Αφηρημένο

Εισαγωγή

γκαλεκτίνη-9 (Gal-9) προκαλεί προσκόλληση και συσσώρευση ορισμένων τύπων κυττάρων και αναστέλλει τη μετάσταση των καρκινικών κυττάρων. Τ-κυττάρων με ανοσοσφαιρίνη και βλεννίνης μόριο domain-3 που περιέχει 3 (ΤΙΜ-3) παίζει έναν κεντρικό ρόλο στην ανοσολογική ρύθμιση. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης είναι η διερεύνηση Gal-9 και TIM-3 αλλαγές στο γαστρικό καρκίνο και προγνωστική αξία τους.

Μέθοδοι

Gal-9 και την έκφραση Tim-3 αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα χαρτομάντιλο μέθοδος ανοσοϊστοχημεία μικροσυστοιχία σε 305 γαστρικών καρκίνων, των οποίων το 84 είχε ζευγαρωμένα παρακείμενα φυσιολογικά δείγματα. Κυτταρικές σειρές SGC-7901, BGC-823, MGC-803, ΜΚΝ45 και επίσης βάφονται GES-1. Οι συσχετίσεις μεταξύ αναλύθηκαν τα επίπεδα έκφρασης του Gal-9 και Tim-3 πρωτείνη και όγκου παραμέτρους ή κλινικά αποτελέσματα.

Αποτελέσματα

Gal-9 και Tim-3 χρωματίζονται θετικά σε κύτταρα όγκου σε 86,2% (263/305), και 60,0% (183/305) των ασθενών με καρκίνο του στομάχου, αντίστοιχα. Gal-9 έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε καρκίνο από ότι στα φυσιολογικά βλεννογόνο (

P

& lt? 0.001). Μειωμένη έκφραση Gal-9 σχετιζόταν με λέμφο-αγγειακή εισβολή, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, μακρινή μετάσταση και χειρότερα σταδιοποίηση ΤΝΜ (

P

= 0,034,

P

= 0,009,

P

= 0.002 και

P

= 0,043, αντίστοιχα). Σε αντίθεση, ο Tim-3 έκφραση ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε καρκίνο από ό, τι στο βλεννογόνο ελέγχου (

P

& lt? 0.001). Οι ασθενείς με λεμφαδένες-αγγειακή εισβολή είχαν υψηλότερα επίπεδα έκφρασης του Tim-3 (

P

& lt? 0.001). Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση δείχνει ότι τόσο υψηλά Gal-9 έκφρασης και χαμηλή έκφραση Tim-3 συσχετίστηκε σημαντικά με τον καιρό συνολική επιβίωση (

P

= 0,002,

P

= 0,010, αντίστοιχα)? ο συνδυασμός του Gal-9 και Tim-3 έκφραση ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα πρόβλεψης για ασθενείς με καρκίνο του στομάχου (RR: 0,43? 95% CI: 0,20 – 0,93).

H.pylori

καθεστώς μόλυνσης δεν συσχετίστηκε με Gal-9 και την έκφραση Tim-3 (

P

= 0,102,

P

= 0,565).

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η έκφραση του Gal-9 και Tim-3 σε κύτταρα όγκου μπορεί να είναι ένας δυνητικός, ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Gal-9 και TIM-3 μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στη γαστρική καρκινογένεση

Παράθεση:. Jiang J, Jin M-S, F-Κονγκ, Cao D, Ma H-Χ, Jia Ζ, et al. (2013) Μειωμένη γκαλεκτίνη-9 και αυξημένη έκφραση Tim-3 Σχετικά με κακή πρόγνωση σε γαστρικό καρκίνο. PLoS ONE 8 (12): e81799. doi: 10.1371 /journal.pone.0081799

Επιμέλεια: Pierre Busson, Ινστιτούτο θέματα καρκίνου Gustave Roussy, Γαλλία

Ελήφθη: 6η Ιανουαρίου, 2013? Αποδεκτές: 26 Οκτωβρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 10 Δεκεμβρίου, 2013

Copyright: © 2013 Jiang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη έχει υποστηριχθεί από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81072369 και 81273065). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου παραμένει η τέταρτη πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος και είναι η δεύτερη κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους παγκοσμίως [1]. Γαλεκτίνες είναι μια ομάδα πρωτεϊνών που δεσμεύονται β-γαλακτοζίτες μέσω εξελικτικώς διατηρημένη στοιχεία αλληλουχίας της περιοχής αναγνώρισης υδατάνθρακα (CRD) [2], [3]. Η οικογένεια γαλεκτίνη συμβάλλει στην νεοπλασματικό μετασχηματισμό, την επιβίωση των κυττάρων του όγκου, εισβολή ιστού και μετάσταση διαφόρων τύπων καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του γαστρικού καρκίνου [4]. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι το επίπεδο έκφρασης της γαλεκτίνης-3 ήταν σημαντικά υψηλότερη στα γαστρικά καρκινώματα σε σύγκριση με παρακείμενο φυσιολογικό ιστό. Γαλεκτίνη-3 και γαλεκτίνης-4 μπορεί να είναι χρήσιμοι δείκτες όγκου για γαστρικών καρκίνων σε σχέση με την εξέλιξη του όγκου και δυνατοτήτων του λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες ιδιαίτερα σε ορισμένες ιστολογικών τύπων καρκίνου του στομάχου [5], [6]. Γκαλεκτίνη-9 (Gal-9) είναι ένα νέο μέλος της οικογένειας πρωτεϊνών γκαλεκτίνη [7]. Τα τελευταία χρόνια, ένας σημαντικός ρόλος έχει προκύψει για την Gal-9 στην υγεία και την ασθένεια [8]. Στην κανονική φυσιολογία, Gal-9 φαίνεται να είναι κεντρικό διαμορφωτή της Τ-κυτταρικής ανοσίας με την επαγωγή της απόπτωσης σε ειδικούς υποπληθυσμούς Τ-κυττάρων. Επειδή αυτές οι Τ-κυτταρικοί πληθυσμοί που συνδέονται με αυτοανοσία, φλεγμονώδη νόσο, και απόρριψη μοσχεύματος, ήταν η υπόθεση ότι η εφαρμογή της εξωγενούς Gal-9 μπορεί να περιορίζει παθογόνος δράση των Τ-κυττάρων [9], [10]. Επιπλέον, Gal-9 εντοπίζεται στο κυτταρόπλασμα και στην κυτταρική επιφάνεια των κυττάρων και φαίνεται να απελευθερώνεται από κύτταρα όγκου [11]. Σε συμπαγείς όγκους, οι διαθέσιμες μελέτες πρότειναν ότι Gal-9 έχει μια λειτουργία καταστολής όγκων, με την απώλεια του Gal-9 που συνδέεται στενά με αυξημένη μετάσταση και υψηλή επανάληψη [12], [13], [14], [15]. Kadowaki et al έδειξε επίσης ότι Gal-9 σηματοδότηση μπορεί να παρατείνει την επιβίωση με διέγερση μακροφάγων να διαφοροποιηθούν σε πλασματοκυτταροειδή δενδριτικών κυττάρων που μοιάζουν με μακροφάγα σε ένα μοντέλο ποντικού από καρκίνο του πνεύμονα [16]. Αυτά τα datas παρουσιάζονται ότι Gal-9 μπορεί να είναι μια πιθανή προγνωστικός παράγοντας με αντι-μεταστατικό δυναμικό. Ωστόσο, η έκφραση της Gal-9 δεν έχει ακόμη διερευνηθεί σε γαστρικό καρκίνο.

immunoglobulin- Τ-κυττάρων και βλεννίνης μόριο domain-3 που περιέχει 3 (Tim-3) είναι ένας Τ βοηθητικών τύπου 1 (Th1) -ειδικές μόριο κυτταρικής επιφάνειας που φαίνεται να ρυθμίζουν αποκρίσεις Th1 και την επαγωγή περιφερική ανοχή [17], [18]. Πρόσφατα, παρεκκλίνουσα έκφραση Tim-3 αναφέρθηκε σε κύτταρα μελανώματος, συμβάλλοντας στην χαμηλή ικανότητα προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων και προαγωγή της επιβίωσης του όγκου [19]. Zhuang et al κατέδειξαν επίσης το σημαντικό ρόλο του Tim-3 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [20]. Zhu C et al έδειξαν ότι η Gal-9 είναι ο Tim-3 συνδέτη, και πρότεινε ότι η οδός Tim-3-Gal-9 μπορεί να έχει εξελιχθεί για να εξασφαλιστεί η αποτελεσματική τερματισμό των δραστικών Th1 κυττάρων [21]. Για να διερευνηθεί η σχέση μεταξύ Tim-3-Gal-9 μονοπάτι και την πρόοδο του καρκίνου του στομάχου, η έκφραση της πρωτεΐνης Gal-9 και Tim-3 ερευνήθηκε σε 305 ασθενείς με καρκίνο του στομάχου, των οποίων το 84 περιπτώσεις είχε ζευγαρωμένα γειτονικό φυσιολογικό δείγματα ιστών. Σύλλογοι της πρωτεϊνικής έκφρασης με τον ασθενή κλινικά χαρακτηριστικά και την πρόγνωση επίσης διερευνηθεί σε αυτή τη μελέτη.

Μέθοδοι

πληθυσμοί Μελέτη

Τριακόσια πέντε ασθενείς, συμπεριλαμβανομένων 231 άνδρες και 74 γυναίκες με γαστρικό καρκίνο που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση μεταξύ Αυγούστου 2000 και του Δεκεμβρίου 2010 στο Πρώτο Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Jilin εντάχθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Οι ασθενείς δεν λαμβάνουν καμία θεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Η διάγνωση του καρκίνου του στομάχου έγινε με βάση μορφολογικές και ανοσοϊστοχημικά ευρήματα αξιολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους παθολόγους (MSJ και YPW). Γαστρικούς καρκίνους απομακρύνθηκαν με χειρουργική εκτομή? παρακείμενο φυσιολογικό γαστρικού επιθηλίου δείγματα επίσης συλλέχθηκαν από 84 ασθενείς για σύγκριση. ηλικίες των ασθενών κυμαίνεται από 32 έως 87 ετών, με μέση ηλικία τα 64 χρόνια. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς και το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Πρώτου Νοσοκομείου του Πανεπιστημίου Jilin.

Κυτταρική καλλιέργεια

Ανθρώπινο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου SGC-7901 , BGC823, MGC803, ΜΚΝ45 αποκτήθηκαν από το Τμήμα γαστρικού και του παχέος Χειρουργικής, Πρώτη Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Jilin. Η απαθανάτισε ανθρώπινη γαστρικού βλεννογόνου κυτταρική σειρά GES-1 παρέχονται από το Νοσοκομείο του Καρκίνου του Πανεπιστημίου του Πεκίνου. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 που περιέχει 10% θερμο-απενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό (FBS) και 100 ng /ml το καθένα πενικιλίνη και στρεπτομυκίνη σε μία συσκευή επώασης (50 ml /l CO2) στους 37 ° C. Μέσο επί των κυττάρων άλλαζε κάθε 2-3 ημέρες. Κύτταρα σε φάση λογαριθμικής ανάπτυξης συλλέχθηκαν για περαιτέρω πειράματα.

Ανοσοϊστοχημεία

Εν συντομία, οι τομές (4 μm σε πλάτος) από το microarry ιστού (TMA) μπλοκ αποπαραφινοποιήθηκαν και αφυδατωμένα, θερμικά επαγόμενη ανάκτηση επιτόπου διεξήχθη με εμβάπτιση διαφάνειες σε 10 mmol κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος (pH 6,0) και βράζει το ρυθμιστικό για 10 μίλια σε μια χύτρα ταχύτητας. Μετά από αποκλεισμό με 3% Η

2O

2, όλες οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C με αντίσωμα αντι ανθρώπινο γαλεκτίνης-9 πολυκλωνικό (1:250 αραιώνονται, ab69630, Abcam, UK) και αντι ανθρώπινο Tim-3 πολυκλωνικό αντίσωμα (8 μg /ml, AF2365, R &? D Systems, Minneapolis, USA), 3,3-Διαμινοβενζιδίνη (DAB) χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο, και οι τομές με αιματοξυλίνη. Για αρνητικούς ελέγχους, slides όγκου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ισοτύπων IgG από το κουνέλι (φυσιολογική IgG κουνελιού, sc-2027, Santacruz, USA) και κατσίκα (κανονικό IgG αίγας, sc-2342, Santacruz, USA) για την αντικατάσταση του πρωτογενούς αντισώματος, όλα αρνητικά οι έλεγχοι κατέδειξαν αμελητέα φόντο λεκέ. Οι κυτταρικές σειρές (SGC-7901, BGC-823, MGC-803, ΜΚΝ45 και GES-1) ήταν συνήθως καλλιεργούνται, γαστρικό σφαιρίδια καρκινικού κυττάρου εγκλείστηκαν σε παραφίνη και υποβάλλονται σε επεξεργασία ως διαφάνειες ιστού. κυτταρικές σειρές γαστρικού καρκίνου του βάφτηκαν με την ίδια μέθοδο.

Τα βαμμένα πλακίδια αξιολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους παθολόγους (MSJ και YPW), οι οποίοι δεν γνώριζαν την κλινικά δεδομένα και τα αποτελέσματα, η ευρέως αποδεκτή ημι-ποσοτική ανάλυση (Η-βαθμολογία σύστημα) χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση ένταση χρώσης και τα ποσοστά των κυττάρων χρωματίζονται με ένα συγκεκριμένο μέγεθος της έντασης. Η-βαθμολογία υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση: Η-βαθμολογία = ΣPi (i) (i = 0,1,2,3, Pi = 0~100%). i σημαίνει την ένταση της χρώσης, δηλαδή καμία χρώση = 0, ασθενής χρώση = 1, μέτρια χρώση = 2 και ισχυρή χρώση = 3. Pi αντιπροσωπεύει ποσοστά των χρωματισμένων κυττάρων με εντάσεις που κυμαίνονται από 0 έως 100. Ως εκ τούτου, η Η-βαθμολογία κυμαίνεται από 0 έως 300, η-βαθμολογία & gt? 0 θεωρείται ως θετική χρώση και η-βαθμολογία = 0 θεωρείται ως ένα πλήρες αρνητική χρώση. Τα αντιφατικά αποτελέσματα της χρώσης ένταση από δύο παθολόγους επιλύθηκαν με την αναθεώρηση των υποθέσεων μαζί και να συμφωνήσουν σχετικά με τα αποτελέσματα και τα αντιφατικά αποτελέσματα των ποσοστών των χρωματισμένων κυττάρων επιλύθηκαν με τον υπολογισμό των μέσων βαθμολογιών.

κηλίδωση Western

Για να επιβεβαιώσει την ακρίβεια των ημι-ποσοτικός προσδιορισμός με ανοσο-ιστολογία, Η κηλίδωση Western χορηγήθηκαν στα γαστρικά κύτταρα γραμμές καρκίνου. Τα κύτταρα λύθηκαν με ψυχρό ρυθμιστικό λύσης και φυγοκεντρήθηκαν στα 12.000 g για 10 λεπτά, ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης αναμίχθηκαν με κυτταρολύματα και έβρασαν για 5 λεπτά στους 95 ° C. 10 μg συνολικής πρωτεΐνης φορτώθηκαν σε 10% ασυνεχή πηκτή πολυακρυλαμιδίου SDS για ηλεκτροφόρηση και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν πάνω σε μεμβράνες πολυβινυλιδενο φθορίδιο. Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν σε 5% αλβουμίνη βόειου ορού και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα (αντι Gal-9 και αντι Tim-3) όλη τη νύκτα στους 4 ° C σε ρυθμισμένο με Tris αλατούχο διάλυμα με 0,1% Tween20. Μετά το πλύσιμο, οι μεμβράνες επωάστηκαν σε συζευγμένη με υπεροξειδάση χρόνου αντισωμάτων για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι μεμβράνες στη συνέχεια επωάστηκαν και ελήφθησαν και αναλύθηκαν western αποτύπωση εικόνων. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος και όλες οι τιμές πυκνομετρική κανονικοποιήθηκαν έναντι της σχετικής β-ακτίνης αξία.

Προσδιορισμός

H.pylor

i μόλυνση

Μεταξύ 305 γαστρικό περιπτώσεων καρκίνου, συλλέχθηκαν δείγματα αίματος από 104 ασθενείς για την εξέταση των

H.pylor

i μόλυνση πριν από τη χειρουργική επέμβαση. 4 ml νηστείας δείγματα αίματος αφέθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε. Ο ορός ελήφθη και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C. Ορός ανοσοσφαιρίνης (Ig) G αντισώματα προς

H.pylori

ανιχνεύθηκαν με

H.pylor

i-IgG με ένζυμο συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) κιτ (Biohit, Helsink, Φινλανδία). Οι τίτλοι των αντισωμάτων ορίστηκαν με την οπτική πυκνότητα (OD) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και τίτλους υψηλότερη από ό, τι η τιμή αποκοπής του 30EIU θεωρήθηκαν ως θετικά για

H.pylori

λοίμωξη. Τα δείγματα ελέγχου ποιότητας σετ έδειξε συντελεστής διακύμανσης 4,5% για το

Η

.

πυλωρού

εξέταση λοίμωξη.

Στατιστικά ανάλυση

Η-βαθμολογία της Gal- 9 και Tim-3 έκφρασης παρουσιάζονται ως διάμεση τιμή (ενδοτεταρτημοριακό). Οι Wilcoxon ταιριάζουν ζεύγη signed-rank test και Mann-Whitney U ή τεστ Kruskal-Wallis H χρησιμοποιήθηκαν κατά τη σύγκριση ζεύγη ομάδων και δύο ανεξάρτητες ομάδες αντίστοιχα. Η μέθοδος Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί το συνολικό ποσοστό επιβίωσης, και οι διαφορές επιβίωσης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Η Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό των σχετικών κινδύνων (ΕΑ) και τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (95% ΠΙ) μετά την προσαρμογή ανάλογα με την ηλικία (κλίμακα μεταβλητή), το φύλο (ονομαστική μεταβλητή), λέμφο-αγγειακή εισβολή (ονομαστική μεταβλητή) και ΤΝΜ σταδιοποίηση (κλίμακα μεταβλητή). Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν αμφίδρομες και

P

-τιμές μικρότερες του 0,05 θεωρήθηκαν ότι είναι στατιστικά σημαντική. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του πακέτου λογισμικού SPSS 18.0 (SPSS Inc. USA).

Αποτελέσματα

Η έκφραση των κυτταρικών γραμμών γαστρικού καρκίνου Gal-9 και Tim-3 σε καρκίνο του στομάχου και Πώληση

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι Gal-9 και Tim-3 χρωματίζονται θετικά σε κύτταρα όγκου σε 86,2% (263/305), 60,0% (183/305) των ασθενών με καρκίνο του στομάχου, αντίστοιχα. Τα περισσότερα από τα καρκινικά κύτταρα σε γαστρικό καρκινικό ιστό έδειξε ισχυρή κυτταροπλασματική Gal-9 ανοσοχρώση, αλλά ένας μικρός αριθμός των γαστρικών καρκινικών κυττάρων έδειξαν αρνητική ανοσοχρώση για Gal-9 (Σχήμα. 1Α, 1Β, 1C). Γαστρική καρκινικά κύτταρα έδειξαν μία σαφή κυτταροπλασματική και πυρηνική θετικότητα για Tim-3 ανοσοχρώση (Σχήμα. 1 D, 1 Ε, 1F, 1G).

γαστρική καρκινικά κύτταρα έδειξαν μία σαφή κυτταροπλασματική (D), πυρηνική θετικότητα (Ε), ή αρνητικό για Tim-3 ανοσοχρώση (G). (F) έδειξε μία ασθενή Tim-3 θετική χρώση σε γαστρικό κανονική mucusa. Οι κυτταρικές σειρές SGC-7901, BGC-823 και MGC-803 και GES-1 έδειξε ασθενές κυτταροπλασματική Gal-9 ανοσοχρώση (Η, BCG-823), αλλά ΜΚΝ45 έδειξε αρνητική ανοσοχρώση για Gal-9 (Ι). Τέσσερις κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου έδειξε επίσης ισχυρή κυτταροπλασματική και πυρηνική θετικότητα για Tim-3 κηλίδωση (κυτταρική σειρά J, BCG-823). Ωστόσο, τα κύτταρα GES-1 έδειξε αρνητική χρώση για Tim-3 (Κ). Αρχικό μεγεθύνσεις, X200 και X400.

Η

Μεταξύ 84 ζεύγη δειγμάτων, Gal-9 θετική χρώση βρέθηκε σε 68/84 (81,0%), καρκίνο του στομάχου και σε βασικά κύτταρα του 51/84 (60,7%) φυσιολογικό βλεννογόνο, αντίστοιχα (

P

= 0,004). Αντιστρόφως, Tim-3 θετική χρώση βρέθηκε 55/84 (65,5%) σε γαστρικό καρκίνο και 72/84 (82,7%) στην κανονική βλεννογόνο, αντίστοιχα (

P

= 0,002). Επιπλέον, κυτταρικές σειρές SGC-7901, BGC-823and MGC-803 και GES-1 έδειξε αδύναμη κυτταροπλασματική Gal-9 ανοσοχρώση (Σχήμα. 1), αλλά ΜΚΝ45 έδειξε αρνητική ανοσοχρώση για Gal-9 (σχήμα. 1Ι). Τέσσερις κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου έδειξε επίσης ισχυρή κυτταροπλασματική και πυρηνική θετικότητα για Tim-3 κηλίδωση (Σχήμα. 1J). Ωστόσο, GES-1 κύτταρα έδειξαν αρνητική χρώση για Tim-3 (Figure.1K).

Η ανίχνευση του Gal-9 και ενεργοποίηση Tim-3 ελέγχθηκε από τα ίδια κύτταρα με κηλίδωση Western, η οποία απεικονίζεται στο Σχήμα 2.

Σημειώστε ότι τόσο ο Tim-3 και Gal-9 ανιχνεύθηκαν σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του στομάχου MGC803, SGC7901 και BGC823, απουσία ενεργοποίησης Gal-9 σε ΜΚΝ45 κύτταρα, και τα αρνητικά του Tim-3 ανοσοχρώση στην GES-1 επιβεβαιώθηκαν επίσης

Η

Gal-9 έκφραση σε βλάβες του καρκίνου ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα σε κανονικό βλεννογόνο (διάμεση-βαθμολογία:. 140 vs 20?

P

& lt? 0.001 . Σχήμα 3Α). Tim-3-βαθμολογία σε βλάβες του καρκίνου ήταν σημαντικά χαμηλότερα από εκείνα σε κανονικό βλεννογόνο (διάμεση-βαθμολογία: 40 vs 170?

P

& lt? 0.001 Σχήμα 3Β.)

Ωστόσο, υπάρχουν διαφορές Γαλ. -9 (3γ) ή Tim-3 εκφράσεις (3d) βρέθηκαν μεταξύ των ασθενών με

Η

.

πυλωρού

λοίμωξη (Θετικό) και χωρίς να

H.pylori

λοίμωξη ( αρνητική).

Η

Gal-9 και Tim-3 επίπεδα έκφρασης και

H.pylor

i λοίμωξη

Από 104 ασθενείς με καρκίνο του στομάχου ελέγχονται για

Η .pylor

i αντισώματα, το συνολικό θετικό ποσοστό

H.pylor

i λοίμωξη ήταν 65,4%. Στην ανάλυση ηλικία υποομάδας, η

H.pylor

i ποσοστό λοίμωξης ήταν υψηλότερη στην ομάδα 45-65 ετών, σε σύγκριση με τους νεότερους των 45 ετών ομάδες, ή άνω των 65 ετών ομάδες. Τα αποτελέσματα έδειξαν καμία συσχέτιση μεταξύ

H.pylor

i μόλυνση και την Gal-9 και την έκφραση Tim-3 (

P

= 0,102,

P

= 0,565). (Σχήμα 3C, 3D).

Συσχέτιση Gal-9 και Tim-3 έκφρασης με κλινικοπαθολογική παραμέτρους

Όπως φαίνεται στον πίνακα 1, Η-βαθμολογία του Tim-3 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε άνδρες ασθενείς από γυναίκες ασθενείς (

P

= 0,010). επίπεδα Tim-3 έκφρασης συσχετίζεται θετικά με την ηλικία (

P

= 0.004), ωστόσο τα επίπεδα Gal-9 έκφρασης συσχετίζεται αρνητικά με την ηλικία (

P

= 0.049). Υπήρχαν σημαντικές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης Gal-9 και Tim-3 μεταξύ των υποομάδων της φλεβικής διείσδυσης, σε ασθενείς με φλεβική διήθηση, η διάμεση τιμή-βαθμολογία της Gal-9 ήταν σημαντικά χαμηλότερη (

P

= 0,034) και Tim- 3 ήταν σημαντικά υψηλότερη (

P

& lt? 0.001). Σύμφωνα με τα στάδια ΤΝΜ, υψηλότερες-βαθμολογία παρατηρήθηκε σε ασθενείς του σταδίου Ι όγκους σε σύγκριση με άλλα στάδια (

P

= 0,043). Η σημαντικά υψηλότερη-βαθμολογία της Gal-9 βρέθηκε σε ασθενείς χωρίς λεμφαδένα μετάσταση (

P

= 0,009), καθώς και σε ασθενείς χωρίς μακρινή μετάσταση (

P

= 0,022). Αναλύσαμε επίσης την έκφραση Gal-9 και Tim-3 σύμφωνα με τη διαφοροποίηση του όγκου (υψηλή, μεσαία και χαμηλή) και το βάθος της εισβολής (Τ1-Τ4), δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον πίνακα 1 με λεπτομέρεια.

Η

Υψηλή Gal-9 έκφρασης και αρνητική έκφραση Tim-3 συσχετίστηκε σημαντικά με τον καιρό συνολική επιβίωση

Συνέχεια πληροφορίες ήταν διαθέσιμα για όλους τους 305 ασθενείς, που καλύπτουν τις περιόδους κυμαίνονται από 3 έως 135 μήνες (διάμεση τιμή 40 μήνες). Κανένας ασθενής δεν πέθανε από μετεγχειρητικές επιπλοκές εντός 30 ημερών από την έναρξη της περιόδου της μελέτης, και 120 (39,3%) ασθενείς έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της παρακολούθηση. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier χαράχθηκαν σύμφωνα με την Η-βαθμολογία (Αρνητική, HSCORE≤100, HSCORE≤200 και-βαθμολογία & gt? 200). Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης ήταν σημαντικά υψηλότερη σε Gal-9-βαθμολογία & gt? 200 ομάδα από ό, τι άλλες ομάδες (δοκιμασία log-rank,

P

= 0,011). Ως καμπύλες επιβίωσης των αρνητικών ομάδα, HSCORE≤100 και η ομάδα HSCORE≤200 ήταν παρόμοια, εμείς τους συνδυάζονται για περαιτέρω ανάλυση, και η καμπύλη επιβίωσης Kaplan-Meier ήταν φαίνεται στο Figure.4A (

P

= 0,002). Ασθενείς με Tim-3-αρνητικούς όγκους είχαν μεγαλύτερη συνολική επιβίωση. Τα ίδια αποτελέσματα προέκυψαν όταν όλοι οι ασθενείς θετική έκφραση συνδυάστηκαν (Figure.4B, δοκιμασία log-rank,

P

= 0,01). καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier επίσης χαράσσεται σύμφωνα με την Gal-9 και Tim-3 συν-έκφραση, το συνολικό ποσοστό επιβίωσης των ασθενών οι οποίοι ήταν Gal-9-βαθμολογία & gt? 200 και Tim-3 αρνητικό ήταν σημαντικά υψηλότερη, και οι ασθενείς οι οποίοι ήταν Gal -9 HSCORE≤200 και Tim-3 θετικά ήταν σημαντικά χαμηλότερη (Figure.4C, δοκιμασία log-rank,

P

& lt? 0.001).

Η

Συνδυασμός Gal-9 και Tim-3 έκφραση ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης

Πίνακας 2 έδειξε ότι η πολυπαραγοντική ανάλυση των παραγόντων που σχετίζονται με την πρόγνωση των ασθενών. Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι οι ακόλουθοι παράγοντες σχετίζονταν σημαντικά με τη μετεγχειρητική επιβίωση: το στάδιο TNM, φλεβική διείσδυση και ο συνδυασμός του Gal-9 και την έκφραση Tim-3 (

P

& lt? 0.001,

P

= 0.001,

P

& lt? 0.001 αντίστοιχα). Μετά προσαρμόζεται ανάλογα με την ηλικία και το φύλο, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης έδειξε ότι Gal-9 και Tim-3 συν-έκφραση και το στάδιο TNM ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες, αλλά Λεμφικό-αγγειακή εισβολή δεν ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας.

Η

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, οι υψηλότερες εκφράσεις του Gal-9 βρέθηκαν σε ασθενείς χωρίς λέμφο-αγγειακή εισβολή, μετάσταση στους λεμφαδένες και απομακρυσμένες μετάσταση. Επιπλέον, οι υψηλότερες εκφράσεις του Gal-9 συνδέεται στενά με καλύτερη επιβίωση. Αυτά τα ευρήματα είναι συνεπή με μια προηγούμενη αναφορά στον καρκίνο του μαστού, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας και το κακόηθες μελάνωμα [12], [13], [14], [15], [22]. Gal-9 έκφραση σε γαστρικές αλλοιώσεις του καρκίνου ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε ζεύγη γειτονικό φυσιολογικό γαστρικό επιθηλιακών ιστών, το αποτέλεσμα αυτό μας οδήγησε στο να υποθέσει ότι η δραστικότητα Gal-9 εμφανίζουν αντικαρκινικές σε ιστούς που φέρουν όγκο μέσω incresed συσσωμάτωση των κυττάρων του όγκου [23] . Ωστόσο, η διαπίστωση αυτή είναι διαφορετική από τις παρατηρήσεις της Liang του. Βρήκαν ότι Gal-9 έκφραση σε ιστούς του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας 38 επεμβατικής πλακώδες καρκίνωμα (SCC) ασθενείς ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε φυσιολογικό τραχηλικό επιθήλιο από 23 υγιείς ελέγχους. Αλλά Gal-9 εκφράσεις σε καλά διαφοροποιημένο SCC ήταν σημαντικά υψηλότερες σε σύγκριση με εκείνες του υψηλού βαθμού πλακώδους intrapiehelial βλάβες [14]. Δυστυχώς, δεν συνέκρινε την έκφραση Gal-9 σε καρκινικούς ιστούς να αντιστοιχιστεί παρακείμενων φυσιολογικών ιστών. Η απόκλιση από διαφορετικές μελέτες μπορεί να οφείλεται σε ατομική διακύμανση του ανοσοποιητικού κατάσταση, προκαλεί φλεγμονή του ιστού και ειδικότητα της Gal-9 έκφραση. Επιπλέον, διάφορες ασθένειες είναι ευαίσθητοι σε αποπτωτικά αποβολή από ανασυνδυασμένη Gal-9. Σύμφωνα με αυτή την παρατήρηση, υποδηλώνοντας ότι gal-9 μπορεί να είναι ένας ελκυστικός υποψήφιος για τη θεραπεία του καρκίνου. Η θεραπεία με ανασυνδυασμένη Gal-9 μπορεί να αποτρέψει μεταστατική εξάπλωση του καρκίνου [16], [24], [25].

Tim-3 είναι η επιφάνεια μόριο που μπορεί να αναγνωρίσει ειδικά Th1 κύτταρα από τα κύτταρα Th2 και στα δύο ποντίκια και ανθρώπους [26]. Έχει επίσης βρεθεί σε κυτταροτοξικά CD8 + Τ κύτταρα, Th17, Treg, μονοκύτταρα, δενδριτικά κύτταρα, σιτευτικά κύτταρα, φυσικά φονικά (ΝΚ) κύτταρα, μελάνωμα, SCC και καρκινικά κύτταρα πνεύμονα [19], [20], [27], [ ,,,0],28], [29], [30]. Εδώ, για πρώτη φορά, αποδείξαμε Tim-3 έκφραση σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα και κυτταρικές σειρές. Επιπλέον, βρήκαμε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ Tim-3 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα και τις κλινικές-παθολογικές παράμετροι της λέμφου-αγγειακή εισβολή. Επιπλέον, βρήκαμε ότι το ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με θετικούς όγκους έκφραση Tim-3 ήταν σημαντικά χαμηλότερα από εκείνα με αρνητικές έκφραση Tim-3. Η μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλύσεις αποκάλυψαν επίσης ότι Tim-3 η υπερέκφραση σε καρκινικά κύτταρα που σχετίζονται με κακή πρόγνωση του καρκίνου του στομάχου.

Tim-3 είναι ένα ισχυρό ανοσοανασταλτική μόριο που εμπλέκονται στην ανοσολογική ανοχή, και αυτοάνοσες αποκρίσεις. Οι μηχανισμοί για τη ρύθμιση Tim-3 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα δεν είναι ακόμη πλήρως κατανοητοί. Wiener et al ανέφεραν ότι ο ΤΟΡ-β1 αυξημένα Tim-3 έκφραση, η οποία οδήγησε σε τοπική ανοσοκαταστολή [19]. Εν τω μεταξύ, τα υψηλά επίπεδα του όγκου TGF-β1 ήταν σημαντικά σχετίζεται με μειωμένη επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου. Προηγούμενες μελέτες έχουν προσδιορίσει Tim-3 ως αρνητικός ρυθμιστής του Τ βοηθητικών 1 β-κυττάρων αποκρίσεις [26]. Πρόσφατα, ωστόσο, οι νέες έρευνες δείχνουν ότι ο Tim-3, επίσης, να προωθήσει μια προ-φλεγμονώδη απόκριση, υποδεικνύοντας ότι ο Tim-3 έχει διπλό ρόλο στην ανοσία [31], [32]. Έτσι, τα επίπεδα έκφρασης του Tim-3 σε καρκινικά κύτταρα μπορεί να συνδέεται με κυτοκίνη που παράγουν κατά τη διαδικασία της γαστρικής καρκινογένεσης. Επιπλέον, πρόσφατες μελέτες έχουν προσδιορίσει ότι ο Tim-3 η υπερέκφραση σχετίστηκε με μικρότερη συνολική επιβίωση των επιθηλιακών καρκίνων συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα και καρκίνου του τραχήλου [20], [30], τα ευρήματά μας συμφωνούν με αυτές τις αναφορές. Το πιο σημαντικό από όλα αυτά τα ευρήματα, Cao et al επιβεβαίωσε ότι κάτω ρύθμιση της έκφρασης του Tim-3 σε κύτταρα HeLa ανέστειλε σημαντικά τόσο την μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων Hela [30]. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο Tim-3, όχι μόνο για να καταστείλει αντικαρκινική ανοσία, αλλά και την άμεση προώθηση της προόδου του καρκίνου.

Ταυτοποίηση Gal-9 ως συνδετήρας για Tim-3 έχει πλέον εδραιωθεί ο Tim-3-Gal -9 μονοπάτι ως σημαντικός ρυθμιστής της Th1 ανοσίας, η οποία οδηγεί σε απόπτωση των κυττάρων Th1 [21], [33]. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι τόσο υψηλότερη έκφραση Gal-9 και αρνητική έκφραση Tim-3 συσχετίστηκε σημαντικά με καλύτερη συνολική επιβίωση (

P

= 0,002,

P

= 0,010, αντίστοιχα)? ο συνδυασμός του Gal-9 και Tim-3 έκφραση ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης σε γαστρικό καρκίνο. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η οδός Tim-3-Gal-9 μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην γαστρική καρκινογένεση.

Επιπλέον,

H.pylori

είναι μία ομάδα 1 καρκινογόνο βασίζεται στην Παγκόσμια Οργάνωση Υγείας (ΠΟΥ) και το Διεθνές Κέντρο Έρευνας για τον Καρκίνο (IARC) [34]. Έχει γενικά αποδεκτό ότι γαστρικό καρκίνο είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων που περιλαμβάνει μια σειρά από εκδηλώσεις όπως ατροφική γαστρίτιδα, εντερική μεταπλασία, δυσπλασία και καρκίνωμα. Προηγούμενες εκθέσεις έχουν σημειωθεί ότι η αλληλεπίδραση Tim-3-Gal-9 μπορεί να έχει σημαντική επίδραση στις φλεγμονώδεις [26], [35], [36], [37]. Εξετάσαμε επίσης εάν

H.pylori

λοίμωξη μπορεί να επηρεάσει τα επίπεδα έκφρασης της Gal-9 και Tim-3. Ωστόσο, στην παρούσα μελέτη, τα επίπεδα Gal-9 και Tim-3 έκφραση δεν ήταν στατιστικά σημαντική μεταξύ του

H.pylori

ομάδα (+) και το

H.pylori

(-) ομάδα στο γαστρικό καρκίνο (

P

= 0.101,

P

= 0,565). Περαιτέρω έρευνες με additionalsamples που απαιτούνται για τον καθορισμό των ρόλων του Gal-9 και Tim-3 στο

H.pylori

-infection.

Εν κατακλείδι, η μελέτη αυτή κατέδειξε την έκφραση της Gal-9 και Tim-3 σε καρκίνο του στομάχου. Σημαντικά, οι πολυμεταβλητές αναλύσεις αποκάλυψαν το σημαντικό ρόλο του Gal-9 και Tim-3 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Έτσι, η κατάσταση της Gal-9 και Tim-3 θα μπορούσε να καθοριστεί σε κλινική εξέταση και μπορεί να έχουν αξία θεραπεία στο μέλλον [38], [39].

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω τον Δρ Jennifer S. Davis, ο κ Chang-Τραγούδι Guo και κα Ying τραγούδι για την τεχνική υποστήριξή τους.