Αφηρημένο

λειχήνες παράγουν διάφορες μοναδικές χημικές ουσίες που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για φαρμακευτικούς σκοπούς. Για τη διαλογή νέων λειχήνες δευτερογενών μεταβολιτών δείχνουν ανασταλτική δράση κατά του καρκίνου του πνεύμονα κινητικότητα, ελέγξαμε εκχυλίσματα ακετόνης των 13 δειγμάτων λειχήνες συλλέγονται στη Χιλή. Physciosporin, απομονώθηκε από το

Pseudocyphellaria coriacea

(Hook f & amp?. Taylor) D.J. Galloway & amp? Π James, πιστοποιήθηκε ως μια αποτελεσματική ένωση και έδειξαν σημαντική ανασταλτική δραστικότητα στη μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες έναντι ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα. θεραπεία Physciosporin μειωμένη και τα δύο επίπεδα πρωτεΐνης και του mRNA του Ν-καντερίνης με ταυτόχρονη μείωση των επιπέδων των δεικτών μετάβαση επιθηλίου-μεσεγχύματος, όπως σαλιγκαριών και συστροφή. Physciosporin κατέστειλε επίσης KITENIN (KAI1 C-τερματικό αλληλεπιδρούν τετρασπανίνη) μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1 τόσο απουσία και παρουσία της διέγερσης του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα. Ποσοτική ανάλυση σε πραγματικό χρόνο PCR έδειξε ότι η έκφραση του γονιδίου καταστολής της μεταστάσεως, KAI1, αυξήθηκε ενώ εκείνη του γονιδίου ενισχυτή μετάσταση, KITENIN, ήταν δραματικά μειωμένα κατά physciosporin. Ιδιαίτερα, η δράση του 3′-αμετάφραστη περιοχή του KITENIN μειώθηκε κατά physciosporin. Επιπλέον, Cdc42 και Rac1 δραστηριότητες μειώθηκαν κατά physciosporin. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η λειχήνες δευτερογενών μεταβολιτών, physciosporin, αναστέλλει τον καρκίνο του πνεύμονα κινητικότητας μέσω καινοτόμων μηχανισμών δράσης

Παράθεση:. Yang Υ, Πάρκο SY, Nguyen TT, Yu YH, Nguyen τηλεόραση, Sun EG, κ.ά. . (2015) λειχήνα δευτερογενής μεταβολίτης, Physciosporin, αναστέλλει τον Καρκίνο του Πνεύμονα κυτταρική κινητικότητα. PLoS ONE 10 (9): e0137889. doi: 10.1371 /journal.pone.0137889

Επιμέλεια: Zhiqian Zhang, το Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο & amp? Ινστιτούτο, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 14 Ιουν, 2015? Αποδεκτές: 24 του Αύγ 2015? Δημοσιεύθηκε: 15 Σεπ 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Ερευνών της Κορέας (NRF-2013R1A1A2004677, MRC-2011-0030132) και από την Κορέα Εθνικό Πρόγραμμα Ερευνητικό Κέντρο πόρων ( NRF-2014M3A9B8002115). Αυτή η μελέτη έλαβε επίσης την υποστήριξη από την επιχορήγηση της έρευνας που χρηματοδοτείται από το Ερευνητικό Κέντρο Sunchon Φυσικών Ιατρικής. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Συντομογραφίες : DMSO, διμεθυλοσουλφοξείδιο? EGF, επιδερμικού αυξητικού παράγοντα? HPLC, υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία? KITENIN, KAI1 C-τερματικό τετρασπανίνη Αλληλεπίδραση? NMR, πυρηνικός μαγνητικός συντονισμός? PBD, ρ21 περιοχή σύνδεσης? TLC, χρωματογραφία λεπτής στιβάδας με

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου και η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με τους ανθρώπους σε όλο τον κόσμο [1, 2]. Υπήρχαν περίπου 1,8 εκατομμύρια νέες περιπτώσεις καρκίνου του πνεύμονα διαγιγνώσκονται το 2012, αντιπροσωπεύοντας το 12,9% του συνόλου των περιπτώσεων καρκίνου [1, 2]. Λόγω της έλλειψης αποτελεσματικής θεραπείας για προχωρημένη νόσο, η πρόγνωση του καρκίνου του πνεύμονα παραμένει ανεπαρκής, με λιγότερο από το 15% επιβιώνουν πέντε χρόνια μετά τη διάγνωση [3]. Όταν ο καρκίνος του πνεύμονα έχει διαγνωστεί σε παρουσίαση με συμπτώματα, που μεταφέρει ένα εξαιρετικά φτωχή πρόγνωση, με συνολική επιβίωση 5 ετών 16% στις ΗΠΑ και λιγότερο από 10% στο Ηνωμένο Βασίλειο [4]. Στον καρκίνο του πνεύμονα, μετάσταση είναι η κύρια αιτία του θανάτου, και διαλεύκανση του μηχανισμού της εξέλιξης του όγκου και της μετάστασης είναι έτσι έχουν μεγάλη σημασία [5]. Στα αρχικά στάδια της τοπικής εισβολής, τα μονοπάτια σηματοδότησης που ελέγχουν τη δυναμική κυτταροσκελετική των καρκινικών κυττάρων, ο κύκλος εργασιών της μήτρας-κυττάρων και το κύτταρο-κύτταρο κόμβων ενεργοποιήθηκαν [6]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη νέων χημικών παραγόντων που αναστέλλουν την μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολή στοχεύοντας το παραπάνω σήμα απαιτείται θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου.

λειχήνες παράγουν ποικίλες δευτερογενείς μεταβολίτες που δείχνουν μια ποικιλία βιολογικών δραστηριοτήτων, συμπεριλαμβανομένης αντικαρκινική δράση [7]. Μέχρι σήμερα, έχουν σχεδόν χίλια δευτερογενών μεταβολιτών λειχήνες έχουν ανακαλυφθεί και μερικά από αυτά τα μοναδικά μεταβολιτών λειχήνα είναι αποτελεσματικά έναντι διαφόρων

in vitro

μοντέλα καρκίνου του [8]. Ωστόσο, αν και λειχήνες αποτελούν πηγή για τη διαλογή για αντικαρκινικές δραστικές ενώσεις, μόνο ένας μικρός αριθμός ενώσεων έχουν δοκιμαστεί [9]. Συνεπώς, η παρούσα μελέτη εξέτασε την ανασταλτική δράση της 13ης Χιλής ειδών λειχήνα κατά τη μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα και διερευνήθηκε περαιτέρω τα πιθανά μοριακών μηχανισμών στους οποίους αντι-μεταστατική τους δράση για τον εντοπισμό πιθανών νέα αντι-μετάσταση.

Υλικά και Μέθοδοι

Παρασκευή εκχυλισμάτων λειχήνες

thalli των λειχήνες συλλέχθηκαν από τη Χιλή, τον Ιανουάριο του 2009 και του 2012 κατά τη διάρκεια εκδρομές στο Εθνικό Πάρκο Torres Del Paine, Παταγονία, οργανωμένη από τον Δρ Pereira στο Πανεπιστήμιο Talca, Talca, Χιλή. Η άδεια για τη συλλογή δειγμάτων λειχήνες από τη θέση εκδόθηκε από τη Διοίκηση της Εθνικής Δασικής Corporation (CONAF) της Punta Arenas και τη διοίκηση του Εθνικού Πάρκου Torres del Paine, περιοχή Magallanes και της Χιλής της Ανταρκτικής, η οποία αποτελεί μέρος του Εθνικού Συστήματος Προστατευόμενων άγρια ​​περιοχές της πολιτείας της Χιλής. Οι μελέτες πεδίο δεν συνεπάγεται καμία απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη. Τα αντίγραφα κατατέθηκαν στην κορεατική λειχήνες και Allied Bioresource Center (KOLABIC) στην κορεατική λειχήνα Research Institute (KoLRI), Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Sunchon, την Κορέα.

χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (TLC) ανάλυση του υλικού λειχήνες

λειχήνα θάλεια εμβαπτίστηκαν σε 1 κ.εκ. ακετόνης για 5 λεπτά σε 1.5 mL σωλήνες EP, και το συμπυκνωμένο διάλυμα κηλιδώθηκε επί πυριτικής πηκτής προ-επικαλυμμένες πλάκες 60 F254 (Merck Millipore, Darmstadt, Γερμανία) χρησιμοποιώντας μία microcap αρκετές φορές. Διαλύτης Α [Τολουόλιο: Διοξίνη: οξικό οξύ 180: 45: 5 (ν /ν /ν)], που περιγράφεται στο βελτιωμένη τυποποιημένη μέθοδος Culberson [10], χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη. Η πλάκα TLC στίγματα με δείγματα φορτώθηκε σε ένα δίδυμο θάλαμο σκάφης προ-κορεσμένη με σύστημα διαλύτη Α και απομακρύνθηκε από τον θάλαμο όταν το μέτωπο του διαλύτη φθάσει 14 εκατοστά από το αρχικό βασική γραμμή. Τα αποτελέσματα έγιναν ορατά με την εξέταση και τη σήμανση στο φως της ημέρας (για χρωστικές ουσίες) και κάτω από υπεριώδες στα 254 και 350 nm. Μετά από αυτό, οι πλάκες ψεκάστηκαν με 10% υδατικό θειικό οξύ και θερμάνθηκε στους 110 ° C για να εξασφαλιστεί η πλήρης οπτικοποίηση. Μετά απανθράκωση, τα συγκεκριμένα χρώματα των ουσιών, τόσο στο φως της ημέρας και κάτω από υπεριώδες (350 nm), σημειώθηκαν.

Δύο είδη λειχήνων

Lethariella cladonioides (Nyl

.

) Krog

(Atranorin) και

Usnea longissimi

(usnic οξύ) χρησιμοποιήθηκαν ως πρότυπο ελέγχου. Με βάση την τυποποιημένη μέθοδο [10, 11], σε σχέση R

τιμή f είναι αποφασισμένη να βοηθήσει στον εντοπισμό κάθε σημείο [12].

Διαχωρισμός και ταυτοποίηση των physciosporin

Pseudocyphellaria coriacea

(CL090002) εκχύλισμα διαχωρίστηκε με TLC όπως περιγράφεται παραπάνω. Το σημείο προσδιορίζεται ως physciosporin αποξέεται και εκλούσθηκε με ακετόνη. Το υπερκείμενο ξηραίνεται και ζυγίζεται μετά από φυγοκέντρηση. υγρή χρωματογραφία (HPLC) δοκιμασία υψηλής απόδοσης διεξήχθη για να επιβεβαιωθεί απλή κορυφή εντός του καθαρισμένο δείγμα, και, στη συνέχεια, τη δομή του physciosporin επιβεβαιώθηκε με πυρηνικό μαγνητικό συντονισμό (NMR) ανάλυση (Σχήματα Α και Β στο S1 File).

Κυτταροκαλλιέργεια

Τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα Α549 συμπεριλαμβανομένων, H1650 και H1975 χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 1% διάλυμα πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη υπό υγροποιημένη 5% CO

2 ατμόσφαιρα στους 37 ° C σε έναν επωαστήρα.

πληγών επούλωσης δοκιμασίας

Α549 κύτταρα επιστρώθηκαν σε πυκνότητα 2.5 ~ 3 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 6 φρεατίων καλλιέργειας ιστού (Corning, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα για συρροή. κύτταρα μονόφυλλο ξύστηκαν με ένα στείρο ρύγχος πιπέτας για τη δημιουργία ενός τραύματος. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν δύο φορές με RPMI 1640 χωρίς ορό για να απομακρυνθεί επιπλέοντα κύτταρα και επωάστηκαν σε μέσο RPMI1640 καλλιέργειας συμπληρωμένο με 2% FBS με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin. Οι φωτογραφίες των κυττάρων πάρθηκαν στα 0, 24, 48, και 72 ώρες μετά τον τραυματισμό για να μετρηθεί το πλάτος του τραύματος. Για κάθε δείγμα, λήφθηκε ένας μέσος όρος πέντε δοκιμασίες τραύματος για να καθορίσει το μέσο ποσοστό της μετανάστευσης. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές.

δοκιμασία Invasion

δοκιμασίες Εισβολή διεξήχθησαν σε θαλάμους Boyden (Corning, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Τα φίλτρα πολυανθρακικού (μέγεθος πόρων 8 μm, Corning) προ-επικαλυμμένες με 1% ζελατίνη χρησιμοποιήθηκαν για προσδιορισμούς εισβολής. Τα κύτταρα (2 χ 10

6) σε 120 μι μέσου (RPMI 1640 που περιέχει 0.2% BSA διαλυμένα σε PBS) με ή χωρίς 5 μg /mL ακατέργαστα εκχυλίσματα λειχήνα ή physciosporin σπάρθηκαν στον άνω θάλαμο. Στη συνέχεια, 400 μι μέσου με 10 μg /mL ινωδονεκτίνης προστέθηκε στον κάτω θάλαμο για να χρησιμεύσει ως χημειοτακτικό παράγοντα. Μετά από 24 ώρες επώασης, τα κύτταρα στον άνω θάλαμο μονιμοποιήθηκαν με κιτ Diff Quik (Sysmex). Στη συνέχεια, τα κύτταρα που συνδέονται στον ανώτερο θάλαμο μηχανικά απομακρύνθηκαν με βαμβάκι. Τα κύτταρα προσκολλημένο στην κάτω πλευρά του φίλτρου χρωματίστηκαν και μετρήθηκαν κάτω από το μικροσκόπιο σε όρθια θέση (5 πεδία /θάλαμο). Κάθε δοκιμασία επαναλήφθηκε εισβολή σε τρία ανεξάρτητα πειράματα.

κηλίδωση Western

Cells κατεργασία με 5 μg /mL του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin για 24 ώρες πλύθηκαν δύο φορές με παγωμένο PBS και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης [13]. Τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology (Ν-cadherin, α-τουμπουλίνης) και BD Biosciences (Ε-καδερίνης). Αντισώματα ανιχνεύτηκαν με υπεροξειδάση αρμορακίας δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο (Thermo) χρησιμοποιώντας κιτ Immobilon Western χημειοφωταύγειας HRP Substrate (Millipore) και η φωταύγεια απεικόνισης (Image Quant LAS 4000 mini). Συγκροτήματα μετρήθηκαν με Multi-Gauge 3.0 και σχετικής πυκνότητας τους υπολογίζεται με βάση την πυκνότητα των α-τουμπουλίνης ζώνες σε κάθε δείγμα. Οι τιμές εκφράστηκαν ως αυθαίρετες πυκνομετρικές μονάδες που αντιστοιχούν σε ένταση του σήματος.

Ποσοτική RT-PCR

Η ποσοτική RT-PCR (qRT-PCR) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14]. Εν συντομία, ολικό RNA απομονώθηκε από ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα χρησιμοποιώντας RNAiso Plus (Takara, Otsu, Shiga Shiga 520 έως 2193, Japan) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA από κάθε ομάδα κατεργασμένων κυττάρων μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ένα Μ-ΜΕν αντίστροφης μεταγραφάσης kit (Invitrogen, Carlsbad, USA) και SYBR πράσινο (Enzynomics, Σεούλ, Κορέα). Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για πραγματικού χρόνου PCR ήταν σαλιγκάρι (προς τα εμπρός) 5′-tcccgggcaatttaacaatg-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-tgggagacacatcggtcga-3′? Twist (προς τα εμπρός) 5’-cgggagtccgcagtctta-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-tgaatcttgctcagcttgtc-3′? Ν-cadherin (προς τα εμπρός) 5’-ctcctatgagtggaacaggaacg-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-ttggatcaatgtcataatcaagtgctgta-3′? KAI1 (προς τα εμπρός) 5’-gctcatgggcttgggct-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-gagctcagtcacgatgccgc-3′? KITENIN (προς τα εμπρός) 5’-cggaataaagacggcagagg-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-tgctccgaggtgcctgtgat-3′? GAPDH (προς τα εμπρός) 5’-atcaccatcttccaggagcga-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-agttgtcatggatgaccttggc-3’. αντιδράσεις και αναλύσεις qRT-PCR πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση CFX (Bio-Rad, Hercules, USA).

Reporter δοκιμασία

Για την δοκιμασία ρεπόρτερ ΑΡ-1, τα κύτταρα ΗΕΚ293Τ επιμολύνθηκαν με πλασμίδιο έκφρασης KITENIN και ΑΡ1 πλασμίδιο αναφοράς. Μετά από 12 ώρες διαμόλυνσης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5 μg /mL των εκχυλισμάτων ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin για 48 ώρες με ή χωρίς EGF και στη συνέχεια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας διπλής-Luciferase® σύστημα προσδιορισμού ανταποκριτή (Promega, Madison, WI, USA). Η Renilla πλασμίδιο αναφοράς λουσιφεράσης (PRL-ΤΚ) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης. Η δραστηριότητα για TOPFLASH ρεπόρτερ, NF-κΒ και STAT ρεπόρτερ δοκιμάστηκαν επίσης στη μελέτη μας.

Για την ανίχνευση KITENIN ρεπόρτερ προαγωγό, προαγωγό ανθρώπινη KITENIN (-2344 έως + 536) ενισχύθηκε με PCR από γονιδιωματικό DNA του ΗΕΚ293Τ κύτταρα χρησιμοποιώντας εκκινητές σχεδιασμένους από την γονιδιωματική αλληλουχία του τόπου KITENIN (1p13.1). Τα προϊόντα PCR υποβλήθηκαν σε πέψη με

Κρη

I /

Bgl

II και κλωνοποιήθηκε εντός του πλασμιδίου pGL3basic (Promega, Madison, WI, USA) ανοδικά του γονιδίου αναφοράς της λουσιφεράσης. Η κατασκευή επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση. Η KITENIN 3′-untranlated περιοχή (3′-UTR) δοκιμασία πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15]. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν, και τουλάχιστον τρία αποτελέσματα από ανεξάρτητα πειράματα συμπεριλήφθηκαν σε μια ανάλυση. Διπλώστε αλλαγές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τιμές κανονικοποιούνται με τη δραστηριότητα της λουσιφεράσης της Renilla.

Affinity-καθίζηση των κυτταρικών GTPases

Οι κυτταρικές δραστηριότητες Rac1 και Cdc42 προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας GST-RBD /PBD όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16] . Εν συντομία, τα κύτταρα λύθηκαν σε ρυθμιστικό λύσης. Τα προϊόντα λύσης επωάστηκαν με σφαιρίδια GST-RBD /PBD σε RT για 1 ώρα. Τα σφαιρίδια στη συνέχεια πλύθηκαν τέσσερις φορές με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης. Οι δεσμευμένες πρωτεΐνες Rac1 και Cdc42 ανιχνεύθηκαν με ανοσοκηλίδωση χρησιμοποιώντας ένα μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι Rac1 (Millipore 05-389) και Cdc42 (Santa Cruz SC-87). Η σχετική δραστικότητα εκάστου ΟΤΡάσης προσδιορίστηκε με ποσοτικοποίηση κάθε ζώνη του GTP-δεσμευμένη ΟΤΡάσης και το συνολικό ποσό της ΟΤΡάσης χρησιμοποιώντας Multi-Gauge 3.0, και οι τιμές των ΟΤΡ-δεσμευμένη ζώνες κανονικοποιήθηκαν με εκείνη του συνολικού ποσού. Όλα τα αποτελέσματα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τρεις διαφορετικές εκθέσεις από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Αποτελέσματα

εκχυλίσματα ακετόνη λειχήνες συλλέγονται στη Χιλή αναστέλλουν την κινητικότητα των κυττάρων Α549

εισβολή και το παιχνίδι μετανάστευση κρίσιμο ρόλο στην μετάσταση των καρκινικών κυττάρων. Για να βρείτε μια ανασταλτική ουσία από λειχήνα δευτερογενών μεταβολιτών, επούλωσης τραύματος ανιχνεύσεις πραγματοποιήθηκαν σε Α549 ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα ως αρχική διαλογή για τα εκχυλίσματα ακετόνης 13 Χιλής λειχήνες (Πίνακας 1) [17-20]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α,

Rhizoplaca melanophthalma

,

Hypotrachyna sinuosa

,

Pseudocyphellaria coriacea

,

Pseudocyphellaria glabra

και

Nephroma sp

. ανέστειλε τη μετανάστευση των κυττάρων Α549 σε συγκέντρωση 5 μg /mL. Η συγκέντρωση αυτή χρησιμοποιήθηκε ως δεν παρατηρήθηκε κυτταροτοξικότητα σε αυτή τη συγκέντρωση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Οι αποστάσεις μεταξύ των άκρων των πληγών για κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με τις πέντε εκχυλίσματα λειχήνα ήταν ευρύτερες από εκείνες για τα κύτταρα DMSO-αγωγή (Σχήμα 1Β).

Η

(Α) Ποσοτική ανάλυση προσδιορισμών μετανάστευση κυττάρων Α549 αγωγή με 5 μg /mL των εκχυλισμάτων ακετόνης του

Pseudocyphellaria glabra

,

Pseudocyphellaria coriacea

,

Nephroma

sp.,

Physcia

sp.,

Flavoparmelia caperata

,

Hypotrachyna sinuosa

,

Rhizoplaca melanophthalma

,

Rhizoplaca melanophthalma

,

Pseudocyphellaria argyracea

,

Pseudocyphellaria verrucosa

,

Xanthoparmelia

sp.,

Protousnea sp

. και

Xanthoparmelia

sp .. (Β) Εκπρόσωπος εικόνες των δοκιμασιών μετανάστευσης των κυττάρων Α549 που έλαβαν θεραπεία με τα εκχυλίσματα του

R

.

melanophthalma

,

Η

.

sinuosa

,

P

.

coriacea

,

P

.

glabra

και

Nephroma

sp. (C-D) δοκιμασίες Εισβολή των Α549 κυττάρων σε επεξεργασία με 5 μg /mL των εκχυλισμάτων ακετόνης του

R

.

melanophthalma

,

Η

.

sinuosa

,

P

.

coriacea

,

P

.

glabra και Nephroma sp

. (C) και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων σε κάθε κατεργασία (D). Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). *** P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με τα κύτταρα Α549 DMSO-θεραπεία

Η

Για να ελέγξετε περαιτέρω κατά πόσον οι παραπάνω αποσπάσματα λειχήνες είχε ανασταλτική δράση έναντι της εισβολής των κυττάρων Α549, αναλύσεις εισβολή πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ζελατίνης επικαλυμμένο δικύκλων και επιμελητήρια. Όπως φαίνεται στο Σχ 1Γ, τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με εκχυλίσματα ακετόνης των πέντε λειχήνες έδειξε λιγότερους αριθμούς εισέβαλαν κυττάρων σε σύγκριση με τον έλεγχο DMSO-θεραπεία. Ποσοτική ανάλυση των στοιχείων αποκάλυψε ότι οι διαφορές ήταν σημαντικές (Σχήμα 1 D). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα εκχυλίσματα ακετόνης του

R

.

melanophthalma

,

Η

.

sinuosa

,

P

.

coriacea

,

P

.

glabra

και

Nephroma sp

. παρουσιάζουν ανασταλτική δράση έναντι Α549 κυτταρική κινητικότητα.

Physciosporin ταυτοποιήθηκε ως ενεργό λειχήνες δευτερογενής μεταβολίτης από

P

.

coriacea

στην αναστολή της κινητικότητας των κυττάρων του καρκίνου του πνεύμονα

Για να διερευνηθεί η κύρια ένωση των εν λόγω πέντε υποψήφιες λειχήνες, πέντε εκχυλίσματα λειχήνα ακετόνη μεμονωμένα αναλύθηκαν με TLC (σχήμα 2Α). Με βάση την σχετική R

f αξιών [12],

R

.

melanophthalma

,

Η

.

sinuosa

,

και Nephroma sp

. μοιράζονται τον ίδιο κύριο συστατικό, usnic οξύ (spot α, Σχήμα 2Α), ενώ

P

.

glabra

και

P

.

coriacea

έχουν διακριτά κύριες ενώσεις (σημείο γ, Σχήμα 2Α). Όπως usnic οξύ είναι το πιο εκτεταμένα μελετηθεί μεταβολίτης λειχήνα για αντικαρκινική δράση, επιλέξαμε «σημείο c ‘για περαιτέρω μελέτη. «Spot γ ‘ήταν ευδιάκριτη παρατηρήθηκε εντός

P

.

glabra

και

P

.

coriacea

μεταξύ των άλλων

Pseudocyphellaria

γένους που κατέχει tenuiorin (spot δ) και άλλοι άγνωστοι μεταβολίτες ως η κύρια ένωση (αριστερό πάνελ, Σχήμα 2Β). Ως «σημείο γ ‘στην

P

.

glabra

και

P

.

coriacea

μοιράζονται την ίδια TLC R

τιμή f με physciosporin στο

P

.

granulata

και ήταν ωχρό ή σκούρο γκρι στο φως της ημέρας και έγινε μαύρο και πυκνότερα κάτω από υπεριώδη ακτινοβολία (αριστερά και δεξιά πάνελ, Σχήμα 2Β), εντοπίσαμε «σημείο γ ‘ως physciosporin [21-23].

P

.

faveolata

και

P

.

valdiviana

επίσης κατέχουν physciosporin ως κύρια ένωση τους (δεξί πάνελ, Σχήμα 2Β). Η physciosporin χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη αυτή απομονώθηκε από

P

.

coriacea

και τα ποσά των άλλων λειχήνες physciosporin που περιέχουν περιορισμένες. Η καθαρότητα και η δομή του physciosporin επιβεβαιώθηκε με ανάλυση HPLC και NMR (Σχ 2C? S1 File)

(ΑΒ) Χρωματογραφία Λεπτής Στοιβάδας (TLC) χρησιμοποιώντας ανάλυση (τολουόλιο:. Διοξίνη: οξικό οξύ = 180: 45: 5 , v) σύστημα ν /ν /διαλύτης για εκχυλίσματα λειχήνα που έχει ανασταλτική δραστικότητα σε Α549 κυτταρική κινητικότητα (Α), οι λειχήνες σε

Pseudocyphellaria

γένος (Β). «A» υποδηλώνει την τοποθεσία του τόπου για usnic οξύ? «Β», για atranorin? «Γ», για physciosporin? «Δ» για tenuiorin. είδος λειχήνας

L

.

cladonioides

και

U

.

longissimi

χρησιμοποιήθηκαν ως πρότυπο ελέγχου για atranorin και usnic οξύ, αντίστοιχα. (C) Χημική δομή της physciosporin. (D-Ε) δοκιμασία μετανάστευση κυττάρων Α549 σε επεξεργασία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή 5 μg /mL physciosporin (D), και ποσοτική ανάλυση του μήκους του τραύματος (Ε). (F-G) δοκιμασίες Εισβολή των Α549 κυττάρων σε επεξεργασία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin (F), και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμούς κυττάρων σε κάθε αγωγή (G). Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). *** P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με τα κύτταρα Α549 DMSO-θεραπεία

Η

Για να ελέγξετε αν physciosporin είναι η αναστολή της κινητικότητας των κυττάρων Α549 δραστική ένωση, physciosporin δοκιμάστηκε στην επούλωση των πληγών δοκιμασίες και δοκιμασίες εισβολής. Σε σύγκριση με το εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

, physciosporin έδειξε παρόμοια ανασταλτική δράση κατά της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων Α549 (Σχήμα 2D-2G). Ειδικότερα, physciosporin ανέστειλε την εισβολή των κυττάρων Α549 με δόση-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 2F και 2G). Είναι ενδιαφέρον ότι η αναστολή της καθαρισμένης ένωσης ήταν υψηλότερη από εκείνη των ακατέργαστων εκχυλισμάτων στη δοκιμασία εισβολή αλλά ελαφρώς μικρότερη στη δοκιμασία μετανάστευσης (Εικ 2Ε και 2G). Ανασταλτική δράση του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriaea

και physciosporin επί πνεύμονα κινητικότητα καρκινικών κυττάρων παρατηρήθηκε επίσης σε H1650, H1975 κύτταρα (Σχήμα 3). Η βιωσιμότητα των κυττάρων δεν μετεβλήθη στη δεδομένη συγκέντρωση physciosporin (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Πάνω απ ‘όλα, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι physciosporin είναι ένας ενεργός λειχήνες δευτερογενής μεταβολίτης από

P

.

coriacea

στην αναστολή του καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικής κινητικότητας.

(ΑΒ) δοκιμασίες Εισβολή H1650 και H1975 καρκινικά κύτταρα πνεύμονα που έλαβαν θεραπεία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή 5 μg /mL physciosporin (Α), και ποσοτική ανάλυση των εισέβαλαν αριθμός κυττάρων σε κάθε θεραπεία (Β). Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). *** P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με τα κύτταρα Α549 DMSO-θεραπεία

Η

εκχύλισμα ακετόνης

P

.

coriacea

και physciosporin μειώθηκε το επίπεδο των επιθηλιακών-μεσεγχυματικών δείκτη μετάβαση

Για να διερευνήσουν τον μηχανισμό δράσης για την ανασταλτική δράση της physciosporin κατά του καρκίνου του πνεύμονα κινητικότητα, τις επιδράσεις του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

και physciosporin εξετάστηκαν σε αρκετές οδούς σηματοδότησης. Πρώτον, οι αλλαγές στα επίπεδα των επιθηλιακών-μεσεγχυματικών (ΕΜΤ) δείκτη μετρήθηκαν σε κατεργασμένα κύτταρα (Σχήμα 4). Στη μελέτη μας, μειώνει την έκφραση του Ν-cadherin ήταν εμφανής σε κύτταρα Α549 που έλαβαν θεραπεία με εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin τόσο την πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA (Σχήμα 4Β και 4C), ενώ εκείνα του Ε-καδερίνης παρέμεινε οριακός (Σχ 4Α και δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα για το Ε-καδερίνης mRNA). Επιπλέον, οι εκφράσεις των σαλιγκαριών και Twist ήταν δοσοεξαρτώμενο τρόπο μειώθηκε κατά εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin θεραπείας (Σχήμα 4C). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι το εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

και physciosporin έχουν ανασταλτική δραστικότητα έναντι του πνεύμονα κινητικότητα καρκινικών κυττάρων εν μέρει μέσω της αναστολής της ΕΜΤ.

(ΑΒ) ανάλυση κηλίδας Western Ε-καδερίνης (Α) και Ν-καδερίνης (Β) σε κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με 5 μg /mL των εκχυλισμάτων ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin. (Γ) Η ποσοτική ανάλυση των επιπέδων mRNA του Ν-καδερίνης, σαλιγκάρι και Twist σε κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με 5 μg /mL των εκχυλισμάτων ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin. Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από δύο τουλάχιστον ανεξάρτητα πειράματα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). * P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με τα κύτταρα Α549 DMSO-θεραπεία

Η

εκχύλισμα ακετόνης

P

.

coriacea

και physciosporin κατέστειλε KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1 και επηρέαζαν την έκφραση του KAI1 και KITENIN

Στη συνέχεια, οι αλλαγές στην μεταγραφική δραστηριότητα της β-κατενίνης /LEF-1 (TOPFLASH), AP -1 (ΑΡ-1-Ιυο), ΝΡ-κΒ (NF-κΒ-Luc) και STAT (STAT-Ιυο) μετρήθηκαν σε επεξεργασμένα κύτταρα. Σε μια προκαταρκτική δοκιμή, μόνο δραστηριότητα ΑΡ-1 μειώθηκε κατά εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin θεραπεία με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο απουσία συν-ενεργοποιητή (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σε προηγούμενη μελέτη μας, δείξαμε ότι KITENIN (KAI1 C-τερματικό αλληλεπιδρούν τετρασπανίνη) προωθεί την ογκογόνο δυναμικό των καρκίνων, και του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) διεγείρει KITENIN μεσολάβηση ΑΡ-1 ενεργοποίηση [24]. Για να ελέγξετε περαιτέρω τις επιδράσεις του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin επί KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1, ΑΡ-1 ανιχνεύσεις αναφοράς διεξήχθησαν σε κύτταρα συν-επιμολυσμένα με KITENIN. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, KITENIN μεσολάβηση δραστικότητα ΑΡ-1 μειώθηκε κατά εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

ή θεραπεία physciosporin σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, με και χωρίς διέγερση EGF. Για να διερευνήσουν πώς ακετόνης εκχύλισμα

P

.

coriacea

και physciosporin κατέστειλε KITENIN μεσολάβηση δραστηριότητα ΑΡ1, ελέγξαμε τα επίπεδα KITENIN σε επεξεργασμένα κύτταρα. επίπεδα KITENIN mRNA μειώθηκαν με την κατεργασία (Σχήμα 5Β). Το μεταστατικό κατασταλτικό γονίδιο, KAI1, συχνά ρυθμίζεται προς τα κάτω σε μεταστατικά κύτταρα όγκου [25, 26]. Όπως KITENIN έχει μια αντίστροφη σχέση με KAI1 ή άλλα γονίδια μετάσταση κατασταλτικά [27], ελέγξαμε το επίπεδο του mRNA του KAI1 σε κατεργασμένα κύτταρα και βρήκε μια παρόμοια αντίστροφη σχέση μεταξύ KITENIN και KAI1 (Σχήμα 5C). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι το εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

και physciosporin αναστέλλουν την κινητικότητα Α549 κυττάρων εν μέρει μέσω της καταστολής της KITENIN μεσολάβηση δραστηριότητα ΑΡ-1 με τη ρύθμιση KITENIN και KAI1 εκφράσεις. Για να ελέγξει πώς επίπεδο του mRNA του KITENIN μπορεί να αλλάξει με την κατεργασία, διεξήχθησαν προσδιορισμοί λουσιφεράσης για KITENIN υποκινητή και 3′-UTR. Ως αποτέλεσμα, η δραστικότητα του KITENIN 3′-UTR ήταν δραματικά μειώνεται από την θεραπεία (Σχήμα 5Ε), ενώ εκείνη του KITENIN υποκινητή παρέμεινε σταθερή (Εικόνα 5D).

(Α) ΑΡ-1 δοκιμασία λουσιφεράσης του ΗΕΚ293Τ κύτταρα επιμολυσμένα με KITENIN και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin στην απουσία ή παρουσία της διέγερσης του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα. (Β-Ο) Ποσοτική ανάλυση του επιπέδου mRNA του KITENIN (Β) και KAI1 (C) σε κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin. (D-Ε) προαγωγός KITENIN (D) και 3′-UTR (Ε) δοκιμασίες λουσιφεράσης των κυττάρων ΗΕΚ293Τ που έλαβαν θεραπεία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin. Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). * P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01? *** P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με τα κύτταρα DMSO-επεξεργασία

Η

εκχύλισμα ακετόνης

P

.

coriacea

και physciosporin μειωμένη δραστηριότητα RhoGTPase

Στη συνέχεια, οι αλλαγές στις δραστηριότητες της RhoGTPases μετρήθηκαν σε επεξεργασμένα κύτταρα (Σχήμα 6). Να διερευνήσει τις επιδράσεις του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

και physciosporin σχετικά με τις δραστηριότητες της Cdc42 και Rac1, αναλύσεις pull-down GST πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας GST-PBD (περιοχή p21-σύνδεση). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι δραστηριότητες της Cdc42 και Rac1 μειώθηκαν κατά 20% και 33%, αντίστοιχα, σε παρουσία physciosporin (Σχήμα 6Α και 6Β). δραστηριότητα RhoA επίσης μειώθηκε κατά εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

και physciosporin (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι το εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

και physciosporin αναστέλλουν την κινητικότητα Α549 κυττάρων εν μέρει μέσω της μείωσης της δραστηριότητας RhoGTPase. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο λειχήνας δευτερογενούς μεταβολίτη, physciosporin, αναστέλλει τον καρκίνο κυτταρική κινητικότητα με ειδικούς μηχανισμούς δράσης.

(ΑΒ) Τα επίπεδα του GTP-δεσμευμένη Cdc42 (Α) και Rac1 (Β) μετρήθηκαν σε κύτταρα Α549 υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 5 μg /ml του εκχυλίσματος ακετόνης του

P

.

coriacea

ή physciosporin. GTP-Cdc42 και -Rac1 μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας GST-PBD. Τα συνολικά ποσά των Cdc42 και Rac1 έδειξαν να μετρηθεί η σχετική δραστηριότητα. Ποσοτικά στοιχεία ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα, η = 3. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± S.E.M. (Τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). *** P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με τα κύτταρα Α549 DMSO-θεραπεία

Η

Συζήτηση

Πολλοί μοναδική χημικές ουσίες έχουν απομονωθεί από λειχήνα που χρησιμοποιούνται για φαρμακευτικούς σκοπούς. Σε αυτή τη μελέτη, μια αποτελεσματική χημική ένωση physciosporin έχει απομονωθεί από τη Χιλή λειχήνα

Pseudocyphellaria coriacea

για ανασταλτική δράση τους κατά του καρκίνου του πνεύμονα κυτταρική κινητικότητα. Physciosporin, ένα χλωριωμένο depsidone, απομονώθηκε για πρώτη φορά το 1977 από τον λειχήνα

Pseudocyphellaria physciospora

και ταυτοποιήθηκε ως 2-χλωρο-4-φορμυλο-3,8-διυδροξυ-Ι, 6,9-τριμεθυλ-11- οξο-11

H

διβενζο [b, e] [l, 4] διοξεπιν-7-καρβοξυλικός (5-chlorovirensate) [22], αλλά η βιολογική δραστικότητα τους δεν έχει αναφερθεί μέχρι σήμερα. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε τα εξής: 1) το εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

και δευτερεύον του, physciosporin, αναστέλλουν την κινητικότητα των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα? 2) το εκχύλισμα του

P

.

coriacea

και physciosporin καταστολή EMT? 3) το εκχύλισμα του

P

.

coriacea

και physciosporin μειώσει KITENIN μεσολάβηση δραστηριότητα AP-1 και επηρεάζουν την έκφραση των KAI1 και KITENIN? και 4) το εκχύλισμα του

P

.

coriacea

και physciosporin μείωση της δραστηριότητας RhoGTPase.

EMT, μια ουσιαστική μετατροπή φαινοτυπικά κατά την εμβρυϊκή ανάπτυξη, την αναδιαμόρφωση των ιστών και την επούλωση των πληγών, παίζει ζωτικό ρόλο στην εισβολή και μετάσταση όγκου [28-30]. Αυξήσεις στην έκφραση Ν-cadherin και μειώνεται σε επίπεδο Ε-καδερίνης (που ονομάζεται «μεταγωγή καντερίνης») είναι ζωτικής σημασίας για την EMT και να προκύψουν κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου [31]. Ιδιαίτερα, το επίπεδο της Ν-καντερίνης φαίνεται να αντιπροσωπεύουν το φαινότυπο μεσεγχυματικά των κυττάρων και μια ομάδα παραγόντων μεταγραφής, συμπεριλαμβανομένων σαλιγκάρι, Slug, Zeb και Twist έχει έναν κρίσιμο ρόλο στον έλεγχο του ΕΜΤ [32]. Σαλιγκάρι, ένας παράγοντας μεταγραφής ψευδαργύρου-δακτύλου εντοπίστηκε για πρώτη φορά στη Drosophila, είναι ένας βασικός ρυθμιστής EMT [33]. Twist έχει επίσης έναν σημαντικό ρόλο στην μετάσταση καρκίνου. Για παράδειγμα, η αναστολή της έκφρασης Twist με βραχεία παρεμβαλλόμενα RNA επηρεάζει μεταστατικό σθένος [34], και τη ρύθμιση των Twist-1 μπορεί να συμβάλει στην αντοχή σε πακλιταξέλη και Antimicrotubule φάρμακα σε ασθενείς με καρκίνο [35]. αποτέλεσμα μας έδειξε ότι τα επίπεδα της Ν-cadherin, σαλιγκάρι, και Twist μειώθηκαν κατά εκχύλισμα ακετόνης του

P

.

coriacea

και θεραπεία physciosporin ενώ εκείνα του Ε-καδερίνης παρέμεινε οριακός (Σχήμα 4). Αξίζει να σημειωθεί είναι ότι, σε ορισμένες περιπτώσεις, οι αλλαγές στο επίπεδο Ε-καδερίνης δεν είναι απαραίτητα για ΕΜΤ [36] ή μεταστατικού όγκου δραστηριότητα [37].

KITENIN είναι ένα γονίδιο μετάσταση ενίσχυσης. Πρόσφατα, ταυτοποιήσαμε ότι άξονας KITENIN /ErbB4-Dvl2-c-Jun είναι μια ασυνήθιστη EGFR ανεξάρτητη κατάντη σήμα του EGF και προκαλεί την διεισδυτικότητα και ογκογένεσης των καρκινικών κυττάρων [24]. Στα αποτελέσματά μας, KITENIN μεσολάβηση δραστηριότητα ΑΡ-1 μειώθηκε από το εκχύλισμα του

P

.

coriacea

και physciosporin. Ειδικά, η έκφραση του KITENIN μειώθηκε με την κατεργασία και, για αυτό, η δραστικότητα 3′-UTR του KITENIN ήταν δραματικά μειωμένη (Σχήμα 5). Λίγοι KITENIN στόχευση microRNAs καταστολή της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων μέσω της ρύθμισης της έκφρασης KITENIN αναφέρθηκαν και miR-27a, miR-30b, και miR-124 είναι από τα παραδείγματα [15]. Προς το παρόν, δεν γνωρίζουμε αν physciosporin πιθανό ενεργεί ως microRNAs να καταστείλει 3′-UTR δραστηριότητα KITENIN. Ωστόσο, όπως αντισυμβατικό KITENIN /ErbB4 μεσολάβηση κατάντη σήμα της EGF διαδραματίζει έναν από τη μοριακή βάση για την απονομή αντίσταση σε αντι-EGFR παράγοντες, το εκχύλισμα του

P

.

coriacea

και physciosporin μπορεί να έχει δυναμικό ευεργετική δράση στην αντιμετώπιση της περιορισμένης κλινικής αποτελεσματικότητας του αντι-EGFR θεραπείας.

Rho ΘΤΡάσες, μέλη της υπεροικογένειας Ras των μικρών GTPases όπως Rac1, Cdc42, και