Αφηρημένο

Συσσωρευμένα στοιχεία αποδεικνύουν την απαίτηση για περαιτέρω διαστρωμάτωση των ασθενών στο ίδιο στάδιο του όγκου, σύμφωνα με το μοριακό παράγοντες. Αξιολογούμε τον συνδυασμό του σταδίου του καρκίνου και της κατάστασης μεθυλίωσης του DNA ως δείκτης του κινδύνου υποτροπής και θνησιμότητας μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του παχέως εντέρου (CRC). Μια μελέτη κοόρτης 215 ασθενών με CRC (μέση ηλικία 64,32 χρόνια? 50,5% των ανδρών) από την Tri-Service Γενικό Νοσοκομείο στην Ταϊβάν εξέτασαν τη σχέση μεταξύ του σταδίου του καρκίνου και του κινδύνου CRC υποτροπής και θνησιμότητας. Ένα μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox χρησιμοποιήθηκε για να αναλύσει την κατάσταση του ασθενούς μεθυλίωσης και κλινικές πληροφορίες κατά την έναρξη της μελέτης, καθώς και τις ενώσεις τους με CRC υποτροπή και τη θνησιμότητα κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης. Οι ασθενείς σε προχωρημένο στάδιο με

p16

,

hMLH1

, και

MGMT

μεθυλίωση συσχετίστηκαν με υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής CRC σε σύγκριση με τους ασθενείς τοπική σκηνή με το καθεστώς unmethylation σε ιστούς όγκων , με προσαρμοσμένη αναλογίες κινδύνου (HR) (95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI]) από 9,64 (2,92 – 31,81), 8,29 (3,40 – 20,22) και 11,83 (3,49 – 40,12), αντίστοιχα. Κατά την ανάλυση των φυσιολογικών ιστών, παρατηρήσαμε παρόμοιο κίνδυνο CRC επανάληψης με προσαρμοσμένο HRs (95% CI) των 10,85 (4,06 – 28,96), 9,04 (3,79 – 21,54) και 12,61 (4,90 – 32,44), αντίστοιχα. Για συνδυασμένες αναλύσεις, ο κίνδυνος υποτροπής στους ασθενείς σε προχωρημένο στάδιο με μεθυλίωσης του DNA τόσο φυσιολογικών και καρκινικών ιστών, σε σύγκριση με την τοπική σκηνή με unmethylation, αυξήθηκε με προσαρμοσμένο HR (95% CI) των 9,37 (3,36 – 26,09). Στους ασθενείς με προχωρημένο στάδιο, την κατάσταση μεθυλίωσης και υποτύπου ιστού που σχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο για 5-ετή αθροιστική υποτροπή CRC (

σ

Εικ. 1); ένα μοντέλο παλινδρόμησης Cox επιβεβαίωσε τη συνεπή κίνδυνο μετά προσαρμοστεί πιθανών συνεισφερόντων παραγόντων, όπως το φύλο, την ηλικία, τη θέση του όγκου, επικουρική χημειοθεραπεία, και κλινικό στάδιο (

σ

& lt? 0.001)

Η αθροιστική. τα ποσοστά υποτροπής ήταν σημαντικά διαφορετική στις 4 υποομάδες κατά τη διάρκεια των 5 ετών της παρακολούθησης μετά την προσαρμογή για το φύλο, την ηλικία κατά την επέμβαση, τη θέση του όγκου, επικουρική χημειοθεραπεία, και κλινικό στάδιο.

Η

Η

Όπως φαίνεται στον πίνακα 3, μπορούμε στη συνέχεια αναλύθηκαν κατάσταση μεθυλίωσης του DNA και CRC επανάληψης στους ασθενείς της μελέτης, στρωματοποιητικό σύμφωνα με το στάδιο του καρκίνου (τοπική και προχωρημένους) και υποτύπου ιστό (κανονικό και όγκου). Παρατηρήσαμε ότι ο κίνδυνος της CRC υποτροπής ήταν σημαντικά σχετίζεται με την κατάσταση μεθυλίωσης στους ασθενείς τα διάφορα στάδια του καρκίνου, και στις 2 υποτύπους των ιστών, μετά την προσαρμογή για το φύλο και την ηλικία κατά την εγχείρηση (

σ

& lt? 0.001) . Οι ασθενείς τοπικές στάδιο ήταν μη σημαντικά σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο υποτροπής CRC, ανεξάρτητα από την κατάσταση μεθυλίωσης και υποτύπου ιστού. Στους ασθενείς με προχωρημένο στάδιο, την κατάσταση μεθυλίωσης και υποτύπου ιστού που σχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο CRC υποτροπής.

Η

Συζήτηση

Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η μεθυλίωση του DNA ορισμένων γονιδίων και το κλινικό στάδιο ήταν που συνδέονται με τον κίνδυνο CRC υποτροπής σε ασθενείς μελέτη μας. Παρατηρήσαμε ότι κατάσταση μεθυλίωσης του DNA στις 3 γονίδια-στόχους και το στάδιο του καρκίνου συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με CRC υποτροπή στον όγκο και φυσιολογικούς ιστούς. Όταν είμαστε συγκεντρωμένοι οι καταστάσεις μεθυλίωσης του γονιδίου, σύμφωνα με το στάδιο του καρκίνου και υποτύπου ιστού, παρατηρήσαμε περαιτέρω αυξήσεις του κινδύνου CRC υποτροπής. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το κλινικό στάδιο του καρκίνου και την κατάσταση μεθυλίωσης του DNA θα μπορούσε ενδεχομένως να αξιολογηθεί ως προγνωστικοί παράγοντες του κινδύνου CRC υποτροπής.

Προηγούμενες μελέτες παρατηρήθηκε παρόμοια σύνδεσης μεταξύ σύντομη ελεύθερη υποτροπής επιβίωση και μεθυλίωσης του DNA σε ασθενείς με CRC [15 -17]. Zitt et al σύγκριση διάφορες δοκιμές διαλογής για CRC, και ανέφεραν ότι η μεθυλίωση του DNA παρέχει ένα κλινικά χρήσιμο δείκτη για την έγκαιρη ανίχνευση της εξέλιξης της νόσου σε ασθενείς με CRC, η οποία θα μπορούσε ενδεχομένως να βελτιώσει την επιβίωση και την ποιότητα ζωής [15] του ασθενούς. Kim et al ανέφεραν ότι η μεθυλίωση του DNA των πολλαπλών προαγωγών θα μπορούσε να παρέχει ένα βιοδείκτη για την έγκαιρη ανίχνευση της CRC, και ότι τα πρότυπα μεθυλίωσης DNA θα μπορούσε επίσης να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικοί παράγοντες της μεταστατικής ή επιθετικής CRC [16]. Τα δεδομένα από μια κλινική μελέτη παρακολούθησης έδειξε ότι η μεθυλίωση των συγκεκριμένων γονιδίων που σχετίζονται με κακή επιβίωση σε ασθενείς CRC προχωρημένο [17]. Μια μεγάλη μελέτη παρακολούθησης σε 61 494 ασθενείς της Ασίας και του Καυκάσου με CRC έδειξε ότι τα ποσοστά επιβίωσης ήταν σημαντικά υψηλότερα στους ασθενείς των Φιλιππίνων και της Κίνας εθνικότητας από ό, τι σε άλλους ασθενείς [18]. Παρ ‘όλα αυτά, τα αποτελέσματα μας από ένα κινεζικό πληθυσμό ήταν σύμφωνα με αυτά των περιγραφόμενων μελετών και η μελέτη είχε παρόμοια αποτελέσματα με τον καρκίνο Γονιδιώματος Atlas [19].

εκτροπές σε μεθυλίωση των μακρομορίων, ιδιαίτερα DNA, καθώς επίσης και αναστάτωση στη σύνθεση και επιδιόρθωση του DNA, θεωρείται ότι παίζουν κύριους ρόλους στην καρκινογένεση [20]. Μεθυλίωση του DNA είναι η πιο εκτεταμένα ερευνηθεί επιγενετικές αλλαγή [21], και μπορεί να παρέχει μια νέα γενιά των καρκίνων. Επιγενετικές τροποποιήσεις, ιδιαίτερα μεθυλίωση του DNA σε επιλεγμένες υποκινητές γονιδίων, είναι κοινές μεταβολές σε μοριακό επίπεδο σε ανθρώπινους όγκους [16]. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι η μεθυλίωση ορισμένων γονιδίων που συνδέονται με σημαντικά αυξημένο κίνδυνο CRC υποτροπής. Brock et al αναγνώρισε την μεθυλίωση του

p16

και

CDH13

στην οιδηματώδης και λεμφαδένων του μεσοθωρακίου, την εκτίμηση των λόγων πιθανοτήτων (OR) για CRC υποτροπής ως 8.00 (95% CI, 2,50 – 25,51) και 4,32 (95% CI, 1,61 έως 185,02), αντίστοιχα. Όταν αξιολογείται συνολικά μεθυλίωση στα οιδηματώδης και λεμφαδένων του μεσοθωρακίου, η OR για CRC υποτροπής ήταν 15,5 (1,61 έως 185,02) [22]. Τα αποτελέσματά μας παρομοίως απέδειξαν αυξημένο κίνδυνο υποτροπής CRC όταν διαστρωμάτωση κατάσταση μεθυλίωσης του DNA, σύμφωνα με το στάδιο των κλινικών του καρκίνου και υποτύπου ιστού.

Τα γονίδια που αξιολογούνται στην παρούσα μελέτη,

p16

,

hMLH1

και

MGMT

, εμπλέκονται στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και DNA MMR. Η ανώμαλη μεθυλίωση του υποκινητή των ογκοκατασταλτικών γονιδίων μπορεί να οδηγήσει σε μειωτικά μεταγραφική έκφραση και την έκφραση της πρωτεΐνης σε επιθηλιακά κύτταρα [23]. MMR και τον έλεγχο του κυτταρικού κύκλου και οι δύο παίζουν κρίσιμο ρόλο στη διαγραφή των επαναλήψεων μονονουκλεοτιδίου, και την απώλεια του συστήματος επιδιόρθωσης είναι ένας από τους κύριους μηχανισμούς που εμπλέκονται στη συσσώρευση των λειτουργικών αλλαγή ογκογόνο επιπτώσεις, συμπεριλαμβανομένης της ανάπτυξης CRC [24]. μεθυλίωσης DNA μεταβολές αντιπροσωπεύουν την ιστολογική ανομοιογένεια και κλινικοπαθολογικών ποικιλομορφία των ανθρώπινων καρκίνων. Η υπερέκφραση του DNA μεθυλοτρανσφεράση 1 δεν είναι ένα δευτερεύον αποτέλεσμα της αυξημένης πολλαπλασιαστική δραστηριότητα των κυττάρων, αλλά συσχετίστηκε σημαντικά με συσσωρευμένη υπερμεθυλίωση του DNA στα νησιά CpG των γονιδίων των όγκων που σχετίζονται με [25]. Η συσχέτιση μεταξύ μεθυλίωσης του DNA και το στάδιο του καρκίνου θα μπορούσε να εξαρτάται από την ιντερλευκίνη 6, μια χρόνια φλεγμονή δείκτη που ενισχύει την υπερμεθυλίωση του γονιδίου καταστολέα όγκου

p53

οικογένειες, αλλά μειώνει τη μεθυλίωση του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα [26]. Η χρόνια φλεγμονή θεωρείται ότι προκαλείται από φλεγμονή μεσολαβούμενη βλάβη κυτοσίνη, και τα προϊόντα τέτοιων ζημιών θα μπορούσε να παράσχει μια μηχανιστική σύνδεση μεταξύ της φλεγμονής και του καρκίνου [27], και την προώθηση της παρεκκλίνουσα μεθυλίωση σε ανθρώπινους καρκίνους. Φλεγμονώδεις μεσολαβητές απόκρισης, όπως κυτοκίνες, οι ελεύθερες ρίζες, και αυξητικούς παράγοντες, επάγουν επιγενετικές μεταβολές στην ογκοκατασταλτικά γονίδια. Οι παρατηρήσεις του αυτές οι αλλαγές έχουν ενισχύσει περαιτέρω τη σχέση μεταξύ της φλεγμονής και του καρκίνου [28].

Ως εκ τούτου, ο κίνδυνος της κακής αυξήσεις πρόγνωση στα προηγμένα κλινικά στάδια του καρκίνου όταν οι ασθενείς διαγνώσθηκε για πρώτη φορά, ακόμα και μετά τη χειρουργική εκτομή. Τα αποτελέσματά μας ήταν σύμφωνες με εκείνες των σχετικών μελετών, με συμμετοχή του λεμφικού και απομακρυσμένες μεταστάσεις με κακή πρόγνωση [29,30]. Τα προχωρημένα στάδια της CRC που σχετίζονται με υψηλότερο κίνδυνο κακή πρόγνωση σε σύγκριση με τις τοπικές CRC στάδιο. Επιπλέον, μια κλινική επανεξέταση του καρκίνου του πνεύμονα έδειξε ότι όταν οι στρατηγικές είναι σε θέση να επισπεύσει την εξέταση των ατόμων που είναι ύποπτα ότι έχουν καρκίνο, η νόσος μεταθέτει συνήθως προς μια πιο πρώιμο στάδιο και τα ποσοστά εκτομή αύξηση [31]. Προηγούμενες μελέτες έχουν προσδιορίσει ότι παρεκκλίνουσα υπερμεθυλίωση προαγωγού των γονιδίων σχετιζόμενων με τον καρκίνο μπορεί να είναι δυνητικά χρήσιμα ως επιγενετικών δεικτών για την πρόβλεψη έκβαση της θεραπείας του καρκίνου [32,33]. Στην άλλη μελέτη από 22 μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), οι ασθενείς με Esteller et al., 68% των ασθενών που δείχνουν υπερμεθυλίωση στο DNA των όγκων έδειξαν επίσης στο DNA ορού απέναντι στάδια, η οποία συνέβη με όλα τα στάδια από Ι έως ΙΙΙΑ [ ,,,0],33]. Δύο μελέτες έδειξαν ότι η παρεκκλίνουσα μεθυλίωση του DNA συνδέονται με την πρόγνωση του καρκίνου, ακόμη και σε διαφορετικά κλινικά στάδια. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι η μεθυλίωση του γονιδίου υποκινητή σχετίζεται με πρώιμη υποτροπή του σταδίου Ι NSCLC [22]. Επιπλέον, οι αναλογίες της μεθυλίωσης ήταν ως επί το πλείστον χαμηλότερα σε φυσιολογικούς ιστούς σε σχέση με ιστούς όγκου στον Πίνακα 1, αλλά οι κίνδυνοι επανάληψης ήταν παρόμοια σε αυτούς τους δύο τύπους ιστών. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι όταν η μεθυλίωση του DNA ανιχνεύθηκε σε ασθενείς με προχωρημένο, ο κίνδυνος υποτροπής θα αυξηθεί απότομα. Προηγούμενη μελέτη έδειξε Ο μηχανισμός αυτού του αυξημένου κινδύνου από τις μεταβολές του μοριακού επιπέδου. Sato et al. έχουν αναφέρει μεθυλίωσης του DNA των μη καρκινικών ιστών που ελήφθησαν από ασθενείς με αδενοκαρκινώματα του πνεύμονα ήταν σε προκαρκινικά στάδια με παρεκκλίνουσα μεθυλίωση του DNA κατά τη διάρκεια αρκετών γονιδίων [34]. Οι αλλαγές μεθυλίωσης του DNA σε προκαρκινικά στάδια ενισχυθεί σε φυσιολογικούς ιστούς κατά τη διάρκεια της εξέλιξης σε αναπτυχθεί αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Η οποία αποτελείται με τα ευρήματά μας ότι οι μοριακές αλλαγές δεν θα μπορούσε να βρεθεί από παθολογική εξέταση, αλλά η μεθυλίωση του DNA αλλαγές έχουν συμβεί σε παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς από τις βλάβες. Ως εκ τούτου, οι μεταβολές της μεθυλίωσης DNA σε φυσιολογικούς ιστούς οδηγήσει σε κακή πρόγνωση σε σχέση με τους ιστούς του καρκίνου. Gene κατάσταση μεθυλίωσης σε μια ανεξάρτητη ομάδα επικύρωσης διεξήχθη με σημαντικά υψηλότερη αναλογία πιθανοτήτων υποτροπής μεταξύ των ασθενών περίπτωση, συνήθως αυξάνεται με διαφορετικές περιοχές της μετουσιωμένο ανίχνευσης, όπως όγκων, των περιφερειακών κόμβων, μεσοθωρακίου κόμβοι, καθώς και του όγκου και του μεσοθωρακίου κόμβοι. Περαιτέρω έρευνες των ασθενών κλινικών πληροφοριών, όπως βιοχημικά στοιχεία αίματος ή ιστορικό φαρμακευτικής αγωγής, με στρωματοποίηση για τον εντοπισμό ομάδων υψηλού κινδύνου του CRC υποτροπής, είναι υποχρεωτικά.

Τα πλεονεκτήματα και οι περιορισμοί του εντάλματος μελέτης μας συζήτηση. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε δεδομένα παρακολούθησης για μεθυλίωση του DNA και το στάδιο του καρκίνου ως δείκτες κινδύνου υποτροπής CRC σύμφωνα με υπότυπο ιστό. Έχουμε διενεργήσει αξιολογήσεις μας με τη χρήση μοριακών βιοδεικτών και κλινικές πληροφορίες. Τα αποτελέσματά μας θα μπορούσε να παράσχει ιατρούς με μία κλινική αναφοράς για την πρόγνωση των ασθενών CRC postsurgery. Ωστόσο, είναι κατανοητό ότι μεγαλύτερο χρόνο της παρακολούθησης μπορεί να έχουν μεγαλύτερες διαφορές σε αυτή τη μελέτη. Παρ ‘όλα αυτά, προηγούμενες μελέτες έδειξαν τη σύντομη μέση της παρακολούθησης μετά τη χειρουργική θεραπεία μεταξύ των ασθενών CRC, κάτω των 2 ετών της παρακολούθησης περιόδους, οι οποίες ανέφεραν σημαντικές διαφορές στη συχνότητα της υποτροπής [35,36]. Δεύτερον, δεν είχαμε αξιολογήσει φλεγμονώδεις αντιδράσεις ή βιοδείκτες φλεγμονής που σχετίζονται με τους ασθενείς CRC. Kanai et al. διαπίστωσε ότι η χρόνια φλεγμονή μπορεί να επηρεάσει την πρόγνωση του CRC ασθενών [25]. Ήμασταν σε θέση να αξιολογήσει αυτή τη συσχέτιση. Παρά το γεγονός ότι, ημι-ποσοτική MSP χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη, ποσοτική MPS όπως, πυρο-αλληλούχιση θα πρέπει να εκτελείται για περαιτέρω μελέτη. Επιπλέον, η έκφραση των γονιδίων δεν αξιολογεί σε αυτή τη μελέτη λόγω των κατεψυγμένων ιστών αποθηκεύονται στην τράπεζα του όγκου, το συνολικό επίπεδο του RNA στο δείγμα ήταν ανεπαρκείς για πείραμα της γονιδιακής έκφρασης. Η αναπαραγωγή δεν πραγματοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη.

Εν κατακλείδι, η μελέτη αυτή αποδεικνύει ότι ομαδοποίηση κατάσταση μεθυλίωσης του DNA, σύμφωνα με το στάδιο του καρκίνου και υποτύπου ιστού είναι ζωτικής σημασίας για την εκτίμηση του κινδύνου υποτροπής σε ασθενείς με CRC. Τα αποτελέσματα της μελέτης έδειξαν επίσης μια υποκείμενη μηχανισμός για τον αυξημένο κίνδυνο υποτροπής σε ασθενείς με CRC, ιδιαίτερα σε nontumorous ιστούς.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Μέθοδοι. Η μεθυλίωση-ειδική προϋπόθεση PCR.

Κατεργασμένου με όξινο θειώδες DNA υποβλήθηκε σε MS-PCR χρησιμοποιώντας ζεύγη εκκινητών σχεδιάστηκαν για να ενισχύσουν ειδικά τα γονίδια-στόχους. Το διάλυμα αντίδρασης (15 μλ) περιείχαν HotStart Taq Πρόμιγμα (7.5 μL) (RBC Bioscience, Taipei, Ταϊβάν), κατεργασμένου με όξινο θειώδες DNA (0.6 μL), και 0,6-μι δείγματα του προς τα εμπρός και αντίστροφους εκκινητές. Οι αλληλουχίες εκκινητή για

ρ16

,

hMLH1

, και

MGMT

έχουν περιγραφεί προηγουμένως [14]. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης συνθήκες ποδηλασίας (PCR) για την μεθυλιωμένων και μη-μεθυλιωμένων εκκινητές που εμπλέκονται μετουσίωση στους 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 35 κύκλους στους 95 ° C για 30 δευτερόλεπτα, ανόπτηση στους 62 ° C, 60 ° C, και 53 ° C για 35 δευτερόλεπτα και 72 ° C για 30 δευτερόλεπτα, και μια τελική επέκταση στους 72 ° C για 4 λεπτά. Τα προϊόντα PCR αναμείχθηκαν με χρωστική DNA (Bioman, Taipei, Ταϊβάν), υποβλήθηκε σε ηλεκτροφόρηση πηκτής οριζόντια σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 2% για 25 λεπτά, και χρωματίστηκαν με βρωμιούχο αιθίδιο για 10 λεπτά. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με υπεριώδες (UV) διαφανοσκόπισης που φαίνεται στο S1 Σχ. Στατιστικών μεθόδων. Σε αυτή τη μελέτη, οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ανάλογα με τη μεθυλίωση του 3 γονιδίων στόχων. Τα βασικά μέτρα έκβασης ήταν CRC υποτροπή και τη θνησιμότητα. Τα άτομα-έτη παρακολούθησης χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό των υποτροπής και θνησιμότητας CRC, αρχής γενομένης από την ημερομηνία της χειρουργικής εκτομής και συνεχίζοντας μέχρι την ημερομηνία της διάγνωσης της CRC υποτροπής, ημερομηνία του θανάτου, ή στις 31 Δεκεμβρίου, 2012. Μια Kaplan- ανάλυση Meier και ένα μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox χρησιμοποιήθηκαν για να αναλύσουν την κατάσταση του ασθενούς μεθυλίωσης και κλινικές πληροφορίες κατά την έναρξη της μελέτης, καθώς και τις ενώσεις τους με CRC υποτροπή ή θνησιμότητα κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης, μετά από προσαρμογή για πιθανούς συγχυτικούς συμπαράγοντες. Οι προσαρμοσμένες αναλογίες κινδύνου (HR) και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ) υπολογίστηκαν για να αξιολογήσει την κατάσταση μεθυλίωσης ως προγνωστικός δείκτης του κινδύνου της CRC υποτροπής. Οι πιθανές συγχυτικές μεταβλητές στο μοντέλο ήταν το φύλο, την ηλικία κατά την επέμβαση (που αντιμετωπίζεται ως συνεχής μεταβλητή), τη θέση του όγκου, και επικουρική χημειοθεραπεία. Οι ρυθμίζεται HRs Στη συνέχεια υπολογίστηκαν για κάθε κατηγορία. Οι ενώσεις μεταξύ της κατάστασης μεθυλίωσης του DNA και του κινδύνου CRC υποτροπής και θνησιμότητας αξιολογήθηκαν περαιτέρω χρησιμοποιώντας αναλύσεις κατανεμημένες ανάλογα με το στάδιο της βασικής γραμμής κλινική του καρκίνου (Ι-IV). Να δοκιμάσει μια γραμμική τάση σε όλη την κλινικά στάδια του καρκίνου και καταστάσεις μεθυλίωση σε υποτύπους των ιστών, η συχνότητα εμφάνισης της CRC υποτροπής σε κάθε κατηγορία χρησιμοποιήθηκε ως συνεχής μεταβλητή σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123396 .s001

(DOCX)

S1 Εικ. Γέλης αγαρόζης εκπροσώπησε το

p16 υποκινητή

γονίδιο μεθυλιωμένο ή μη μεθυλιωμένο κατάσταση των ασθενών CRC

T:. Ιστό του όγκου? Ν: κανονικό ιστό? MR: δείκτης αναφοράς του μεγέθους του προϊόντος PCR? U: unmethylation? M: μεθυλίωση. Για την ποιότητα του μεθυλίωσης-ειδική PCR, πειραματικές έλεγχοι παρουσιάστηκαν από WBC από υγιείς ανθρώπους, και δύο ανθρώπινες ορθοκολικό αδενοκαρκίνωμα κυτταρικές γραμμές (ΗΤ29 και DLD1). Το νερό ήταν αρνητικός μάρτυρας για αυτό το πείραμα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123396.s002

(ΔΕΘ)

S1 αποτελέσματα. Τα αποτελέσματά μας από τις ενώσεις μεταξύ των διαφόρων σταδίων του καρκίνου και CRC υποτροπή και θνησιμότητα παρατηρήθηκε μια σημαντική αύξηση κατά στάδια στην CRC υποτροπής και θνησιμότητας μεταξύ του σταδίου I-IV ασθενείς (

σ

& lt? 0.001).

Η σταδίου III και IV ασθενείς συσχετίστηκαν με σημαντικά υψηλότερο κίνδυνο CRC υποτροπής σε σύγκριση με τους ασθενείς μου σκηνή, με προσαρμοσμένη HRs (95% CI) των 19,37 (2,59 έως 145,05) και 56,36 (7,42 έως 428,09), αντίστοιχα. Οι ασθενείς σταδίου IV συσχετίστηκαν με σημαντικά υψηλότερο κίνδυνο θνησιμότητας σε σύγκριση με τους ασθενείς μου σκηνή, με προσαρμοσμένη HR (95% CI) 5,76 (1,99 – 16,61). Συμπεριλάβαμε το στάδιο Ι και ΙΙ οι ασθενείς στην τοπική υποομάδα στάδιο και το στάδιο ΙΙΙ και IV ασθενείς σε προχωρημένο στάδιο της υποομάδας. Οι ασθενείς σε προχωρημένο στάδιο υποομάδα συσχετίστηκαν με υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής CRC και θνησιμότητας σε σύγκριση με τους ασθενείς στην τοπική υποομάδα στάδιο, με προσαρμοσμένο HRs (95% CI) των 6,73 (3,56 – 12,71) και 1,75 (0,94 – 3,28), αντίστοιχα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123396.s003

(DOCX)