Αφηρημένο

Ιστορικό

πρωτεϊνών και αντισωμάτων συστοιχίες έχουν αναδειχθεί ως μια πολλά υποσχόμενη τεχνολογία για να μελετήσει την έκφραση της πρωτεΐνης και πρωτεΐνης λειτουργία με τρόπο υψηλής απόδοσης. Αυτοί οι πίνακες αποτελούν επίσης μια νέα ευκαιρία στο προφίλ επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης σε δείγματα ασθενών με καρκίνο και να προσδιορίσει χρήσιμα βιοσημάδια για την κλινική διάγνωση, ταξινόμηση των ασθενειών, την πρόβλεψη, την ανάπτυξη φαρμάκων και της φροντίδας των ασθενών. Εφαρμόσαμε συστοιχίες αντισωμάτων για να ανακαλύψει μια ομάδα πρωτεϊνών που μπορούν να χρησιμεύσουν ως βιοδείκτες για τη διάκριση μεταξύ των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών και φυσιολογικούς μάρτυρες.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Χρησιμοποιώντας ένα σχέδιο μελέτης ασθενών-μαρτύρων της 34 ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών και 53 ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες, εμείς προφίλ των επιπέδων έκφρασης των 174 πρωτεϊνών με χρήση τεχνολογίας συστοιχίας αντισωμάτων και προσδιορίζεται το επίπεδο CA125 χρησιμοποιώντας ELISA. Τα επίπεδα έκφρασης αυτών των πρωτεϊνών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας 3 διακρίνουσα μεθόδων, συμπεριλαμβανομένων τεχνητό νευρωνικό δίκτυο, δέντρο ταξινόμηση και την ανάλυση βαθμολογίας διάσπαση-σημείο. Μια ομάδα 5 πρωτεϊνικών δεικτών ορού (MSP-άλφα, ΤΙΜΡ-4, PDGF-R άλφα, και OPG και CA125) ταυτοποιήθηκε, η οποία θα μπορούσε να ανιχνεύσει αποτελεσματικά τον καρκίνο των ωοθηκών με υψηλή ειδικότητα (95%) και υψηλή ευαισθησία (100%), με AUC = 0,98, ενώ CA125 μόνο είχε μια AUC των 0,87.

Συμπεράσματα /Σημασία

πιλοτική μελέτη μας έχει δείξει το πολλά υποσχόμενο σύνολο των 5 δεικτών ορού για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών.

Παράθεση: Jiang W, Huang R, Duan C, Fu L, Xi Υ, Yang Y, et al. (2013) Προσδιορισμός των Πέντε Ορός πρωτεϊνικών δεικτών για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών από Αντίσωμα πίνακες. PLoS ONE 8 (10): e76795. doi: 10.1371 /journal.pone.0076795

Επιμέλεια: Rakesh Κ Srivastava, Το Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 15 του Απριλίου, 2013? Αποδεκτές: 28 Αυγ 2013? Δημοσιεύθηκε: 8 Οκτωβρίου 2013

Copyright: © 2013 Jiang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο ήταν εν μέρει υποστηρίζεται από RayBiotech βιοδεικτών Discovery Pilot Grant. Οι συγγραφείς θα ήθελαν να εκφράσουν τις ευχαριστίες τους για την υποστήριξη του έργου οδηγεί επιστήμονα για Guangzhou περιοχή οικονομική ανάπτυξη (2009L-P180)? Πρόγραμμα εκατό κορυφαίους εφευρέτες και επιχειρηματίες (LCY201111)? Guangdong πρόγραμμα καινοτόμο ερευνητική ομάδα (201001s0104659419), και ερευνητικές επιχορηγήσεις από την περιοχή της οικονομικής ανάπτυξης Guangzhou (2010Q-P450). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Weidong Jiang, Ruochun Huang και Ruo-Pan Huang είναι υπάλληλοι της RayBiotech, Inc. , η οποία αναπτύσσει και εμπορεύεται τεχνολογίες σειρά πρωτεϊνών και προϊόντων. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος των ωοθηκών αποτελεί την τρίτη συχνότερη μορφή καρκίνου και είναι μία από τις κύριες αιτίες του καρκίνου θανάτου μεταξύ των γυναικών στις Ηνωμένες Πολιτείες και την Ευρώπη [1-3]. Τα περισσότερα συμπτώματα του καρκίνου των ωοθηκών είναι ασαφείς και παρόμοια με εκείνα που συχνά έμπειροι με τους όρους υγειονομικού πιο κοινή, μη-απειλητική για τη ζωή? αυτά μπορεί να περιλαμβάνουν κοιλιακό πρήξιμο ή φούσκωμα, πυελικό άλγος ή δυσφορία, χαμηλότερο πόνο στην πλάτη, απώλεια της όρεξης ή αίσθημα πλήρους γρήγορα, επίμονη δυσπεψία, αέρια ή ναυτία και οι αλλαγές στα εντέρου ή της ουροδόχου κύστης συνήθειες. Ως αποτέλεσμα, σχεδόν το 80% των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών διαγιγνώσκονται σε προχωρημένα στάδια. Δυστυχώς, το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για ασθενείς με κλινικά προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών είναι μόνο το 15% έως 20%, σε πλήρη αντίθεση με ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών πάνω από 90% για τους ασθενείς με νόσο του σταδίου Ι. Ως εκ τούτου, είναι επείγον να ανακαλύψουν και να αναπτυχθούν βιοδείκτες για τον προσυμπτωματικό έλεγχο του καρκίνου των ωοθηκών και την έγκαιρη διάγνωση.

Σήμερα, CA-125 και απεικόνισης είναι οι 2 πιο κοινές προσεγγίσεις για τις δοκιμές προσυμπτωματικού ελέγχου του καρκίνου των ωοθηκών. Ωστόσο, αυτές οι 2 δείκτες, είτε χρησιμοποιούνται μόνα τους ή σε συνδυασμό, δεν είναι χρήσιμα διαλογής ή διαγνωστικούς σκοπούς λόγω της χαμηλής εξειδίκευσης και /ή ευαισθησία. Για παράδειγμα, ορός CA-125 έχει δειχθεί ότι έχουν μια ευαισθησία & gt?. 98% αλλά ειδικότητα μόνο 50-60% για πρώιμο στάδιο της νόσου [4-6]

Πολλαπλές μελέτες έχουν αναφερθεί να εντοπίσει βιοδείκτες του καρκίνου των ωοθηκών στον ορό με τη χρήση πολυπλεξίας της τεχνολογίας αντισωμάτων array [7-9]. ομάδα Dr. Lokshin εντοπίστηκε μια ομάδα πρωτεϊνικών δεικτών 6 ορού, συμπεριλαμβανομένης της ιντερλευκίνης-6 (IL-6), ιντερλευκίνη-8 (IL-8), επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF), του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), πρωτεΐνη χημειοελκτική μονοκυττάρων -1 (MCP-1), και CA-125, το οποίο εμφανίζεται σημαντική διαφορά στις συγκεντρώσεις ορού μεταξύ των ωοθηκών καρκίνο και ελέγχου ομάδες με 84% ευαισθησία σε 95% ειδικότητας [7]. ομάδα Δρ Gil Mor εντοπίστηκε μια ομάδα 6 βιοδείκτες, CA-125, οστεοποντίνη (ΟΡΝ), ινσουλινοειδής αυξητικός παράγοντας 2 (IGF-II), μετανάστευση μακροφάγων ανασταλτικό παράγοντα (MIF), η λεπτίνη και η προλακτίνη, η οποία κατέδειξε μια ευαισθησία 95.3 % και ειδικότητα 99,4% για την ανίχνευση του καρκίνου [8] ωοθηκών. Χρησιμοποιώντας συστοιχίες ανθρώπινο βιοτίνη-based αντίσωμα, εξετάσαμε τα προφίλ έκφρασης ορό των 507 πρωτεϊνών σε δείγματα ορού από 47 ασθενείς με καρκίνους των ωοθηκών, 33 ασθενείς με καλοήθεις μάζες των ωοθηκών και 39 υγιείς, ίδιας ηλικίας ελέγχους και εντοπίζονται σημαντικές διαφορές στην έκφραση πρωτεΐνης μεταξύ της κανονικής έλεγχοι και οι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών (

P

& lt? 0,05). Με ανάλυση ταξινόμηση και την ανάλυση βαθμολογίας Διαίρεση σημείο αυτών των 2 ομάδων, ένα πάνελ 6 σήμανσης πρωτεϊνών, το οποίο αποτελούνταν από ιντερλευκίνη-2 άλφα υποδοχέα (IL2Rα), ενδοθηλίνη, οστεοπροτεγερίνη (OPG), αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα D (VEGF-D ) και betacellulin (BTC), μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διάκριση ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών από φυσιολογικά άτομα [9]. Αυτές οι μελέτες υποδεικνύουν έντονα ότι η τεχνολογία συστοιχίας αντισωμάτων έχει δείξει μεγάλη υπόσχεση στην ανακάλυψη και ανάπτυξη των προφίλ των ωοθηκών καρκίνο βιοδεικτών του ορού και υποδεικνύουν έντονα ότι πάνελ κυτοκινών του ορού μπορεί να είναι χρήσιμα ως βιοδείκτες για την έγκαιρη ανίχνευση των καρκίνων των ωοθηκών.

Σε αυτό το μελέτη, χρησιμοποιήσαμε 174-δείκτη μας, σάντουιτς ELISA που βασίζονται σε πίνακες συστοιχία αντισωμάτων για τον έλεγχο δειγμάτων ορού από 34 ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών και 53 φυσιολογικά υγιή άτομα, προκειμένου να εντοπίσει έναν πίνακα δείκτη πρωτεΐνης ορού για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών.

Αποτελέσματα

Επικύρωση 174-δείκτη ημι-ποσοτική συστοιχίες κυτοκίνης (Σχήματα 1, 2)

Πίνακας Α (αριστερά) δείχνει ισχυρή συσχέτιση ενδο-δοκιμασίας (ίδιο δείγμα αναλύθηκε για το ίδιο γυάλινο πλακίδιο , δοκιμάστηκε την ίδια ημέρα)? Πίνακας Β (μεσαίο) δείχνει ισχυρή συσχέτιση μεταξύ δοκιμασίας (ίδιο δείγμα αναλύθηκε σε διαφορετικά γυάλινα πλακίδια, δοκιμάστηκαν σε διαφορετικές ημέρες)? Πίνακας C (δεξιά) δείχνει φτωχή συσχέτιση μεταξύ καρκίνου και φυσιολογικά δείγματα αναλύθηκαν στις ίδιες γυάλινες πλάκες, δοκιμάστηκε την ίδια ημέρα

Η

Πίνακας Α (αριστερά) δείχνει αντιπροσωπευτικό φθορισμού εικόνες σήματος για συστοιχία G6.? Πίνακας Β (μεσαίο) δείχνει αντιπροσωπευτικό φθορισμού εικόνες σήματος για σειρά G7? Πίνακας C (δεξιά) δείχνει αντιπροσωπευτικό εικόνες σήματος φθορισμού σειρά G8.

Η

Σε αυτή τη μελέτη, εφαρμόσαμε την τεχνολογία συστοιχίας αντισωμάτων για τον προσδιορισμό των προφίλ έκφρασης των 174 κυτταροκινών στον ορό από ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών και την ηλικία συμφωνημένα υγιείς φυσιολογικούς μάρτυρες. Οι κυτοκίνες σε αυτή τη μελέτη περιλαμβάνονται αντι-φλεγμονώδεις κυτοκίνες, προφλεγμονώδεις κυτταροκίνες, αυξητικούς παράγοντες, αγγειογονικούς παράγοντες ή χημειοτακτικές κυτοκίνες, μεταξύ άλλων. Ορισμένες από αυτές τις κυτοκίνες με πληροφορίες μεταβάλλονται σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών από τις δικές μας μελέτες και βιβλιογραφία, αλλά ευρεία οθόνη μας από 174 πρωτεΐνες περιλαμβάνονται επίσης πολλούς άλλους τύπους δεικτών ως μέρος ενός «αμερόληπτη» προσέγγιση της χρήσης υψηλής περιεκτικότητας, υψηλής απόδοσης κυτοκίνης συστοιχίες αντισωμάτων στο προφίλ των επιπέδων κυτταροκινών από τον ορό ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών », με στόχο τον εντοπισμό πιθανών διαγνωστικών βιοδεικτών.

Πρώτον, περαιτέρω καθορίζεται η επαναληψιμότητα της ανάλυσης στην ανάλυση του ανθρώπινου ορού, χρησιμοποιώντας την ανάλυση διασποράς-οικοπέδου. αναπαραγωγιμότητα Intra-ολίσθησης για τις συστοιχίες γυαλιού-slide-based αξιολογήθηκε με τη δοκιμή αναπαράγουν κλάσματα των ίδιων δειγμάτων με δύο υπο-συστοιχίες τυπωμένα στο ίδιο πλακίδιο και ανιχνεύθηκαν ταυτόχρονα. Η αναπαραγωγιμότητα δια-slide προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας δύο διαφορετικές διαφάνειες τυπωμένα με τα ίδια συστοιχίες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας διπλούν δείγματα των ίδιων δειγμάτων σε δύο διαφορετικές ημέρες. Οι συντελεστές συσχέτισης Pearson για την ενδο-slide και μεταξύ των διαφανειών επαναληψιμότητα ήταν 0.923 (

P

& lt? 0.001) και 0.899 (

P

& lt? 0.001) αντίστοιχα, υποδηλώνοντας την υψηλή επαναληψιμότητα της δοκιμασίας. Σε αντίθεση, ο συντελεστής συσχέτισης Pearson για τον καρκίνο του εναντίον φυσιολογικά δείγματα ήταν 0,226 (

P

& lt? 0.005)., Γεγονός που υποδηλώνει ότι τα δείγματα καρκίνου και φυσιολογικά δείγματα είναι από δύο διαφορετικούς πληθυσμούς

Στη συνέχεια, ορό από ένα σύνολο 34 ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών και 53 υγιείς ελέγχους προσδιορίστηκαν για επίπεδα έκφρασης των κυτοκινών 174 με στόχο την ανακάλυψη νέων διαγνωστικών δεικτών για καρκίνο των ωοθηκών. Αυτά τα δείγματα ορού ελήφθησαν κυρίως από τους συνεργάτες μας και ήταν ηλικία και το φύλο συμφωνημένα (Πίνακας 1). Ανθρώπινα κυτοκίνης Antibody Arrays χρησιμοποιήθηκαν στο προφίλ σχήματα έκφρασης για 174 κυτοκινών σε δείγματα ορού και οι 87 ασθενείς. Η ένταση του σήματος είναι ανάλογη με το επίπεδο έκφρασης ενός ατόμου πρωτεΐνης σε κάθε δείγμα. Τα δεδομένα συστοιχία ακολούθως κανονικοποιήθηκαν με βάση τον μέσο θετικό ένταση σήματος ελέγχου του κάθε συστοιχία. Οι μέσες εντάσεις σήματος του κάθε τόπου στη συνέχεια διορθώθηκαν για την τοπική φόντο. Για τη δημιουργία ενός ορίου σήμα, σήμα έντασης cut-off αξία καθορίστηκε κατά +/- 2SD 10 ρυθμιστικού εντάσεις σήματος κενό ελέγχου, όπου οι συστοιχίες ήταν επωάζονται με ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού, αντί των δειγμάτων ορού ασθενούς. Τυχόν τιμές που υπερβαίνουν το όριο σήμα θεωρήθηκαν πραγματικά σήματα (δηλαδή, μία θετική ανίχνευση της κυτοκίνης). Τιμές χαμηλότερες από ό, τι το σήμα cut-off είχαν ανατεθεί μια τιμή 1. Εάν οι μετρούμενες τιμές της έντασης του σήματος από όλα τα δείγματα για ένα συγκεκριμένο κυτοκίνης 1, αυτές οι κυτοκίνες αφαιρέθηκαν από τον κατάλογο για περαιτέρω ανάλυση.

Η Καρκίνος των ωοθηκών

Υγιής έλεγχος

Συνολικός αριθμός

3453Mean Age61.751.2Median Age6656.2Age Range26-7928-79

Καρκίνος Characteristis

Ιστολογίας

υδαρής Adenoocarcinoma29Mucous Adenocarcinoma4Germline tumor1

στάδιο

στάδιο I4Stage II3Stage ΙΙΙ & amp? IV25NA2Table 1. Χαρακτηριστικά του πληθυσμού μελέτης.

CSV Λήψη CSV

Αναγνώριση των δεικτών πρωτεΐνης ορού από τεχνητό νευρωνικό δίκτυο ανάλυσης (Σχήμα 3)

3α. Τεχνητά ανάλυση νευρικού δικτύου των 174 σήμανσης αποτελέσματα συστοιχία αντισωμάτων συγκρίνοντας καρκίνους των ωοθηκών και των υγιών μαρτύρων. Τα δείγματα που αντιπροσωπεύουν τόσο το σύνολο εκπαίδευσης και το σύνολο πρόβλεψης απεικονίζονται στο γράφημα.

3β. Τα κορυφαία 8 δείκτες με τον μεγαλύτερο αντίκτυπο στο τεχνητό νευρωνικό ανάλυση του δικτύου των συστοιχιών αντισωμάτων 174-δείκτη σε καρκίνους των ωοθηκών και υγιείς μάρτυρες που παρουσιάζονται.

Η

Μετά την εξομάλυνση και διήθηση, τα δεδομένα υποβλήθηκαν στη συνέχεια σε τεχνητά νευρωνικά δικτύων (ΤΝΔ) ανάλυση. Τα δεδομένα ένταση σήματος για μεμονωμένους ασθενείς χωρίστηκαν τυχαία σε σύνολο εκπαίδευσης (Ν = 51) ή σύνολο πρόβλεψης (Ν = 36). Στη φάση ανακάλυψης πρόβλεψη, το σύνολο εκπαίδευσης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας την άδεια-μία προσέγγιση χιαστί επικύρωση. Μέσω αυτής της ανάλυσης, εντοπίστηκαν συνολικά 8 προγνωστικούς παράγοντες. Αυτά τα 8 προγνωστικοί στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν για την πρόβλεψη της κατάστασης της νόσου σε σύνολο πρόβλεψης. Η σωστή συμφωνία της προβλεπόμενης κατάστασης της νόσου με τη χρήση του πίνακα 8-δείκτη με την κλινική διάγνωση στο σύνολο σύνολο εκπαίδευσης και πρόβλεψη ήταν 82% και 80% αντίστοιχα.

Αναγνώριση του πίνακα 5-δείκτης για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών (Εικόνες 4 και 5)

Η

Πίνακας Α (επάνω αριστερά): Dot ιστόγραμμα οικόπεδο με 5-αναλύτη διάσπαση-σημείο βαθμολογία κατάταξης των ορών από υγιή ελέγχου (Ν) και τον καρκίνο των ωοθηκών (CA). Ταξινομείται ορθώς φυσιολογικά δείγματα ορού θα πρέπει να έχει μια βαθμολογία από 0 έως 2, ενώ τα δείγματα από ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών θα πρέπει να έχει ένα σκορ 3-5? Πίνακας Β (πάνω δεξιά): Η καμπύλη ROC για τον πίνακα 5-δείκτης της ανάλυσης διάσπαση-score του καρκίνου των ωοθηκών έναντι υγιών μαρτύρων. Η ROC είναι η καμπύλη χαράσσεται της ευαισθησίας (αληθώς θετικά) έναντι (ψευδώς θετικά) αξίες 1-ειδικότητα? Πίνακας Γ (κάτω δεξιά): Πίνακας με τη χρήση πέντε δείκτη βαθμολογίας διάσπαση σημείο να χαρακτηρίσει ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. Ένα cut-off βαθμολογία από 3 χρησιμοποιήθηκε.

Η

Στη συνέχεια, από αυτούς τους 8 δείκτες, επιλέξαμε 4, τόνωση μακροφάγων πρωτεΐνη άλφα (MSP-άλφα), αναστολέα μεταλλοπρωτεϊνασών ιστού-4 (TIMP-4 ), αιμοπεταλικό άλφα υποδοχέα αυξητικού παράγοντα (αλφα PDGF-R), και οστεοπροτεγερίνη (OPG), για ανάλυση ιεραρχική σύμπλεγμα χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS. Χρησιμοποιώντας τον πίνακα 4-δείκτη πάνω από το 83% των δειγμάτων που έχουν αναγνωριστεί σωστά (το 95% των υγιών ελέγχων και 62% των καρκίνων των ωοθηκών).

Τέλος, όλες οι 87 δείγματα αναλύθηκαν με τα παραπάνω προσδιορίζονται 4 δείκτες ορού συν CA125 χρήση ανάλυσης βαθμολογίας διάσπαση-σημείο. Χρησιμοποιώντας το σκορ αποκοπής των 3, 100% του καρκίνου των ωοθηκών και 95% δείγματα υγιούς ελέγχου που έχουν αναγνωριστεί σωστά, δίνοντας τη συνολική σωστή συμφωνία 96,6%.

Από CA125 είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο δείκτη για τον καρκίνο των ωοθηκών, συγκρίναμε η AUC μεταξύ μόνος CA125 με εκείνη του πίνακα 5-δείκτη μας, όπως προσδιορίζεται από τις καμπύλες ROC. CA125 μόνο έχει μια AUC των 0,87. Από την άλλη πλευρά, πρόσφατα ταυτοποιημένα πάνελ 5-δείκτης μας έχει ένα AUC του 0,98. Έτσι, πιλοτική μελέτη μας εντόπισε ένα πολλά υποσχόμενο σύνολο των 5 δεικτών ορού για την έγκαιρη ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών.

Επικύρωση πίνακα 5-δείκτης για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών με δοκιμασία ELISA (Σχήμα 6)

επίπεδα δύο δεικτών πρωτεΐνης (MSP-άλφα και ΤΙΜΡ-4) που προσδιορίζονται ως εκφράζονται διαφορικά σε δείγματα καρκίνου των ωοθηκών χρησιμοποιώντας συστοιχίες αντισωμάτων επιβεβαιώθηκαν με ELISA. Τα δεδομένα συστοιχία αντισωμάτων ήταν πλήρως σύμφωνη με τα δεδομένα ELISA για τον χαρακτηρισμό ορούς από ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών και των υγιών μαρτύρων. Τα δεδομένα συστοιχία αντισωμάτων παρουσιάζονται ως διάμεση σειρά έντασης σήματος (FI), και τα δεδομένα ELISA δείχνονται ως μέση συγκέντρωση πρωτεΐνης (ng /ml).

Η

Για να επιβεβαιωθεί η πολλαπλή ανίχνευση των δεδομένων συστοιχίας, εκτελέσαμε single-στόχος προσδιορισμούς ELISA για την ποσοτική μέτρηση των επιπέδων έκφρασης αυτών των κυτοκινών χωριστά, και αυτά τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν με τα δεδομένα πίνακα. Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης για πρωτεΐνες που μετράται από τη διάταξη και ELISA ήταν παρόμοια (βλέπε Σχήμα 6). Όλα τα 4 δείκτες (MSP-άλφα, TIMP-4, PDGF-R άλφα, και OPG) που προσδιορίζονται από την ανάλυση και την διάσπαση-σημείο ανάλυση βαθμολογίας ANN επιβεβαιώθηκαν με κιτ ELISA. Το Σχήμα 6 δείχνει αντιπροσωπευτικά δεδομένα για δύο από αυτούς τους δείκτες, MSP-α και ΤΙΜΡ-4.

Συζήτηση

CA125 είναι ένας από τους πιο σημαντικούς βιοδείκτες για τον καρκίνο των ωοθηκών. Είναι συχνά χρησιμοποιείται αποτελεσματικά για την παρακολούθηση της ανταπόκρισης στη θεραπεία και την ανίχνευση υποτροπής του καρκίνου των ωοθηκών. Ωστόσο, CA125 από μόνη της δεν είναι ένα χρήσιμο διαγνωστικό δείκτη για την κλινική εφαρμογή λόγω της χαμηλής εξειδίκευσης του? με μια τιμή αποκοπής αναφοράς 35 IU /ml, CA125 έδειξε περιορισμένη ειδικότητα της τάξης του 50-60%, με την ευαισθησία των & gt? 98% για πρώιμο στάδιο της νόσου [4-6]. Ανύψωση του CA125 είναι ανιχνεύσιμη σε περίπου 0,2 έως 5,9% υγιείς γυναίκες και 2,2 έως 27,8% των ασθενών με καλοήθεις παθήσεις των ωοθηκών [10]. Αύξηση της CA125 παρατηρήθηκε μόνο στο 50% των ασθενών Ι καρκίνο των ωοθηκών στάδιο και αυξήθηκε στο 90% ή παραπάνω σε στάδιο III και IV ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [11].

Λόγω της πολυπλοκότητας και της ετερογένειας του καρκίνου των ωοθηκών, είναι απίθανο ότι μια ενιαία βιοδείκτης θα είναι σε θέση να ανιχνεύει όλους τους υποτύπους και στάδια της ασθένειας με υψηλή εξειδίκευση και ευαισθησία. Με την αναζήτηση της βιβλιογραφίας και άλλη πηγή, Δρ. Πολάνσκι και Anderson έχει καταρτίσει μια λίστα των 1261 πρωτεϊνών που πιστεύεται ότι να εκφράζονται διαφορικά σε ανθρώπινο καρκίνο [12]. Μεταξύ αυτών, οι 260 υποψήφιες βιοδείκτες θεωρούνται ως «υψηλής προτεραιότητας» επειδή έχουν ενοχοποιηθεί ως πιθανοί δείκτες καρκίνου σε πολλαπλές δημοσιεύσεις στη βιβλιογραφία και, επειδή τα περισσότερα από αυτά έχουν αναφερθεί ότι είναι ανιχνεύσιμη σε ορό ή πλάσμα. Συμπεριλάβαμε πολλές από αυτές τις βιοδεικτών σε αντίσωμα προσυμπτωματικό έλεγχο βιοδεικτών μας.

Οι κυτοκίνες είναι μια ποικιλόμορφη ομάδα πρωτεϊνών που αποτελείται από κυτοκίνες, χημειοκίνες, αυξητικοί παράγοντες, ιντερφερόνες, αντιποκινών και λεμφοκίνες και παίζουν πολλούς κρίσιμους ρόλους των φυσιολογικών και παθολογικών διεργασίες. Είναι επίσης καλά γνωστό ότι οι κυτοκίνες, χημειοκίνες, αυξητικοί παράγοντες, παράγοντες αγγειογένεσης, πρωτεάσες, αποπτωτικών παραγόντων, υποδοχείς, μόρια προσκόλλησης και αντιποκινών παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου, την εξέλιξη και την μετάσταση. Καλλιέργεια στοιχεία δείχνουν ότι ένα σύνθετο δίκτυο κυτοκίνης εμπλέκεται στον καρκίνο των ωοθηκών. Ένας αριθμός αυτοκρινείς και παρακρινείς βρόχοι κυτοκίνης έχουν ταυτοποιηθεί σε καρκίνο των ωοθηκών και επηρεάζουν την βιολογία αυτού του όγκου. Ανίχνευση των προτύπων έκφρασης των πολλαπλών κυτοκινών μπορεί να προσφέρει νέες ιδέες στη βιολογία του καρκίνου, τον εντοπισμό νέων μοριακών στόχων για τη θεραπεία του καρκίνου και να ανακαλύψουν νέες βιοδεικτών για τη διάγνωση και την πρόγνωση της νόσου [13,14].

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε απέδειξαν την αποτελεσματικότητα του διαλογής μίας ημι-ποσοτική, με βάση σάντουιτς-συστοιχία αντισωμάτων ανιχνεύει ένα πάνελ 174 δεικτών στον ορό 34 ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών και 53 της ίδιας ηλικίας υγιή δείγματα αναφοράς για την αναγνώριση ενός πάνελ ενδεικτών πρωτεΐνης 5 ορού, συμπεριλαμβανομένης CA125, ότι μπορεί να ανιχνεύσει τον καρκίνο των ωοθηκών αποτελεσματικά με υψηλή ειδικότητα (95%) και υψηλή ευαισθησία (100%) με την AUC του 0,98. Αυτοί οι δείκτες επικυρώθηκαν με προσδιορισμό ELISA.

Παρατηρήσαμε ότι CA125 μόνο έχει μια AUC του 0,87, αφ ‘ετέρου, πρόσφατα ταυτοποιημένα πάνελ 5-δείκτης μας έχει ένα AUC από 0,98, υποδεικνύοντας βελτιωμένη απόδοση όταν η ανίχνευση CA125 συνδυάζεται με άλλα 4 υποθετικές βιοδεικτών πρωτεΐνη για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών (ΤΙΜΡ-4, OPG, PDGF-R άλφα, και MSP-alpha).

ΤΙΜΡ-4 ανήκει στην μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας (ΜΜΡ) υπεροικογένεια. MMPs αποτελούν ουσιώδη στοιχεία extraceullular μήτρα (ECM) υποβάθμισης, συμπεριλαμβανομένης ρυθμίζουν την απελευθέρωση της ECM δεσμευμένου κυτοκίνες και αυξητικούς παράγοντες, που οδηγεί σε αγγειογένεση, κυτταρική εισβολή και, τελικά σε πολλούς καρκίνους, μετάσταση. Αυτές οι MMPs ελέγχονται αυστηρά και ρυθμίζεται από διάφορους TIMPs, αρκετές από τις οποίες φαίνεται να παίζουν ένα κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση. Lab Chegini έχει αναφερθεί αυξημένη έκφραση του ΤΙΜΡ-4 σε καρκινικούς ιστούς των ωοθηκών με ανάλυση IHC, υποδηλώνοντας δυνητικό ρόλο της στην ογκογένεση του καρκίνου των ωοθηκών [15].

OPG ανήκει στην υπερ-οικογένεια TNF και μπορεί να συνδεθεί με το πυρηνικό παράγοντα ενισχυτή κάπα ελαφριάς αλυσίδας των ενεργοποιημένων Β κυττάρων (ΝΡκΒ) και νέκρωσης όγκου απόπτωση παράγοντα που σχετίζονται με την επαγωγή συνδέτη (TRAIL) οδούς σηματοδότησης. OPG εντοπίστηκε για πρώτη φορά από την ικανότητά της να ρυθμίζει την ομοιόσταση της οστικής ανακατασκευής. Ωστόσο, Lab Piche ανέφερε ότι OPG μπορεί να χρησιμεύσει ως τέτοιος παράγοντας επιβίωσης, προστατεύοντας TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα ωοθηκών, υποδηλώνοντας δυνητικό ρόλο της στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών [16].

PDGF-R άλφα είναι ένας υποδοχέας στην υπεροικογένεια του PDGF. Εξυπηρετούν ως αγγειογόνοι παράγοντες ανάπτυξης, PDGFs παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη των κυττάρων, χημειόταξη, αγγειογένεση και, στο πλαίσιο του καρκίνου, η ανασυγκρότηση του μικροπεριβάλλοντα στρωματικών όγκων. Lab Jakobsen ανέφερε ότι PDGF-R άλφα έδειξε υψηλότερη έκφραση σε ιστούς καρκίνου των ωοθηκών σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς παρακείμενα [17]. Αναφέρθηκε επίσης ότι το PDGF-R άλφα εκφράζεται συχνότερα στο ορώδες καρκίνωμα σε σύγκριση με endometriod και βλεννώδες όγκων [18], η οποία είναι συνεπής με τα ευρήματα της μελέτης μας, στην οποία η πλειοψηφία των όγκων εξετάστηκαν (29 από 34) ήταν ορώδες .

Ο ΘΧΣ είναι ένας αυξητικός παράγοντας που εμπλέκονται στην ενεργοποίηση διέγερση του υποδοχέα-1 (MSTR1) μακροφάγων. Η άλφα αλυσίδα MSP (MSP-άλφα) εκκρίνεται από διάσπαση της προ-MSP. Υπάρχουν αναφορές που δείχνουν ότι η οδός MSP διαδραματίζει έναν σημαντικό ρόλο στην μετάσταση όγκου [19].

Εν ολίγοις, χρησιμοποιώντας 174 σήμανσης τεχνολογία συστοιχίας αντισωμάτων κυτοκίνης, εντοπίσαμε μια ομάδα πρωτεϊνικών δεικτών 5 ορού η οποία μπορεί να ανιχνεύσει ωοθηκών καρκίνος τόσο με υψηλή εξειδίκευση και υψηλή ευαισθησία, υποδεικνύοντας υποσχόμενη εφαρμογή της στην εξατομικευμένη ιατρική για την ανίχνευση του καρκίνου των ωοθηκών. Επιπλέον, λαμβάνοντας υπόψη ότι ένα σχετικά μικρό μέγεθος του δείγματος (Ν & lt? 100) που χρησιμοποιείται στην παρούσα έρευνα επιτευχθεί μια εξαιρετικά υψηλή ευαισθησία (100%) και σχετικά υψηλή ειδικότητα (95%), προσφέρουμε κάποια ελπίδα ότι η επικύρωση του πίνακα πολλαπλών βιοδεικτών μπορεί κάποια μέρα να είναι χρήσιμο για την οθόνη για ένα θανατηφόρο καρκίνο που σπάνια παίρνει διαγνωστεί στα αρχικά της στάδια.

πρωτεϊνών και αντισωμάτων συστοιχίες έχουν αναδειχθεί ως μια πολλά υποσχόμενη τεχνολογία για να μελετήσει την έκφραση της πρωτεΐνης και της λειτουργίας των πρωτεϊνών σε ένα υψηλό τρόπο απόδοσης. Αυτές οι συστοιχίες των πρωτεϊνών και αντισωμάτων παρουσιάσει μια νέα ευκαιρία στο προφίλ επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης σε δείγματα ασθενών με καρκίνο »και να εντοπίζουν τις χρήσιμες βιοσημάδια για την ανάπτυξη φαρμάκων και της φροντίδας των ασθενών. πίνακας 5-δείκτης μας θα μπορούσε να διακρίνει αποτελεσματικά ωοθηκών από υγιείς ελέγχους Αυτά τα 5 επιμέρους δείκτες δεν είναι μοναδικές σε καρκίνους των ωοθηκών, όπως φαίνεται από την έκφρασή τους σε άλλους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων του μαστού [18-22], καρκίνους του πνεύμονα [23], του παχέος εντέρου καρκίνους [24], καρκίνους του προστάτη [25,26], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [27], καρκίνους του παγκρέατος [28], κλπ Ως εκ τούτου, θα είναι πολύ σημαντικό και ενδιαφέρον να διερευνηθεί κατά πόσο αυτός ο συνδυασμός του 5-δεικτών μπορεί να εντοπίσει άλλους τύπους καρκίνου επίσης. Δύο από τα πιο σημαντικά συστατικά στο πρόγραμμα ανακάλυψη βιοδεικτών είναι η υψηλή ποιότητα των δειγμάτων των ασθενών και τεχνολογιών υψηλής περιεκτικότητας σε έλεγχο και υψηλής απόδοσης. Ως εκ τούτου, ο συνδυασμός των δοκιμασμένη τεχνολογία και πλατφόρμες από εμάς και καλά χαρακτηρίζεται προ-διαγνωστικά δείγματα από PLCO στο Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου (NCI) ανίχνευσης που βασίζεται σε αντίσωμα θα παρέχει μια μοναδική ευκαιρία για την ανακάλυψη βιοδεικτών και την επικύρωση [29,30]. Τέτοιες έρευνες όχι μόνο θα χρησιμεύσει για να επικυρώσει το συγκεκριμένο πίνακα βιοδείκτη που προσδιορίζονται στην παρούσα μελέτη? θα βοηθήσουν να επικυρώσει τη χρήση των συστοιχιών αντισωμάτων ως μια προσέγγιση υψηλής throuput να εντοπίσει βιοδείκτες του καρκίνου για τον έλεγχο της νόσου και την ανίχνευση.

Υλικά και Μέθοδοι

Το πρωτόκολλο αυτό έχει εγκριθεί από ασήμι θεσμική αναθεώρηση επιτροπή. IRB ID: 3303. Το διοικητικό συμβούλιο κριτική είναι στερλίνα ανεξάρτητη υπηρεσία, Inc βρίσκεται στο 6300 εξουσιών FERRY ROAD, σουίτα 600-351, Ατλάντα, GA 30339. γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε κατά τη συλλογή δειγμάτων από ασθενείς και υγιείς μάρτυρες

Ηθικοί

γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε κατά τη συλλογή δειγμάτων από ασθενείς και υγιείς μάρτυρες.

Η συλλογή των δειγμάτων

Τα δείγματα ορού από 34 ασθενείς με διάγνωση σε πρώιμο στάδιο (Ι και II) ή όψιμη φάση (III και IV) των καρκίνων των ωοθηκών και 53 ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες που περιλαμβάνονται στη μελέτη συλλέχθηκαν από την θυγατρική νοσοκομείο, η Sun Yat-sen University. Εν συντομία, περίπου 2 ml φλεβικού αίματος από ασθενείς. Ορός συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι να χρειαστεί. Πληροφορίες σχετικά με τη διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών, σταδιοποίηση, ιστολογία, ο βαθμός και η ηλικία ήταν στη διάθεσή μας, αλλά τα μοναδικά αναγνωριστικά ασθενούς, όπως όνομα, διεύθυνση, ημερομηνία γέννησης, δεν είχε προβλεφθεί.

Τεχνολογία

συστοιχία αντισωμάτων

Ημι-ποσοτική συστοιχίες αντισωμάτων με βάση σάντουιτς (RayBio

® Ανθρωπίνων κυτοκίνης Array G-Series 2000) αναπτύχθηκαν σε 3 ξεχωριστές συστοιχίες (Human κυτοκίνης πίνακες G6, G7 και G8), το καθένα αντιπροσωπεύει ένα μοναδικό σύνολο 54 έως 60 αντιγόνου-ειδικά αντισώματα για την ανίχνευση συνολικά 174 δείκτες ορού σε μήτρα γυάλινη πλάκα. Ένα ζεύγος αντισωμάτων απαιτείται για την ανίχνευση κάθε αναλύτη. Γυάλινες πλάκες τυπώθηκαν ως 4 ή 8 πανομοιότυπες υπο-συστοιχίες αποτελούνται από κηλίδες του κάθε αντιγόνου-ειδικό αντίσωμα apture για την εν λόγω διάταξη. Τα αντίστοιχα αντισώματα ανίχνευσης ήταν επισημασμένο με βιοτίνη και να συνδυαστούν ως ένα μόνο αντιδραστήριο κοκτέιλ για μεταγενέστερη χρήση. Τυπωμένες διαφάνειες τοποθετήθηκαν σε συνελεύσεις θάλαμο για να επιτρέψει την επώαση του κάθε υπο-συστοιχία με ένα διαφορετικό δείγμα. Μετά τον αποκλεισμό κάθε υπο-συστοιχία με ένα ρυθμιστικό διάλυμα δέσμευσης, υπο συστοιχίες επωάστηκαν με δείγματα ορού. Μετά από εκτεταμένη πλύση για την απομάκρυνση του μη-ειδικής δέσμευσης, το κοκτέιλ βιοτινυλιωμένου αντισώματα ανίχνευσης προστίθενται σε συστοιχίες. Μετά από εκτεταμένη πλύση, τα πλακίδια συστοιχία επωάστηκαν με στρεπταβιδίνη συζευγμένη με fluor (HiLyte Fluor ™ 532, από Anaspec, Fremont, CA). Τα σήματα φθορισμού στη συνέχεια κατέστησαν ορατές χρησιμοποιώντας λέιζερ που βασίζεται σε σύστημα σαρωτή (GenePix 4200A, Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA) χρησιμοποιώντας την πράσινη κανάλι. Για να αυξηθεί η ακρίβεια, δύο επαναλήψεις ανά αντίσωμα κηλιδώθηκαν, και οι μέσοι όροι των διάμεσου εντάσεων σήματος και για τις δύο κηλίδες (μείον τοπική αφαίρεση υποβάθρου) χρησιμοποιήθηκαν για όλους τους υπολογισμούς. Μέσα από αυτές τις βελτιώσεις, μπορούμε να πάρουμε ένα συντελεστή μεταβλητότητας (CV) της τάξης του 10% με τη χρήση της πλατφόρμας διαφάνεια γυαλιού μας.

ELISA ανάλυση

ELISA διεξήχθη σύμφωνα με το εγχειρίδιο RayBio® ELISA (RayBiotech , Inc., Norcross, GA, USA). Εν συντομία, προ-επικαλυμμένες πλάκες 96-φρεατίων ELISA με αντισώματα σταματούν πρώτα μπλοκαριστεί χρησιμοποιώντας ένα ρυθμιστικό μπλοκαρίσματος. Διπλασιασμός δείγματα (100 μικρολίτρα ανά φρεάτιο) του αραιωμένου ορού και πολλαπλές αραιώσεις (δηλαδή, συγκεντρώσεις) προτύπου πρωτεΐνης φορτώθηκαν επάνω στην πλάκα ELISA. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Χωρίς περιορισμούς υλικά πλύθηκαν έξω, και βιοτινυλιωμένο αντίσωμα ανίχνευσης αντι-κυτοκίνης προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Οι πλάκες επωάστηκαν για 1 ώρα σε RT. Μετά την πλύση, 100 μικρολίτρα στρεπταβιδίνης-συζευγμένου αντιδραστηρίου HRP προστέθηκε στα φρεάτια, και η πλάκα επωάστηκε για 30 λεπτά σε RT. Μετά από εκτεταμένη πλύση, ανάπτυξη χρώματος πραγματοποιήθηκε με επώαση με HRP υπόστρωμα. Μετά την προσθήκη διαλύματος διακοπής, η οπτική πυκνότητα (OD) στα 450 nm προσδιορίστηκε για κάθε φρεάτιο χρησιμοποιώντας μια συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας, και οι συγκεντρώσεις των δειγμάτων προσδιορίστηκαν με σύγκριση με τις πρότυπες καμπύλες συγκέντρωσης.

Ανάλυση

Δεδομένα

Ένα προσαρμοσμένο t-test χρησιμοποιήθηκε για να δοκιμαστεί η σημασία μεταξύ των επιπέδων έκφρασης πρωτεΐνης στον καρκίνο των ωοθηκών και τα δείγματα υγιή έλεγχο.

P

τιμές μικρότερες από 0.05 θεωρήθηκαν ότι είναι στατιστικά σημαντικές.

Για να προσδιοριστεί το κατώφλι σήματος, τα σήματα από τις συστοιχίες μετρήθηκαν υπό την απουσία των δειγμάτων (χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό ως τυφλό αποκλεισμού) και επαναλαμβάνεται 10 φορές. Τα σήματα που παράγονται χρησιμοποιώντας κενά τέθηκαν στον μέσο όρο και την τυπική απόκλιση (SD) υπολογίσθηκε. Σήματα με τιμές χαμηλότερες από το μέσο όρο κενό σήμα + 2xSD θεωρήθηκαν ως φόντο.

Τα δεδομένα αναλύθηκε επίσης με τη χρήση νευρωνικών δικτύων. Αυτό το ισχυρό εργαλείο μας επιτρέπει το βρείτε προφίλ έκφρασης κοινή πρωτεΐνη για να προβλέψει τον καρκίνο. Σε πρώτη φάση της μελέτης, το 80% των δειγμάτων που τυχαιοποιήθηκαν σε σύνολο εκπαίδευσης και το υπόλοιπο 20% των δειγμάτων που χρησιμοποιήθηκαν ως ομάδα ελέγχου. Το πλεονέκτημα αυτής της προσέγγισης είναι η επιτυχία της πρόβλεψης θα γίνει πιο ακριβή την πάροδο του χρόνου, όταν θα είναι διαθέσιμα περισσότερα δεδομένα.

Τα δεδομένα αναλύθηκαν επίσης με ανάλυση βαθμολογίας διάσπαση-σημείο. Το σημείο διαχωρισμού διαιρεί το χώρο του δείγματος σε δύο χρονικά διαστήματα, μία για τον καρκίνο των ωοθηκών και ένα για φυσιολογικούς μάρτυρες. Η καλύτερη βαθμολογία διάσπαση-σημείο κάθε δείκτη επιλέχθηκε για να εξασφαλιστεί η ελαχιστοποίηση των ταξινομήθηκαν λανθασμένα δείγματα. Για κάθε δείκτη, ένα σκορ 0 ανατέθηκε σε ένα δείγμα, αν έπεσε στην κανονική διάστημα ελέγχου για την εν λόγω δείκτη? Ο βαθμός 1 ανατέθηκε σε ένα δείγμα, εάν έπεσε στο διάστημα καρκίνο των ωοθηκών. Συνολικά, ένα άτομο ορίστηκε ένα σκορ ως το άθροισμα αυτών αποδίδεται βαθμολογίες για

Ν

διαφορετικούς δείκτες. Ως εκ τούτου, το εύρος των εν λόγω σκορ ήταν μεταξύ 0 και

Ν

. Ένα συγκεκριμένο όριο (

T

) επιλέχθηκε για τη βέλτιστη χωριστή καρκίνο των ωοθηκών από υγιείς μάρτυρες, δηλαδή ένα δεδομένο άτομο με συνολικό σκορ & lt?

T

προβλέπεται να έχει κανονική κατάσταση, ενώ ένα άτομο με συνολικό σκορ & gt?.

T

διαγνώστηκε ο καρκίνος των ωοθηκών

Από τα παραπάνω στοιχεία, υπολογίστηκε η ειδικότητα, ευαισθησία, θετική προγνωστική αξία (PPV) και αρνητική προγνωστική αξία (NPV) . Η ROC προσδιορίζεται επίσης.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Brett Burkholder για εποικοδομητικές συζητήσεις και την επεξεργασία του παρόντος εγγράφου.