Αφηρημένο

Ο ρόλος του

WDR3

γονίδιο σε γονιδιωματική αστάθεια έχει αξιολογηθεί σε μια ομάδα 115 διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς (DTC) ασθενείς. Genomic αστάθεια έχει μετρηθεί σύμφωνα με την ανταπόκριση των λεμφοκυττάρων περιφερικού αίματος σε ιονίζουσα ακτινοβολία (0.5 Gy). Η απάντηση έχει μετρηθεί με τη δοκιμή μικροπυρήνων (ΜΝ) την αξιολόγηση της συχνότητας των διπύρηνα κύτταρα με ΜΝ (BNMN), τόσο πριν όσο και μετά την ακτινοβολία. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των γονότυπων, για τις συχνότητες BNMN προηγούμενα η ακτινοβολία, παρατηρήθηκαν. Παρ ‘όλα αυτά σημαντικές μειώσεις στις βλάβες του DNA μετά από ακτινοβόληση παρατηρήθηκαν σε άτομα που φέρουν τα αλληλόμορφα παραλλαγή για καθένα από τα τρία γονότυπου SNP: rs3754127 [-8.85 (-15.01

να

-2,70), Ρ & lt? 0.01]? rs3765501 [-8.98 (-15.61

για να

-2,36), η P & lt? 0.01]? rs4658973 [-8.70 (-14.94

για να

-2,46), η P & lt? 0.01]. Αυτές οι τιμές αντιστοιχούν σε εκείνα που λαμβάνονται υποθέτοντας δεσπόζουσα μοντέλο. Αυτή η μελέτη δείχνει για πρώτη φορά ότι

WDR3

μπορούν να διαμορφώσουν τη σταθερότητα του γονιδιώματος

Παράθεση:. García-Quispes WA, Pastor S, Γκαλόφρε P, Biarnés J, Castell J, Βελάσκεθ A, et al . (2012) Πιθανή ρόλος του

WDR3

Gene για Γονιδιώματος Σταθερότητα σε καρκίνο του θυρεοειδούς ασθενείς. PLoS ONE 7 (9): e44288. doi: 10.1371 /journal.pone.0044288

Επιμέλεια: Javier Σ Castresana, Πανεπιστήμιο της Ναβάρα, Ισπανία

Ελήφθη: 17, Απρίλη 2012? Δεκτές: 1 Αυγούστου 2012? Δημοσιεύθηκε: 26 Σεπτεμβρίου, 2012

Copyright: © García-Quispes et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Ισπανικό Υπουργείο Παιδείας και Επιστημών (SAF2007-6338) και την Generalitat de Catalunya (CIRIT? 2009SGR-725). W. Α García-Quispes υποστηρίχθηκε από predoctoral υποτροφία από το Αυτόνομο Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης (PIF). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

περιοχή χρωμόσωμα 1p12 έχει συνδεθεί με διάφορους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου διαφοροποιημένο καρκίνωμα του θυρεοειδούς (DTC) [1], [2]. Προηγούμενες μελέτες που διεξάγονται από την ομάδα μας σε αυτή την περιοχή έχουν διαπιστώσει ότι το

WDR3

γονίδιο, χαρτογραφήθηκε σε αυτή την περιοχή, δείχνει μια σημαντική συσχέτιση με το DTC, γεγονός που υποδηλώνει εμπλοκή της στην αιτιολογία του καρκίνου του θυρεοειδούς [3].

Ελάχιστες πληροφορίες υπάρχουν για το ρόλο του

WDR3

, αλλά είναι γνωστό ότι ανήκει σε μια οικογένεια ευκαρυωτικών γονιδίων που φέρουν WD επαναλαμβάνει [4]. WD επαναλήψεις Τα ελάχιστα διατηρημένες περιοχές του περίπου 40 αμινοξέα, τυπικά σε αγκύλες το Gly-His και Trp-Asp, η οποία μπορεί να διευκολύνει το σχηματισμό του ετεροτριμερή ή πολυπρωτεϊνικό συμπλοκών. Από το WD-επαναλαμβάνω πρωτεϊνών δεν υπάρχουν σε προκαρυωτικά γονιδιώματα, υποτίθεται ότι πιθανώς προέκυψαν στα άμεσοι πρόδρομοι των ευκαρυωτικών οργανισμών [5]. Οι πρωτεΐνες που ανήκουν στην οικογένεια επανάληψη WD που εμπλέκονται σε μια ποικιλία κυτταρικών διεργασιών? συμπεριλαμβανομένων εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, μεταγωγή σήματος, την απόπτωση, και γονιδιακή ρύθμιση [6]. Αναφορικά με το

WDR3

γονίδιο, θα πρέπει να αναφερθεί ότι κωδικοποιεί μια πυρηνική πρωτεΐνη του 943 αμινοξέων που περιέχει 10 WD επαναλαμβάνει [4]. Αυτό το γονίδιο εμπλέκεται στην πρόοδο του κυτταρικού κύκλου και την μεταγωγή σήματος [7] και, αν και η ειδική λειτουργία του

WDR3

είναι άγνωστη, ένα ρόλο στο ριβόσωμα βιογένεση έχει πρόσφατα αναφερθεί [8].

δεδομένου ότι καμία από τις λειτουργίες που αποδίδονται σε WDR3 μπορεί να συνδέεται ειδικά με καρκίνο του θυρεοειδούς, υποθέσαμε ότι ίσως συμμετέχει σε πιο γενική μηχανισμούς διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας. Κατά συνέπεια, οι διακυμάνσεις στο

WDR3

λειτουργία που σχετίζεται με την ύπαρξη γενετικών πολυμορφισμών μπορεί να δημιουργήσει το γονιδίωμα αστάθεια που μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένο κίνδυνο καρκίνου. Σε αυτό το πλαίσιο, θα πρέπει να αναφέρεται ότι έχουν ριβοσωμικές πρωτεΐνες έχουν αναφερθεί ότι εμπλέκονται επίσης στη διατήρηση της ακεραιότητας του γονιδιώματος [9].

Αν και γενωμική αστάθεια είναι μια σύνθετη παράμετρο, ένα γενικό χαρακτηριστικό των ατόμων που δείχνει ασθενειών, όπως του Fanconi αναιμία ή αταξία τηλαγγειεκτασία είναι μια φτωχή απόκριση έναντι παραγόντων που επηρεάζουν την ακεραιότητα του γονιδιώματος, όπως είναι η περίπτωση της ιονίζουσας ακτινοβολίας (IR). Έτσι, ραδιοευαισθησία θεωρείται ένας βιοδείκτης του γενωμική αστάθεια [10]. Για να προσδιορίσετε αν ένα υποψήφιο γονίδιο που εμπλέκεται στη γονιδιωματική σταθερότητα πρέπει να αποδεικνύεται ότι τα κύτταρα που φέρουν διαφορετικούς γενετικούς πολυμορφισμούς είναι ιδιαίτερα ευαίσθητοι μπροστά της δράσης IR.

Εδώ, θα αξιολογηθεί η σχέση μεταξύ των τριών μη-κωδικοποίησης και μόνο νουκλεοτίδιο πολυμορφισμούς του

WDR3

γονιδίου και της συχνότητας των μικροπυρήνων, τόσο αυθόρμητη και μετά την έκθεση IR. Η μελέτη έχει διεξαχθεί σε λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος από μία ομάδα 115 DTC ασθενών, και τα επίπεδα της βλάβης του DNA αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την ανάλυση κυτοκίνηση-block μικροπυρήνων (CBMN), επειδή είναι μια καθιερωμένη κυτταρογενετική τεχνική με πολλές πλεονεκτήματα έναντι άλλων κυτταρογενετική προσεγγίσεις. Σε αυτό το πλαίσιο, πρέπει να τονιστεί ότι έχει καλά καταδειχθεί ότι προσδιορισμού CBMN είναι πολύ χρήσιμο ως ένας δείκτης της αυθόρμητης και επαγόμενης βλάβης του DNA [11] – [13].

Η

Υλικά και Μέθοδοι

ηθική δήλωση

Η μελέτη εγκρίθηκε από την ηθική επιτροπές από το Νοσοκομείο Universitari Vall d’Hebron της Βαρκελώνης, και το Νοσοκομείο Universitari Γιατρός Josep Trueta στην Girona (Ισπανία).

Πληθυσμός μελετηθεί

Η μελέτη διεξήχθη σε συνολικά 115 ασθενείς με καρκίνο του θυρεοειδούς, 93 (81%) γυναίκες και 22 (19%) άνδρες, προσλαμβάνονται τόσο από το Νοσοκομείο Universitari Vall d’Hebron στη Βαρκελώνη, και το Νοσοκομείο Universitari Γιατρός Josep Trueta στην Girona (Ισπανία). Η μέση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 43.30 ± 15.07 (μέση τιμή ± SD) έτη και 49.76 ± 16.49, όταν ελήφθη το δείγμα. Σύμφωνα με τον όγκο-τύπου, 99 (86%) των ασθενών είχαν ταξινομηθεί ως θηλώδη και 16 (14%) ως ωοθυλακίων.

Τα δείγματα αίματος συλλέχθηκαν πριν από τη θεραπεία ιώδιο (

131I), μετά την απόκτηση γραπτή συγκατάθεση όλων των ασθενών. Όλοι οι συμμετέχοντες συμπλήρωσαν ένα ερωτηματολόγιο, το οποίο καλύπτει πρότυπο δημογραφικές ερωτήσεις, καθώς και μια σύντομη επαγγελματική, την ιατρική, και το οικογενειακό ιστορικό. Η ιστολογική ταξινόμηση του όγκου ελήφθη από τα ιατρικά αρχεία. Όλοι οι συμμετέχοντες υπέγραψαν μια γραπτή συγκατάθεση.

Η

Κυτταρική καλλιέργεια και επεξεργασία με IR

Ο προσδιορισμός κυτοκίνηση μπλοκ μικροπυρήνων (CBMN) πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας την τεχνική κυτοχαλασίνη Β και μετά από μια τυποποιημένη διαδικασία [14]. Ελήφθησαν δείγματα αίματος με φλεβική παρακέντηση και 0,5 ml ηπαρινοποιημένο αίμα αραιώθηκε με 4,5 ml πλήρους μέσου καλλιέργειας που αποτελείται από RPMI 1640, συμπληρωμένο με 15% εμβρυϊκό βόειο ορό, 1% αντιβιοτικά (πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη) και 1% Ε-γλουταμίνη? όλα τα χημικά ελήφθησαν από PAA Laboratories GmbH, Pasching, Αυστρία. Λεμφοκύτταρα διεγείρονται να διαιρέσει με 1% φυτοαιμοσυγκολλητίνη (PHA) (Gibco San Diego, USA) αμέσως μετά τη θεραπεία με IR.

Η

Τέσσερις καλλιέργειες καθοριστεί για κάθε δότη. Δύο ακτινοβολήθηκαν με 0.5 Gy 137Cs γ-ακτίνες, ενώ οι άλλοι δύο παραμένουν χωρίς αγωγή. Η ακτινοβόληση πραγματοποιήθηκε στο οργανικής μονάδας Tecnica de Protecció Radiologica (UTPR-UAB) της Αυτόνομο Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης. Ο ρυθμός δόσης ήταν 6,00 Gy λεπτά

-1. Τα λεμφοκύτταρα (ακτινοβολημένα και μη ακτινοβολημένα) καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C για 72 ώρες. Σε 44 ώρες μετά τη διέγερση ΡΗΑ, 10 μι (3 mg /mL) κυτοχαλασίνης Β (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) προστέθηκε για να δώσει τελική συγκέντρωση στη καλλιέργεια του 6 μg /mL. Οι καλλιέργειες διατηρήθηκαν στους 37 ° C και 5% CO

2.

Η

συγκομιδής κυττάρων και

βαθμολόγησης ΜΝ

Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση (10 λεπτά στα 120 g). Το υπερκείμενο απορρίφθηκε μετά από κάθε φυγοκέντρηση. Η υποτονική κατεργασία διεξήχθη προσθήκη 5 ml 0.075 Μ ΚΟΙ στους 4 ° C για 10 λεπτά. Στη συνέχεια, τα κύτταρα φυγοκεντρήθηκαν και ένα μίγμα μεθανόλης /οξικού οξέος (3:01 ν /ν) προστέθηκε ήπια. Αυτό το βήμα καθήλωσης επαναλήφθηκε δύο φορές και τα προκύπτοντα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε έναν μικρό όγκο στερεωτικού διαλύματος. Παρασκευάσματα ξηραίνεται στον αέρα έγιναν και τα πλακίδια χρωματίσθηκαν με 10% Giemsa (Merck KGaA, Darmstadt, Γερμανία) σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ 6.8) για 7 λεπτά. Διαφάνειες κωδικοποιήθηκαν από ένα πρόσωπο που δεν συμμετέχει στο σκορ.

Η

Για την ανίχνευση του επιπέδου της γενετικής βλάβης, η συχνότητα των διπύρηνα κύτταρα με μικροπυρήνων (BNMN) αξιολογήθηκε. Ένα τυφλώνεται βαθμολόγησης του 1000 διπύρηνα κύτταρα ανά δείγμα (ακτινοβολημένα και μη ακτινοβολημένα) αναλύθηκαν για να προσδιοριστεί η παρουσία των μικροπυρήνων, σύμφωνα με πρότυπα κριτήρια [14].

SNP επιλογή

Οι πολυμορφισμοί χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη επιλέχθηκαν σύμφωνα με προηγούμενες αναλύσεις μας [3]. Έτσι, επιλέξαμε τρεις SNPs ετικέτα που δείχνει συσχέτιση απλότυπου με καρκίνο του θυρεοειδούς, rs3754127 (C /T, 5 ‘κοντά στο γονίδιο), rs3765501 (G /A, εσώνιο) και rs4658973 (T /G, εσώνιο).

εκχύλιση του DNA και SNP γονοτυποποίηση

DNA απομονώθηκε από περιφερικό αίμα, χρησιμοποιώντας την πρότυπη μέθοδο φαινόλης-χλωροφορμίου. Η γονοτυπική SNP πραγματοποιήθηκε στο Centro Nacional de Genotipado (CeGen) χρησιμοποιώντας την τεχνική iPlex (Sequenom) και ήταν ο γονότυπος με επιτυχία σύμφωνα με τα κριτήρια ελέγχου της ποιότητας του CeGen (https://www.cegen.org). Για να διασφαλιστεί η αξιοπιστία προσδιορισμού γονοτύπου, το 10% των δειγμάτων επιλέχθηκαν τυχαία και διπλά γονότυπος από αντίγραφα σε πλάκες πολλαπλών 96 φρεατίων. Επιπλέον, δύο HapMap τρίο αναφοράς ενσωματώθηκαν σε πλάκες και ελέγχθηκαν η συμφωνία γονότυπο και τη σωστή Μέντελ κληρονομικότητα.

Η στατιστική ανάλυση

Η ανάλυση των διαφορών, ανισορροπία σύνδεσης και εκτίμηση της συχνότητας απλότυπος πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση το διαδικτυακό εργαλείο για SNPStats ανάλυση SNP [15]. Γραμμικό μοντέλο παλινδρόμησης για το κυρίαρχο και συνεπικρατούν κληρονομιά πραγματοποιήθηκαν. Όλες οι αναλύσεις προσαρμόστηκαν ως προς την ηλικία, το φύλο και την ιστολογική διάγνωση. Απλότυπου αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το ίδιο εργαλείο ιστό. λογισμικό Haploview [16] χρησιμοποιήθηκε για την εξέταση της LD μεταξύ SNPs. Άλλες στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση R έκδοση 2.12.1 [17].

Αποτελέσματα

Γενικά χαρακτηριστικά των επιλεγμένων DTC ασθενείς συνοψίζονται στο τμήμα Υλικά και Μέθοδοι. Όπως αναφέρεται, το ποσοστό των γυναικών ήταν υψηλότερο από αυτό των ανδρών, γεγονός που αντικατοπτρίζει την υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης DTC στις γυναίκες. Επιπλέον, η αυξημένη συχνότητα εμφάνισης του θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς υποδεικνύει την επικράτηση αυτής της ιστολογικής υπότυπο.

Ο Πίνακας 1 δείχνει ότι η μέση τιμή της συχνότητας αυθόρμητης BNMN στους 115 ασθενείς ήταν 6,87 ± 0,55 (μέση τιμή ± SE). Οι τιμές BNMN παρουσίασαν αύξηση κατά 4,6 φορές (31.35 ± 1.5) μετά από έκθεση σε 0,5 Gy ιονίζουσας ακτινοβολίας, σχετικά με τις αυθόρμητες επίπεδα. Αυτές οι διαφορές μεταξύ της αυθόρμητης και μετά συχνότητα ακτινοβολία BNMN ήταν, όπως αναμενόταν, στατιστικά σημαντική (Ρ & lt? 0.001). Επιπλέον, αν και ο μέσος όρος των αυθόρμητων BNMN ήταν υψηλότερη στις γυναίκες (7,19 ± 0,65) από ότι στους άνδρες (5.51 ± 0.94) η διαφορά αυτή δεν πέτυχαν στατιστική σημαντικότητα (Ρ = 0,339). Από την άλλη πλευρά, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των θηλυκών και αρσενικών μετά την ακτινοβόληση (31,19 ± 1,70 και 31,01 ± 3,11? Αντίστοιχα, Ρ = 0,833).

Οι αυθόρμητες τιμές BNMN στον υπότυπο των ασθενών με θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς έδειξαν μία μικρή αλλά όχι σημαντική μείωση, σε σύγκριση με την θυλακιώδη υπότυπο (6.64 ± 0.57 και 8.31 ± 1.82? αντίστοιχα, Ρ = 0,559). Οι τιμές των BNMN μετά την ακτινοβολία δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο υποτύπων (31,71 ± 1,50 και 29,13 ± 5,53? Αντίστοιχα, P = 0,553).

Στο σχήμα 1 παρατηρείται η καλή συσχέτιση που υπάρχει ανάμεσα στην αυθόρμητη BNMN τιμών και αυτών που παρατηρήθηκαν μετά την ακτινοβόληση (R

2 = 0,28, P & lt? 0.001). Αυτό θα έδειχνε μια υποκείμενη γενετική αιτία.

Έχουμε αξιολόγησε επίσης το κυτταρικό ρυθμό πολλαπλασιασμού με τη χρήση του δείκτη πολλαπλασιασμού κυτοκίνηση-αποκλεισμένη (CBPI). Η τιμή CBPI δείχνει το μέσο αριθμό των κύκλων κυττάρου ανά κύτταρο [18]. Τα αποτελέσματα (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) δείχνουν μια σημαντική μείωση του CBPI σε καλλιέργειες που εκτίθενται σε ιονίζουσα ακτινοβολία (Ρ & lt? 0.001).

Οι διαφορές και τα διαστήματα τους εμπιστοσύνης 95% υπολογίστηκαν με γραμμική παλινδρόμηση αναλύσεις χρησιμοποιώντας ως αναφορά το ομόζυγο γονότυπο για την πιο συχνή αλληλόμορφο, με προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο και διαγνώσεις. Ο Πίνακας 2 δείχνει τις διαφορές που παρατηρούνται στην αυθόρμητη αξίες BNMN, σύμφωνα με τις διαφορετικές πολυμορφισμούς, λαμβάνοντας υπόψη την συνεπικρατούν μοντέλο κληρονομικότητας. Για την αυθόρμητη συχνότητα BNMN βρέθηκαν μικρές διαφορές μεταξύ των γονότυπων για όλους τους αξιολογήθηκαν πολυμορφισμούς. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε όλες τις περιπτώσεις οι τιμές BNMN ήταν υψηλότερα στα γονότυπους αναφοράς (ομόζυγο για το κοινό αλληλόμορφο), αλλά αυτές οι διαφορές δεν έφθασαν στατιστική σημασίες.

Η ανάλυση του απλότυπου πραγματοποιήθηκε για τα τρία SNPs του WDR3 και ο τα αποτελέσματα υποδεικνύονται στον πίνακα 3. Τρία απλότυποι είχαν προβλεφθεί να έχουν μια συχνότητα & gt? 0,01. Οι άλλοι απλότυποι είχαν προβλεφθεί να είναι πολύ περίεργο για ουσιαστική στατιστική ανάλυση. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές για καμία από τις πιο συχνές απλοτύπων με τις αυθόρμητες τιμές BNMN.

Τα μέσα για τις συχνότητες BNMN ήταν σημαντικά διαφορετικό από το γονότυπο μεταξύ των τριών

WDR3

πολυμορφισμών (Πίνακας 4) . Παρατηρήσαμε σημαντικά χαμηλότερες μέσες συχνότητες BNMN με την παρουσία του ανηλίκου αλληλόμορφο μετά από έκθεση σε ιοντίζουσα ακτινοβολία προτείνοντας ένα κυρίαρχο μοντέλο κληρονομικότητας. Για παράδειγμα, η rs3754127 C /T-T /T γονότυποι έδειξε μία μειωμένη συχνότητα BNMN σύγκριση με CC άτομα (βλέπε Πίνακα 4). Ομοίως, βρήκαμε επίσης μια μείωση στην βλάβη προκαλούμενη από ακτινοβολία με απλότυπος όταν συνδυάζοντας την έλασσον αλληλόμορφο του καθενός από τα τρία γονότυπου SNPs [-4,9 (-9,16

να

-0,63), Ρ = 0,026] (βλέπε . Πίνακας 5)

Όταν η ανάλυση έγινε στρωματοποίηση του πληθυσμού από τον τύπο του όγκου κατά τη διάγνωση (ωοθυλακίων ή θηλώδες), το θηλώδες υποομάδας έδειξε τιμές μετά την ακτινοβολία παρόμοια με εκείνα του συνολικού πληθυσμού: rs3754127 [-8,39 (-14,45 έως -2,33), η P & lt? 0.01]? rs3765501 [-8.83 (-15,37 έως -2,29), η P & lt? 0.01]? rs4658973 [-8.36 (-14,46 έως -2,27), η P & lt? 0.01], όλα για το κυρίαρχο μοντέλο. Από την άλλη πλευρά, το αποτέλεσμα που παρατηρείται για το θυλακιώδους υποτύπου μετά την ακτινοβόληση ήταν υψηλότερη από ό, τι σε θηλώδες και στο συνολικό DTC ασθενείς? Ωστόσο, οι διαφορές δεν ήταν στατιστικά σημαντικές, πιθανώς λόγω του χαμηλού αριθμού των ατόμων: rs3754127 [-27,78 (-55,54 έως -0,02), P = 0.074]? rs3765501 [-28,67 (-62,46 έως 5,12), P = 0,12]? rs4658973 [-29,10 (-60,26 έως 2,06), P = 0.094], όλα για κυρίαρχο μοντέλο.

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη δείξαμε μία σημαντική σχέση μεταξύ των τριών επιλεγμένων πολυμορφισμούς του

WDR3

γονίδιο και τα επίπεδα της βλάβης του DNA μετά από μια θεραπεία με IR. Αυτό θα έδειχνε ένα ρόλο WDR3 στη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας.

WDR3

γονίδιο κωδικοποιεί μια πυρηνική πρωτεΐνη που περιέχει 10 WD επαναλαμβάνει με άγνωστη λειτουργία [4], καθώς και τα μέλη αυτής της μεγάλης οικογένειας είναι δομικά συγγενείς, αλλά λειτουργικά διαφορετικές. Μερικές από τις κυτταρικές λειτουργίες ή πορείες ρυθμίζονται από τα μέλη αυτής της οικογένειας περιλαμβάνουν ρύθμιση των γονιδίων, τη μεταγωγή σήματος, την επεξεργασία και μάτισμα του RNA, λεμφοκυττάρων, ρύθμιση της προόδου του κυτταρικού κύκλου, κυτταρική διαίρεση /διαχωρισμός χρωματίνης, και διαφοροποίηση των κυττάρων /ιστών, μεταξύ άλλων, όπως αναθεωρήθηκε [5], [6]. Ωστόσο, μέχρι τώρα δεν υπάρχουν πληροφορίες που υποδεικνύει μια πιθανή εμπλοκή με τους μηχανισμούς επιδιόρθωσης ή επιρροής, για τη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας για

WDR3

, ή για οποιοδήποτε μέλος της οικογένειάς του.

Με στόχο να βρουν μια λογική εξήγηση για τη συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ

WDR3

πολυμορφισμών και συχνότητα DTC, έχουμε ήδη αναφερθεί το up-ρύθμιση του

WRD3

σε διάφορες καρκίνου του θυρεοειδούς κυτταρικές σειρές, γεγονός που υποδηλώνει πιθανή εμπλοκή της στην θυρεοειδή καρκίνος ογκογένεση [3]. Αυτό θα συμφωνούσε με τις μελέτες που διεξάγονται στο κύτταρο καρκινώματος μαστού γραμμή MCF-7 που δείχνει ότι η καταστολή του

WDR3

μειώνουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, να μειώσει το μέγεθος των κυττάρων και να μειώσει το σχηματισμό εστιών, υποδεικνύοντας ότι

WDR3

παρέχει ανάπτυξη και πολλαπλασιαστικό πλεονέκτημα σε καρκινικά κύτταρα [8]. Η πρωτεΐνη WDR3 ανακατανέμεται εντός του πυρήνα όταν ριβόσωμα βιογένεση διαταράσσεται. Κυτταρικά γεγονότα φαίνεται να επηρεάζεται από τη ρύθμιση της έκφρασης του

WDR3

αλλαγή ριβοσωμάτων βιογένεση [8]. Μειωμένη παροδικές αλλαγές στα επίπεδα των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA-βλάβες (μη-ομόλογο τέλος-που ενώνει πρωτεΐνες) έχουν παρατηρηθεί στον πυρηνίσκο μετά από έκθεση σε ιοντίζουσα ακτινοβολία? Ως εκ τούτου, φαίνεται πιθανό ότι αυτές οι αλλαγές αντανακλούν μια βιολογικά σχετική απάντηση σε βλάβες στο DNA διπλό σκέλος διάλειμμα [19].

Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν μια συσχέτιση μεταξύ των ήσσονος σημασίας αλληλόμορφα συχνότητας για rs3754127, rs3765501, rs4658973 πολυμορφισμών και χαμηλότερες τιμές της βλάβης του DNA, μετά την κατεργασία με ιοντίζουσα ακτινοβολία. Αν και οι SNPs που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας δεν παράγουν αλλαγές των αμινοξέων στην πρωτεϊνική αλληλουχία, είναι γνωστό ότι μη-κωδικοποίησης πολυμορφισμών μονού νουκλεοτιδίου μπορούν να τροποποιήσουν τη γονιδιακή έκφραση [20]. Τροποποιήσεις κοντά στην αλληλουχία προαγωγού (rs3754127) μπορεί να διακόψει τη σωστή αλληλεπίδραση με παράγοντες μεταγραφής μεταβαλλόμενες εντελώς η έκφραση γονιδίου ή που επηρεάζουν το επίπεδο έκφρασης [21]? αυτό σημαίνει ότι η μεταγραφή του WDR3 θα μπορούσε να εξαρτάται από γενετική διακύμανση στην περιοχή του υποκινητή. Αν και εναλλακτικό μάτισμα, λόγω της παρουσίας του SNPs, συμβαίνουν πιθανώς [22], [23], πρέπει να τονιστεί ότι οι εναλλακτικές μεταγραφές επίσης επάγονται από ιονίζουσα ακτινοβολία [24]. Έτσι, οι πολυμορφισμοί στο rs3765501 και /ή rs4658973 μπορεί επίσης να επηρεάσει εναλλακτικό μάτισμα, όχι μόνο λόγω της παρουσίας του, αλλά και από πρόσθετα ή διαφορετικά αποτελέσματα με τις ιονίζουσες ακτινοβολίες επιδράσεις. Εναλλακτικώς, οποιαδήποτε από αυτές πολυμορφισμών μπορεί να είναι υπεύθυνη για τη μείωση της βλάβης του DNA μετά IR, αλλά δρουν ως γενετικοί δείκτες των γενετικών παραλλαγών WDR3 εμπλέκονται άμεσα στη γονιδιωματική σταθερότητα WDR3.

Οι παρατηρούμενες επιδράσεις, υποδεικνύοντας την εμπλοκή του

WDR3

στη διατήρηση της γονιδιωματικής σταθερότητας μετά την έκθεση σε IR, θα συμφωνήσω με την ένωση βρέθηκε με DTC και με το ρόλο που αποδίδεται στο ριβόσωμα βιογένεση. Έτσι, οι μεταβολές στην έκφραση του

WDR3

θα διαταράξει τις οδούς σηματοδότησης που υπάρχουν μεταξύ των ριβοσωμάτων ενεργοποίηση βιογένεση και p53 [8]. Όλα αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν εντελώς σημαντικό ρόλο του

WDR3

στη διατήρηση της σταθερότητας του γονιδιώματος, καθώς και στην καρκινογένεση και ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου. Ενδιαφέροντα, τα προκαταρκτικά αποτελέσματα με ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (Β Moreno, προσωπική επικοινωνία) φαίνεται να δείχνουν μια αλλαγμένη έκφραση του

WDR3

στον καρκίνο του παχέος εντέρου, υποστηρίζουν την άποψή μας, προτείνοντας ένα ρόλο WDR3 στη γονιδιωματική σταθερότητα και τον καρκίνο. Τα δεδομένα μας είναι αρκετά ενδιαφέρον να πραγματοποιήσει συμπληρωματικές μελέτες στο

WDR3

γονιδιακής έκφρασης για να επιβεβαιωθεί αυτή η υπόθεση.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε όλα τα θέματα που συμμετέχουν σε αυτή τη μελέτη, καθώς και στα μέλη της Ιατρικής Υπηρεσίας Πυρηνικής, Νοσοκομείο Vall dHebron (Βαρκελώνη) και της μονάδας Ενδοκρινολογίας του Νοσοκομείου Josep Trueta (Girona) για την παροχή δειγμάτων αίματος του ασθενούς.