Αφηρημένο

Ιστορικό

Εμείς ως στόχο να διερευνήσει τον επιπολασμό και την προγνωστική ρόλο του

SOX2, PIK3CA, FGFR1

και

BRF2

κέρδος γονιδίου σε ασθενείς με χειρουργικά μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC).

Μέθοδοι

SOX2, PIK3CA, FGFR1

και

BRF2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου αξιολογήθηκε από φθορισμού

in situ

υβριδισμού (FISH) σε παραταγμένοι πυρήνες ιστού από 447 εκτομή NSCLCs.

Αποτελέσματα

αριθμός αυξήθηκε αντίγραφο του γονιδίου (FISH +) για

SOX2

,

PIK3CA

,

FGFR1

και

BRF2

παρατηρήθηκε στο 23,6%, 29,2%, 16,6% και 14,9% των περιπτώσεων, αντίστοιχα. FISH + κατάσταση για κάθε γονίδιο συσχετίστηκε σημαντικά με το ιστορικό καπνίσματος, πλακώδες καρκίνωμα (SCC) ιστολογία, και αυξημένο αριθμό αντιγράφων των άλλων μελετήθηκαν γονίδια. Η πολυπαραγοντική ανάλυση της συνολικής επιβίωσης υπέδειξαν αυξηθεί

αριθμό SOX2

αντιγράφου γονιδίου (

P

= 0,008), το στάδιο Ι-ΙΙ (

P

& lt? 0.001), και το αδενοκαρκίνωμα ή SCC ιστολογία (

P

= 0,016) ως ανεξάρτητες, ευνοϊκές προγνωστικούς παράγοντες. Μια στατιστικά σημαντική αλληλεπίδραση παρατηρήθηκε μεταξύ σκηνής και

Κατάσταση SOX2

γονίδιο (

P

= 0,021), υποδεικνύοντας ότι η προγνωστική επίδραση των

SOX2

κέρδος γονίδιο διαφέρει από τα στάδια και είναι περιορισμένη σε ασθενείς με νόσο σταδίου Ι-ΙΙ. (HR 0.44, 95% CI: 0,25 – 0,77?

P

= 0.004, προσαρμοσμένο για ιστολογία)

Συμπεράσματα

Η αυξημένη SOX2 αριθμού αντιγράφων γονιδίου είναι ένα ανεξάρτητο και ευνοϊκό προγνωστικό παράγοντα για χειρουργικά, πρώιμο στάδιο NSCLC, ανεξαρτήτως του ιστολογία. SOX2, κέρδη γονίδιο PIK3CA, FGFR1 και BRF2 είναι πιθανό να συμβούν ταυτόχρονα, με δυνητικά σχετικές συνέπειες για την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών

Παράθεση:. Toschi L, Finocchiaro G, Nguyen TT, Skokan MC, Giordano L, Gianoncelli L, et al. (2014) Αυξημένη

SOX2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου σχετίζεται με

FGFR1

και

PIK3CA

Gene Gain σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα και προβλέπει βελτιωμένη επιβίωση σε πρώιμο στάδιο της νόσου Στάδιο. PLoS ONE 9 (4): e95303. doi: 10.1371 /journal.pone.0095303

Επιμέλεια: Harriet Wikman, Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf, Γερμανία

Ελήφθη: 30 του Οκτωβρίου του 2013? Αποδεκτές: 26 Μαρτίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 15, Απριλίου του 2014

Copyright: © 2014 Toschi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από ιδιωτική δωρεά από τον κ Gerry Scotti, Κολοράντο Καρκίνο του πνεύμονα SPORE NCI P50CA058187, NCI CCSG P30CA046934 και επιχορηγήσεις ΝΙΗ /NCATS Κολοράντο CTSI KL2TR000156. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο παγκοσμίως και τα ποσοστά επιβίωσης είναι φτωχοί. Κατά τα τελευταία λίγα χρόνια, η πρόοδος στη γνώση της βιολογίας του καρκίνου του πνεύμονα οδήγησε στην ταυτοποίηση των ενεργοποιημένων ογκογονιδίων που μπορεί να στοχεύονται θεραπευτικά με νέους παράγοντες. Μεταξύ αυτών είναι οι αναστολείς κινάσης τυροσίνης, όπως gefitinib και erlotinib για ασθενείς με υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (

EGFR

) μεταλλάξεις [1] – [2] και, πιο πρόσφατα, crizotinib για άτομα με κινάσης αναπλαστικού λεμφώματος (

ALK

) αναδιατάξεις [3]. Αυτοί οι παράγοντες έχουν βελτιώσει σημαντικά το αποτέλεσμα των βιολογικά επιλεγμένων μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) ασθενείς με προχωρημένη νόσο, ενθαρρύνοντας την ταυτοποίηση νέων θεραπευτικών στόχων.

Το SRY (sex περιοχή καθορισμού Y) -κουτί 2 (

SOX2

) γονίδιο, που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 3q26.33, κωδικοποιεί για ένα μέλος της SRY σχετίζονται οικογένεια HMG-box μεταγραφικών παραγόντων και έχει ενοχοποιηθεί στη ρύθμιση πλειοδυναμία σε εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα [4]. Προς τα πάνω ρύθμιση

SOX2

επάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη της πνευμονικής κυτταρικές σειρές καρκινώματος πλακωδών κυττάρων (SCC) και οδηγεί πνεύμονα ογκογένεση σε ποντικούς [5] – [6]. Ενίσχυση του

SOX2

έχει συσχετιστεί με την πνευμονική SCC [5] – [8], με αναδρομική στοιχεία που δείχνουν μια τάση για βελτιωμένη επιβίωση υπέρ της

SOX2

γονίδιο κέρδος σε χειρουργικά ασθενείς [7 ] – [8]

το

PIK3CA

γονίδιο κωδικοποιεί για την καταλυτική υπομονάδα ρ110α της κατηγορίας ΙΑ φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3-κινάσες (PI3K) και έχει προσδιοριστεί να λειτουργεί ως ογκογονίδιο σε ανθρώπινες κακοήθειες ενεργοποιηθεί. με γονιδιακή ενίσχυση ή μεταλλάξεις [9]. Είναι σημαντικό, προκλινικά μοντέλα έδειξαν ότι η αναστολή του μονοπατιού PI3K μειώνει την επιβίωση των κυττάρων NSCLC φιλοξενούν

PIK3CA

αλλοιώσεις του γονιδίου [10] – [11], και πολλές νέες PI3K, αναστολείς της Akt και mTOR έχουν εισέλθει δοκιμές κλινικής δοκιμής για την θεραπεία των καρκίνων του PI3K-εθισμένος.

PIK3CA

βρίσκεται στο χρωμόσωμα 3q26.32, κοντά στο

SOX2

τόπο. Συγκριτικές μελέτες γονιδιωματικής υβριδοποίησης έδειξαν διακριτά επίπεδα ενίσχυσης για

SOX2

και

PIK3CA

στον πνεύμονα SCC με 3q26 κέρδος [5], γεγονός που υποδηλώνει ότι θα μπορούσαν να παίζουν ανεξάρτητα ογκογόνο ρόλους.

ο υποδοχέας αυξητικού παράγοντα ινοβλαστών 1 (FGFR1), η οποία κωδικοποιείται από ένα γονίδιο που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 8p12.1, είναι ένα μέλος μιας οικογένειας υποδοχέων κινάσης τυροσίνης τέσσερα (FGFR1-4) και έχει μελετηθεί ευρέως ως βασικό υποδοχέα που εμπλέκεται σε εμβρυϊκά ανάπτυξη [12]. Ενίσχυση του

FGFR1

έχει πρόσφατα αναφερθεί σε ποσοστό έως 22% του πνεύμονα SCC [13] και έχει συσχετιστεί με ευαισθησία σε αναστολείς κινάσης τυροσίνης FGFR1 σε πολλαπλά προκλινικά μοντέλα, συμπεριλαμβανομένων των πνευμόνων SCC κυτταρικές γραμμές [13] – [ ,,,0],15], που οδηγεί σε κλινικές δοκιμές αυτών των παραγόντων στο

FGFR1

-amplified όγκους.

Ο συντελεστής 2 B που σχετίζονται με (

BRF2

) γονίδιο, που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 8p11. 23 πολύ κοντά στο

FGFR1

, κωδικοποιεί μία υπομονάδα της RNA πολυμεράσης III (Pol III) συμπλόκου έναρξης μεταγραφής, η οποία είναι υπεύθυνη για τη μεταγραφή ενός αριθμού γονιδίων μη κωδικεύουσας RNA των οποίων τα προϊόντα εμπλέκονται σε σύνθεση πρωτεϊνών, την επεξεργασία του RNA και μεταγραφής [16]. Το RNA pol III συχνά απορυθμισμένη στον καρκίνο, και

BRF2

ταυτοποιήθηκε πρόσφατα ως νέο ογκογονίδιο στον πνεύμονα SCC ενεργοποιούνται με αυξημένο αριθμό αντιγράφων [17]. Στην πραγματικότητα,

BRF2

ενίσχυση προσδιορίζει μια αυξημένη δραστικότητα RNA Pol III και παρατεταμένη κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την επιβίωση

in vitro

[17].

Μεταβολές στον αριθμό αντιγράφων του

SOX2

,

PIK3CA

,

FGFR1

και

BRF2

γονίδια έχουν ατομικά μελετηθεί σε μια σειρά πληθυσμών NSCLC, ιδιαίτερα στον πνεύμονα SCC, με περιορισμένη και μερικές φορές αντικρουόμενα στοιχεία σχετικά με προγνωστικές επιπτώσεις τους. Επιπλέον, ο επιπολασμός του αριθμού αντιγράφων κέρδη περισσότερα από ένα γονίδια και την επίδρασή του στην επιβίωση των ασθενών είναι ακόμη σε μεγάλο βαθμό ανεξερεύνητη. Η παρούσα μελέτη διεξήχθη για να διερευνήσει την επικράτηση του

SOX2, PIK3CA, FGFR1

και

BRF2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου αλλάζει σε ένα μεγάλο, μη επιλεγμένων ομάδα του χειρουργικά ασθενείς με NSCLC, για να επαληθεύσετε ταυτόχρονη γονιδιωματικής κέρδη και να καθοριστεί αν αριθμού αντιγράφων αλλαγές σε αυτά τα γονίδια επηρεάζουν το αποτέλεσμα του ασθενούς.

ασθενείς και Μέθοδοι

έγκρισης

Ηθική Δήλωση

Institutional Review Board (IRB) (# 304/12 ) λήφθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας Istituto Κλινικο Humanitas. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από ασθενείς που υποβάλλονται σε ενεργό παρακολούθηση στο ίδρυμά μας. IRB παραιτήθηκε από τις απαιτήσεις για την έγγραφη συγκατάθεση από τους ασθενείς που δεν θα μπορούσε να επιτευχθεί. Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις ηθικές αρχές που αναφέρονται στην πιο πρόσφατη έκδοση της Διακήρυξης του Ελσίνκι.

Ασθενείς

Η αναδρομική αυτή μελέτη διεξήχθη σε ένα προηγουμένως αναφερθεί ομάδα των 447 ασθενών Καυκάσου NSCLC ότι έλαβε μια ριζική εκτομή του πρωτογενούς NSCLC μεταξύ του 2000 και του 2004 στο Istituto Κλινικο Humanitas (Rozzano, Ιταλία) [18]. Μια μικροσυστοιχία ιστού (TMA) κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας πυρήνες διαμέτρου 0,6 χιλιοστών.

φθορισμού

In Situ

υβριδισμός (FISH) Ανάλυση

Το βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα (BAC) κλώνοι RP11- 459K06, RP11-245C23, RP11-168H08 και RP11-350N15, αντίστοιχα, που περιέχουν ανθρώπινο ένθετα DNA από περιοχές ομόλογες με

SOX2

,

PIK3CA

,

BFR2

και

FGFR1

, χρησιμοποιήθηκαν για τους ανιχνευτές απαρίθμηση FISH, σύμφωνα με πρωτόκολλα που περιγράφηκε προηγουμένως [19] – [20]. αριθμό αντιγράφων ανά κύτταρο για κάθε γονίδιο που απαριθμούνται σε τουλάχιστον 50 καρκινικά κύτταρα από 2 πυρήνες ιστού ανά ασθενή από κυτταρογενετιστής εμπειρογνώμονα τύφλωσε με τα στοιχεία του ασθενούς. Εν τη απουσία επικυρωμένων κριτηρίων βαθμολόγησης για FISH αυτών των γονιδίων, ένα προκαθορισμένο αποκοπής της μέσης ≥4 γονιδίου αντίγραφα /κύτταρο, που χρησιμοποιήθηκε προηγουμένως για τον ορισμό κέρδος γονίδιο με άλλες τεχνικές [13], ή παρουσία γονιδίου συστάδων που δείχνει αληθινό γονιδιακή ενίσχυση, ορίστηκε για τον εντοπισμό περιπτώσεων με αυξημένο αριθμό αντιγράφων του γονιδίου (FISH +). Τα παραδείγματα των προτύπων FISH φαίνεται στο σχήμα 1.

Η

Στατιστική Ανάλυση

Σύλλογοι μεταξύ δημογραφικών και κλινικών χαρακτηριστικών και της κατάστασης FISH εκτιμήθηκαν χρησιμοποιώντας τη συνέχεια προσαρμόζεται Chi-τετράγωνο ή το ακριβές τεστ του Fisher , ανάλογα με την περίπτωση. Pearson συντελεστής συσχέτισης χρησιμοποιήθηκε για να ελεγχθεί η συσχέτιση μεταξύ της κατάστασης FISH κάθε γονιδίου.

Η συνολική επιβίωση (OS), που υπολογίζεται από τη στιγμή της διάγνωσης σε θάνατο ασθενούς ή την τελευταία επαφή, αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων εκτιμήθηκαν με τη χρήση της δοκιμής log rank. Οι αναλογίες κινδύνου με τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (95% CI) υπολογίστηκαν με χρήση του μοντέλου παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε στο & lt? 0,05 για κάθε ανάλυση. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το πακέτο R.

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά Ασθενών

Η μελέτη περιελάμβανε μια ομάδα από 447 ασθενείς με χειρουργικά NSCLC. Οι λεπτομέρειες της κλάσης έχουν περιγραφεί στο παρελθόν [18] και τα χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον πίνακα 1. Εν συντομία, η πλειοψηφία των ασθενών ήταν άνδρες (82,8%), πρώην (53,2%) ή νυν καπνιστές (36,0%), με ιστολογική βαθμού 1 ή 2 όγκοι (64,2%). Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε ριζική χειρουργική επέμβαση και οι όγκοι είχαν ανεβεί σύμφωνα με την ταξινόμηση ΤΝΜ με ενδείξεις παθολογικής σταδίου Ι σε 37,1% των περιπτώσεων, το στάδιο ΙΙ στο 22,1%, το στάδιο ΙΙΙ στο 32,7% και το στάδιο IV στο 8,1%. Η τελευταία ομάδα περιλάμβανε ασθενείς με μεταστατικό μοναχικά βλάβη, κυρίως στον εγκέφαλο και τα επινεφρίδια, επιδέχονται χειρουργική επέμβαση ή η στερεοτακτική ακτινοχειρουργική. Οι ασθενείς με νόσο σταδίου ΙΙΙ ρΝ2 (n = 101) έλαβαν μεσοθωρακίου μετεγχειρητική ακτινοθεραπεία. Συνολικά, δεδομένης της χειρουργικής χρονικό διάστημα (2000-2004), δεν υπάρχουν ασθενείς με όγκους σταδίου Ι-ΙΙ έλαβαν μετεγχειρητική συστημική θεραπεία, ενώ μόνο 18 άτομα με νόσο σταδίου ΙΙΙ υποβλήθηκαν σε θεραπεία με επικουρική βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία. Η πλειονότητα των ασθενών είχαν διαγνωσθεί με αδενοκαρκίνωμα (54,6%), ενώ 138 (30,9%) και 65 (14,5%) ασθενείς είχαν SCC ή άλλα ιστολογία, αντίστοιχα. Μετά από διάμεση παρακολούθηση 60,4 μηνών, 244 θάνατοι και η διάμεση επιβίωση ήταν 42,5 μήνες. Σημαντικά μεγαλύτερη επιβίωση παρατηρήθηκε για τους ασθενείς με σταδίου Ι-ΙΙ (αναφέρεται στο παρόν ως «πρώιμο στάδιο») όγκους σε σύγκριση με εκείνους με σταδίου ΙΙΙ-IV της νόσου (

P

& lt? 0.001). Ασθενείς με SCC ή αδενοκαρκίνωμα είχε παρόμοιο αποτέλεσμα και έζησαν περισσότερο από ό, τι οι ασθενείς με άλλους ιστολογίες (

P

& lt? 0.001). Καμία διαφορά δεν παρατηρήθηκε επιβίωση ανάλογα με το φύλο, το ιστορικό καπνίσματος ή παθολογική βαθμού.

Η

SOX2

και

PIK3CA

Copy Αριθμός Κέρδος

em

SOX2

και

PIK3CA

κατάσταση γονίδιο επιτυχία προσδιορίζεται σε 445 (99,6%) και 435 (97,3%) ασθενείς, αντίστοιχα. Συνολικά,

SOX2

αυξημένο αριθμό αντιγράφων γονιδίου ανιχνεύθηκε σε 105 περιπτώσεις (23,6%), με την αληθινή γονιδιακή ενίσχυση που παρατηρείται σε 19 ασθενείς (4,3%).

PIK3CA

κέρδος γονίδιο βρέθηκε σε 29,2% των ασθενών, συμπεριλαμβανομένων των 21 περιπτώσεις (4,8%) με την αληθινή γονιδιακή ενίσχυση. Όπως ήταν αναμενόμενο δεδομένης της φυσικής τους εγγύτητας, μια στατιστικά σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε αύξηση του αριθμού αντιγράφων μεταξύ

SOX2

και

PIK3CA

(Pearson συντελεστής συσχέτισης: 0.78,

P

& lt? 0.001 ), με αντικρουόμενα αποτελέσματα FISH μεταξύ των δύο γονιδίων σε μόλις 9,9% των περιπτώσεων. Η ένωση αυτή διατηρήθηκε σε όλες τις ιστολογικές υποτύπους (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως συνοψίζεται στον πίνακα 2, και τα δύο

SOX2

+ και

PIK3CA

+ καθεστώς σημαντικά που συνδέονται με το ανδρικό φύλο, πρώην /τρέχον ιστορικό καπνίσματος, και SCC ιστολογία. Επιπλέον,

PIK3CA

κέρδος γονίδιο πιο συχνά παρατηρείται σε όγκους βαθμού ΙΙΙ (

P

= 0,040). Όλες οι περιπτώσεις με

SOX2

πραγματική ενίσχυση του γονιδίου ήταν SCC, για ένα συνολικό επιπολασμό της τάξης του 13,8%

SOX2

της -amplified όγκων σε ασθενείς με SCC ιστολογία. Παρομοίως,

PIK3CA

αληθές γονιδιακή ενίσχυση βρέθηκε σε 12,8% των περιπτώσεων με SCC, ενώ μόνο 4 ασθενείς με μη πλακώδους όγκοι ήταν

PIK3CA

-amplified, συμπεριλαμβανομένων 3 αδενοκαρκινώματα και μία πλειομορφικές καρκίνωμα.

Η

SOX2 ασθενείς

+ είχαν σημαντικά μεγαλύτερη επιβίωση από ό, τι

SOX2

– θέματα (53,7% έναντι 41,1% 5-ετή OS,

P

= 0.019) (σχήμα 2Α), χωρίς καμία διαφορά στην έκβαση μεταξύ των περιπτώσεων με ≥4 σημαίνει γονίδιο αντίγραφα /κύτταρο και τα άτομα με πραγματική ενίσχυση του γονιδίου (

P

= 0,937). Οι αναλύσεις υποομάδων σύμφωνα με ενιαία χαρακτηριστικά κλινικο-παθολογικές, συμπεριλαμβανομένων στάδιο, ιστολογία, το φύλο, το κάπνισμα και το βαθμό, εντόπισε ένα σημαντικό πλεονέκτημα επιβίωσης για

SOX2

+ ασθενείς στο υποσύνολο των πρώιμων σταδίων (70,4% έναντι 51,8% 5 -year OS,

P

= 0,004, σχήμα 2Β) και βαθμού 3 όγκους (52,3% έναντι 37,4% 5-ετή OS,

P

= 0.037). Σε ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ-IV της νόσου, καμία διαφορά επιβίωση ανιχνεύθηκε μεταξύ

SOX2

+ και

SOX2

– περιπτώσεις (

P

= 0,993), ενώ η τάση για μια καλύτερο αποτέλεσμα προς όφελος του

SOX2

+ υποκείμενα παρατηρήθηκε στην υποομάδα SCC (

P

= 0.053).

(Α)

SOX2

, ολόκληρα σώμα στρατού. (Β)

SOX2

, σταδίου Ι-ΙΙ. (C)

PIK3CA

, ολόκληρη ομάδα. (D)

SOX2 /PIK3CA

, ολόκληρη ομάδα. (Ε)

FGFR1

, ολόκληρη ομάδα. (F)

BRF2

, ολόκληρη ομάδα. Συντομογραφίες: OS = συνολική επιβίωση? NR δεν = επιτευχθεί.

Η

στοιχεία επιβίωσης σύμφωνα με το

PIK3CA

κατάστασης του γονιδίου ήταν παρόμοια με

SOX2

, πιθανότατα ως αποτέλεσμα της σημαντικής επικάλυψης μεταξύ της κατάστασης FISH αυτών των δύο γονιδίων. Στην πραγματικότητα, ένα στατιστικά σημαντικό πλεονέκτημα επιβίωσης παρατηρήθηκε για

PIK3CA ασθενείς

+ σε σύγκριση με το

PIK3CA

– ασθενείς στο σύνολο του πληθυσμού (52,2% έναντι 40,9% 5-ετή OS,

P

= 0,044) (Σχήμα 2C). Το πλεονέκτημα επιβίωσης για

PIK3CA ασθενείς

+ παρέμεινε στατιστικά σημαντική μόνο στο υποσύνολο των όγκων πρώιμο στάδιο (69,5% έναντι 51,5% 5-ετή OS,

P

= 0,005), με μια τάση για βελτιωμένη επιβίωση σε ασθενείς με SCC (

P

= 0.064).

Εμείς ως στόχο να διερευνήσουν περαιτέρω τα πρότυπα επιβίωσης των ασθενών με ασύμφωνα

SOX2 /PIK3CA

κατάστασης του γονιδίου (n = 43). Όπως φαίνεται στο σχήμα 2D, υπήρξε παρόμοια αποτελέσματα μεταξύ

SOX2- /PIK3CA

+ (n = 34) και διπλά αρνητικά (n = 297) ασθενείς, ενώ η επιβίωση του

SOX2 + /PIK3CA

– άτομα (n = 9) φάνηκε να είναι παρόμοια με αυτή της διπλής θετικής ομάδα (n = 93) .Those ευρήματα υποδεικνύουν ότι το

PIK3CA

κέρδος γονίδιο δεν ήταν

per se

προγνωστικά σχετική.

FGFR1

και

BRF2

Αριθμός Κέρδος Αντιγράψτε

Ένα σύνολο 445 (99,6%) ασθενείς ήταν να αξιολογηθούν ως προς

FGFR1

αντίγραφο γονιδίου αριθμό, με 16,6% FISH + ασθενείς, συμπεριλαμβανομένων 37 περιπτώσεις (8,3%) με την αληθινή γονιδιακή ενίσχυση.

FGFR1

κέρδος γονίδιο ήταν σημαντικά πιο συχνή σε ασθενείς με SCC από ό, τι σε εκείνες με αδενοκαρκίνωμα ή άλλο ιστολογίες (SCC έναντι των μη-SCC: 28,3% έναντι 11,4%,

P

& lt? 0.001,) ενώ καμία συσχέτιση με το φύλο, το κάπνισμα, το στάδιο ή βαθμό βρέθηκε (πίνακας 2).

FGFR1

αληθές γονιδιακή ενίσχυση παρατηρήθηκε στο 17,4% των SCC αλλά παρατηρήθηκε επίσης σε 3/26 (11,5%) των όγκων με νευροενδοκρινική διαφοροποίηση και 2/28 (7,1%) ποτέ καπνιστές με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, συμπεριλαμβανομένου ενός θηλυκού με ταυτόχρονη

EGFR

L858R μετάλλαξη.

BRF2

κατάστασης του γονιδίου αξιολογήθηκε με FISH σε 435 (97,3%) ασθενείς και παρατηρήθηκε αυξημένος αριθμός αντιγράφων γονιδίου στο 14,9% των περιπτώσεις, συμπεριλαμβανομένων 27 ασθενείς (6,2%) με γονιδιακή ενίσχυση. Όπως φαίνεται στον πίνακα 2, ο πρώην /τρέχον ιστορικό καπνίσματος και η SCC ιστολογία συσχετίστηκε σημαντικά με τον

BRF2

+ κατάστασης. Πιθανή λόγω της στενής φυσικής τους θέσης στο χρωμόσωμα 8p11-12, μια σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ

FGFR1

και

BRF2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου (Pearson συντελεστής συσχέτισης: 0.78,

P

& lt? 0.001), με μόνο 5,3% των περιπτώσεων με αντικρουόμενα αποτελέσματα FISH. Η σύνδεση μεταξύ των δύο γονιδίων ήταν ανεξάρτητη από ιστολογία (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, σημαντικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ του αριθμού αντιγράφων κέρδη των γονιδίων που βρίσκονται σε διαφορετικά χρωμοσώματα (

FGFR1

ή

BRF2

με

SOX2

ή

PIK3CA

,

P

& lt? 0.001 για κάθε ένωση), ανεξάρτητα από την ιστολογική εξέταση. Ιδιαίτερα,

SOX2

και

PIK3CA

γονίδιο κέρδη παρατηρήθηκαν σε 55,4% και 75,7%, αντίστοιχα, των

FGFR1

+ όγκους.

Το

FGFR1

+ ή

BRF2

+ ασθενείς επέζησαν περισσότερο από εκείνους που δεν έχουν ή κέρδος χαμηλού αριθμού αντιγράφων, αν και η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

FGFR1

,

P

= 0,324?

BRF2

,

P

= 0,179) (σχήματα 2Ε και 2F).

FGFR1

αριθμού αντιγράφων γονιδίου απέτυχε να δείξει σημαντική προγνωστική επίπτωση κατά την ανάλυση επιβίωσης σύμφωνα με κλινικο-παθολογική χαρακτηριστικά, συμπεριλαμβανομένου του φύλου, το κάπνισμα, το στάδιο, ιστολογία και βαθμοί (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αντίθετα, ένα σημαντικό πλεονέκτημα επιβίωσης παρατηρήθηκε για

BRF2

+ ασθενείς με νόσο πρώιμο στάδιο, σε σύγκριση με το

BRF2

– ομάδα (74,6% έναντι 54,0% 5-ετή OS,

P

= 0,040), ενώ δεν προγνωστική σχετικότητα παρατηρήθηκε για

BRF2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου σε άλλες υποομάδες ασθενών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Λόγω της σημαντικής επικάλυψης μεταξύ

FGFR1

και

BRF2

κατάσταση FISH, δεν υπάρχουν διαφορές επιβίωσης βρέθηκαν στο σύνολο του πληθυσμού κατά την ομαδοποίηση των ασθενών σύμφωνα με τα δύο γονίδια (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ομοίως, καμία επίπτωση επιβίωση παρατηρήθηκε κατά το συνδυασμό

FGFR1

ή

BRF2

με

SOX2

ή

PIK3CA

FISH αποτελέσματα στο σύνολο του πληθυσμού ή σε clinically- ορίζεται υποομάδες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η πολυπαραγοντική ανάλυση

Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, οι παράγοντες που σχετίζονται με την επιβίωση ήταν στάδιο, ιστολογία,

SOX2

και

PIK3CA

αριθμό αντιγράφων του γονιδίου. Λαμβάνοντας υπόψη την ισχυρή συσχέτιση μεταξύ

SOX2

και

PIK3CA

κατάστασης του γονιδίου, τα δύο γονίδια που αξιολογήθηκαν σε δύο διαφορετικά μοντέλα. Στο

SOX2

μοντέλο,

SOX2 κέρδος γονίδιο

, πρώιμο στάδιο και αδενοκαρκίνωμα /SCC ιστολογία αναδειχθεί ως ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για τη βελτίωση της επιβίωσης (HR

SOX2 + vs SOX2- 0,48, 95% CI : 0,28 – 0,83,

P

= 0,008? HR

σταδίου Ι-ΙΙ vs ΙΙΙ-IV 0.49, 95% CI: 0,37 – 0,65?

P

& lt? 0.001? HR

αδενοκαρκίνωμα /SCC vs άλλα 0,67, 95% CI: 0,46 – 0,93?

P

= 0,016). Είναι σημαντικό, παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ της σκηνής και

Κατάσταση SOX2

γονίδιο (

P

= 0,021), υποδεικνύοντας ότι η προγνωστική αντίκτυπο της αυξημένης

αριθμό SOX2

γονίδιο αντίγραφο διέφερε σύμφωνα με το στάδιο του όγκου και περιορίστηκε σε ασθενείς με νόσο πρώιμο στάδιο (HR 0.44, 95% CI: 0,25 – 0,77?

P

= 0.004, προσαρμοσμένο για ιστολογία). Σε αντίθεση, στο πολυπαραγοντικό μοντέλο θεωρώντας

PIK3CA

αριθμό αντιγράφων του γονιδίου, το στάδιο και ιστολογία,

PIK3CA

κέρδος γονίδιο απέτυχε να προβλέψει μια σημαντική πλέον επιβίωσης (

P

= 0,135) .

Ο αντίκτυπος επιβίωση παρατηρήθηκε για

BRF2

κέρδος γονιδίου σε ασθενείς με νόσο πρώιμο στάδιο δεν επιβεβαιώθηκε στο πολυπαραγοντικό μοντέλο μετά από διόρθωση για ιστολογία (

P

= 0,135), . αν και ο μικρός αριθμός των

BRF2

+ περιπτώσεις αποκλείεται ασφαλή συμπεράσματα

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη αξιολόγησε την προγνωστική σημασία του αριθμού αντιγράφων μεταβολές των τεσσάρων ογκογονιδίων στο παρελθόν σχετίζεται με πνεύμονα SCC –

SOX2, PIK3CA, FGFR1

και

BRF2

– σε μια μεγάλη ομάδα χειρουργικά ασθενείς με NSCLC. Για πρώτη φορά, αναφέρουμε αυξηθεί

αριθμό SOX2

γονίδιο αντίγραφο αξιολογούνται από FISH ως ανεξάρτητη ευνοϊκό προγνωστικό παράγοντα σε ασθενείς με σταδίου Ι και ΙΙ NSCLC, ανεξάρτητα από ιστολογίας.

SOX2, μια μεταγραφή παράγοντας που παίζει καθοριστικό ρόλο στην εμβρυϊκή ανάπτυξη, έχει πρόσφατα αναδειχθεί ως ένας ελκυστικός θεραπευτικός στόχος στον καρκίνο του πνεύμονα. Στην πραγματικότητα, ενίσχυση και /ή υπερέκφραση του

SOX2

έχουν αναφερθεί σε πνεύμονα SCC, αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα και, πιο πρόσφατα, ο καρκίνος του πνεύμονα μικρού κυττάρου [5], [20] – [21]. Τα προκλινικά εκθέσεις ήταν συνεπείς σε δείχνουν ότι SOX2 αποσιώπηση οδηγεί σε σημαντική βλάβη της κυτταρικής ανάπτυξης σε μοντέλα καρκίνου του πνεύμονα, υποστηρίζοντας αναστολή SOX2 ως μια πολλά υποσχόμενη αντικαρκινική στρατηγική σε κακοήθειες του πνεύμονα [5], [22].

Ο προσδιορισμός FISH + κατάστασης ως μέση ≥4 γονίδιο αντίγραφα /κύτταρο ή το γονίδιο παρουσία συστάδων (πραγματική ενίσχυση του γονιδίου),

SOX2

κέρδος γονίδιο παρατηρήθηκε σε περίπου ένα τέταρτο της NSCLCs και σημαντικά που συνδέονται με το ανδρικό φύλο, η έκθεση στον καπνό και SCC ιστολογία , όπως αναφέρθηκε προηγουμένως από άλλους [5] – [7]. Ιδιαίτερα, το ήμισυ του πνεύμονα SCC κατηγοριοποιούνται ως FISH +, με πραγματική ενίσχυση γονιδίου που συμβαίνουν στο 13,8% των περιπτώσεων, ενώ τα αδενοκαρκινώματα πνεύμονα παρουσίασε αυξημένη

SOX2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου στο 10,7% των δειγμάτων χωρίς περιπτώσεις που φιλοξενούν πραγματική ενίσχυση του γονιδίου. Αυτά τα ευρήματα είναι περίπου σύμφωνα με άλλες μελέτες FISH σε NSCLC, στις οποίες χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικά κριτήρια βαθμολόγησης [7] – [8].

Η προγνωστική ρόλος της SOX2 έχει διερευνηθεί σε αναδρομικές σειρές NSCLC. Παρά τα δεδομένα από μια πρόσφατη μετα-ανάλυση υποδεικνύει ένα ευνοϊκό προγνωστικό αντίκτυπο για έκφραση SOX2 σε NSCLC ανεξάρτητα από ιστολογία, [23] οι περισσότερες μελέτες έδειξαν ότι η πρωτεΐνη SOX2 υπερέκφραση προέβλεψε παρατεταμένη επιβίωση σε χειρουργικά SCC πνεύμονα [7] – [8], ενώ του επίπτωση επιβίωσης σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα παραμένει αμφιλεγόμενη [21], [24]. Δύο μελέτες έχουν δείξει μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης SOX2 αξιολογείται με ανοσοϊστοχημεία και

κέρδος γονίδιο SOX2

αξιολογούνται από FISH, και πρότεινε ένα ευνοϊκό προγνωστικό ρόλο για την αύξηση της

SOX2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου στον πνεύμονα SCC, αν και δεν επιτεύχθηκε στατιστική σημαντικότητα [7] – [8]. Ιδιαίτερα, Wilbertz et al. ανιχνευθεί μια τάση για βελτιωμένη επιβίωση σε ασθενείς πνεύμονα SCC με ≥10

SOX2

αντίγραφα /κύτταρο σε σύγκριση με όγκους χωρίς ή με ενίσχυση χαμηλού επιπέδου, αλλά αυτό το αποτέλεσμα χάθηκε στο πολυπαραγοντικό μοντέλο [7].

για πρώτη φορά, έχουμε αναφερθεί στατιστικώς σημαντικά βελτιωμένη συνολική επιβίωση για

SOX2

FISH + ασθενείς με σταδίου Ι και ΙΙ NSCLC. Είναι σημαντικό ότι, η ευνοϊκή προγνωστική επίδραση του

SOX2

κέρδος γονίδιο που παρατηρήθηκαν στη μελέτη μας, όπου οι μη-SCC ασθενείς αντιπροσώπευαν περίπου το 38% των

SOX2

+ περιπτώσεις, ήταν ανεξάρτητη της ιστολογίας και

PIK3CA

κέρδος γονίδιο. Τα ευρήματά μας έρχονται σε αντίθεση με εκείνα μιας άλλης μελέτης, όπου μια αρνητική επίπτωση επιβίωσης για

SOX2

ενίσχυση χαμηλό επίπεδο, σε σύγκριση με την έλλειψη ενίσχυσης, παρατηρήθηκε σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα [7]. Επιπλέον, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι το όφελος επιβίωσης που παρατηρείται σε μη επιλεγμένους NSCLC πρώιμο στάδιο, δεν περιορίζεται σε ασθενείς με πραγματική ενίσχυση γονιδίου, αλλά επεκτάθηκε και σε εκείνους με μέση ≥4

SOX2

αντίγραφα /κύτταρο και υπάρχουν συστάδες γονιδίων. Οι διαφορές μεταξύ της μελέτης μας και ότι του Wilbertz et al. μπορεί να εξηγηθεί από τις διαφορές ως προς τα κριτήρια βαθμολόγησης FISH και τον ασθενή κλινικά χαρακτηριστικά. Ο λόγος για την έλλειψη επιπτώσεων επιβίωσης για

SOX2

κέρδος γονιδίου σε ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ και IV της νόσου στην ομάδα μας, είναι ασαφής και θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω. Είμαστε εικάζουν ότι

SOX2

κέρδος γονίδιο είναι ένα πρώιμο συμβάν στον πνεύμονα ογκογένεση και την εξέλιξη του όγκου οδηγεί σε πρόσθετες μοριακές ανωμαλίες που επηρεάζουν την έκβαση των ασθενών.

FGFR1 έχει πρόσφατα αναδειχθεί ως ένα πολλά υποσχόμενο στόχο σε NSCLC μετά το γονίδιο αναφέρθηκε ως ενισχύθηκε σε περίπου 20% του πνεύμονα SCC [13] – [14], [25], που οδηγεί σε πρώιμη φάση των κλινικών δοκιμών παραγόντων αντι-FGFR1 σε

FGFR1

-amplified NSCLC. Τα δεδομένα μας επιβεβαίωσε την προηγουμένως αναφερθεί συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης

FGFR1

αριθμού αντιγράφων γονιδίου και SCC ιστολογία. Είναι σημαντικό ότι,

FGFR1

κέρδος γονίδιο βρέθηκε επίσης στο 11,4% των μη πλακώδους όγκων, συμπεριλαμβανομένων πραγματική ενίσχυση γονιδίου σε περίπου 7% των ασθενών αδενοκαρκίνωμα με την ιστορία ποτέ δεν το κάπνισμα – τον ίδιο πληθυσμό με αυξημένη πιθανότητα υπόθαλψη

EGFR

μεταλλάξεις ή

ALK

ανακατατάξεις – και 11% μεταξύ νευροενδοκρινείς όγκους. Παρά το γεγονός ότι οι μικροί αριθμοί αυτών των υποομάδων αποκλείει κάθε οριστικό συμπέρασμα, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι

FGFR1

εκτίμηση αριθμού αντιγράφων γονιδίου θα πρέπει να επιδιωχθεί σε επιλεγμένους ασθενείς με μη-πλακώδες όγκων για τον προσδιορισμό των υποψηφίων για αντι-FGFR1.

στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε ότι ο αριθμός ταυτόχρονων αντίγραφο κέρδη του

SOX2, PIK3CA, FGFR1

ή

BRF2

ήταν κοινή. Ενώ η ισχυρή συσχέτιση μεταξύ

SOX2

και

PIK3CA

και μεταξύ των

FGFR1

και

BRF2

κατάστασης του γονιδίου ήταν αναμενόμενο λόγω της εγγύτητάς τους στα χρωμοσώματα 3q26 και 8p11 -12, αντίστοιχα, η μελέτη μας είναι η πρώτη που αναφέρουν στατιστικά σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ αριθμού αντιγράφων κέρδη και στις δύο περιοχές του γονιδιώματος, ανεξάρτητα από την ιστολογία. Σε αντίθεση, Weiss et al. περιγράφεται ότι το

FGFR1

και

SOX2

ενισχύσεις ήταν αλληλοαποκλειόμενες στον πνεύμονα SCC, αν και σε αυτή τη μελέτη η γονιδιωματική κέρδος ερευνήθηκε από συστοιχίες πολυμορφισμό μονού νουκλεοτιδίου και διαφορετικά όρια για τον αριθμό αλλαγών αντίγραφο χρησιμοποιήθηκαν [ ,,,0],13]. Τα ευρήματά μας θα πρέπει να αυξήσει προσοχή στην ανάπτυξη των αναστολέων ΡΙ3Κ ή FGFR1 ως ενιαίο μέσα σε NSCLCs με

PIK3CA

ή

FGFR1

κέρδος γονίδιο, αντίστοιχα. Στην πραγματικότητα, σε παρουσία ταυτόχρονης γενωμικού κέρδος πολλαπλών ογκογόνων ταυτόχρονη αναστολή περισσότερων από ένα στόχο θα μπορούσε να υποχρεωθεί να μειώσει αποτελεσματικά την ανάπτυξη του όγκου. Αυτή η έννοια υποστηρίζεται από την παρατήρηση ότι ΡΙ3Κ αδρανοποίηση με τεχνολογία παρεμβολής RNA, σε κυτταρικές σειρές πνεύμονα SCC με 3q26 ενίσχυση, παράγεται μόνο περιορισμένα αποτελέσματα επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, σε αντίθεση με

SOX2

knockdown [5]. Επιπλέον, μια ενδιαφέρουσα παρατήρηση ήταν η συνύπαρξη του

FGFR1

πραγματική ενίσχυση γονιδίου και

EGFR

μετάλλαξη L858R σε μια γυναίκα, ποτέ καπνιστής ασθενή με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, γεγονός που υποδηλώνει ότι ορισμένα NSCLCs θα μπορούσε να συν-εξαρτάται από την FGFR1 και EGFR για την επιβίωση. Συνολικά, τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι σε μερικούς όγκους η εκτίμηση ενός ενιαίου στόχου φάρμακο μπορεί να μην είναι αρκετή για να προβλέψει την ευαισθησία των ναρκωτικών, αντιμετωπίζοντας την ανάγκη για μια βαθύτερη κατανόηση της βιολογίας NSCLC.

Η μελέτη μας έδειξε καμία στατιστικά σημαντική προγνωστική ρόλο για

FGFR1

ή

BRF2

αριθμού αντιγράφων γονιδίου σε χειρουργικά ασθενείς με NSCLC, όταν χρησιμοποιεί προκαθορισμένα κριτήρια FISH βαθμολόγησης μας, αν και μια τάση για βελτιωμένη επιβίωση για

FGFR1

+ ή

ασθενών BRF2

+ μπορούσε να παρατηρηθεί στο σύνολο του πληθυσμού. Άλλοι ερευνητές έχουν διερευνηθεί πρόσφατα εάν

FGFR1

κέρδος γονίδιο επηρεάζει την επιβίωση σε NSCLC με αμφίβολα αποτελέσματα [13], [26] – [29]. Στην πραγματικότητα, ενώ ορισμένοι συγγραφείς ανέφεραν ένα πλεονέκτημα επιβίωσης για NSCLCs με αυξημένη

FGFR1

αριθμού αντιγράφων γονιδίου [28], μια πρόσφατη κορεατική μελέτη έδειξε ότι

FGFR1

ενίσχυσης υψηλό επίπεδο επηρεάζει αρνητικά την επιβίωση σε χειρουργικά πνεύμονα SCC [27]. Διαφορετικές τεχνικές, μεθόδους βαθμολόγησης, και τα κριτήρια για την επιλογή των ασθενών (δηλ ιστολογία, την εθνικότητα, το στάδιο, περιεγχειρητική θεραπείες) μπορεί να ευθύνονται για τις διαφορές που παρατηρούνται μεταξύ των μελετών, ενθαρρύνοντας την αξιολόγηση της προγνωστικής ρόλο του

FGFR1

αριθμού αντιγράφων γονιδίου σε ομοιόμορφα επιλεγμένες ομάδες.

Εν κατακλείδι, δείξαμε για πρώτη φορά ότι η αύξηση

αριθμό SOX2

αντιγράφου γονιδίου συνδέεται σημαντικά με βελτιωμένη επιβίωση σε χειρουργικά στάδιο Ι και ΙΙ οι ασθενείς με NSCLC, ανεξαρτήτως του ιστολογία . Βρήκαμε επίσης ότι

SOX2

κέρδος γονιδίου σχετίζεται με τον αριθμό αντιγράφων κέρδη των άλλων αγώγιμων ογκογονιδίων, συμπεριλαμβανομένων των

FGFR1

και

PIK3CA

. Τα ευρήματά μας επιβεβαιώνουν την πολυπλοκότητα των NSCLC βιολογίας και να ενθαρρύνει την εξερεύνηση νέων θεραπευτικών συνδυασμών.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τον Μοριακής Παθολογίας /Κυτταρογενετικής κοινόχρηστο πόρο του Πανεπιστημίου του Κολοράντο για την τεχνική βοήθεια.