Abstract

Ιστορικό

Η αγγειογένεση είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη και τη μετάσταση του καρκίνου. Αν και αντι-αγγειογόνοι παράγοντες, ιδίως αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), αναστολείς έχουν επιδείξει δραστικότητα μονού παράγοντα, υπάρχει σημαντικό ενδιαφέρον για το συνδυασμό αυτών των νέων φαρμάκων με συμβατικά αντιδραστήρια χημειοθεραπεία για την επίτευξη βέλτιστου κλινική αποτελεσματικότητα. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει τα οφέλη της θεραπείας συνδυασμού των αγγειακών παγίδα ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF-Trap) με γεμσιταβίνη σε ένα μοντέλο όγκου στους πνεύμονες.

Μέθοδοι

Μια λουσιφεράσης που εκφράζουν Lewis καρκίνωμα του πνεύμονα μοντέλο (LLC) ιδρύθηκε το C57BL /6J ποντίκια και τα ποντίκια που φέρουν όγκο τυχαιοποιήθηκαν σε ομάδες ελέγχου, VEGF-Trap, gemcitabine και VEGF-Trap /ομάδες συνδυασμός γεμσιταβίνης. Η ανάπτυξη του όγκου και η επιβίωση των ζώων παρακολουθήθηκε. Tumor πυκνότητα μικροαγγείων και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων αξιολογήθηκαν με CD31 και Ki-67 ανοσοϊστοχημική ανάλυση. δοκιμασία TUNEL διεξήχθη για την ανίχνευση αποπτωτικών κυττάρων. Τα επίπεδα πρωτεΐνης της κυκλίνης D1, προ-κασπάση-3, Bcl-2, ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 σε εκχυλίσματα όγκων εξετάστηκαν με κηλίδα western.

Αποτελέσματα

το VEGF Trap σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη έδειξε σημαντικά αυξημένη αναστολή της ανάπτυξης του όγκου και παρατεταμένη επιβίωση ποντικών σε σύγκριση με το VEGF-Trap ή μονοθεραπεία γεμσιταβίνη. Η συνδυαστική θεραπεία με VEGF Trap /γεμσιταβίνη όχι μόνο ανέστειλε ισχυρά την αγγειογένεση των όγκων και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, αλλά επίσης αυξημένη κυτταρική απόπτωση εντός των νεοπλασματικών κυττάρων. Επιπλέον, η θεραπεία συνδυασμού αξιοσημείωτα κάτω ρυθμισμένη η έκφραση του πολλαπλασιασμού, αντι-απόπτωση και πρωτεΐνες που σχετίζονται με εισβολή.

Συμπέρασμα

Η συνδυασμένη θεραπεία με τη χρήση VEGF-Trap και gemcitabine αποτέλεσμα τη βελτίωση της κατά του όγκου αποτελεσματικότητα σε ένα μοντέλο καρκίνου των πνευμόνων και VEGF-Trap /συνδυασμός γεμσιταβίνης μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τη θεραπεία του καρκίνου του ανθρώπινου πνεύμονα

Παράθεση:. Zhou S, Yang Υ, Yang Υ, Tao η, Li D, Zhang J, et al. (2013) Θεραπεία συνδυασμού του VEGF-Trap και Γεμσιταβίνη οδηγεί σε βελτιωμένη αποτελεσματικότητα κατά του όγκου σε ένα ποντίκι του καρκίνου του πνεύμονα μοντέλο. PLoS ONE 8 (7): e68589. doi: 10.1371 /journal.pone.0068589

Επιμέλεια: Subhash Gautam, Henry Ford Health System, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 15 του Μάρτη 2013? Αποδεκτές: 6 του Ιουνίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Ιουλίου 2013

Copyright: © 2013 Zhou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τη Σαγκάη «Επιστήμη και Τεχνολογία σχέδιο δράσης για την καινοτομία» ερευνητικό έργο πειραματόζωο (Νο 10140900400), Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 31000527), Σαγκάη Υγεία Γραφείο του Ταμείου έρευνας για νέους ερευνητές (με τον Δρ Shuang Zhou) και πρόγραμμα Μελετητής Χονγκ Κονγκ (Νο XJ2011025). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν τα ακόλουθα συμφέροντα. Junli Zhang απασχολείται από Yantai Rongchang βιοτεχνολογίες, Ltd. Eli Lilly and Company Σαγκάη παρέχονται γεμσιταβίνη (Gemzar) για τη μελέτη αυτή. Δεν υπάρχουν περαιτέρω διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Η αγγειογένεση είναι η διαδικασία των νέων αιμοφόρων αγγείων σχηματισμό από τα υπάρχοντα αγγειακό σύστημα. Είναι μια σημαντική διαδικασία στην ανάπτυξη των κακοήθων όγκων, όπως νεοπλασματικές αλλοιώσεις πρέπει να δημιουργήσουν τη δική τους παροχή αίματος για να αυξηθεί πέρα ​​από 1-2 mm σε διάμετρο [1]. Το κυρίαρχο ρυθμιστής της αγγειογένεσης του όγκου είναι ο αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας (VEGF) [2], [3], η οποία είναι το κλειδί αγγειογόνος παράγοντας που είναι γνωστό ότι είναι παρούσα όλο τον κύκλο ζωής του όγκου [4]. συνεχής έκφραση του, μαζί με τη γενετική σταθερότητα των υποδοχέων του VEGF στα ενδοθηλιακά κύτταρα, κάνει άμεση και συνεχή καταστολή του VEGF σηματοδοτούν μια σημαντική στρατηγική κατά του όγκου [3], [4]. Με το ρόλο της αγγειογένεσης στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου εδραιωθεί, αντι-αγγειογενετική παράγοντες έχουν λάβει πολύ διαδεδομένη προσοχή αλλά η κλινική στρατηγικές για τη βέλτιστη χρήση τους είναι ακόμα υπό ανάπτυξη [5].

Η αντι-αγγειογενετική αγγειακού ενδοθηλιακού παράγοντα παγίδα αυξητικού παράγοντα (VEGF-Trap ή αφλιβερσέπτη) είναι μια μηχανική χιμαιρική πρωτεΐνη που περιέχει την εξωκυτταρική περιοχή 2 του VEGF υποδοχέα-1 (VEGFR-1, Flt-1) και εξωκυτταρική περιοχή 3 του VEGFR-2 (ΚΟΚ) συντηγμένη στο τμήμα Fc ανθρώπινης ανοσοσφαιρίνης G1. VEGF-Trap ισχυρά αποκλείει όλες τις ισομορφές του VEGF-Α και ΡΙΟΡ τόσο ανθρώπου και ποντικού προέλευση [6]. VEGF-Trap ασκεί αντι-αγγειογενετική επιδράσεις της μέσω υποστροφή αγγειακού συστήματος του όγκου [7], [8], ομαλοποίηση των επιζώντων αγγείωσης, και η αναστολή της νέου σκάφους όγκου βλάστησης [9], [10]. Αυτά τα ενθαρρυντικά αποτελέσματα οδήγησαν στην εξέλιξη αυτού του παράγοντα σε κλινικές μελέτες [11], και έχει πρόσφατα εγκριθεί από ΗΠΑ FDA για καρκίνο του παχέος εντέρου [12]. Ωστόσο, είναι απίθανο ότι αντι-αγγειογενετική θεραπείες είναι θεραπευτική μόνοι τους επειδή αντι-αγγειογόνοι παράγοντες οι ίδιοι δεν μπορούν να σκοτώσουν άμεσα τα καρκινικά κύτταρα. Αντίθετα, μεγαλύτερες δυνατότητες τους μπορεί να πραγματοποιηθεί όταν χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με συμβατικές αντικαρκινικές θεραπείες, για παράδειγμα, η χημειοθεραπεία [13], [14]. Αντι-αγγειογένεση επαγόμενη ομαλοποίηση της αγγείωσης του όγκου μπορεί να βελτιώσει την αιμάτωση του όγκου και να οδηγήσουν σε αυξημένη απελευθέρωση χημειοθεραπεία [15] – [18]

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο παγκοσμίως.. Η γεμσιταβίνη είναι ένα ανάλογο δεοξυκυτιδίνης που έχει δείξει αποτελεσματικότητα ως θεραπεία για πολλές συμπαγείς όγκους. Η γεμσιταβίνη έχει συνταγογραφούνται συχνά για τη θεραπεία των ασθενών με καρκίνο μη-μικρών κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC) [19], [20], ωστόσο, τα οφέλη της περιορισμένη, λόγω της χαμηλό ρυθμό απόκρισης ή επίκτητη αντίσταση όγκου.

στην παρούσα μελέτη, προσπαθήσαμε να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας συνδυασμού χρησιμοποιώντας VEGF-Trap και gemcitabine σε ένα μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα LLC ποντίκι, και να ερευνήσει την πιθανή μηχανισμός που ευθύνεται για την αυξημένη αποτελεσματικότητα κατά του όγκου.

Υλικά και Μέθοδοι

ποντίκια και Αντιδραστήρια

C57BL /6J θηλυκά ποντίκια είχαν αγοραστεί από την κινεζική Ακαδημία Επιστημών και στεγάζεται στο κέντρο συντήρησης των ζώων του Πανεπιστημίου Tongji για τουλάχιστον 1 εβδομάδα πριν από την χρήση. Τα πρωτόκολλα που εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων του Πανεπιστημίου Tongji. Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν κάτω από ειδικές συνθήκες άνευ παθογόνων σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος. Το VEGF Trap κατασκευάσθηκε σύμφωνα με Holash και συναδέλφους [8], και εκφράζεται σε ωοθήκης κινέζικου χάμστερ (CHO) κυττάρων μετά από σταθερή διαμόλυνση. Το ανασυνδυασμένο VEGF-Trap καθαρίστηκε με πρωτεΐνη-Α χρωματογραφίας ανταλλαγής ιόντων και συνάφειας και να ανασυσταθεί σε στείρο PBS. Η ποιότητα του VEGF-Trap προσδιορίστηκε με αναγωγική SDS-PAGE. Η δραστικότητα δέσμευσης του ανασυνδυασμένου VEGF-Trap με VEGF ποντικού επιβεβαιώθηκε με ELISA-βάσης άμεση δοκιμασία σύνδεσης. Η πρωτεΐνη αποθηκεύτηκε στους -20 ° C μέχρι τη χρήση του για υποδόρια (SC) χορήγηση σε 1 g /kg. Γεμσιταβίνη (Gemzar) ευγενώς παρέχεται από την Eli Lilly (Indianapolis, Ind., USA) και αποθηκεύτηκαν στους 4 ° C. Σύμφωνα με τις προηγούμενες μελέτες [21], gemcitabine διαλύθηκε σε στείρο PBS για ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) ένεση σε δόση 60 mg /kg.

Κατασκευή του Luciferase εκφράζουν γραμμή όγκου κυττάρων

LLC κύτταρα αδενοκαρκινώματος πνεύμονα ποντικού (CRL-1642) ήταν από την American Type Culture Collection (ATCC), τα οποία πολλαπλασιάζονται σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% ορό απενεργοποιημένο με θέρμανση εμβρυϊκό ορό (GIBCO-BRL), 1 μΜ πυροσταφυλικό νάτριο, 2 mM γλουταμίνη και 100 mg /l πενικιλλίνη, και διατηρήθηκε στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2 στον αέρα. Λουσιφεράσης γονίδιο ενισχύθηκε με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) από ένα πρότυπο cDNA χρησιμοποιώντας ένα έναυσμα: 5′-CAC CGA CTC TAG AGC ΚΕΔ CAC CAT GGA AGA TGC ΥΠΑ ΑΑΑ C και ένα αντίστροφο έναυσμα: 5′-CGG CAA GAT ΚΕΔ CGT GTA ΑΤΑ ACG GTC CGT CGA CAA TCA AC, πλαισιώνεται με θέση περιορισμού Ι και Sal Ι Χ-bal. PCRs διεξήχθησαν με 30 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 30 δευτερόλεπτα, ανόπτηση στους 58 ° C για 45 δευτερόλεπτα, και επέκταση στους 72 ° C για 60 δευτερόλεπτα. Το θραύσμα PCR υποβλήθηκε σε πέψη με Χ-bal Ι και Sal Ι και εισάγεται εντός pRRL-CMV lenti-ιικό πλασμίδιο στο Χ-bal θέση Ι και Sal Ι. Lenti-λουσιφεράσης (lenti-Luc) ιικό φορέα συσκευάστηκε σε κύτταρα 293Τ με διαμόλυνση πλασμιδίων συσκευασίας (Invitrogen) lenti-Luc και. Μετά από 48 ώρες μετά την επιμόλυνση, συλλέχθηκαν τα υπερκείμενα που περιέχουν lenti-Luc ιού. Για ιική μεταγωγή lenti-Luc, τα κύτταρα LLC σπάρθηκαν σε πλάκα 6 φρεατίων και lenti-ιό που περιείχε υπερκείμενα προστέθηκαν στο μέσο (υπερκείμενα: φρέσκο ​​μέσο = 1:01, περίπου 1 × 10

8 ιικά σωματίδια /ml) παρουσία πολυβρενίου (8 μg /ml). Ένας σταθερός κλώνος λουσιφεράσης που εκφράζουν επιλέχθηκε με περιορισμένη αραίωση για τη δημιουργία μιας κυτταρικής γραμμής Luc-LLC. Η δραστικότητα λουσιφεράσης σε κύτταρα Luc-LLC προσδιορίστηκε με Δοκιμασίας Λουσιφεράσης χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης λουσιφεράσης (Beyotime) και απεικόνιση βιοφωταύγειας (Berthold). Περαιτέρω συγκρίσεις της κυτταρικής ανάπτυξης, της μετανάστευσης και του όγκου που σχηματίζουν ικανότητα των κυττάρων LLC και Luc-LLC διεξήχθησαν από ΜΤΤ δοκιμασία, την επούλωση των πληγών και του υποδόριου εκτίμηση μοντέλο όγκου, αντίστοιχα.

Animal Όγκου Μοντέλο και Θεραπεία Ομάδες

Για να εμβολιάσουν όγκων, 2 × 10

6 κύτταρα Luc-LLC επαναιωρήθηκαν σε 200 μΐ μέσου DMEM άνευ ορού και υποδορίως εγχύθηκαν στο δεξί πλευρό του 6 έως 8 εβδομάδων C57BL /6J ποντικούς. Μία εβδομάδα μετά Luc-LLC εμβολιασμό, οι ποντικοί που φέρουν όγκο χωρίστηκαν τυχαία στις ακόλουθες ομάδες (η = 8 ανά ομάδα) με βάση την βιοφωτισμός μετράται μετά τον όγκο απεικόνιση πρώτης και όγκων έφθασε περίπου 100 mm

3: (α) χωρίς θεραπεία ελέγχου (200 μΙ PBS τρεις φορές την εβδομάδα με ενδοπεριτοναϊκή ένεση)? (Β) το VEGF Trap μόνο (1 g /kg τρεις φορές την εβδομάδα με υποδόρια ένεση)? μόνο (γ) Η γεμσιταβίνη (60 mg /kg τρεις φορές την εβδομάδα με ενδοπεριτοναϊκή ένεση)? (Δ) το VEGF Trap /Γεμσιταβίνη συνδυασμός (VEGF-Trap 1g /kg τρεις φορές την εβδομάδα με υποδόρια ένεση, και gemcitabine 60 mg /kg τρεις φορές την εβδομάδα με ενδοπεριτοναϊκή ένεση). Η θεραπεία συνεχίστηκε για 2 εβδομάδες στη συνέχεια. Το μέγεθος του όγκου παρακολουθήθηκε κάθε δεύτερη ημέρα για 15 ημέρες με ένα παχύμετρο βερνιέρου μετά την έναρξη της θεραπείας. Οι όγκοι των όγκων προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο: Όγκος (mm

3) =

μια

×

β

2 × 0.5, όπου

μια

είναι η μεγάλη διάμετρος και

b

είναι η μικρή διάμετρος όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SE. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε απεικόνιση την ημέρα 12 μετά την έναρξη της θεραπείας. Την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας, τα ποντίκια σε όλες τις ομάδες θυσιάστηκαν. Οι όγκοι ζυγίστηκαν και οι φωτογραφίες τραβήχτηκαν μετά την ανατομή. Το ήμισυ του ιστού όγκου καθορίστηκε σε υπεριωδικό-λυσίνη-παραφορμαλδεϋδη (PLP) και O.C.T (Sakura Finetek) ενσωματωμένα για ανοσοϊστοχημεία. Το άλλο μισό ήταν καταψύχθηκαν ακαριαία σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. ανάλυση καμπύλης επιβίωσης έγινε σε μια ανεξάρτητη ομάδα θεραπείας. θάνατος του ποντικιού προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα προκαθορισμένο κριτήριο.

Η βιοφωταύγεια Imaging

in vivo

Η

Η απεικόνιση βιοφωταύγεια πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα απεικόνισης ζώων (Nightowl LB 983 Σύστημα Μοριακής Απεικόνισης , Berthold). Οι ποντικοί εγχύθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση 150 mg /kg D-λουσιφερίνη άλας καλίου (δαγκάνας Life Sciences) σε 200 μλ DPBS. Μετά από 5 λεπτά λουσιφερίνης ένεση, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν μέσω ενδοπεριτοναϊκής ένεσης πεντοβαρβιτάλης (50 mg /kg). Κάθε ποντικός τοποθετήθηκε σε ένα αριστερό πλευρική θέση κατάκλισης και ένα ψηφιακό κλίμακα του γκρι ζώο εικόνα αποκτήθηκε, ακολουθούμενη από την απόκτηση και επικάλυψη μιας εικόνας ψευδοχρωμάτων αντιπροσωπεύει τη χωρική κατανομή των φωτονίων ανιχνεύεται αναδύεται από ενεργό λουσιφεράσης εντός του ζώου. Ο χρόνος έκθεσης κυμαίνονταν από 10 έως 30 δευτερόλεπτα, ανάλογα με την ένταση της εκπομπής βιοφωταύγειας από τα κύτταρα του όγκου. Φωτονίων που εκπέμπονται από συγκεκριμένες περιοχές είχαν προσδιοριστεί ποσοτικά χρησιμοποιώντας ένα λογισμικό IndiGo (Berthold). Περιοχές ενδιαφέροντος (ROI) καταρτίστηκαν γύρω από τις περιοχές του όγκου και ποσοτικά ως μετρήσεις φωτονίων ανά δευτερόλεπτο.

Η ανοσοϊστοχημεία

ιστούς όγκων μονιμοποιήθηκαν σε PLP, ενσωματωμένα σε ΥΧΕ, και κόβεται σε 10 μm τομές . Στη συνέχεια, οι τομές βάφτηκαν με ειδικά αντισώματα για ανάλυση.

Για την ανάλυση της πυκνότητας μικροαγγείων, τομές όγκων βάφτηκαν με ένα αντι-ποντικού CD31 αντίσωμα αρουραίου (BD Pharmingen) ακολουθούμενο από FITC-συζευγμένο IgG αντι-αρουραίου κουνελιού (Invitrogen ). Cellular πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με DAPI (Sigma-Aldrich). Η ποσοτικοποίηση της πυκνότητας μικροαγγείων (MVD) προσδιορίστηκε σύμφωνα με την μέθοδο του Weidner et al. [23]. Εν συντομία, οι τομές πρώτον προβληθεί σε χαμηλές μεγεθύνσεις (× 40 και × 100) για τον προσδιορισμό της πιο αγγειακή περιοχή του όγκου (hot spot). Εντός της περιοχής hot spot, το χρωματισμένο μικροαγγείων μετρήθηκε σε ένα ενιαίο υψηλής ισχύος (Χ 400) πεδίο. MVD εκφράστηκε ως ο αριθμός των μικροαγγείων /πεδίου. Οποιεσδήποτε CD31-χρώση ενδοθηλιακών κυττάρων ή συστάδων των ενδοθηλιακών κυττάρων που διαχωρίστηκαν καθαρά από τα γειτονικά μικροαγγείων, τα καρκινικά κύτταρα, ή στοιχεία συνδετικού ιστού θεωρήθηκε μια ενιαία μετρήσιμη μικροαγγείων.

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκτελέστηκε στις παγωμένες τομές των όγκων με ένα αντι-ποντικού Ki-67 αντίσωμα αρουραίου (Biolegend) ακολουθούμενο από FITC-συζευγμένο IgG αντι-αρουραίου κουνελιού (Invitrogen). Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως το ποσοστό του Ki-67 θετικών κυττάρων ± SEM ανά × 400 μεγέθυνση. Ένα σύνολο δέκα × 400 πεδία εξετάστηκαν και μετρήθηκαν από τρείς όγκους σε κάθε μια από τις ομάδες θεραπείας. Ο δείκτης πολλαπλασιασμού Ki-67 υπολογίστηκε σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο: ο αριθμός των Ki-67 θετικών κυττάρων /ο συνολικός αριθμός κυττάρων χ 100%

TUNEL Δοκιμασία

In situ.

ανίχνευση των αποπτωτικών κυττάρων στον ιστό του όγκου πραγματοποιήθηκε με την τεχνική τερματικό δεοξυνουκλεοτιδυλοτρανσφεράσης μεσολάβηση τέλος επισήμανση dUTP nick (TUNEL) με τη χρήση ενός εμπορικά διαθέσιμου κιτ ανίχνευσης απόπτωσης (Beyotime) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. TUNEL θετικά κύτταρα από 10 ανεξάρτητα πεδία ποσοτικοποιήθηκαν με το χέρι. Ο δείκτης απόπτωσης υπολογίζεται σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο:. Ο αριθμός των αποπτωτικών κυττάρων /συνολικό αριθμό των εμπύρηνων κυττάρων χ 100%

Ανάλυση Western Blot

ιστούς όγκου την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας ήταν ομογενοποιούνται με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (RIPA) (50 mM Tris-HCl, ρΗ 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.1% SDS, 1% Triton Χ-100, 1% δεοξυχολικό νάτριο, 1 mM PMSF, 10 mg /ml απροτινίνη , 10 mg /ml λευπεπτίνη) επί πάγου. Μετά από φυγοκέντρηση στις 14.000 rpm στους 4 ° C για 30 λεπτά, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν και ολικές συγκεντρώσεις πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν με δοκιμασία BCA (Pierce). Ίσες ποσότητες μετουσιωμένες πρωτεΐνες φορτώθηκαν σε 10% γέλη SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη PVDF (Millipore). Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο γάλα σε TBST (1 χ TBS που περιέχει 0.1% Tween 20) και στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα αντι-ποντικού για CyclinD1, προ-κασπάση-3, Bcl-2, ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 (όλα από την Santa Cruz Biotechnology) όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Μετά από πλύση με TBST τρεις φορές, συζευγμένο με HRP δεύτερα αντισώματα συνδέθηκαν και πραγματοποιήθηκαν με χημειοφωταύγεια χρησιμοποιώντας υπόστρωμα SuperSignal West Pico (Pierce). εντάσεις μπάντα ήταν ποσοτικά με τη χρήση του λογισμικού Band Leader.

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μονόδρομη ANOVA ή

t

test του Student, ανάλογα με την περίπτωση.

*

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική και

**

P

& lt?. 0.01 θα ήταν εξαιρετικά στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Ίδρυση LLC όγκου Μοντέλο σταθερή έκφραση λουσιφεράσης

Για την καλύτερη ανάπτυξη της οθόνης και μετάσταση όγκου

in vivo

, κατασκευάσαμε κυτταρικές σειρές LLC με την έκφραση σταθερή λουσιφεράσης και υποδορίως εμβολιασμένα κύτταρα Luc-LLC σε C57BL /6J ποντικούς. Οι όγκοι μετρήθηκαν και απεικονίστηκαν στις ημέρες 7, 14 και 21 μετά τον εμβολιασμό του όγκου. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α και Β, η ανάπτυξη του όγκου Luc-LLC οπτικοποιήθηκε με βιοφωταύγεια απεικόνισης και τα φωτόνια που εκπέμπονται από συγκεκριμένες περιοχές προσδιορίστηκαν ποσοτικά χρησιμοποιώντας ένα λογισμικό IndiGo, το οποίο ήταν σύμφωνο με την καμπύλη ανάπτυξης του όγκου (Σχήμα 1 C). Δεν παρατηρήθηκε διαφορά μεταξύ Luc-LLC και τα κύτταρα LLC ευρεσιτεχνίας στην κυτταρική μορφολογία, τη μετανάστευση και την ανάπτυξη

in vitro

, καθώς και την ικανότητα σχηματισμού όγκου

in vivo

(Εικόνα S2). Διαφορετικά σχήματα αγωγής αντιπροσωπεύθηκαν στο Σχήμα 1D

(Α) Η βιοφωταύγεια εικόνες των όγκων LLC την ημέρα 7, 14 και 21 μετά Luc-LLC υποδόριο εμβολιασμό (n = 6).? (Β) Οι μετρήσεις των φωτονίων ανά δευτερόλεπτο που απεικονίζει τους όγκους των όγκων των ποντικών χρησιμοποιώντας το λογισμικό ανάλυσης απεικόνισης IndiGo,

*

P

& lt? 0,05,

**

P

& lt? 0.01

vs

ημέρα 7? (Γ) καμπύλη ανάπτυξης όγκου από την ημέρα 5 έως 25 μετά Luc-LLC υποδόριο εμβολιασμό (n = 6),

*

P

& lt? 0,05,

**

P

& lt? 0,01

vs

ημέρα 5? (Δ) Σχηματική αναπαράσταση του πρωτοκόλλου πείραμα που περιγράφεται στο υλικά και μέθοδοι, τα ζώα χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες: (α) Ο έλεγχος? (Β) το VEGF Trap και μόνο? (Γ) Η γεμσιταβίνη μόνη της? (Δ) Συνδυασμός των VEGF-Trap και γεμσιταβίνη.

Η

Επιπτώσεις του VEGF-Trap σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη στη LLC όγκοι

Για να διερευνήσουν τις θεραπευτικές επιδράσεις της θεραπείας συνδυασμού του VEGF-Trap και gemcitabine για την ανάπτυξη των όγκων LLC, C57BL /6 ποντίκια που φέρουν όγκους LLC χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες θεραπείας, όπως περιγράφεται παραπάνω. VEGF-Trap παρασκευάστηκε όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. Το καθαρισμένο VEGF-Trap έδειξε ως μονή ζώνη με ένα φαινομενικό μοριακό βάρος 50 kD (Εικόνα S1A) και επέδειξε μία ισχυρή δραστικότητα δέσμευσης με VEGF ποντικού όπως προσδιορίζεται με μία δοκιμασία άμεσης σύνδεσης (Σχήμα S1B). Όταν οι όγκοι των όγκων έφθασε περίπου 100 mm

3, ξεκίνησε η θεραπεία. Την ημέρα 6 μετά τη θεραπεία αρχική αγωγή, VEGF-Trap και συνδυασμός γεμσιταβίνης έδειξε σημαντικές ανασταλτικές επιδράσεις στην ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Παρά το γεγονός ότι το VEGF Trap ή γεμκιταβίνη μόνος επίσης ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου, η θεραπεία συνδυασμού οδήγησε σε ένα πιο εύρωστο αναστολή στην ανάπτυξη του όγκου και είχε την πιο σημαντική καθυστέρηση στην ανάπτυξη του όγκου, όπως προσδιορίζεται με τον όγκο του όγκου την ημέρα 9, 12 και 15 μετά την αρχική θεραπεία ( Σχήμα 2C,

P

& lt? 0,01, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου). ανάλυση απεικόνισης βιοφωτισμός από LLC όγκων κατά την ημέρα 12 μετά την έναρξη της θεραπείας επιβεβαίωσε την αντικαρκινική δράση (Σχήμα 2Α και Β). Σημαντικές διαφορές σε μεγέθη και βάρος όγκου παρατηρήθηκαν κατά την ημέρα 15 όταν η θεραπεία διεκόπη και οι όγκοι ανατμήθηκαν (Εικόνα 2D και Ε). Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά στο μέγεθος του όγκου βρέθηκε μεταξύ του VEGF-Trap και μονοθεραπεία γκεμσιταμπίνης ομάδες. Έτσι, η θεραπεία συνδυασμού του VEGF-Trap και gemcitabine αυξημένη αποτελεσματικότητα κατά του όγκου σε μοντέλο όγκου LLC. Ομοίως, η αυξημένη αναστολή της ανάπτυξης του όγκου στη συνδυαστική θεραπεία μεταφράστηκε σε παρατεταμένη επιβίωση των ζώων σύμφωνα με την ανάλυση Kaplan-Meier και οι ποντικοί που λαμβάνουν την θεραπεία συνδυασμού παρέμεινε σε ποσοστό επιβίωσης 100% μέχρι το τέλος της περιόδου παρατήρησης (Σχήμα 2F) .

(Α) η βιοφωταύγεια εικόνες του υποδόριου εμβολιασμένου όγκων LLC την ημέρα 12 μετά την έναρξη της θεραπείας? (Β) ανάλυση απεικόνισης (φωτόνια ανά δευτερόλεπτο) που απεικονίζει τους όγκους όγκων ποντικών χρησιμοποιώντας το λογισμικό ανάλυσης απεικόνισης IndiGo? (Γ) Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε την ημέρα 3, 6, 9, 12,15 μετά την έναρξη της θεραπείας? (D) Αντιπροσωπευτική φωτογραφίες όγκου την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας? (Ε) βάρη των όγκων μετρήθηκαν κατά την ημέρα 15, όταν οι όγκοι συλλέχθηκαν? καμπύλες (F) επιβίωσης κατασκευάσθηκαν σύμφωνα με την ανάλυση Kaplan-Meier. n = 8 για κάθε ομάδα, *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt?. 0.01

vs

την ομάδα ελέγχου

Η

Αναστολή όγκου αγγειογένεση και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό

LLC όγκους από όλες τις ομάδες θεραπείας συλλέχθηκαν την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας και παρασκευάστηκαν για μελέτες immunehistochemistry όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Η αγγειογένεση εντός του ιστού του όγκου αξιολογήθηκε μετρώντας την πυκνότητα μικροαγγείων ακόλουθη ανοσοϊστοχημική χρώση για CD31. Η θεραπεία με VEGF-Trap ή τη θεραπεία συνδυασμού οδήγησε σε μια προφανή αναστολή της αγγειογένεσης σε όγκους σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Οι μέσες μετρήσεις σκάφος ανά πεδίο υψηλής ισχύος σε VEGF-Trap ή συνδυασμός ομάδας ήταν σημαντικά χαμηλότερες (

P

& lt? 0,01) από ότι με την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 3Α και Β). Παρά το γεγονός ότι υπήρξε μια στατιστικά σημαντική σε μικροαγγειακή πυκνότητα, μπορούμε επίσης να σημειωθεί ότι οι όγκοι γεμσιταμπίνη αγωγή έδειξε μια ισχυρότερη CD31-θετικά περιοχή από τους όγκους στην ομάδα της θεραπείας συνδυασμού.

(Α) Εκπρόσωπος εικόνες των CD31-θετικών μικροαγγείων περιοχή και Κί67-θετικών κυττάρων στις βιώσιμους ιστούς LLC όγκου την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας εκτιμήθηκαν με την ανοσοϊστοχημική χρώση? (Β) και (Γ) πυκνότητα μικροαγγείων και το ποσοστό των Κί67-θετικών κυττάρων προσδιορίστηκαν μετρώντας τον αριθμό των θετικών χρώσης ανά πεδίο υψηλής ισχύος στο τμήμα, όπως περιγράφεται στο «Υλικά και Μέθοδοι». *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01

vs

την ομάδα ελέγχου. Ράβδος κλίμακας, 50 μm.

Η

Για να εξεταστεί πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ιστούς όγκων μετά τη θεραπεία, κατεψυγμένα τμήματα των όγκων χρωματίστηκαν με Ki-67 αντισώματος και του δείκτη πολλαπλασιασμού Ki-67 υπολογίστηκε με βάση την ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Ο δείκτης πολλαπλασιασμού Ki-67 έδειξε μία 8-φορές μείωση σε VEGF-Trap και ομάδα συνδυασμού γεμσιταβίνη σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 3Α και C), υποδηλώνοντας μια σημαντική καταστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων όγκου σε ομάδες θεραπείας.

Αύξηση του όγκου των κυττάρων απόπτωση

για να διερευνήσουν περαιτέρω το μηχανισμό των συνδυασμένων επιπτώσεων του VEGF-Trap και γεμσιταβίνη σε όγκους LLC, μια δοκιμασία TUNEL διεξήχθη για να μελετήσει την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α και Β, η δοκιμασία TUNEL αποκάλυψε μια αξιοσημείωτη αύξηση στην απόπτωση εντός ιστούς όγκων από την ομάδα θεραπείας συνδυασμού (

P

& lt? 0,01)., Σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες

(Α) Cell απόπτωση εκτιμήθηκε με χρώση TUNEL, οι αντιπροσωπευτικές τομές ιστών όγκου LLC ελήφθησαν από ποντικούς την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας? (Β) Το αποπτωτικό δείκτη προσδιορίστηκε όπως περιγράφεται στο «Υλικά και μέθοδοι». *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01

vs

την ομάδα ελέγχου. Κλίμακα bar, 50 μm.

Η

κάτω ρύθμιση έκφρασης της διάδοσης των πυρηνικών όπλων, αντι-απόπτωση και εισβολή Σχετικές Πρωτεΐνες

Αφού διαπιστώθηκε τις αλλαγές στην πυκνότητα μικροαγγείων, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και του δείκτη απόπτωσης σε απάντηση για το VEGF Trap και συνδυασμού γεμκιταβίνης θεραπεία, έχουμε δίπλα προσπάθησε να ερευνήσει την πιθανή μηχανισμός των συνδυασμένων επιδράσεων που παρατηρούνται στο μοντέλο όγκου

in vivo

αξιολογώντας την έκφραση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού (Κυκλίνη D1), αντι-απόπτωση ( προ-κασπάση-3, Bcl-2), και εισβολή (ΜΜΡ2, ΜΜΡ9) που σχετίζονται με πρωτεΐνες χρησιμοποιώντας κηλίδα western. Στα εκχυλίσματα από όγκους LLC την ημέρα 15 μετά την έναρξη της θεραπείας, η κυκλίνη D1, προ-κασπάση, Bcl-2, ΜΜΡ2 και η έκφραση ΜΜΡ9 είχαν κάτω-ρυθμίζονται το VEGF Trap και ομάδα συνδυασμού γεμσιταβίνη σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (

P

& lt? 0,01). Αποτελέσματα κηλίδος Western επιβεβαίωσε ότι το VEGF Trap ή μονοθεραπεία γεμσιταβίνη μπορούσε ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση όλων αυτών των πρωτεϊνών, αλλά η συνδυαστική θεραπεία ενισχυθεί περαιτέρω αυτά τα αποτελέσματα (Σχήμα 5Α και Β). Αυτά τα δεδομένα ήταν συνεπή με τα αποτελέσματα από ανοσοϊστοχημική ανάλυση και δοκιμασία TUNEL (Εικόνα 3, Εικόνα 4).

(Α) ανάλυση κηλίδας Western έδειξε ότι ο VEGF-Trap σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη ανέστειλε την έκφραση της κυκλίνης D1, Pro- Caspase-3, Bcl-2, ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 σε όγκους LLC? (Β) Ποσοτικοποίηση των επιπέδων της πρωτεΐνης. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Πυκνότητας ποσοτικοποίησης ήταν σε σχέση με τα πρώτα στοιχεία που σε κάθε περίπτωση (που υποδεικνύεται από την τιμή 1). Όλα τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον δύο ανεξάρτητα πειράματα. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt?. 0.01

vs

την ομάδα ελέγχου

Η

Συζήτηση

η αγγειογένεση είναι μια αυστηρά ρυθμιζόμενη διαδικασία, που περιλαμβάνει μια δυναμική ισορροπία μεταξύ διεγερτικών και ανασταλτικών σημάτων. Η αγγειογένεση λαμβάνει χώρα όταν η ισορροπία μεταξύ αγγειογενετική διεγερτών και αναστολέων είναι υπέρ της διέγερσης [24]. Ο αποκλεισμός του κλειδιού αγγειογόνου διεγέρτη, VEGF, είναι ένα αποτελεσματικό μέσο για την αναστολή της αγγειογένεσης σε μοντέλα όγκων σε ζώα [25], [26]. Ωστόσο, αντι-VEGF μονοθεραπεία έχει περιορισμένη κλινικά οφέλη για τους ασθενείς με καρκίνο και σε υψηλή δοσολογία μπορεί συχνά να οδηγήσει σε διάφορες ανεπιθύμητες ενέργειες όπως υπέρταση, πρωτεϊνουρία, θρομβώσεις, και GIP [27], [28]. Ως εκ τούτου, απαιτείται περαιτέρω έρευνα για τη μεγιστοποίηση της επίδρασης κατά του όγκου ενώ ελαχιστοποιεί τον αριθμό των παρενεργειών από αντι-αγγειογενετική θεραπεία.

Αύξηση απόδειξη έχει προτείνει ότι ο συνδυασμός των αναστολέων αγγειογένεσης με χημειοθεραπεία που παράγονται καλύτερα θεραπευτικά αποτελέσματα στην θεραπεία του καρκίνου [29] – [35]. Μία κλινική δοκιμή φάσης ΙΙΙ έδειξαν ότι ο συνδυασμός των αντι-νΕΟΡ μονοκλωνικού αντισώματος bevacizumab με καρβοπλατίνη-πακλιταξέλη βελτίωσε σημαντικά τη συνολική επιβίωση (OS) σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε σύγκριση με τη χημειοθεραπεία μόνο [36]. Έτσι, είναι κλινικά σχετικό να διερευνήσει περισσότερους συνδυασμούς μεταξύ αντι-αγγειογόνοι παράγοντες και θεραπευτικές αγωγές χημειοθεραπείας για περισσότερες θεραπευτικές επιλογές.

Λαμβάνοντας υπόψη την ευρεία χρήση της γεμσιταβίνης στην αντιμετώπιση του NSCLC, είναι σημαντικό να καθοριστεί εάν ο συνδυασμός των ένα αντι-αγγειογόνο παράγοντα με γεμσιταβίνη μπορεί να παράγει κλινικό όφελος. Πρόσφατα, μια μελέτη φάσης ΙΙΙ (Διαθ δίκη) που σε σύγκριση με bevacizumab συν σισπλατίνη γεμσιταβίνη να chemocherapy (σισπλατίνη γεμσιταμπίνη) έδειξε βελτιωμένη επιβίωση πρόοδος-free, αλλά όχι τη συνολική επιβίωση [37]. Παραμένει μια πρόκληση να επεκτείνει τη συνολική επιβίωση των ασθενών στην κορυφή της θεραπείας γεμσιταβίνης.

το VEGF Trap είναι ένα χιμαιρικό VEGF δόλωμα πρωτεΐνη σύντηξης υποδοχέα-Ρο και έχει πρόσφατα εγκριθεί από ΗΠΑ FDA για μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου [12]. Σε σύγκριση με bevacizumab, VEGF-Trap είναι ένας πιο ισχυρός αναστολέας της αγγειογένεσης λόγω του υψηλότερου συγγένειά του με το VEGF. Επιπλέον, το VEGF Trap μπορούν επίσης να μπλοκάρουν ΡΙΟΡ η οποία είναι επίσης ένα προ-αγγειογόνος παράγοντας. Έτσι, θα ήταν ενδιαφέρον να αξιολογηθεί αν ο συνδυασμός του VEGF-Trap και gemcitabine μπορεί να οδηγήσει σε μια πιο αποτελεσματική θεραπεία για τον καρκίνο του πνεύμονα.

Στην παρούσα μελέτη, υποθέσαμε ότι μια συνδυαστική θεραπεία που αποτελείται από VEGF-Trap και gemcitabine θα μπορούσε να επιτευχθεί βελτιωμένη αποτελέσματα κατά του όγκου. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, εξετάσαμε τα θεραπευτικά αποτελέσματα αυτής της θεραπείας συνδυασμού σε ένα μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα LLC. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η θεραπεία συνδυασμού με το VEGF Trap και gemcitabine παρείχε περισσότερες θεραπευτικά οφέλη από κάθε επιμέρους τροπικότητα. Η συνδυασμένη θεραπεία είχαν σημαντικά υψηλότερες ανασταλτικές επιδράσεις στην ανάπτυξη του όγκου και παρατεταμένη επιβίωση, όχι μόνο την αναστολή της αγγειογένεσης του όγκου και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αλλά και την αύξηση της κυτταρικής απόπτωσης εντός των νεοπλασματικών κυττάρων.

Για να διερευνηθεί η πιθανή μηχανισμό βασίζεται η βελτιωμένη αντι- αποτελεσματικότητα όγκου στο συνδυαστική θεραπεία VEGF-Trap και gemcitabine, εκχυλίσματα ιστού όγκου μελετήθηκαν με κηλίδα western για έκφραση πρωτεΐνης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο VEGF-Trap ή γεμκιταβίνη μόνο του κάτω ρυθμισμένα την έκφραση του πολλαπλασιασμού (Κυκλίνη D1), αντι-απόπτωση (προ-κασπάση-3, Bcl-2), και εισβολή (ΜΜΡ2, ΜΜΡ9) που σχετίζονται με τις πρωτεΐνες, αλλά ο συνδυασμός θεραπεία είχε ως αποτέλεσμα μια πιο σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω αυτών των δεικτών σε σύγκριση με τις ομάδες μονοθεραπείας. Αυτά τα δεδομένα ήταν συνεπή με τα αποτελέσματα από ανοσοϊστοχημική ανάλυση και δοκιμασία TUNEL, υποστηρίζοντας την ιδέα ότι η συνδυαστική θεραπεία του VEGF-Trap και gemcitabine μπορεί να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα κατά του όγκου.

Η υψηλή ισχύς αναστολής VEGF από το VEGF Trap μάρκες ο παράγοντας αυτός αποτελεί ιδανικό συνεργάτη για συνδυασμό με τις προσεγγίσεις που στοχεύουν σε άλλους μηχανισμούς της εξέλιξης του όγκου. Σε κλινικές, θεραπεία VEGF-Trap μπορεί να προσφέρει επιπλέον οφέλη μέσω ομαλοποίηση του αγγειακού συστήματος του όγκου, η οποία μειώνει την ενδιάμεση πίεση και το δοχείο διαπερατότητα και αυξάνει την παράδοση και άλλων παραγόντων μέσα στους ιστούς του όγκου, η οποία μπορεί να καταστήσει τα καρκινικά κύτταρα πιο ευαίσθητα στη χημειοθεραπεία [38] – [40]. Ο συνδυασμός της συνεχούς αναστολής VEGF από το VEGF Trap με άλλους τρόπους θεραπείας μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πιο βέλτιστη θεραπευτική επιλογή σε ορισμένους τύπους όγκων.

Τα αποτελέσματα μας πρότειναν ότι ο συνδυασμός του VEGF-Trap και gemcitabine μπορεί να είναι μια πιο αποτελεσματική εναλλακτική λύση για τον καρκίνο του πνεύμονος ανθρώπου, τα οποία μπορούν να αποτελέσουν τη βάση μιας σκεπτικό για ανθρώπινες κλινικές μελέτες για τη διερεύνηση τα οφέλη της θεραπείας συνδυασμού του VEGF-Trap και gemicitabine στον καρκίνο του πνεύμονα.

εν κατακλείδι, η συνδυαστική θεραπεία του VEGF -Trap και gemcitabine αποτέλεσμα τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας κατά του όγκου στο μοντέλο LLC όγκου. Η συνδυαστική θεραπεία ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου και παρατεταμένη επιβίωση των ζώων μέσω κατέστειλε την αγγειογένεση των όγκων και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, καθώς και η αυξημένη κυττάρου όγκου απόπτωση. VEGF-Trap θεραπεία συνδυασμού /γεμσιταβίνη θα μπορούσε να παρουσιάσει μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τον καρκίνο του πνεύμονα ανθρώπου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Η ποιότητα και η δράση του VEGF-Trap. (Α) Η ποιότητα του VEGF-Trap προσδιορίστηκε με αναγωγική SDS-PAGE για να δείξει ως μονή ζώνη με ένα φαινομενικό μοριακό βάρος 50 kD? (Β) το VEGF Trap παρουσίασαν ισχυρή δεσμευτική δραστηριότητα VEGF ποντίκι, όπως επιβεβαιώνεται από μια δοκιμασία άμεσης σύνδεσης

doi:. 10.1371 /journal.pone.0068589.s001

(TIFF)

Εικόνα S2.

Σύγκριση των βιολογικών χαρακτηριστικών των κυττάρων LLC και Luc-LLC. κυτταρική μορφολογία και τη μετανάστευση (Α), ανάπτυξη (Β), και την ικανότητα σχηματισμού όγκου (C) των κυττάρων LLC και Luc-LLC διεξήχθησαν από την επούλωση των πληγών, ΜΤΤ δοκιμασία και υποδόρια εκτίμηση μοντέλο όγκου, αντίστοιχα, οι οποίες έδειξαν καμία διαφορά μεταξύ της διαγονιδιακό και μη διαγονιδιακά κύτταρα. μπαρ κλίμακα, 200 μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0068589.s002

(TIFF)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Eli Lilly and Company στη Σαγκάη για την ευγενική παροχή γεμσιταβίνη (Gemzar).