Αφηρημένο

Ιστορικό

Περιφέρεια χρωμοσωμάτων Συντήρηση 1 (CRM1) είναι μια πυρηνική εξαγωγέα και αναστολέας της έχει αντικαρκινική δραστικότητα σε διάφορες μορφές καρκίνου. Αυτή η μελέτη αξιολόγησε τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα του νέου αναστολέα CRM1 KPT-185 σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC).

Μέθοδοι

κυτταρικές σειρές NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με KPT-185 για να αξιολογηθούν οι αλλαγές στη βιωσιμότητα κυττάρου, του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση, και η έκφραση πρωτεΐνης. NOD-SCID ποντίκια που έφεραν ξενομοσχεύματα κυττάρων NSCLC από του στόματος θεραπεία με KPT-276, ένα κλινικό ανάλογο της KPT-185, για να εξετάσει την αποτελεσματικότητα και τις παρενέργειες των KPT-276 in vivo.

Αποτελέσματα

KPT-185 μείωσε σημαντικά τη βιωσιμότητα των έξι κυτταρικών γραμμών NSCLC με χρονο και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, συμπεριλαμβανομένων αναστολέα κινάσης υποδοχέα τυροσίνης του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR-ΤΚΙ) ανθεκτικών H1975 και κυτταρικές σειρές H1650GR. Επιπλέον, KPT-185 που επάγεται αυτά NSCLC κύτταρα να συλλάβει σε φάση G1 του κυτταρικού κύκλου και προκάλεσε απόπτωση με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. επεξεργασία KPT-185 μείωσε επίσης τα επίπεδα της πρωτεΐνης CRM1 σε έξι κυτταρικές σειρές NSCLC, και η μείωση θα μπορούσε να καταργηθεί πλήρως από το βορτεζομίμπης αναστολέα πρωτεασώματος. KPT-185 ενεργοποιημένα κασπάσης 3, 8, και 9, αλλά ανέστειλε την έκφραση της survivin σε κύτταρα NSCLC. Σε ένα μοντέλο κυττάρων ξενομοσχεύματος H1975 του ποντικιού, η ανάπτυξη του όγκου ανεστάλη σημαντικά από του στόματος χορήγηση KPT-276, και δεν υπήρχε απώλεια σωματικού βάρους σημαντικά το ποντίκι ή άλλες παρενέργειες.

Συμπεράσματα

Η τρέχουσα μελέτη καταδείξει τα αποτελέσματα αντι-όγκου των KPT-185 στα κύτταρα NSCLC, συμπεριλαμβανομένων EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτική κυτταρικές σειρές NSCLC. Περαιτέρω μελέτες θα αξιολογήσει δράση κατά των όγκων KPT-185 σε μια κλινική δοκιμή σε ασθενείς με NSCLC

Παράθεση:. Wang S, Han X, Wang J, Yao J, Shi Υ (2014) Αντικαρκινική Συνέπειες της Μυθιστόρημα χρωμόσωμα Περιφέρεια Συντήρηση 1 (CRM1) Αναστολέας για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων in vitro και στο ποντίκι Ξενομοσχεύματα όγκου. PLoS ONE 9 (3): e89848. doi: 10.1371 /journal.pone.0089848

Επιμέλεια: Jingwu Xie, Indiana University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 του Αύγ του 2013? Αποδεκτές: 28 Ιαν 2014? Δημοσιεύθηκε: 4 του Μάρτη, 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτοί οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνου

πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις. ο κόσμος, αντιπροσωπεύοντας το 1,3 εκατομμύρια σε όλο τον κόσμο θάνατοι σχετίζονται με τον καρκίνο κάθε χρόνο [1]. Ιστολογικά, περίπου το 85% των ασθενών με καρκίνους του πνεύμονα είναι μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) [2], οι περισσότεροι εκ των οποίων έχουν διαγνωστεί σε προχωρημένα στάδια της νόσου και μη επιλέξιμες για θεραπευτική επέμβαση. Ανακουφιστική θεραπεία περιλαμβάνει χημειοθεραπεία και ραδιοθεραπεία και πιο πρόσφατα, η θεραπεία στόχευσης, όπως ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας αναστολείς κινάσης υποδοχέα τυροσίνης (EGFR-ΤΚΙ) gefitinib, erlotinib, και icotinib. Αυτές οι θεραπείες έχουν βελτιώσει την επιβίωση των ασθενών με NSCLC [3]? Ωστόσο, οι ασθενείς που ανταποκρίνονται αρχικά σε θεραπείες EGFR-ΤΚΙ τελικά την ανάπτυξη επίκτητης αντοχής. Έτσι, νέοι θεραπευτικοί παράγοντες με χαμηλή τοξικότητα και καλύτερα αποτελέσματα χρειάζονται επειγόντως για τους ασθενείς με NSCLC.

Κατά τη διάρκεια της ανθρώπινης καρκινογένεση ή την πρόοδο του καρκίνου, τα κακοήθη κύτταρα αποκτούν την ικανότητα να εξάγουν κλειδί πυρηνικές πρωτεΐνες που μπορούν να επηρεάσουν την αποτελεσματικότητα της θεραπείας. Αυτές οι πρωτεΐνες περιλαμβάνουν καταστολείς όγκων και ρυθμιστές της κυτταρικής απόπτωσης, πυρηνικό εντοπισμό της οποίας απαιτείται για τη σωστή λειτουργία τους [4]. Χρωμόσωμα συντήρηση περιοχή 1 πρωτεΐνη (CRM1 ή ονομάζεται XPO1) είναι μέλος του importin β υπεροικογένεια των πυρηνικών υποδοχέων των εξαγωγών (karyopherins). Επιπλέον, CRM1 είναι ο κύριος μεσολαβητής της πυρηνικής εξαγωγής, μπορούν να αλληλεπιδράσουν με σήματα πλούσιες σε λευκίνη πυρηνικής εξαγωγής (Νες), και πρωτεΐνες μεταφοράς μέσω συγκροτημάτων πυρηνικού πόρου στο κυτταρόπλασμα [5] – [7], συμπεριλαμβανομένου του EGFR, p53 και πυρηνικού παράγοντα της κάπα ενισχυτή γονίδιο φως πολυπεπτιδίου σε Β-κύτταρα αναστολέα, άλφα (ΙκΒ-α) [8] – [10]. Αν η δραστηριότητα του CRM1 μεσολάβηση εξαγωγή είναι αποκλεισμένη, η λειτουργία της πρωτεΐνης μπορεί να μεταβληθεί. Ως εκ τούτου, οι αναστολείς CRM1 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως μια νέα κατηγορία στόχευσης θεραπεία κατά του καρκίνου του ανθρώπου. Πράγματι, μέχρι σήμερα, πολλά μικρά μόριο αναστολείς CRM1 έχουν αναπτυχθεί και με υψηλή δραστικότητα κατά του όγκου, όπως leptomycin Β (ΕΜΒ), ratjadone, goniothalamin, Ν-azolylacrylates, και CBS9106 [11] – [15]. Αυτά τα μικρά μόρια αναστολείς ομοιοπολικά συνδέονται προς το υπόλειμμα κυστεϊνης (Cys528) στην NES-αύλακα σύνδεσης του CRM1 πρωτεΐνη [16] – [17]. Μια κλινική δοκιμή Φάσης Ι της LMB διεξήχθη, αλλά LMB δεν συνιστάται για περαιτέρω κλινική ανάπτυξη λόγω της υψηλής τοξικότητας και την έλλειψη αποτελεσματικότητας [18]. Στη συνέχεια, ένας αριθμός αναλόγων LMB έχουν αναφερθεί με μειωμένη τοξικότητα [19].

Πιο πρόσφατα, μια άλλη κατηγορία των αναστολέων CRM1 έχει ταυτοποιηθεί, συμπεριλαμβανομένων KPT-185 και KPT-276 (Karyopharm Therapeutics Inc .; Βοστόνη , MA, USA). Αυτοί οι αναστολείς είναι επιλεκτικά αναστολείς της πυρηνικής εξαγωγής (ημιτονοειδής), και έχουν έδειξε να είναι αποτελεσματική για τη θεραπεία ορισμένων τύπων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παγκρέατος, οξεία μυελοειδή λευχαιμία, λέμφωμα κυττάρων μανδύα, με αποτέλεσμα σημαντική αναστολή της ανάπτυξης και την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων χωρίς σοβαρές τοξικότητα [20] – [22]. Εν τω μεταξύ, τα επίπεδα της πρωτεΐνης CRM1 αυξημένα σε καρκινικούς ιστούς πνεύμονα σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Έτσι, σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα αυτών των νέων φαρμάκων όπως οι αναστολείς CRM1 (δηλαδή, KPT-185 και KPT-276) σε κύτταρα NSCLC

in vitro

και

in vivo

να ελπίζουμε ότι παρέχει νέα εικόνα αυτών των φαρμάκων για τη μελλοντική θεραπεία στόχος του NSCLC.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι κυτταρικές σειρές και τα αντιδραστήρια

Το ανθρώπινο NSCLC κυτταρικές σειρές Α549, H1650, H1975 , H2228, και HCC827 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). Η κυτταρική σειρά H1650 Gefitinib ανθεκτική (H1650GR) ιδρύθηκε το εργαστήριο μας, εκθέτοντας το κύτταρο σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις του gefitinib για 10 μήνες. Η προκύπτουσα κυτταρική γραμμή H1650GR ήταν ανθεκτικό στο gefitinib

in vitro

(IC

50 & gt? 30 μΜ). Οι κυτταρικές γραμμές NSCLC καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640, συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), 100 U /mL πενικιλλίνη, και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA).

KPT-185 και KPT-276 δόθηκαν από Karyopharm Therapeutics. Bortezomib λήφθηκε από Σέλεκ Chemicals LLC (Houston, TX, USA). Ο αναστολέας παν-κασπάσης Ζ-VAD-FMK αγοράστηκε από την Calbiochem (San Diego, CA, USA). Αντισώματα έναντι EGFR, GAPDH, που διασπάται-κασπάση-3, κασπάση-8, διασπάται-κασπάση-9, πολυ- (ΑΟΡ-ριβόζη) πολυμεράσης (PARP), survivin, και δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση (HRP) έναντι IgG κουνελιού και IgG ποντικού ελήφθησαν από την Cell Signaling Technology (Danvers, ΜΑ, USA). Επιπλέον, αντισώματα έναντι CRM1, πυρηνικό παράγοντα κάπα ελαφριά γονιδίου του πολυπεπτιδίου ενισχυτής των κυττάρων Β (NF-κΒ), και ΙκΒ-α λήφθηκαν από Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Όλα τα άλλα αντιδραστήρια και χημικά ελήφθησαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, USA).

Κυτταρική βιωσιμότητα δοκιμασία

κύτταρα NSCLC απλώθηκαν σε μια πυκνότητα 6000 κυττάρων ανά φρεάτιο σε ένα πλάκα 96 φρεατίων και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα. Την επόμενη ημέρα, το μέσο ανάπτυξης αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο που περιέχει σειριακές αραιώσεις KPT-185 (έως 10 μΜ) ή διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) ως μάρτυρα. Εις διπλούν πλάκες, τα κύτταρα NSCLC εκτέθηκαν σε KPT-185, gefitinib, ή KPT-185 συν gefitinib. Αφού τα κύτταρα αναπτύχθηκαν για μέχρι τρεις ημέρες, η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα τίτλο Κυττάρου 96® Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού Μη-ραδιενεργού κυττάρου Υδατικό (Promega, Fitchburg, WI, USA). Το αντιδραστήριο προστέθηκε στα κύτταρα και επωάστηκαν περαιτέρω για 3 ώρες. Η απορρόφηση μετρήθηκε κατόπιν σε 490 nm με έναν αναγνώστη μικρο-πλάκας (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Τα δεδομένα συνοψίζονται ως ποσοστό των μη επεξεργασμένων κυττάρων (έλεγχος DMSO).

κυτταρομετρίας ροής του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης

δοκιμασία

Μετά την αγωγή κυττάρων NSCLC με KPT-185 για 48 ώρες, αυτά χρωματίστηκαν με προπίδιο ιωδιούχο ρυθμιστικό (ΡΙ) χρώση (Cayman Chemical, Αηη Arbor, ΜΙ, USA) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια μετρήθηκε με FACS κυτταρομετρία (BD Biosciences, NJ, USA). Τα ιστογράμματα DNA αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό ανάλυσης κυτταρικού κύκλου ModFit LT (Επαλήθευση Software House).

κυτταρικής απόπτωσης ανιχνεύθηκε με Alexa Fluor 488 αννεξίνης V /Dead κυτταρικής απόπτωσης Kit (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ. Εν συντομία, μετά την κατεργασία με KPT-185 για 48 ώρες, τα κύτταρα τόσο από την αναστολή και την προσκόλληση συλλέχθηκαν και συν-επωάστηκαν με Αννεξίνη V-ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) και ΡΙ, στη συνέχεια μετρήθηκε με κυτομετρία FACS (BD Biosciences). Το ποσοστό των αννεξίνης V και αρνητικά κύτταρα ΡΙ προσδιορίσθηκε με βάση τα διαγράμματα στιγμών FITC και ΡΙ.

απομόνωση RNA και qRT-PCR

Το συνολικό κυτταρικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το RNeasy Mini Kit ( Qiagen, Hilden, NRW, Γερμανία) και, στη συνέχεια, αντίστροφη μεταγραφή σε cDNA με τη χρήση του εκθέτη III σύστημα πρώτου κλώνου σύνθεση για RT-PCR (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα cDNA ενισχύθηκαν περαιτέρω με πραγματικού χρόνου PCR με τα ακόλουθα συνθετικά εκκινητές (Invitrogen): CRM1, 5′-GCCTCACTGAGATTGCTGGT-3 ‘και 5′-TGAAGGGCCTCCATAAGAGT-3′? και αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH), 5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3 ‘και 5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’. Οι συνθήκες της PCR σε ένα μίγμα αντίδρασης 20 μL που περιείχαν cDNA (2 μL), εκκινητές (400 ηΜ το καθένα, 1 μί), και SYBR πράσινο κύριο μείγμα (2 χ 10 μL) (Invitrogen). cDNA ενισχύθηκε σε ένα σύστημα πραγματικού χρόνου PCR Lightcycler480 (Roche Applied Science, Penzberg, Γερμανία) με τις ακόλουθες κύκλους: 95 ° C για 10 λεπτά που ακολουθείται από 40 κύκλους των 95 ° C για 15 s και 60 ° C για 60 s. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές. Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης CRM1 κανονικοποιήθηκαν προς GAPDH χρησιμοποιώντας τη μέθοδο 2-ΔΔCT.

εκχύλιση πρωτεϊνών και

κηλίδος Western

Μετά την αγωγή κυττάρων με KPT-185 για 48 ώρες, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ψυχρό ρυθμιστικό φωσφορικού άλατος (PBS) και λύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα ΝΕ-PER (Pierce Biotechnology, Waltham, ΜΑ, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το υπερκείμενο (προϊόν λύσης ολόκληρου κυττάρου) προσδιορίστηκε ποσοτικά και έπειτα ηλεκτροφορήθηκε με τη χρήση νατρίου ηλεκτροφόρηση δωδεκύλ θειικού πηκτώματος πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE). Οι πρωτεΐνες στη συνέχεια μεταφέρθηκαν πάνω σε μεμβράνη PVDF (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA) χρησιμοποιώντας ηλεκτροστύπωσης. Μετά από αυτό, οι μεμβράνες αποκλείσθηκαν με 5% αποβουτυρωμένο γάλα σε σκόνη σε Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα συν Tween 20 (TBS-T) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια επωάζονται με ένα πρωτεύον αντίσωμα σε 4 ° C όλη τη νύκτα. Την επόμενη ημέρα, οι μεμβράνες πλύθηκαν με ΤΒδ-Τ τρεις φορές και επωάζονται περαιτέρω με ένα δευτερεύον προϊόν σύζευξης αντισώματος-ΗΚΡ σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Μετά από πλύσιμο με TBS-T και πάλι, οι πρωτεΐνες ανιχνεύτηκαν ζώνες με υπόστρωμα ανίχνευση Immobilon Western HRP (Millipore). Θετικές εικόνες καταγράφηκαν με ένα όργανο χημειοφωταύγειας (ProteinSimple, Santa Clara, CA, USA).

ανοσοφθορισμού μικροσκοπία

Ο εντοπισμός και η έκφραση της CRM1, EGFR, ΙκΒ-α, NF-κΒ και ρ53 ανιχνεύθηκαν με την παρουσία και απουσία του KPT-185 με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού. κύτταρα NSCLC υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με KPT-185 για 48 ώρες και καθορίζεται για 30 λεπτά με 4% παραφορμαλδεΰδη. Στη συνέχεια, κυτταρικές μεμβράνες ήταν διαπερατότητας με κατεργασία με Triton Χ-100 (0,1% β /ο) σε PBS για 15 λεπτά. Μετά από αποκλεισμό με ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού αποτελούμενο από 5% φυσιολογικό ορό κατσίκας για 1 ώρα, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με πρωτογενές αντίσωμα για 1 ώρα. Μετά την πλύση με PBS, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για 1 ώρα με ένα δευτερεύον ΡΙΤΟ-συζευγμένο αντίσωμα και DAPI. Φωτομικρογραφίας εικόνες καταγράφηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Olympus, Tokyo, Japan).

Ποντίκι NSCLC δοκιμασία κυττάρων ξενομοσχεύματος

Τέσσερις εβδομάδων θηλυκούς μη-παχύσαρκους διαβητικούς-σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια (NOD -SCID) ποντίκια αγοράστηκαν από το Ινστιτούτο Ζωολογίας, κινεζική Ακαδημία Επιστημών, και εμβολιάστηκαν υποδορίως στην περιοχή πλευρό με ένα εναιώρημα H1975 κύτταρα (5.0 × 10

6 κύτταρα). Οι όγκοι των όγκων μετρήθηκαν τρεις φορές την εβδομάδα και υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: όγκος (mm

3) = (πλάτος (mm))

2 χ μήκος (mm) /2. Μόλις η ανάπτυξη του όγκου ήταν σταθερή (μέσο μέγεθος 100 mm

3), τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 3 ομάδες και από του στόματος θεραπεία με έκδοχο (Pluronic F-68 /PVP-Κ29 /32), gefitinib (100 mg /kg QD για 3 εβδομάδες) ή KPT-276 (100 mg /kg 3 φορές την εβδομάδα για 3 εβδομάδες) [22]. Καμπύλες ανάπτυξης ξενομοσχευμάτων καρκινικού κυττάρου παρήχθησαν με γραφική παράσταση των μέσων σχετικά μεγέθη όγκου +/- SE. μεταβολές βάρους σώματος (που μετράται τρεις φορές την εβδομάδα) εκφράστηκαν ως αναλογία σε σχέση με το βάρος λίγο πριν την αρχική θεραπεία. Οι ποντικοί θανατώθηκαν όταν η διάμετρος μονοδιάστατη όγκου έφθασε 15 mm ή μετά την απώλεια του 10% του σωματικού τους βάρους. Η σημασία αυτών των διαφορών μεταξύ των διαφόρων ομάδων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα τεστ ANOVA. Τα επίπεδα πρωτεΐνης του CRM1, EGFR και survivin σε ξενομοσχεύματος όγκοι ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα του Καρκίνου Ινστιτούτο /Νοσοκομείο, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών.

Αποτελέσματα

Η αναστολή της βιωσιμότητας των κυττάρων NSCLC από KPT-185

Για να αξιολογηθεί η δραστικότητα κατά του όγκου της CRM1 αναστολέα KPT-185, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς βιωσιμότητας των κυττάρων σε έξι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές NSCLC. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με σειριακές αραιώσεις KPT-185 από 1 ηΜ έως 10 μΜ για 2 και 3 ημέρες. Τα δεδομένα έδειξαν ότι KPT-185 μειώνεται η βιωσιμότητα των κυττάρων NSCLC σε μία δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο, με μια IC

50 από 1,3 ηΜ έως 46 μΜ (Σχήμα 1Α-Ρ). Σε αυτή τη μελέτη, η κάθε γραμμή κυττάρων NSCLC αντιπροσώπευε μια διαφορετική μοριακή υποτύπου του NSCLC. Είναι ενδιαφέρον, KPT-185 ανέστειλε επίσης τη βιωσιμότητα του EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτική H1975 και H1650GR κύτταρα και EGFR-ΤΚΙ-ευαίσθητα κύτταρα HCC827, υποδεικνύοντας ότι KPT-185 μπορεί να είναι ένας καλός υποψήφιος για τον αποτελεσματικό έλεγχο του EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτική καρκίνων του πνεύμονα . Επιπλέον, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι δεν υπήρχε συνεργική δράση μεταξύ KPT-185 και EGFR-ΤΚΙ (gefitinib) θεραπεία στην αναστολή κυτταρικής βιωσιμότητας του όγκου (Σχήμα 1G & amp? Η).

Έξι κυτταρικές σειρές NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με KPT-185 για 48 ώρες ή 72 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων καταστάλθηκε από KPT-185 σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (A~F). KPT-185 βιωσιμότητα ανέστειλε κύτταρο σε H1975 (G) και κύτταρα HCC827 (H) σε σύγκριση με την επίδραση της αγωγής gefitinib EGFR-ΤΚΙ. (Ν = 3).

Η

Πρόκληση NSCLC διακοπή του κυτταρικού κύκλου από KPT-185

Για να καθοριστεί αν η μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων μετά από θεραπεία KPT-185 συνδέθηκε με τις αλλαγές στο κελί κατανομή του κύκλου σε κύτταρα NSCLC, αναλύσαμε κύκλους κυττάρων σε κύτταρα NSCLC μετά από 24 ώρες θεραπείας με KPT-185. Σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου, η αγωγή KPT-185 συνελήφθησαν κύτταρα NSCLC στην G1 φάση του κυτταρικού κύκλου. Ωστόσο, το εύρημα αυτό δεν συνέβη στην H2228 κύτταρο το οποίο δεν ήταν ευαίσθητη στη θεραπεία KPT-185 (Σχήμα 2).

Τα κύτταρα συνελήφθησαν στη φάση G1 του κυτταρικού κύκλου σε KPT-185 ευαίσθητα κύτταρα. (Ν = 3).

Η

Η επαγωγή της απόπτωσης των κυττάρων NSCLC από KPT-185

Από KPT-185 θεραπεία επαγόμενης NSCLC διακοπή του κυτταρικού κύκλου στην φάση G1 του κυτταρικού κύκλου, εμείς αποφασισμένος αν KPT-185 που επάγεται NSCLC κυτταρικής απόπτωσης. Πράγματι, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι η θεραπεία KPT-185 για 48 ώρες αύξησε τα επίπεδα της χρώσης αννεξίνης V σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, υποδεικνύοντας κυτταρική απόπτωση (Σχήμα 3Α). Επιπλέον, η θεραπεία KPT-185 που προκαλείται από H1975 κύτταρα να υφίστανται απόπτωση, αλλά gefitinib δεν έχει αποτέλεσμα. Εν τω μεταξύ, οι δύο KPT-185 και gefitinib επαγόμενη απόπτωση σε HCC827 κύτταρα (Σχήμα 3Β, 3C & amp? 3D). Επιπλέον, αγωγή κυττάρων με KPT-185 και gefitinib δεν οδήγησε σε μια συνεργική επίδραση στην κυτταρική απόπτωση.

Οι έξι κυτταρικές γραμμές NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με KPT-185 και, στη συνέχεια, των κυττάρων του όγκου απόπτωση εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής δοκιμασίας . Τα δεδομένα έδειξαν μία δοσοεξαρτώμενη επαγωγή της κυτταρικής απόπτωσης μετά από 48 ώρες της αγωγής (Α). KPT-185 επαγόμενη απόπτωση σε H1975 (Β) και κύτταρα HCC827 (C) σε σύγκριση με την θεραπεία gefitinib EGFR-ΤΚΙ. Μία αντιπροσωπευτική δεδομένα της δοκιμασίας απόπτωσης σε κύτταρα H1975 δείχθηκε (D). (Ν = 3).

Η

Η ελαττωμένη CRM1 και άλλων πρωτεϊνών στα κύτταρα NSCLC από KPT-185

Στη συνέχεια, αναλύσαμε την επίδραση της KPT-185 σχετικά με τη ρύθμιση των CRM1expression σε NSCLC κύτταρα. Το επίπεδο της πρωτεΐνης CRM1 ήταν σημαντικά μειωμένη μετά την επεξεργασία με KPT-185 σε όλες τις έξι NSCLC κυτταρικές γραμμές όταν συγκρίνονται με κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 4Α). Ωστόσο, τα επίπεδα του CRM1 mRNA ήταν υψηλότερη σε H1975, HCC827 και H1650GR κυττάρων μετά από θεραπεία με KPT-185 από εκείνη των κυττάρων ελέγχου (Σχήμα 4Β), δεικνύοντας ότι η μείωση των CRM1 πρωτεΐνης με KPT-185 δεν ήταν στο μεταγραφικό επίπεδο. Στη συνέχεια ερευνήθηκε κατά πόσον KPT-185 με μειωμένη έκφραση πρωτεΐνης CRM1 οφειλόταν στην ενεργοποίηση του μονοπατιού ουβικουϊτίνης /πρωτεασώματος. H1975, HCC827, και H1650GR κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με KPT-185 παρουσία ή απουσία του bortezomib (10 ηΜ? Πρωτεοσωμικού αναστολέα) επί 48 ώρες. Με την παρουσία του bortezomib, η μείωση του CRM1 πρωτεΐνης με KPT-185 ήταν σχεδόν μπλοκαριστεί (Σχήμα 4C), προτείνοντας ότι KPT-185 που προκαλείται από την εξάντληση CRM1 απαιτεί ενεργοποίηση του μονοπατιού ουβικουϊτίνης /πρωτεασώματος. Στη συνέχεια αξιολογήθηκαν τα επίπεδα διαφόρων πρωτεϊνών που εμφανίζονται να εξαχθούν από CRM1, όπως EGFR, p53, και ΙκΒ-α. θεραπεία KPT-185 μείωσε επίσης την έκφραση του EGFR σε όλες τις έξι NSCLC κυτταρικές σειρές (Σχήμα 4D & amp? Σχήμα S1). Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική μεταβολή στα επίπεδα του NF-κΒ και ΙκΒ-α σε αυτά τα κύτταρα, αλλά ΙκΒ-α και ΝΡ-κΒ συσσωρεύθηκε στον πυρήνα σε ομάδα θεραπείας KPT-185 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 4D, 4Ε & amp? Σχήμα S1). Είναι ενδιαφέρον ότι, μετά από αγωγή με KPT-185, το επίπεδο του ρ53 ρυθμίζεται αυξητικά σε κύτταρα Α549, τα οποία έχουν ένα άγριου τύπου ρ53, ενώ πρωτεΐνη ρ53 ρυθμίζεται προς τα κάτω και να περιορίζονται στο πυρήνα σε H1975 κύτταρα, τα οποία έχουν μια μεταλλαγμένη πρωτεΐνη ρ53 (Εικόνα 4D & amp? 4Ε). Εν τω μεταξύ, δεν υπήρχε μεταβολή στα επίπεδα πρωτεΐνης ρ53 τόσο στην HCC827 και H2228 κύτταρα και πρωτεΐνη ρ53 δεν ήταν ανιχνεύσιμη σε H1650 και H1650GR κύτταρα (Σχήμα 4D).

Οι έξι κυτταρικές γραμμές NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με KPT- 185 για 48 ώρες. Η έκφραση της πρωτεΐνης CRM1 ρυθμισμένα προς τα κάτω (amp A &? Ε), ενώ τα επίπεδα mRNA ήταν CRM1 πάνω ρυθμισμένα (Β, Ν = 3). Με την παρουσία του αναστολέα πρωτεασώματος bortezomib, η μείωση του CRM1 πρωτεΐνης μετά την αγωγή KPT-185 ήταν σχεδόν μπλοκαριστεί στο H1975, κύτταρα HCC827 και H1650GR (C). έκφραση EGFR ήταν μειωτικά μετά τη θεραπεία KPT-185. Τα επίπεδα των πρωτεϊνών ΝΡ-κΒ και ΙκΒ-α δεν επηρεάστηκαν σημαντικά. KPT-185 απορυθμίζεται άγριου τύπου ρ53 σε κύτταρα Α549, μειωτικά μεταλλαγμένο ρ53 σε H1975 κυττάρων, και δεν υπήρχε αποτέλεσμα σε HCC827 και H2228 κυττάρων. Επιπλέον, ρ53 δεν ανιχνεύτηκε σε H1650 και H1650GR κύτταρα (D & amp? Ε, 400 ×).

Η

Η επαγωγή της ενεργοποίησης της κασπάσης στα κύτταρα NSCLC από KPT-185

Για την περαιτέρω διαλεύκανση οι υποκείμενες μοριακά γεγονότα με την οποία KPT-185 απόπτωση που επάγεται σε κύτταρα NSCLC, αναλύσαμε την ενεργοποίηση και διάσπαση των κασπασών, PARP και survivin μετά από επεξεργασία των έξι κυτταρικών γραμμών NSCLC με KPT-185 για 48 ώρες. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι, σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου, κασπάσες-8, -9 και -3, και PARP ενεργοποιήθηκαν ή διασπώνται, ενώ survivin, έναν αναστολέα της απόπτωσης, έγινε μειωτικά σε κύτταρα NSCLC αντιμετωπίζονται από KPT-185 (Σχήμα 5Α). Εμείς στη συνέχεια κατεργάζεται H1975 κυττάρων με 100 mM του αναστολέα παν-κασπάσης Ζ-VAD-FMK για 2 ώρες πριν από τη θεραπεία KPT-185. Βρήκαμε ότι H1975 απόπτωση κυττάρων που προκαλείται από KPT-185 αναστέλλεται πλήρως από Z-VAD-FMK (Σχήμα 5Β).

Οι έξι κυτταρικές γραμμές NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με KPT-185 για 48 ώρες. ενεργοποιήθηκαν κασπάσες-8, -9 και -3 και PARP ή διασπάται, αλλά survivin ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω (Α). Με την παρουσία του αναστολέα κασπάσης παν-Z-VAD-FMK, KPT-185-επαγόμενη απόπτωση πλήρως αποκλειστεί σε H1975 κύτταρα (Β, Ν = 3).

Η

Επίδραση της KPT-276 επί κύτταρα NSCLC in vivo

στη συνέχεια αξιολογήθηκαν τα αποτελέσματα της CRM1 αναστολέα KPT-276 (η κλινική που ισοδυναμεί με KPT-185) σε κύτταρα NSCLC

in vivo

. Πρέπει πρώτα μεταμοσχευμένα κύτταρα NSCLC H1975 με EGFR-ΤΚΙ μετάλλαξη αντίστασης σε NOD-SCID ποντικούς. Μετά καθορίστηκαν ξενομοσχεύματα όγκου, οι ποντικοί χορηγήθηκαν από του στόματος με έκδοχο, gefitinib, ή KPT-276 θεραπείες. Βρήκαμε ότι η θεραπεία KPT-276 ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου όταν συγκρίνεται με το όχημα ή ομάδες ξενομοσχεύματος όγκου gefitinib φάρμακο (

P

& lt? 0,05? Σχήμα 6Α). Τα ποντίκια ανέχθηκαν την από του στόματος χορηγούμενη KPT-276 (100 mg /kg) θεραπείες, όπως υποδεικνύεται από μια μέση απώλεια βάρους 6,64% (Σχήμα 6Β). Επιπλέον, οι παρενέργειες της χημειοθεραπείας-όπως, όπως διάρροια, δεν παρατηρήθηκαν. Τα επίπεδα πρωτεΐνης του CRM1, EGFR και survivin σε ξενομοσχεύματος όγκοι ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία. Η έκφραση του CRM1 ήταν μειωτικά, και CRM1 περιοριζόταν σε πυρήνα σε ομάδα θεραπείας KPT-276 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου και gefitinib θεραπεία (Σχήμα 6C). Η έκφραση του EGFR και survivin ήταν προς τα κάτω σε ομάδα θεραπείας KPT-276 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου και gefitinib θεραπεία (Σχήμα S2).

κύτταρα NSCLC H1975 μεταμοσχεύθηκαν σε NOD-SCID ποντικούς. Ποντίκια με μια καθιερωμένη ξενομοσχεύματος κυττάρου NSCLC χορηγήθηκαν από του στόματος με έκδοχο, gefitinib, ή KPT-276. Όγκου κυτταρική ανάπτυξη ξενομοσχεύματος αξιολογήθηκε για 30 ημέρες. καμπύλες ανάπτυξης όγκου έδειξε στατιστικά σημαντική καταστολή της ανάπτυξης κυττάρου H1975 in vivo σε σύγκριση με όχημα ή gefitinib θεραπείας (

P

& lt? 0,05? Α). Τα ποντίκια χορηγήθηκε από του στόματος KPT-276 (100 mg /kg, τρεις φορές την εβδομάδα για τρεις εβδομάδες) ανέχθηκαν την θεραπεία καλά (Β). Το επίπεδο της πρωτεΐνης των CRM1was ανιχνεύθηκε σε όγκους ξενομοσχεύματος με ανοσοϊστοχημεία (C, 400 ×).

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα των νέων φαρμάκων όπως οι αναστολείς CRM1 σε NSCLC κύτταρα

in vitro

και

in vivo

. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ημιτονοειδές CRM1 αναστολέα KPT-185 μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων NSCLC και τους διεγείρονται για να υφίστανται απόπτωση με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. KPT-185 παρουσίασαν επίσης μια ισχυρή αντικαρκινική δραστικότητα σε EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές NSCLC. Επιπλέον, KPT-185 επάγεται επίσης διακοπή του κυτταρικού κύκλου στην G1 /S σημείο ελέγχου στο KPT-185-ευαίσθητο NSCLC κυτταρικές γραμμές, κάτω ρυθμισμένα επίπεδα CRM1 και πρωτεΐνης EGFR, συσσωρευμένη ρ53, ΙκΒ-α και ΝΡ-κΒ στον πυρήνα, και ενεργοποιημένα κασπάσες-8, 3, 9 και πρωτεϊνών σε κύτταρα NSCLC. Στοματική χορήγηση KPT-276 ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου σε H1975 που φέρει NOD-SCID ποντίκια, τα οποία ήταν ανθεκτικά σε θεραπεία EGFR-ΤΚΙ. Το πιο σημαντικό, τα ποντίκια ανέχθηκαν την θεραπεία KPT-276 με ελάχιστη απώλεια σωματικού βάρους και χωρίς σοβαρή τοξικότητα. Περαιτέρω μελέτες θα αξιολογήσει τις υποκείμενες μοριακών μηχανισμών KPT-185 αντικαρκινική δραστικότητα σε μια κλινική μελέτη για ασθενείς με NSCLC.

Πράγματι, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι CRM1 υπερέκφραση συνδέεται με την εξέλιξη του όγκου και θνησιμότητας σε διάφορα ανθρώπινους καρκίνους [23]. Για παράδειγμα, Zhang έδειξε ότι CRM1 siRNA οδήγησε σε CRM1 πρωτεΐνη knockdown και μειωμένη λέμφωμα κυττάρων μανδύα (MCL) τη βιωσιμότητα των κυττάρων, και Sines επαγόμενη πρωτεΐνη CRM1 μετατόπιση εντός του πυρήνα, όπου η έκφρασή του ρυθμίζεται προς τα κάτω [22]? Έτσι, αυτά τα δεδομένα φαίνεται να είναι αντίθετη με πρώην αναστολείς CRM1 [13], [14], [24], [25]. Στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε ότι KPT-185 μειωμένη κυτταρική βιωσιμότητα NSCLC, απόπτωση, και συνέλαβε κύτταρα NSCLC στο στάδιο G1 του κυτταρικού κύκλου. Αυτά τα δεδομένα συμφωνούν με προηγούμενες μελέτες επί αναστολέων CRM1 σε διαφορετικούς ανθρώπινους καρκίνους [13], [14], [22] – [25]. τρέχοντα δεδομένα μας έδειξαν επίσης ότι ο αναστολέας ΣΙΝΕ KPT-185 κάτω-ρυθμίζονται τα επίπεδα πρωτεΐνης CRM1 στα κύτταρα NSCLC μέσω KPT-185 που προκαλείται πρωτεασώματος υποβάθμιση της CRM1 πρωτεΐνης. Ετσι, ένας πιθανός μηχανισμός κυτταροτοξική αναστολέων CRM1 είναι μέσω της οδού ουμπικιτίνης /πρωτεασώματος, μειώνοντας την εξαγωγή των πρωτεϊνών ογκοκατασταλτικών (TSP) από τον πυρήνα στο κυτταρόπλασμα, όπως ρ53, ΙκΒ-α και ΝΡ-κΒ. Etchin et al. Αποδείχθηκε περαιτέρω ότι οι αναστολείς CRM1 θα μπορούσε να συνδεθεί με την αύλακα του CRM1 πρωτεΐνη που συνήθως καταλαμβάνεται από το NES, και μπλοκάρουν CRM1 κατευθυνόμενη πρωτεΐνη εξαγωγή [21].

Ένας αριθμός μελετών έχουν δείξει ότι η ενεργοποίηση ΝΡ-κΒ είναι απαραίτητο να διατηρηθεί η βιωσιμότητα των κυττάρων του όγκου, και η αναστολή της δραστικότητας του ΝΡ-κΒ από μόνη της είναι επαρκής για να επάγει κυτταρικό θάνατο [26], [27]. Ωστόσο, στην παρούσα μελέτη μας, εμείς δεν παρατηρούμε σημαντικές αλλαγές στο NF-κΒ και τα επίπεδα έκφρασης ΙκΒ-α σε κύτταρα NSCLC μετά τη θεραπεία KPT-185, αλλά ΙκΒ-α και NF-κΒ εν μέρει συσσωρευτεί στον πυρήνα σε KPT-185 ομάδα θεραπείας. CRM1 είναι γνωστό για την εξαγωγή άγριου τύπου ρ53 από τον πυρήνα στο κυτταρόπλασμα των καρκινικών κυττάρων μέσω Ο-τερματικού NES του, επιτρέποντας την αποτελεσματική αποικοδόμηση του ρ53 με πρωτεασώματα. Στην παρούσα μελέτη μας βρήκαμε ότι η αναστολή της δραστηριότητας CRM1 από KPT-185 εμπόδισε p53 από την έξοδο από τον πυρήνα, με αποτέλεσμα τη συσσώρευση των πυρηνικών p53 και τη σταθεροποίηση στην p53 ευρύ τύπο κυττάρων NSCLC Α549. Σε H1975 κύτταρα, τα οποία έχουν ένα μεταλλαγμένο ρ53, KPT-185 αγωγή ρυθμισμένα προς τα κάτω τα επίπεδα ρ53 και ρ53 περιορίζεται στον πυρήνα. Επιπλέον, τα επίπεδα ρ53 παρέμειναν σταθερά σε τόσο HCC827 και κυττάρων H2228, υποδηλώνοντας ότι η απόπτωση σε αυτά τα κύτταρα είναι ρ53-ανεξάρτητη. Παραδόξως, ρ53 δεν ήταν ανιχνεύσιμη σε κύτταρα H1650 και H1650GR. Η κυτταρική γραμμή H1650 έχει προηγουμένως περιγραφεί ως μία κυτταρική γραμμή που φέρει μεταλλαγμένο τύπο του ρ53 [28].

EGFR ρυθμίζει σημαντικές ογκογόνων διαδικασιών, συμπεριλαμβανομένων πολλαπλασιασμού, αντίσταση απόπτωση, αγγειογένεση και εισβολή, και συχνά υπερεκφράζεται κατά την διάρκεια της ανάπτυξης και την εξέλιξη του NSCLC [29]. EGFR μπορεί να ανιχνευθεί στον πυρήνα και εξάγονται στο κυτταρόπλασμα από CRM1. Στη μελέτη μας, δείξαμε ότι η έκφραση EGFR μειώθηκε μετά από KPT-185-μειωμένη έκφραση CRM1 στα κύτταρα NSCLC. Νόσκε et al. [30] έδειξε την αντίστροφη συσχέτιση του EGFR με την έκφραση CRM1 σε ιστούς καρκίνου των ωοθηκών. Τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης EGFR μειώθηκαν μετά την έκθεση των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών σε leptomycin Β (ΕΜΒ), γεγονός που υποδηλώνει ότι CRM1 παίζει ένα ρόλο στην ενδοκυτταρική διενεργοποίησης του EGFR [30]. Σε αντίθεση, Lo et al. ανιχνεύθηκαν αυξημένα επίπεδα πυρηνικής EGFR εξής LMB θεραπεία σε ανθρώπινα κύτταρα Α431 επιδερμοειδούς καρκινώματος [31], υποδηλώνοντας ότι η αυξημένη πυρηνική EGFR με LMB παρέχει μια εύλογη μηχανισμό με τον οποίο τα κύτταρα shuttle κυτταρικής επιφάνειας EGFR μέσω του συμπλόκου πυρηνικού πόρου και μέσα στο πυρηνικό διαμέρισμα.

Survivin είναι μέλος των αναστολέων της οικογένειας απόπτωσης και προστατεύει από την απόπτωση είτε άμεσα είτε έμμεσα αναστέλλοντας την ενεργοποίηση των κασπασών [32]. PARP είναι ένα υπόστρωμα της κασπάσης και της ενεργοποίησης του οδηγεί σε απόπτωση. Στην τρέχουσα μελέτη μας, KPT-185 ήταν σε θέση να ενεργοποιήσει κασπάσες-8, -9 και -3, PARP, αλλά αναστέλλουν survivin σε όλες τις έξι κυτταρικές γραμμές NSCLC. τρέχοντα δεδομένα μας έδειξαν επίσης ότι KPT-185 ήταν σε θέση να επάγει απόπτωση στα δύο EGFR-ΤΚΙ-ευαίσθητο και ανθεκτικών κυττάρων NSCLC. Επιπλέον, βρήκαμε ότι ο αναστολέας παν-κασπάσης Ζ-VAD-FMK προληφθούν πλήρως KPT-185 επαγόμενη απόπτωση σε H1975 κύτταρα. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι SINE επαγόμενη απόπτωση εξηρτάτο από την ενεργοποίηση της κασπάσης σε κυτταρικές σειρές NSCLC.

KPT-185 έχει δειχθεί ότι διαθέτει ακατάλληλο φαρμακοκινητικές ιδιότητες

in vivo

, είτε υποδορίως ή από το στόμα. Ωστόσο, KPT-276, που σχετίζεται δομικά με KPT-185, είναι κατάλληλη για από του στόματος θεραπεία [22]. Mutka et al. Σημειώνεται ότι LMB έχει εκτός στόχου επιδράσεις έναντι πρωτεϊνών εκτός από CRM1 και ότι αυτές οι επιπτώσεις εκτός-μπορούσαν να συμβάλουν στην παρενέργειες LMB του (~ 20% απώλεια σωματικού βάρους) [33]. Στην τρέχουσα μελέτη μας, χρησιμοποιήσαμε KPT-276 σε δόση 100 mg /kg τρεις φορές την εβδομάδα για τρεις εβδομάδες για τη θεραπεία ποντίκια που φέρουν ξενομοσχεύματα NSCLC κυττάρου όγκου. Βρήκαμε ότι αυτοί οι ποντικοί ανεκτή (λιγότερο από το 10% του σωματικού απώλεια βάρους) η θεραπεία. Επιπλέον, KPT-276 εμφάνισε υψηλή δραστικότητα κατά των όγκων σε EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτική ξενομοσχεύματα κυττάρων NSCLC. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι KPT-276 μπορεί να είναι ένας χρήσιμος αναστολέας CRM1 για την κλινική θεραπεία των ασθενών με NSCLC, ειδικά για ασθενείς με EGFR ΤΚΙ-ανθεκτική.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

ο εντοπισμός και η έκφραση του EGFR, ΙκΒ-α, και NF-κΒ ανιχνεύθηκαν με την παρουσία και απουσία του KPT-185 με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού. Η έκφραση του EGFR ήταν μειωτικά, και ΙκΒ-α και ΝΡ-κΒ συσσωρεύθηκε στον πυρήνα σε ομάδα θεραπείας KPT-185 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (400 Χ)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0089848.s001

(TIFF)

Εικόνα S2.

Τα επίπεδα πρωτεΐνης του EGFR και survivin ανιχνεύθηκαν σε όγκους ξενομοσχεύματος με ανοσοϊστοχημεία. Η έκφραση του EGFR και survivin ήταν προς τα κάτω σε ομάδα θεραπείας KPT-276 σε σύγκριση με την ομάδα θεραπείας ελέγχου και gefitinib (400 Χ)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0089848.s002

(TIF)

Ευχαριστίες

θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε Karyopharm Therapeutics ανώνυμη εταιρεία για την παροχή KPT ενώσεις ΣΙΝΕ, και ο Καθηγητής Michael Wang και Liang Zhang του Πανεπιστημίου του Τέξας MD Anderson Cancer Center, Houston Texas, USA, για την κριτική σχόλια.

Η μελέτη παρουσιάστηκε ως μια αφίσα σε AACR 2013 ετήσια συνεδρίαση στην Ουάσινγκτον DC, ΗΠΑ (Περίληψη # 3444).