο [39,40]. Ρυθμίζει αρνητικά αρκετές miRNAs ογκοκατασταλτικό και πιθανότατα παίζει σημαντικό ρόλο στην έναρξη και την εξέλιξη των συμπαγών καρκίνων [11,41]. Επιπλέον, ρυθμίζει αρκετές βασικές ογκογονιδίων (c-myc, KRAS και Notch 1) και EMT. Επιπλέον, η υπερέκφραση των παραγόντων πλειοδυναμίας σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος οδήγησε σε αυξημένη έκφραση του DCLK1 [42]. Πρόσφατα Nakanishi et al. [43], έχουν χρησιμοποιήσει ένα κομψό μοντέλο ποντικού Dclk1-Cre να αποδείξει, ότι Dclk1 σηματοδοτεί εντερικά βλαστικά κύτταρα του όγκου. Κατάλυση της Dclk1 κυττάρων που εκφράζουν το

Αρο

min /+

ποντίκια οδήγησε σε υποχώρηση των πολυπόδων χωρίς οποιαδήποτε ζημία στην κανονική εντερικό επιθήλιο. Στην έκθεση αυτή, μετά την knockdown του DCLK1 χρησιμοποιώντας νανοσωματίδια ενθυλακωμένα siRNA (NPsiDCLK1) σε όγκο ξενομόσχευμα ποντικούς, παρατηρήθηκε μια σημαντική αύξηση της: (Α)

miR-143/145

συστάδα, η οποία οδήγησε σε αρνητική ρύθμιση του κλειδί δείκτες πλειοδυναμίας (Oct4, SOX2, KLF4 και Nanog)? (Β) γράμ-

7α

, η οποία οδήγησε σε μειωμένη παράγοντα pluripotency LIN28B? και (C)

miR-200a, b

και

γ

, η οποία οδήγησε σε αρνητική ρύθμιση της EMT και αγγειογενετικών παραγόντων. Η χορήγηση του NPsiDCLK1 δεν οδήγησε σε εμφανή τοξικότητα σε ποντικούς. Αυτά τα δεδομένα λαμβανόμενα μαζί υποδηλώνουν έναν κεντρικό ρυθμιστικό ρόλο του DCLK1 σε παγκρεατικά ογκογένεση.

Υλικά και Μέθοδοι

μικρά παρεμβαλλόμενα RNA που

αλληλουχία

DCLK1 siRNA (siDCLK1) που στοχεύουν την περιοχή κωδικοποίησης του DCLK1 (accession Νο NM_004734) (GGGAGUGAGAACAAUCUACtt) και ομελέτα siRNAs (si-SCR) δεν ταιριάζουν με κανένα από τα ανθρώπινα γονίδια ελήφθησαν (Ambion Inc, Austin, TX).

Σύνθεση και χαρακτηρισμός των DCLK1 siRNA ΣΔ

Πολυ (λακτίδιο-συν-γλυκολίδιο) νανοσωματίδια οξύ (PLGA NPS) συντέθηκαν χρησιμοποιώντας ένα διπλό γαλάκτωμα τεχνική εξάτμισης διαλύτη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11,44]. Εν συντομία, siRNA (DCLK1 ή ομελέτα) συμπυκνώθηκε στο κατιονικό πολυμερές πολυ (αιθυλενοϊμίνη) (ΡΕΙ) για να σχηματίσει ένα σύμπλοκο siRNA-ΡΕΙ. Αυτό το σύμπλοκο προστέθηκε σε PLGA σε χλωροφόρμιο και στροβιλίζεται και μεταφέρθηκε σε 2% πολυβινυλική αλκοόλη. Αυτό το γαλάκτωμα υποβλήθηκε σε υπερήχους και αφέθηκε να εξατμισθεί όλη τη νύχτα. Το μέγεθος, ο δείκτης πολυδιασποράς, και ζήτα δυναμικού μετρήσεις συντίθεται siRNA ΝΡ προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το φως διάθλαση σκέδαση (DLS) χρησιμοποιώντας Ζέτα PALS (Brookhaven Instruments, Holtsville, NY).

μοντέλο όγκου ξενομοσχεύματος

NOD ποντίκια /SCID αγοράστηκαν από το Εργαστήριο Jackson (Bar Harbor, Maine) και στεγάστηκαν σε συνθήκες χωρίς παθογόνα. Είχαν φροντίδα σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές που ορίζονται από την Αμερικανική Ένωση για τη Διαπίστευση του Εργαστηρίου Φροντίδα Ζώων και τις ΗΠΑ Υπηρεσίας Δημόσιας Υγείας Ανάθεση «Πολιτική για τα Ανθρώπινα Φροντίδα και Χρήση Εργαστηριακών Ζώων.» Σώμα «Όλες οι μελέτες εγκρίθηκαν και εποπτεύεται από το Πανεπιστήμιο της επιτροπής φροντίδας ζώων και Χρήση Oklahoma Health Sciences Κέντρου (IACUC). κύτταρα AsPC-1 (1 χ 10

7) ενέθηκαν υποδορίως στα πλευρά του 4- έως 6 εβδομάδων ποντικών ηλικίας (η = 3). Οι όγκοι μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα παχύμετρο και ο όγκος υπολογίστηκε ως (μήκος Χ πλάτος

2) × 0.5. Οι όγκοι ήταν ψηλαφητοί 30 ημέρες μετά την ένεση των κυττάρων. NPs ανασυστάθηκαν σε στείρο κανονικό αλατόνερο και εγχέεται απευθείας εντός των όγκων. Κάθε ζώο που φέρει τον όγκο εγχύθηκε τις ημέρες 30, 33, 36, 39, και 42 με μία από τις ακόλουθες παρασκευές -50 μΐ (5 μΜ) του παρασκευάσματος siRNA-ΝΡ [NP μόνο (έλεγχος), NP-siScrambled (NPsiSCR), ή NPsiDCLK1]. Όλα τα ποντίκια θανατώθηκαν την ημέρα 45.

Η ανοσοϊστοχημεία, Western blot, σε πραγματικό χρόνο αντίστροφη μεταγραφή-PCR, ανάλυση miRNA, εισβολή δοκιμασία και δοκιμασία λουσιφεράσης γονίδιο

οι αναλύσεις αυτές ήταν διεξάγεται όπως περιγράφεται προηγουμένως [11,41]. Οι λεπτομερείς περιγραφές που παρέχονται στο συμπληρωματικό τμήμα των Υλικών και Μεθόδων (Κείμενο S1).

Αποτελέσματα

RNA σίγηση της DCLK1 αναστέλλει παγκρέατος ξενομόσχευμα καρκίνου ανάπτυξης

AsPC-1 ανθρώπινου παγκρέατος καρκινικά κύτταρα εγχύθηκαν υποδόρια στις λαγόνες NOD /SCID ποντικούς και οι όγκοι αφέθηκαν να αναπτυχθούν για 30 ημέρες. NP έγκλειστα siRNAs (NPsiDCLK1 και NPsiSCR) εγχύθηκαν εντός του όγκου. Νανοσωματιδίων ενθυλάκωση διεξήχθη για να ξεπεραστούν οι περιορισμοί της θεωρητικής siRNA που βασίζεται παράδοσης [45]. Η αποτελεσματικότητα αυτής της προσέγγισης έχει προηγουμένως δοκιμαστεί σε ορθοκολικό ξενομοσχεύματα καρκίνου [11]. Την ημέρα 30, όταν οι όγκοι ήταν ψηλαφητοί, κινήθηκαν οι θεραπείες και συνεχίστηκε κάθε τρίτη ημέρα για συνολικά πέντε ενέσεις. Οι όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα 45, και οι όγκοι του όγκου που παριστάνεται στο σχήμα 1. Η χορήγηση του NPsiDCLK1 οδήγησε σε σημαντική (~ 85%) μείωση (

ρ

& lt? 0,01) στον όγκο του όγκου σε σύγκριση με είτε τον έλεγχο (NPS-μόνο) ή NPsiSCR αγωγή όγκων (Σχήμα 1Α και 1Β). Ανάλυση mRNA έδειξαν σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω (

σ

& lt? 0,01) του DCLK1 mRNA σε σύγκριση με έλεγχο ή NPsiSCR θεραπεία όγκων (Σχήμα 1C). Αυτά τα δεδομένα λαμβανόμενα μαζί δείχνουν ότι η αναστολή της DCLK1 αποτέλεσμα AsPC-1 ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου σύλληψης.

Α, AsPC-1 ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως στα πλευρά του NOD /SCID ποντίκια για να παράγουν όγκους. Την ημέρα 30, PLGA NP έγκλειστα siRNAs (siDCLK1 και siSCR) εγχύθηκαν απευθείας εντός των όγκων και ακολουθείται από ενέσεις κάθε τρίτη μέρα. Μετά από 5 ενέσεις, οι όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα 45 και αντιπροσωπεύονται παραπάνω. Ο όγκος του όγκου μετρήθηκε κάθε 3 ημέρες. Β, Αντιπροσωπευτικά φωτογραφία ποντικών που φέρουν τους όγκους από κάθε ομάδα δείχνονται. C, η έκφραση του mRNA DCLK1 στους όγκους ποσοτικοποιείται με πραγματικού χρόνου RT-PCR. Οι τιμές δίνονται ως μέσος όρος ± SEM, και

αστερίσκους

δηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές (*

σ

& lt? 0.01). σε σύγκριση με τον έλεγχο (NP μόνο)

Η

νοκ ντάουν της DCLK1 αποτελέσματα στην αρνητική ρύθμιση των παραγόντων πλειοδυναμίας σε παγκρεατικά ξενομοσχεύματα όγκου μέσω miR-145

έχει αποδειχθεί ότι Oct4, SOX2, c-myc, LIN28, Nanog και KLF4 απαιτούνται για την ΟΚΕ αυτο-ανανέωση και pluripotency και υπερεκφράζεται σε ορισμένες επιθετικών καρκίνων και σε ΚΕΠ [23-26,28]. Η υπερέκφραση αυτών των παραγόντων μπορεί να επαναπρογραμματίσει ή αποδιαφοροποιούνται του ανθρώπου και των σωματικών κυττάρων ποντικού σε iPSCs. Εδώ παρατηρήσαμε μια σημαντική (

σ

& lt? 0,01) ρύθμιση προς τα κάτω (& gt? 40%) στην έκφραση του mRNA των δεικτών πλειοδυναμίας Nanog και KLF4 (Σχήμα 2Α και 2Β) με πραγματικού χρόνου RT-PCR μετά το νοκ ντάουν της DCLK1. Ομοίως πρωτεΐνες Nanog και KLF4 επίσης ρυθμίζεται προς τα κάτω, όπως αναλύθηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση (Σχήμα 2C και 2D). Επιπλέον, παρατηρήσαμε επίσης μία σημαντική (& gt? 40%). Μειορρύθμιση του Oct4 (Σχήμα 2Ε) και SOX2 (Σχήμα 2F) στο επίπεδο του mRNA μετά την knockdown του DCLK1 σε AsPC-1 ξενομοσχευμάτων όγκου

siRNA- μεσολάβηση νοκ ντάουν της DCLK1 οδήγησε σε αρνητική ρύθμιση των παραγόντων πλειοδυναμίας: Nanog mRNA (Α)? KLF4 mRNA (Β)? πρωτεΐνης Nanog (C)? πρωτεΐνη KLF4 (D)? Oct4 mRNA (Ε) και SOX-2 mRNA (F). mRNA αναλύθηκε χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR και η πρωτεΐνη με ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις. Για ραβδόγραμμα σε Α, Β, Ε και ΣΤ, οι τιμές δίδονται ως μέσος όρος ± SEM, και

αστερίσκους

δηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές (*

σ

& lt? 0,01) σε σύγκριση με τον έλεγχο (NP μόνο).

η

DCLK1 μετα-μεταγραφικά ρυθμίζει miR-145 για τον καρκίνο του παγκρέατος

miR-145

έχει αποδειχθεί ότι καταστέλλει Oct4, SOX2 και KLF4, καταστέλλοντας έτσι πλειοδυναμία και τον έλεγχο της διαφοροποίησης [21].

miR-145

ρυθμίζεται μειωτικά σε διάφορους καρκίνους και έχει αποδειχθεί ότι διαθέτει ογκοκατασταλτικά και ανασταλτικές ιδιότητες μετάστασης [29,30]. Προηγούμενες εκθέσεις [11,28,41] και τα δεδομένα που παρουσιάζονται παραπάνω δείχνουν ότι DCLK1 ρυθμίζει αρνητικά miRNAs ογκοκατασταλτικό όπως γράμ-

7α

,

miR-144

και

miR-200a

. Ομοίως, εδώ παρατηρήσαμε σημαντική επαγωγή (1,5 φορές) του

pri-miR-143/145

σύμπλεγμα miRNA (Εικόνα 3Α) και

pri-miR-145

miRNA (Εικόνα 3Β) μετά την νοκ ντάουν της DCLK1 σε AsPC-1 μοσχευμάτων όγκων. Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία γονιδίου αναφοράς της λουσιφεράσης για να μετρηθεί ποσοτικά την επίδραση της DCLK1 νοκ ντάουν για

miR-145

miRNA. κύτταρα AsPC-1 επιμολύνθηκαν με ένα πλασμίδιο που περιέχει το γονίδιο λουσιφεράσης πυγολαμπίδας με ένα συμπληρωματικό

miR-145 θέση

πρόσδεσης στο 3 ‘UTR. Μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία μόνο με NPs, NPsiSCR, ή NPsiDCLK1 και υποβλήθηκαν σε μέτρηση λουσιφεράσης δραστηριότητα. Μια μείωση στη δράση της λουσιφεράσης παρατηρήθηκε σε κύτταρα που κατεργάζονται με NPsiDCLK1 σύγκριση με τον μάρτυρα ή NPsiSCR (Σχήμα 3C). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η εξουδετέρωση των αποτελεσμάτων DCLK1 στην αρνητική ρύθμιση του

miR-145

κατάντη στόχους miRNA σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Έχει ήδη αποδειχθεί ότι υπάρχει ένας μηχανισμός βρόχος ανάδρασης μεταξύ

miR-143/145

και KRAS και RREB1. RREB1 είναι γνωστό ότι καταστέλλει τη μεταγραφή του

miR-143/145

με σύνδεση προς την περιοχή του προαγωγέα. Επιπλέον, KRAS και RREB1 είναι κατάντη στόχοι του

miR-143/145

[29]. Εξόντωση DCLK1 οδήγησε σε αυξημένη έκφραση του

miR-143/145

διασποράς και προς τα κάτω ρύθμιση προς τα κάτω στόχος του KRAS (Εικόνα 3D). Επιπλέον, βρήκαμε ότι η έκφραση του RREB1 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω μετά από τη χορήγηση του siRNA κατά DCLK1 (Σχήμα 3Ε). Με αυτά τα δεδομένα, μπορούμε εικάζουν ότι DCLK1 παίζει ρόλο στην μετα-μεταγραφική ρύθμιση του

miR-143/145

διασποράς και έτσι ρυθμίζει προς τα κάτω KRAS και RREB1 στο παγκρέατος ξενομοσχεύματα όγκου.

Μετά το νοκ ντάουν της DCLK1 σε AsPC-1 μοσχευμάτων όγκων, μια σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση του

miR-143/145

cluster (α) και

miR-145

miRNA (Β) με πραγματικού χρόνου RT-PCR. C, Μία μείωση της δραστηριότητας της λουσιφεράσης (λουσιφεράση μονάδες) μετά από επιμόλυνση με πλασμίδιο που κωδικοποιεί λουσιφεράση που περιέχει το

miR-145

θέση πρόσδεσης παρατηρήθηκε μετά την knockdown του DCLK1 σε AsPC-1 ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου κύτταρα. Νοκ ντάουν της DCLK1 είχε επίσης ως αποτέλεσμα την αρνητική ρύθμιση του KRAS (D) και RREB1 (Ε) mRNA, προς τα κάτω τους στόχους του

miR-143/145

σύμπλεγμα miRNA, αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας σε πραγματικό χρόνο RT-PCR. Οι τιμές δίνονται ως μέσος όρος ± SEM, και

αστερίσκους

δηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές (*

σ

& lt? 0.01). σε σύγκριση με τον έλεγχο (NP μόνο)

Η

Συνολικά, αυτά τα στοιχεία στο σύνολό τους αποδεικνύουν ένα δυνητικό ρυθμιστικό ρόλο για DCLK1 στην έκφραση των παραγόντων iPSC σε καρκίνους του παγκρέατος μέσω του

miR-145

miRNA.

DCLK1 ρυθμίζει ας-7α και κατάντη LIN28B στόχο της στον παγκρεατικό καρκίνο

σε παγκρέατος και του παχέος εντέρου κύτταρα, έχουμε αποδείξει στο παρελθόν ότι DCLK1 ρυθμίζει αρνητικά miRNA γράμ-

7α

. siRNA μεσολάβηση νοκ ντάουν της DCLK1 οδήγησε σε αρνητική ρύθμιση των γράμ-

7α

κατάντη στόχους c-myc και KRAS. Σε παγκρεατικό ξενομοσχεύματα όγκου σε επεξεργασία με NPsiDCLK1, παρατηρήσαμε μια σημαντική ρύθμιση προς τα άνω του γράμ-

7a

(Σχήμα 4Α) και μετέπειτα προς τα κάτω ρύθμιση προς τα κάτω στόχος του c-myc (mRNA και πρωτεΐνη) (Σχήμα S1). Οι εκθέσεις δείχνουν ότι LIN28B, ένας παράγοντας συντήρησης πλειοδυναμία ρυθμίζει miRNA γράμ-

7

και με τη σειρά του γράμ-

7

ρυθμίζει LIN28B (λόγω της παρουσίας της θέσης πρόσδεσης στο 3 ‘UTR του LIN28B) , γεγονός που υποδηλώνει μια διπλή αρνητική αλληλεπίδραση μεταξύ LIN28 και γράμ-

7

[46,47]. Εδώ θα θέλαμε να δούμε αν NPsiDCLK1 ρυθμίζει προς τα κάτω τους στόχους του γράμ-

7α

miRNA. κύτταρα AsPC-1 διαμολύνθηκαν με πλασμίδιο που κωδικοποιεί το γονίδιο λουσιφεράσης πυγολαμπίδας υπό τον έλεγχο του 3 ‘UTR που περιέχει θέση δέσμευσης για γράμ-

7

. Μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με NPsiDCLK1 και υποβλήθηκε σε μέτρηση λουσιφεράσης. Μετά την knockdown του DCLK1, παρατηρήσαμε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του

ας-7

εξαρτώμενη δραστικότητα λουσιφεράσης (Σχήμα 4Β) υποδεικνύοντας ότι NPsiDCLK1 ρυθμίζει καθοδικά στόχους του γράμ-

7

σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Βασισμένο σε πραγματικό χρόνο RT-PCR ανάλυση των όγκων που έλαβαν θεραπεία με NPsiDCLK1, παρατηρήσαμε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του LIN28B mRNA σε σύγκριση με NPsiSCR ή όγκους ελέγχου αγωγή (Σχήμα 4C). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι DCLK1 ρυθμίζει LIN28B μέσω

ας-7

εξαρτώμενο μηχανισμό.

Α, siRNA μεσολάβηση νοκ ντάουν της DCLK1 στα καρκινικά ξενομοσχεύματα οδηγεί σε αυξημένη έκφραση του

pri-γράμ- 7α

miRNA. Β, Μετά το νοκ ντάουν της DCLK1, μείωση σε ποσοστό

miR let7a-

εξαρτώμενη δραστηριότητα λουσιφεράσης παρατηρήθηκε σε κύτταρα AsPC-1. C, LIN28B mRNA προς τα κάτω στόχος του γράμ-

7α

ήταν μειωτικά σε όγκους που έλαβαν θεραπεία με NPsiDCLK1. Οι τιμές στα ιστογράμματα δίνονται ως μέσος όρος ± SEM, και αστερίσκοι δηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές (*

P

& lt? 0.01). σε σύγκριση με τον έλεγχο (NP μόνο)

Η

DCLK1 ρυθμίζει miR-200 οικογένεια γονιδίων και EMT σε καρκίνο του παγκρέατος

EMT είναι μια εξαιρετικά διατηρημένη διαδικασία, η οποία χαρακτηρίζεται από το φαινοτυπική μετατροπή των επιθηλιακών κυττάρων σε μεσεγχυματικά κύτταρα [7]. EMT είναι απαραίτητη σε διάφορα διαδικασία, συμπεριλαμβανομένων μορφογένεση οργάνων, επούλωση πληγών, μετάσταση καρκίνου και την αναδιαμόρφωση του ιστού στην εμβρυϊκή ανάπτυξη. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι

miR-200a, b

και

γ

(

miR-200

) είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν EMT και την αγγειογένεση [48]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι DCLK1 υπερεκφράζεται σε ανθρώπινο παγκρεατικό καρκινικούς ιστούς και συνεντοπίζεται με σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα. Μετά το νοκ ντάουν της DCLK1, μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω της ZEB1, ZEB2, σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα παρατηρήθηκε μετά από αυξημένη έκφραση του

pri-miR-200a

στο AsPC-1 καρκινικά κύτταρα [11]. Ομοίως, στην AsPC-1 μοσχευμάτων όγκων, μια 2-πλάσια επαγωγή

pri-miR

-200

μια

(

σ

& lt? 0,01) παρατηρήθηκε (Εικόνα 5Α) . Επίσης, θέλαμε να διερευνηθεί η επίδραση της DCLK1 νοκ ντάουν στην έκφραση του

miR-200b

και

γ

στο AsPC-1 μοσχευμάτων όγκων. Παρόμοια με

miR-200a

, παρατηρήσαμε μια σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση του

miR-200b

(1,5 φορές) (Εικόνα 5Α) και

miR-200c

(2-φορές ) (Σχήμα 5Α) μετά την knockdown του DCLK1. Στη συνέχεια, θελήσαμε να διερευνήσουμε κατά πόσο DCLK1 ρυθμίζει τις κατάντη στόχοι του

miR-200

. Πραγματοποιήσαμε μια λουσιφεράσης δοκιμασία ρεπόρτερ για

miR-200

. AsPC-1 κύτταρα επιμολύνθηκαν χωριστά με πλασμίδια που κωδικοποιούν το γονίδιο της λουσιφεράσης υπό τον έλεγχο του θέσεις σύνδεσης miRNA (τρία πλασμίδια το καθένα περιέχει θέσεις σύνδεσης για

miR-200A, b

ή

γ

) κατά του 3 ‘UTR. Μετά την επιμόλυνση, θα αντιμετωπίζονται τα κύτταρα με NP-siDCLK1. Τα κυτταρολύματα υποβλήθηκαν σε μέτρηση λουσιφεράσης. Μετά το νοκ ντάουν της DCLK1, υπήρξε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω των

miR-200a

,

miR-200b

και

miR-200c

(Εικόνα 5Β) με τη μεσολάβηση δραστηριότητα λουσιφεράσης. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι DCLK1 ρυθμίζει

miR-200

και κατάντη των στόχων της σε PDAC. Παρατηρήσαμε επίσης μια επακόλουθη μείωση του

κατάντη στόχους miR-200

ZEB1 και ZEB2 (Σχήμα 5C), σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα (Σχήμα 5D) μετά το νοκ ντάουν της DCLK1 σε παγκρεατικά ξενομοσχεύματα όγκου. Επιπλέον, τα κύτταρα AsPC-1 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με NPsiSCR ή NPsiDCLK1 και υποβάλλεται σε δοκιμασία εισβολή χρησιμοποιώντας θαλάμους εισβολή BD Biosciences Matrigel (BD BIOCOAT

TM). Παρατηρήσαμε σημαντική αναστολή της εισβολής μετά την knockdown του DCLK1 (Σχήμα 5Ε και F). Αυτά τα δεδομένα λαμβανόμενα μαζί δεικνύουν ότι knockdown του DCLK1 αναστέλλει ΕΜΤ και εισβολή ρυθμίζοντας

miR-200

σε ανθρώπινα παγκρεατικά καρκινικά ξενομοσχεύματα και καρκινικά κύτταρα. Ομοίως με τις προηγούμενες μελέτες μας, μετά το νοκ ντάουν της DCLK1, παρατηρήσαμε επίσης αναστολή της Notch1 μέσω

miR-144

(Εικόνα S2) σε AsPC-1 μοσχευμάτων όγκων.

Α, siRNA με τη μεσολάβηση νοκ ντάουν των αποτελεσμάτων DCLK1 σε αυξημένη έκφραση του

pri-miR-200a

,

pri-miR-200b

και

pri-miR-200c

με πραγματικού χρόνου RT-PCR . Β, Μετά το νοκ ντάουν της DCLK1, μείωση σε ποσοστό

miR-200a

,

miR-200b

και

δραστηριότητα miR-200c

εξαρτάται λουσιφεράσης παρατηρήθηκε σε κύτταρα AsPC-1 . ξενομοσχεύματα όγκου σε επεξεργασία με NPsiDCLK1 αποδειχθεί μια ρύθμιση προς τα κάτω του ΕΜΤ παραγόντων μεταγραφής ZEB1 και ZEB2 mRNA (C), μειωμένη έκφραση mRNA σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα (D). Ε, siRNA μεσολάβηση αναστολή των αποτελεσμάτων DCLK1 σε αναστολή της εισβολής στα κύτταρα AsPC-1. Λευκά βέλη δείχνουν τα κύτταρα εισέβαλαν μέσα από τη μήτρα Matrigel. F, Bar γράφημα αντιπροσωπεύει τον ποσοτικό προσδιορισμό των κυττάρων που εισέβαλαν μετά από κάθε θεραπεία. Τα κύτταρα μετρήθηκαν σε 5 διαφορετικά πεδία για κάθε ένθετο. Οι τιμές στα ιστογράμματα δίνονται ως μέσος όρος ± SEM, και αστερίσκοι δηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές (*

P

& lt? 0.01). σε σύγκριση με τον έλεγχο (NP μόνο)

Η

DCLK1 ρυθμίζει αγγειογενετικών παραγόντων σε PDAC

έχει αποδειχθεί ότι

miR-200

αναστέλλει αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα εισβολή και τη μετάσταση με στόχευση VEGFR1. Μια υποθετική θέση σύνδεσης για

miR-200

παρατηρήθηκε στο 3 ‘UTR του VEGFR1, και καταδείχθηκε ότι

miR-200

ρυθμίζει αρνητικά VEGFR1 [48]. Επιπλέον, μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι VEGFR1 και VEGFR2 έχει μια θέση σύνδεσης για

miR-200b

και βασίζεται σε δοκιμασία ανταποκριτή λουσιφεράσης-based

miR-200b

ρυθμίζει αυτές τις αγγειογενετικών παραγόντων [49]. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι VEGFR1 και VEGFR2 είναι κατάντη στόχοι του

miR-200

. Εδώ, βρήκαμε DCLK1 ρύθμιση

miR-200

και προς τα κάτω τους στόχους της. Θέλαμε να διερευνήσει περαιτέρω την επίδραση της DCLK1 νοκ ντάουν για αγγειογενετικών παραγόντων VEGFR1 και VEGFR2. Παρατηρήσαμε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του VEGFR1 mRNA (Σχήμα 6Α), πρωτεΐνη (Σχήμα 6Β και C – αριστερός πίνακας) σε όγκους που έλαβαν θεραπεία με NPsiDCLK1 σε σύγκριση με τον έλεγχο και την αγωγή NPsiSCR-όγκους. Παρατηρήσαμε επίσης ρύθμιση προς τα κάτω του VEGFR2 mRNA (Σχήμα 6Ε) και πρωτεΐνης (Σχήμα 6C – δεξί πάνελ) σε παγκρεατικά ξενομοσχεύματα όγκου σε επεξεργασία με NPsiDCLK1. Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς αναφοράς λουσιφεράσης και βασιζόμενων VEGFR1 και VEGFR2. κύτταρα AsPC-1 επιμολύνθηκαν με λουσιφεράσης γονίδιο με VEGFR1 ή VEGFR2 3 ‘UTR, υποβλήθηκε σε επεξεργασία με NPsiDCLK1 και υποβλήθηκε σε μέτρηση λουσιφεράσης δραστηριότητα. Μετά την knockdown του DCLK1, παρατηρήσαμε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του VEGFR1 (Σχήμα 6D) και VEGFR2 (Σχήμα 6F) 3 ‘UTR δραστικότητας που επιτελείται λουσιφεράσης. Αυτά τα δεδομένα μαζί δείχνουν ότι DCLK1 ρυθμίζει VEGFR1 και VEGFR2

μέσω του miR-200

στο PDAC.

Α, siRNA μεσολάβηση νοκ ντάουν της DCLK1 οδηγεί σε μειωμένη έκφραση του mRNA σε VEGFR1 NPsiDCLK1 αντιμετωπίζονται ξενομοσχεύματα όγκου . Μια μείωση στην VEGFR1 πρωτεΐνη παρατηρήθηκε σε NPsiDCLK1 θεραπεία όγκων (Β – κηλίδας Western? C – ανοσοφθορισμού – αριστερό πίνακα, VEGFR1 κόκκινο). D, Μετά την knockdown του DCLK1, μείωση της δραστηριότητας VEGFR1-3’UTR εξαρτώμενη λουσιφεράσης παρατηρήθηκε σε κύτταρα AsPC-1. Ε, εξόντωση DCLK1 οδηγεί σε μειωμένη έκφραση του mRNA σε VEGFR2 NPsiDCLK1 αγωγή ξενομοσχεύματα όγκου. F, Μία μείωση της δραστηριότητας της λουσιφεράσης VEGFR2-3’UTR εξαρτώμενη παρατηρήθηκε σε κύτταρα AsPC-1. NPsiDCLK1 μεσολάβηση νοκ ντάουν της DCLK1 οδήγησε σε μειωμένη έκφραση της VEGFR2 πρωτεΐνης υπολογίζεται χρησιμοποιώντας ανάλυση ανοσοφθορισμού (C – δεξιά πάνελ, VEGFR2 κόκκινο). Οι τιμές στα γραφήματα ράβδων σε Α, Β, D και Ε, δίδονται ως μέσος όρος ± SEM, και αστερίσκοι υποδηλώνουν στατιστικώς σημαντικές διαφορές (*

P

& lt? 0,01). Σε σύγκριση με τον έλεγχο (NP μόνο)

Συζήτηση

miRNAs είναι ταχέως αναδυόμενες ως κρίσιμη ρυθμιστές της σχεδόν όλες τις βασικές κυτταρικές διεργασίες. Απορύθμιση των miRNAs είναι αρκετά κοινά σε πολλούς καρκίνους του ανθρώπου, συμπεριλαμβανομένων PDAC. Σε πολλούς όγκους, είτε υπάρχει υπερέκφραση του λεγόμενου ογκογόνο miRNAs (π.χ.,

miR-155

,

miR-17-5p

και

miR-21

) [ ,,,0],15,16] ή προς τα κάτω ρύθμιση του όγκου miRNAs καταστολέα (π.χ.,

miR-34

,

miR-15a

,

miR-16-1

και γράμ-

7

) [17-20]. Η γράμ-

7

και

miR-200

οικογένειες είναι γνωστές οι ρυθμιστικές αρχές των βασικών προγραμμάτων διαφοροποίησης κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης. Απώλεια γράμ-

7

στον καρκίνο αποτελέσματα στην εξέλιξη και αποδιαφοροποίηση, και το

miR-200

οικογένεια έχει αποδειχθεί ότι είναι ένας βασικός ρυθμιστής της EMT. Επιπλέον, πρόσφατες μελέτες έχουν συνδέσει γράμ-

7

με τη συντήρηση και την EMT βλαστικών κυττάρων. Έτσι, είναι πολύ πιθανό ότι εξέλιξης του όγκου μπορεί να αντιπροσωπεύει μια διαδικασία που οδηγεί σε προοδευτική αποδιαφοροποίηση (ΕΜΤ) προς ένα τύπο κυττάρου που έχει ένα κύτταρο-όπως φαινότυπο στελέχους. Επιπλέον, η διαδικασία αυτή φαίνεται να ρυθμίζεται αυστηρά από μηχανισμούς miRNA-εξαρτώμενη [10,11,27,30]. DCLK1 ρυθμίζει EMT σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος

μέσω

ένα

miR-200a

εξαρτάται μηχανισμό [11] και είναι επίσης ένας ρυθμιστής του γράμ-

7α

στην παγκρέατος και του παχέος εντέρου κύτταρα, τα οποία υποστηρίζει την έννοια ότι αυτά τα miRNAs είναι σχετικές και νέους στόχους σε διάφορους καρκίνους στερεού όγκου [10,11,27,30,41]. DCLK1 είναι μια υποθετική δείκτης της εντερικής και παγκρεατικών αρχέγονων κυττάρων και ρυθμίζεται αυξητικά σε πολλούς στερεούς όγκους παρέχοντας πρόσθετη απόδειξη του δυναμικού βασικό ρόλο της στην ογκογόνο διαδικασία. Στην έκθεση αυτή, έχουμε αποδείξει ότι πέρα ​​από τη ρύθμιση πολλών miRNAs ογκοκατασταλτικό και κατάντη ογκογόνο στόχους, τα αποτελέσματα της αναστολής DCLK1 στην προς τα πάνω ρύθμιση των miRNAs που ρυθμίζουν αρνητικά αρκετές βασικές pluripotency και προ-αγγειογενετικών παραγόντων. Τα δεδομένα αυτά υποστηρίζουν την ιδέα ότι η DCLK1 είναι ένας κεντρικός ρυθμιστής της διαδικασίας όγκου.

Η καταστολή του

miR-143

και

miR-145

, δύο συν-μεταγράφονται miRNAs που βρίσκεται στο ανθρώπινο χρωμόσωμα 5q, έχει αναφερθεί σε καρκίνο του παγκρέατος. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι διαθέτουν ογκοκατασταλτικό δραστηριότητας [50,51]. Μειωμένη

miR-143/145

έκφρασης είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό πολλών τύπων όγκου συμπεριλαμβανομένων του καρκινώματος του παχέος εντέρου και PDAC [29,50,51]. Επιπλέον, η έκφραση αυτών των miRNAs αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό και ενεργοποιεί την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων

in vitro

και

in vivo

[29].