Αφηρημένο

αυξημένο οξειδωτικό στρες κάτω από υπεργλυκαιμικές συνθήκες, μέσα από την αλληλεπίδραση των AGEs με τους υποδοχείς RAGE και μέσω της ενεργοποίησης της ιντερλευκίνη μεσολάβηση σηματοδότηση μεταγραφή, έχει αναφερθεί σε καρκίνο. Οι πρωτεΐνες τροποποιήσεις διερευνώνται για τους ρόλους τους στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου και αυτοαντισωμάτων απόκριση εναντίον τους κερδίζει το ενδιαφέρον ως ένας ανιχνευτής για την έγκαιρη ανίχνευση της νόσου. Αυτή η μελέτη ανέλυσε τις αλλαγές στο ιστόνης Η1 κατά την τροποποίησή τους από methylglyoxal (MG) και τις επιπτώσεις της στο auto-ανοσοπαθογένειας του καρκίνου. Τροποποιημένο ιστόνης έδειξαν τροποποιήσεις στα αρωματικά κατάλοιπα, άλλαξε μικροπεριβάλλον τυροσίνη, διαμοριακή διασταύρωση και την παραγωγή των AGEs. Έδειξε συγκάλυψης των υδρόφοβων μπαλώματα και υψοχρωμική μετατόπιση της σε συγκεκριμένες φθορισμού ANS. MG επιθετικά οξειδωμένη ιστόνης Η1 που οδηγεί στη συσσώρευση αντιδραστικών καρβονυλίων. Άπω μετρήσεις UV CD έδειξαν δι-καρβονυλίου που προκαλείται ενίσχυση της δομής άλφα και την επαγωγή του φύλλου βήτα διαμόρφωση? και θερμική αποδιάταξη (Tm) μελέτες επιβεβαίωσαν την θερμική σταθερότητα του τροποποιημένου ιστόνης. Ανάλυση FTIR έδειξαν μετατόπιση αμιδίου Ι μπάντα, η παραγωγή μιας ομάδας καρβοξυαιθύλιο και δονήσεις Ν-Οα στο τροποποιημένο ιστόνης. Ανάλυση LCMS επιβεβαίωσε τον σχηματισμό Nε- (καρβοξυαιθυλ) λυσίνη και ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μελέτες αποκάλυψαν την άμορφη σχηματισμό συσσωματώματος. Το τροποποιημένο ιστονών έδειξαν δέσμευση με DNA αλλαγμένη συνεταιρισμού. Τροποποιημένο H1 προκληθέντα αντισώματα υψηλού τίτλου σε κουνέλια και την IgG απομονωμένη μορφή ορούς κουνελιών ανοσοποιημένων με σύνδεσης τροποποιημένης H1 εμφάνισε ειδικές με ανοσογόνο της στην ανάλυση Western Blot. IgG απομονώθηκε από τον ορό ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα, καρκίνο του προστάτη, του καρκίνου του μαστού και του καρκίνου της κεφαλής και του λαιμού περιοχή έδειξε την καλύτερη αναγνώριση των νεο-επιτόπων επί του τροποποιημένου ιστόνης, αντανακλώντας την παρουσία κυκλοφορούντων αυτοαντισωμάτων στον καρκίνο. Από εκθέσεις δείχνουν μια σύνδεση μεταξύ του άξονα AGE-RAGE και καρκινογένεση, γλυκοξείδωση ιστόνης Η1 και την ανοσογονικότητα του ανοίγει τρόπους για την κατανόηση του ρόλου των glycoxidatively κατεστραμμένο πυρηνικό πρωτεϊνών στα καρκινικά

Παράθεση:. Mir AR, Uddin Μ, Khan F, Alam Κ, Αλί Α (2015) δικαρβονυλικές Induced δομικές διαταραχές Κάντε ιστόνης Η1 Εξαιρετικά Ανοσοποιητικό και να δημιουργήσει ένα αυτό-άνοση απόκριση στον Καρκίνο. PLoS ONE 10 (8): e0136197. doi: 10.1371 /journal.pone.0136197

Επιμέλεια: Wei-Guo Zhu, το Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Κέντρο Επιστημών Υγείας, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 18η Απριλίου 2015? Αποδεκτές: 31 Ιουλ 2015? Δημοσιεύθηκε: 28 Αυγούστου 2015

Copyright: © 2015 Mir et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος είναι μία από τις πλέον θανατηφόρες ασθένειες υπεύθυνες για ένα μεγάλο αριθμό των θανάτων σε όλο τον κόσμο και την έγκαιρη διάγνωση του καταλαμβάνει το κεντρικό στάδιο στη μείωση των συνολικών δημόσιων επιπτώσεις της [1-2]. Από αυτή την άποψη, ο εντοπισμός και η αξιολόγηση των αυτοαντισωμάτων έναντι τροποποιημένων πρωτεϊνών σε ασθενείς με καρκίνο κατέχει εξέχουσα θέση στην αναπτυξιακή βιοδείκτη για την έγκαιρη ανίχνευση της νόσου. Οι διάφορες μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις πρωτεϊνών (PTMs) που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των καρκίνων υποτίθεται ότι είναι σημαντικό για διαγνωστικούς ενδιαφέρον τους [3-4].

Λεπτομέρειες PTMs, όπως ο σχηματισμός των τελικών προϊόντων προχωρημένης γλυκοζυλίωσης (AGEs ) με ρόλο στην ανάπτυξη και πρόοδο των καρκίνων επίσης αναδυόμενες [5]. Έχει αναφερθεί ότι cancerscreate ένα ευνοϊκό το περιβάλλον για την παραγωγή των AGEs, λόγω της υψηλότερης πρόσληψης τους γλυκόζης για να εκπληρώσουν τις ενεργειακές τους ανάγκες [6-8]. Τα προϊόντα της γλυκοζυλίωσης σχηματίζονται έχουν τη δυνατότητα να δεσμεύει τα μακροφάγα μέσω του υποδοχέα καθαριστή μακροφάγων και, να μαίνεται και να συμβάλλουν έτσι στην ανάπτυξη του καρκίνου μέσω προ-φλεγμονωδών τους δυνατότητες και αξιοποιώντας την απαίτηση για την ενεργοποίηση της ιντερλευκίνης 6 (IL-6) μεσολάβηση μιτοχονδριακή μετατροπείς σήματος και ενεργοποιητές της μεταγραφής 3 (STAT3) [9-11]. Επιδημιολογικές μαρτυρίες σχετικά με τη μοριακή ετερογένεια των καρκίνων αποκαλύπτουν γονιδιοτοξικές επιπτώσεις της οξείας καρβονυλ στρες, καθιστώντας ασθενείς με διαβήτη επιρρεπείς σε διάφορες μορφές καρκίνου [12]. AGEs που προκαλείται γονοτοξικότητας σε σωληνάριο κύτταρα με πιθανές επιπτώσεις στην ενισχυμένη ανάπτυξη καρκίνου σε προχωρημένο ασθένειες των νεφρών επισημαίνει επίσης προς την ίδια συσχέτιση [13].

Η ανίχνευση των αυτοαντισωμάτων που παράγονται κατά έκτροπα μεταποιημένες πρωτεΐνες στον καρκίνο που είναι ανοσογόνος και διεγείρει την κυτταρική και χυμική ανοσοαπόκριση έχουν οδηγήσει σε μια σειρά από έρευνες με στόχο την ανίχνευση του καρκίνου του αυτοαντιγόνων με τη μορφή της ρευματοειδούς αρθρίτιδας, όπου έχουν αντι IgG αντισώματα έχουν αναφερθεί ως διαγνωστικό βιοδείκτη [14]. Μεταξύ των πρωτεϊνών, μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις των ιστονών, ειδικότερα έχουν ένα σημαντικό ρόλο στην έκφραση του γονιδίου και κατά συνέπεια στην ανάπτυξη και την πρόοδο του καρκίνου, και τις τροποποιήσεις τους εξετάζονται επίσης ως πιθανοί βιοδείκτες της εξέλιξης της νόσου και την πρόγνωση [15-16].

Επιπλέον, μεταξύ των παραγόντων γλυκίωση methylglyoxal (MG), μία ένωση δικαρβονυλίου που δημιουργούνται από διάφορες μεταβολικές οδούς έχει ταυτοποιηθεί ως σημαντική πρόδρομος σε τροποποίηση διαφόρων πρωτεϊνών, με 50.000 φορές morereactivity από εκείνη της γλυκόζης, με αμφότερα ενδοκυττάρια και εξωκυτταρικές πρωτεΐνες, σε φυσιολογικό συγκέντρωση [17], καθώς και σε υψηλότερες συγκεντρώσεις [18] και έχει συσχετισθεί με ένα ρόλο σε μια πληθώρα ασθενειών [9, 19]. μεσολάβηση Methylglyoxal διαταραχές μπορούν να προκαλέσουν δομικές και λειτουργικές αλλαγές στο Η1 πυρηνική πρωτείνη ιστόνης με πιθανές συνέπειες στην ανοσο-βιολογία των διαφόρων τύπων καρκίνου.

Σε αυτή τη μελέτη, ιστόνη Η1 επωάστηκε με αυξανόμενες συγκεντρώσεις methylglyoxal να παράγει AGEs. MG προκαλείται από διαρθρωτικές αλλαγές στην Η1 ιστονών αναλύθηκαν με UV, φθορισμού και CD φασματοσκοπία, ηλεκτροφόρηση πηκτής ακρυλαμιδίου πολυ, μετασχηματισμού Fourier υπέρυθρη φασματοσκοπική ανάλυση (FTIR), προσδιορισμός του περιεχομένου καρβονυλίου, επιφάνεια Υδροφοβικότητα (H

0) εκτίμηση, Υγρή χρωματογραφία μάζας φασματοσκοπία (ανάλυση m /z), μικροσκοπία ηλεκτρονίων σάρωσης και μελετώντας τα αλλαγμένα αλληλεπιδράσεις στη σύνδεση με το DNA. Η πιθανή ανοσογονικότητα των ιθαγενών και των τροποποιημένων ιστόνες διαπιστώθηκε σε κουνέλια. Κυκλοφορούντων αυτοαντισωμάτων που υπάρχουν σε ασθενείς withvarious τύπους καρκίνων αξιολογήθηκαν ως προς τη δέσμευση τους με το φυσικό και τροποποιημένο MG ιστόνης Η1 μέσω άμεσης δέσμευσης και ανταγωνιστικές μελέτες αναστολής σε ELISA και με την δοκιμασία επιβράδυνσης πηκτής.

Υλικά και Μέθοδοι

ιστόνης Η1, 2,4-δινιτροφαινυλ υδραζίνη (ϋΝΡΗ), 1-ανιλινοναφθαλινο-8-σουλφονικό οξύ (ANS), δωδεκυλ θειικό νάτριο (SDS), methylglyoxal, υδροχλωρική αμινογουανιδίνη, διαιθυλενο τριαμινο πεντα-οξικό οξύ (DTPA), νάτριο αζίδιο, βρωμιούχο αιθίδιο, πρωτεΐνη Α-αγαρόζη (2,5 ml προ-συσκευασμένη στήλη), αγαρόζη, αζίδιο νατρίου, Tween-20, σωληνώσεις διάλυσης, αντι-ανθρώπινου και αντι-κουνελιού IgG, συζυγές αλκαλικής φωσφατάσης, φωσφορικό παρα-νιτροφαινύλιο, πλήρες του Freund και ατελή ανοσοενισχυτικά αγοράστηκαν από την Sigma Chemical Company, St. Louis, ΜΟ, USA. Το ακρυλαμίδιο, δισακρυλαμίδιο, υπερθειικό αμμώνιο (APS) και Ν, Ν, Ν ‘, Ν’-τετραμεθυλαιθυλενοδιαμίνη (ΤΕΜΕϋ) ήταν από την Bio-Rad Laboratories, υδροξείδιο του νατρίου USA, αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (δινάτριο άλας), μεθανόλη, παγόμορφο οξικό οξύ, ισο- προπανόλη, χλωριούχο νάτριο, ανθρακικό νάτριο, νιτρώδες νάτριο, νιτρικό άργυρο, ξυλόλιο, υδροξείδιο του νατρίου, φορμαλδεΰδη, όξινο ανθρακικό νάτριο, αιθανόλη, θειικό αμμώνιο και υπερθειικό αμμώνιο ελήφθησαν από Qualigens, Ινδία. Πολυστυρενίου μικροτιτλοδότησης επίπεδου πυθμένα πλάκες και μονάδες ELISA αγοράστηκαν από την Nunc, Δανία. Όλα τα άλλα χημικά /αντιδραστήρια ήταν της υψηλότερης αναλυτικού βαθμού διαθέσιμα.

Προσδιορισμός της Συγκέντρωση Πρωτεΐνης της ιστόνης Η1

συντελεστή μοριακής απόσβεσης θύμου μόσχου ιστόνης Η1 (1280 Μ

-1 εκατοστά

-1) χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η συγκέντρωση της πρωτεΐνης με μέτρηση της απορρόφησης των διαλυμάτων πρωτεΐνης στα 280 nm. Θύμου μόσχου ιστόνης Η1 μοριακού βάρους που χρησιμοποιούνται για τους υπολογισμούς ήταν 21500 Dalton.

Τροποποίηση των Η1 ιστονών από methylglyoxal

Η διαδικασία που δίνεται από τον Roberts

et al

. [20] ακολουθήθηκε. τροποποίηση ιστόνης Η1 διεξήχθη σε φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου 10 mM, ρΗ 7.4 που περιέχει 150 mM NaCl). Ιστόνης Η1 (42 μΜ) δείγματα τροποποιήθηκαν με επώαση με διάφορες συγκεντρώσεις methylglyoxal (2,5, 5, 7,5 και 10 mM) για 24 ώρες στους 37 ° C. Όλα τα δείγματα υποβλήθηκαν σε εκτεταμένη διαπίδυση μετά την επώαση.

φασματοσκοπία απορρόφησης

Το προφίλ απορρόφησης του φυσικού και methylglyoxal τροποποιημένου ιστόνες Η1 καταγράφηκε σε Shimadzu φασματοφωτόμετρο (UV μοντέλο 1700) στην περιοχή μηκών κύματος 250 -500 nm χρησιμοποιώντας κυψελίδα χαλαζία 1 cm μήκος διαδρομής σε σταθερή θερμοκρασία.

μελέτες φθορισμού

φθορισμού φάσματα καταγράφηκαν σε Shimadzu (RF-5301-PC) spectrofluorophotometer στους 25 ± 0,1 ° C σε μια οπτική διαδρομή 1 cm κυττάρων σε πλάτος σχισμής 3 nm.

Εμείς μετριέται ενδογενούς φθορισμού από συναρπαστικές τα δείγματα πρωτεΐνης στα 275 nm και καταγραφή των φασμάτων εκπομπής στο εύρος 300-400 nm.

Απώλεια στην η ένταση φθορισμού (FI) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση:

ηλεκτροφόρηση πηκτώματος θειικού δωδεκυλ-πολυακρυλαμιδίου

Methylglyoxal μεσολάβηση τροποποιήσεις ιστόνης Η1 αναλύθηκαν με τη χρήση μη μετουσιωτικού μη αναγωγικές κάθετη δωδεκυλθειικό νάτριο ηλεκτροφόρηση πολυακρυλαμιδίου γέλης (PAGE) όπως περιγράφεται από τον

Laemilli

, με ελαφρές τροποποιήσεις [21]. 25 μg του φυσικού και του τροποποιημένου δείγματα ιστόνης αναμίχθηκαν με το ένα τέταρτο του όγκου του ρυθμιστικού διαλύματος δείγματος (50% γλυκερόλη, και 0,002% μπλε βρωμοφαινόλης σε 1 Μ Tris HCI, ρΗ 6.8) και εφαρμόστηκε στα φρεάτια 10% SDS γέλη πολυακρυλαμιδίου. Η γέλη έτρεξε σε 80 volts επί 4 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια χρωματίζονται με νιτρικό άργυρο και φωτογραφήθηκε με σύστημα Molecular Imager Gel Doc XR.

Περαιτέρω μελέτες πραγματοποιήθηκαν σε ιστόνης Η1 τροποποιηθεί με 7,5 mM μεθυλογλυοξάλης με φυσική ιστόνης Η1 χρησιμεύει ως έλεγχος

ΗΛΙΚΙΑ Δοκιμασία

AGE-ειδικός φθορισμός μετρήθηκε στα 440 nm μετά από διέγερση στα 370 nm και η αύξηση στην ένταση φθορισμού (FI) υπολογίστηκε από την ακόλουθη εξίσωση.:

Προσδιορισμός της επιφανειακής υδροφοβίας (H

0)

Η επιφάνεια υδροφοβικότητα προσδιορίστηκε με τη φθορίζοντα ανιχνευτή 1-anilinonapthalene- 8-σουλφονικό οξύ (ANS) με φασματοσκοπία φθορισμού ως ανά ένα καθιερωμένο πρωτόκολλο [22]. Η μοριακή αναλογία μεταξύ Η1 ιστόνης και ANS ελήφθη ως 1:10 και φάσματα εκπομπής καταγράφηκαν μεταξύ 400-600 nm. Ποσοστιαία μεταβολή στην ένταση φθορισμού (FI) υπολογίστηκε από την ακόλουθη εξίσωση:

Προσδιορισμός του περιεχομένου δραστικών καρβονυλίου

Η κριτική αξιολόγηση της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες καρβονυλίου χρησιμεύει ως βιοδείκτες της πρωτεΐνης οξειδωτική βλάβη. Αναλύσαμε την περιεκτικότητα σε καρβονύλια των ιθαγενών και methylglyoxal τροποποιημένα Η1 ιστόνης (MG-H1) σύμφωνα με το δημοσιευμένο πρωτόκολλο με ελαφρές τροποποιήσεις [23]. Native και methylglyoxal (7,5 mM) τροποποιημένων δειγμάτων Η1 ιστόνης προστέθηκαν με ίσες ποσότητες 10 mM DNPH σε 2.5 Μ HCl. Τα δείγματα στροβιλίζονται σε τακτά χρονικά διαστήματα και επωάζονται στο σκοτάδι για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτά επωάστηκαν με 10% TCA για 15 λεπτά στους -20 ° C και φυγοκεντρήθηκαν στους 4 ° C για 15 λεπτά σε 9000 g. Τα σφαιρίδια πρωτεΐνης πλύθηκαν τρεις φορές με οξικό παγωμένης αιθανόλης /οξικό αιθυλεστέρα (1: 1) μετά την απόρριψη του υπερκειμένου και φυγοκεντρήθηκε για 2 λεπτά στα 9000 g μεταξύ όλων των πλύσεων. Μετά την τελευταία πλύση, το σφαιρίδιο εναιωρήθηκε σε 1 ml 6 Μ γουανιδίνη-ΗΟΙ και αναμείχθηκαν σωστά. Τα δείγματα πρωτεΐνης διαλύθηκαν μετά πλήρως αφήνοντας στους 37 ° C για 15-30 λεπτά. Μόλις τα σφαιρίδια πρωτεΐνης διαλυθεί πλήρως, η συγκέντρωση του DNPH προσδιορίστηκε με μέτρηση της απορρόφησης στα 360 nm έναντι χλωριούχο γουανιδίνιο (ως τυφλό) με τη χρήση του συντελεστή μοριακής απόσβεσης του 22.000 Μ

-1 εκατοστά

-1. Η απορρόφηση των δειγμάτων που λαμβάνονται σε 276 nm και η πρωτεΐνη καρβονυλίου περιεχόμενο εκφράστηκε ως nmole mg

-1 πρωτεΐνης.

κυκλικού διχρωϊσμού Προσδιορισμός

κυκλικού διχρωϊσμού αξιολογεί τις αλλαγές στην πρωτεΐνη δευτερογενή δομή, αναδίπλωση και δεσμευτικές ιδιότητες τους. Πραγματοποιήσαμε την φασματική ανάλυση Far-UV CD των ιθαγενών της ιστόνης Η1 και MG της τροποποιημένης ομόλογό χρησιμοποιώντας J-815 JASCO φασματοπολαριμέτρου. Το όργανο που συνδέεται με ένα μικροϋπολογιστή με ένα θερμοστατικά ελεγχόμενο κάτοχος κυττάρων που συνδέονται με λουτρό Neslab του RTE 110 νερό με ακρίβεια θερμοκρασίας ± 0,1 ° C. Οι σαρώσεις ελήφθησαν κατά διαστήματα μήκος κύματος 1 nm στους 25 ° C. Όλες οι σαρώσεις καταγράφηκαν σε διαστήματα μήκος κύματος 1 nm. Φάσματα συλλέχθηκαν σε 50 nm λεπτά

-1 σάρωση ταχύτητες, 0,1 nm γήπεδο δεδομένων και χρόνο απόκρισης 2s. Τα φάσματα καταγράφηκαν σε πολύ υπεριώδη περιοχή μεταξύ μηκών κύματος 190 έως 250 nm και η συγκέντρωση πρωτεΐνης ήταν 0,2 mg /ml. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν σε μοριακή ελλειπτικότητα υπολειμματική (θ) (deg /cm

2 /dmol) σε μήκος κύματος λ, με βάση την εξίσωση δίνεται παρακάτω [24] .Where θ

obs είναι η παρατηρούμενη ελλειπτικότητα σε μοίρες,

C

p είναι το μοριακό κλάσμα και

l

είναι το μήκος της διαδρομής των φωτεινών ακτίνων σε εκατοστά. Η περιεκτικότητα σε α-έλικας διαφορετικών δειγμάτων ιστόνης Η1 υπολογίστηκαν από θ τιμές στα 222 nm (MRE

222) χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση.

Θερμική μετουσίωση Μελετών (Tm) από Far-UV CD

Ο θερμο-σταθερότητα της δευτερογενούς δομής του ιστόνης Η1 και MG του να τροποποιηθεί μορφή αναλύθηκε με φασματοσκοπία CD Far-UV στα 222 nm από 20 ° C έως 90 ° C χρησιμοποιώντας μια κλίση θερμοκρασίας 1 ° C /min.

Fourier Transform Infrared φασματοσκοπική ανάλυση-εξασθενημένης ολικής ανάκλασης (FTIR-ATR)

υπερύθρων μετασχηματισμού Fourier φασματοσκοπία (FTIR) πραγματοποιήθηκε για να αναλυθεί η δευτερεύουσα δομή του Η1 ιστόνης και MG τροποποιημένα ιστόνης χρησιμοποιώντας Perkin Elmer FT-IR φασματοφωτόμετρο. Υπέρυθρη φασματική αναγνώσεις καταγράφηκαν μεταξύ 1000 εκατοστά

-1 έως 4000 cm

-1. Μελέτες FTIR διεξήχθησαν σε 10 mg /ml συγκέντρωσης πρωτεΐνης.

φασματοσκοπία μάζας υγρής χρωματογραφίας (ανάλυση m /z)

Το σύστημα HPLC ήταν συνδεδεμένο με ένα φασματόμετρο μάζας χρόνου-πτήσης (LCMS-IT-TOF, Shimadzu) εξοπλισμένο με μία διεπιφάνεια ηλεκτροψεκασμού λειτουργεί σε θετικό τρόπο ιόντος με τάση ορίζεται σε 4,5 kV. Η θερμοκρασία του αερίου turbo ιόντων ήταν 250 ° C. ανάλυση Πλήρης σάρωση MS διεξήχθη στο εύρος αναλογίας /z 0-240 m. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν για MS πρωτεΐνες ιστόνης συγκρίθηκαν με εκείνες του προτύπου CEL [25].

Ηλεκτρονική Μικροσκοπία Σάρωσης (SEM) μελέτες

Οι μικρο-αρχιτεκτονικές λεπτομέρειες της φυσικής και MG τροποποιημένα ιστόνες παρατηρήθηκαν με τη χρήση ηλεκτρονικής σάρωσης. Air αποξηραμένα δείγματα προσροφάται επί μεμβράνης υπερδιήθησης κυτταρίνης. Τα δείγματα επικαλύφθηκαν με χρυσό και τοποθετημένη σε ένα επικαλυμμένο ταινία άνθρακα πλέγματα από ανοξείδωτο χάλυβα που λειτουργούν σε μία επιταχυνόμενη τάση των 15 kV και σε συνθήκες χαμηλής κενό. Οι εικόνες που λήφθηκαν χρησιμοποιώντας μια JSM-6510LV (JEOL ΙΑΠΩΝΙΑ) ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης σε λειτουργία [26]

Αλλαγές στην αλληλεπίδραση με το DNA:. Κυκλικού διχρωϊσμού (CD) ανάλυση

Η αλληλεπίδραση των ιθαγενών και MG τροποποιημένο Η1 ιστόνης με DNA αναλύθηκε με φασματοσκοπία CD. 50 μg /ml του DNA επωάστηκε για 1 ώρα με 0.2 mg /ml της φυσικής Η1 και MG τροποποιημένα Η1 αντίστοιχα σε 0,05 Μ ρυθμιστικό Tris, ρΗ 7,4. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση στις 14.000 rpm για 8 λεπτά και CD φάσματα καταγράφηκαν για το υπερκείμενο. Εγγενής DNA της ίδιας συγκέντρωσης ελήφθη ως έλεγχος. Για να αποφύγετε τυχόν παρεμβολές από πρωτεΐνη, όλες οι μετρήσεις έγιναν σε μεγαλύτερα μήκη κύματος μεταξύ 220 εκατοστά

-1 έως 330 cm

-1.

ανοσολογικές μελέτες και κηλίδωση Western

Τυχαία επελέγησαν φυλής θηλυκά λευκά κουνέλια Νέας Ζηλανδίας βάρους 1-1,5 Kg για immunizationas ανά τον καθιερωμένο πρωτόκολλο του εργαστηρίου μας [27]. Ορός ανοσοσφαιρίνη G (IgG) από τα πειραματόζωα απομονώθηκε με χρωματογραφία συγγένειας σε Α-αγαρόζη στήλη πρωτεΐνη [28] και κηλίδωση Western πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο δίνεται στο τεχνικό φυλλάδιο για σύστημα ECL Plus Western Blotting (Amersham, UK) για να καθοριστεί η εξειδίκευση των αντισωμάτων που παράγονται εναντίον φυσικού και του τροποποιημένου ιστόνες Η1 στα κουνέλια [29].

η συλλογή των δειγμάτων αίματος για κλινικές μελέτες

για την ανίχνευση της παρουσίας αυτοαντισωμάτων εναντίον μητρική και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1, οροί ελήφθησαν από ασθενείς με καρκίνο (n = 83) των διαφορετικών ηλικιακών ομάδων που παρακολουθεί την JN Medical College Hospital, Aligarh, την Ινδία, μετά την ενημερωμένη συγκατάθεση. Τα δείγματα ελήφθησαν μετά από προσεκτική κλινική εξέταση των ασθενών με αποδεδειγμένη ιστοπαθολογική διάγνωση. Ο πληθυσμός περιελάμβανε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (n = 27), του προστάτη (n = 19), του μαστού (n = 22) και ασθενείς που έχουν καρκίνους της κεφαλής και του λαιμού περιοχή (n = 15) .Υπάρχουν ήταν 49 γυναίκες με μέσο όρο ηλικίας 38,5 ± 22,9 χρόνια και 34 άνδρες, 36 ± 18,3 χρόνια μέση ηλικία. Η ηλικία του συνόλου των ασθενών μειώθηκε μεταξύ 15-63 ετών. Δείγματα από υγιή άτομα (n = 40? 20 άρρενες & amp? 20 θηλυκά με μία μέση ηλικία 36 ± 18,6 έτη) χρησίμευσαν ως έλεγχος. Τα δείγματα ορού θερμάνθηκαν στους 56 ° C για 30 λεπτά για αδρανοποίηση του συμπληρώματος πρωτεϊνών και αποθηκεύεται στους -20 ° C με 0,2% αζίδιο του νατρίου. αντισωμάτων ορού δέσμευση αξιολογήθηκε με ELISA.

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη δεόντως εγκριθεί από την Επιτροπή Δεοντολογίας Θεσμικών (1617 /FM /22-01-2013) και Ζωικής Επιτροπή Ηθικής (8289 /OAH /21-02-2013), δεόντως εγγεγραμμένη σύμφωνα με Επιτροπής για τον έλεγχο και την εποπτεία των πειραμάτων σε ζώα (CPCSEA) Ινδία (Εγγραφή αρ. 401 /RO /C /2001 /CPCSEA), οε JN Medical College, Σχολή Ιατρική, AMU.

τα δείγματα αίματος συλλέχθηκαν από τους ασθενείς και σε υγιή άτομα μετά από ενημέρωση προφορική συγκατάθεση. Η λειτουργία της συναίνεσης είχε δεόντως εγκριθεί από την επιτροπή δεοντολογίας. Μια σωστή καταγραφή όλων των ασθενών και υγιών ατόμων έχει διατηρηθεί.

Η απομόνωση των IgG με χρωματογραφία συγγένειας

Ορός ανοσοσφαιρίνης G (IgG) απομονώθηκε με χρωματογραφία συγγένειας σε πρωτεΐνη Α-αγαρόζη στήλη [ ,,,0],28]. Ορός (0,5 ml) αραιώνεται με ίσο όγκο PBS (ρΗ 7.4) εφαρμόστηκε στην κορυφή της στήλης προ-εξισορροπημένη με το ίδιο ρυθμιστικό διάλυμα. Η διαμπερής πλύση ανακυκλώθηκε 2-3 φορές και μη δεσμευμένο υλικό απομακρύνθηκε με εκτεταμένη πλύση με PBS. Το δεσμευμένο IgG εκλούστηκε με 0,58% οξικό οξύ σε 0.85% χλωριούχο νάτριο και συλλέγεται σε ένα σωλήνα που περιέχει 1,0 ml 1,0 Μ Tris-HCl (ρΗ 8.5). 3 ml κλάσματα συλλέχθηκαν και αναγνώστηκε στα 280 nm. Η συγκέντρωση IgG προσδιορίστηκε λαμβάνοντας υπόψη 1.4 OD280 = 1,0 mg IgG /ml. Το απομονωμένο IgG υποβλήθηκε σε διαπίδυση έναντι PBS και φυλάχθηκαν στους -20 ° C με 0,1% αζίδιο του νατρίου.

Άμεση ELISA πρόσδεσης

ELISA διεξήχθη σε επίπεδου πυθμένα πλάκες πολυστερίνη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27] . Πολυστερίνη Polysorp φρεατίων μικροτιτλοδότησης αντίστοιχα επικαλύπτονται με 100 μΐ φυσικού ή methylglyoxal τροποποιημένες πρωτεΐνες (10 μg /ml). Η απορρόφηση (Α) του κάθε φρεάτιο παρακολουθήθηκε στα 410 nm σε έναν αυτόματο αναγνώστη μικροπλάκας. Κάθε δείγμα εις διπλούν και τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέσος όρος των δύο μετρήσεων.

Ανταγωνισμός ELISA

Η αντιγονική ειδικότητα των αντισωμάτων προσδιορίστηκε με ELISA ανταγωνισμού [27] .Varying ποσότητες αναστολέων (0-20 μg /ml) αναμείχθηκαν με μια σταθερή ποσότητα του καθαρισμένου με συγγένεια IgG και το μίγμα επωάστηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες και επί μία νύκτα στους 4 ° C. Το ανοσοποιητικό σύμπλοκο που σχηματίζεται έτσι επικαλύφθηκε στα φρεάτια στη θέση του IgG. Τα υπόλοιπα βήματα ήταν ίδια όπως στο άμεσο προσδιορισμό ELISA πρόσδεσης. Η εκατοστιαία αναστολή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο:

δοκιμασία

μετατόπισης ζώνης

Για την οπτική ανίχνευση των αντισωμάτων σύνδεσης αντιγόνου και το σχηματισμό ανοσοσυμπλόκου, δοκιμασία επιβράδυνσης πηκτής διεξήχθη [30]. Τα ανοσοσύμπλοκα παρασκευάζονται με επώαση σταθεράς ποσότητας του φυσικού και MG-τροποποιημένα ιστόνες με ποικίλες ποσότητες καθαρισμένου με συγγένεια άνοσης IgG από ορούς ασθενών με καρκίνο σε TBS για 2 ώρες στους 37 ° C και όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Ένα τέταρτο της χρωστικής δείγματος προστέθηκε στο μίγμα και ηλεκτροφορήθηκαν σε 10% SDS-PAGE για 4 ώρες σε 80 V. Τα πήγματα οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας χρώση νιτρικού αργύρου [21].

στατιστική ανάλυση των αποτελεσμάτων

Όλες οι μετρήσεις έγιναν εις διπλούν. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση ± δ.ϋ. Ένα δύο ουρά

σ

τιμή χαμηλότερη από 0,05 λήφθηκε για να είναι σημαντική.

Αποτελέσματα

φασματοσκοπία απορρόφησης

φάσμα απορρόφησης υπεριώδους των ιθαγενών της ιστόνης Η1 έδειξε μια χαρακτηριστική κορυφή για πρωτεΐνες σε 277 nm. Η ιστόνη Η1 τροποποιηθεί με 2,5, 5, 7,5 και 10 mM του methylglyoxal εμφάνισε 67,87%, 90,16%, 94,54% και 96,64% hyperchromicities στις φασματικές κορυφές αντίστοιχα. Ένα εξόγκωμα σαν κορυφή κατέστη επείγουσα στα 340 nm σε τροποποιημένων πρωτεϊνών στις υψηλότερες συγκεντρώσεις του MG. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 1.

Η

ενδογενούς φθορισμού

Τα μέγιστα φθορισμού για μητρική ιστόνη Η1 λήφθηκε στα 305 nm-ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα της εκπομπής τυροσίνης. Η επώαση του ιστόνης Η1 με αυξανόμενες συγκεντρώσεις methylglyoxal οδήγησαν σε σημαντική μείωση στην ένταση φθορισμού. Η 2,5, 5, 7,5 και 10 mM methylglyoxal τροποποιημένο Η1 ιστόνης παρουσίασαν μείωση 31,31%, 49,68%, 81,78% και 95,31% σε ενδογενή ένταση φθορισμού όταν συγκρίνονται με την φυσική Η1 ιστόνης. Η αυξανόμενη συγκέντρωση των μεθυλογλυοξάλη στα δείγματα πρωτεΐνης οδήγησε σε μια μετατόπιση προς το ερυθρό 3, 6, 8 και 10 nm σε μήκος κύματος εκπομπής. Περαιτέρω, επιπλέον καμπούρα σαν κορυφές παρατηρήθηκαν στην τροποποιημένη πρωτεΐνη στα 440 nm. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 2.

Η

ηλεκτροφορητική ανάλυση

Αποτελέσματα PAGE έδειξε αυξημένο ηλεκτροφορητική κινητικότητα στα τροποποιημένα δείγματα πρωτεΐνης σε σύγκριση προς τη φυσική ιστόνης. Οι τροποποιημένες πρωτεΐνες παρουσίασαν αυξημένη ζώνη που εκτείνεται έναντι του φυσικού ιστόνης. Ένα επιπλέον ζώνη εμφανίστηκε επίσης σε τροποποιημένων πρωτεϊνών σε ένα μοριακό βάρος υψηλότερο από εκείνο της φυσικής ιστόνης Η1. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 3.

ανάλυση PAGE του φυσικού και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1: 25 μg από κάθε μητρική ιστόνης Η1 και 2,5, 5, 7,5 και 10 mM methylglyoxal τροποποιημένα αντίστοιχά φορτώθηκαν στα φρεάτια 10 τζελ% πολυακρυλαμιδίου υπό μη συνθήκες μετουσίωσης (λωρίδα 1-5), λωρίδα 6 δείχνει το δείκτη μοριακού βάρους.

η

ΗΛΙΚΙΑ δοκιμασία

Σύμφωνα με τις ίδιες συνθήκες, η μητρική της ιστόνης Η1 δεν έδωσε καμία αξιόλογη ΗΛΙΚΙΑ φθορισμός. Οι παρατηρούμενες εντάσεις φθορισμού για τη μητρική και την τροποποιημένη ιστόνης Η1 ήταν 7.886 στα 430 nm και 39.21 στα 446 nm, αντίστοιχα. MG-H1 παρουσίασαν αύξηση 79,88% στην ένταση φθορισμού AGE. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχήμα 4.

Η

Surface υδροφοβικότητα (H

0)

Μια σημαντική μείωση στην ένταση φθορισμού ANS σε MG τροποποιημένο H1 σε σύγκριση προς φυσική ιστόνης ήταν παρατηρηθεί. Native και MG τροποποιημένα Η1 έδειξε εντάσεις φθορισμού των 26,12 στα 279 nm και 5.21 στα 276 nm που αντιστοιχεί σε μείωση της έντασης φθορισμού ANS κατά 79,97% στην περίπτωση της τροποποιημένης ιστόνης. Μία κυανή μετατόπιση από 3 nm παρατηρήθηκε επίσης στην περίπτωση της τροποποιημένης πρωτεΐνης. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 5.

Η

Reactive καρβονυλ περιεχόμενο

Η φασματοφωτομετρική ποσοτικοποίηση των αντιδραστικών πρωτεΐνη δεσμεύεται καρβονύλια μετά από αντίδραση με 2,4-δινιτροφαινυλυδραζίνη (ϋΝΡΗ) έδειξε τιμές απορρόφησης των 0.055 και 0,624 για το φυσικό και στο τροποποιημένο ιστόνης Η1 αντίστοιχα στα 370 nm. Η περιεκτικότητα σε καρβονύλιο ήταν 2,47 nmole /mg της πρωτεΐνης στη μητρική ιστόνης Η1 και 28,36 nmole /mg της πρωτεΐνης στην περίπτωση των τροποποιημένων methylglyoxal ιστόνης Η1 παρουσιάζοντας 11,48 φορές αύξηση των αντιδραστικών καρβονυλίων. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 6.

Η

Circular διχρωϊσμού φάσματα

CD φασματική ανάλυση έδειξε ορατή διαφορά σε μοριακή ελλειπτικότητας του φυσικού και του τροποποιημένου ιστόνης σε τρία μήκη κύματος δηλαδή., 190 nm, 201 nm και 222 nm. Παρατηρήσαμε μια αύξηση στην θετική ελλειπτικότητα σε 190 nm, μία μείωση στην αρνητική ελλειπτικότητα στα 200 nm και μία αύξηση στην αρνητική ελλειπτικότητα στα 222 nm. Η παρατηρούμενη ελλειπτικότητα σε 190 nm για τη μητρική της ιστόνης και methylglyoxal τροποποιημένα H1 ήταν 0.909 ΟΕΙΠ και 1.249 MDEG αντίστοιχα. Η αρνητική ελλειπτικότητα λήφθηκε στα 200 nm και 222 nm. Στα 200 nm CD (θ) τιμές για τη μητρική της ιστόνης και methylglyoxal τροποποιημένα H1 ήταν – 33.615 ΟΕΙΠ και – 33.132 ΟΕΙΠ και στα 222 nm οι τιμές ήταν -8,39 και -10,2 αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 7.

Η

Θερμική μετουσίωση Μελετών (Tm) από Far-UV CD

Οι αλλαγές στα δευτερεύοντα δομικά χαρακτηριστικά που λαμβάνονται μέσω μελετών θερμοκρασία τήξης ακολουθώντας το ξεδίπλωμα μοτίβα των πρωτεϊνών μέσω της απώλειας σε ελλειπτικότητας σε 222 nm, έδειξε νωρίς άνοιγμα έλικα στην φυσική ιστόνης σε σύγκριση με το MG τροποποιημένο ιστόνης. Η θερμοκρασία τήξης μεσαίο σημείο (Tm) του φυσικού και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1 βγήκε να είναι 53 ° C και 64 ° C αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα δίνονται στην Εικόνα 8.

Η

FTIR-ATR φασματοσκοπική ανάλυση

Αποτελέσματα FTIR της αυτοφυούς ιστόνης Η1 έδειξε δονητική τέντωμα του C = O, ένα χαρακτηριστικό αμιδίου Ι ζώνη στα 1635 cm

-1. Ωστόσο, μετά την τροποποίηση, η μπάντα αμιδίου πήρα μετατοπίζεται προς 1.640 εκατοστά

-1. Αν και εμφανίστηκε κανένα βαθιά ζώνες στην περιοχή αμιδίου II, αλλά η διαφορά του ποσοστού μετάδοσης στην περιοχή αυτή ήταν ορατή. Εμείς καταγράφεται μικρότερη διαπερατότητα για τη μητρική της ιστόνης σε σύγκριση με τροποποιημένη μορφή του. Επιπλέον, παρατηρήσαμε μια πρόσθετη ομάδα στην τροποποιημένη πρωτεΐνη η οποία έδειξε μία εκτείνεται ζώνη στα 1731 cm

-1. Αυτό το τέντωμα δεν παρατηρήθηκε στην φυσική μορφή. Η τροποποιημένη ιστόνης εμφάνισε επίσης μια πρόσθετη ζώνη στα 1066 cm

-1, η οποία ήταν απούσα στο φυσική μορφή σε αυτή την περιοχή. Μεγάλες ζώνες παρατηρήθηκαν στην περιοχή με μήκη κύματος μεταξύ 3.000 εκατοστά

-1 έως 3500 cm

-1. Αυτή η περιοχή ήταν ευρύτερη για τροποποιημένα ιστόνης ό, τι για τη φυσική πρωτεΐνη. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 9.

Η

Υγρή χρωματογραφία φασματομετρία μάζας

Τα φάσματα μάζας των τυποποιημένων CEL λήφθηκε για τη διερεύνηση της παρουσίας και CEL σύγκρουσης προκαλούμενη αποσύνθεση μορφές της στην φυσική και τροποποιήθηκε ιστόνες. Η βασική κορυφή και δύο φάσματα μάζας των προϊόντων ιόντων του προτύπου CEL παρατηρήθηκαν στα m /z 219.0145 τιμές, 84.1024 και 130.1032 αντίστοιχα (Σχήμα 10Α). Καμία από αυτές τις κορυφές, όπως παρατηρείται στο πρότυπο CEL βρέθηκε σε περίπτωση φυσικής ιστόνης Η1 (σχήμα 10Β)? το τροποποιημένο Η1 ιστόνης έδωσε το πιο σημαντικό προϊόν ιόν σε m /z του 84,1086. Οι λιγότερο έντονη κορυφές παρατηρήθηκαν στα m /z 130.1208 και 219.1432 (Σχήμα 10C).

Η

Μικροσκοπία Σάρωσης Ηλεκτρονίου (SEM)

Ηλεκτρονική Μικροσκοπία Σάρωσης έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για την αποκάλυψη υψηλή -Ανάλυση δομικές λεπτομέρειες των πρωτεϊνών. Όπως παρατηρήθηκε στις εικόνες SEM, ο σχηματισμός συσσωματωμάτων είναι σαφές λόγω της τροποποίησης της ιστόνης Η1 με MG (Σχήμα 11Α). Native ιστονών φαίνεται αρκετά διαφορετική από την τροποποιημένη της μορφή (Σχήμα 11Β).

Η

Αποτελέσματα CD των αλληλεπιδράσεων DNA-πρωτεΐνης

Η εγκύκλιος ανάλυση διχροϊκό των αλληλεπιδράσεων μεταξύ της ιστόνης Η1 και DNA έδειξε αξιοσημείωτη παραλλαγές σε φασματικές ιδιότητες της φυσικής ιστόνης, τροποποιημένη μορφή της και το φυσικό DNA. Native DNA έδειξε μια θετική ζώνη στα 277 nm (θ = 8.542) και μια αρνητική ζώνη στα 243nm (θ = 5.851). Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ ιστόνης Η1 με DNA οδηγεί σε μείωση των θετικών κορυφή στα 276 (θ = 4.9123) και μια αύξηση της αρνητικής κορυφής στα 245 (θ = 5.092). Τα αποτελέσματα της MG τροποποιημένων ιστόνης και DNA ήταν διαφορετικές από το DNA και H1-DNA καθώς έδωσε ενδιάμεσο κορυφή στα 277 (θ = 5.882) και η αύξηση του αρνητικού κορυφή στα 243 (θ = 4.394), αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ 12.

Η

Western blotting μελέτες

25 μg του φυσικού και MG-H1 εμφανίστηκε ως σαφείς ζώνες επί γέλης πολυακρυλαμιδίου μετά από χρώση αργύρου. Η τροποποιημένη πρωτεΐνη έδειξε ζώνη τέντωμα, σχηματισμός υψηλότερων οντότητα μοριακού βάρους και μια αυξημένη φωτεινότητα σε σύγκριση με το φυσικό αντίστοιχο. Σε imunoblot ανάλυση, αντισώματα που επάγονται έναντι MG-H1 έδειξε ειδική σύνδεση για το ανοσογόνο με μικρή αναγνώριση για τα επίτοπα επί του μη τροποποιημένου ιστόνης Η1. Αυτό επαναλαμβάνει τα αποτελέσματά μας ELSIA. Το αποτέλεσμα δίνεται στο Σχ 13.

Α1 και Α2 representSDS PAGE της φυσικής και MG-H1 αντίστοιχα. Β1 και Β2 είναι τα ανοσοστυπώματα που απεικονίζουν σύνδεση του αντι-MG-H1 αντισώματα προς φυσική H1 και MG-Η1, αντίστοιχα.

Η

Η σύνδεση των αυτοαντισωμάτων στον ορό σε ασθενείς με καρκίνο με την φυσική Η1 και MG τροποποιημένη ιστόνη Η1

σημαντικά υψηλότερο ποσοστό των αυτοαντισωμάτων ορού από όλους τους τύπους καρκίνου έδειξαν αυξημένη πρόσδεση με μεθυλογλυοξάλης τροποποιημένο H1 σε σύγκριση με την φυσική μορφή στα πειράματα σύνδεσης απευθείας ELISA. Από το σύνολο των δειγμάτων 83 ορού, 54 δείγματα (65,06%) παρουσίασαν σημαντικά υψηλότερη σύνδεση με το MG-H1as εναντίον μητρική ομόλογό του, δείχνοντας έτσι την καλύτερη αναγνώριση για την τροποποιημένη Η1 ιστονών. Αυτές περιλαμβάνουν 19 δείγματα καρκίνου του πνεύμονα, 12 δείγματα καρκίνου του προστάτη, 15 δείγματα καρκίνου του μαστού και 8 δείγματα ofhead και τραχήλου. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 14A-14D.

(Α) Δέσμευση αυτοαντισωμάτων στον ορό σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (οροί αρ. 1-27) με την φυσική (□) και MG τροποποιημένα Η1 ιστόνης (■). Κανονική ανθρώπινοι οροί (NHS) χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Το ιστόγραμμα δείχνει σημαίνουν τιμές απορρόφησης. (Β) Η σύνδεση του αυτοαντισωμάτων στον ορό σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη (οροί αρ. 28-46) στη φυσική (□) και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1 (■). Κανονική ανθρώπινοι οροί (NHS) χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Το ιστόγραμμα δείχνει σημαίνουν τιμές απορρόφησης. (C) Δέσμευση αυτοαντισωμάτων στον ορό σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού (οροί αρ. 47-68) στη φυσική (□) και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1 (■). Κανονική ανθρώπινοι οροί (NHS) χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Το ιστόγραμμα δείχνει σημαίνουν τιμές απορρόφησης. (D) Δέσμευση αυτοαντισωμάτων ορού σε κεφάλι και το λαιμό ασθενών με καρκίνο (οροί αρ. 69-83) στη φυσική (□) και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1 (■). Κανονική ανθρώπινοι οροί (NHS) χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Το ιστόγραμμα δείχνει τις μέσες τιμές απορρόφησης.

Η

Η πρόσδεση της IgG από ασθενείς με καρκίνο στη γενέτειρά Η1 και MG τροποποιημένα ιστόνης Η1

Για να αξιολογηθεί περαιτέρω η λεπτή ειδικότητα των αυτοαντισωμάτων σε ασθενείς με καρκίνο, IgG ήταν απομονώθηκαν από δείγματα ορού που δείχνει υψηλότερη δέσμευση προς MG τροποποιημένα ιστόνης Η1 και αξιολογούνται από την αναστολή ELISA. IgG αναμίχθηκε με διάφορες ποσότητες του φυσικού και MG-H1 (0-20 μg /ml) και επωάστηκαν για 2 ώρες στους 37 ° C και όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Η παρατηρούμενη αναστολή αντίσωμα fornative Η1 και ιστόνες MG-H1 ήταν στην περιοχή από 19,4% -36,2% και 49,2% -76,5% αντίστοιχα.Η σημαίνει επί τοις εκατό αναστολή από γηγενείς Η1 στη δέσμευση των αυτοαντισωμάτων από πνεύμονα, του προστάτη, του μαστού, και το κεφάλι