Αφηρημένο

Στόχοι

Ο λιπώδης ιστός περιέχει έναν πληθυσμό πολυδύναμων λιπώδη βλαστικά κύτταρα (ASCs) ότι στρώματος μορφή όγκου και μπορεί να προωθήσει την εξέλιξη του όγκου. Λαμβάνοντας υπόψη το υψηλό ποσοστό της μετάστασης του καρκίνου των ωοθηκών στο επιπλοϊκά λιπώδη, υποθέσαμε ότι επιπλοϊκά που προέρχονται από ASC μπορεί να συμβάλλει στην ανάπτυξη καρκίνου των ωοθηκών και της διάδοσης.

Υλικά και Μέθοδοι

Εμείς απομονωθεί ASCs από το επίπλουν από τρεις ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, με (O-ASC4, Ο-ASC5) και χωρίς (Ο-Asc1) επιπλοϊκά μετάσταση. BM-MSCs, SQ-ASCs, Ο-ASCs χαρακτηρίστηκαν με συστοιχίες γονιδιακής έκφρασης και μεταβολικής ανάλυσης. Στρωματικά κύτταρα επιδράσεις επί του πολλαπλασιασμού καρκινικών κυττάρων, χημειοαντίσταση και ακτινοβολία αντίστασης των ωοθηκών αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασίες συν-καλλιέργεια με λουσιφεράση σημασμένο ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές των ωοθηκών. Transwell δοκιμασίες μετανάστευσης διεξήχθησαν με ρυθμισμένα μέσα από O-ASCs και κύτταρο ελέγχου γραμμές. κύτταρα SKOV3 ήταν intraperitionally ένεση με ή χωρίς O-Asc1 να παρακολουθείτε

in-vivo

μεταμόσχευση.

Αποτελέσματα

O-ASCs προώθησε σημαντικά

στο

vitro

πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση χημειοθεραπεία και ακτινοβολία ανταπόκριση των κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών. O-ASC4 είχαν πιο έντονες επιπτώσεις για τη μετανάστευση και τη χημειοθεραπεία απάντηση σε OVCA 429 και OVCA 433 κύτταρα από O-Asc1. Η ανάλυση των δεδομένων των μικροσυστοιχιών απεκάλυψε ότι O-ASC4 και Ο-ASC5 έχουν παρόμοια προφίλ γονιδιακής έκφρασης, σε αντίθεση με O-Asc1, η οποία ήταν περισσότερο παρόμοια με BM-MSCs και υποδόρια ASCs σε ιεραρχική συσταδοποίηση. Ανθρώπινο Ο-ASCs ανιχνεύθηκαν στο στρώμα του ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών ποντικού ξενομοσχεύματα αλλά όχι αμέτοχη ωοθήκες.

Συμπεράσματα

ASCs που προέρχονται από το ανθρώπινο επίπλουν μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό του καρκίνου, τη μετανάστευση, χημειοαντίσταση και η ακτινοβολία αντίστασης των ωοθηκών

in-vitro

. Επιπλέον, κλινικές O-ASCs απομονώνει επιδεικνύουν ετερογενή συνέπειες για τον καρκίνο των ωοθηκών

in-vitro

Η

Παράθεση:. Nowicka Α, Marini FC, Solley TN, Elizondo PB, Zhang Υ, Sharp HJ, et al. (2013) Ανθρώπινα επιπλοϊκά-Προέρχεται λιπώδης βλαστοκύτταρα Αύξηση του καρκίνου των ωοθηκών πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση, και χημειοαντίσταση. PLoS ONE 8 (12): e81859. doi: 10.1371 /journal.pone.0081859

Επιμέλεια: Pranela Rameshwar, Rutgers – New Jersey Medical School, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 9 του Αυγούστου 2013? Αποδεκτές: 16 του Οκτωβρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 2 Δεκεμβρίου του 2013

Copyright: © 2013 Nowicka et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις έρευνας από το Πανεπιστήμιο του Τέξας MDAnderson Cancer Centre NCI εξειδικευμένα προγράμματα της ερευνητικής αριστείας (SPORE) σε καρκίνο των ωοθηκών Βραβείο Αναπτυξιακή έρευνα (DRP) (Grant Νο CA83639) [https://www.mdanderson.org/Departments/ovarianspore /] και οι επιχορηγήσεις R01CA133057 από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας [www.nih.gov]. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Παρακαλώ σημειώστε ότι ένα συν-συγγραφέας, PBE, αυτή τη στιγμή απασχολούνται σε Asuragen Inc. στο Ώστιν, Τέξας. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πιο θανατηφόρα γυναικολογική κακοήθεια, με αποτέλεσμα 16.000 θανάτους ετησίως στην Ηνωμένες Πολιτείες [1]. Η θνησιμότητα και νοσηρότητα του καρκίνου των ωοθηκών είναι λόγω του υψηλού ποσοστού ενδοπεριτοναϊκή διάδοση και την ανάπτυξη της χημειοθεραπείας ανθεκτικών όγκων παρά τα αρχικά chemoresponsive ασθένεια.

Ενδοπεριτοναϊκή διάδοση του καρκίνου των ωοθηκών συχνά οδηγεί στο σχηματισμό μετάστασης στο επίπλουν, καλά αγγειοποιημένου και νευρώνονται λιπώδους ιστού που βρίσκεται πάνω από το έντερο. Ο λόγος που το επίπλουν είναι το προτιμότερο «έδαφος» για το μεταστατικό καρκίνο κυττάρων των ωοθηκών παραμένει άγνωστη. Η απάντηση της μετάστασης του καρκίνου των ωοθηκών στο επίπλουν σε χημειοθεραπεία αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό θανάτου από καρκίνο των ωοθηκών, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ του καρκίνου των ωοθηκών και του επιπλοϊκά μικροπεριβάλλον είναι μια σημαντική κινητήρια δύναμη της κλινικής έκβασης [2].

Υποθέσαμε ότι το επίπλουν είναι ένα φιλόξενο περιβάλλον για το σχηματισμό της μετάστασης του καρκίνου των ωοθηκών οφείλεται σε πληθυσμό καρκινικών tropic μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων στο επιπλοϊκά λιπώδη. Πρόσφατα, χαρακτηρίσαμε ένα πληθυσμό από πολυ-ισχυρά λιπώδη μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων από το επίπλουν (O-ASCs) δύο ασθενών με νόσο επιπλοϊκά και ένα χωρίς. Κάθε απομόνωσης επιβεβαιώθηκε ότι διαθέτει multi-ισχυρό δυναμικό διαφοροποίησης, όπως αναμενόταν από την MSC. ASCs μοιάζουν βλαστικά κύτταρα μυελού των οστών προερχόμενα μεσεγχυματικά (ΒΜ-MSC) τα οποία έχουν την ικανότητα να μεταναστεύουν σε όγκους και μπορεί να έχουν δειχθεί ότι προάγουν την έναρξη του όγκου, την ανάπτυξη, την αγγείωση, μετάσταση, και την αντίσταση στη χημειοθεραπεία σε πολλά μοντέλα όγκου [3-6 ]. Ερευνήσαμε τα αποτελέσματα των O-ASCs από ασθενείς με και χωρίς επιπλοϊκά μετάσταση σε κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι κυτταρικές σειρές

Οι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκινώματος των ωοθηκών OVCA 429, OVCA 433 και Α2780 ελήφθησαν από τον Δρ Samuel C. Mok (Πανεπιστήμιο του Τέξας MD Anderson Κέντρο, Houston, TX). OVCA 429 και OVCA 433 κυτταρικές γραμμές καθιερωμένες κυτταρικές σειρές που προέρχονται από ασθενείς με τελικού σταδίου ορώδες αδενοκαρκινώματα των ωοθηκών, όπως περιγράφεται από Bast et al [7]. Οι ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές καρκινώματος των ωοθηκών SKOV3 και Α2780 και την ανθρώπινη BM-MSCs ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA). Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε ϋΜΕΜ (Mediatech, Inc., Manassas, VA) που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) (HyClone, Logan, UT) και 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη (Mediatech, Manassas, VA) στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO2.

Ανθρώπινο O-ASCs και SQ-ASCs απομόνωση

Σύμφωνα με το MD Anderson Institutional Review Board-εγκεκριμένο πρωτόκολλο, κατάφωρα φυσιολογικό εμφανίζονται τα ανθρώπινα επίπλουν και του υποδόριου λιπώδους ιστού ελήφθησαν κατά τη διάρκεια των διαδικασιών σταδιοποίηση των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών. Ενημερωμένη συγκατάθεση για τις τραπεζικές ιστού λήφθηκε από κάθε ασθενή. Όλα κλινική έρευνα έχει διεξαχθεί μέσω των εντολέων που εκφράστηκε στη Δήλωση της Helinski. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή. O-ASCs και SQ-ASCs απομονώθηκαν σύμφωνα με προηγουμένως δημοσιευμένα πρωτόκολλα [8]. O-Asc1 απομονώθηκε από ένα (δείκτης μάζας σώματος (ΒΜΙ) = 25,2 kg /m

2) ασθενής με υποτροπιάζουσα endometriod αδενοκαρκίνωμα του ενδομητρίου και των ωοθηκών χωρίς επιπλοϊκά μετάσταση. O-ASC4 και O-ASC5 απομονώθηκαν από από ασθενείς με υψηλής ποιότητας υδαρής καρκίνου των ωοθηκών με επιπλοϊκά συμμετοχή. Ο ΔΜΣ για τους ασθενείς από τους οποίους προήλθαν O-ASC4 και 5 ήταν 32,4 kg /m

2 και 22 kg /m

2, αντίστοιχα. O-ASC5 χρησιμοποιήθηκε για συστοιχίας γονιδιακής έκφρασης και έκφρασης δείκτη κυτταρικής επιφάνειας, αλλά χάθηκε μετά σειριακό πέρασμα

in-vitro

και έτσι θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί όχι σε λειτουργικές δοκιμασίες. Το απομονωμένο Ο-ASCs και SQ-ASCs καλλιεργήθηκαν σε μέσο α-ΜΕΜ (Mediatech, Manassas, VA) με 20% FBS (HyClone, Logan, UT) και 1% πενικιλλίνη στρεπτομυκίνη και L-γλουταμίνη (Mediatech, Manassas, VA ).

γραμμής O-ASCs χαρακτηρισμό

Μετά την απομόνωση, τα κύτταρα επεκτάθηκαν

in-vitro

σε μέσο α-ΜΕΜ (Mediatech, Manassas, VA). έκφραση δείκτη επιφανείας κυττάρου χαρακτηρίζεται από την ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. O-ASCs χαρακτηρίστηκαν σε πρώιμο πέρασμα (το πολύ 5) χρησιμοποιώντας αντισώματα ειδικά για τις ακόλουθες δείκτες: CD11b, CD29, CD34, CD44, CD45, CD 90, EpCam (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), και CD105 (BioLegend, San Diego, CA).

Για να επιβεβαιώσετε την αδιπογονική δυναμικό της O-ASCs και BM-MSCs, που επωάζονται 10

5 κύτταρα σε αδιπογονική μέσων επαγωγής (μέσο DMEM με 10% FBS, 45 g /L γλυκόζη, L-γλουταμίνη, 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη, 10 μg /ml ινσουλίνη, 500 μΜ 3-ισοβουτυλο-1-μεθυλξανθίνη, 1 μΜ δεξαμεθαζόνη, και 200 ​​μΜ ινδομεθακίνη). Μετά από 72 ώρες, το μέσο συντήρησης (DMEM Mediatech, Manassas, VA) με 10% FBS, 45 g /L γλυκόζη, L-γλουταμίνη, 10 μg /ml ινσουλίνη, 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη) προστέθηκε στα κύτταρα. Το μέσο συντήρησης αλλάχθηκε 2 φορές την εβδομάδα κατά την διάρκεια 10 ημερών επώασης. Στους χρόνους που υποδεικνύονται, εκτελέσαμε κόκκινο έλαιο Ο (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ) ιστοχημική χρώση των κυτταροπλασματικά έγκλειστα ουδέτερων λιπιδίων λειτουργικών λιποκύτταρα.

οστεοβλαστικά διαφοροποίηση O-ASCs και BM-MSCs ήταν πραγματοποιείται με τη χρήση 5 x10

4 κύτταρα. Μετά από 3 εβδομάδες επώασης σε μέσο επαγωγής οστεοβλαστών (μέσο OsteoDiff ΝΗ, Bergisch Gladbach, Miltenyi Biotec GmbH, Germany), εξωκυτταρικές αποθέσεις ασβεστίου σημάνθηκαν σύμφωνα με Ερυθρό της αλιζαρίνης S (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ).

Επιβεβαιώσαμε τα κύτταρα χονδρογονικό δυναμικό χρησιμοποιώντας 10

6 κύτταρα, τα οποία επωάστηκαν σε 2 ml χονδρογονικό μέσο (ϋΜΕΜ μέσο με 45 g /L γλυκόζη, L-γλουταμίνη, 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη, 50 μg /ml ασκορβικό οξύ, 100 ηΜ δεξαμεθαζόνη, και 10 ng /ml αυξητικό παράγοντα μετασχηματισμού β). Το μέσο αλλάχθηκε τρεις φορές την εβδομάδα. Μετά από 21 ημέρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν, εγκλείστηκαν σε παραφίνη και βάφτηκαν με 1% Alcian Blue (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ) σε 5% οξικό οξύ. Το μπλε χρώμα στην εικόνα αντιπροσωπεύει θειωμένη πρωτεογλυκανών καταθέσεις που είναι ενδεικτικά της λειτουργικής χονδροκυττάρων.

δοκιμασία της ανθρώπινης έκφρασης Nimblegen HG18

εκχύλιση mRNA για O-Asc1, O-ASC4, O-ASC5, υποδόρια ASCs (SQ-ASCs), και ΒΜ-MSCs εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το Qiagen RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Nimblegen (Madison, WI) HG18 72 k μικροσυστοιχίες που περιέχουν 72.000 μακρών ολιγονουκλεοτιδίων (60-μερές), ότι κεραμίδι το ανθρώπινο γονιδίωμα χρησιμοποιήθηκαν για συστοιχίας γονιδιακής έκφρασης προφίλ. Gene προφίλ έκφρασης εκτελέστηκε τουλάχιστον δύο φορές για κάθε κυτταρικές γραμμές. εικόνες μικροσυστοιχιών υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε NimbleScan v2.3 (Nimblegen, Madison, WI). Ομαλοποίηση εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το ισχυρό αλγόριθμο ανάλυσης πολλαπλών πίνακα με τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις.

Έκφραση λογισμικό ανάλυσης

Για να εκτελέσετε την ανάλυση διασποράς του δείγματος και της έκφρασης προφίλ ανάλυση των γονιδίων, η BRB Εργαλεία Array Έκδοση 4.2. 1 (Richard Simon και η Amy Peng Lam, το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Bethesda, MD) χρησιμοποιήθηκε. Τα δείγματα συγκεντρωμένα χρησιμοποιώντας ανεξέλεγκτους ιεραρχικής ομαδοποίησης με τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις. συγκρίσεις Class χρησιμοποιώντας μονοπαραγοντική

t-test

με ένα τυχαίο μοντέλο διακύμανση επί RMA (Robust Multi-array Κανονικός) κανονικοποιημένα δεδομένα χρησιμοποιήθηκαν για την ταυτοποίηση γονιδίων που ήταν σημαντικά διαφορικά εκφραζόμενο. Ένα επίπεδο σημαντικότητας ρ = 0,001 ορίστηκε για κάθε μονοπαραγοντική δοκιμή.

Μεταβολικό δοκιμασίες

Τα κύτταρα επιστρώθηκαν στα 50,000 κύτταρα ανά φρεάτιο σε πλάκες 12 φρεατίων για 48 ώρες. Τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για εξωκυτταρικό μεταβολική ανάλυση και τα κυτταρικά ιζήματα λύθηκαν με ρυθμιστικό RIPA για ανάλυση πρωτεΐνης. Γλυκόζη κατανάλωση εκτιμήθηκε με Wako κιτ γλυκόζης και οι δοκιμασίες έγιναν σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Τα υπερκείμενα των κυττάρων προστέθηκαν σε μία πλάκα 96 φρεατίων γεμίζουν με ανασυσταθέν αντιδραστήριο γλυκόζης Wako (Wako Chemicals, Richmond, VA). Στη συνέχεια, η πλάκα επωάστηκε στους 37 ° C και ανακινήθηκε ταυτόχρονα. Η απορρόφηση ανιχνεύθηκε σε 505 nm και 600 nm με φασματοφωτόμετρο (SpectraMax

® Μ5? Molecular Devices) για τη μέτρηση του περιεχομένου γλυκόζης των δειγμάτων. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν σε μmol /mg πρωτεΐνης [9].

Το περιεχόμενο γαλακτικού των δειγμάτων μετρήθηκαν με το Trinity Kit γαλακτικού οξέος σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα κύτταρα υπερκείμενο αραιώθηκαν 1:10 σε PBS και στη συνέχεια αραιωμένα δείγματα προστέθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων που περιέχει το ανασυσταμένο αντιδραστήριο Γαλακτικό Trinity. Το παρασκευασμένο πλάκας 96-φρεατίων προστατεύτηκε από το φως και επωάζονται στους 37 ° C για μία ώρα. Η απορρόφηση ανιχνεύθηκε στα 540nm με φασματοφωτόμετρο (SpectraMax

® Μ5? Molecular Devices) για τη μέτρηση γαλακτικού περιεχόμενα των δειγμάτων. δοκιμασία πυροσταφυλικού εμπλέκονται χρωματομετρική νικοτιναμίδη αδενίνη δινουκλεοτιδίου (NADH) ποσοτικοποίηση. Γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH) καταλύει τη μετατροπή του πυροσταφυλικού σε γαλακτικό με το βάρος του NADH. Εν συντομία, διάλυμα NADH παρασκευάστηκε με διάλυση NADH (Sigma Aldrich) σε διάλυμα Tris (ρΗ = 7,0). Γαλακτική αφυδρογονάση (LDH) ανασυστάθηκε σε 50% γλυκερόλη και αραιώνονται σε διάλυμα Tris (ρΗ = 7,0). διάλυμα NADH προστέθηκε σε πλάκα 96 φρεατίων πριν την προσθήκη του υπερκειμένου κυττάρου. Το παρασκευασμένο πλάκα επωάστηκε στους 37 ° C για πέντε λεπτά και ανακινήθηκε. Η απορρόφηση διαβάστηκε στα 340 nm με φασματοφωτόμετρο (SpectraMax

® Μ5? Molecular Devices) για να σαρώσει τα βασικά επίπεδα της NADH. Στη συνέχεια, LDH προστέθηκε και η πλάκα προστατεύθηκε από το φως και επωάστηκε στους 37 ° C για μία ώρα. Τα τελικά επίπεδα NADH μετρήθηκαν στο ίδιο μήκος κύματος. Απώλεια απορρόφησης NADH αντιστοιχεί σε πυροσταφυλικό περιεχόμενα των δειγμάτων. Τα ενδοκυτταρικά περιεχόμενα ΑΤΡ μετρήθηκαν για τους διάφορους τύπους κυττάρων με τη χρήση της Titer-Glo φθορισμού δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας κυττάρων (Promega). Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων (λευκό) σε 8000 κύτταρα ανά φρεάτιο για 24 ώρες. Εικοσιτέσσερις ώρες αργότερα, τα κύτταρα επωάστηκαν για 2 ώρες σε είτε παρουσία ολιγομυκίνη (2,5μg /ml) ή 2-δεοξυγλυκόζη (100mm). Το περιεχόμενο ΑΤΡ ανιχνεύθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, με ένα φασματοφωτόμετρο (SpectraMax

® M5? Molecular Devices).

Διάδοση δοκιμασία

OVCA 429, OVCA 433 κύτταρα, Α2780, και κύτταρα SKOV3 διαμολύνθηκαν σταθερά με το γονίδιο της λουσιφεράσης της πυγολαμπίδας χρησιμοποιώντας ένα βραδέος μέθοδο και επιστρώθηκαν στα 5000 κύτταρα /φρεάτιο σε μία πλάκα 96 φρεατίων BD Falcon, μόνος του ή σε 1: 1 συν-καλλιέργεια με O-Asc1 ή O-ASC4. Συν-καλλιέργειες διεξήχθησαν σε DMEM (Mediatech, Manassas, VA) με 10% FBS και 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη. Μετά από 24 ώρες, 0,15 mg /ml D-λουσιφερίνης προστέθηκε και επωάστηκε για 1 ώρα. Η φωταύγεια μετρήθηκε με ένα φωτόμετρο (Fluostar Omega, BMG Labtech, Offenburg, Germany). Τα μέσα μαζικής ενημέρωσης έχουν αντικατασταθεί, και οι μετρήσεις επαναλήφθηκαν για έως και 11 ημέρες καλλιέργειας.

δοκιμασία Μετανάστευση

Η μετανάστευση των κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ρυθμισμένα μέσα (CM) που παράγεται από O-Asc1 και O-ASC4 . O-ASCs καλλιεργήθηκαν σε ένα πλακίδιο 6 φρεάτων σε συρροή σε μέσο α-ΜΕΜ (Mediatech, Manassas, VA) με 20% FBS (Hyclone) και 1% πενικιλίνη, στρεπτομυκίνη και L-γλουταμίνη (Mediatech, Manassas, VA). Μετά την πλύση με PBS, DMEM ελεύθερο ορού, με 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη (Mediatech, Manassas, VA) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο. Μετά από 36 ώρες, O-ASC CM συλλέχθηκε. Ο καρκίνος των ωοθηκών κυτταρικές σειρές ενδιαφέροντος επιστρώθηκαν (σε μέσα άνευ ορού) στο ανώτερο τμήμα του 24 φρεατίων transwell πλάκα με 8 μm πόρους (Corning, Inc., Corning, ΝΥ) με 500 μΙ Ο-ASC CM προστέθηκε σε ο πυθμένας του κάθε φρεάτιο. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν ή εις τριπλούν. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα τα οποία μετανάστευσαν χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας Hema 3 Stat Pack (Thermo Fisher Scientific, Waltham, ΜΑ). Η οπτική πυκνότητα διαβάστηκε απευθείας από την πλάκα 96 φρεατίων στα 590 nm από έναν αναγνώστη ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) πλάκα (BioTek Instruments, Winooski, VT).

δοκιμασία ακτινοευαισθησία

λουσιφεράσης -επισημασμένο κύτταρα Α2780 επιστρώθηκαν (με πυκνότητα 10.000 κύτταρα /φρεάτιο) σε μία πλάκα 96 φρεατίων BD Falcon, μόνος του ή σε 1: 1 ή 1:19 συν-καλλιέργεια με O-Asc1 ή O-ASC4. Συν-καλλιέργειες διεξήχθησαν σε DMEM (Mediatech, Manassas, VA) με 10% FBS, 250 μg /ml G418, 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα ακτινοβολούνται σε 0 Gy, 2 Gy, 4 Gy, 6 Gy και 8 Gy μέσω καίσιο 137 ακτινοβολία εξωτερικής δέσμης. Η έκφραση λουσιφεράσης μετρήθηκε σε 0,15 mg /ml D-λουσιφερίνης. Μετά από 1 ώρα επώασης στους 37 ° C, η φωταύγεια μετρήθηκε με ένα φασματοφωτόμετρο (Fluostar Omega, BMG Labtech, Offenburg, Germany). Το μέσο στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με νέο μέσο που περιέχει G418, και οι μετρήσεις επαναλήφθηκαν κάθε δεύτερη μέρα έως ότου τα κύτταρα έφθασαν σε συρροή.

Η πακλιταξέλη και η καρβοπλατίνη δοκιμασίες

Luciferase-επισημασμένο OVCA 429, OVCA 433, Α2780, και κύτταρα SKOV3 επιστρώθηκαν (με πυκνότητα 10.000 κύτταρα /φρεάτιο) σε μία πλάκα 96 φρεατίων BD Falcon, μόνος του ή σε 1: 1 συν-καλλιέργεια με O-Asc1 και Ο-ASC4. Συν-καλλιέργειες διεξήχθησαν σε DMEM (Meditech, Manassas, VA). Μετά από 24 ώρες, OVCA 429 έως 0,5 μΜ πακλιταξέλης 200 μΜ καρβοπλατίνη, OVCA 433 έως 1 μΜ πακλιταξέλης και 100 μΜ καρβοπλατίνη, Α2780 σε 20 μΜ πακλιταξέλη 200 μΜ καρβοπλατίνη και SKOV3 έως 50 μΜ πακλιταξέλης και 100 μΜ καρβοπλατίνη εκτέθηκαν. Η έκφραση λουσιφεράσης μετρήθηκε σε 0,15 mg /ml D-λουσιφερίνης. Μετά από 1 ώρα επώασης στους 37 ° C, η φωταύγεια μετρήθηκε με ένα φωτόμετρο (Fluostar Omega, BMG Labtech, Offenburg, Germany). Τα μέσα στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με νέα μέσα που περιέχουν την ορισθείσα συγκέντρωση της πακλιταξέλης και καρβοπλατίνη και η μέτρηση επαναλαμβάνονταν πάνω από 9 ημέρες.

O-ASCs

in-vivo

μεταμόσχευση

Για να καθοριστεί εάν O-ASCs εμφυτεύονται σε στρώμα καρκίνο των ωοθηκών, 5 γυμνούς ποντικούς εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκά (ΙΡ) με 5 χ 10

6 λουσιφεράσης που εκφράζουν SKOV-3 κύτταρα όγκου, με ή χωρίς τον ίδιο αριθμό RFP-επισημασμένου O-Asc1. Η ομάδα ελέγχου αποτελείτο από το ποντίκι ένεση με μόνο O-Asc1. Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε με

in-vivo

bioluminescent απεικόνισης. Οι ποντικοί θανατώθηκαν μετά από 53 ημέρες. Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με το πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την Επιτροπή (IACUC) MD Anderson του Θεσμική Animal Care και Χρήση. Όγκου και των ωοθηκών σταθεροποιήθηκαν και ενσωματωμένα σε παραφίνη για ιστολογική ανάλυση. Ανοσοφθορισμού διεξήχθη στις ωοθήκες με σκοπό την ανίχνευση RFP εκφράζουν O-ASC σε όλους τους ποντικούς. Όλες οι εργασίες των ζώων γίνεται σύμφωνα με το εγκεκριμένο πρωτόκολλο του ποντικιού στο MD Anderson Cancer Κέντρο. πρωτόκολλο του ποντικιού εγκρίθηκε από την Επιτροπή (IACUC) MD Anderson του Θεσμική Animal Care και Χρήση. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) χρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας πρότυπο πρωτόκολλο σε πλακίδια των εγκλεισμένων σε παραφίνη ιστών.

Στατιστική ανάλυση

T-τεστ διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας λογισμικό GraphPad Prism, έκδοση 5,00 (GraphPad Software, San Diego, CA, www.graphpad.com) για να προσδιοριστεί στατιστικώς σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων. Οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές εάν

σ

& lt? 0.05 .. Όλα τα γραφήματα δείχνουν μέση τιμή ± SEM.

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός O-ASCs

O-ASCs απομονώθηκαν από τρεις ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. O-Asc1 ελήφθη από επιπλοϊκά λιπώδη ιστό ενός ασθενούς με ενδομητρίου και αδενοκαρκίνωμα ωοθηκών χωρίς επιπλοϊκά μετάσταση. O-ASC4 και Ο-ASC5 απομονώθηκαν από χονδροειδώς κανονική εμφανίζονται επίπλουν λαμβάνεται από έναν ασθενή με ορώδες καρκίνωμα των ωοθηκών με επιπλοϊκά μετάσταση. δοκιμασίες Διαφοροποίηση έδειξε ότι Ο-ASCs, όπως BM-MSCs, διαφοροποιούνται σε αδιπογονική, χονδρογονική και οστεογονικές γραμμώσεις μεσεγχυματικά (Σχήμα S1). Οι δείκτες κυτταρικής επιφάνειας χαρακτηρίστηκαν με κυτταρομετρία ροής (σχήμα S2). O-Asc1 και Ο-ASC4, παρόμοια με BM-MSCs, εξέφρασε CD29, CD44, CD73, CD90, και CD105. Δεν εκφράζουν CD11b, CD34, CD45, ή EpCam. Το CD34 δείκτη επιφάνειας (διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που εκφράζεται σε πρώιμων αιματοποιητικών και αγγειακό ιστό) εκφράστηκε κατά 10% του Ο-ASC1s σύγκριση με 0,2% του ΒΜ-MSCs και 1,42% των Ο-ASC4. Ενδογλίνη (CD105) και CD44 ήταν σχεδόν καθολικά εκφράζονται σε BM-MSCs (99,34% και 100% των κυττάρων, αντίστοιχα), αλλά εκφράστηκαν σε χαμηλότερα επίπεδα σε O-Asc1 (87,24% και 46,1% των κυττάρων, αντίστοιχα), ή Ο- ASC4 (7,98% και 30% των κυττάρων, αντίστοιχα). Άλλοι δείκτες εκφράστηκαν σε παρόμοια επίπεδα σε όλες τις κυτταρικές σειρές.

Η γονιδιακή έκφραση

Η γονιδιακή έκφραση του Ο-Asc1, O-ASC4, O-ASC5 για σύγκριση με SQ-ASC και BM-MSC ερευνήθηκε με συστοιχίες Nimblegen. Μια ιεραρχική συσταδοποίηση αλγόριθμος χρησιμοποιήθηκε σε δείγματα ομάδα επί βασίζεται στην ομοιότητα στην έκφραση όλων των 24.000 γονίδια. Δενδρογράμματα βασίζεται σε ανεξέλεγκτους ομαδοποίηση χωρίζονται δείγματα σε δύο κύριους κλάδους? 1) Ο-ASC4 και Ο-ASC5, τα οποία απομονώθηκαν από ασθενείς με μετάσταση στο επίπλουν, και 2) SQ-ASCs και Ο-Asc1) και ΒΜ-MSCs (Σχήμα 1Α).

Ανεξέλεγκτη ομαδοποίηση έγινε για να δημιουργήσει ένα δενδρόγραμμα χρησιμοποιώντας κέντρο συσχέτισης και το μέσο σύνδεσης (Α) (Ο-Asc1, O-ASC4, O-ASC5, BM-MSC: n = 2? SC-ASC: n = 4). ανάλυση ΙΡΑ αποκάλυψε οδούς με σημαντικά διαφορετική έκφραση μεταξύ O-Asc1 και Ο-ASC4 (Β). Οι λειτουργίες που παρατίθενται από το πιο σημαντικό (υψηλότερο bars) έως λιγότερο σημαντικό (κατώτερο ράβδοι), και η κάθετη κίτρινη γραμμή δηλώνει το όριο για σημαντικότητα (Ρ = 0.05).

Η

Χρησιμοποιώντας ένα πακέτο στατιστικών εργαλείων, εντοπίσαμε 415 σημαντικά διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων μεταξύ O-Asc1 και O-ASC4. Πενήντα έξι τοις εκατό των υπερ-εκφρασμένων γονιδίων (ελάχιστη 10x φορές αλλαγή) σε O-ASC4 σχέση με O-Asc1 κωδικοποιημένες για προϊόντα των οποίων η τελική εντοπισμός είναι στη μεμβράνη του πλάσματος ή εξωκυτταρικό χώρο. Ingenuity Pathways Ανάλυση (ΙΡΑ) ανάλυση έδειξε ότι τα περισσότερα από αυτά τα γονίδια που εμπλέκονται στην κυτταρική κίνηση, την ανάπτυξη, και τον πολλαπλασιασμό και τον καρκίνο ή μικρό μόριο μεταβολισμού (Σχήμα 1Β). Ο Πίνακας 1 παραθέτει τα κορυφαία 25 γονίδια (πάσο αλλαγή αποκοπής & gt? 4 και τιμή p & lt? 0.001) των οποίων η έκφραση διέφεραν σημαντικά μεταξύ OSC4 και OSC1.

Σύμβολο

αριθμό προσχώρησης

όνομα γονίδιο Εηίτεζ

Τοποθεσία

Πληκτρολογήστε

Fold αλλαγή

p-value Παραμετρική

ACANNM_001135, NM_013227AggrecanExtracellular spaceOther116.511.20E-06VNN1NM_004666Vanin 1Plasma membraneEnzyme0. υποδοχέα συζευγμένου με πρωτεΐνη 116Plasma membraneG-πρωτεΐνη 0327.20E-06GPR116NM_015234G συνδυασμό receptor23.811.02E-05GRIK2NM_021956, υποδοχέα NM_175768Glutamate, ιονοτροπικοί, καϊνικού 2Plasma membraneIon channel21.191.02E-05NRCAMNM_001037132Neuronal κυτταρική προσκόλληση moleculePlasma membraneOther0.0331.13E-05C1QL3NM_001010908Complement στοιχείο 1, q δευτερεύον-όπως 3Extracellular spaceOther0.0421.24E-05ITGA8NM_003638Integrin, άλφα 8Plasma membraneOther51.011.35E-05CADM3NM_021189Cell μορίου προσκόλλησης 3Plasma membraneOther0.0491.51E-05NEBLNM_006393NebulettePlasma membraneOther0.0582.17E-05GJA5NM_005266Gap πρωτεΐνη διασταύρωση, άλφα 5, 40 kDaPlasma membraneTransporter24.452.27E-05NPTX1NM_002522Neuronal πεντραξίνη IExtracellular spaceOther35.62.51 E-05AIF1LNM_001002260Allograft φλεγμονώδη παράγοντα 1-likePlasma παράγοντας membraneOther12.842.73E-05F11RNM_016946F11 receptorPlasma membraneOther0.0983.18E-05PF4NM_002619Platelet 4Extracellular spaceCytokine0.0973.39E-05OXTRNM_000916Oxytocin receptorPlasma membraneG-πρωτεΐνης σε συνδυασμό receptor14.553.63E-05PCDH10NM_032961Protocadherin 10Plasma membraneOther57.293.83E-05SGCANM_000023Sarcoglycan, άλφα ( 50 kDa δυστροφίνης σχετιζόμενη γλυκοπρωτεΐνη) Plasma membraneOther10.434.00E-05SORBS1NM_001034954Sorbin και τον τομέα SH3 περιέχουν 1Plasma membraneOther30.084.00E-05CXCL5NM_002994Chemokine (σύνδεσης CXC μοτίβο) συνδέτη 5Extracellular spaceCytokine0.124.15E-05ESM1NM_007036Endothelial κυττάρου-ειδικό μόριο 1Extracellular spaceGrowth factor20.674.34E-05CCBP2NM_001296Chemokine πρωτεΐνη 2Plasma membraneG-πρωτεΐνης σε συνδυασμό receptor0.134.39E-05IL13RA2NM_000640interleukin 13 υποδοχέα, άλφα 2Plasma membraneTransmembrane receptor0.0684.60E-05MMP7NM_002423Matrix μεταλλοπεπτιδάση 7 (ματριλυσίνη, της μήτρας) Εξωκυττάρια spacePeptidase0.14.68E-05WFDC1NM_021197WAP τέσσερις-δισουλφίδιο πεδίο πυρήνα 1Extracellular spaceOther19.454.75E-05Table 1. Κατάλογος των 25 γονιδίων των οποίων η έκφραση ήταν στατιστικά σημαντικά διαφορετική μεταξύ O-ASC4 εναντίον O-Asc1.

Για τον υπολογισμό της στατιστικής σημαντικότητας, χρησιμοποιήσαμε Φοιτητών

t-test

. CSV Λήψη CSV

Μεταβολικό δοκιμασίες

Stroma έχει αποδειχθεί ότι για την προώθηση της κακοήθη εξέλιξη αλλάζοντας τον μεταβολισμό των καρκινικών κυττάρων. Σύμφωνα με το «φαινόμενο αντίστροφης Warburg», στρωματικά κύτταρα ρυθμίζουν προς τα πάνω γλυκόλυση, αυξάνοντας την παραγωγή γαλακτικού οξέος που εκκρίνεται και καταναλώνεται από γειτονικά κύτταρα καρκίνου για να τροφοδοτήσουν την οξειδωτική φωσφορυλίωση (OXPHOS) [10]. Υποθέσαμε ότι οι φιλο-πολλαπλασιαστικές και μεταναστευτικές συνέπειες της OSC μπορεί να εξηγηθεί από τις διαφορές του μεταβολισμού σε στρωματικά απομονώνει. SQ-ASC είχε το υψηλότερο επίπεδο της πρόσληψης γλυκόζης και γαλακτικού έκκριση σε σύγκριση με BM-MSC και Ο-ASCs (Σχήμα 2Α και 2Β). Μεταξύ O-ASCs απομονώνει, O-ASC4 είχαν σημαντικά υψηλότερο ποσοστό της γλυκόλυσης και του γαλακτικού έκκριση από O-Asc1 (Σχήμα 2Α και 2Β). O-ASC4 είχαν υψηλότερο ρυθμό πρόσληψης πυροσταφυλικού από O-Asc1 οποίο ενδέχεται μετατρέπεται σε γαλακτικό δεδομένου ότι το έχουν υψηλότερο ποσοστό γλυκολυτικών δραστηριότητας σε O-ASC4 (Σχήμα 2C). Σταθερή παραγωγή κατάσταση ATP ήταν υψηλότερη σε O-ASC4 από O-Asc1 (Σχήμα 2Ε-F). Η παραγωγή ΑΤΡ αποδίδεται σε γλυκόλυση προσδιορίστηκε με αναστολή της Ρ1Ρ0-ATPsynthase με ολιγομυκίνη ενώ ΑΤΡ από οξειδωτική φωσφορυλίωση (OXPHOS) μετρήθηκε με την αναστολή της οδού γλυκόλυσης με 2-δεοξυγλυκόζη (2DG). Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι Ο-ASC4 παράγεται ΑΤΡ επιλεκτικά από τη γλυκόλυση ενώ O-Asc1 παράγεται ΑΤΡ από OXPHOS (Σχήμα 2 Ε και F).

Μεταβολικό ανάλυση διεξήχθη επί ΒΜ-MSC, SC-ASC και Ο-Asc1 και 4, συμπεριλαμβανομένων πρόσληψη γλυκόζης (Α), γαλακτικό έκκριση (Β), η πρόσληψη πυροσταφυλικό (C), η ενδογενής παραγωγή ATP (D), ΑΤΡ που προέρχεται από γλυκόλυση (Ε) και ΑΤΡ που προέρχεται από οξειδωτική φωσφορυλίωση (OXPHOS) (F). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± S.E.M. * P & lt? 0,05, ** p & lt? 0,01 και *** ρ & lt? 0,001 για μη ζευγαρωμένα 2-tailed t-test του Student (n = 8).

Η

O-ASCs επιδράσεις στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών

Επειδή η διάκριση μεταξύ O-Asc1 και O-ASC4 σε σχέση με την ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης και μεταβολικές δοκιμασίες, υποθέσαμε ότι αυτές οι απομονώσεις μπορεί να έχουν διακριτές επιδράσεις στην βιολογία του καρκίνου των ωοθηκών. Για να ελεγχθεί αυτό, συγκρίθηκαν οι επιδράσεις της Ο-Asc1 και Ο-ASC4 επί του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών, της μετανάστευσης και chemsensitivity. Πρώτον, για να προσδιοριστεί αν O-ASCs επηρεάζουν τον μεταβολισμό των ωοθηκών των καρκινικών κυττάρων, μη επισημασμένο Ο-ASCs και λουσιφεράσης που εκφράζουν κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών (OVCA 429, OVCA 433, Α2780, και SKOV3) συν-καλλιεργήθηκαν σε αναλογία 1: 1 μέχρι κύτταρο κατέστησαν συρρέοντα 11 ημέρες μετά την επίστρωση. OVCA 429 και OVCA 433 κύτταρα πολλαπλασιασμός αυξήθηκε σημαντικά στα 7 (ρ & lt? 0.001 και ρ & lt? 0,5 ​​αντίστοιχα), 9 (ρ & lt? 0,0001 και για τις δύο κυτταρικές σειρές) και 11 ημέρες (ρ & lt? 0.0001 και ρ & lt? 0,001 αντίστοιχα) όταν συν-καλλιεργούνται με O-Asc1 σε σύγκριση με τον έλεγχο. Σημαντικές προ-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της Ο-ASC4 παρατηρήθηκαν σε OVCA 429 κύτταρα μετά από 9 ημέρες (ρ & lt? 0,01) και OVCA 433 κύτταρα σε 11 ημέρα της συν-καλλιέργειας (ρ & lt? 0.001). O-ASC4 αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων SKOV3 στα 7 (ρ & lt? 0.001), 9 (ρ & lt? 0,01) και 11 ημέρα (ρ & lt? 0,01). Είναι ενδιαφέρον ότι, O-Asc1 και Ο-ASC4 κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Α2780 ανθρώπινου ωοθηκικού καρκινώματος (ρ & lt? 0,01 τις ημέρες 7, 9 και 11) (Σχήμα 3). Για την αξιολόγηση των επιπτώσεων της χαμηλότερης αναλογίας των κυττάρων ASC, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς πολλαπλασιασμού με 1:19 O-ASCs: αναλογία καρκινικών κυττάρων (Σχήμα S3). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο ρυθμό πολλαπλασιασμού για OVCA 429, OVCA 433, κυτταρικές σειρές SKOV3 Α2780 και όταν συν-καλλιεργήθηκαν με O-ASCs την αναλογία αυτή.

λουσιφεράσης που εκφράζουν κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών καλλιεργήθηκαν μόνα τους ή σε μία αναλογία 1: 1 με μη επισημειωμένο O-ASCs. Σημαντική διαφορά ανάμεσα στους ελέγχους (τα καρκινικά κύτταρα καλλιεργήθηκαν μόνο) και καρκινικά κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν με O-ASCs δείχνονται: *, Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? ****, P & lt? 0,0001 (n = 5). ANOVA με Bonfferoni τεστ πολλαπλών συγκρίσεων.

Η

O-ASCs συνέπειες για ωοθηκών μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων

Για να διερευνηθεί η επίδραση των Ο-ASCs για τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών, τροποποιημένο Boyden δοκιμασίες θάλαμο διεξήχθησαν με ρυθμισμένα μέσα (CM) από Ο-ASCs. Ο αριθμός των καρκινικών κυττάρων μετανάστευσαν (OVCA 429, OVCA 433, Α2780, και SKOV3) αυξήθηκαν σημαντικά μετά από επώαση με CM από τα δύο Ο-Asc1 και 4. O-ASC4 CM σημαντικά αυξημένη μετανάστευση των OVCA 429, 433 και κύτταρα Α2780, σε σύγκριση με O-Asc1. (Εικόνα 4, Εικόνα S4).

Ο καρκίνος των ωοθηκών κυττάρων που μετανάστευσαν μέσω ενός πόρου 8 μm με την παρουσία του ελέγχου του Ο-ASC ρυθμισμένα μέσα. Η απορρόφηση στα 590 nm αντανακλά τον αριθμό των κυττάρων που διήλθε μέσω της μεμβράνης transwell. Σημαντικές διαφορές παρουσιάζονται ως εξής: *, Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0,001 για t-test unpaired 2-tailed του Student (n = 3).

Η

επίδραση O-ASCs στο καρκινικό κύτταρο απόκριση των ωοθηκών σε χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία

Για να καθοριστεί αν η παρουσία Ο-ASCs επιπτώσεις ωοθηκικών καρκινικών κυττάρων απόκριση στη χημειοθεραπεία, υποβάλλαμε σε αγωγή μόνο κύτταρα και συν-καλλιεργήθηκαν με O-ASCs με πακλιταξέλη ή καρβοπλατίνη. OVCA 429 κύτταρα είχαν σημαντικά μεγαλύτερη επιβίωση μετά από αγωγή με καρβοπλατίνη ή ταξόλη όταν συν-καλλιεργήθηκαν με O-ASC4. OVCA 433 και SKOV-3 επιβίωση μετά την αγωγή του καρβοπλατίνη και ταξόλη αυξήθηκαν με συν-καλλιέργεια των δύο Ο-Asc1 και Ο-ASC4. επιβίωση Α2780 δεν επηρεάστηκε από O-ASC συν-καλλιέργεια (Σχήμα 5Α). Για να προσδιοριστεί αποτέλεσμα O-ASCs την ευαισθησία ακτινοβολία, τα κύτταρα Α2780 συνκαλλιεργήθηκαν 1: 1 για 7 ημέρες με O-Asc1 ή O-ASC4. Μετά την επώαση, τα κύτταρα ακτινοβολούνται σε 2, 4, 6, και 8 Gy. Παρατηρήσαμε μια σημαντική αύξηση στην επιβίωση μετά από 4, 6 και 8 Gy σε Α2780 κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν με O-Asc1 (ρ & lt? 0,05, ρ & lt? 0.0001 και ρ & lt? 0,01, αντίστοιχα) και Ο-ASC4 (ρ & lt? 0,01, ρ & lt ? 0.001 και ρ & lt? 0,01, αντίστοιχα) σε σύγκριση με τον έλεγχο (Σχήμα 5Β). Το ραδιόφωνο-προστατευτικός ρόλος του λιπώδους βλαστικών κυττάρων δεν φαίνεται καθαρά σε ένα παρόμοιο πείραμα πραγματοποιήθηκε με 1:19 αναλογία Ο-ASCs κύτταρα να. καρκινικά κύτταρα (Σχήμα S5).

Ο καρκίνος των ωοθηκών κύτταρα καλλιεργήθηκαν με ή χωρίς έναν ίσο αριθμό Ο-ASC και αγωγή με τις δόσεις του paclitaxel και καρβοπλατίνη (n = 5) (Α) ή ακτινοβολία (n = 4) 0-8 Gray (Β), όπως φαίνεται. Σημαντικές διαφορές παρουσιάζονται ως εξής: *, Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001? ****, P & lt? 0.0001 για αταίριαστα 2-tailed t-test του Student.

Η

O-ASC μεταμόσχευση

Στη συνέχεια, έχουμε ως στόχο να προσδιορίσει εάν O-ASCs εμφυτεύονται στο στρώμα με καρκίνο των ωοθηκών και φυσιολογικούς ιστούς, συμπεριλαμβανομένων ωοθήκη. Γυμνοί ποντικοί ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκώς με λουσιφεράση εκφράζουν SKOV-3 κύτταρα όγκου, με ή χωρίς έναν ίσο αριθμό RFP-επισημασμένου O-Asc1. Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε με

in-vivo

bioluminescent απεικόνισης. Μετά από 7 ημέρες, η δραστικότητα λουσιφεράσης ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με O-ASCs αλλά εν συνεχεία μειώθηκε (Σχήμα S6). O-ASCs επανα-ένεση την ημέρα 25. Ο ανοσοφθορισμός εκτελέστηκε 7 ημέρες αργότερα για την ανίχνευση RFP εκφράζουν O-ASCs εντός των ωοθηκών και αμέτοχη ωοθήκη. RFP εκφράζουν O-ASCs ανιχνεύθηκαν εντός του στρώματος ξενομοσχευμάτων ωοθηκών αλλά όχι εντός μη εμπλεκόμενο ωοθήκες (Σχήμα 6Α, 6Β), καταδεικνύοντας ογκο-ειδικά της μεταμόσχευσης, όπως έχει αναφερθεί με την MSC από άλλες πηγές.

(Α) Immunoflouresence διεξήχθη για την ανίχνευση O-ASC σε ξενομοσχεύματα SKOV3 ωοθηκών και κατάφωρα κανονική ωοθήκη. O-ASC ανιχνεύονται ως ερυθρά κύτταρα εντός του στρώματος των όγκων των ωοθηκών σε ποντικούς που έχουν εγχυθεί με RFP εκφράζουν O-ASC. (B) H & amp?. Χρώση του ιστού Ε (μεγέθυνση 20x)

Η

Συζήτηση

Εκτός από λιποκύτταρα, το επίπλουν περιέχει αίματος και του λεμφικού σκάφη, καθώς και ένα πλούσιο φλεγμονώδη διήθηση που κάνουν αυτό διακρίνεται από υποδόριο λιπώδη ιστό.