στόχο

Για να διασφαλιστεί η ΖΑΚ siRNA δεν αναπτύσσουν συνέπειες στόχο, χρησιμοποιήσαμε ακόμα μια συλλογή από siRNA που κατευθύνεται από το 5 ποσοστιαίες της ΖΑΚ mRNA. SiRNAmediated knock-down της ΖΑΚ χρήση εγχόρδων 2 επίσης κατέστειλε την προκαλούμενη από δοξορουβικίνη φωσφορυλίωση της p38 και JNK MAPK. Επιπλέον, siRNA μεσολαβεί knockdown του ΖΑΚ εφαρμογής αλληλουχίας 2 κατασταλεί η δοξορουβικίνη προκάλεσε διάσπαση της PARP, αν και όχι τόσο αποτελεσματικά όσο αλληλουχία 1. Για το λόγο αυτό, χρησιμοποιείται αλληλουχία 1 σε επόμενα πειράματα.

Μια αμετάβλητες χαρακτηριστικό ribotoxic αιτίες είναι η ικανότητά τους να αναστέλλουν την μετάφραση πρωτεΐνης. Για να εξακριβωθεί αν η δοξορουβικίνη αναστέλλει την πρωτεϊνική σύνθεση, εκθέσαμε τα κύτταρα HaCaT στη δοξορουβικίνη για διάφορους χρόνους, κατά τους οποίους φορές κύτταρα εκτέθηκαν σε λευκίνη για 30 λεπτά. Συνεχής εξέταση των κυττάρων με μικροσκοπία αποδεδειγμένη ελάσσονα κινητό αποκόλληση, ακόμη και 24 ώρες μετά την προσθήκη της δοξορουβικίνης. μπλοκ Εμετίνη χάρτη δραστηριότητας Ε αφού ένα υψηλής δόσης δοξορουβικίνης. Μεταγωγή με ribotoxic στρεσογόνους των σημάτων που οδηγούν σε ενεργοποίηση του SAPKs προϋποθέτει ότι τα ριβοσώματα να συμμετέχουν στη σύνθεση των πρωτεϊνών κατά τη στιγμή που τα κύτταρα υποβάλλονται στον στρεσογόνο παράγοντα. του στόματος Syk αναστολέα

Ο αποκλεισμός της πρωτεϊνικής σύνθεσης από τους αναστολείς ταχείας δράσης όπως εμετίνη, πριν από την έκθεση των κυττάρων σε ribotoxic ωθήσεις, σταματά μεταγωγή του σημείου που οδηγούν σε ενεργοποίηση της ρ38 και JNK ΜΑΡΚ. δείξει ότι εμετίνη μπλοκαριστεί πρωτεϊνικής σύνθεσης σε λιγότερο από 1 λεπτό μετά την προσθήκη στα κύτταρα. Για να διαπιστωθεί αν προηγούμενη επεξεργασία των κυττάρων HaCaT με εμετίνη θα μπορούσε να εμποδίσει την ενεργοποίηση των ρ38 και ΙΝΚ ΜΑΡΚ, τα κύτταρα εκτέθηκαν σε εμετίνη ή όχημα πριν από την προσθήκη ντοξορουμπικίνης. Εφαρμόσαμε μια υψηλότερη συγκέντρωση της doxorubicin να ενθαρρύνει την ταχεία φωσφορυλίωση της ρ38 και JNK ΜΑΡΚ. Συμπλήρωμα της εμετίνη πριν από την έκθεση σε δοξορουβικίνη εντελώς μπλοκάρει την φωσφορυλίωση της JNK και της p38 MAPK.

Η δοξορουβικίνη κατέστειλε την ενσωμάτωση της λευκίνης κατά 50% πλήρως και σε 1 ώρα σε 2 ώρες. Πραγματοποιήσαμε μια παρόμοια δοκιμή με τη χρήση ΟϋΟ, ότι δεν είναι πραγματικά ένα ribotoxic stressorand αποτέλεσμα την ενεργοποίηση των p38 και JNK MAPK μέσω διαφορετικών στοιχείων. Σε αντίθεση με δοξορουβικίνη, η φωσφορυλίωση της ρ38 και JNK ΜΑΡΚ δεν καταστάλθηκε από εμετίνη. Οι αναστολείς της ΖΑΚ μπλοκ δοξορουβικίνη επαγόμενη απόπτωση και MAP Κ αρχική σε κύτταρα HaCaT. Ένας σημαντικός στόχος στη χημειοθεραπεία του καρκίνου θα είναι να μειωθεί παράπλευρες απώλειες σε φυσιολογικούς ιστούς και όργανα. Η διαχείριση των αποτελεσματικών δόσεων δοξορουβικίνης σε ασθενείς με καρκίνο συχνά συνδέεται με τις δυνατότητες ανάπτυξης της καρδιοτοξικότητας και άλλες ανεπιθύμητες αντιδράσεις.

Id παραγόντων που θα μπορούσαν να επιλεκτικά καταστέλλουν την καταστροφή του φυσιολογικού ιστού με doxorubicin μπορεί να επιτρέψει τη χορήγηση μεγαλύτερης ή συχνότερη δόσεις δοξορουβικίνης σε ασθενείς με καρκίνο. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η αναστολή της ΖΑΚ από πειραματική αναστολέα μικρού μορίου μειώνει ribotoxic στρεσογόνο θάνατο που επάγεται κυττάρου. Παρ ‘όλα αυτά, DHP 2 δεν είναι πλέον δημιουργήθηκε από την Eli Lilly και δεν είναι διαθέσιμο.

Σε μια ολοκληρωμένη δουλειά για να αναγνωρίσει τον στόχο του 38 μικρά αναστολείς κινάσης μορίου, Karaman et al. καθόρισε τις σταθερές διάστασης ενός κυττάρου από 287 ειδικών κινασών πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένων ΖΑΚ. Sorafenib, μια μεταβλητή αναστολέας κινάσης που έχει χρησιμοποιηθεί στη θεραπεία καρκίνωμα νεφρών και ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, βρέθηκε να κατέχει μια πραγματικά υψηλή συγγένεια σύνδεσης για ΖΑΚ.