Αφηρημένο

Ιστορικό

Η χρόνια φλεγμονή είναι συχνά παρατηρείται σε ιστολογική ανάλυση των κακοήθων και καλοήθων δείγματα προστάτη. Είναι μια υποψία υποστήριξη παράγοντας για τις ασθένειες του προστάτη και την εξέλιξη τους και μια κύρια αιτία των ψευδώς θετικών τεστ PSA σε προσυμπτωματικό έλεγχο του καρκίνου. Υποθέσαμε ότι η φλεγμονή προκαλεί αυτοαντισώματα, η οποία μπορεί να είναι χρήσιμη βιοδείκτες. Έχουμε ως στόχο τον εντοπισμό και την επικύρωση του προστάτη συνδέεται φλεγμονή αυτοαντισωμάτων στον ορό σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη και να αξιολογήσει την έκφραση του αντίστοιχου αυτοαντιγόνων.

Μέθοδοι

Η ριζική προστατεκτομή δείγματα των ασθενών με καρκίνο του προστάτη (Ν = 70) είχαν ταξινομηθεί σε υψηλές και χαμηλές ομάδες φλεγμονή ανάλογα με το ποσό των λεμφοκυττάρων που διηθούν ιστού. Οι αντίστοιχες προ-χειρουργική δείγματα ορού αίματος εξετάστηκαν για αυτοαντισώματα χρησιμοποιώντας μια δέσμη πρωτεΐνης χαμηλής πυκνότητας. Επιλεγμένα αυτοαντιγόνα εντοπίστηκαν στον ιστό του προστάτη και πρότυπο έκφρασης τους αναλύθηκε με ανοσοϊστοχημεία και qPCR. Το αναγνωρισμένο προφίλ αυτοαντισωμάτων ήταν διασταυρώθηκαν σε ένα ανεξάρτητο σύνολο του δείγματος (Ν = 63) με τη χρήση της τεχνολογίας δέσμη πρωτεΐνης Luminex-χάντρα.

Αποτελέσματα

διαλογή συστοιχία Protein εντοπίζονται 165 αυτοαντισώματα διαφορικά άφθονα στο ορό υψηλό σε σύγκριση με ασθενείς χαμηλού φλεγμονή. Το πρότυπο έκφρασης του τρία αντίστοιχα αντιγόνα καθορίστηκαν σε καλοήθεις και καρκινικού ιστού με ανοσοϊστοχημεία και qPCR: SPAST (Spastin), STX18 (συνταξίνη 18) και SPOP (κηλίδα-τύπου POZ πρωτεΐνης). Από αυτά, SPAST ήταν σημαντικά αυξημένη σε ιστό προστάτη με υψηλή φλεγμονή. Και οι τρεις αυτοαντιγόνα εκφράστηκαν διαφορικά σε πρωτογενείς και /ή ανθεκτικό ευνουχισμός όγκων του προστάτη όταν αναλύονται σε φλεγμονή ανεξάρτητη μικροσυστοιχιών ιστού. Cross-επικύρωσης της προφίλ φλεγμονής αυτοαντισωμάτων σε ένα ανεξάρτητο σύνολο του δείγματος χρησιμοποιώντας μια δέσμη πρωτεΐνης Luminex-χάντρα, ανακτώνται 51 από τα σημαντικά διακρίσεις αυτοαντισώματα. Τρεις αυτοαντισώματα ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω και στις δύο οθόνες, της Μουτ, RAB11B και CSRP2 (p & gt? 0,05)., Δύο, SPOP και ZNF671, κοντά σε στατιστική σημαντικότητα (p = 0,051 και 0,076)

Συμπεράσματα

παρέχουμε αποδείξεις ενός προφίλ αυτοαντισωμάτων φλεγμονή ειδικά και επιβεβαιώστε την έκφραση των αντίστοιχων αυτοαντιγόνων στον ιστό του προστάτη. Αυτό υποστηρίζει την αξιολόγηση των αυτοαντισωμάτων ως μη επεμβατική δείκτες για τη φλεγμονή του προστάτη

Παράθεση:. Schlick Β, Massoner P, Lueking Α, Charoentong P, Blattner Μ, Schaefer G, et al. (2016) του ορού αντισωμάτων στον Χρόνια προστάτη φλεγμονή στον καρκίνο του προστάτη ασθενείς. PLoS ONE 11 (2): e0147739. doi: 10.1371 /journal.pone.0147739

Επιμέλεια: Aamir Ahmed, King College του Λονδίνου, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 28 Ιούλη του 2015? Δεκτές: 7 Ιανουαρίου 2016? Δημοσιεύθηκε: 10 Φεβρουαρίου 2016

Copyright: © 2016 Schlick et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η στοιχεία είναι διαθέσιμα στην υποστήριξη αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από COMET Κ1 Κέντρο Oncotyrol-Κέντρο για την εξατομικευμένη ιατρική, που χρηματοδοτείται από τον Οργανισμό Προώθησης αυστριακή Έρευνας (FFG) και το Ίδρυμα μέλλον της η χώρα του Τιρόλου, και Protagen AG. ONCOTYROL GmbH, Protagen AG και TARGOS Μοριακής Παθολογίας GmbH παρέχεται στήριξη με τη μορφή των μισθών για τους συγγραφείς [BS, μμ, GS], [AL, KM, CT, PA, SM, PSK], [Δ.Ζ., MK], αλλά δεν έχουν οποιοδήποτε πρόσθετο ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, η συλλογή και ανάλυση δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Όλοι οι άλλοι συγγραφείς δηλώνουν δεν υπάρχει ανταγωνιστικών συμφερόντων. Οι συγκεκριμένοι ρόλοι αυτών των συγγραφέων αρθρωτά στο τμήμα «συγγραφέας εισφορές»

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από COMET Κ1 Κέντρο Oncotyrol-Κέντρο για την εξατομικευμένη ιατρική, που χρηματοδοτείται από τον Οργανισμό Προώθησης Έρευνας Αυστριακή (FFG) και το Ίδρυμα μέλλον της χώρας του Τιρόλου, και Protagen AG. Πέτρα Massoner, Georg Schaefer και Bettina Schlilck είχαν προσληφθεί από ONCOTYROL. Angelika Lueking, Klaus Marquart, Carmen Theek, Peter Amersdorfer, Stefan Müllner και Peter Schulz-Κηαρρβ είχαν προσληφθεί από Protagen AG. Stefan Müllner είναι ο συνιδρυτής και Διευθύνων Σύμβουλος της Protagen AG. Dirk Zielinski και Matthias Kirchner είχαν προσληφθεί από TARGOS Μοριακής Παθολογίας GmbH. Πέτρα Massoner σήμερα συνδεδεμένες ως υπότροφος του DAAD με τη Roche Diagnostics GmbH, ωστόσο, τα στοιχεία της που περιλαμβάνονται στη μελέτη παρήχθησαν πριν από την υπαγωγή, η μελέτη που παρουσιάζεται εδώ είναι ανεξάρτητη από την υποτροφία ή οποιαδήποτε άλλη εργασία που σχετίζονται με την Roche Diagnostics GmbH. Protagen AG κατέχει δίπλωμα ευρεσιτεχνίας για «Marker Ακολουθίες για τη διάγνωση του καρκίνου του προστάτη, και η χρήση τους». Δεν υπάρχουν προϊόντα στην ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως αναφέρεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Ο αδένας του προστάτη είναι μια περιοχή των συχνών καλοήθων και κακοήθη νόσο με την ηλικία ως ο κύριος παράγοντας κινδύνου [1, 2]. Ως μειονέκτημα της συνεχώς αύξηση του προσδόκιμου ζωής η συχνότητα εμφάνισης των παθήσεων του προστάτη, όπως ο καρκίνος του προστάτη, υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) και προστατίτιδα αυξάνεται, καθώς και οι ασθένειες αυτές αντιπροσωπεύουν ένα αυξανόμενο ιατρικό και κοινωνικό πρόβλημα, αλλά και ένα αυξανόμενο οικονομικό βάρος [3- 6]. Συχνά, ιστοπαθολογική ανάλυση βιοψιών προστάτη και χειρουργικά δείγματα αποκαλύπτει τη φλεγμονή που σχετίζεται με τη νόσο του προστάτη, στις περισσότερες περιπτώσεις μια ασυμπτωματική, «χρόνια» φλεγμονή χαρακτηρίζεται από ιστολογικές μεταβολές και το ανοσοποιητικό διηθήσεις κυττάρου [7-10]. Η χρόνια φλεγμονή μπορεί να είναι μία από τις κινητήριες δυνάμεις της προόδου της νόσου του προστάτη και ένας σημαντικός παράγοντας που συμβάλλει στην ψευδώς θετικά το ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) καρκίνο του προστάτη [11-15].

Η πηγή ενδοπροστατική φλεγμονής δεν είναι ακόμη πλήρως ακάλυπτα, λοίμωξη, αυτοανοσία, κυτταρική βλάβη, ορμονικές διακυμάνσεις, ή διατροφικούς παράγοντες μπορεί να συμβάλει. Όσο και η αιτία για την προστατίτιδα έχει απομείνει μια πρόκληση για περαιτέρω έρευνες, τη συνάφειά της με παθολογικές διεργασίες είναι ασαφής [16]. Μελέτες δείχνουν τη συμβολή της χρόνιας φλεγμονής στην καρκινογένεση και την ανάπτυξη της ασθένειας του προστάτη [17, 18]. Ιδιαίτερα, πολλαπλασιαστικών φλεγμονωδών ατροφία (ΡΙΑ) που θεωρείται ένα καρκίνο του προστάτη πρόδρομος αλλοίωση, συνδέεται με φλεγμονώδη ανοσολογική διηθήσεις κύτταρο, το οποίο διεγείρει τον πολλαπλασιασμό, την υποστήριξη της καρκινογένεσης μέσω ενισχυμένης οξειδωτικό στρες και κυτταρική βλάβη και πρωτοπόρος κακοήθη εκφυλισμό [19]. Αν και οι περισσότερες μελέτες ασχολήθηκαν με την επίδραση της φλεγμονής στην καρκινογένεση και της εξέλιξης του όγκου, αυτό το φαινόμενο δεν περιορίζεται στον καρκίνο, τα άνοσα διηθήματα κυττάρων που βρίσκονται επίσης συχνά σε υπερπλαστική ή ακόμα και σε ιστολογικά φυσιολογικό προστατικό ιστό [17].

Υπό το φως την ανάγκη να συνεχιστούν οι προσπάθειες αποσαφήνιση των επιπτώσεων της φλεγμονής σε προστάτη της νόσου, εύκολα προσβάσιμο βιοδείκτες για τη φλεγμονή του προστάτη θα είναι μια μεγάλη βοήθεια. Επιπλέον, τέτοιες δείκτες που επιτρέπουν σε μια λιγότερο επεμβατική τρόπος για τη διάγνωση, πρόγνωση και θεραπεία παρακολούθηση της χρόνιας προστατίτιδας απαιτείται για τη βελτίωση της φροντίδας των ασθενών, να αυξήσει την ειδικότητα της δοκιμής PSA για την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη και να οδηγήσει σε βελτίωση της διαχείρισης του καρκίνου του προστάτη. Σε αυτό το πλαίσιο είναι σημαντικά αυτοαντισώματα τύπους μορίων δείκτη, όπως αυτά που συνδέονται με τη δραστηριότητα του ανοσοποιητικού συστήματος. Αντισώματα έχουν ιδανικές ιδιότητες ως πιθανοί δείκτες, είναι πολύ σταθερή και δεν υφίστανται βραχυπρόθεσμες διακυμάνσεις στη συγκέντρωση, είναι εύκολα προσβάσιμες μέσω δείγματα ορού ή πλάσματος και σε κάθε κλινική εργαστηριακή υπάρχουν εξαιρετικά ευαίσθητες μεθόδους ανίχνευσης διαθέσιμες για την ποσοτικοποίηση τους. Για τους ασθενείς με καρκίνο είχε πειστικά αποδειχθεί ότι μια αντινεοπλασματική ανοσοαπόκριση μπορεί να προκληθεί [20, 21]. έχουν αυτοαντισώματα έναντι αντιγόνων του καρκίνου έχουν ταυτοποιηθεί σε ασθενείς με διαφορετικές οντότητες συμπαγή όγκο όπως για παράδειγμα όγκοι του μαστού [22, 23], το κεφάλι και το λαιμό [24, 25], του πνεύμονα [26, 27], του οισοφάγου [28], του παχέος εντέρου [29] και του προστάτη [26, 30, 31].

Πρόσφατα, χρησιμοποιήσαμε μικροσυστοιχίες πρωτεΐνης για αυτοαντισωμάτων προφίλ στο αίμα των ασθενών με καρκίνο του προστάτη και των ελέγχων μη καρκινικά. Εντοπίσαμε μια ομάδα του καρκίνου του προστάτη συνδέεται αυτοαντισώματα [31]. Η επέκταση αυτών των μελετών, εμείς εδώ παρουσιάσει την αναγνώριση και την επικύρωση των αυτοαντισωμάτων που σχετίζονται με προστάτη ανοσοποιητικών κυττάρων διηθήσεις σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Επιπλέον, αξιολογήσαμε το πρότυπο έκφρασης των αντίστοιχων αυτοαντιγόνων σε κακοήθη και μη κακοήθη ιστό προστάτη και ρώτησε αν οι μεταλλάξεις μπορεί να προκαλέσει αυτοαντισώματα.

Υλικό και Μέθοδοι

Αναδρομική δείγμα ομάδα

τα δείγματα ορού ελήφθησαν από το καρκίνο του προστάτη Bioresource του Τμήματος Ουρολογίας, Innsbruck Medical University. Τα δείγματα αίματος είχαν συλλεχθεί στο πλαίσιο του προγράμματος έγκαιρης ανίχνευσης καρκίνου του προστάτη Tyrolean και φυλάχθηκαν στους -80 ° C μέχρι τη χρήση [32]. Ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς και η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Ιατρικού Πανεπιστημίου του Innsbruck (ΑΜ Μελέτη 3174, τροπολογία 2). Όλα τα δείγματα που λαμβάνονται πριν από ριζική χειρουργική προστατεκτομή από ασθενείς με βιοψία, κλινικά εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη, οι οποίοι ήταν τουλάχιστον 40 ετών και οι οποίοι είχαν λάβει καμία προηγούμενη θεραπεία για καρκίνο του προστάτη. η επιλογή των ασθενών για τις περιπτώσεις χαμηλής και υψηλής φλεγμονή βασίστηκε στην ανάλυση των δειγμάτων ολόκληρη προστάτη αδένα για διηθητικά λεμφοκύτταρα. Μια ομάδα από 70 ασθενείς (38 υψηλό, 32 χαμηλή διείσδυση) για τη μελέτη διαλογής και 63 ασθενείς (33 υψηλό, 30 χαμηλή διείσδυση) για τη μελέτη διασταυρούμενης επικύρωσης στρατολογήθηκαν.

αυτοαντισωμάτων προφίλ

Οι προσδιορισμοί που χρησιμοποιούνται για αυτοαντιγόνο προφίλ, μια δέσμη πρωτεΐνης χαμηλής πυκνότητας και μία συστοιχία πρωτεΐνη Luminex-σφαιριδίων, αντίστοιχα, καθορίστηκαν ως ευρέως εφαρμόσιμες τεχνικές και όχι ειδικά μόνο για τον καρκίνο του προστάτη. Ενώ η τεχνική array πρωτεΐνη επί της αρχικής μελέτης έλεγχο, το μεταγενέστερο καθιερωμένη τεχνική Luminex-σφαιρίδια χρησιμοποιήθηκε για ανεξάρτητη μελέτη διασταυρούμενης επικύρωσης.

Επιλογή περιλαμβάνονται πρωτεΐνες αυτοαντιγόνο βασίστηκε σε προηγούμενες οθόνες αυτοαντισωμάτων μας στον προστάτη καρκίνος [31] και αυτοάνοσων ασθενειών [33-35], και τις δημοσιευμένες αυτοαντιγόνα βρέθηκαν σχετίζεται με τον καρκίνο [36-42]. Επιπλέον, η αποτελεσματικότητα της παραγωγής πρωτεϊνών, την ποιότητα των πρωτεϊνών, και τα κριτήρια απόδοσης του προσδιορισμού υπόψη για την τελική επιλογή των πρωτεϊνών αυτοαντιγόνου. 4012 πρωτεΐνες επελέγησαν για τη συστοιχία πρωτεΐνη, 3.061 πρωτεϊνών για τη δέσμη πρωτεΐνης Luminex-σφαιριδίων. Τα πάνελ αυτοαντιγόνο που απαριθμούνται στο Υποστήριξη Πληροφοριών (S1 πίνακα). Η δοκιμασία πρωτεΐνης σφαιριδίων ήταν ομαδοποιούνται σε 8 υποπαρατάξεων ως το μέγιστο διαθέσιμο αριθμό ξεχωριστά χρωματική κωδικοποίηση LuminexMagPlex

χάντρες TM (Luminex, MV’s-Hertogenbosch, Ολλανδία) είναι 500. Ο προσδιορισμός αυτοαντισωμάτων Luminex-χάντρα ιδρύθηκε για μια ευρεία εφαρμογή, ανεξάρτητα από τα αποτελέσματα ελέγχου χαμηλής /υψηλής φλεγμονή αρχική του προστάτη και ως εκ τούτου δεν ταιριάζει ακριβώς με το αρχικό πίνακα αυτοαντιγόνο. Με βάση τις αντίστοιχες ID γονιδίου, το 84% των πρωτεϊνών αυτοαντιγόνο του προσδιορισμού Luminex-χάντρα επίσης εκπροσωπούνται στην πρωτεΐνη μικροσυστοιχιών.

αυτοαντιγόνο πρωτεΐνες που εκφράζονται σε

E

.

coli

και ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας μια διαδικασία καθαρισμού συγγενείας His-tag. Παραγωγή επίπεδων πρωτεϊνικές μικροσυστοιχίες διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [31]. Εν συντομία, οι πρωτεΐνες εντοπίστηκαν εις τετραπλούν για FAST διαφάνειες νιτροκυτταρίνης με επίστρωση (GE Healthcare). Ποντικού και ανθρώπου IgGs σε διαφορετικές συγκεντρώσεις προστέθηκαν για να χρησιμοποιηθούν ως άνοσο ελέγχων ανίχνευσης και για την κανονικοποίηση των δεδομένων. Ένα αυτοματοποιημένο σταθμό (ΕΣ 4800 Pro, Tecan) χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση της ανάλυσης μικροσυστοιχιών αυτοαντισωμάτων. slides Array αποκλείστηκαν με 2% (w /v) βόειου ορού (BSA) σε TBS που περιέχει 0,1% (ν /ν) Tween 20 (TBST) και δείγματα ορού αίματος προστέθηκαν σε 1: 100 αραίωση σε 2% (w /v) BSA /TBST. Μετά από επώαση σε θερμοκρασία δωματίου για 16 ώρες δευτερογενή (ποντικού-αντι-ανθρώπινο-IgG, 1: 5000, Sigma) και τριτογενή (Cy3-επισημασμένο γαϊδάρου αντι-ποντικού IgG, 1: 500, Jackson ImmunoResearch) στάδια επώασης αντισώματος διεξήχθησαν 2% (w /v) BSA /TBST σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Μετά από κάθε στάδιο επώασης, τα πλακίδια πλύθηκαν 3 φορές με TBST. Επεξεργασμένα συστοιχίες πρωτεΐνη σαρώθηκαν σε συνεστιακή αναγνώστη μικροσυστοιχιών (ScanArray 4000, Perkin Elmer Life Science) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Pro λογισμικό ανάλυσης εικόνας GenePix 6.0 μικροσυστοιχιών (Molecular Devices).

Η τεχνική Luminex-χάντρα για αυτοαντιγόνο προφίλ ήταν εγκατεστημένος επειδή έχει πολλά πλεονεκτήματα σε σύγκριση με την αρχικώς χρησιμοποιούμενη τεχνική δέσμη πρωτεΐνης όπως η υψηλότερη δυναμική περιοχή, κατώτερο συντελεστές διακύμανσης, αυξημένη σταθερότητα οφείλεται στην ομοιοπολική σύνδεση των πρωτεϊνών και καλύτερη απόδοση στην ανάλυση υψηλής απόδοσης. Για τη συστοιχία αυτοαντιγόνο χάντρα επελέγησαν 3061 αυτοαντιγόνα. καθαρισμένο με συγγένεια ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες-His ετικέτα συνδέθηκαν ομοιοπολικά σε μαγνητικά καρβοξυλιωμένων χρωματικά κωδικοποιημένο MagPlex

χάντρες TM μικρόσφαιρας ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Luminex). Για κάθε αντίδραση μοναδιαία σύζευξη έως 12,5 μg αντιγόνου και 8,8 χ 10

χρησιμοποιήθηκαν 5 ατομικά κωδικοποιημένες χάντρες. Η αποτελεσματικότητα σύζευξης και σταθερότητα χάντρα παρακολουθήθηκαν. Ένα υπο-συστοιχίας χάντρα αποτελείται από έως και 384 διαφορετικά σφαιρίδια επικαλυμμένα με αντιγόνο και οκτώ σφαιρίδια ελέγχου. Λόγω του συνολικού αριθμού των αντιγόνων, καθορίστηκαν και χρησιμοποιείται για τις αναλύσεις οκτώ διαφορετικά υποπαρατάξεων. σφαιρίδια επικαλυμμένα με πρωτεΐνη διανεμήθηκαν σε πλάκες μικροτίτλου 96-φρεατίων και επωάστηκαν με αραιωμένο (1: 100) δείγματα ορού για 22 ώρες στους 4 ° C. Σε κάθε πλάκα ανάλυσης, τρεις ορούς αναφοράς μετρήθηκαν χρησιμεύει ως ποιοτικός έλεγχος. Χωρίς περιορισμούς αντισώματα απομακρύνθηκαν με πλύση. Bound ανθρώπινα αντισώματα ποσοτικοποιήθηκαν με ανίχνευση με φυτοερυθρίνη (ΡΕ) -σημασμένου αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ανίχνευσης (κατσίκα-αντι-ανθρώπινο-ΡΕ, Jackson /Dianova) που ακολουθείται από αρκετούς κύκλους καθαρισμού και μέτρησης του σήματος φθορισμού σε μια συσκευή FlexMap3D (Luminex) (DD πύλη 7,500 έως 15,000? μέγεθος του δείγματος: 80 μl? 1000 εκδηλώσεις ανά περιφέρεια χάντρα? χρονικό όριο 60 sec)..

δεδομένα προ-επεξεργασία και βιοστατιστική ανάλυση

συστοιχίες πρωτεΐνη Planar

Μετά την διάμεση φόντο αφαίρεση, η διάμεση ένταση φθορισμού από 4 σημεία πανομοιότυπα υπολογίστηκε για κάθε αυτοαντιγόνου και ομαλοποιήθηκε ως προς στίγματα ελέγχους IgG. Cut-offs προσδιορίστηκαν ξεχωριστά για κάθε αυτοαντιγόνου και υπολογίζεται ως η μέση ένταση του σήματος του ομάδα ελέγχου χαμηλής φλεγμονή συν 3 τυπικές αποκλίσεις. δείγματα ομάδα υψηλού φλεγμονή με τιμές πάνω από το cut-off ταξινομήθηκαν ως θετικά και όλα τα αντιγόνα που ταξινομήθηκαν σύμφωνα με φθίνουσα αριθμό των θετικών δειγμάτων. Ν-πλάσια αύξηση ή μείωση ενός ειδικού αυτοαντισώματος καθορίστηκε με βάση την κανονικοποιημένη μέση ένταση σήματος στο υψηλό σε σύγκριση με το χαμηλής κοόρτη φλεγμονή. Κατάταξη των κορυφαίων υποψήφιος δεικτών βασίστηκε σε πολλαπλή μεταβολή και να διορθωθεί p-Value.

συστοιχίες πρωτεΐνη Στεφάνη.

Η μετρούμενη μέση χάντρα ένταση φθορισμού για κάθε αυτοαντιγόνο χρησιμοποιήθηκε για περαιτέρω υπολογισμούς. Σε σπάνιες περιπτώσεις, όταν λιγότερο από 10 σφαιρίδια ανακτήθηκαν για τη μέτρηση, η τιμή αυτή ορίστηκε να λείπει. Αυτές οι τιμές αντικαταστάθηκε από τη μέση τιμή αυτής της αυτοαντιγόνου που μετράται σε όλα τα δείγματα. Αυτοαντιγόνα με τις τιμές που λείπουν περισσότερο από το 20% αποκλείστηκαν από την περαιτέρω ανάλυση. Μετά το μετασχηματισμό log2 ποσοστημόριο εξομάλυνση [43, 44] χρησιμοποιήθηκε για την εξομάλυνση των δειγμάτων σε κάθε πιάτο.

Η κατάταξη των πέντε καλύτερες επιδόσεις αυτοαντισώματα ταυτίζεται με την τεχνική array χάντρα για τη διαφοροποίηση της χαμηλής και τις ομάδες υψηλού φλεγμονή βασίστηκε σε ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης με τη μεταβλητή ομάδα (υψηλή /χαμηλή φλεγμονή) ως εξαρτημένη μεταβλητή και τις μέσες τιμές φθορισμού των αυτοαντισωμάτων ως παράγοντες που επηρεάζουν. Ρ-τιμές για το ενιαίο παράγοντες που επηρεάζουν αυτές καθορίζεται με βάση το τεστ του Wald, και επιπλέον παράμετρο εκτιμήσεις και υπολογίστηκαν τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (CI) δύο όψεων. αναλογίες πιθανοτήτων (OR) δόθηκαν μαζί με τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% σε δύο όψεις. Η απόδοση ταξινόμησης αξιολογήθηκε με βάση την ευαισθησία, την ειδικότητα, και οι τιμές AUC που επιτεύχθηκαν με αυτό το μοντέλο [43, 45]

Λειτουργική σχολιασμό και την οδό ανάλυση

Μετά τη χαρτογράφηση των top 165 αυτοαντισώματα ελεγχθεί θετικά με την πρωτεΐνη μικροσυστοιχίας με γονίδια, ελήφθη ένα σύνολο 136 γονιδίων και να χρησιμοποιηθούν για την ανάλυση του γονιδίου οντολογία. Λειτουργική σχολιασμό ομαδοποίηση έγινε με τη χρήση της βάσης δεδομένων DAVID (https://david.abcc.ncifcrf.gov) [46, 47].

Ιστός μικροσυστοιχιών (TMA) και ανοσοϊστοχημεία

Για την κατασκευή ενός microarray ιστού (Φλεγμονή-ΤΜΑ) σταθεροποιημένα με φορμαλίνη και ενσωματωμένα σε παραφίνη δείγματα ανθρώπινου ιστού (n = 70) που εμφανίζουν υψηλές ή χαμηλές ποσότητες λεμφοκυττάρων που διηθούν ιστού που επιλέγεται από την ομάδα διαλογής αυτοαντισώματος. Τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά συνοψίζονται στον Πίνακα 1 στη στήλη «Cohort Screening». Η χρήση των αρχειοθετημένα δείγματα που προέρχονται από ριζική προστατεκτομή δείγματα που λαμβάνονται στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ίνσμπρουκ εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ιατρικού Πανεπιστημίου του Ίνσμπρουκ. Για κάθε περίπτωση τρεις πυρήνες καρκινικού ιστού και τρεις καλοήθης πυρήνες με διάμετρο 0,6 mm αποκόπηκαν από τον ιστό του δότη και να μεταφερθεί στο μπλοκ υποδοχής TMA [48]. Η TMA συναρμολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα εγχειρίδιο arrayer ιστού (Beecher Instruments, η Sun Prairie, WI). Basal ρ63 δείκτη κυττάρου και καρκινικών κυτταρικό δείκτη α-μεθυλακυλοσυνένζυμο-CoA ρακεμάση (AMACR) χρώσεις που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της ιστολογική διάγνωση και SPAST, STX18 ή SPOP χρώσεις, αντίστοιχα, διεξήχθησαν σε μια συσκευή χρώσης Discovery-XT (Ventana, Tucson, ΑΖ) με τη χρήση τυποποιημένων πρωτοκόλλων οργάνου. αντισώματα στόχους, τους προμηθευτές, τους αριθμούς άρθρου, και οι συγκεντρώσεις που χρησιμοποιήθηκαν ήταν οι εξής: αντι-SPAST, Atlas Αντισώματα (Στοκχόλμη, Σουηδία), # HPA017311, 1:50? αντι-STX18, Atlas-αντισώματα, # HPA003019, 1: 150? αντι-SPOP, Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ), # SAB1406659, δύο παρα δέκα? αντι-p63, Sigma-Aldrich, # P3362, 1: 200? αντι-AMACR, Dako (Βιέννη, Αυστρία), # M3616, 1: 200, αντι-CD45, Dako, # M0701, 1:. 300

Η

Η αξιολόγηση των ανοσοϊστοχημική εντάσεις χρώση ήταν εποπτεύεται από έναν έμπειρο uropathologist (GS). Εικόνες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Axio Imager Ζ2 (Zeiss) και του λογισμικού TissueFAXS (TissueGnostics). Ποσοτική ανοσοϊστοχημική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό ανάλυσης HistoQuest ανοσοϊστοχημεία (TissueGnostics). Για κάθε TMA εντοπίσετε τη μέση ένταση και το ποσοστό των θετικά χρωματισμένων κυττάρων αξιολογήθηκαν και μια βαθμολογία υπολογίζεται πολλαπλασιάζοντας αυτές τις δύο τιμές για κάθε πυρήνα TMA. Οι μέσες τιμές σκορ υπολογίστηκαν από τρία καρκίνο και τρία καλοήθη πυρήνες ιστού του κάθε ασθενή. Mann Whitney U test χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των διαφορών μεταξύ των δύο ομάδων.

Ένα δεύτερο ΤΜΑ (Targos-ΤΜΑ) η οποία περιλαμβάνει 111 δείγματα ιστών από ιστολογικές κανονικό προστάτη (ΒΕ), καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (ΒΡΗ), του προστάτη καρκίνωμα (CA), καθώς και πυρίμαχο όγκους κλινικά διαγνωστεί ευνουχισμό (CRPC), κατασκευάστηκε και βάφτηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Η χρήση αυτών των δειγμάτων ιστού που απορρέουν από ριζική προστατεκτομή χειρουργικές επεμβάσεις στο Νοσοκομείο του Kassel εγκρίθηκε από τα θεσμικά συμβούλια επανεξέταση. Χρώσεις αξιολογήθηκαν από ανεξάρτητο παθολόγο (Μ.Κ.), χρησιμοποιώντας μια ημιποσοτική σύστημα βαθμολόγησης (H-Score), το οποίο συνδυάζει τέσσερις κατηγορίες ένταση με το εκτιμώμενο ποσοστό των χρωματισμένων κυττάρων [49]. Mann Whitney U test χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των διαφορών μεταξύ των ομάδων.

απομόνωση RNA και qPCR

Ολικό RNA εξήχθη από καλοήθεις και κακοήθεις περιοχές κατεψυγμένων τομών ιστού και των δύο ομάδων ασθενών (υψηλή /χαμηλή φλεγμονή, n = 66) χρησιμοποιώντας την AllPrep DNA /RNA Micro Kit (Qiagen, GmbH, Hilden, Germany). Οι συγκεντρώσεις RNA και η καθαρότητα προσδιορίστηκαν φασματοφωτομετρικά. Η αντίστροφη μεταγραφή (RT) εκτελέστηκε σε 500 ng ολικού RNA χρησιμοποιώντας iScript επιλέξτε κιτ σύνθεσης cDNA (Bio-Rad, Hercules CA, USA) και τυχαία εξαμερή εκκινητές (Promega, Madison WI, USA). QPCR (40 κύκλοι) πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν με τη χρήση 8 πσ ολικό RNA ισοδύναμα cDNA για κάθε 10 μΙ αντίδρασης. Χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθες δοκιμασίες Taqman (Applied Biosystems, Foster CityCA, USA): PTPRC, Hs04189704_m1? STX18, Hs01099207_m1? SPOP, Hs00737433_m1? SPAST, Hs00208952_m1? TBP, Hs00427620_m1. έκφραση του γονιδίου στόχου ομαλοποιήθηκε με το γονίδιο καθαριότητας TBP. Η αναλογία σχετική έκφραση (R) υπολογίστηκε με βάση την Taqman αποδοτικότητα δοκιμασία γονιδίου στόχου και του γονιδίου αναφοράς και η απόκλιση κατώφλι κύκλου (Ct) του κάθε δείγματος σε ένα δείγμα ελέγχου (βαθμονομητή, cDNA μείγμα 3 καλοηθών και 3 τμήματα κακοήθη ιστό, 20ng qPCR εισόδου) με τον ακόλουθο τύπο:. Ε = [E

στόχου ^ ΔΟΙ (βαθμονομητή-δείγμα)] /[E

αναφοράς ^ ΔΟΙ (βαθμονομητή-δείγμα)] [50]

Αναζήτηση για SPOP μεταλλάξεις

Πενήντα τρία δείγματα cDNA που απορρέουν από την απομόνωση RNA υψηλής /δείγματα ιστών χαμηλή φλεγμονή που περιγράφονται στην προηγούμενη παράγραφο χρησιμοποιήθηκαν για την οθόνη μετάλλαξη SPOP. Ένα ζεύγος εκκινητών (Eurofins MWG Operon, Ebersberg, Γερμανία) πλαισιώνουν την περιοχή των επαναλαμβανόμενων μεταλλάξεις SPOP σχεδιάστηκε χρησιμοποιώντας το open-source λογισμικό Primer 3: Fwd, 5′-AAGGGTTCCAAGTCCTCCAC-3 ‘? Rev, 5’-CGGCACTCAGGAACCTTTAC-3 ‘[51]. PCR ενίσχυση πραγματοποιήθηκε σε 100 ng ολικού RNA ισοδύναμο με Taq DNA πολυμεράση (Peqlab, Erlangen, D) σε σύνολο 100 μΙ, εφαρμόζοντας τις ακόλουθες προϋποθέσεις: μετουσίωση στους 95 ° C για 2 λεπτά? 40 κύκλοι 95 ° C για 1 λεπτό, 62 ° C για 30 δευτερόλεπτα, και 72 ° C για 1 λεπτό? επιμήκυνση στους 72 ° C για 7 λεπτά. PCR ποσότητα και το μέγεθος του προϊόντος ελέγχθηκε στις 1,2% αγαρόζη Flash Gels (Lonza, Rockland, Η.Π.Α.). ΫΝΑ καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ εκχύλισης Qiagen PCR και η αλληλουχία του χρησιμοποιώντας τους ίδιους εκκινητές σύμφωνα με ένα πρότυπο πρωτόκολλο προσδιορισμού αλληλουχίας Sanger (Mycrosynth, Μπάλγκατς, CH).

Δεδομένου ότι η συχνότητα των μεταλλάξεων ανιχνεύεται SPOP ήταν σημαντικά χαμηλότερο από εκείνο που αναφέρθηκαν στη βιβλιογραφία [51], τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν με τη μέθοδο που περιγράφηκε αρχικά από Blattner et al. [52], το DNA απομονώθηκε από καλοήθεις και κακοήθεις περιοχές των τμημάτων κατεψυγμένου ιστού χρησιμοποιώντας το AllPrep DNA /RNA Micro Kit. Μετά από ένα αρχικό στάδιο ενίσχυσης προ-PCR για να εμπλουτίσει τις περιοχές-στόχους, μια ανάλυση υψηλής ανάλυσης τήξης (HRM) πραγματοποιήθηκε. Αυτή η δοκιμασία στοχεύει εξώνια 6 και 7 του γονιδίου SPOP περιέχει όλα τα προηγουμένως ανιχνευθεί μεταλλάξεις σε καρκίνο του προστάτη (αμινοξέα 80 να 106 και τα αμινοξέα 120 έως 140). Το δείγμα που έδειξε μια αξιοσημείωτη μετατόπιση της καμπύλης τήξης εστάλη μακριά για αλληλουχίας Sanger για να επιβεβαιώσει και να διευκρινίσει περαιτέρω αλλοίωση της.

Αποτελέσματα

Τα ορού επίπεδα αυτοαντισωμάτων είναι αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη με ανοσοποιητικών κυττάρων διήθηση του προστάτη

σε μια προσπάθεια να προσδιοριστούν προστάτη χρόνια φλεγμονή που σχετίζεται αυτοαντισωμάτων, ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που εμφανίζουν χαμηλό ή υψηλό αριθμό διηθητικών κυττάρων του ανοσοποιητικού σε ριζική προστατεκτομή δείγματα τους υποβλήθηκαν σε ανάλυση. Για τον εντοπισμό υψηλής και χαμηλής φλεγμονή ομάδων ασθενών, επωφεληθήκαμε από τον αριθμό των διηθητικών κυττάρων του ανοσοποιητικού σε ολόκληρη προστάτη. Για κάθε ασθενή είκοσι με τριάντα διαφάνειες ιστού που αντιπροσωπεύουν διάφορες περιοχές του προστάτη χρωματίστηκαν για το ταψί CD45 δείκτη λευκοκυττάρων να καθορίσει ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα. Ένας έμπειρος uropathologist διεξαχθεί την κατάταξη σε δύο ομάδες (υψηλή /χαμηλή φλεγμονή), σύμφωνα με ιστοπαθολογική σύστημα ταξινόμησης για τη χρόνια φλεγμονή του προστάτη [53]. δείγματα ασθενών με ή χωρίς ήπια φλεγμονή είχαν οριστεί ως «ομάδα χαμηλού φλεγμονή» και τα άτομα με μέτρια και υψηλή φλεγμονή ως «ομάδα υψηλού φλεγμονή». Κλινικές παραμέτρους όπως η ηλικία, δείκτης φλεγμονής C-αντιδρώσα πρωτεΐνη (CRP), Gleason Score, τον όγκο του προστάτη, PSA και ελεύθερου PSA ήταν ισομερώς κατανεμημένα μεταξύ των υψηλών και των χαμηλών ομάδες φλεγμονή (Πίνακας 1, S1 Σχήμα).

Τα προφίλ αυτοαντίσωμα ορού από 38 υψηλής φλεγμονής και 32 χαμηλή φλεγμονή (έλεγχος) ασθενείς ελήφθησαν για τα αντίστοιχα δείγματα προ-χειρουργική ορό αίματος χρησιμοποιώντας μια 4012 ανασυνδυασμένη οθόνη δέσμη πρωτεΐνης (Σχήμα 1Α). Επιλογή του πάνελ δοκιμής αντιγόνου βασίστηκε στα δικά και αναφέρθηκαν δεδομένα σχετικά με αυτοαντιγόνα που σχετίζονται με τον καρκίνο του προστάτη, άλλοι τύποι καρκίνου και ασθενειών που σχετίζονται με φλεγμονή, όπως η σκλήρυνση κατά πλάκας ή ερυθηματώδη λύκο, αντίστοιχα [31, 36-42] (S1 πίνακα). Αυτοαντισώματα έως 3919 αυτοαντιγόνα ανιχνεύθηκαν σε τουλάχιστον έναν από τους ασθενείς και ο αριθμός των ασθενών ήταν θετικοί για αυτοαντισώματα που αντιστοιχεί σε ένα άτομο αυτοαντιγόνο κυμαίνεται από 0 έως 69, 70 (S1 πίνακα). Λαμβάνοντας υπόψη τον αριθμό των θετικών δειγμάτων και στις δύο ομάδες που δημιουργούνται κατάλογο 15 αυτοαντισωμάτων πιο διαφορετικά υπάρχει στο υψηλό σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλής φλεγμονή (Σχήμα 1Β). Οι κορυφαίες αυτοαντισώματα έναντι spastin (SPAST, giI40806168) και πρωτεΐνη POZ κηλίδα-τύπου (SPOP, giI56117827) ήταν παρόντες στο 37% και το 42% των ορών που προέρχονται από ασθενείς υψηλού φλεγμονή, ενώ ανιχνεύσιμη σε λιγότερο από 3% και το 10% της οροί από ασθενείς ελέγχου χαμηλής φλεγμονή. Αξιολόγηση της πολλαπλή μεταβολή για κάθε μία από τις 997 αυτοαντισωμάτων στο υψηλό σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλής φλεγμονή ελέγχου, αποκάλυψε σημαντικά αυξημένη αφθονία (ρ & lt? 0,05) από 165 αυτοαντισωμάτων σε ομάδα των ασθενών υψηλού φλεγμονή (Σχήμα 1 C, S2 Πίνακα). Κανένας από αυτούς δεν προσδιορίστηκε αποκλειστικά στην υψηλή ομάδα φλεγμονή. Είναι ενδιαφέρον, το επίπεδο έντασης του μόνο ένα αυτοαντισωμάτων (σύνδεση αντιγόνου FEZF2, giI157388917) ήταν σημαντικά μειωμένη (log2-foldchange: -2,66, p-Value: 0.002). Στην υψηλή σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χαμηλής φλεγμονή

Ένα διάγραμμα ροής της στρατηγικής που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και διασταυρούμενης επικύρωσης των αυτοαντισωμάτων (ΑΑΒ) τις υπογραφές που συνδέονται με χρόνια φλεγμονή του προστάτη. Ριζική προστατεκτομή δείγματα ταξινομήθηκαν σε δύο (υψηλή /χαμηλή φλεγμονή) ομάδες με βάση την έκταση της ανοσολογικής διεισδύσεις κυττάρων σε ολόκληρο προστάτη. Τα αντίστοιχα δείγματα ορού αίματος πριν τη χειρουργική επέμβαση αναλύθηκαν για αυτοαντισώματα (ΑΑΒ) χρησιμοποιώντας συστοιχία επίπεδων πρωτεΐνη (διαλογή, n = 70). Μια μελέτη διασταυρούμενης επικύρωσης δοκιμή της ευρωστία του εντοπίστηκαν πίνακα ΑΑΒ βασίστηκε στην τεχνολογία δέσμης πρωτεΐνης Luminex-σφαιριδίων (cross-επικύρωσης, n = 63). Η στατιστική σύγκριση των προφίλ αυτοαντισωμάτων στον ορό των χαμηλών και υψηλών ομάδες φλεγμονή χρησιμοποιήθηκε για τον εντοπισμό και την επικύρωση διαφορικά άφθονη aABS. Τα πρότυπα έκφρασης ιστού του προστάτη και η έκφραση σε διαφορετικά στάδια εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη καθορίστηκαν για τρία επιλεγέντα αντίστοιχα αυτοαντιγόνα (AAGs). Β Bar chart για θετικά κατατάσσονται παρατηρήσεις των 15 πιο διαφορικά ανιχνεύονται αυτοαντισώματα στην ομάδα του υψηλού φλεγμονή σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλής φλεγμονή. Τα δεδομένα εκφράζονται ως ποσοστό του συνολικού αριθμού των θετικών δειγμάτων σε κάθε ομάδα. Γ Υπολογισμός της πτυχής αλλαγή για κάθε αυτοαντισωμάτων αποκάλυψε μια σημαντική αύξηση της τάξης του 165 αντιγόνα στον καρκίνο του υψηλού φλεγμονή του προστάτη (επάνω δεξιά πάνελ, σ & lt? 0,05, διπλώστε την αλλαγή & gt? 2, Mann-Whitney Test) και μια μείωση της τάξης του μόνο μία (άνω αριστερό πίνακα ). Δ Γραφική αναπαράσταση των δέκα κορυφαία λειτουργικά συμπλέγματα εκχωρηθεί για φλεγμονής που συνδέεται με αυτοαντισώματα, χρησιμοποιώντας το εργαλείο λειτουργική σχολιασμό DAVID. Το μέγεθος γραμμή αντιστοιχεί στο ποσοστό που προσδιορίζονται αντίστοιχων γονιδίων που σχετίζονται με μια συγκεκριμένη λειτουργική κατηγορία (P & lt? 0,05).

Η

Έχουμε αναρωτηθεί αν οι 165 αυτοαντισώματα ενισχύεται σημαντικά με τη χρόνια φλεγμονή που σχετίζεται με διακριτές λειτουργικές συστάδες και Ως εκ τούτου, αυτά αντιστοιχίζονται με αντίστοιχα γονίδια τους για να εκτελέσει μια λειτουργική ομαδοποίηση σχολιασμό χρησιμοποιώντας τη βάση δεδομένων DAVID. εντοπίστηκαν αρκετές εμπλουτίζεται μοριακής λειτουργίες και βιολογικών διεργασιών. Από τις δέκα κορυφαίες όρους σχολιασμού «πρωτεΐνη εντοπισμού» σχηματίζεται το μεγαλύτερο σύμπλεγμα που περιέχει 14 συνδέονται γονίδια που κωδικοποιούν πρωτεΐνες που εμπλέκονται στη διακίνηση φυσαλιδώδη (GDI1, MYH9), ενδο- (CDC42) και εξωκύττωση (STX18), χρωματίνη δεσμευτική (CHMP5) και κυτταροτοξικά Τ β-κυττάρων ενεργοποίησης (CTLA) .Το σύμπλεγμα «μακρομοριακό σύμπλοκο οργάνωση υπομονάδα» αποτελούνταν από τα γονίδια που απαιτούνται για την επιδιόρθωση του DNA (SF3B3), την πρωτεϊνική σύνθεση (EIF2A), τον πολλαπλασιασμό των Τ-κυττάρων (FADD), και μικροσωληνίσκων αποσυναρμολόγηση (STMN1, SPAST). Συνολικά, παρατηρήσαμε ότι τα αυτοαντισώματα υπερεκπροσωπούνται σε ασθενείς υψηλού φλεγμονή κατευθύνονταν κυρίως εναντίον των αντιγόνων δομής και πρωτεΐνες που σχετίζονται με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Σχήμα 1D, Πίνακας 2).

Η

Αντιγόνα αυτοαντισωμάτων ορού προερχόμενου εκφράζονται στον προστάτη

Για να διευκρινιστεί αν τα αντιγόνα των προσδιορισμένων αυτοαντισωμάτων που εκφράζονται και πιθανότατα απορρυθμισμένη σε ιστό προστάτη, ερευνήσαμε την μορφή έκφρασης των διακριτών πρωτεϊνών στόχων. Γι ‘αυτόν τον τρία υποψήφια αντιγόνα, Spastin (SPAST), κηλίδα-τύπου POZ πρωτεΐνη (SPOP), και συνταξίνη 18 (STX18), επελέγησαν σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: (i) αυτοαντισώματα είναι μεταξύ των κορυφαίων διαφορικά άφθονη φλεγμονή που σχετίζεται με αυτά, σύμφωνα με p-τιμές και διπλώστε την αλλαγή (S2 Πίνακας)? (Ii) αντισώματα για IHC είναι εμπορικά διαθέσιμα και τα αντίστοιχα επίπεδα αντιγόνου είναι επαρκή για ανοσοϊστολογικές ανίχνευσης σύμφωνα με την ανθρώπινη πρωτεΐνη Atlas (www.proteinatlas.org)? (Iii) ενώσεις με διαφορετικούς τύπους καρκίνου είχαν αναφερθεί (Πίνακας 3). Μια μικροσυστοιχία ιστός συμπεριλαμβανομένων των δειγμάτων ιστών ασθενών υψηλού και χαμηλού φλεγμονή της οθόνης αυτοαντισώματος δημιουργήθηκε και χρησιμοποιήθηκε για την ανοσοϊστοχημική ανίχνευση αυτών των πρωτεϊνών αυτοαντιγόνου.

Η

SPAST, SPOP και STX18 βρέθηκαν εκφράζεται στο επιθήλιο της καλοήθους και του καρκίνου περιοχές και στις δύο ομάδες ασθενών. Ποσοτικοποίηση των εντάσεων ανοσοχρώση αποκάλυψε μια σημαντικά αυξημένη έκφραση SPAST στο υψηλό φλεγμονή σε σύγκριση με δείγματα ιστού χαμηλή φλεγμονή του προστάτη. Ωστόσο, SPOP και STX18 ανοσολογική αντίδραση ήταν αμετάβλητες μεταξύ των δειγμάτων υψηλής και χαμηλής φλεγμονή ασθενή (σχήμα 2Α).

Μια Ανοσοϊστοχημική χρώσεις του εκπροσώπου σημεία μικροσυστοιχιών ιστού από υψηλές και χαμηλές ομάδες ασθενών φλεγμονή. SPAST, STX18 και SPOP εκφράζονται στο επιθήλιο της καλοήθους (BE) και του καρκίνου (CA) περιοχών και των δύο ομάδες. Η ποσοτική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό ανάλυσης HistoQuest ανοσοϊστοχημεία (TissueGnostics). Μια βαθμολογία υπολογίστηκε πολλαπλασιάζοντας την ένταση χρώσης και το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων. n = 25 ανά ομάδα. * Ρ & lt? 0,05, Mann-Whitney Test. Bar, 100 μm.