Αφηρημένο

Ιστορικό

Στην πρόσφατη μελέτη μας, ιστό πρωτεομική ανάλυση του στόματος προ-κακοήθεις αλλοιώσεις (OPLs) και φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος οδήγησε στην ταυτοποίηση ενός πάνελ βιοδεικτών, συμπεριλαμβανομένων προθυμοσίνη άλφα (PTMA), να διακρίνει OPLs από ιστολογικά φυσιολογικό στοματικών ιστών. Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να προσδιοριστεί η κλινική σημασία των PTMA υπερέκφραση σε προφορική πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων, δυσπλασία και το κεφάλι και το λαιμό ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (HNSCC).

Μεθοδολογία

Η ανοσοϊστοχημεία των PTMA πρωτεΐνης πραγματοποιήθηκε σε HNSCCs (n = 100), υπερπλασία των πλακωδών κυττάρων (n = 116), δυσπλασία (n = 50) και ιστολογικά φυσιολογικό στοματικών ιστών (n = 100). Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η σύνδεση των PTMA υπερέκφραση με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους και την πρόγνωση της νόσου πάνω από 7 χρόνια για τους ασθενείς HNSCC.

Αποτελέσματα

ανοσοϊστοχημική ανάλυση μας κατέδειξε σημαντική υπερέκφραση των πυρηνικών PTMA σε πλακωδών κυττάρων υπερπλασία (63,8%), δυσπλασία (50%) και HNSCC (61%) σε σύγκριση με από του στόματος φυσιολογικό βλεννογόνο (p

τάση & lt? 0.001). Chi-square ανάλυση έδειξε σημαντική συσχέτιση της πυρηνικής PTMA με προχωρημένα στάδια όγκων (III + IV). ανάλυση επιβίωσης Kaplan Meier έδειξε μειωμένης επιβίωσης ελεύθερης νόσου (DFS) σε ασθενείς HNSCC (p & lt? 0.001? διάμεση επιβίωση 11 μηνών). Αξιοσημείωτα, Cox-πολυπαραγοντική ανάλυση αποκάλυψε πυρηνική PTMA ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης κακής πρόγνωσης των ασθενών HNSCC (ρ & lt? 0.001, αναλογία κινδύνου, το HR = 5,2, 95% CI = 02.03 – 11.08) σε σύγκριση με τον ιστολογικό βαθμό, T-στάδιο, κομβική θέση και το στάδιο του όγκου.

Συμπεράσματα

Πυρηνική PTMA μπορεί να χρησιμεύσει ως προγνωστικός δείκτης σε HNSCC να καθορίσει το υποσύνολο των ασθενών που είναι πιθανό να παρουσιάσουν υποτροπή της νόσου.

Παράθεση: Tripathi SC, Matta Α, Kaur J, Grigull J, Chauhan SS, Thakar A, et al. (2011) Η υπερέκφραση του προθυμοσίνη Άλφα Προβλέπει Αποτέλεσμα Κακή Νόσου σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου. PLoS ONE 6 (5): e19213. doi: 10.1371 /journal.pone.0019213

Επιμέλεια: Irina V. Λεμπέντεβα, Enzo Life Sciences, Inc., Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 Οκτώβρη του 2010? Αποδεκτές: 29 Μαρ, 2011? Δημοσιεύθηκε: 5 Μαΐου 2011

Copyright: © 2011 Tripathi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. SCT είναι υποστηρίζεται από ένα Senior Research Fellowship από την ινδική Συμβουλίου Ιατρικής Έρευνας (ICMR), Νέο Δελχί, Ινδία. AM είναι αποδέκτης των MITACS Επιτάχυνση Fellow. RR αναγνωρίζει με ευγνωμοσύνη την υποστήριξη από τον Ιωσήφ και την Mildred Sonshine Κέντρο Κεφαλής και Τραχήλου Ασθένειες και Temmy Latner /Dynacare Ίδρυμα Οικογένειας, τον Καναδά. RR και KWMS αναγνωρίζουν χρηματοδότηση από τις καναδικές Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας (CIHR), Διεθνές Κέντρο Επιστήμης και Τεχνολογίας Συνεργασίες Καναδά (ISTP Καναδάς) και του Τμήματος Βιοτεχνολογίας (DBT), Ινδία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ανθρώπινο προθυμοσίνη άλφα (PTMA) είναι ένα 12,5 kDa, οξύ-πλούσια, μη-ιστόνης πυρηνική πρωτεΐνη, που αποτελείται από 110 αμινοξέα [1]. PTMA είναι γνωστό ότι παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, του πολλαπλασιασμού, μεταγραφή, χρωματίνης αναδιαμόρφωση, οξειδωτικό στρες-απόκρισης και την απόπτωση [2] – [8]. Η υπερέκφραση του PTMA έχει αναφερθεί σε αρκετές κακοήθειες όπως ο καρκίνος του μαστού [5], ηπατοκαρκινώματος [9], του καρκίνου του πνεύμονα [10], το νευροβλάστωμα [11], ο καρκίνος της ουροδόχου κύστης [12], γαστρικό [13] και ανώτερου ουροποιητικού μεταβατικό κυτταρικό καρκίνωμα [14]. Επιπλέον, PTMA χρησίμευσε επίσης ως προγνωστικός δείκτης για καρκίνο του μαστού, του γαστρικού, του προστάτη και της ουροδόχου κύστης [5], [13], [15], [16]. Πρόσφατα, ταυτοποιήσαμε PTMA μεταξύ των πάνελ βιοδεικτών που μπορούν να βρουν χρησιμότητα τους στη διάκριση OPLs και HNSCCs από μη κακοήθεις ιστούς, χρησιμοποιώντας ισοβαρικών ετικετών για σχετική και η απόλυτη ποσοτικοποίηση (iTRAQ) επισήμανση και πολυδιάστατο φασματομετρία μάζας υγρής χρωματογραφίας /tandem (LC-MS /MS) [17].

HNSCC είναι μεταξύ των δέκα πιο διαδεδομένες καρκίνων στον κόσμο, με ένα μεγαλύτερο ποσοστό που συμβαίνουν στις αναπτυσσόμενες χώρες. Καπνός, betel λίρες και η κατανάλωση αλκοόλ, καθώς και τον ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) είναι οι κύριοι παράγοντες κινδύνου που συνδέονται με την ανάπτυξη του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου [18] – [24]. Στοματική καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OSCC), ένα από τα σημαντικότερα υποτύπων HNSCC, συχνά προηγείται κλινικά καλά καθορισμένες αλλοιώσεις, όπως λευκοπλακία, η οποία συνδέεται αιτιωδώς με χρόνια έκθεση του στοματικού βλεννογόνου σε καρκινογόνους /αυξητικοί παράγοντες στον καπνό και /ή betel λίρες. Κατά μέσο όρο περίπου 1-2% αυτών των στοματικών βλαβών μετατρέψει σε καρκίνο ετησίως [25] – [27]. Επιπλέον, περισσότερο από το 50% όλων των ασθενών HNSCC έχουν προχωρήσει νόσου κατά τη στιγμή της διάγνωσης [28]. Παρά το γεγονός ότι, υπήρξαν εξελίξεις στην τρόπους θεραπείας που βελτιώνουν την ποιότητα της ζωής και να έχουν παρηγορητική αξία, τα ποσοστά επιβίωσης για τους ασθενείς HNSCC δεν έχουν βελτιωθεί σημαντικά (περίπου 50%), συχνά λόγω υποτροπής ή δεύτερη πρωτοπαθείς όγκους τοπική-περιφερειακή παρατηρούνται συχνά σε οι επιζώντες [27] – [30]. Επί του παρόντος, οι πιο σημαντικοί προγνωστικοί παράγοντες για HNSCC είναι ιστολογική βαθμού του όγκου, το στάδιο, το βάθος της εισβολής όγκου και την εμπλοκή των περιφερειακών λεμφαδένων κατά τη στιγμή της διάγνωσης. Ωστόσο, κανένας από αυτούς τους παράγοντες μπορούν να προβλέψουν την πρόγνωση του HNSCC αποτελεσματικά, υπογραμμίζοντας έτσι τη σημασία του εντοπισμού νέων βιολογικών δεικτών για την έγκαιρη ανίχνευση, αξιολόγηση του κινδύνου και ακριβή πρόβλεψη της επανάληψης για αυτήν την κακοήθεια.

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε ως στόχο να προσδιορίσει η κλινική σημασία των PTMA υπερέκφραση στο κεφάλι και το λαιμό ογκογένεση. Αναλύσαμε την έκφραση PTMA σε μια μεγάλη ομάδα των κλινικών δειγμάτων, συμπεριλαμβανομένων των κανονικών του βλεννογόνου του στόματος, πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC με ανοσοϊστοχημεία. Περαιτέρω, ερευνήσαμε συσχετίσεις της έκφρασης πυρηνικών PTMA με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων των πλακωδών κυττάρων υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC να καθορίσουν τη χρησιμότητά του ως βιοδείκτη.

Αποτελέσματα

Συσχέτιση των πυρηνικών PTMA σε πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων, δυσπλασία και HNSCC με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά

Για να προσδιοριστεί η κλινική σημασία της PTMA πρωτεΐνης στην ογκογένεση κεφάλι-και-λαιμό, την έκφραση της αναλύθηκε σε κανονικό βλεννογόνο του στόματος, πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων, δυσπλασία και HNSCC χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Σχήμα 1Α δείχνει τη συνολική κατανομή βαθμολογίας των πυρηνικών PTMA στην κανονική του βλεννογόνου του στόματος, πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων, δυσπλασία και HNSCC. Από τις 100 ιστολογικά φυσιολογικούς ιστούς που αναλύθηκαν, 88 ιστούς (88%) δεν έδειξαν ανιχνεύσιμη ανοσοχρώση PTMA σε πυρήνες των επιθηλιακών κυττάρων σε φυσιολογικούς ιστούς (Πίνακας 1, Σχήμα 1Β (ί)). έκφραση PTMA παρατηρήθηκε σε 5 από 43 (11,6%) ζευγαρωμένο φυσιολογικούς ιστούς και 7 της 57 (12,3%) μόνο ασύζευκτα φυσιολογικούς ιστούς. Chi ανάλυση πλατεία τάση έδειξε επίσης σημαντική αύξηση στην πυρηνική έκφραση του PTMA σε ιστούς που λαμβάνονται από διαφορετικά στάδια της ογκογένεσης κεφαλής και του λαιμού (πλακώδους κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC, p

τάση & lt? 0.001). Μεταξύ πλακωδών κυτταρική υπερπλασία (n = 116), 74 περιπτώσεις (63,8%) έδειξε σημαντική αύξηση της πυρηνικής ανοσοαντιδραστικότητα PTMA (ρ & lt? 0.001, OR = 12,9, 95% CI = 6,3 – 26,3) σε σύγκριση με την κανονική του στόματος ιστούς (Πίνακας 2 και Η Εικόνα 1 Β (iii)). Αυξημένη πυρηνική έκφραση του PTMA παρατηρήθηκε επίσης σε 50% δυσπλασία (25 50 περιπτώσεις, ρ & lt? 0.001, OR = 7.3, 95% CI = 3,2 – 16,6) σε σύγκριση με την κανονική του στόματος ιστούς (Πίνακας 3 και Σχήμα 1Β (v)) . Οι πίνακες 1, 2 και 3 συνοψίζουν συσχετίσεις των πυρηνικών PTMA με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων της κανονικής βλεννογόνου του στόματος, πλακωδών κυττάρων και υπερπλασίας δυσπλασία αντίστοιχα. Είναι ενδιαφέρον ότι, η πυρηνική PTMA έδειξε σημαντική συσχέτιση με την κατανάλωση καπνού συνήθειες των ασθενών με πλακώδες υπερπλασία των κυττάρων (p & lt? 0.001)

(α) ανάλυση Box-Plot:. Box οικόπεδα που δείχνει την κατανομή της συνολικής βαθμολογίες με βάση την ανοσοϊστοχημεία της PTMA πρωτεΐνης σε ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές από του στόματος φυσιολογικούς ιστούς, πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC. Ο κάθετος άξονας δείχνει συνολική βαθμολογία ανοσοχρώση, που λαμβάνεται όπως περιγράφεται στην ενότητα Μέθοδοι. Το σχήμα δείχνει συνολική κατανομή βαθμολογίας της έκφρασης πυρηνικών PTMA σε πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων (εύρος 0-7), δυσπλασία (εύρος 0-7) και HNSCC (εύρος 0-7). (Β) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση PTMA στο κεφάλι και το λαιμό τους ιστούς: εγκλεισμένα σε παραφίνη τμήματα ιστολογικά στόματος κανονικής βλεννογόνου, πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας αντι-PTMA πολυκλωνικό αντίσωμα, όπως περιγράφεται στην ενότητα Μέθοδοι. (I) κανονικό βλεννογόνο του στόματος που δείχνει καμία PTMA ανοσοχρώση? (Ii) πλακωδών κυτταρική υπερπλασία δεν δείχνει ανοσοχρώση για PTMA? (Iii) πλακωδών κυτταρική υπερπλασία δείχνει πυρηνική ανοσοχρώση PTMA σε επιθηλιακά κύτταρα? (Iv) δυσπλασία δεν δείχνει πυρηνική ανοσοχρώση PTMA? (V) δυσπλασία απεικονίζει πυρηνική ανοσοχρώση PTMA σε επιθηλιακά κύτταρα? (Vi) ενότητα HNSCC δείχνει καμία χρώση των πυρηνικών PTMA? (Vii) ενότητα HNSCC απεικονίζει πυρηνική χρώση PTMA σε καρκινικά κύτταρα? (Viii) Το τμήμα καρκίνο της ουροδόχου κύστης ιστό που δείχνει πυρηνική ανοσοχρώση PTMA? (Ix) Το τμήμα HNSCC χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος, δεν δείχνει ανοσοχρώση PTMA σε καρκινικά κύτταρα? (Ι-ΙΧ αρχική μεγέθυνση χ 200).

Η

Η

Μεταξύ HNSCC, 61% των περιπτώσεων έδειξε πυρηνικό εντοπισμό του PTMA σε κύτταρα όγκου σε σύγκριση με την κανονική του στόματος ιστούς (ρ & lt ? 0.001, OR = 11,5, 95% CI = 5,7 – 23,7? Ο Πίνακας 4 και Σχήμα 1Β (vii)). Οι κλινικοπαθολογικών παραμέτρων του HNSCC και οι συσχετίσεις τους με έκφραση πυρηνικών PTMA παρουσιάζονται στον Πίνακα 4. Είναι ενδιαφέρον ότι, η πυρηνική PTMA έδειξε σημαντική συσχέτιση με προχωρημένο στάδιο του όγκου (ρ = 0,03). Αξιοσημείωτα, κανένας από τους ιστούς έδειξε HNSCC κυτταροπλασματική ανοσοχρώση PTMA. Ο θετικός έλεγχος (καρκίνος της ουροδόχου κύστης) έδειξε έντονη έκφραση πυρηνικών PTMA (Εικόνα 1Β (viii)), ενώ δεν ανοσοχρώση παρατηρήθηκε σε τομές ιστών που χρησιμοποιούνται ως αρνητικοί μάρτυρες όπου το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε με ισότυπο ειδική IgG (Εικόνα 1Β (ix)).

Η ικανότητα των πυρηνικών PTMA να διακρίνει πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων, δυσπλασία και HNSCC από το κανονικό βλεννογόνο του στόματος καθορίστηκε από την αξιολόγηση ευαισθησία, ειδικότητα, θετική και αρνητική προγνωστική αξία και η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) χρησιμοποιώντας Receiver Operating ανάλυση Χαρακτηριστική (ROC) καμπύλη. Οι τιμές για την ευαισθησία, την ειδικότητα και AUC για πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC δίνονται στον Πίνακα 5. Η θετική προγνωστική αξία (PPV) ήταν 86,0, 67,6 και 83,6 για πυρηνική έκφραση της PTMA αντίστοιχα σε αυτές τις τρεις ομάδες (Πίνακας 5).

Η

PTMA υπερέκφραση ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για HNSCC

Το εκτιμώμενο προβλεπτική ικανότητα έκφρασης PTMA με κακή πρόγνωση εκτιμήθηκε με ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier. ασθενείς HNSCC φιλοξενούν πυρηνικής PTMA έδειξαν μειωμένη σημαντικά την επιβίωση ελεύθερη νόσου (ρ & lt? 0,001? διάμεση επιβίωση 11 μήνες) σε σύγκριση με τους ασθενείς που δεν παρουσιάζουν την πυρηνική ανοσοχρώση PTMA (Σχήμα 2d). Cox-πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η προγνωστική δυνατοτήτων της πυρηνικής PTMA σε HNSCC σε σύγκριση με άλλες παραμέτρους clincopathological συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας, του φύλου, η ιστολογική ποιότητα, T-στάδιο, κομβικών κατάσταση και το στάδιο του όγκου. Είναι ενδιαφέρον ότι, η πυρηνική PTMA αναδειχθεί ως ένα ανεξάρτητο και πιο σημαντικός παράγοντας πρόβλεψης της κακής πρόγνωσης σε ασθενείς HNSCC στην πολυπαραγοντική ανάλυση (p & lt? 0.001, HR = 5,2, 95% CI = 02.03 – 11.08).

(α) Kaplan- Meier εκτίμηση των σωρευτικών ποσοστό επιβίωσης ελεύθερης νόσου, ο διάμεσος χρόνος για την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS: δεν θα επαναληφθούν /μετάσταση) σε ασθενείς HNSCC δείχνει πυρηνική ανοσοχρώση της PTMA ήταν 11 μήνες, σε σύγκριση με τους ασθενείς που δεν παρουσιάζουν την πυρηνική ανοσοχρώση PTMA (p & lt? 0.001)? (Β) Θετική προγνωστική αξία: Αξίες θετική προγνωστική [PPV (t)] για το χρόνο υποτροπής του καρκίνου για τους 51 ασθενείς HNSCC με PTMA (+) (συνεχής γραμμή) και για όλους τους ασθενείς 77 HNSCC με στοιχεία επιβίωσης (διακεκομμένη γραμμή)? (Γ) αρνητική προγνωστική αξία: αρνητική προγνωστική αξία [NPV (t)] για το χρόνο υποτροπής του καρκίνου του για 26 ασθενείς με PTMA (-) (συνεχής γραμμή), και για όλους τους 77 ασθενείς (διακεκομμένη γραμμή)

Η.

με βάση τα δεδομένα μας, το επιπλέον προγνωστική αξία ότι η πυρηνική έκφραση PTMA προϋπόθεση για την πρόβλεψη (PPV) ή εξαίρεση (NPV) επανεμφάνιση καρκίνου σε ασθενείς HNSCC μετρήθηκε από το λόγο: PPV

υποτροπή /HNSCC (83 μήνες | PTMA ) /PPV

υποτροπή /HNSCC (83 μήνες) = 78.4 /61.0? NPV

υποτροπή /HNSCC (83 μήνες | PTMA) /NPV

υποτροπή /HNSCC (83 μήνες) = 73,1 /39,0 (Σχήμα 2ε & amp? 2στ). Ως εκ τούτου, αυτά τα ευρήματα καταδεικνύουν σαφώς το δυναμικό των πυρηνικών PTMA ως δείκτης για την πρόβλεψη των υποτροπών της HNSCC.

Επαλήθευση των PTMA υπερέκφρασης με RT-PCR και ανοσοκηλίδωση

Η υπερέκφραση του PTMA σε πλακώδους κυτταρική υπερπλασία , δυσπλασία και HNSCC σε σύγκριση με την κανονική στοματική βλεννογόνο επαληθεύτηκε με RT-PCR και ανοσοστύπωμα στα ίδια δείγματα ιστών που χρησιμοποιήθηκαν για ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Μας ανάλυση RT-PCR έδειξαν αυξημένα επίπεδα PTMA μετεγγραφής σε πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων (Η1, Η2), δυσπλασία (D1, D2) και HNSCC (Τ1, Τ2, Τ3) σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς (Ν1, Ν2) (Σχήμα 3α) . ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως με τη χρήση ειδικού αντισώματος για PTMA έδειξε ξεκάθαρα μία μόνο έντονη ζώνη του 12,5 kDa σε προϊόντα λύσης ολόκληρου κυττάρου που λαμβάνονται από πλακωδών κυττάρων υπερπλασία (Η1, Η2), δυσπλασία (D1, D2) και HNSCCs (Τ1, Τ2) ενώ δεν ζώνη θα μπορούσε να ανιχνευθεί σε φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος (Ν1, Ν2) (Σχήμα 3b). Μαζί, αυτά τα ευρήματα επιβεβαίωσαν υπερέκφραση του PTMA σε πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC σε σύγκριση με την κανονική του στόματος ιστούς.

(α) RT-PCR ανάλυση του PTMA στην κανονική βλεννογόνο, πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και ιστών HNSCC . Πάνελ δείχνει αυξημένα επίπεδα PTMA μετεγγραφής σε πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων (Η1, Η2), δυσπλασία (D1, D2) και HNSCC (Τ1, Τ2, Τ3) σε σύγκριση με την κανονική στοματική βλεννογόνο (Ν1, Ν2) που έδειξε βασικά επίπεδα PTMA μεταγραφές . β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για την κανονικοποίηση της ποσότητας του RNA που χρησιμοποιείται για κάθε αντίδραση RT-PCR παρίσταται στο κάτω πάνελ. (Β) ανάλυση ανοσοκηλίδας: ανοσοστυπώματος ανάλυση των PTMA σε κανονικό βλεννογόνο του στόματος (Ν1, Ν2), πλακώδους κυττάρου υπερπλασία (Η1, Η2), δυσπλασία (D1, D2) και HNSCC (Τ1, Τ2). Ίση ποσότητα προϊόντων λύσης πρωτεΐνης ηλεκτροφορήθηκαν σε 12% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη PVDF. Η μεμβράνη επωάστηκε με τα αντίστοιχα πρωτογενή αντισώματα και δευτερογενή αντισώματα, όπως περιγράφεται στο τμήμα των Μεθόδων και το σήμα που ανιχνεύεται από ενισχυμένη μέθοδο χημειοφωταύγειας. Πάνελ δείχνει αυξημένη έκφραση PTMA σε πλακωδών κυττάρων υπερπλασία (Η1, Η2), δυσπλασία (D1, D2) και HNSCC (Τ1, Τ2) σε σχέση με την κανονική του βλεννογόνου του στόματος (Ν1, Ν2). GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως μάρτυρας φόρτωσης (κάτω πάνελ).

Η

Συζήτηση

Η χρόνια φλεγμονή στο βλεννογόνο του στόματος κορυφώνεται με την ανάπτυξη της OPLs, μερικά από τα οποία η πρόοδος στην ειλικρινή κακοήθεια. Σε αυτό το πολλαπλών σταδίων μοντέλο της κεφαλής και ογκογένεσης λαιμού, του στόματος βλάβες όπως λευκοπλακία με ιστοπαθολογική απόδειξη της δυσπλασίας, θεωρούνται επίσης ως προ-κακοήθη ή δυνητικά κακοήθεις αλλοιώσεις, βρίσκονται σε υψηλό κίνδυνο εξέλιξης σε καρκίνο – συχνά, αλλά όχι πάντα συσχέτιση με τη σοβαρότητα της επιθηλιακή δυσπλασία [31]. Ωστόσο, οι στοματικές αλλοιώσεις με πλακωδών κυτταρική υπερπλασία έχουν αποκλειστεί σε μεγάλο βαθμό από τη μοριακή ανάλυση στις περισσότερες από τις μελέτες. Εδώ, αποδείξαμε ότι οι μεταβολές στην έκφραση της πρωτεΐνης μπορεί να συμβεί στα πρώτα στάδια της κεφαλής και του λαιμού καρκινογένεσης δηλ υπερπλασία πλακωδών κυττάρων, τα οποία θα μπορούσαν να ευθύνονται για την αυξημένη πολλαπλασιασμό. Μια άλλη σημαντική κλινική πρόκληση είναι να αξιολογήσει την πρόγνωση του HNSCC αποτελεσματικά, υπογραμμίζοντας με αυτόν τον τρόπο την επείγουσα ανάγκη για βιοδείκτες που μπορεί να προβλέψει τον κίνδυνο υποτροπής σε HNSCC. Τα κυριότερα ευρήματα της μελέτης μας είναι οι εξής: (i) σημαντική αύξηση στην έκφραση της πυρηνικής PTMA στο πλακωδών κυττάρων υπερπλασία και δυσπλασία σε σύγκριση με την κανονική ιστών του στόματος? (Ii) το αυξημένο δυναμικό των πυρηνικών PTMA να διαφοροποιηθούν πλακωδών κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και HNSCC από φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος με υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα? (Iii) των δυνατοτήτων της πυρηνικής PTMA στην πρόβλεψη υποτροπής σε HNSCC. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή η έρευνα καταδεικνύει την πρώτη κλινική ένδειξη της αυξημένης έκφρασης των πυρηνικών PTMA σε προ-κακοήθεις αλλοιώσεις και HNSCC σε μεγάλη κλίμακα. Περαιτέρω, η τρέχουσα μελέτη επαλήθευσε επίσης προηγούμενη έκθεσή μας αυξημένης έκφρασης του PTMA πρωτεΐνης σε OPLs προσδιορίζονται χρησιμοποιώντας επισήμανση iTRAQ και ιστών πρωτεομική ανάλυση, αν και σε περιορισμένο αριθμό περιπτώσεων [32].

Η σημαντικά αυξημένη έκφραση των πυρηνικών PTMA σε πρώιμες βλάβες με πλακωδών κυτταρική υπερπλασία υποδηλώνει δυνατότητες του για την αναγνώριση ασθενών σε πρώιμο στάδιο, πριν την έναρξη της δυσπλασίας. Αυτό υποστηρίζεται καλά από το ρόλο της πυρηνικής PTMA στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και του πολλαπλασιασμού [33]. Περαιτέρω, η αυξημένη έκφραση της πυρηνικής PTMA έχει επίσης αναφερθεί σε απόκριση σε φλεγμονή. Αξίζει να σημειωθεί ότι, θυμοσίνη α1 που προέρχεται από τον πρόδρομο της PTMA έχει αναφερθεί ότι είναι ένας ενδογενής ρυθμιστής του ανοσοποιητικού ομοιόστασης που ελέγχει τη φλεγμονή, ανοσία, και ανοχή σε μία ποικιλία κλινικών ρυθμίσεων [34]. Είναι σημαντικό ότι, η χρόνια φλεγμονή έχει ευρέως που συνδέονται με την ανάπτυξη του HNSCC [35] και παρόντα ευρήματα μας πυρηνικών υπερέκφραση PTMA σε πλακώδη κυτταρική υπερπλασία, δυσπλασία και ειλικρινή όγκους μας δελεάζει να κάνει υποθέσεις ρόλος του PTMA στη διασύνδεση φλεγμονή και τον καρκίνο ανάπτυξη. Αναγνωρίζουμε επίσης την πιθανή σχέση μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών PTMA και τον κίνδυνο της επιβεβαίωσης ανάπτυξης καρκίνου των αναγκών σε μακροχρόνια μελέτη παρακολούθησης ασθενών με πλακώδες υπερπλασία των κυττάρων? όπως διαχρονικές μελέτες είναι δύσκολο, αλλά αυτοί οι ασθενείς παρακολουθούνται για την τακτική παρακολούθηση της εξέλιξης της νόσου.

Προς υποστήριξη των ευρημάτων μας, Suzuki et al., ανέφεραν αυξημένη έκφραση της πυρηνικής PTMA με την εξέλιξη από το φυσιολογικό επιθήλιο, μέσω της προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία σε καρκινώματα, γεγονός που υποδηλώνει τη συμμετοχή της στην διαφοροποίηση και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη [15]. Αρκετές άλλες μελέτες έχουν επίσης προτείνει ένα παρόμοιο ρόλο για PTMA στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό ως ογκοπρωτεϊνης [5] – [7], [33], [36] – [38]. PTMA δεν σχετίζεται μόνο με τον πολλαπλασιασμό, αλλά εμπλέκεται άμεσα στη διαδικασία, πιθανότατα ως ένα πρώιμο συστατικό στα γεγονότα πολλαπλασιασμού που ενεργοποιούνται με τις myc γονίδια [8], [39]. Επίσης, επηρεάζει τη δραστηριότητα των συγκεκριμένων μεταγραφικών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένου του υποδοχέα οιστρογόνων (ER), p53, p21 και μετατροπείς σήματος και ενεργοποιητές της μεταγραφής 3 [36], [40], [41]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η έκφραση PTMA ρυθμίζεται θετικά από πρωτεΐνες οιστρογόνο RNA δέσμευσης, HuR, c-myc και E2F, ενώ ρ53 δρα ως αρνητικός ρυθμιστής της μεταγραφής [40], [42] – [44]. Επιπλέον, PTMA αλληλεπιδρά με τις ιστόνες και επηρεάζει τις διαδικασίες της χρωματίνης αναδιαμόρφωση [36], [45] – [47]. Επιπλέον, ο ρόλος του PTMA στην προσκόλληση, η μετανάστευση και πολλαπλασιασμός έχει αναφερθεί σε ανθρώπινο καρκίνο των ωοθηκών [48].

Το πιο σημαντικό, στην έκφραση μελέτη πυρηνικών PTMA μας προέκυψε ως μια ανεξάρτητη φτωχή μάντης σε πολυμεταβλητά ανάλυση, σύγκριση με τις γνωστές κλινικές και παθολογικοί παράγοντες για HNSCC συμπεριλαμβανομένων ιστολογική βαθμού [καλά διαφοροποιημένα (WD), μετρίως διαφοροποιημένα (MD) και κακώς διαφοροποιημένα (PD)], Τ-στάδιο, λεμφαδένα θετικότητα και το στάδιο του όγκου. Επιπλέον, η ανάλυση της πρόβλεψης δυναμικό της PTMA αποκάλυψε τη χρησιμότητά του ως δείκτη για τον εντοπισμό επιθετική HNSCC, υποστηρίζοντας τη συσχέτιση που παρατηρήθηκε με ανάλυση Kaplan-Meier και ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης. Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά απέδειξαν τις δυνατότητες της πυρηνικής PTMA ως δυνητικό δείκτη για την πρόβλεψη φτωχή πρόγνωση του HNSCC. Ωστόσο, βιολογικός ρόλος των PTMA στην εξέλιξη HNSCC και επανάληψης δεν είναι απολύτως κατανοητή, που δικαιολογούν έτσι περαιτέρω έρευνες σε μελλοντικές μελέτες. Altered προφίλ έκφρασης PTMA έχει επίσης αναφερθεί σε αρκετές άλλες κακοήθειες [5], [9] – [12], [14]. Η υπερέκφραση του PTMA έχει αναφερθεί σε αρκετές νεοπλάσματα και το επίπεδο έκφρασης συνδέεται με την πρόγνωση, μεταστατικό δυναμικό και τη συνολική επιβίωση των ασθενών. υπερέκφραση του σε καρκίνο του μαστού συσχετίζεται με μεταστατικό δυναμικό των καρκινικών και με τον κίνδυνο θανάτου [5]. Έχει αναφερθεί ως πιθανός βιολογικός δείκτης στον καρκίνο του παχέος εντέρου [49], ένας δείκτης όγκου για την ανίχνευση του μεταβατικού κυτταρικού καρκινώματος της ουροδόχου κύστης [16] και μάντης σε ανώτερου ουροποιητικού μεταβατικό καρκίνωμα κυττάρου [14].

Συμπερασματικά, η πυρηνική PTMA παρατηρήθηκε στην πλειοψηφία των πλακωδών δυσπλασία υπερπλασία των κυττάρων και HNSCC. Οι διαχρονικές μελέτες μεγάλης κλίμακας εγγύηση για την αξιολόγηση του δυναμικού της PTMA υπερέκφραση για τον εντοπισμό ασθενών με στοματικές αλλοιώσεις διατρέχουν υψηλό κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου. Επιπλέον, η μελέτη μας κατέδειξε τη σημασία της πυρηνικής PTMA η κακή μάντης της HNSCC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και τη συλλογή δεδομένων κλινικοπαθολογοανατομικές, δείγματα ιστών

Η Επιτροπή Θεσμικών ανθρώπινη ηθική της το All Ινδία Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών (AIIMS), Νέο Δελχί, Ινδία, ενέκρινε αυτή τη μελέτη πριν από την έναρξη του. Μια γραπτή συγκατάθεση έχει εγκριθεί από επιτροπή δεοντολογίας ελήφθη από όλους τους συμμετέχοντες που εμπλέκονται στη μελέτη. δείγματα ιστού ελήφθησαν από διαγνωστικές ή θεραπευτικές διαδικασίες από ασθενείς παρουσιάζουν χαρακτηριστικά υπερπλασίας πλακωδών κυττάρων (n = 116) ή δυσπλασία (n = 50) που παρακολουθεί την Εξωτερικά Ιατρεία των Τμημάτων Χειρουργικής κλάδων και Ωτορινολαρυγγολογία, AIIMS, και από 100 ασθενείς HNSCC που υποβάλλονται σε θεραπευτική χειρουργική επέμβαση καρκίνου κατά τη διάρκεια της περιόδου 2002-2007, μετά τη σύμφωνη γνώμη των ασθενών. Όπου είναι δυνατόν, μη-κακοήθεις ιστούς ζεύγη (η = 43) ελήφθησαν από μία θέση σε απόσταση από το χειρουργικά HNSCC. Μη-κακοήθεις αταίριαστα ιστών του στόματος (n = 57) ήταν επίσης συλλέχθηκαν από τους ασθενείς που παρακολουθεί την Εξωτερικά Ιατρεία Τμήμα Οδοντικής Χειρουργικής για την εξαγωγή δοντιού. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα 100 μη-κακοήθεις ιστούς του στόματος με ιστολογική ένδειξη της κανονικής επιθηλίων αποτελούσαν την φυσιολογική ομάδα. Μετά την εκτομή, οι ιστοί αμέσως καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C στο Research Tissue Bank μέχρι περαιτέρω χρήση? ένα μέρος του ιστού συλλέγονται επίσης σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη για ιστοπαθολογική και ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Η ιστολογικά επιβεβαιωμένο από το στόμα φυσιολογικό επιθήλιο, στοματικές βλάβες με πλακωδών υπερπλασία κυττάρου ή με δυσπλασία, και HNSCC όπως αποκαλύπτεται από Η και χρώση Ε χρησιμοποιήθηκαν για ανοσοϊστοχημεία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17]. δημογραφικά, κλινικά και παθολογικά στοιχεία των ασθενών καταγράφηκαν σε ένα προ-σχεδιασμένο performa όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17], [50]. Οι πληροφορίες που τεκμηριώνονται περιλαμβάνονται κλινική ΤΝΜ σταδιοποίηση (όγκος, κόμβος, μετάσταση με βάση την ταξινόμηση Ένωση Διεθνές Κέντρο Καρκίνου le ΤΝΜ των κακοήθων όγκων του 2002), τη θέση της βλάβης, ιστοπαθολογική Βαθμός (WD, MD, PD), την ηλικία, το φύλο, και τον καπνό καταναλωτικές συνήθειες.

συνέχεια Μελέτη

Εβδομήντα επτά ασθενείς HNSCC οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία 2002 – 2007 ερευνήθηκαν και αξιολογήθηκαν στην κλινική παρακολούθηση του καρκίνου της κεφαλής και του λαιμού σε κανονικό χρόνο χρονικά διαστήματα. Επιβίωση κατάσταση των ασθενών HNSCC επαληθεύτηκε και ενημερώθηκε από τα αρχεία του μητρώου των όγκων, Ινστιτούτο Ρόταρυ Cancer Hospital, AIIMS, το Δεκέμβριο του 2009. ασθενείς HNSCC παρακολουθήθηκαν για μέγιστο χρονικό διάστημα 83 μηνών. Σύμφωνα με το πρωτόκολλο του νοσοκομείου που περιγράφηκε προηγουμένως [50], [51], οι ασθενείς HNSCC με Τ

1 και Τ

2 όγκοι υπέστησαν αγωγή μόνο με χειρουργική επέμβαση, ενώ η πλειονότητα των ασθενών με Τ

3 και Τ

4 ασθενειών αντιμετωπίστηκαν με ριζική χειρουργική επέμβαση που ακολουθείται από μετεγχειρητική ριζική ακτινοθεραπεία. Οι ασθενείς επανεξεταστεί κλινικά σε τακτική βάση και ο χρόνος μέχρι την υποτροπή καταγράφηκε. Εάν ένας ασθενής πέθανε, ο χρόνος επιβίωσης λογοκρίθηκε κατά τη στιγμή του θανάτου? Στο ιατρικό ιστορικό, κλινική εξέταση, και ακτινολογική αξιολόγηση χρησιμοποιήθηκαν για να καθοριστεί εάν ο θάνατος προέκυψε από υποτροπιάζοντα καρκίνο (υποτροπιάζουσα ασθενείς) ή από οποιεσδήποτε άλλες αιτίες. επιζώντες ελεύθερη νόσου ορίστηκαν ως ασθενείς χωρίς κλινικές και ακτινολογικές ενδείξεις τοπικό, περιφερειακό, ή μακρινή υποτροπή κατά τη χρονική στιγμή της τελευταίας παρακολούθησης. Loco-περιφερειακές υποτροπή /θάνατος παρατηρήθηκε σε 51 από 77 (66%) των ασθενών που παρακολουθούνται κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης. Είκοσι έξι ασθενείς που δεν παρουσιάζουν υποτροπή ήταν ζωντανοί μέχρι το τέλος της περιόδου παρακολούθησης. Μόνο ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) αξιολογήθηκε στην παρούσα μελέτη, καθώς ο αριθμός των θανάτων που οφείλονται σε εξέλιξη της νόσου δεν επιτρέπουν μια αξιόπιστη στατιστική ανάλυση. Ελεύθερη νόσου επιβίωση εκφράστηκε ως ο αριθμός των μηνών από την ημερομηνία της επέμβασης σε τοπική-περιοχική υποτροπή /θάνατο.

Η ανοσοϊστοχημεία

ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές (5 μm) ανθρώπινη φυσιολογική στοματικού βλεννογόνου (n = 100), υπερπλασία των πλακωδών κυττάρων (n = 116), δυσπλασία (n = 50) και HNSCC (n = 100) συλλέχθηκαν σε πλακίδια επικαλυμμένα με ζελατίνη. Εν συντομία, οι τομές αποπαραφινώθηκαν σε ξυλόλιο, ενυδατώνονται σε βαθμίδα αλκοόλ, και προ-επεξεργασμένο σε φούρνο μικροκυμάτων για 10 λεπτά στους 800 W και 5 λεπτά στους 480 W σε Tris – ρυθμιστικό EDTA (0.01 Μ, ρΗ = 9,0) για το αντιγόνο ανάκτηση. Οι τομές επωάστηκαν με υπεροξείδιο του υδρογόνου (0.3% ν /ν) σε μεθανόλη για 30 λεπτά για την απόσβεση της ενδογενούς ενεργότητας υπεροξειδάσης, και ακολούθησε αποκλεισμός με 1% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) για να αποκλειστεί η μη ειδική πρόσδεση. Στη συνέχεια, τα πλακίδια επωάστηκαν με (Ν-18) αντίσωμα κατσίκας πολυκλωνικό-PTMA αντι (4 μg /ml, sc-18205, Santa Cruz Biotechnology, CA) για 16 ώρες στους 4 ° C. Το πρωτογενές αντίσωμα ανιχνεύθηκε με τη χρήση της στρεπταβιδίνης-βιοτίνης σύμπλοκο με το Dako LSAB συν κιτ (Dako Cytomation, Glostrup, Δανία) και διαμινοβενζιδίνη ως χρωμογόνο [32]. Όλες οι διαδικασίες διεξήχθησαν σε θερμοκρασία δωματίου εκτός αν ορίζεται διαφορετικά. Τα πλακίδια πλύθηκαν με αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (TBS, 0,1 Μ, ρΗ = 7,4), 3-5 φορές μετά από κάθε βήμα. Τέλος, οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη Mayer και τοποθετείται με D.P.X έγκλεισης. Στις αρνητικές τομές ιστών ελέγχου, το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε με ισότυπο ειδικού μη-άνοση IgG ποντικού. Τομές ιστού από καρκίνο της ουροδόχου κύστης χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος για έκφραση PTMA [12]. Οι τομές αξιολογήθηκαν με φως μικροσκοπική εξέταση χρησιμοποιώντας την Olympus BX51 μικροσκόπιο.

Αξιολόγηση των ανοσοϊστοχημική χρώση

Κάθε slide αξιολογήθηκε για PTMA ανοσοχρώση χρησιμοποιώντας μια ημι-ποσοτική σύστημα βαθμολόγησης τόσο για ένταση χρώσης και το ποσοστό των θετικών επιθηλιακών κυττάρων, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [50]. Ανοσοθετικού χρώση αξιολογήθηκε σε τυχαία επιλεγμένα πέντε περιοχές του τμήματος του ιστού. Για την έκφραση της πρωτεΐνης PTMA, τομές βαθμολογήθηκαν ως θετικά, αν επιθηλιακά κύτταρα έδειξαν ανοσοθετικότητα στον πυρήνα όταν παρατηρήθηκε ανεξάρτητα από τέσσερις από εμάς (SCT, AM, JK, SDG), οι οποίοι δεν γνώριζαν την κλινική έκβαση (τα πλακίδια κωδικοποιούνται και ο σκόρερ δεν έχουν προηγούμενη γνώση του τοπικού φορτίου του όγκου, lymphonodular εξάπλωση, και βαθμολόγηση των δειγμάτων ιστού). Οι τομές ιστών βαθμολογήθηκαν με βάση την% του ανοσοχρώση κυττάρων ως: 0-10% = 0? 10-30% = 1? 30-50% = 2? 50-70% = 3 και 70-100% = 4. Τμήματα βαθμολογήθηκαν επίσης ημι-ποσοτικά με βάση την ένταση χρώσης ως αρνητικός = 0? ήπια = 1? μέτριο = 2? έντονο = 3 [50]. Τέλος, η συνολική βαθμολογία ελήφθη με την προσθήκη της βαθμολογίας του ποσοστού θετικότητας και την ένταση. Η βαθμολόγηση από τις τέσσερις παρατηρητές (SCT, AM, JK, SDG) ήταν αντιφατικά σε περίπου 5% των περιπτώσεων και μια συναίνεση σχετικά με το τελικό αποτέλεσμα επιτεύχθηκε με την εκ νέου αξιολόγηση αυτών των διαφανειών και συζήτηση.

Στατιστική Ανάλυση

Οι ανοσοϊστοχημικές δεδομένα υποβλήθηκαν σε στατιστική ανάλυση με τη χρήση του λογισμικού SPSS 13.0 (Chicago). Ευαισθησία και ειδικότητα υπολογίστηκαν και ποσοτικά με τη χρήση του δέκτη ανάλυση καμπύλης λειτουργίας χαρακτηριστικό (ROC). Η προγνωστική αξία (PV) περιγράφει την αναλογία των ταξινομηθεί σωστά περιπτώσεις. Με βάση τις τιμές ευαισθησία και ειδικότητα για PTMA, ένα cut-off ≥2 ορίστηκε ως θετικό κριτήριο για την πυρηνική ανοσοθετικότητα PTMA για στατιστική ανάλυση. Οι σχέσεις μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης PTMA και κλινικοπαθολογοανατομικές παράμετροι εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας Chi-Square και ακριβές τεστ του Fischer. Δύο όψεων τιμές ρ υπολογίστηκαν και ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε ότι ήταν σημαντική. Ομοίως, η θετική προγνωστική αξία (PPV) και αρνητική προγνωστική αξία (NPV) υπολογίστηκε για πλακώδη υπερπλασία των κυττάρων, δυσπλασία και HNSCC σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς.

Ο συσχετισμός της χρώσης PTMA με την επιβίωση των ασθενών αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας πίνακες ζωής κατασκευασμένη από δεδομένα επιβίωσης με οικόπεδα Kaplan-Meier [50]. Η πολυπαραγοντική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το μοντέλο παλινδρόμησης Cox, η οποία περιελάμβανε PTMA υπερέκφραση και κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους όπως η ηλικία, το φύλο, η ιστολογική βαθμό, T-στάδιο, κομβικών κατάσταση και το στάδιο του όγκου. Η συστηματική και αυστηρή εκτίμηση των Θετική και αρνητική προγνωστική αξία (PPV και NPV, αντίστοιχα) για προγνωστικούς βιοδείκτες διεξήχθη όπως περιγράφεται παραπάνω [50]. Για την μελέτη παρακολούθησης της HNSCC, το T δηλώνει το χρόνο αποτυχίας, δηλαδή, η πρώτη φορά που η επανάληψη έχει διαγνωστεί μετά από χειρουργική αφαίρεση του όγκου. Για αυτά τα δεδομένα, οι θετικές και αρνητικές τιμές πρόβλεψης ως συναρτήσεις του χρόνου ορίζεται ως εξής: PPV

όγκου (t) = Prob (T≤t και στην επανάληψη | PTMA (πυρηνικό) ≥2)? NPV

όγκου (t) = Prob (T & gt? T ή δεν θα επαναληφθούν | PTMA (πυρηνικό) & lt? 2)? 0≤t≤83, Αυτές οι πιθανότητες εκτιμώνται από τις παρατηρούμενες συσσωρευμένες επιπτώσεις κατά τη διάρκεια των αντίστοιχων περιόδων του χρόνου [52].

Η αντίστροφη μεταγραφή-PCR

Εκπρόσωπος κατεψυγμένα δείγματα ιστού ιστολογικά επιβεβαιωμένου στόματος φυσιολογικούς ιστούς (n = 5), πλακωδών κυτταρική υπερπλασία (n = 5), δυσπλασία (n = 5) και HNSCC (n = 5) χρησιμοποιήθηκαν για την εκχύλιση του ολικού RNA χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRI (Sigma, ΜΟ) όπως περιγράφεται προηγουμένως [53] . Πρώτου κλώνου cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας 2 μg RNA με ολίγο dT ως τον εναρκτήρα με MMLV αντίστροφη μεταγραφάση. PCR διεξήχθη με τη χρήση ειδικών PTMA εμπρός εκκινητές (5′-ATGTCAGACGCAGCCGTAGACACCA-3 ‘) και ανάστροφα (5′-CTAGTCATCCTCGTCGGTCTTCTGC-3’) [11]. Είκοσι μικρολίτρα από κάθε PCR προϊόν χρησιμοποιήθηκε για ηλεκτροφόρηση επί πηκτώματος αγαρόζης 1,2% και φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας σύστημα ChemiImager.

ανάλυση ανοσοστυπώματος των PTMA σε στοματική ιστούς

λύματα ολόκληρων κυττάρων παρασκευάστηκαν από του στόματος κανονική