Αφηρημένο

Οι άνδρες που ζουν στα νησιά Φίτζι και το πόσιμο κάβα έχουν χαμηλή συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του προστάτη (PCA). Ωστόσο, η επίπτωση του προστάτη μεταξύ των Φίτζι ανδρών που είχαν μεταναστεύσει στην Αυστραλία, αυξήθηκε κατά 5,1 φορές. Ως εκ τούτου, εξέτασε τις πιθανές επιπτώσεις των εκχυλισμάτων ρίζας κάβα και ενεργά συστατικά της (kavalactones και flavokawains) για την ανάπτυξη του προστάτη και του υποδοχέα των ανδρογόνων (AR) έκφρασης. κυτταρικές γραμμές PCa (LNCaP, LAPC-4, 22Rv1, C4-2B, DU145 και PC-3) με διαφορετική έκφραση AR, και ένα μετασχηματισμένο προστάτη μυοϊνοβλάστη κυτταρική γραμμή (WPMY-1), υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ένα εμπορικό εκχύλισμα κάβα, kavalactones ( kawain, 5’6′-dehydrokawain, yangonin, methysticin) και flavokawain Β Έκφραση των AR και γονιδίων στόχων του (

PSA

και

TMPRSS2

) εξετάστηκε. Δύο νέα ασθενή που προέρχεται προστάτη μοντέλα ξενομοσχεύματος από υψηλής ποιότητας δείγματα προστάτη καθορίστηκαν με εμφύτευση των δειγμάτων σε γυμνά ποντίκια και περνώντας τεμάχια όγκου μέσω υποδόριας ένεσης σε γυμνούς ποντικούς, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με εκχύλισμα κάβα και flavokawain Β να εξετάσουν τις επιπτώσεις τους στην ανάπτυξη του όγκου, έκφραση AR και τα επίπεδα του PSA στον ορό. Το εκχύλισμα κάβα και flavokawain Β αποτελεσματικά κάτω-ρυθμίζεται η έκφραση τόσο του AR πλήρους μήκους και παραλλαγές AR ματίσματος. Το εκχύλισμα κάβα και kavalactones επιταχυνόμενη υποβάθμιση της πρωτεΐνης AR, ενώ flavokawain Β ανέστειλε

AR μεταγραφή

mRNA μέσω μείωσης Sp1 έκφρασης και η δέσμευση του Sp1 στον υποκινητή AR. Το εκχύλισμα της ρίζας κάβα και flavokawain Β μειώνουν την ανάπτυξη του όγκου, η έκφραση AR στους ιστούς και τα επίπεδα του PSA στον ορό του όγκου σε μοντέλα ξενομοσχεύματος προστάτη που λαμβάνονται από ασθενή. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν μια πιθανή χρησιμότητα ενός ασφαλούς προϊόντος κάβα ή δραστικά συστατικά για την πρόληψη και τη θεραπεία του προχωρημένου προστάτη με τη στόχευση AR

Παράθεση:. Λι Χ, Liu Ζ, Xu Χ, Μπλερ CA, η Sun Ζ, Xie J, et al. (2012) Κάβα Εξαρτήματα Down-ρυθμίζουν την έκφραση των Ar και Ar Splice Παραλλαγές και περιορισμό της αύξησης της προερχόμενων από ασθενή του καρκίνου του προστάτη ξενομοσχεύματα σε ποντίκια. PLoS ONE 7 (2): e31213. doi: 10.1371 /journal.pone.0031213

Συντάκτης: Τσαντ Creighton, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 22 Νοεμβρίου 2011? Αποδεκτές: 4 Ιαν 2012? Δημοσιεύθηκε: 9 Φεβρουαρίου 2012 |

Copyright: © 2012 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας χορηγεί CA129793 και CA122558 (https://www.cancer.gov/)and αμερικανικό Ινστιτούτο Έρευνας για τον Καρκίνο χορηγήσει 41.493 (https://www.aicr.org). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ασίας /Ειρηνικού άνδρες που καταναλώνουν χαμηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά και φυτικά βασισμένη διατροφή έχουν τα χαμηλότερα ποσοστά της κλινικής προστάτη στον κόσμο [1], [2]. Ωστόσο, όταν Ασίας οι άνδρες μεταναστεύουν στις ΗΠΑ, τα ποσοστά της κλινικής προστάτη αυξάνουν [3]. Αυτές οι παρατηρήσεις εμπλέκουν και τις δύο περιβαλλοντικών παραγόντων και των διατροφικών συνηθειών (όπως η κατανάλωση των χαμηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά και διατροφή φυτικής προέλευσης) σε ανάπτυξη PCa. Ως εκ τούτου, μία από τις στρατηγικές για την πρόληψη και τη θεραπεία του προστάτη έχει επικεντρωθεί στη χρήση των φυσικών και συνθετικών βιοενεργά συστατικά των τροφίμων.

Κάβα (

Piper methysticum Forst

) είναι ένα πολυετές φυτό ιθαγενών στην περιοχή του Ειρηνικού νησιά. Κάβα ρίζα και το ρίζωμα χρησιμοποιούνται για την παρασκευή ενός μη-ζύμωση και τελετουργικό ποτό με χαλαρωτικές επιδράσεις στα νησιά του Ειρηνικού για χιλιάδες χρόνια [4]. Οι ασυνήθιστα χαμηλές συχνότητες αρκετών μορφών καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του πνεύμονα και του καρκίνου του προστάτη, αναφέρθηκε στα έθνη νησί του Ειρηνικού παρά το υψηλό μέρος των καπνιστών σε αυτούς τους πληθυσμούς [2], [5]. Επιπλέον, ο Στάινερ [6] ανέφεραν ότι η ηλικία-τυποποιημένη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου για τις τρεις υψηλότερες χώρες κάβα-πόσιμο (Βανουάτου, Φίτζι, και Δυτική Σαμόα) ήταν το ένα τέταρτο ή το ένα τρίτο εκείνης των μη-κάβα πόσιμο χώρες, όπως η Νέα Ζηλανδία και Ηνωμένες Πολιτείες (Χαβάη και το Λος Άντζελες), και Πολυνήσιοι μη-κάβα-πόσιμο (Μαορί). Μοναδικά, σε αυτές τις τρεις χώρες κάβα-πίνουν περισσότερο οι άνδρες πίνουν κάβα και του καπνού από ό, τι οι γυναίκες, αλλά υπάρχει μια χαμηλότερη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου για τους άνδρες παρά για τις γυναίκες [6]. Επιπλέον, Καρκίνος του Συμβουλίου Καρκίνου στην Ουαλία έκθεση Νέα Νότια (NSW) Μετανάστες 1991-2001 βρέθηκε [7] ότι η συχνότητα εμφάνισης PCA σε Φίτζι άνδρες που μετανάστευσαν προς και διέμεναν στη Νέα Νότια Ουαλία, Αυστραλία, αυξήθηκε κατά 5,1 φορές σε σύγκριση με εκείνους που ζουν στα νησιά Φίτζι . Η έκθεση αυτή μας ώθησε να διερευνήσει τα πιθανά οφέλη των εκχυλισμάτων κάβα και ενεργά συστατικά για την πρόληψη του προστάτη.

Εμείς αναφέρει για πρώτη φορά ότι μια εμπορική εκχύλισμα κάβα και ενεργά συστατικά της (kavalactones και flavokawain Β) κατάντη ρυθμίζουν την έκφραση AR. Εξάντληση των AR πρωτεΐνης προκύψει με δύο διαφορετικούς μηχανισμούς: 1) αποδόμηση πρωτεΐνης ενισχυμένη AR, και 2) μειώνεται Εξειδίκευση πρωτεΐνη 1 (SP1) μεσολάβηση μεταγραφή AR. Κάβα εκχύλισμα και θεραπεία flavokawain Β ποντικών με ξενομοσχεύματα ασθενή που προέρχεται από μειωμένη ανάπτυξη των όγκων και την έκφραση του AR και γονιδίων στόχων του σε καρκινικούς ιστούς, και μείωσε τα επίπεδα του PSA στον ορό.

Μέθοδοι

δήλωση Δεοντολογίας

η χρήση των ποντικών και τη φροντίδα τους για την παρούσα μελέτη έχει εγκριθεί ρητώς από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια, Irvine Θεσμικών φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήση (IACUC? αριθμό πρωτοκόλλου 2007 – 2741).

Οι κυτταρικές σειρές, οι ενώσεις και αντιδραστήρια

Ο LNCaP, LAPC4, 22Rv1, PC3, DU145, κυτταρικές σειρές και WPMY-1 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA), και C4-2B κυτταρική γραμμή ήταν από Urocor Inc. (Oklahoma City, OK). Αυτά τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS). Όλες οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη ήταν εντός 20 περάσματα από την παραλαβή. Οι κυτταρικές γραμμές δοκιμάστηκαν και επικυρώνονται από ATCC ή Urocor Inc. Όλα τα κύτταρα γραμμές δοκιμάστηκαν επίσης για γνωστά είδη μόλυνσης από μυκόπλασμα χρησιμοποιώντας ένα κιτ από την Lonza Inc. (Walkersville, MD). Καθαρό kawain, 5 ‘, 6’-dehydrokawain, yangonin, methysticin και flavokawain Β (99%) απομονώθηκαν από εκχυλίσματα κάβα από LKT Laboratories, Inc. (St. Paul, MN). Κάβα εκχύλισμα ρίζας σε μία συγκέντρωση 150 mg /ml kavalactones σε 50% αιθανόλη ελήφθη από Γαία Βότανα (Brevard, NC). Αντισώματα έναντι AR και τουμπουλίνης ήταν από την Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA). αντισώματα PSA και Sp1 αγοράστηκαν από την Thermo Scientific (Fremont, CA). 3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2, βρωμιούχο 5-διφαινυλτετραζόλιο (ΜΤΤ) ήταν από τη Sigma. ΚΝΑζοΙ Β αγοράστηκε από την Tel-Test (Friendswood, TX.). Το κιτ Αντίστροφη σύστημα μεταγραφής και ήταν από την Promega (Mandison, WI). Μια ποσοτική κιτ RT-PCR ήταν από την Bio-Rad (Hercules, CA).

Μέτρηση kavalactones και flavokawains στη ρίζα κάβα εκχύλισμα

Το εκχύλισμα κάβα αραιώνεται 400 φορές από ακετονιτρίλιο, και στη συνέχεια διηθείται με 0,45 μm ανθεκτικά διαλύτη φίλτρα και αποθηκεύεται στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω ανάλυση. Η χρωματογραφία πραγματοποιήθηκε σε ένα Acquity Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) σύστημα (Waters Corp., Milford, ΜΑ, USA) με ένα αυτόματο δειγματολήπτη στους 8 ° C. Ο διαχωρισμός των ενώσεων διεξήχθη στους 50 ° C χρησιμοποιώντας ένα Waters Acquity UPLC ®BEH C18 στήλη 1,7 μm (2,1 χ 50 mm) με μια βαθμίδα έκλουσης: (Α) νερό: ακετονιτρίλιο: οξικό οξύ (97.8:2:0.2 ν /ν /ν), και (Β) ακετονιτρίλιο:. οξικό οξύ 99.8:0.2 (ν /ν) ως κινητή φάση

το πρόγραμμα έκλουσης ήταν ως ακολούθως: 10% Β (αρχική), 90% Β (1.0 min), 90% Β (2.0 λεπτά), 10% Β (2.05 λεπτά) και 10% (3 λεπτά). Ο ρυθμός ροής ήταν 0.3 mL /min και ο όγκος έγχυσης ήταν 10 μλ. Η UPLC συζεύχθηκε με Micromass Quattro Micro Υγρή χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας (LC /MS /MS) τριπλό τετράπολο φασματόμετρο μάζας (εύρος μάζας: 2~2000 m /z) με ιονισμό ηλεκτροψεκασμού (ESI) διασύνδεση σε θετικό τρόπο. Το όργανο λειτούργησε σε θετικό τρόπο λειτουργίας ιόντος με τάση ESI 3,8 kV, και μία ροή αερίου αποδιαλύτωση 700 L /h. Αργό χρησιμοποιήθηκε ως επαγόμενη σύγκρουση αέριο διαστάσεως σε πίεση 7,1

e-3 mbar με μία επιλεγμένη μετάβαση παρακολούθησης αντίδραση για flavokawain Α του m /z 315 & gt? M /z 181, flavokawain Β 284 & gt? 181, kawain του 231 & gt? 115, 5 ‘, 6’-dehydrokawain των 229 & gt? 131, mythysticin 275 & gt? 159, Yangonin 259 & gt?. 161

ΜΤΤ δοκιμασία

τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πυκνότητα 2 × 10

4 ανά φρεάτιο σε πλάκες καλλιέργειας 24 φρεατίων για 24 ώρες, και στη συνέχεια κατεργάζεται όπως υποδεικνύεται στα σχήματα. Μετά την κατεργασία για 72 ώρες, 1 mg /mL ΜΤΤ προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο για 2 ώρες, και η απορρόφηση προσδιορίστηκε στα 570 nm. Οι καμπύλες δόσης-απόκρισης για αναστολή της ανάπτυξης παράχθηκαν ως ποσοστό των ελέγχων υποστεί αγωγή με έκδοχο.

Western ανάλυση κηλίδος

Διαυγασμένα προϊόντα λύσης πρωτεΐνης (20-100 μg) μετουσιώθηκαν και επιλυθεί από 8-16 % SDS-PAGE. Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης, και ανιχνεύθηκαν με αντισώματα υποδεικνύονται και οπτικοποιούνται με ένα ενισχυμένο σύστημα ανίχνευσης χημειοφωταύγειας.

Ποσοτική RT-PCR

σε πραγματικό χρόνο ποσοτικές αντιδράσεις ενίσχυσης PCR για το

AR

, ειδικό αντιγόνο προστάτη (

PSA

) και πρωτεάση διαμεμβράνης, σερίνης 2 (

TMPRSS2

) επίπεδα mRNA διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας σύστημα MyiQ (Bio-Rad) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [8], [9]. Οι αλληλουχίες των εκκινητών για

AR

,

PSA

και

TMPRSS2

είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση της συγκριτική μέθοδο Ct, όπου Ct είναι ο αριθμός του κύκλου στον οποίο ο φθορισμός πρώτα υπερβαίνει το όριο. Οι τιμές Ct από κάθε δείγμα ελήφθησαν αφαιρώντας τις τιμές για βήτα-ακτίνης Ct από την τιμή γονιδίου στόχου Ct. Η διακύμανση του

βήτα ακτίνης

τιμές Ct είναι & lt? 0.5 μεταξύ των διαφορετικών δειγμάτων. Μια διαφορά έναν κύκλο Ct τιμή αντιπροσωπεύει μια διαφορά 2-φορές του επιπέδου του mRNA. Ιδιαιτερότητα της προκύπτοντα προϊόντα PCR επιβεβαιώθηκε με καμπύλες τήξης και πηκτή αγαρόζης.

Η επιμόλυνση, δράση προαγωγού και λουσιφεράσης Δοκιμασία

Τα πλασμίδια PSA-Luc και plARS-Luc είναι μια ευγενική δωρεά του Δρ Γουάνγκ (Πανεπιστήμιο της Νέας Υόρκης Cancer Institute) Longgui. Ανθρώπινα Sp1-ΗΑ ετικέτα πλασμίδιο παρασχέθηκε ευγενώς από τον Macus Tien Kuo (Πανεπιστήμιο του Τέξας Μ D. Anderson Κέντρο Καρκίνου). C4-2B και LNCaP κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με PSA-Luc ή plARS-Luc και πλασμίδιο λουσιφεράσης Renilla pGL 4.71 (Promega) ή με SP1-ΗΑ πλασμίδιο με Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Μετά από 48 ώρες, flavokawain Β προστέθηκε όπως υποδεικνύεται με τριπλή επαναλήψεις. Στη συνέχεια, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και η δραστικότητα της λουσιφεράσης μετρήθηκε με το Dual-Glo σύστημα δοκιμασίας Luiferase (Promega). Renilla φωταύγεια χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για τους αριθμούς των κυττάρων και την αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης. Η σχετική αναλογία του φωταύγειας από τα ενδιαφερόμενα γονίδιο υποκινητή να Renilla φωταύγεια φαίνονται στα σχήματα ως δραστικότητα προαγωγέα. Για Sp1 επιμόλυνση, τα κύτταρα συγκομιδή για μια δοκιμασία ανοσοαποτύπωση.

χρωματίνης Ανοσοκαθίζηση (μάρκας) [10] κύτταρα

LNCaP και C4-2B ήταν διασταυρωμένα με φορμαλδεΰδη. Το σύμπλεγμα πρωτεΐνης /DNA διασπάσθηκε σε θραύσματα 500-1500 bp με επεξεργασία με υπερήχους. Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης (4 mg) επωάστηκαν με SP1 αντίσωμα, ή με ένα αντίσωμα ποντικού αντι-GFP. σφαιρίδια πρωτεΐνης G σεφαρόζης (Sigma) χρησιμοποιήθηκε για να τραβήξει προς τα κάτω το σύμπλοκο, που ακολουθείται από έκπλυση με ρυθμιστικό υψηλού άλατος Wash, LiCl, και ΤΕ ρυθμιστικά διαλύματα). Τα ανοσοϊζήματα DNA-πρωτεΐνης εκλούστηκαν από τα σφαιρίδια και το DNA εκχυλίστηκε και καθαρίστηκε. Expand High Fidelity-PCR System (Roche) χρησιμοποιήθηκε για να ενισχύσει την αλληλουχία από +248 έως +487 νουκλεοτίδια της περιοχής AR 5′-UTR, που περιέχει δύο θέσεις σύνδεσης Sp1. Primer ακολουθίες είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος.

Θεραπεία του προστάτη μοντέλα ξενομοσχεύματος όγκου των ασθενών που προέρχονται από

προστατεκτομή ιστών ελήφθησαν μέσω μιας IRB-εγκεκριμένο πρωτόκολλο στο UCI Ιατρικό Κέντρο. Μικρά θραύσματα ιστολογικά αποδεδειγμένο όγκου εμφυτεύθηκαν σε 8-εβδομάδων αρσενικών σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια (SCID) χρησιμοποιώντας μια τεχνική υπονεφρικής xeongraft [11]. Οι όγκοι που χαρακτηρίζονται ως GM0308 και RC0309 στους 3 και 13 ποντικού περάσματα αντίστοιχα, επανα-εμφυτεύτηκαν στον υποδόριο τσέπες των ποντικών SCID. Μία εβδομάδα αργότερα, όταν οι όγκοι αυξήθηκαν σε περίπου 100 mm

3, οι ποντικοί τυχαιοποιήθηκαν σε ομάδες αγωγής. Για τη θεραπεία εκχύλισμα κάβα, ποντικοί τρέφονται με πρότυπη δίαιτα συμπληρωμένη με είτε τον έλεγχο του οχήματος ή kg κάβα εκχύλισμα /6 g στη διατροφή. Για τη θεραπεία flavokawain Β, τα ποντίκια ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά κάθε μέρα με τον έλεγχο του οχήματος (10% DMSO, 20% αιθανόλη και 70% Cremophor) ή 200 mg flavokawain Β /κιλό σωματικού βάρους του ποντικού. Η θεραπεία συνεχίστηκε από την ημέρα 0 έως την ημέρα 17 για το εκχύλισμα kava και να ημέρα 27 για την ανάπτυξη flavokawain Β όγκου παρακολουθήθηκε τόσο PSA ορού και μέτρηση διαμέτρημα του μεγέθους του όγκου εβδομαδιαία. πρόσληψη σωματικού βάρους και τα τρόφιμα καταγράφηκαν κατά τη διάρκεια των πειραμάτων. Στο τέλος των πειραμάτων, οι ιστοί όγκων ζυγίστηκαν και κόβονται στο μισό για την απομόνωση mRNA και χρώση ανοσοϊστοχημείας, αντίστοιχα. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε από τον τύπο: 0,5236 × L

1 × (L

2)

2, όπου το L

1 είναι ο μεγάλος άξονας και L

2 είναι το μικρό άξονα του ο όγκος. Ορός συγκέντρωση PSA προσδιορίστηκε με PSA ενζυματικής ανοσοαπορρόφησης κιτ προσδιορισμού (Bio-Quant, San Diego, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κιτ.

Ανοσοϊστοχημεία

Το αντιγόνο ανακτήθηκε χρησιμοποιώντας 0.05 Μ γλυκίνης-ΗΟΙ ρυθμιστικό διάλυμα, ρΗ 3,5, που περιέχει 0,01% (β /ο) ΕϋΤΑ, στους 95 ° C για 20 λεπτά και χρωματίστηκαν με αντι-ανθρώπινο AR (1:100). Η χρώση έγινε ορατή με διαμινοβενζαδίνης χρησιμοποιώντας το κιτ Cell and Tissue Χρώση (R &? D Systems).

Στατιστική ανάλυση

Συγκρίσεις των ποσοτικών δοκιμασιών RT-PCR και υποκινητή μεταξύ πειραμάτων θεραπείας και ελέγχου διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας

t

test του Student. Για τα πειράματα ανάπτυξης όγκου, επαναλαμβανόμενες μετρήσεις ΑΝΟνΑ χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει τις διαφορές στα μεγέθη των όγκων μεταξύ των θεραπειών, χρονικά σημεία, και οι αλληλεπιδράσεις θεραπείας-χρόνου. Πρόσθετες μετα-τεστ έγιναν για να εξεταστούν οι διαφορές στα μεγέθη των όγκων μεταξύ του ελέγχου, το εκχύλισμα κάβα, και τη θεραπεία flavokawain Β σε κάθε χρονικό σημείο χρησιμοποιώντας την συντηρητική μέθοδο Bonferroni. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων.

Αποτελέσματα

Το εκχύλισμα κάβα και ενεργά συστατικά της (kavalactones και flavokawain Β) διαφορικά αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων που εκφράζουν AR

kavalactones και χαλκόνες (δηλαδή flavokawains) είναι δύο σημαντικές κατηγορίες των βιοδραστικών ενώσεων που προσδιορίζονται από τα εκχυλίσματα κάβα. Χρησιμοποιώντας UPLC, μετρήσαμε τα περιεχόμενα του kavalactones και flavokawains. Το εμπορικό εκχύλισμα κάβα διαλύεται σε αιθανόλη και χρησιμοποιήθηκε εδώ περιείχε 2,7% kawain, 1.75% 5, 6-dehydrokawain, 3,08% Yangonin, 1,4% methysticin, 0,33% flavokawain Β, και 0,21% flavokawain Α (Σχήμα 1). Για να εξεταστεί το δυναμικό των συστατικών του εκχυλίσματος kava να αναστείλει την ανάπτυξη PCa, κυτταρικές σειρές προστάτη και ένα μετασχηματισμένο γραμμή μυοϊνοβλάστη προστάτη υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το εκχύλισμα κάβα, kavalactones και flavokawain B. Οι κυτταρικές σειρές ποικίλουν στην έκφραση τους AR πρωτεϊνών, καθώς επίσης και τους ανδρογόνων εξάρτηση. Σχήμα 2 και τον Πίνακα 1 δείχνουν ότι το εκχύλισμα της ρίζας kava αναστέλλεται ομοίως ανδρογόνων ευαίσθητες και μη ευαίσθητες κυτταρικές σειρές του προστάτη. Το εκχύλισμα ρίζας kava ήταν πιο ισχυρό από kavalactones αλλά λιγότερο ισχυρή από ό, τι flavokawain Β στην αναστολή της ανάπτυξης. Μεταξύ των kavalactones, 5, 6-dehydrokawain είναι ο πλέον ισχυρός παράγοντας στην αναστολή της ανάπτυξης των κυτταρικών σειρών προστάτη (Σχήμα 2 και Πίνακας 1). Τόσο το εκχύλισμα ρίζας kava και 5, 6-dehydrokawain εξίσου στην αναστολή της ανάπτυξης των LNCaP και παραγώγων C4-2B του, ενώ flavokawain Β ήταν περίπου 4,5-φορές πιο αποτελεσματική στη μείωση της ανάπτυξης των κυττάρων C4-2B από την ανάπτυξη των κυττάρων LNCaP . Δεδομένου ότι το εκχύλισμα κάβα έχει πολύ μικρότερη flavokawain Β και περισσότερο 5, 6-dehydrokawain, το αποτέλεσμα αυτό προκύπτει ότι 5, 6-dehydrokawain ή ο συνδυασμός της με άλλα δραστικά συστατικά μπορεί να παίζει έναν κυρίαρχο ρόλο για την ανασταλτική δράση του εκχυλίσματος κάβα επί της ανάπτυξης κυτταρικών σειρών προστάτη.

η

τα κύτταρα σε πλάκες καλλιέργειας των 24 φρεατίων υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 0,1% DMSO, το εκχύλισμα ρίζας κάβα, kawain, 5 ‘, 6’-dehydrokawain, yangonin, methysticin, ή flavokawain Β (FKB) στις ενδεικνυόμενες δόσεις. Μετά από 72 ώρες αγωγής, πυκνότητες κυττάρου μετρήθηκαν με δοκιμασία ΜΤΤ. Κάθε σημείο είναι ο μέσος όρος των τιμών από τέσσερα ανεξάρτητα πλάκες? μπαρ, SD. Κάθε δείγμα μετρήθηκε εις διπλούν. IC

50 s υπολογίστηκαν από καμπύλες δόσης-απόκρισης.

Η

Κάβα εκχύλισμα ρίζας και kavalactones μειώνουν την έκφραση του PSA και TMPRSS2 μέσω της επιτάχυνσης των AR πρωτεϊνικής αποδόμησης

το σχήμα 3Α δείχνει ότι το εκχύλισμα κάβα και kavalactones (δηλαδή kawain, 5’6′-dehydrokawain, yangonin και methysticin) αισθητά προς τα κάτω-ρυθμίζουν την έκφραση του mRNA των γονιδίων στόχων AR (

PSA

και

TMRSS2

), αλλά δεν είναι η έκφραση του mRNA της AR σε κύτταρα C4-2B. Σχήμα 3Β και C δείχνει ότι τόσο το εκχύλισμα κάβα και ατομική kavalactones μειώσει AR και η έκφραση της πρωτεΐνης PSA, καθώς και. Η ανασταλτική της ανάπτυξης δράση των kavalactones συσχετίζονται καλά με τις επιπτώσεις τους στην πρωτεΐνη AR ρύθμιση προς τα κάτω. C4-2B κύτταρα, ένα ανδρογόνο-ανεξάρτητες παράγωγο LNCaP, ήταν πιο ευαίσθητα στην AR κάτω ρύθμιση επίδραση των kavalactones και το εκχύλισμα κάβα από ήταν κύτταρα LNCaP.

(Α). C4-2B κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,1% DMSO, εκχύλισμα ρίζας κάβα, dehydrokawain, kawain, yangonin και methysticin για 8 ώρες. τα επίπεδα mRNA του Ar και Ar γονιδίων-στόχων (

PSA

και

TMPRSS2

) προσδιορίστηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR. Τα ιστία είναι μέσες ± SD τριών ανεξάρτητων ποσοτικών μέτρων. Κάβα εκχύλισμα ρίζας και kavalactones μειώσει σημαντικά την έκφραση του mRNA των γονιδίων στόχων AR (Student

t

τεστ, P & lt? 0.01), αλλά όχι ότι του AR (P & gt? 0,05). (Β) και (C). Η έκφραση της πρωτεΐνης του AR και PSA σε κύτταρα LNCaP και C4-2B μετά υποδεικνύεται θεραπείες σε συγκέντρωση IC τους

50 s για 16 ώρες αναλύθηκε με στύπωμα Western. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Υ = yangonin? M = methysticin? D = 5’6? -dehydrokawain? Κ = kawain, KRE = εκχύλισμα ρίζας κάβα. (ΡΕ). C4-2B κύτταρα υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με 10 μg /ml κυκλοεξιμιδίου για 2 ώρες και στη συνέχεια συμπληρώθηκε με εκχύλισμα ρίζας κάβα ή 5’6? -dehydrokawain Σε συγκέντρωση του IC τους

50 s για διαφορετικές χρονικές περιόδους. Μετά τις θεραπείες, τα επίπεδα πρωτεΐνης AR αναλύθηκαν με κηλίδωση Western και ημι-ποσοτικά με μέτρηση πυκνομετρία. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Στη συνέχεια εξετάσαμε την σταθερότητα του AR πρωτεΐνης με κατεργασία των κυττάρων με κυκλοεξιμίδιο να αναστέλλουν σύνθεση νέας πρωτεΐνης. Το Σχήμα 3D δείχνει ότι AR πρωτεΐνη δεικνύει επιταχυνόμενη αποικοδόμηση σε κύτταρα C4-2B υποστεί αγωγή είτε με το εκχύλισμα κάβα ή 5’6′-dehydrokawain, σε σύγκριση με τη σταθερότητα της σε κύτταρα υπό αγωγή με όχημα. Στο 16 και 24 ώρες από θεραπείες, το εκχύλισμα κάβα και 5’6′-dehydrokawain θεραπείες μειώνουν τα επίπεδα της πρωτεΐνης AR κατά περίπου 80% και 70%, αντίστοιχα, ενώ το επίπεδο της πρωτεΐνης AR τον έλεγχο του οχήματος μειωθεί μόνο κατά περίπου 20% και 37% , αντίστοιχα (Σχήμα 3D).

Flavokawain Β ρυθμίζει προς τα κάτω την έκφραση των AR και γονιδίων-στόχων του (PSA και TMPRSS2)

Flavokawain Β είναι το πλέον ισχυρό μέσο για την αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων μεταξύ των εξέτασε βιοενεργά συστατικά του εκχυλίσματος κάβα. Ως εκ τούτου, διερευνήθηκε η επίδραση της flavokawain Β επί της εκφράσεως AR. Εικόνα 4Α δείχνει ότι flavokawain Β μειώνουν σημαντικά την έκφραση της πρωτεΐνης AR σε όλα τα AR κυτταρικές σειρές που εκφράζουν (LAPC4, C4-2B, WPMY-1, LNCaP και 22Rv1). Είναι ενδιαφέρον ότι, το επίπεδο της πρωτεΐνης AR σε κύτταρα WPMY-1 είναι η πιο ευαίσθητη σε flavokawain θεραπεία Β. Από WPMY-1 αντιπροσωπεύει ένα μετασχηματισμένο γραμμή μυοϊνοβλάστη προστάτη [12], το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει ότι flavokawain Β μπορεί να είναι ένας νέος παράγοντας για τη στόχευση του προστάτη στρωματικά AR. Flavokawain Β μειώθηκαν επίσης τα επίπεδα πρωτεΐνης του PSA (Εικόνα 4Α). Το Σχήμα 4Β δείχνει ότι flavokawain Β αναστέλλει την έκφραση του AR και PSA πρωτεΐνες που επάγεται από ένα συνθετικό ανάλογο ανδρογόνου, R1881. Προ-θεραπεία με έναν αναστολέα πρωτεασώματος, MG132, δεν ανακτήσει το flavokawain Β κάτω-ρυθμίζονται-AR επίπεδο πρωτεΐνης (Εικόνα 4C). Σε αντίθεση με το εκχύλισμα κάβα και kavalactones θεραπείες, θεραπεία των κυττάρων LNCaP και C4-2B με 5 μg /ml flavokawain Β για 4 και 8 ώρες είχε ως αποτέλεσμα μια αξιοσημείωτη μείωση των επιπέδων του mRNA της

AR

και το στόχο της γονίδια

(PSA και TMPRSS2)

(Σχήμα 4D). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η flavokawain Β μεσολάβηση AR κάτω ρύθμιση είναι μέσω της ρύθμισης της μεταγραφής του.

(Α) .Η πρωτεΐνη έκφραση των AR και PSA μετά υποδεικνύεται θεραπείες για 16 ώρες ή 5 μg /ml FKB για αναφερόμενη περίοδο φορών αναλύθηκε με στύπωμα Western. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. (Β) .western ανάλυση κηλίδωση δείχνει ότι FKB μειώνει τόσο τη συστατική και ένα συνθετικό ανδρογόνο, R1881, διεγείρεται η έκφραση AR και PSA σε LNCaP κυττάρων. LNCaP κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ξυλάνθρακα απογυμνωμένο μέσον FBS. FKB και R1881 στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις επεξεργασμένα κύτταρα για 16 ώρες. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. (ΝΤΟ). πρωτεοσωμικού αναστολέα, MG132, δεν επηρεάζει FKB μεσολαβεί τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης πρωτεΐνης AR. LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με MG132 για 2 ώρες και στη συνέχεια προστέθηκε FKB για επιπλέον 16 ώρες. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. (ΡΕ). LNCaP και C4-2B κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5 μg /ml FKB για 4 και 8 ωρών. Real-time RT-PCR για να αναλυθεί η έκφραση του mRNA του Ar και Ar γονιδίων-στόχων (

PSA

και

TMPRSS2

). Οι στήλες είναι μέσες ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. FKB μειώνει σημαντικά την έκφραση του mRNA των γονιδίων στόχων AR (Student

t

τεστ, P & lt? 0,01).

Η

Η μεταγραφική καταστολή του AR από flavokawain Β απαιτεί την έκφραση του μεταγραφικού παράγοντα Sp1

επόμενο διερευνηθεί πιθανός μηχανισμός flavokawain Β μεταγραφή με τη μεσολάβηση AR. SP1 είναι ένας υποθετικός μεταγραφικός παράγοντας για τη ρύθμιση AR. Sp1 συνδέεται άμεσα με το GC-box στον προαγωγό AR μέσω ενός μοτίβου πρωτεΐνη δακτύλου ψευδαργύρου [13], [14]. Ως εκ τούτου, ένας ρεπόρτερ λουσιφεράσης AR προαγωγέα που περιέχει τέσσερις θέσεις πρόσδεσης Sp1 χρησιμοποιήθηκε για δράση υποκινητή AR δοκιμασία σε κυτταρικές σειρές PCa. Το Σχήμα 5Α δείχνει ότι οι θεραπείες flavokawain Β μειώνουν σημαντικά δραστηριότητα υποκινητή AR με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Η μείωση της δραστικότητας προαγωγέα AR με flavokawain Β συνδέθηκε με μια μείωση των επιπέδων της πρωτεΐνης Sp1 (Σχήμα 5Β). Κατά συνέπεια, η ανάλυση αποκάλυψε ότι ChIP θεραπεία flavokawain Β κυττάρων C4-2B και LNCaP ανέστειλε σημαντικά την πρόσδεση των Sp1 στις ακολουθίες AR προαγωγό (Σχήμα 5C). Για να εξεταστεί εάν Sp1 απαιτείται για flavokawain Β μεσολάβηση AR κάτω ρύθμιση, τα κύτταρα C4-2B επιμολύνθηκαν παροδικά με SP1 και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με flavokawain B. Η Εικόνα 5D δείχνει ότι η υπερέκφραση του Sp1 αυξημένα επίπεδα AR πρωτεΐνης και εξασθένησε την flavokawain Β-επαγόμενη AR ρύθμιση προς τα κάτω. Λαμβανόμενα μαζί, τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν σαφώς ότι flavokawain Β μειώνει την έκφραση της πρωτεΐνης Sp1, οδηγώντας σε AR μεταγραφική ρύθμιση προς τα κάτω.

(Α) .C4-2B κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με PSA-Luc ή plARS-Luc, μαζί με ένα πλασμίδιο λουσιφεράσης Renilla μετρήθηκαν pGL 4,71 και λουσιφεράσης δραστηριότητες. FKB μειώνει σημαντικά τις δραστηριότητές υποστηρικτής του

AR

και

PSA

γονίδια (Student

t

τεστ, P & lt? 0,01). Οι στήλες είναι μέσες ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. (Β) .western κηλίδωση ανάλυση της έκφρασης πρωτεΐνης Sp1. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (ΝΤΟ). ανάλυση ChIP της πρόσδεσης του Sp1 στην αλληλουχία AR υποκινητή αποκαλύπτει πως οι 16 ώρες FKB αποτελέσματα της θεραπείας σε μία σημαντική μείωση στην πρόσδεση του Sp1 με την αλληλουχία υποκινητή AR που περιέχουν δύο θέσεις δέσμευσης Sp1. Mouse IgG χρησιμοποιήθηκε ως τυφλός μάρτυρας. (ΡΕ). Η υπερέκφραση του Sp1 σε C4-2B κύτταρα εξασθενεί FKB που προκαλείται AR πρωτεΐνη ρύθμιση προς τα κάτω. Μετά από 48 ώρες Sp1-ΗΑ πλασμίδιο επιμόλυνση, C4-2B κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με FKB για 16 ώρες. Εξετάστηκαν SP1 και τα επίπεδα της πρωτεΐνης AR. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως μάρτυρας φόρτωσης.

Η

kavalactones και flavokawain Β συνδυασμός οδηγεί σε μια βελτιωμένη ανασταλτική επίδραση στην ανάπτυξη των κυττάρων C4-2B και στην έκφραση της πρωτεΐνης AR

Εικόνα 6Α και Β δείχνει ότι 7,5 μg /ml yangonin και 1 μg /ml flavokawain Β ανέστειλαν μόνη την ανάπτυξη των κυττάρων C4-2B κατά 15% και 20%, αντίστοιχα, ενώ ο συνδυασμός τους μείωσε την ανάπτυξη κατά περισσότερο από 70%. Παρομοίως, 5’6′-dehydrokawain σε δόση 7,5 μg /ml ελάττωσε την ανάπτυξη των κυττάρων C4-2B κατά λιγότερο από 5%, ενώ ο συνδυασμός της με 1 μg /ml flavokwain Β ανέστειλε την ανάπτυξη κατά περίπου 60%. Συνεπής με αυτό το αποτέλεσμα, flavokawain Β σε συνδυασμό με άλλα kavalactones (δηλ kawain και methysticin) επίσης είχε ως αποτέλεσμα μια συνεργιστική ανασταλτική επίδραση στην ανάπτυξη των κυττάρων C4-2B (Σχήμα 6C και D). Επιπλέον, ο συνδυασμός του 5’6′-dehydrokawain ή yagonin με περιποιήσεις flavokawain Β είχε ως αποτέλεσμα μία ενισχυμένη κάτω ρύθμιση έκφρασης πρωτεΐνης AR και στα δύο κύτταρα C4-2B και 22Rv1 (Σχήμα 6 Ε και F). Αξιοσημείωτα, 22Rv1 φιλοξενεί μια παραλλαγή ματίσματος AR με μοριακό βάρος περίπου 80 KD [15]. Flavokawain Β και 5’6′-dehydrokawain είναι πιο αποτελεσματικές στην μείωση της έκφρασης της παραλλαγής AR ματίσματος από εκείνη του πλήρους μήκους AR (Σχήμα 6F). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι kavalactones και πράξη flavokawain Β συνεργικά ή προσθετικά για να αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων του προστάτη και να ρυθμίζουν προς τα κάτω πρωτεΐνης έκφραση AR και την παραλλαγή AR ματίσματος.

Η ανάπτυξη ανασταλτική της FKB και yagonin (Α), ή 5’6? -dehydrokawain (Β), ή kawain (C), ή methysticin (D) μόνο και σε συνδυασμό επί κυττάρων C4-2B. Κάθε σημείο είναι ο μέσος όρος των τεσσάρων ανεξάρτητων πειραμάτων? μπαρ, SD. Κάθε δείγμα μετρήθηκε εις διπλούν. IC

50 s υπολογίστηκαν από καμπύλες δόσης-απόκρισης, IC

50 s από τους συνδυασμούς είναι σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες των θεραπειών μόνο (Student

t

τεστ, P & lt? 0,01). (Ε) και (F) κηλίδωση Western ανάλυση της έκφρασης της πλήρους μήκους AR (110 kDa), η παραλλαγή AR ματίσματος (83 kDa) και PSA σε κύτταρα C4-2B και 22Rv1, αντίστοιχα. Ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα δεικνύεται από τρία ανεξάρτητα πειράματα. α-τουμπουλίνης ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

εξάγει Kava και flavokawain Β μειώνουν την ανάπτυξη ασθενή που προέρχεται ξενομοσχευμάτων PCA σε ποντίκια SCID, η έκφραση AR σε ιστούς όγκων και τα επίπεδα PSA ορού

Για να προσδιορίσετε το

in vivo

αντι-προστάτη επίδραση του εκχυλίσματος κάβα και flavokawain Β, αναπτύξαμε δύο πιο κλινικά σχετικές, ασθενής που προέρχονται από μοντέλα ξενομοσχεύματος προστάτη, GM0308 και RC0309. Η GM0308 ασθενή που προέρχεται προστάτη xengrafts γραμμή προήλθε από ένα υψηλής ποιότητας (σκορ Gleason άθροισμα = 5 + 5) του προστάτη δείγμα προστατεκτομή που λαμβάνονται από έναν ασθενή ο οποίος είχε προηγουμένως υποβληθεί σε θεραπεία με τη θεραπεία στέρησης ανδρογόνων (ADT), docetaxel σε συνδυασμό με καρβοπλατίνη, και ετοποσίδης συν σισπλατίνη. Η ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος δημιουργήθηκε αρχικά με τη χρήση ενός υπονεφρικής τεχνική ξενομοσχεύματος, και στη συνέχεια διέρχεται από την υποδόρια ένεση των τεμαχίων όγκου. Η γραμμή RC0309 προήλθε από ένα υψηλής ποιότητας δείγμα (σκορ Gleason άθροισμα = 5 + 4) προστάτη προστατεκτομή που λαμβάνονται από έναν ασθενή ο οποίος δεν είχε καμία προηγούμενη επεξεργασία. Αυτά τα ανθρώπινα ξενομοσχεύματα καρκίνου διατηρήσει πιστά τις ιστοπαθολογικές χαρακτηριστικά του αρχικού κλινικό δείγμα. Και οι δύο γραμμές εκκρίνουν PSA στον ορό του ποντικού ξενιστή (Σχήμα 6Α). Η γραμμή GM0308 εκφράζει μία κολοβωμένη AR περίπου 80 kDa, χωρίς νοηματικές μεταλλάξεις στα εξόνια 3, 4, ή 5 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σε αντίθεση, RC0309 κατέχει τον πλήρη AR μήκος (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ποντίκια που φέρουν όγκους GM0308 στο πέρασμα 3 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με έκδοχο ελέγχου ή 200 mg /kg flavokawain Β καθημερινά με ΙΡ ένεση για 28 ημέρες. Το Σχήμα 6Α δείχνει μια προοδευτική αύξηση του όγκου ξενομοσχεύματος και ορό άνοδο PSA κατά τη διάρκεια ολόκληρης της μελέτης στην ομάδα ελέγχου του οχήματος. Η θεραπεία flavokawain Β, ωστόσο, οδήγησε σε μειωμένο ρυθμό ανάπτυξης του όγκου συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου σε όλη την μελέτη (Σχήμα 7Α). Τα υγρά βάρη των όγκων ή PSA ορού σε έλεγχο και ομάδα flavokawain Β αγωγή καταγράφηκαν στο τέλος της θεραπείας είναι 0,43 ± 0,27 g και 0,097 ± 0,048 g, ή 66.6 ± 12.8 ng /mL και 18.4 ± 4.8 ng /ml, αντίστοιχα ( σημαίνουν ± SD? n = 13 για τον έλεγχο και n = 6 για τις ομάδες θεραπείας FKB? Ρ & lt? 0.001, του Student t test). θεραπεία Flavokawain Β εξασθενημένο ανάπτυξη του όγκου κατά 77,3% και μείωση των επιπέδων του PSA κατά 68% στο τέλος της θεραπείας.

(Α) και (Β). Τα ποντίκια που φέρουν τον ασθενή προερχόμενο όγκους προστάτη χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδες θεραπείας και ελέγχου με παρόμοια επίπεδα PSA ορού πριν τη θεραπεία σε κάθε ομάδα. Οι όγκοι των όγκων και PSA ορού καταγράφηκαν, και παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. Υγρό βάρος των όγκων παριστάνεται ως μέσος όρος των όγκων από μεμονωμένες ποντικό σε κάθε ομάδα. Μπαρ, σημαίνει ± SD. Οι όγκοι των όγκων (επαναλαμβανόμενων μετρήσεων ανάλυση διακύμανσης (ANOVA), ρ & lt? 0,01) και βάρη των όγκων (Student

t

δοκιμής, Ρ & lt? 0,01) από FKB και το KRE ποντίκια με αγωγή ήταν σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες του οχήματος ποντίκια που έλαβαν θεραπεία ελέγχου. (ΝΤΟ). χρώση Ανοσοϊστολογία έκφρασης AR σε ιστούς όγκων. ανοσοχρώση ελέγχου διεξήχθη με IgG ισότυπο μόνο? Τα πλακίδια με αιματοξυλίνη και φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φωτός. Αρχική μεγέθυνση: × 200. (ΡΕ). AR θετικά κύτταρα μετρήθηκαν σε 12 πεδία σε κάθε ομάδα. Το ποσοστό των θετικών κυττάρων AR υπολογίστηκε και παρουσιάζονται ως μέση ± SD (το αριστερό δύο πινάκων). Τα επίπεδα mRNA του

AR

,

PSA

και

TMPRSS2

σε ιστούς όγκων που έλαβαν θεραπεία με όχημα ή FKB αναλύθηκαν με RT PCR πραγματικού χρόνου (ο δεξιός πίνακας). Μπαρ, σημαίνει ± SD. Τα ποσοστά των AR θετικά κύτταρα είναι σημαντικά χαμηλότερη στην KRE και FKB αντιμετωπίζονται ομάδες από εκείνες στις ομάδες που έλαβαν θεραπεία ελέγχου του οχήματος (Student

t

τεστ, P & lt? 0,01). Τα επίπεδα mRNA της

AR

,

PSA

και

TMPRSS2

είναι χαμηλότερη στην KRE και FKB αντιμετωπίζονται ομάδες από εκείνες στις ομάδες ελέγχου (Φοιτητικό

t

δοκιμή, P & lt?. 0.01)

η

Ποντίκια που φέρουν όγκους RC0309 στο πέρασμα 13 είχαν τραφεί με τροφή συμπληρωμένη με τον έλεγχο του οχήματος ή 6 g /kg το εκχύλισμα κάβα για 18 ημέρες. Ομοίως, η συμπλήρωση εκχύλισμα ρίζας kava ως αποτέλεσμα τη σημαντική μείωση του ρυθμού ανάπτυξης όγκων σε σύγκριση με τον έλεγχο οχήματος (Σχήμα 7Β, ANOVA, Ρ & lt? 0,01). Τα υγρά βάρη των όγκων ήταν 1,83 ± 0,79 g στην ομάδα ελέγχου και 0,73 ± 0,34 g στην ομάδα εκχύλισμα ρίζας kava (Σχήμα 7Β? N = 5, μέση ± SD? Ρ & lt? 0,05, του Student t test). Το εκχύλισμα κάβα εξασθενεί την ανάπτυξη του όγκου κατά περίπου 60,1% και μειώθηκαν τα επίπεδα του PSA στον ορό κατά 42% στο τέλος της θεραπείας.

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση δείχνει ότι τα τμήματα του όγκου από το εκχύλισμα κάβα ή flavokawain Β θεραπεία του προστάτη ξενομοσχεύματα παρουσίασαν μια (ΣΙ). (ΝΤΟ).