Αφηρημένο

Η αυτοάνοση παγκρεατίτιδα (AIP) ορίζεται από το χαρακτηριστικό διήθηση λεμφοπλασματοκυτταρική, πορογενές στενώσεις και του παγκρέατος τη διεύρυνση ή τη μάζα που μπορεί να μιμηθεί τον καρκίνο του παγκρέατος (PaCa). Η διάκριση μεταξύ αυτού καλοήθη νοσήματα και τον καρκίνο του παγκρέατος μπορεί να είναι προκλητική. Ωστόσο, μια ακριβής διάγνωση μπορεί να προκαταλάβει την λανθασμένη διάγνωση του καρκίνου, επιτρέποντας την κατάλληλη ιατρική θεραπεία του AIP και, κατά συνέπεια, μείωση του αριθμού των περιττών παγκρέατος εκτομές.

φασματομετρία μάζας (MS) και δύο διαστάσεων διαφορικό gel ηλεκτροφόρηση (2D-ΨΗΦΟ) έχουν εφαρμοστεί για την ανάλυση πρωτεϊνών αλλοιώσεις στον ορό σχετίζονται με AIP και PaCa, και να προσδιορίσει τις υπογραφές πρωτεΐνη ενδεικτική των ασθενειών. ορούς των ασθενών ήταν ανοσολογικά από τις 20 πιο σημαντικές πρωτεΐνες ορού πριν από την περαιτέρω 2D-ΨΗΦΟ και ανάλυση εικόνας. Η ταυτότητα των πιο διακρίσεις πρωτεΐνες ανιχνεύονται, πραγματοποιήθηκε με MS και ELISAs εφαρμόστηκαν για να επιβεβαιώσετε την έκφρασή τους. Ορός προφίλ ανάλυση των δεδομένων με 2D-ΨΗΦΟ αποκάλυψε 39 κορυφές πρωτεΐνης είναι σε θέση να διακρίνουν μεταξύ AIP και PaCa. Οι πρωτεΐνες καθαρίστηκαν και αναλύθηκαν περαιτέρω με MALDI-TOF-MS. Peptide μάζα αποτυπωμάτων οδήγησε στην ταυτοποίηση των έντεκα πρωτεΐνες. Μεταξύ αυτών απολιποπρωτεΐνη ΑΙ, απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ, τρανσθυρετίνη, και tetranectin ταυτοποιήθηκαν και βρέθηκαν ως 3.0-, 3,5-πλάσια, 2-, και 1,6 φορές μειώθηκε σε PaCa ορούς, αντίστοιχα, ενώ απτοσφαιρίνης και απολιποπρωτεΐνη Ε βρέθηκαν να είναι 3.8- και 1,6 φορές αυξημένη σε PaCa ορούς. Με την εξαίρεση της απτοσφαιρίνης τα αποτελέσματα ELISA των ταυτοποιημένων πρωτεϊνών επιβεβαίωσε τα χαρακτηριστικά ανάλυση εικόνας 2D-ΨΗΦΟ. Ένταξη των ταυτοποιημένων πρωτεϊνών του ορού ως δείκτες AIP μπορεί να έχουν σημαντικές δυνατότητες για την παροχή πρόσθετων πληροφοριών για τη διάγνωση της AIP για να επιλέξετε την κατάλληλη θεραπεία

Παράθεση:. Felix K, Hauck O, Fritz S, Hinz U, Schnolzer Μ , Kempf Τ, et al. (2013) του ορού Υπογραφές Πρωτεΐνη Διαφοροποίηση αυτοάνοση παγκρεατίτιδα σε σχέση με τον καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (12): e82755. doi: 10.1371 /journal.pone.0082755

Επιμέλεια: Henrik Einwaechter, Klinikum rechts der Isar der TU München, Γερμανία

Ελήφθη: 2 του Γενάρη του 2013? Αποδεκτές: 4, Νοέμβρη 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Δεκεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Felix et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από το γερμανικό Ίδρυμα Ερευνών (DFG) FE 940 /2-1. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση που έλαβε για την παρούσα μελέτη. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η αυτοάνοση παγκρεατίτιδα (AIP) είναι μια ξεχωριστή κλινική οντότητα, που περιγράφεται ως μια χρόνια φλεγμονώδης διεργασία στο πάγκρεας με αυτοάνοσες μηχανισμούς. Κλινικά και ιστολογικά, δύο υποσύνολα των αυτοάνοσων παγκρεατίτιδα (τύπου 1 και τύπου 2 ΑΙΡ) υπάρχουν και θα πρέπει να διακρίνεται [1] – [4]. Ο τύπος 1 AIP, ένα λεμφοπλασμακυπαρικό σκληρυντική παγκρεατίτιδα (LPSP), δείχνει κάποια τυπικά χαρακτηριστικά: περιπορική λεμφοπλασματοκυτταρική διήθηση, ίνωση, αποφρακτική φλεβίτιδα, και διήθηση των κυττάρων του πλάσματος IgG4-θετική. Ο τύπος 2 AIP ιδιοπαθή αγωγού-centric παγκρεατίτιδα (IDCP) χαρακτηρίζεται από μαζική διείσδυση των κοκκιοκυττάρων στον παγκρεατικό παρέγχυμα και επιθηλιακά βλάβες (GEL). Τα χαρακτηριστικά αυτά περιγράφονται στα κριτήρια Mayo HISORt, το οποίο χρησιμοποιούμε στην κλινική μας [5]. Τύπος 1 ΑΙΡ επηρεάζει κυρίως τα ενήλικα αρσενικά με & gt? 90% των ασθενών είναι άνω των 40 ετών [6]. Η πιο κοινή κλινική παρουσίαση του τύπου 1 ΑΙΡ είναι οξεία αποφρακτικό ίκτερο, το οποίο αναφέρεται σε έως και 75% των ασθενών [7]. Επιπλέον, μια παγκρεατική διεύρυνση ή μάζα μπορεί να μιμηθεί τον καρκίνο του παγκρέατος σε ποσοστό έως 80% των ασθενών [1]. Με την παρουσία μιας νέας εμφάνισης του διαβήτη και η απώλεια βάρους, η διάκριση μεταξύ ΑΙΡ και καρκίνο του παγκρέατος μπορεί να είναι προκλητική. Επιπλέον, σε μια αξονική τομογραφία ή μαγνητική τομογραφία (MRI), μια ορισμένη «λουκάνικο σε σχήμα« διεύρυνση του παγκρέατος με καθυστέρηση περιφερειακή ενίσχυση (ενίσχυση της ζάντας) περιγράφεται [8] – [10]. Ενδοσκοπική Παλίνδρομη Cholangio-Pancreatography (ERCP) αποκαλύπτει χαρακτηριστική στένωση τμηματική και πολλαπλές στενώσεις, η οποία μπορεί να βοηθήσει να γίνει διάκριση μεταξύ του καρκίνου του παγκρέατος και πρωτοπαθής σκληρυντική χολαγγειίτιδα [11] – [13]. Τύπος 1 AIP παρουσιάζει αρκετές ορολογικές χαρακτηριστικά. Το πιο σημαντικό από αυτά είναι αυξημένα επίπεδα των IgG4, το οποίο είναι ζωτικής σημασίας για τη διάγνωση σε περίπτωση απουσίας του ιστολογία σύμφωνα με τα κριτήρια Mayo HISORt ορό [5]. Επιπλέον, αντιπυρηνικά αντισώματα, anticarbonic ανυδράσης, και antilactoferrin μπορεί να αυξηθεί πάρα πολύ. ΑΙΡ μπορεί συχνά να είναι δύσκολο να διακριθεί από PaCa ως δημογραφικά των ασθενών, καθώς και τα κλινικά και απεικόνισης χαρακτηριστικά (π.χ. παγκρεατικό διεύρυνση, αποφρακτικό ίκτερο σε 76%, η απώλεια βάρους στο 35% των ασθενών), είναι παρόμοια. Ως εκ τούτου, είναι επιθυμητό να αναγνωρίσουμε ΑΙΡ δεδομένου 2,5 έως 11% όλων των ασθενών που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για ύποπτο PaCa πράγματι έχουν μια καλοήθη φλεγμονώδη νόσο του παγκρέατος [14] – [16]. ΑΙΡ μπορούν να θεραπευθούν με στεροειδή, και η υψηλή απόκριση σε αυτή τη θεραπεία είναι ένα σημαντικό κριτήριο διαγνωστικής. Ως εκ τούτου, είναι εξαιρετικά σημαντικό για τη διάγνωση της AIP για να επιλέξετε την κατάλληλη θεραπεία και να αποφευχθεί η περιττή χειρουργική επέμβαση.

Ο στόχος αυτής της αρχικής μελέτης ήταν να προσδιορίσει τις πρωτεΐνες του ορού (βιοδείκτες ορού) που επιτρέπουν τη διάκριση AIP από PaCa. Για το σκοπό αυτό εφαρμόζεται μία πρωτεομική στρατηγική όπως περιγράφεται στο σχήμα 1. Η ταυτότητα των πρωτεϊνών ανιχνεύθηκαν προσδιορίστηκε με συνδυασμό διαφόρων τεχνικών, συμπεριλαμβανομένων των πρωτεϊνών του ορού κλασματοποίηση με ανοσοσυγγένειας αφαίρεση διακεκριμένων πρωτεϊνών, ηλεκτροφόρηση 2D-γέλης, και φασματομετρία μάζας και τέλος επιβεβαίωσε και αξιολόγησε τα επίπεδα πρωτεΐνης ορού με ένζυμο ανοσορροφητικές δοκιμασίες (ELISA).

Έξι οροί από κάθε ομάδα (ΑΙΡ, PaCa και CTR) πρώτα υποβάλλεται σε μία μείωση της πολυπλοκότητας του ορού με απομάκρυνση της 20 πιο άφθονα πρωτεΐνες ορού από τις στήλες ανοσοεξάντληση. Η ανοσοσυγγένειας-επεξεργασμένα οροί υποβλήθηκαν παράλληλα με 2D-ΨΗΦΟ και 2 PAGE D, και διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών προσδιορίζονται μέσω ανάλυσης εικόνας ΨΗΦΟ αντιστοιχήθηκαν με παρασκευαστική γέλη, Οι κηλίδες πρωτεΐνης αποκόπηκαν ως βύσματα γέλη, που παρασκευάστηκε για τρυπτική πέψη και προσδιορίζονται από ΚΥΡΊΑ. Η επικύρωση διάπλαση και την πιλοτική του εντοπίστηκαν πρωτεϊνών έγινε με δοκιμές ELISA.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγμα συλλογή

δείγματα του παγκρέατος ιστού προοπτικά συλλέγονται από τον Ιανουάριο του 2003 και τον Μάρτιο 2010 στο Τμήμα Χειρουργικής του Πανεπιστημίου της Χαϊδελβέργης. Η διάγνωση της χρόνιας παγκρεατίτιδας (CP), PaCa ή AIP επιβεβαιώθηκε με ιστοπαθολογική. Σε περίπτωση AIP, χρησιμοποιήθηκαν τα κριτήρια Mayo Clinic (HISORt) [5]. Η ιστολογική εξέταση του, σταθεροποιημένο με φορμαλίνη εμπεδωθεί με παραφίνη και Η &? Τομές παγκρεατικού ιστού E-χρώση διεξήχθη από έναν παθολόγο στο Ινστιτούτο Παθολογίας του Πανεπιστημίου της Χαϊδελβέργης

Η προεγχειρητική αίμα συλλέχθηκε από ασθενείς με διάγνωση αδενοκαρκίνωμα. το πάγκρεας (PaCa, 270 δείγματα), τα αλκοολούχα χρόνια παγκρεατίτιδα (CP, 290 δείγματα), αυτοάνοση παγκρεατίτιδα (ΑΙΡ, 32 δείγματα), μια ομάδα ελέγχου από υγιείς εθελοντές (Co, 127 δείγματα), και άλλων γαστρεντερικών καρκίνων (Gică, 165 δείγματα ). Κατά την εισαγωγή συγκεκριμένων χαρακτηριστικών του ασθενούς (ηλικία, φύλο, δείκτη μάζας σώματος (ΔΜΣ) κλινικά συμπτώματα, απώλεια βάρους, εμπλοκή και άλλων οργάνων, επιπλοκές, εξετάσεις αίματος και θεραπείες, κλπ) έχουν τεκμηριωθεί. Όλοι οι οροί ελήφθησαν σύμφωνα με ένα τυποποιημένο δειγματοληψίας και κωδικοποίησης του πρωτοκόλλου [17]

Δήλωση Ηθική:. Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Χαϊδελβέργης, και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς.

Ανίχνευση ολικής IgG και IgG4 αντισώματα

Ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα της ΑΙΡ είναι η παρουσία υψηλών επιπέδων IgG του ορού, ιδιαίτερα η υποκατηγορία IgG4. Για να εκτιμηθεί περαιτέρω η διαγνωστική αξία των συνολικών επιπέδων IgG και IgG4 σε ΑΙΡ, ανίχνευση των αντισωμάτων εκτελέσθηκε. Η συνολική IgG και τα επίπεδα στον ορό IgG4 υποσύνολο προσδιορίστηκαν κατά τη στιγμή της διάγνωσης με νεφελομετρία χρησιμοποιώντας ένα BNII Θολοσιμετρική (Dade Behring) ως πρότυπη δοκιμή προσδιορισμού για την ποσοτικοποίηση των ανοσοσφαιρινών στον ορό. Τα συνολικά επίπεδα IgG και στον ορό IgG4 θεωρήθηκαν να είναι αυξημένα όταν η συγκέντρωση έφτασε τιμές των ≥ 16,0 g /l και ≥ 1,4 g /l, αντίστοιχα [18].

Ανοσολογική απάντηση στο 15

H. pylori

πρωτεΐνες

Παρόμοια με την ανάπτυξη καρκίνου του στομάχου, ένα παθογόνο ρόλο του

H. pylori

λοίμωξη έχει συζητηθεί για παγκρεατική νόσο [19]. Ερευνήσαμε τη σύνδεση των αντισωμάτων σε 15 διαφορετικές

H. pylori

πρωτεΐνες και παγκρεατική νόσο σε σύγκριση με το

H. pylori

-associated γαστρικού νόσου. Αναλύσαμε τον ορό ασθενών με αυτοάνοση παγκρεατίτιδα (ΑΙΡ, n = 32), η χρόνια παγκρεατίτιδα (CP, n = 290) και του καρκίνου του παγκρέατος (PaCa, n = 269), και σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες (Co, n = 127) και άλλες GI-οδού καρκίνους (Gică, n = 165) με

H. pylori

multiplex ορολογικές εξετάσεις [20], η οποία επιτρέπει την ταυτόχρονη ανίχνευση των αντισωμάτων σε 15

H. pylori

-ειδικά αντιγόνα (ουρία, καταλάση, GroEL, Νάπα, CagA, CagM, Cagδ, HP0231, VacA, ΗραΑ, Cad, HyuA, Omp, HcpC, HP0305). Η multiplex μέθοδος βασίζεται σε μια γλουταθειόνης σύλληψη S-τρανσφεράσης ανοσοπροσροφητικό προσδιορισμό σε συνδυασμό με την τεχνολογία φθορισμού-χάντρα [21], [22]. Ανασυνδυασμένου GST-

H. pylori

πρωτεΐνες σύντηξης χρησιμοποιήθηκαν ως αντιγόνα, φορτώνονται και καθαρισμένο με συγγένεια για φασματικώς διακριτές γλουταθειόνη-καζεΐνη-συζευγμένο (GC) σφαιρίδια πολυστυρολίου με φθορισμό σημασμένο (SeroMap, Luminex, Austin, Texas). Αντισώματα που δεσμεύονται στα σφαιρίδια μέσω του ΟδΤ

H. pylori

πρωτεΐνες σύντηξης κηλιδώθηκαν με βιοτινυλιωμένα αίγας αντι-ανθρώπινο IgA, IgM, IgG (Dianova, Hamburg, Germany) και το προϊόν σύζευξης αναφοράς R-φυκοερυθρίνη στρεπταβιδίνη. Ένα 100 αναλυτή Luminex προσδιόρισε την εσωτερική χρώμα χάντρα και, ως εκ τούτου, το αντιγόνο φέρεται από το σφαιρίδιο. Η ποσότητα των δεσμευμένων αντισωμάτων προσδιορίστηκε ως η μέση ένταση φθορισμού ανταποκριτή (MFI) τουλάχιστον 100 σφαιρίδια ανά σφαιρίδιο που ανά ορού.

Για όλα τα 15 αντιγόνα, το αντιγόνο ειδικές τιμές cut-off προσδιορίζεται σε μια μελέτη επικύρωσης [20] εφαρμόστηκαν από τις τιμές των ΝΧΙ των 20 επιπλέον ορών αρνητική Helicobacter-R-Biopharm ELISA ως μέσος όρος συν 3 τυπικές αποκλίσεις εξαιρουμένων των θετικών ακραίες τιμές. δεδομένα Μελέτη κανονικοποιήθηκε σε αυτή την προηγούμενη μελέτη επικύρωσης διαιρώντας τις αντιδραστικότητες αντισώματος ειδικών για το αντιγόνο από τις κλίσεις των γραμμών παλινδρόμησης των ζευγών δεδομένων ενός πίνακα ορών ελέγχου 77 ποιότητας με καθορισμένη

H. pylori

τρέχει κατάσταση σε αυτό και η προηγούμενη μελέτη επικύρωσης. Όλοι οι οροί αναλύθηκαν σε μία φορά 1:100 αραίωση μέσα σε μια μόνο ημέρα δοκιμασίας.

Η. pylori

ορο-θετικότητα ορίστηκε ως ορο-θετικότητα σε & gt?. 3 πρωτεϊνών, η οποία έδειξε εξαιρετική συμφωνία (kappa = 0,70) με εμπορική ορολογική ταξινόμηση δοκιμασία [20]

ανάλυση Proteome

2D-ΨΗΦΟ Πριν από την ανάλυση δύο διαστάσεων διαφοροποίηση του AIP, PaCa και ορών ελέγχου, ένα στάδιο διαχωρισμού για την εξάλειψη τα 20 πιο γνωστά πρωτεΐνες ορού διεξήχθη για να αποκτήσουν καλύτερη πρόσβαση στις λιγότερο εμφανή πρωτεΐνες ορού. Για το σκοπό αυτό, οι οροί των ασθενών υποβλήθηκαν σε ένα στάδιο ανοσοεξάντληση χρησιμοποιώντας το κιτ ProteoPrep 20 και οδηγό χρήσης (Sigma, Deisenhofen, Γερμανία). Το εξαντλημένο και αραιωμένοι οροί στη συνέχεια προσαρμόζεται στις απαιτούμενες συγκεντρώσεις πρωτείνης από 1,0 mg /ml από το πρωτόκολλο καταβύθισης πρωτεΐνης από Wessel και Flügge, και η πρωτεΐνη ιζήματα ανασυστάθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (8 Μ ουρία, 20 mM Tris, 4% CHAPS, ρΗ 8.5) [23]. Τα δείγματα που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση 2D-ΨΗΦΟ σημάνθηκαν με CyDye ΨΗΦΟ Fluor ελάχιστη χρωστικές (GE Healthcare-GmbH, Freiburg, Γερμανία) πριν από την ανάλυση τζελ 2D. Για το σκοπό αυτό, 50 μg πρωτεΐνης αναμείχθηκαν με 400 pmol CyDye διαλύθηκε σε DMF, στροβιλίζεται, περιστρέφεται, και επωάστηκαν στο σκοτάδι επί πάγου για 30 λεπτά. Η περίσσεια χρωστικής δεσμευόταν με προσθήκη 1 μΙ 10 mM λυσίνη στο μίγμα. Ένα λεπτομερές πρωτόκολλο περιγράφεται στο Εγχειρίδιο Χρήσης Ettan ΨΗΦΟ Σύστημα (GE Healthcare-2005) και [24].

Immobiline DryStrips των 24 cm και ρΗ 3-10 NL (GE Healthcare) παθητικά φορτωμένο με 300 μg των δειγμάτων πρωτεΐνης επαναιωρήθηκαν σε 350 μΐ σε ένα μίγμα από 150 μΙ ρυθμιστικού λύσης (7 Μ ουρία, 2 Μ θειουρία, 4% β /ο CHAPS) και 200 ​​διαλύματος destreak μΐ (2% w /v IPG-αμφολύτη, 2% w /v διθειοθρεϊτόλη DTT). IEF διεξήχθη με σύστημα Ettan IPGphor ΙΕΡ μονάδα (GE Healthcare) και μια κλίση της τάσης έως 8 kV (σύνολο 35,5 KVH). Πριν από τη δεύτερη διάσταση τρέξιμο σε μια σελίδα 15%, οι λωρίδες IPG ήταν σταδιακή εξισορροπήθηκαν για 15 λεπτά σε ένα Tris /HCl ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ 8.8, 6 Μ ουρία, 30% γλυκερόλη, 2% SDS) με 1% DTT, ακολουθούμενη κατά 2,5% ιωδοακεταμίδιο. Ένας δείκτης μοριακού βάρους (SM0671 Sigma) χρησιμοποιήθηκε, και η ηλεκτροφόρηση τρέχει όλη τη νύχτα σε σταθερές 12 W. πηκτώματα σαρώθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σαρωτή Typhoon 9410 (GE Healthcare). Πρωτεΐνη ποσοτικό προσδιορισμό για όλες τις δειγμάτων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση DeCyder 2D 6.5 του λογισμικού (GE Healthcare). Εφαρμόζοντας μια μονάδα DIA, το Cy2 επισημασμένο εσωτερικό πρότυπο επέτρεψαν την εξομάλυνση των πρωτεϊνών σημεία σε όλα τα τζελ. Με τη μονάδα BVA, t-test του Student (ασύζευκτα, δύο tailed) χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό σημαντική (ρ & lt? 0,05) διαφορές σε μία σχετική πρωτεΐνη ποσότητα /επιτόπου σε έξι AIP ορούς σε σύγκριση με έξι PaCa ορούς. Κηλίδες εκεί βρέθηκαν να είναι στατιστικά σημαντικές χαρτογραφήθηκαν και απομονώθηκαν για περαιτέρω διερεύνηση, όπως περιγράφεται παρακάτω.

Αναγνώριση των πρωτεϊνών από τζελ 2D με MALDI-TOF MS.

Μετά την ευθυγράμμιση των πηκτών με άργυρο με τις αντίστοιχες παρασκευαστική τζελ, οι επαναλαμβανόμενες και ταιριάζουν κηλίδες επισημαίνονται με αριθμό ταυτότητας. Τα επιλεγμένα σημεία πρωτεΐνη αποκόπηκαν από τις πηκτές 2D, τοποθετήθηκαν σε επιμέρους σωλήνες ID-επισημασμένο 200 μΙ, και πλύθηκε δύο φορές με 70% ακετονιτρίλιο (ACN), 40 mM ΝΗ

4HCO

3. Μετά από αναγωγή με 10 mM DTT για 1 ώρα στους 56 ° C και αλκυλίωση με 55 ηιΜ ιωδοακεταμιδίου για 30 λεπτά σε RT, τα βύσματα γέλη πλύθηκαν τρεις φορές εναλλάξ με 40 mM ΝΗ

4HCO

3 και αιθανόλη. Μετά από ξήρανση με ακετονιτρίλιο, ένας πέψη με θρυψίνη σε γέλη διεξήχθη με προσθήκη 100 ng τρυψίνης σε 40 mM ΝΗ

4HCO

3 όλη τη νύχτα στους 37 ° C. Τα προκύπτοντα πεπτίδια εκχυλίστηκαν από τα βύσματα γέλη με την προσθήκη 15 μΙ διαλύματος εκχύλισης (1% ACN, 1% μυρμηκικό οξύ).

Για μάζα ταυτοποίηση με φασματομετρία των προϊόντων πέψης θρυπτικού με πεπτιδική μάζα αποτυπωμάτων, τα δείγματα παρασκευάστηκαν για PrespottedAnchorChip (PAC) στόχους, σύμφωνα με το πρωτόκολλο που παρέχεται από τον κατασκευαστή (Bruker-Daltonik, Βρέμη, Γερμανία). α-κυανο-4-υδροξυκινναμωμικού οξέως χρησιμοποιήθηκε ως μήτρα [25]. φάσματα μάζας καταγράφηκαν στον θετικό τρόπο λειτουργίας ανακλαστήρα ιόντων με καθυστερημένη εξόρυξης σε μια Ultraflex Ι ώρα της πτήσης με όργανα (Bruker-Daltonik, Βρέμη, Γερμανία). Ion επιτάχυνση ορίστηκε σε 25,0 kV, τον ανακλαστήρα με 26,3 kV, και την πρώτη πλάκα εκχύλισης σε 21,75 kV. Τα φάσματα μάζας ελήφθησαν με την άθροιση 500-1500 επιμέρους βολές λέιζερ. Η βαθμονόμηση των φασμάτων έγινε εξωτερικά από ένα τετραγωνικό προσαρμόζονται χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο μίγμα βαθμονομήσεως πεπτιδίων που περιέχουν βραδυκινίνη (1-7) σε m /z 757,399, η αγγειοτενσίνη II σε m /z 1046.542, αγγειοτενσίνης Ι σε m /z 1296.685, νευροτενσίνη σε m /z 1672.917, ρενίνης υπόστρωμα στα m /z 1758.933, ACTH κλιπ (1-17) σε m /z 2093.086, ACTH κλιπ (18-39) στα m /z 2465.198, ACTH κλιπ (1-24) σε m /z 2932.588, και κλιπ ACTH (7-38) σε m /z 3657.929. Μεμονωμένα χρεώνονται μονοισοτοπικές μάζες πεπτιδίου χρησιμοποιήθηκαν ως εισροές για την αναζήτηση της βάσης δεδομένων. Αναζητήσεις πραγματοποιήθηκαν με τη βάση δεδομένων NCBInr (κυκλοφόρησε 2009-09-09) χρησιμοποιώντας την μασκότ έκδοση αλγόριθμος αναζήτησης v2.2 (Matrix Science, Λονδίνο, Ηνωμένο Βασίλειο). Taxonomy ήταν θηλαστικά, πρωτεϊνική μάζα περιορίστηκε σε 100 kDa, και ισοηλεκτρικά σημεία αφέθηκαν να κυμαίνεται από 0 έως 14. Carbamidomethylation της κυστεΐνης συμπεριλήφθηκε ως σταθερό τροποποίηση, και η οξείδωση της μεθειονίνης αφέθηκε ως μεταβλητή τροποποίηση. Έως και το ένα έχασε τρυπτική θέση αποκοπής θεωρήθηκε, και η μάζα ανοχή για τις μονοισοτοπικές πεπτίδιο μάζες τέθηκε σε +/- 75 ppm.

ανάλυση ELISA (ELISA)

στερεάς φάσης ELISAs σάντουιτς σύλληψης πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας εμπορικά διαθέσιμα κιτ για την απολιποπρωτεΐνη Α-Ι (ALerCHEK Inc., Πόρτλαντ, Μέιν). Απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ, της απολιποπρωτεΐνης Ε και απτοσφαιρίνης ήταν από AssayPro (AssayPro, St. Charles, MO), tetranectin από USCN Life Science Inc. (Wuhan, ΛΔΚ), και τρανσθυρετίνης από Immundiagnostik AG (Bensheim, Γερμανία). Η απτοσφαιρίνη ELISA από AssayPro είναι επίσης ένα σάντουιτς ELISA αλλά με μια ανταγωνιστική τεχνική ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Οι έξι χρησιμοποιούνται ELISAs ποσοτικοποίηση το άθροισμα όλων των αντιγόνων που δεσμεύουν το αντίσωμα και, ως εκ τούτου, δεν αποκαλύπτουν τη σχετική συμβολή με ισομορφές ή μετα-μεταφραστικά τροποποιημένες μορφές. Όλοι οι οροί αραιώθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή με ρυθμιστικά διαλύματα που παρέχονται ή ρυθμιστικό TBS, και οι δοκιμασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. Υδατάνθρακες αντιγόνο 19-9 (CA 19-9) προσδιορίστηκε σε ορό από ένα σάντουιτς-ανοσολογική δοκιμή με τη χρήση ενός ανοσοπροσδιορισμού ηλεκτροχημειοφωταύγειας (ECLIA, Roche Diagnostics, Mannheim, Germany).

Βιομετρικά ανάλυση

η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με GraphPad Prism 5 λογισμικού (software GraphPad, Inc., San Diego, California, USA) και της SAS έκδοση λογισμικού 9.1 (SAS Institute, Cary, Βόρεια Καρολίνα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

βιομετρικά ανάλυση διεξήχθη για να εξεταστεί η αντοχή του συσχετισμού μεταξύ της μάζας σώματος-δείκτης κλινικές παραμέτρους (ΒΜΙ) και το δείκτη όγκου CA 19-9 με τα επίπεδα του ELISA που βασίζεται επικυρώσεις από τα έξι πρωτεϊνικών δεικτών. Ανάλογα με τον χαρακτήρα των κατανομών των ποσοτικών παραμέτρων σε κάθε ομάδα ο συντελεστής συσχέτισης r με αντίστοιχες ρ-αξία των Pearson και Spearman χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των συσχετισμών. Ο χαρακτήρας των κατανομών των ποσοτικών παραμέτρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Shapiro-Wilk και μια κανονική οικόπεδο πιθανότητα.

Αποτελέσματα

Η ορολογική ανωμαλίες

Δύο κλινικές μορφές διακρίνονται σε ασθενείς που διαγιγνώσκονται με ΑΙΡ: χαρακτηριστεί ως τύπου 1 και τύπου 2. Αναλύσαμε αναλόγως ομάδα μας ασθενή. Ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα του AIP τύπου 1 είναι η ανύψωση της γ-σφαιρίνης και υποσύνολο του, το G4 ανοσοσφαιρίνης (IgG4) επίπεδα ορού? Ως εκ τούτου, αναλύσαμε δείγματα μας για αυτές τις ανωμαλίες. Από τα δείγματα που αναλύθηκαν (n = 32), τρεις ασθενείς χαρακτηρίστηκαν με ανώμαλη συνολικό IgG του & gt? 16 g /l, και 18 δείγματα (59%) έδειξαν αυξημένα επίπεδα IgG4 (ανώτερο όριο 1,4 g /L), που κυμαίνονται μεταξύ 1,8 και 16.6 g /L (Εικ. 2).

τα επίπεδα ορού της IgG και IgG4 προσδιορίστηκαν με αυτοματοποιημένη immunonephelometry, και θεωρούνται αυξημένα όταν ≥16.0 g /l και ≥1.4 g /l αντίστοιχα (διακεκομμένες γραμμές).

H. του πυλωρού και AIP

Από

Helicobacter pylori

μόλυνση έχει συνδεθεί με την παθογένεση του AIP, διερευνήσαμε τη συσχέτιση των αντισωμάτων σε 15 διαφορετικές

H. pylori

πρωτεΐνες σε 32 ΑΙΡ ορούς και σε σύγκριση με άλλες παθήσεις του παγκρέατος και των ελέγχων. Αντισώματος αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με πολλαπλή ορολογικές εξετάσεις βασίζονται σε ανασυνδυασμό εκφράζεται και καθαρισμένο με συγγένεια

H. pylori

πρωτεϊνών σε συνδυασμό με την τεχνολογία φθορισμού χάντρα (Luminex).

Η. pylori

οροθετικότητας ήταν 43,8% στο AIP και 56,9% το CP σε σύγκριση με 64,7% το PaCa, 69,7% σε διαφορετικούς καρκίνους GI και 50,4% σε ελέγχους (που συνοψίζονται στον Πίνακα 1).

Η. pylori

οροθετικούς ασθενείς με ΑΙΡ έδειξαν σημαντικά χαμηλότερη αποκρίσεις αντισώματος σε 3 αντιγόνα (Cagδ, CagA, HP0231) και ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα έως 9 (Cad, Cagδ, CagA, CagM, HP0305, ΗραΑ, HyuA, Omp, και VacA) σε σύγκριση με το

H. pylori

οροθετικούς ασθενείς με άλλους καρκίνους του γαστρεντερικού σωλήνα ως σημείο αναφοράς, με την ύπαρξη μιας σημαντικής αύξησης της δραστικότητας των αντισωμάτων να VacA στο

H. pylori

οροθετικούς ασθενείς με ΑΙΡ και Νάπας σε άτομα με καρκίνο του παγκρέατος. Μεταξύ των ασθενών νόσο του παγκρέατος, τα δεδομένα μας δεν υποστηρίζουν μια σημαντική συσχέτιση του

H. pylori

μόλυνση με AIP

Η

Ορός έκφραση της πρωτεΐνης προφίλ εφαρμογή ανοσοεξάντληση και 2D-ΨΗΦΟ:. Για να βρείτε και να εντοπίσει πιθανούς διαγνωστικούς βιοδείκτες για τη διαφορική διάγνωση της AIP και PaCa, αναλύσαμε οροί από έξι AIP και έξι ασθενείς PaCa σύμφωνα την στρατηγική που παρουσιάζεται στο Σχήμα 1. Για το σκοπό αυτό οι οροί πρώτη ανοσολογικά πρωτεϊνών υψηλής αφθονίας, τότε σημασμένο με βαφές φθορισμού και διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση 2 διαστάσεων γέλη. Η στατιστική ανάλυση των λαμβανομένων εικόνων gel με ένα πακέτο λογισμικού DeCyder αποκάλυψε 39 μεταβλήθηκαν σημαντικά (p & lt? 0,05) πρωτεΐνες μεταξύ AIP και ομάδες PaCa. Οι κηλίδες που ταιριάζουν πρωτεΐνη με την υψηλότερη διαφορική ρύθμιση (n = 14) αποκόπηκαν από παρασκευαστική πηκτώματα 2D-PAGE και υποβλήθηκε σε in-gel τρυπτικής πέψης. Θρυπτικής μιγμάτων πεπτιδίων αναλύθηκαν με MALDI-TOF-MS και προσδιορίζεται από μια αναζήτηση βάσης δεδομένων χρησιμοποιώντας τον αλγόριθμο MASCOT. Μια λίστα με τις προσδιοριζόμενες, διαφορικά ρυθμίζονται πρωτεϊνών στο AIP και PaCa συνοψίζεται στον Πίνακα 2. Ένα σημείο χάθηκε κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας, αλλά αργότερα ταυτοποιήθηκε ως απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ. Για την ταυτοποίηση του, το Cy2 χρώση γέλη ακολούθως άργυρο, η κηλίδα αποκόπηκε, υπέστη πέψη με θρυψίνη και υποβλήθηκε σε ανάλυση φασματομετρία μάζας.

Η

Προσδιορίσαμε απολιποπρωτεΐνη ΑΙ, απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ και τρανσθυρετίνης με αναλογία /PaCa ΑΙΡ των 3, 3,5 και 2, αντιστοίχως. Σε AIP βρήκαμε επίσης αυξημένα επίπεδα ορού για την tetranectin και ανοσοσφαιρίνες, ενώ στην PaCa ορούς, της απολιποπρωτεΐνης Ε και απτοσφαιρίνης (PaCa /αναλογία AIP 1,6 και 3,8 αντίστοιχα) βρέθηκαν αυξημένα.

Διάπλαση της διαφορικής έκφρασης των υποψηφίων βιοδεικτών πρωτεΐνες

Για να αξιολογηθεί η διαγνωστική ακρίβεια των βιοδεικτών υποψηφίων που βρέθηκαν από 2D-ΨΗΦΟ και MS, μετρήσαμε τα επίπεδα της απολιποπρωτεΐνης-AI, απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ, απολιποπρωτεΐνη-Ε, τα επίπεδα τρανσθυρετίνης, tetranectin και απτοσφαιρίνη ορού με εμπορικώς διαθέσιμες ELISA σε μία ομάδα από 32 ΑΙΡ, 30 PaCa, και 30 υγιείς ελέγχους από τυχαία επιλεγμένα δείγματα. Με αυτούς τους προσδιορισμούς ήμασταν σε θέση να διακρίνουν το ορούς AIP από την ομάδα PaCa, και επιβεβαίωσε τις μαζικές αποτελέσματα φασματομετρίας. Με την εξαίρεση της απτοσφαιρίνης (p = 0,1), όλα τα ελεγμένα σημειωτές εδώ αποκάλυψε σημαντικές διαφορές (ρ & lt? 0,05). Το Σχήμα 3 δείχνει τις γραφικές παραστάσεις των αποτελεσμάτων πρωτεΐνης για κάθε ομάδα. Οι τιμές παρουσιάζονται ως μέση με SEM.

Dot οικόπεδα της απολιποπρωτεΐνης Α-Ι, απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ, απολιποπρωτεΐνη Ε, τρανσθυρετίνη, tetranectin, και απτοσφαιρίνη για κάθε ομάδα. Η στατιστική ανάλυση έγινε με GraphPad Prism5 εφαρμογή δοκιμή Mann Whitney (δύο tailed). Οι τιμές που παρουσιάζονται ως μέση τιμή με SEM.

Η

Βιομετρικά ανάλυση

Οι κατηγοριοποιούνται CA 19-9 και ΔΜΣ δεδομένα από τις τρεις ομάδες που παρουσιάζονται στον Πίνακα 3 και στον πίνακα 4 και διανομής εύρος εμφανίζεται ως Θηκόγραμμα-και-whisker στην Εικόνα 4Α. Για να αξιολογηθεί η ισχύς της γραμμικής σύνδεσης μεταξύ των επιπέδων των επικυρώσεων ELISA με βάση με δείκτη μάζας σώματος (ΔΜΣ) και τα επίπεδα του CA 19-9 συντελεστές συσχέτισης για τους έξι δείκτες πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν

Α:. Δείκτη μάζας σώματος και CA 19-9 επίπεδα στο AIP-, PaCa- και ελέγχου-ομάδα που χρησιμοποιούνται στις επικυρώσεις ELISA που βασίζεται. Ο ΔΜΣ και οι τιμές CA 19-9 από τις τρεις ομάδες AIP, PaCa και Ελέγχου παρουσιάζονται ως οικόπεδα box-και-μουστακιού. Συγκρίσεις μεταξύ των τριών ομάδων διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία Kruskal-Wallis και τη συνολική δοκιμή που ακολουθείται από την Mann-Whitney U test για συγκρίσεις κατά ζεύγη. Β: Επαναξιολόγηση των ELISA για τους έξι δείκτες εφαρμογή μιας CA 19-9 αποκοπής & lt? 37 U /ml. Σε σχέση με τους δείκτες 6 πρωτεΐνης οι υποομάδες του AIP και PaCa ορίζεται από ένα CA 19-9 τιμή & lt? 37 U /ml σε σύγκριση με την μονόπλευρη Mann-Whitney δοκιμή u. Σημασία έγινε δεκτή από το επίπεδο του 95%. οικόπεδα κουτί με max, Q3, διάμεσος, Q1 και λεπτά.

Η

Η

Κατά την ανάλυση σύνδεση των έξι δεικτών και BMI μόνο tetranectin αποκάλυψε για τις τρεις ομάδες στο σύνολό τους σε αρνητική συντελεστής συσχέτισης με τιμή r = -0,374 και p = 0.01. Αυτή η αρνητική συσχέτιση ήταν ακόμη πιο έντονη όταν η ομάδα PaCa μόνη αναλύθηκε με r = -0,588 και p = 0,006.

Η ανάλυση σύνδεση των έξι δεικτών και CA 19-9 επίπεδα για τις τρεις ομάδες ως σύνολο αποκάλυψαν μια αρνητική συσχέτιση για την απολιποπρωτεΐνη ΑΙ και τρανσθυρετίνης με συντελεστών συσχέτισης r = -0.388 (p = 0,012) και r = -0.372 (p = 0,0235), αντιστοίχως. Αναλύοντας PaCa μάλλον ένα αρνητικό συντελεστή συσχέτισης βρέθηκε μόνο για απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ με τιμή r = -0,439? αλλά απέτυχε το επίπεδο σημαντικότητας με ρ = 0,08.

Επειδή όλα τα δείγματα AIP έδειξε CA 19.9 επίπεδα ορού κάτω από 37 U /ml συγκρίναμε τα δεδομένα της ELISA με την αντίστοιχη υποομάδα PaCa (n = 21) με CA 19-9 επίπεδα κάτω των 37 U /ml. Η στατιστική ανάλυση έδειξε ακόμη σημαντικές διαφορές για την απολιποπρωτεΐνη Α-Ι, tetranectin και thransthyretin. Η απολιποπρωτεΐνη Α-ΙΙ (p = 0,053) και της απολιποπρωτεΐνης Ε (p = 0,061) απέτυχε ελαφρώς το επίπεδο σημαντικότητας (Εικ. 4Β).

Συζήτηση

Διακριτικά AIP από PaCa μέσω μη επεμβατικές προσεγγίσεις όπως βιοδείκτες ορού, ή απεικόνισης είναι σημαντική, καθώς μέχρι και 11% των ασθενών που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για καρκίνο του παγκρέατος διαγιγνώσκονται να έχουν καλοήθη φλεγμονώδη κατάσταση. Οι ορολογικές δείκτες, όπως αυξημένα γ-σφαιρίνες, ιδιαίτερα IgG4, προτάθηκαν ως καλοί υποψήφιοι για τη διαφορική διάγνωση. Τα αυξημένα επίπεδα IgG4 θεωρείται ως ο πιο ευαίσθητος δείκτης ορού για τη διάγνωση της AIP [18]. Ωστόσο, έχει αποδειχθεί πρόσφατα ότι IgG4 μπορεί επίσης να είναι αυξημένα σε ποσοστό μέχρι 10% των ασθενών PaCa και είναι, ως εκ τούτου, δεν είναι πάντα ειδικά για τη διάκριση ΑΙΡ από PaCa [26]. Επιπλέον, οροαρνητική περιπτώσεις AIP περιγράφηκαν από Γκαζάλε [27].

μας εδώ διερευνηθεί AIP κοόρτης μελέτη έδειξε μόνο το 58% των δειγμάτων με τιμές IgG4 πάνω από 1,4 g /l. Μια ποικιλία αυτοαντισωμάτων μεταξύ τους κατά του πυρηνικού αντιγόνου, λακτοφερίνη ή καρβονικής ανυδράσης II (CAII) έχουν αναφερθεί σε ασθενείς με ΑΙΡ ορούς αλλά κανένα από αυτά είναι γνωστό ότι είναι του IgG4 υποκατηγορίας. Δεν είναι ακόμη σαφές κατά πόσον ο σχηματισμός αυτών των αυτοαντισωμάτων και αυξημένα επίπεδα IgG4 παίζουν παθογόνο ρόλο ή είναι επιφαινόμενα της AIP [28], [29]. Μια ερευνητική ομάδα στην Ιαπωνία πέτυχε στην πρόκληση AIP σε νεογέννητα ποντίκια χωρίς θύμο αδένα με ανοσοποίηση τους με λακτοφερίνη και CAII [30]. Μια άλλη ερευνητική ομάδα ανιχνεύθηκαν αντισώματα έναντι της αμυλάσης α2 στο AIP [31]. Καμία από τις αναφερθεί δείκτες είναι τόσο συγκεκριμένες ώστε να μπορεί να διακρίνει με ασφάλεια μεταξύ του AIP και PaCa.

Μια πιθανή διασύνδεση μεταξύ του

Helicobacter pylori

μόλυνση και AIP έχει αναφερθεί [19]. Αρκετά εργαστήρια πρότεινε ένα μοριακό μιμητισμό ως αιτία, όπου τα αντισώματα που κατευθύνονται προς

H. pylori

πρωτεΐνες δεσμεύονται επίσης σε αλληλουχίες πεπτιδίου σώμα-δικές και επάγουν μια ανοσολογική απόκριση στο πάγκρεας [32] – [36]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, σε μια πρόσφατη εργασία, αποδείχθηκε ότι σε 19 από τους 20 ασθενείς σε διαλογή ΑΙΡ, αυτοαντισώματα έναντι του πλασμινογόνου δέσμευσης πρωτεϊνών από

H. pylori

βρέθηκαν, το οποίο ήταν πιθανόν ένα χρήσιμο ορολογικές δείκτη να διακρίνει AIP από PaCa και CP [19]. Ωστόσο, η εξέταση όλων των ασθενών με ΑΙΡ μας αποκάλυψε μια

H. pylori

οροθετικότητας του 43,8% και ήταν η χαμηλότερη όλων των ομάδων που εξετάστηκαν. Μια εξήγηση για την ασυμφωνία μεταξύ των αποτελεσμάτων των μελετών θα μπορούσε να είναι η γεωγραφικά και περιβαλλοντικά διαφορετική προέλευση των ασθενών. Τα αποτελέσματά μας επιβεβαιώνουν, επίσης, μια προηγούμενη μελέτη, όπου στο πάγκρεας των 11 ασθενών AIP δεν

H pylori

ουρεάσης Α και 16S rDNA εντοπίστηκαν από ένθετη PCR [37].

Ο χαρακτηρισμός των ισοφάρισε και subfractionated ορούς από ΑΙΡ και οι ασθενείς PaCa σε ProteinChip σε μία από προηγούμενες μελέτες μας εφαρμόζοντας την τεχνική SELDI-TOF-MS αποκάλυψε 38 δυνητικούς δείκτες πρωτεΐνη που κυμαίνονται μεταξύ 3,14 και 42,23 kDa [38]. Για την περαιτέρω ανάλυση των αποτελεσμάτων των χαρακτηριστικών που λαμβάνονται με SELDI-TOF-MS, πραγματοποιήσαμε εδώ μια μελέτη 2D-ΨΗΦΟ στην ανοσο απεμπλουτισμένου ορού για τον εντοπισμό των υποψηφίων δείκτης για τη διαφορική διάγνωση των δύο ασθενειών. Συγκρίνοντας το ΑΙΡ και τα δεδομένα έκφρασης πρωτεΐνης PaCa 2D-ΨΗΦΟ χρησιμοποιώντας την ανάλυση DeCyder εικόνα, βρήκαμε σε ορούς ασθενών με ΑΙΡ τρεις φορές υψηλότερα επίπεδα της απολιποπρωτεΐνης ΑΙ, 3,5-φορές υψηλότερα επίπεδα απολιποπρωτεΐνης Α-ΙΙ και δύο φορές υψηλότερα επίπεδα του τρανσθυρετίνη (ΤΘ). Σε AIP βρήκαμε επίσης αυξημένα tetranectin και ανοσοσφαιρίνες, ενώ στην PaCa, της απολιποπρωτεΐνης Ε και απτοσφαιρίνης ήταν υψηλότερες. Παρατηρήσεις σχετικά με μειωμένα επίπεδα της apo AI, apo Α-ΙΙ και ΤΘ σε PaCa και CP σε σύγκριση με φυσιολογικά άτομα έγιναν σε προηγούμενες μελέτες μας [17], [38], [39].

Λόγω του γεγονότος ότι οι εδώ περιγράφονται οι παρατηρήσεις μπορεί να συμβάλει στην καλύτερη διαφορική διάγνωση της AIP και PaCa, πραγματοποιήσαμε ELISA για τα έξι πρωτεΐνες για να επιβεβαιώσετε τα στοιχεία 2D-ΨΗΦΟ /MS και να αξιολογήσει τη συνολική απόδοση τους. Με την εξαίρεση της απτοσφαιρίνης, για την οποία διαπιστώθηκε καμία σημαντική διαφορά, οι αναλογίες μεταξύ των δύο ομάδων έδειξε παρόμοια χαρακτηριστικά αλλά οι αναλογίες ήταν λιγότερο εμφανή. Τα αυξημένα επίπεδα Ε απολιποπρωτεΐνης ορού σε ασθενείς PaCa αξιολογούνται σε αυτή την αρχική μελέτη από 2D-ΨΗΦΟ και ELISA είναι σε συμφωνία με μια πρόσφατη μελέτη είναι Chen et al. APPLING διαφορετικές προσεγγίσεις, συμπεριλαμβανομένων ELISA βρήκαν ένα up-ρύθμιση της απολιποπρωτεΐνης Ε σε PaCa-ιστούς και αυξημένα επίπεδα απολιποπρωτεΐνης Ε σε PaCa ασθενείς ορό [40].

Η ομάδα του AIP και ελέγχου ορών έδειξαν παρόμοιο εύρος κατανομής για οι απολιποπρωτεΐνες, υποδεικνύοντας ότι το περιεχόμενο αυτών των πρωτεϊνών του ορού είναι συγκρίσιμη. Το επόμενο βήμα θα είναι να ελέγξετε αν ο συνδυασμός των καθορισμένων δεικτών μας δίνει τη δυνατότητα να κάνετε μια αξιόπιστη πρόβλεψη σε άγνωστα δείγματα ορών. Επίσης, άλλα εδώ στην μελέτη εντόπισε πρωτεΐνες θα μπορούσαν να ενσωματωθούν σε αυτές τις δοκιμές. Ο λόγος για τα μειωμένα επίπεδα των προαναφερθέντων πρωτεϊνών σε PaCa και CP ορούς, σε σύγκριση με υγιείς εθελοντές ή ΑΙΡ, είναι ασαφές, αλλά υπάρχουν ορισμένες εξηγήσεις. Τόσο CP και ασθενών PaCa πάσχουν από υποσιτισμό και καχεξία διεγείροντας τη σύνθεση των πρωτεϊνών οξείας φάσης στο ήπαρ, αλλά η σύνθεση του απολιποπρωτεϊνών, τρανσθυρετίνης, και ρετινόλη δέσμευσης σταγόνες πρωτεΐνη. Ωστόσο, ο προσδιορισμός της καχεξίας δεν ήταν δυνατόν, όχι δραματική απώλεια βάρους σε ιατρικό ιστορικό του ασθενούς καταγράφηκαν, η πλειοψηφία των ασθενών που αναλύθηκαν έδειξαν εδώ φυσιολογικά ή ελαφρώς αυξημένα ΔΜΣ και μόνο ένας ασθενής PaCa είχαν ΔΜΣ κάτω των 19, όπως φαίνεται στον Πίνακα 4. Η σημαντικές διαφορές των μεμονωμένων πρωτεϊνών που παρατηρήθηκε στη μελέτη μας δείχνουν μια εντελώς διαφορετική αιτιολογία της ΑΙΡ σε μια σελίδα και CP και PaCa από την άλλη.