Αφηρημένο

Σχεδόν όλοι οι καρκίνοι του προστάτη ανταποκρίνονται στη θεραπεία στέρησης ανδρογόνων, αλλά πολλά θα επαναληφθεί. Εμείς ως αίτημα ότι ο κίνδυνος της -frequency διαφυγής ορμονών και delay- επηρεάζεται από τις λεπτομέρειες ορμονοθεραπεία. Περισσότερα, ορμονικές θεραπείες να προκαλέσει κρίσιμη βιολογικές αλλαγές που αφορούν υποδοχείς ανδρογόνων? μερικοί μπορεί να είναι στόχοι για την πρόληψη διαφυγής. Ερευνήσαμε την σχέση μεταξύ της θεραπείας στέρησης ανδρογόνων και τον κίνδυνο υποτροπής με τη χρήση γυμνών ποντικών που φέρουν το υψηλό βαθμό, εξαρτώνται από τις ορμόνες ανθρώπινου προστάτη ξενομοσχεύματος καρκίνου PAC120. Ποντικοί που φέρουν όγκο υπέστησαν αγωγή με ωχρινοτρόπου ορμόνης Releasing Hormone μόνος ανταγωνιστής (LHRH), συνεχή ή διακεκομμένη θεραπευτική αγωγή, ή σε συνδυασμό με τον υποδοχέα ανδρογόνων (AR) ανταγωνιστές (βικαλουταμίδη ή η φλουταμίδη). Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε. Βιολογικές αλλαγές μελετήθηκαν ως προς γονιδιωματική μεταβολές, μεταλλάξεις AR και η έκφραση πρωτεΐνης σε μια μεγάλη σειρά από επαναλαμβανόμενες όγκων σύμφωνα με τους όρους ορμονοθεραπεία. Θεραπείες στόχευσης Her-2 ή ΑΚΤ δοκιμάστηκαν σε συνδυασμό με ευνουχισμό. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων. Η ανάπτυξη του όγκου αναστάλθηκε από συνεχή χορήγηση του ανταγωνιστή δεγαρελίξης LH-RH (ευνουχισμός), αλλά το 40% των όγκων υποτροπιάσει. Διαλείπουσα ευνουχισμός ή πλήρη αποκλεισμό που προκαλείται από δεγαρελίξης και αντιανδρογόνα συνδυασμό, ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου, αλλά αυξάνει τον κίνδυνο υποτροπής (RR) σε σύγκριση με τη συνεχή ευνουχισμό (RR

διαλείπουσα: 14.5, RR

πλήρη αποκλεισμό: 6.5 και 1.35). Όλες οι επαναλαμβανόμενες όγκους που εμφανίζονται

νέα

ποσοτική γενετικές μεταβολές και AR μεταλλάξεις, ανεξάρτητα από τις μορφές θεραπείας. ενίσχυση AR βρέθηκε μετά από πλήρη αποκλεισμό. Αυξημένη έκφραση του /neu Her-2 με συχνές ενεργοποίηση ERK /ΑΚΤ ανιχνεύθηκε σε όλες τις παραλλαγές. Συνδυασμός ευνουχισμό με έναν αναστολέα Her-2 /neu μειώθηκε επανάληψη κινδύνου (0,17) και ο συνδυασμός με έναν αναστολέα mTOR εμπόδισαν. θεραπείες αντι-ορμόνη επηρεάζει τον κίνδυνο υποτροπής, αν και η αναστολή της ανάπτυξης του όγκου ήταν αρχικά παρόμοια. Επαναλαμβανόμενες όγκους που εμφανίζονται γενετική αστάθεια, μεταλλάξεις AR, και οι μεταβολές των οδών φωσφορυλίωσης. Εμείς δεδομένο ότι Her-2 /μονοπάτια ΑΚΤ επιτρέπεται διάσωσης των καρκινικών κυττάρων κάτω από τον ευνουχισμό και αποδείξαμε ότι η αναστολή τους εμπόδισε υποτροπής του όγκου στο μοντέλο μας

Παράθεση:. Guyader C, Ceraline J, Gravier Ε, Morin Α, Michel S, Erdmann Ε, et al. (2012) Κίνδυνος ορμόνη Escape σε μια ανθρώπινη καρκίνο του προστάτη μοντέλου εξαρτάται από θεραπεία Λεπτομέρειες και μπορεί να μειωθεί με αναστολείς της τυροσινικής κινάσης. PLoS ONE 7 (8): e42252. doi: 10.1371 /journal.pone.0042252

Επιμέλεια: Irina Agoulnik, Διεθνές Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16 Ιανουαρίου, 2012? Αποδεκτές: 5 Ιουλ 2012? Δημοσιεύθηκε: 6 Αυγ του 2012

Copyright: © Guyader et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το ARC και το contre le καρκίνου Λιγκ (Παρίσι, Γαλλία). Αυτές οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. ARTIC χρηματοδότησε την αγγλική επεξεργασίας

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν διαβάσει την πολιτική του περιοδικού και έχουν τα ακόλουθα συγκρούσεις: Ένας συγγραφέας έχει προσληφθεί από BioMérieux. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

ανδρογόνων υποδοχέων (AR) ελέγχει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την επιβίωση στις κανονικές του προστάτη και του προστάτη καρκινώματα (PCA). Έτσι στέρησης ανδρογόνων είναι η θεραπεία πρώτης γραμμής του προστάτη. ορμονική θεραπεία περιλαμβάνει ευνουχισμού επιτυγχάνονται φαρμακολογικά με ωχρινοτρόπου ορμόνης που απελευθερώνει την ορμόνη (LH-RH) αγωνιστές ή ανταγωνιστές, ανταγωνιστές AR όπως φλουταμίδιο ή βικαλουταμίδη ή νέες μορφές θεραπείας, όπως αναστολέας 17-20 λυάσης (οξική αμπιρατερόνη, TAK700) ή MDV3100 [1] . Οι θεραπείες γίνονται συνεχώς ή διακεκομμένα, με αναστολέα μονοθεραπεία LH-RH, η μονοθεραπεία με αντι-ανδρογόνο ή σε συνδυασμό, όπως αναφέρεται για την ολοκλήρωση των ανδρογόνων αποκλεισμό.

Όποια και αν είναι η ορμονική θεραπεία, οι περισσότεροι όγκοι απαντήσει, τότε αποκτά την ανεξαρτησία των ανδρογόνων και να επαναληφθεί [2], [ ,,,0],3]. Αρκετοί μηχανισμοί έχουν προταθεί [4], [5].

i.

Genomic αλλαγές συμβαίνουν κατά την διάρκεια της προόδου του όγκου, αλλά ο ρόλος τους παραμένει ασαφής, αν και έχουν κλωνική χρωμοσωμικές ανωμαλίες έχουν βρεθεί σε PCa [6], [7].

II.

Αλλοίωση της εκφράσεως AR είναι συχνή οφείλεται στην ενίσχυση του γονιδίου [8], αυξημένη μεταγραφή, ή σταθεροποίηση της πρωτεΐνης AR μέσω φωσφορυλίωσης ειδικών υπολειμμάτων AR [9], [10], AR μεταλλάξεις που διευρύνουν τη φάσμα συνδέτη [8], μεταβολές στην συνενεργοποιητές πυρηνικού υποδοχέα, και ανεξάρτητη από συνδέτη πρόσδεση του AR σε DNA [2], [11]. Η επικράτηση και η επιρροή του AR αλλαγές στην εξέλιξη της νόσου δεν είναι γνωστά, λόγω της μεταβλητότητας σε θεραπευτικά σχήματα, περιορισμένη πρόσβαση σε υλικό από ασθενείς και έτσι λίγες ολοκληρωμένες μελέτες αλληλουχίας.

III.

Η ενεργοποίηση των οδών επιβίωσης εμπλέκεται σε διαφυγή ορμόνη [12], όπως Her-2 /neu (κινάσης τυροσίνης ανάπτυξης υποδοχέα παράγοντα), mTOR /ΑΚΤ (στόχος της ραπαμυκίνης /ΑΚΤ), ή ERK1 , 2 (εξωκυτταρικό σήμα κινάση ρυθμιζόμενη), όλα εμπλέκονται στην φωσφορυλίωση AR [5], [10]. Her-2 έκφρασης /neu είναι συνήθως χαμηλή περιεκτικότητα σε ΣΕΣΣ. Ωστόσο, τα υψηλά επίπεδα του Her-2 /neu είχαν βρεθεί ότι σχετίζονται με κοντή χρόνους επιβίωσης σε ένα υποσύνολο ασθενών προστάτη [13], [14]. Περισσότερα, Τέχνη

et al.

Έδειξαν ότι αναγκάστηκε Her-2 έκφρασης /neu διαμορφώνει τη σηματοδότηση AR και οδηγεί σε ανεξαρτησία από ανδρογόνα [15]. Μια αλλάξει πορεία ΑΚΤ συνδέθηκε με προστάτη εξέλιξη και την εμφάνιση των όγκων AI [16]. Επιπλέον, Graff

et al.

Έδειξε ότι η αναγκαστική υπερέκφραση της ΑΚΤ στην κυτταρική σειρά LNCaP την επιτάχυνση της ανάπτυξης των όγκων [17]. ΑΚΤ θα μπορούσε να είναι ένας εναλλακτικός τρόπος με τον οποίο Her-2 /neu οδηγεί να θέσει εκτός νόμου την ενεργοποίηση AR [18].

Ένα βασικό ερώτημα σε κλινικές είναι αν τρόπους θεραπείας ορμονικής επηρεάζει με διαφορετικό τρόπο τον κίνδυνο διαφυγής. Για να ανταποκριθεί σε αυτό το κρίσιμο ερώτημα, χρησιμοποιήσαμε ένα πειραματικό μοντέλο μιας ορμόνης που εξαρτάται από ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη (PAC120), που προέρχεται απ ‘ευθείας από έναν ασθενή και αυξανόμενη σε ανοσοκατεσταλμένα ποντίκια. Αξιολογήσαμε την επίδραση των διαφορετικών τρόπων ορμονική θεραπεία για την άμεση ανταπόκριση και στον κίνδυνο υποτροπής? οι βιολογικές αλλαγές που σχετίζονται με διάφορες θεραπείες, όπως γονιδίωμα αλλαγές,

AR

μεταλλάξεις, και η έκφραση του αυξητικού παράγοντα /ενεργοποίηση μελετήθηκαν. Η συμμετοχή των οδών φωσφορυλίωσης στη διαφυγή των ορμονών μας οδήγησε να δοκιμάσει συνδυασμό των αναστολέων της κινάσης της τυροσίνης με φαρμακολογική ευνουχισμό για να μειώσει τον κίνδυνο επανεμφάνισης του όγκου.

Μέθοδοι

όγκου του προστάτη ξενομοσχεύματα

PAC120, μια ορμόνη που εξαρτάται από την ανθρώπινη-σε-ποντικού PCa ξενομοσχεύματος, [19] διατηρήθηκε με σειριακή μεταμόσχευση σε μεσοπλάτια επίθεμα λίπους αρσενικών Swiss γυμνών ποντικών (CRL: NU (ICO) -Foxn

LNU) από την Charles River (L «Arbresle, Γαλλία) χρησιμοποιήθηκε μεταξύ των διόδων 47 και 51. κομμάτια του όγκου των 20 mm

3 ± 5 (± 20. 10

6 κύτταρα), όπου μεταμοσχευθούν. Όλα τα πρωτόκολλα ακολούθησε τις κατευθυντήριες οδηγίες όπως που διατυπώνεται από τη γαλλική επιτροπή δεοντολογίας.

Θεραπείες

δεγαρελίξης (Firmagon® γνωστή ως FE 200 486 κατά τη διάρκεια αυτής της ανάπτυξης, Ferring Research Institute Inc., San Diego, CA) [20] ενίεται υποδορίως μηνιαία στα 10 mg /kg [19], βικαλουταμίδη (Casodex®, Astra Zeneca, Γαλλία) και φλουταμίδη (Eulexine®, Schering-Plough, Kenilworth, NJ) που δίδεται στα 50 mg /kg, από του στόματος, 5 ημέρες την εβδομάδα. Trastuzumab (Herceptin®, Roche, France) εγχύεται εβδομαδιαίως στα 10 mg /kg μέσω ενδοπεριτοναϊκής χορήγησης. Το everolimus (δισκία Afinitor®, Novartis Pharma AG, Switzerland) που δίδεται ανά os στα 2 mg /kg, 3 ημέρες την εβδομάδα. Ορίζουμε συνεχή ευνουχισμό ως ένεση δεγαρελίξης και μόνο μία φορά το μήνα. Τα ποντίκια κρατήθηκαν υπό αγωγή μέχρι την υποτροπή του όγκου (καρκινικών έπρεπε να καταλήξει σε 1.500 χιλιοστά

3). Διαλείπουσα ευνουχισμό αποτελούνταν από 2 ενέσεις δεγαρελίξης την ημέρα 0 και 28 (ένας κύκλος), στη συνέχεια σταμάτησε τη θεραπεία μέχρι όγκου φτάσει πίσω 2 φορές τον αρχικό όγκο. Η πλήρης αποκλεισμός ανδρογόνων είναι η ένωση των δεγαρελίξης μηνιαία σε συνδυασμό με την αντι-ανδρογόνων αναστολέα του υποδοχέα (είτε βικαλουταμίδη ή η φλουταμίδη). Εικόνα S1 αποτελεί ένα σχηματικό διάγραμμα των όρων θεραπείες.

Ανάπτυξη Όγκου

Αξιολόγησης

Παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου έγινε σύμφωνα με Marangoni et al. [21]. Υποτροπή ορίστηκε ως ο χρόνος σε ημέρες που απαιτούνται για τους όγκους για να επιτευχθεί μια 5-πλάσια αύξηση από το αρχικό όγκο.

θραύσματα PAC120 ξενομοσχεύματος όγκου τυχαίως εμφυτεύθηκαν σε 204 αρσενικά ποντίκια. Μόλις οι όγκοι έφθασαν ένα μέσο όγκο 63-250 mm

3, οι ποντικοί που υποβλήθηκαν σε θεραπεία (

n

υποδεικνύεται στον πίνακα S1). Μετά επανανάπτυξης όγκου, AI όγκοι μεταμοσχεύθηκαν σε φαρμακολογικά ευνουχισμένα αρσενικά ποντίκια και να χαρακτηρίζεται σε πρώιμη δίοδοι (1 έως 4).

RT-PCR mRNA Ανάλυση

Ολικό RNA εκχυλίστηκε όπως προηγουμένως δημοσιευθεί [21 ]. Οι αλληλουχίες των εκκινητών που υποδεικνύονται στις μεθόδους S1.

Λειτουργική AR Μετάλλαξη Ανίχνευση με ADE2 Δοκιμασία Reporter

Χρησιμοποιήσαμε μια λειτουργική δοκιμασία στο στέλεχος EJ250 μαγιά για την ανίχνευση μεταλλάξεων AR [22].

ανδρογόνων υποδοχέων (AR) δοκιμασία δραστικότητας ζύμη που βασίζεται.

Μια δοκιμασία δραστηριότητα AR πραγματοποιείται στο στέλεχος ζύμης ανασυνδυασμένου EJ250 (ΜΑΤα ade2-101 his3-D200 leu2-D1 lys2-801 trp1-D1 ura3 -52 URA3: ΕΙΝΑΙ-ADE2 [pRS /AREAde2]) χρησιμοποιήθηκε για δείγματα όγκων οθόνη για μεταλλάξεις AR όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22], [23]. Σε αυτό το στέλεχος ζυμομύκητα EJ250, η έκφραση του γονιδίου αναφοράς ADE2, που απαιτούνται για τη βιοσύνθεση αδενίνης, τοποθετήθηκε υπό τον αυστηρό έλεγχο του ενός εξαρτώμενων από ανδρογόνα υποκινητή [22]. Κατά συνέπεια, η ανάπτυξη της ζύμης EJ250 επικαλείται την μεταγραφική δραστικότητα ενός υποδοχέα ανδρογόνων συνδετήρα-ενεργοποιηθεί. Μετά από μεταμόρφωση με ένα πλασμίδιο έκφρασης AR όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22], μαγιά απλώθηκαν σε επιλεκτικά μέσα εξαντλημένο από αδενίνη και περιέχουν είτε διυδροτεστοστερόνη (DHT), dehydroepiandrostenedione, β-οιστραδιόλη, προγεστερόνη, 17α-υδροξυπρογεστερόνη, φλουταμίδη ή οξική κυπροτερόνη (Sigma Aldrich , St Quentin Fallavier, Γαλλία) στην ενδεικνυόμενη συγκέντρωση. συμπεριλήφθηκαν επίσης Ένας αρνητικός έλεγχος (όχημα) και ένα θετικό μάρτυρα (συμπληρωμένο με αδενίνη). Όταν εφαρμόζεται σε δείγματα όγκων, μεταλλαγμένες παραλλαγές AR μπορεί να διακριθεί από άγριου τύπου AR σύμφωνα με την απόκρισή τους στο στεροειδές ή μη στεροειδές μόριο προστίθεται στο μέσο.

Ανίχνευση υποδοχέα ανδρογόνων (AR) μεταλλάξεις σε δείγματα όγκων.

Εν συντομία, ολικό RNA παρασκευάστηκε από τα δείγματα όγκων (RNeasy Midi Kit, Qiagen, Courtaboeuf, France). Αντίστροφη μεταγραφή εκτελέστηκε με το κιτ της αντίστροφης μεταγραφής Omniscript (Qiagen) από 1 μg του ολικού RNA. θραύσματα AR cDNA ενισχύθηκαν με την προς τα εμπρός (5′-TGCGGCGGCGCAGTGCCGCTAT-3 ‘) (νουκλεοτίδια 2310-2339) και αντίστροφη (5′-GGTGCCATGGGAGGGTTAGATAGGGAG-3’) (νουκλεοτίδια 4075 έως 4101) εναρκτήρες που πλευρίζουν τα εξόνια 1-8 (GenBank NM_000044. 2, νουκλεοτίδια 2310 έως 4101). Στη συνέχεια, 100 ng AR cDNAs θραύσματα εισήχθηκαν σε έναν έκφρασης ζύμης «επισκευή χάσμα» πλασμίδιο με ομόλογο ανασυνδυασμό, και μετά την επίστρωση και επώαση στους 30 ° C για 72 ώρες, οι αποικίες ζυμομυκήτων βαθμολογήθηκαν [22]. Η AR άγριου τύπου προσδιορίστηκαν παράλληλα ως πειραματικός έλεγχος. Το ανδρογόνο ανάπτυξη ζύμης εξαρτώμενη από τον υποδοχέα σε απόκριση προς το στεροειδές ή αντιανδρογόνο προστίθεται στο μέσο αξιολογήθηκε με αποικίες βαθμολόγησης. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ιστογράμματα που αντιστοιχούν στην αναλογία του αριθμού των αποικιών ζύμης άνοιξε με τον αριθμό των αποικιών που λαμβάνονται σε παρουσία 100 ηΜ DHT. Για μεταλλάξεις AR χαρακτηρισμό, το πλασμίδιο έκφρασης AR διασώθηκε από κύτταρα ζύμης για αλληλούχιση. Εν συντομία, ζύμες λύθηκαν με εύρος 150 έως 212 μm γυάλινες χάντρες πλυμένη με οξύ (Sigma Aldrich) και το πλασμίδιο DNA εκχυλίζεται με το πλασμίδιο κιτ NucleoSpin (Macherey-Nagel, Hoerdt, Γαλλία) και υποβάλλονται σε επεξεργασία για προσδιορισμό της αλληλουχίας (GATC Biotech AG, Konstanz, Germany ).

η έκφραση πρωτεΐνης αναλύθηκαν με κηλίδωση Western

ΑΚΤ, φωσφο-ΑΚΤ (S473), ERK1 /2 (Cell Signaling Technology, Ozyme, Saint Quentin en Yveline, Γαλλία), και PSA ( Dako) χρησιμοποιήθηκαν σε 1:1000. Her-2 /neu (Cell Signaling), AR (Upstate, Millipore, Saint Quentin en Yveline), και π-ERK1 /2 (συστήματα RnD, Λιλ, Γαλλία) χρησιμοποιήθηκαν σε 1:500. Αντι-β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε σε 1:5000 (Sigma-Aldrich, Saint Quentin Fallavier, Γαλλία). Τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στο Μέθοδοι S1.

Συγκριτική Γονιδιωματική υβριδοποίηση Πίνακες

Διαδικασία στο παρελθόν ήταν δημοσιευμένο [24]. Πραγματοποιήσαμε συν-υβριδισμό μεταξύ του DNA που εξάγεται από τις παραλλαγές AI και εκείνων που προέρχονται από PAC120p47. Ελάχιστες κοινές αλλαγές εντοπίστηκαν [25]. Ιεραρχική ομαδοποίηση έγινε σε προφίλ με βάση την ελάχιστη περιοχές. Ευκλείδεια απόσταση χρησιμοποιήθηκε ως το μέτρο ομοιότητας και του αλγορίθμου Ward ως agglomerative μέθοδο. Διαχωρισμός σε ομάδες προτάθηκε με βάση τη δομή του δενδρόγραμμα.

Ιστολογίας

μελέτες ιστολογίας φως μικροσκόπιο χρησιμοποιείται 4-μm πάχους φορμόλη σταθερό παραφίνη ενσωματωμένα τμήματα από PAC120, PAC120 υπολειπόμενη όγκων και AI των παραλλαγών που βάφονται με αιματοξυλίνη και ηωσίνη σαφράν.

Στατιστική Ανάλυση

Χρησιμοποιήσαμε το τεστ Mann-Whitney, Kaplan-Meier για την επιβίωση, δοκιμές κατάταξης log-και το ακριβές τεστ του Fisher, σύμφωνα στα αντίστοιχα πειράματα, όπως περιγράφεται στις μεθόδους S1.

Αποτελέσματα

In vivo

απάντηση σε ορμονική αγωγή Σχήματα

Συνεχής ευνουχισμό

με δεγαρελίξη συνελήφθη την ανάπτυξη όλων PAC120 όγκων. Οι υποτροπές παρατηρήθηκαν σε 8/20 ποντικούς, σε μια διάμεση καθυστέρηση 274 ημέρες [εύρος 211 έως 323] (Σχήμα 1Α). Διαλείπουσα ευνουχισμός ελέγχθηκε σύμφωνα με το ακόλουθο πρωτόκολλο: Η πρώτη χορήγηση της δεγαρελίξης μειωμένου όγκου του όγκου σε όλα τα ζώα (14/14, 100%). Η δεύτερη χορήγηση δόθηκε άπαξ regrew όγκου δύο φορές σε όγκο, σε μία διάμεση καθυστέρηση 119 ημερών. Έξι όγκοι όπως αντιμετωπίζονται δεν απάντησε (6/14, 43%) και 8 σταθμοί χαμηλή ανταπόκριση ή σταθεροποίηση. Kaplan Meier ανάλυση έδειξε αυξημένο σχετικό κίνδυνο επανάληψης του 14,5 (95% CI: 2,98 – 70,9,

σ

& lt? 0,001, δοκιμασία log-rank) (Εικόνα 1Α και Πίνακας S2). Ως εκ τούτου, διαλείπουσα στέρησης ανδρογόνων αύξησε τον κίνδυνο της υποτροπής και μείωση του χρόνου έως την εξέλιξη σε σύγκριση με συνεχή ευνουχισμό.

Α) ανάλυση Kaplan-Meier της ορμόνης διαφυγής χωρίς επιβίωση μετά από συνεχή (λευκό τετράγωνο, πλήρης γραμμή), διαλείπουσα (λευκό τετράγωνο, διάστικτη γραμμή) δεγαρελίξης, βικαλουταμίδη συν δεγαρελίξης (μαύρο τρίγωνο, πλήρης γραμμή) ή flutamide συν δεγαρελίξης (μαύρο τρίγωνο, διακεκομμένη γραμμή). Β) καμπύλες ανάπτυξης όγκων ως συνάρτηση του χρόνου σε έλεγχο (λευκό Cercle, πλήρης γραμμή), βικαλουταμίδη (λευκό τρίγωνο, πλήρης γραμμή), φλουταμίδη (λευκό τρίγωνο, διακεκομμένη γραμμή), δεγαρελίξης (λευκό τετράγωνο, πλήρης γραμμή), βικαλουταμίδη συν δεγαρελίξη (μαύρο τρίγωνο, πλήρης γραμμή) και φλουταμίδη συν δεγαρελίξης (μαύρο τρίγωνο, διακεκομμένη γραμμή)? C i) PAC120 ξενομοσχεύματος [x200], υπολειμματική PAC120 όγκου (300 ημέρες) ii) [x100], iii) [Χ400], AI παραλλαγές με adenoid χαρακτηριστικά (iv) [x100], χαρακτηριστικά amphicrine (v) [x200], και mucosecretant χαρακτηριστικά (vi) [x200]

Η

καθυστέρησε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου Flutamide ή βικαλουταμίδη (

p =

0,03 και

σ

& lt? 0.001, αντίστοιχα). (Σχήμα 1Β). Πλήρη αποκλεισμό των ανδρογόνων (δεγαρελίξης συν βικαλουταμίδη) συνέλαβε την ανάπτυξη του όγκου σε 30 περιπτώσεις αντιμετωπίζονται, αλλά 24 όγκους υποτροπιάσει. Υποτροπές συνέβη νωρίτερα από ό, τι μετά τον ευνουχισμό μόνη της (Πίνακας S2) με αυξημένο σχετικό κίνδυνο υποτροπής (σχετικός κίνδυνος 6,55? 95% CI: 2,41 – 17,8,

σ

& lt? 0,001, δοκιμασία log-rank) (Εικόνα 1Α και Πίνακας S2). Πλήρης αποκλεισμός ανδρογόνων με δεγαρελίξη συν φλουταμίδη οδήγησε στην 8/11 επαναλαμβανόμενες όγκους και διάμεσος χρόνος έως την ορμόνη διαφυγή των 253 ημερών [εύρος 43-337] (Πίνακας S2)? αύξηση του κινδύνου υποτροπής δεν ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση μόνο με δεγαρελίξη (

p =

0.561, δοκιμασία log-rank).

Η ιστολογική και μοριακές αλλαγές συνδεδεμένες με ανδρογόνων Ανεξαρτησίας

υπολειπόμενη όγκων PAC120 υπό τον ευνουχισμό έδειξε νεκρωτικές περιοχές, πολυάριθμες μιτώσεις και δεν αποπτωτικών σωμάτων (Σχήμα 1C

ii & amp? iii

). Ανδρογόνων ανεξάρτητες (AI) παραλλαγών που εμφανίζονται ιστολογικές αλλαγές, όπως βλεννώδες, νευροενδοκρινική-όπως, ή αδενοειδείς χαρακτηριστικά διαφοροποίησης (Σχήμα 1 C IV-VI). Όλες οι παραλλαγές AI εμφανίζονται μικτά σχήματα, που κυριαρχείται από βλεννώδες διαφοροποίηση ή /και διαφοροποίηση apocrine και πολυάριθμες πολυπυρηνικές κύτταρα. Κανένας χαρακτηριστικά ήταν ειδικά για κάποια συγκεκριμένη ορμονική θεραπεία.

Η χρωμοσωμική σταθερότητα των όγκων PAC120 μέσα στο χρόνο και περάσματα έχει προηγουμένως αποδειχθεί [24]. Είμαστε συν-υβριδοποιημένο DNA AI με τη γονική PAC120 DNA για να αποκαλύψει τις νέες αλλαγές. Τριάντα-πέντε ελάχιστες περιοχές είχαν μεταβληθεί σε τουλάχιστον 5 (20%) της 26ης AI παραλλαγών που μελετήθηκαν. Παραδόξως, κανένα από τα μεταβολές ήταν κοινές για όλες τις παραλλαγές AI. Τα κέρδη αντίγραφο γονιδίου και ζημίες αναλυτικά στον Πίνακα S3. Οι 26 AI παραλλαγές ομαδοποιήθηκαν με αλλαγμένη περιοχές σε πέντε διακριτές ομάδες χρησιμοποιώντας μια ιεραρχική ανάλυση συστάδων (Σχήμα 2). Ωστόσο, δεν βρήκαμε καμία θεραπεία συγκεκριμένο μοτίβο των αλλαγών που σχετίζονται με υποτροπές (ακριβής δοκιμασία Fisher και Benjamini και Hochberg διόρθωσης για την προσαρμογή για πολλαπλές δοκιμές). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η στέρηση ανδρογόνου δημιουργείται μια τυχαία ποικιλία των νέων γενετικών αλλοιώσεων, αλλά όχι συγκεκριμένο μοτίβο θα μπορούσε να αποδοθεί με τον τύπο του κανόνος επεξεργασίας. Οι μεταβολές αυτές σταθερώς αποκτήθηκαν (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Δεν υπήρχε σχέση μεταξύ του αριθμού αντιγράφων γονιδίου αλλοιώσεις και τον τύπο της θεραπείας ορμόνης. Η αριστερή στήλη δείχνει αριθμημένα AI παραλλαγές με κατεργασία όπου

de

δηλώνει δεγαρελίξης,

de-α

δεγαρελίξης συν αντιανδρογόνο (βικαλουταμίδη ή η φλουταμίδη),

de-t

δεγαρελίξης συν trastuzumab. Πράσινα και κόκκινα χρώματα αντιστοιχούν στις ζημίες και τα κέρδη του αριθμού αντιγράφων του γονιδίου, αντίστοιχα. Κίτρινο αντιστοιχεί απουσία διαφορά όσον αφορά τον αριθμό αντιγράφων του γονιδίου ανάμεσα παραλλαγές AI και γονικής DNA PAC120.

Η

AR

ενίσχυση γονιδίου παρατηρήθηκε στο 15% (4/26) του AI παραλλαγές και συνέβη μόνο σε το AI που προέρχεται μετά από πλήρη αποκλεισμό (aide-α) ομάδα (Πίνακας S3). Συχνότητα της γονιδιακής ενίσχυσης μετά την πλήρη αποκλεισμό των ανδρογόνων ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι μετά από μόνη της τον ευνουχισμό (

p =

0,01, Fisher exact test). Σε αυτές τις περιπτώσεις AR mRNA επίπεδα αυξήθηκαν από 10 έως 20 φορές, όπως και οι επίπεδα του mRNA εντός του όγκου του PSA (Εικόνα S2).

AR

μεταλλάξεις ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας μία λειτουργική δοκιμασία που βασίζεται σε ζύμη ως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Δεν λειτουργική

AR

βρέθηκαν μεταλλάξεις στον όγκο PAC120 αλλά εμφανίστηκε στο 28% (10/36) των παραλλαγή όγκων AI. Ένα παράδειγμα του προφίλ που λαμβάνεται για Aide-a4 φαίνεται στο Σχήμα S3. Μεταλλάξεις συνέβη στο 46%, 17% και 25% μετά την πλήρη αποκλεισμό, αντιανδρογόνα και δεγαρελίξης, αντίστοιχα (Πίνακας S4). AR cDNA αλληλουχίας αποκάλυψε 30 διαφορετικές

AR

μεταλλάξεις (Εικόνα 3, Πίνακας 1), εκ των οποίων το 70% βρίσκονταν στην περιοχή άρθρωσης (HR) ή στο πεδίο σύνδεσης συνδετήρα (LBD), 27% οδήγησε σε μια κομμένη πρωτεΐνη AR. Μερικά AI των παραλλαγών που εμφανίζονται αρκετές μεταλλάξεις. Μόνο Q693X ήταν κοινή σε όλες τις διαφορετικές θεραπείες ορμονών. Η μετάλλαξη Q693X, καθώς και τα άλλα κωδικόνια stop πρόωρη στον Πίνακα 1, οδηγεί σε μια κολοβωμένη παραλλαγή AR έλλειψη του πεδίου σύνδεσης συνδετήρα και AF-2. Η παραλλαγή Q693X AR έχει επίσης ανιχνευθεί σε ανθρώπινους όγκους καρκίνου του προστάτη (μη δημοσιευμένα δεδομένα). Συντετμημένες παραλλαγές AR αποδείξει συστατική μεταγραφική δραστηριότητα όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [23]. Έχουν συσχετιστεί με ευνουχισμό-αντίσταση, δεδομένου ότι μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη in vitro κυτταρικές καλλιέργειες και ζωικά μοντέλα όγκων σε απουσία ανδρογόνων (Σχήμα S4). Οι περισσότερες μεταλλάξεις ήταν μυθιστόρημα.

Πλήρης υπογραμμίζει δείχνουν μεταλλάξεις βρίσκονται σε περισσότερα από ένα όγκου αντιμετωπίζονται με τον ίδιο παράγοντα. Οι μεταλλάξεις που απεικονίζεται με μπλε, πράσινο ή κόκκινο φόντο έχουν προηγουμένως περιγραφεί στην PAIS, CAIS και του προστάτη, αντίστοιχα.

Η

Το επίπεδο της πρωτεΐνης AR (κανονικοποιούνται με ακτίνη) αυξήθηκε σε όλα τα AI παραλλαγές (Σχήμα 4). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι AR μεταβολές αποτελούν βασικά γεγονότα στην υποτροπή του όγκου μετά από στέρηση ανδρογόνου, που απαιτείται για την επιβίωση του καρκίνου του προστάτη κυττάρου.

ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για την πρωτεΐνη φόρτωσης. Β) Τα ιστογράμματα αντιπροσωπεύουν την ποσοτικοποίηση του AR, Her-2 /neu και αναλογίες ρΑΚΤ /ΑΚΤ και pERK /ERK κανονικοποιημένη σε ακτίνη και η μέση του PAC120 που προέρχονται από διάφορα περάσματα (εκφρασμένη αυθαίρετες μονάδες). AR (μαύρες μπάρες) εκφράστηκε σε PAC120 και όλα AI παραλλαγές και Her-2 /neu (διακεκομμένη γκρίζες μπάρες) ήταν υπερεκφράζεται σε όλους AI παραλλαγές. Είτε p-AKT /ΑΚΤ (γκρι μπάρες με πλήρη γραμμή) ή pERK /ERK (λευκές ράβδοι) ενεργοποιήθηκαν στο AI παραλλαγές. Οι συντμήσεις που χρησιμοποιούνται για τον εντοπισμό παραλλαγές εξηγείται στο υπόμνημα του Σχήματος 2.

Η

Her-2 πρωτεΐνης /neu υπερεκφράζεται σε όλες AI παραλλαγές (

n =

17) δοκιμάστηκε σε σύγκριση με PAC120 (Σχήμα 4). Επιπλέον, η ΑΚΤ ή ERK1,2 ή και οι δύο οδοί δραστηριοποιείται στην πλειοψηφία των AI παραλλαγές, που δείχνουν ότι μια τέτοια ενεργοποίηση συνδέεται με την απόδραση σε ορμόνη στέρησης, και συμμετέχει αντισταθμιστικών μηχανισμών ενεργοποίησης AR. Ο βασικός ρόλος αυτών των οδών φωσφορυλίωσης έμμεσα αποδεικνύεται από την ισχυρή επίδραση της αναστολής τους.

επιπτώσεις του συνδυασμού Ευνουχισμός με αναστολείς της τυροσινικής κινάσης

Δεγαρελίξη σε συνδυασμό με trastuzumab σημαντικά και έχει μειώσει δραστικά το σχετικό κίνδυνο υποτροπή στο 0,17 (95% CI: 0,04 – 0,67,

p = 0,005

, δοκιμασία log-rank) (Σχήμα 5Α), και παρέτεινε το διάμεσο χρόνο για να ξεφύγουν ορμόνη 274-351 ημέρες (Πίνακας S2) έναντι ευνουχισμό μόνο με δεγαρελίξη. Όγκου υποτροπή παρατηρήθηκε μόνο σε 17% (4/24) των ζώων που έλαβαν τη θεραπεία συνδυασμού. Η τραστουζουμάμπη ως μοναδικός παράγοντας δεν είχε καμία επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου.

καμπύλες Β) την ανάπτυξη του όγκου ως μία συνάρτηση του χρόνου στην ομάδα ελέγχου (λευκή Cercle, πλήρης γραμμή) και στις ομάδες που έλαβαν everolimus 2 mg /kg τρεις φορές την εβδομάδα (λευκό σχήμα διαμαντιού, διακεκομμένη γραμμή), δεγαρελίξης 10 mg /kg σε μηνιαία βάση (λευκό τετράγωνο, πλήρης γραμμή), η τραστουζουμάμπη συν δεγαρελίξης (σταυρός, πλήρης γραμμή) ή everolimus συν δεγαρελίξης (μαύρα σε σχήμα διαμαντιού, πλήρης γραμμή).

δεγαρελίξη σε συνδυασμό με το everolimus προληφθούν πλήρως ορμόνη διαφυγής από τους 17 όγκους θεραπεία. Όπως καθυστερημένη ανάπτυξη του όγκου μονοθεραπεία everolimus και τα TGI

36 ημέρες ήταν 59% (

p = 0,001

, Mann-Whitney) (Εικόνα 5Β).

Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν μια ανώτερη επίδραση του ευνουχισμού όταν συνδυάζεται με HER-2 /neu στόχευση αντισώματα ή αναστολέας mTOR.

Συζήτηση

Πραγματοποιήσαμε μια

in vivo

πειραματική μελέτη της επίδρασης των διαφορετικών ορμονικών θεραπειών σχετικά με τον κίνδυνο διαφυγής ορμόνης. Ιδρύσαμε μια μεγάλη σειρά AI παραλλαγές για να μελετήσει την ποικιλομορφία των γενετικών και μοριακών γεγονότων που συμβαίνουν μετά την απόδρασή της ορμόνης. Χρησιμοποιήσαμε μια ορμόνη που εξαρτάται ξενομοσχεύματος ανθρώπινου προστάτη (PAC120) [19]. PAC120 προέρχεται απευθείας από μια πρωτογενή όγκο ενός ασθενούς. PAC120 έδειξε εντυπωσιακή σταθερότητα καρυότυπου, διατηρείται σταθερή αυξητική εξάρτηση [24] και η έλλειψη

AR

μεταλλάξεις, μετά από πολλαπλές διόδους [19].

Συνεχής φαρμακολογικές συλλήψεις ευνουχισμό της ανάπτυξης του όγκου, αποδράσεις συμβαίνουν στο 40% των περιπτώσεων. μονοθεραπεία με αντι-ανδρογόνο επιβραδύνεται η ανάπτυξη του όγκου. Αυτό αντικατοπτρίζει τις κλινικές παρατηρήσεις. Στο μοντέλο μας, πλήρης αποκλεισμός ανδρογόνων αυξάνει τον κίνδυνο διαφυγής ορμόνης, σε σύγκριση με τον ευνουχισμό μόνο. Φαίνεται ότι η πλήρης αποκλεισμός ανδρογόνων ασκεί μία υψηλή πίεση επί της οδού σηματοδότησης AR, που οδηγεί στην ενεργοποίηση αρκετών οδών επιβίωσης. Μεγάλες τυχαιοποιημένες μελέτες και μετα-αναλύσεις έδειξαν ότι η πλήρης αποκλεισμός δεν παρέτεινε το χρόνο μέχρι την πρόοδο στους περισσότερους ασθενείς [26]. Φάση ΙΙ και ΙΙΙ μελέτες που συγκρίνουν διαλείπουσα έναντι συνεχή ευνουχισμού στον καρκίνο του προστάτη που σχετίζεται με υψηλότερο κίνδυνο διαφυγής ορμόνης σε περίπτωση διακοπτόμενης ευνουχισμό, αλλά η συνολική επιβίωση δεν μειώθηκε μετά διαλείπουσα στέρησης ανδρογόνων σε σύγκριση με ένα συνεχές πρόγραμμα με μια καλύτερη ποιότητα ζωής και μικρότερο κόστος [27], [28]. Η διαφορά σε σχέση με τα δεδομένα μας θα μπορούσε να εξηγηθεί από την επιθετικότητα του PAC120 (Gleason 9), ενώ οι κλινικές μελέτες που περιλαμβάνονται μια μεγάλη ποικιλία των όγκων του προστάτη χαμηλού και υψηλού βαθμού. Επιπλέον, ο χρόνος που επελέγη για να επανεκκινήσετε τη θεραπεία βασίστηκε σε μια Unic παράμετρο, δηλαδή ο όγκος του όγκου, ενώ στην κλινική αρκετές παράμετροι θεωρούνται (testosteronemia, PSA). Διακοπτόμενη θεραπεία ίσως να μην είναι κατάλληλη για όλες τις περιπτώσεις καρκίνου του προστάτη.

AI των παραλλαγών που εμφανίζονται βιολογικές αλλαγές. Η ιστολογική εξέταση των όγκων κάτω από τον ευνουχισμό έδειξε πολλές μίτωση και νεκρωτικές περιοχές, γεγονός που υποδηλώνει μια ισορροπία μεταξύ της μίτωσης /κυτταρικής επιβίωσης /θανάτου και απορρίπτοντας κάθε λανθάνουσα κατάσταση των καρκινικών υπολειμμάτων. AI των παραλλαγών που εμφανίζονται μικτά μοτίβα, βλεννώδες ή /και διαφοροποίηση apocrine παρόμοια με τη γονική όγκου και κανένα διαθέτει ειδικά τροπικότητα ορμονική θεραπεία.

Ελέγξαμε ότι η βαθιά αλλαγμένη καρυότυπος του PAC120 παρέμεινε αρκετά σταθερή μέσα από τη μεταμόσχευση και το χρόνο [24 ], και δείξαμε ότι ο ευνουχισμός οδήγησε σε κύμα νέων γονιδιωματικών μεταβολών. Επιπλέον, αυτά τα απέκτησε αλλοιώσεις είναι σταθερά (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) ίσως εξηγεί γιατί ανεξαρτησία ορμόνης μη αντιστρεπτά αποκτηθεί. Παραδόξως κανένας από τους νέους αλλαγές ήταν κοινές για τις 26 AI παραλλαγές. Γενετική αστάθεια είναι γνωστό ότι συνδέεται με την πρόοδο του καρκίνου, η παρατήρηση μας προτείνει ένα τέτοιο μηχανισμό εξέλιξης [29], [30]. Στη συνέχεια, ψάξαμε για αλλαγές που αφορούν την έκφραση AR, ενίσχυση του γονιδίου ή γενετικές μεταλλάξεις.

AR

γονίδιο ενισχύσεις, εντοπίστηκαν μετά από την πλήρη αποκλεισμό των ανδρογόνων, όπως διαπιστώθηκε σε ασθενείς [31].

AR

μεταλλάξεις οι οποίες συμβάλλουν στην διαφυγή ορμόνη με την παροχή ενός μεγαλύτερου δεκτικότητα του AR σε άλλους συνδέτες [8], επηρεάζουν αρκετές AR-εξαρτώμενη διεργασίες [2], [32]. Steinkamp

et al.

Ανέφεραν ότι τα δείγματα όγκων του προστάτη ορμόνη-αφελή είχε πολύ λίγες

AR

μεταλλάξεις που υποδηλώνει ότι αυτές οι μεταλλάξεις που προσφέρονται μικρό πλεονέκτημα ανάπτυξη και στην πραγματικότητα ήταν τυχαία «επιβατών» μεταλλάξεις [33]. Η δοκιμασία που χρησιμοποιείται ειδικά επιλέγει για

AR

μεταλλάξεις που επηρεάζουν τη λειτουργία του υποδοχέα [22]. Παρατηρήσαμε μια τεράστια ποικιλία των θεραπειών που προκαλείται

AR

μεταλλάξεις στέρησης ανδρογόνων, αν και πολύ λίγοι ήταν κοινή σε όλες τις παραλλαγές AI και η πλειοψηφία δεν περιγράφεται [34]. Συνολικά, η Διεθνής Αμνηστία παραλλαγές που απεικονίζονται στην υποτιθέμενη ποικιλομορφίας των βιολογικών γεγονότων που συνδέονται με την απόδραση των ορμονών και τόνισε ότι ένα AR-εξαρτώμενη ελέγχου παραμένει κεντρική σε καρκίνους του προστάτη. Novel θεραπευτικές προσεγγίσεις που στοχεύουν τα μονοπάτια AR με αναστολή είτε το 17-20 λυάση ή την μετατόπιση του υποδοχέα προς τον πυρήνα υπογράμμισαν αυτό το βασικό σημείο [1]. τελευταία σειρά μας των δεδομένων είναι μια άλλη εναλλακτική λύση του αποκλεισμού οδών AR που θα μπορούσαν να αντιμετωπιστούν σε κλινικές.

Εξετάσαμε Her-2 /neu και p-ΑΚΤ έκφραση στο PAC120 AI παραλλαγές για να διαπιστωθεί αν μονοπάτια κινάσης και φωσφορυλίωση ενεπλάκησαν στη διαφυγή ορμόνη, όπως φαίνεται από άλλους [15], [18]. Σε κλινικά δείγματα, έκφραση /neu Her-2 ανυψώθηκε σε όγκους AI [14], [35] και αναφέρθηκε ως ένα πρώιμο συμβάν στην ανδρογόνων εξάρτηση με διακόπτη ανεξαρτησίας [36]. Ο προτεινόμενος μηχανισμός για το ρόλο του Her-2 /neu σε διαφυγή ορμόνη είναι ότι αυτή η κινάση ενεργοποιείται φωσφορυλίωση AR (μέσω της οδού ΜΑΡΚ ή μονοπάτι ΑΚΤ) [18], [37], η οποία με τη σειρά της διατηρεί την ακεραιότητα AR και έτσι, η λειτουργία του σε απουσία της τεστοστερόνης. Lin HK et al., Έδειξαν ότι η ΡΙ (3) Κ /Akt, αλλά όχι ΡΙ (3) Κ /p70S6K μονοπάτι σηματοδότησης μπορεί να ρυθμίζουν τη μετενεργοποίηση AR. Με τη χρήση του Herceptin, θα μπλοκάρουν την ΡΙ (3) Κ μονοπάτι προς τα πάνω το οποίο θα μπορούσε να εξηγήσει τη μείωση της διαφυγής του όγκου [38].

Άλλες μεταβολές μπορεί να συμβάλει σε ένα συνδετήρα-ανεξάρτητη ενεργοποίηση του AR. Απώλεια της PTEN, η μετάλλαξη PI3K, ΑΚΤ1 και ενίσχυση ΑΚΤ2 μπορεί να ενεργοποιήσει την κινάση ΑΚΤ. Αύξηση του φωσφο-ΑΚΤ επίπεδα ανιχνεύτηκε σε bicatulamide επεξεργασμένου προστάτη [39]. Σε AI παραλλαγές μας, Her-2 /neu και p-AKT έκφραση /ενεργοποίηση αυξήθηκε και η προληπτική δράση της trastuzumab- ή everolimus- δεγαρελίξης συνδυασμό θεραπειών για τη διαφυγή των ορμονών δείχνει τον καίριο ρόλο τους. Οι /ΑΚΤ και mTOR μονοπάτια Her-2 είναι στόχοι προσβάσιμα σε νέους αναστολείς? trastuzumab απέδειξε την αποτελεσματικότητά της στη HER-2 /neu-ενισχυμένο καρκίνου του μαστού [40]. Wang et al αποδειχθεί σε προστάτη καρκινική κυτταρική γραμμή ότι η αναστολή των οδών mTORC1 και AR με συνδυασμό ραπαμυκίνης και bicatulamide οδήγησε σε απόπτωση και θα μπορούσε να είναι μια θεραπευτική αξία στη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη [41]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε την LnCaP και σε μικρή πείραμα διάρκειας το όφελος του αποκλεισμού της σηματοδότησης AR σε συνδυασμό με τις οδούς mTOR [42]. Αναφέρουμε ότι αυτοί οι παράγοντες, σε συνδυασμό με ευνουχισμό σημαντικά μειωμένη ανδρογόνο ανεξαρτησία, η συν-χορήγηση να απαιτείται. Επιπλέον, η ισχυρή υποστήριξη προέρχονται από μια μελέτη όπου το everolimus σε συνδυασμό με έναν αναστολέα αρωματάσης βελτιωμένη επιβίωση χωρίς εξέλιξη σε ασθενείς με ορμονικούς υποδοχείς-θετικό προχωρημένο καρκίνο του μαστού είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία με μη στεροειδή αναστολείς αρωματάσης [43].

Τα στοιχεία μας επιβεβαιώνουν ότι η AR παραμένει ένας κεντρικός παράγοντας στην επιβίωση των κυττάρων του προστάτη, καθώς και τα στοιχεία μας δείχνουν ότι υποδοχέα ανδρογόνων μπορεί να ενεργοποιηθεί από εναλλακτικές οδούς με αποτέλεσμα ανδρογόνων ανεξαρτησία. Τέλος, δείξαμε ότι ο συνδυασμός θεραπείας του ευνουχισμού με στοχευμένη μοριακή θεραπεία μείωσε σημαντικά τον κίνδυνο διαφυγής ορμόνης. Η μελέτη αυτή θα μπορούσε να έχει μεγάλη επίπτωση στην αντιμετώπιση των ανδρογόνων που εξαρτώνται από τον καρκίνο του προστάτη και διπλή αναστολή αξίζει να διερευνηθεί σε κλινικό περιβάλλον.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Σχηματική αναπαράσταση των

in vivo

θεραπευτικά σχήματα.

doi: 10.1371 /journal.pone.0042252.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

σχετική έκφραση του mRNA του υποδοχέα ανδρογόνου (AR) (μαύρες ράβδοι) και εντός του όγκου του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) (λευκές ράβδοι) σε ανδρογόνα ανεξάρτητο (AI) παραλλαγές. * Υποδηλώνει παραλλαγές με ενισχυμένο

AR

αριθμό αντιγράφων του γονιδίου. Οι συντμήσεις που χρησιμοποιούνται για τον εντοπισμό παραλλαγές εξηγείται στο υπόμνημα του Σχήματος 2.

doi: 10.1371 /journal.pone.0042252.s002

(ΔΕΘ)

Εικόνα S3.

προφίλ απόκρισης ορμόνης στο Aide-α4 ευνουχισμό ανθεκτικά όγκου. Η ανταπόκριση του AR στην Aide-α4 ευνουχισμός ανθεκτικά όγκου εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας την λειτουργική δοκιμασία που βασίζεται σε ζύμη και σε σύγκριση με εκείνη του AR άγριου τύπου, όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Ιστογράμματα αντιπροσωπεύουν παρεκκλίνουσα απαντήσεις που ελήφθησαν με 100 nM β-οιστραδιόλη (Ε2) και 1 οξικό μΜ κυπροτερόνη (CPA), σε σύγκριση με το AR άγριου τύπου

doi:. 10.1371 /journal.pone.0042252.s003

(ΔΕΘ )

Εικόνα S4.

συστατική δραστικότητα της παραλλαγής του υποδοχέα ανδρογόνων Q693X. Η ανοησία μετάλλαξη Q693X οδηγεί σε μια κολοβωμένη παραλλαγή υποδοχέα ανδρογόνων, η οποία διαγράφεται από το σύνολο του πεδίου σύνδεσης συνδετήρα και AF-2.