Αφηρημένο

Οι όγκοι ανεπαρκή σε έκφραση του μεταφορέα που σχετίζονται με την επεξεργασία του αντιγόνου (ΤΑΡ) συνήθως αποτυγχάνουν να επάγουν Τ-κυτταρική ανοσία και είναι ανθεκτικά σε Τ-κυτταρική λύση. Ωστόσο, έχουμε βρει ότι η εισαγωγή του γονιδίου Β7.1 σε ΤΑΡ-αρνητικά (ΤΑΡ

-) ή ΤΑΡ1-επιμολυσμένα (ΤΑΡ1

+) κύτταρα ποντικού CMT.64 καρκινώματος πνεύμονα μπορεί να αυξήσει την ικανότητα των κυττάρων να επάγουν μία προστατευτική ανοσολογική απόκριση εναντίον των καρκινικών κυττάρων άγριου τύπου. Οι διαφορές στην αντοχή των προστατευτικών ανοσοαποκρίσεων παρατηρήθηκαν μεταξύ ΤΑΡ

– και ΤΑΡ1

+ Β7.1 εκφράζουν CMT.64 κύτταρα ανάλογα με τις δόσεις των γ-ακτινοβολημένων κυττάρων ανοσοποίηση. Ενώ τα ποντίκια που ανοσοποιήθηκαν με είτε υψηλή ή χαμηλή δόση Β7.1 εκφράζουν ΤΑΡ1

+ κύτταρα απορρίφθηκαν ΤΑΡ

– όγκους, μόνο υψηλής ανοσοποίηση δόσης με Β7.1 εκφράζουν ΤΑΡ

– κύτταρα οδήγησε σε απόρριψη όγκου. Η επαγόμενη προστατευτικής ανοσίας ήταν Τ-κυττάρων που εξαρτάται, όπως αποδεικνύεται από μειώνεται δραματικά κατά του όγκου ανοσία σε ποντικούς έχει εξαντληθεί από κύτταρα CD8 ή CD4. Αύξηση του Τ-κυττάρου ανοσοαπόκριση έναντι ΤΑΡ

– κύτταρα όγκου παρατηρήθηκε επίσης σε ένα σύστημα ιικά μολυσμένων κυττάρων όγκου. Όταν τα ποντίκια ανοσοποιήθηκαν με μία υψηλή δόση του γ-ακτινοβολημένα κύτταρα CMT.64 μολυσμένα με ιούς δαμαλίτιδας που μεταφέρουν Β7.1 ή /και ΤΑΡ1 γονιδίων, βρήκαμε ότι τα κύτταρα συν-εκφράζουν Β7.1 και ΤΑΡ1, αλλά όχι εκείνοι που εκφράζουν Β7. 1 και μόνο, που επάγεται προστατευτική ανοσία έναντι κυττάρων CMT.64. Επιπλέον, ο εμβολιασμός με ζωντανά καρκινικά κύτταρα επιμολυσμένα με αρκετούς διαφορετικούς γονίδιο (α) αποκάλυψε ότι τα κύτταρα μόνο B7.1- και ΤΑΡ1-συνέκφραση του όγκου μειώθηκε σημαντικά ογκογονικότητας. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το Β7.1-προκάλεσε αντικαρκινική ανοσία κατά του TAP

– καρκίνου διευκολύνεται από ΤΑΡ1-έκφρασης, και ως εκ τούτου και τα δύο γονίδια θα πρέπει να θεωρούνται για τη θεραπεία του καρκίνου στο μέλλον

Παράθεση:. Λι XL, Liu YY, Ιππότης D, Odaka Υ, Mathis JM, Shi R, et al. (2009) Επίδραση Β7.1 Συνδιέγερση σε Τ-κυττάρων με βάση Θωράκιση έναντι του ΤΑΠ-Αρνητικό Καρκίνο μπορεί να διευκολυνθεί από την έκφραση ΤΑΡ1. PLoS ONE 4 (7): e6385. doi: 10.1371 /journal.pone.0006385

Επιμέλεια: Derya Unutmaz, New York University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 24 Μαρτίου 2009? Αποδεκτές: 18 του Ιουνίου 2009? Δημοσιεύθηκε: 24 Ιουλίου 2009

Copyright: © 2009 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη Λουιζιάνα Διοικητικό συμβούλιο της Regents, Feist-Weiller Κέντρο Καρκίνου, Λουιζιάνα μέλος Gene Therapy Προγράμματος και του Τμήματος Κυτταρικής Βιολογίας & amp? Ανατομίας στο LSU Κέντρο Επιστημών Υγείας-Shreveport. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Qian-Jin Zhang κατέχει μετοχές από TAPIMMUNE INC Xiao-Lin Li εν μέρει υποστηρίζεται μισθό της από TAPImmune Inc μέσω πανεπιστημίου της British Columbia, στον Καναδά πριν από τέσσερα χρόνια, όταν εργάστηκε στο πανεπιστήμιο της βρετανικής Κολομβίας του Καναδά. Τρέχουσα εργασία δεν έχει καμία υποστήριξη από την εταιρεία αυτή.

Εισαγωγή

Μια αποτελεσματική στρατηγική για την καταπολέμηση του καρκίνου είναι η επαγωγή CD8 ασυλίας

Τ-κυττάρων + [1]. Ωστόσο, οι όγκοι ελλιπής σε μείζονος συμπλέγματος ιστοσυμβατότητας τάξης Ι (MHC-I) παρουσίαση αντιγόνου συχνά αποφεύγουν ανοσοδιαμεσολαβούμενης καταστροφής [2], [3],. Ανεπάρκεια σε έκφραση ΤΑΡ συχνά παρατηρείται στον καρκίνο του ανθρώπου [2], [3]. ΤΑΡ αποτελείται από ΤΑΡ1 και ΤΑΡ2 υπομονάδες των οποίων η λειτουργία είναι να μεταφέρουν κυτοσολική δημιουργείται πεπτιδίων στον αυλό του ενδοπλασματικού δικτύου (ER) για MHC-I δέσμευσης, που ακολουθείται από μεταφορά των συμπλοκών ΜΗΟ /πεπτιδίου-Ι στην κυτταρική επιφάνεια. Η έλλειψη έκφρασης ΤΑΡ (ένας ή και οι δύο υπομονάδες) σε κύτταρα όγκου αναστέλλει γενικά την έκφραση του πεπτιδίου αντιγόνων ΤΑΡ εξαρτάται από την κυτταρική επιφάνεια, οδηγώντας σε αποτυχία των CD8 αναγνώρισης

+ Τ-κυττάρων.

Αν και παρουσίαση του πεπτιδικά αντιγόνα ΤΑΡ-εξαρτώμενη είναι περιορισμένη, ανεπαρκές ΤΑΡ κύτταρα είναι σε θέση να παρουσιάσει ΤΑΡ ανεξάρτητα αντιγόνα. Για παράδειγμα, το ποντίκι Τ-λεμφώματος κύτταρα RMA-S που εκφράζουν μόνο ΤΑΡ1 [6] και ανθρώπινα κύτταρα Τ2 Τ και τα υβριδικά Β οι οποίοι στερούνται και ΤΑΡ1 και γονίδια ΤΑΡ2 [7] μπορεί να παρουσιάσει μερικά MHC-Ι περιορισμένη ΤΑΡ ανεξάρτητος αντιγόνα που προέρχονται από πρωτεΐνες που βρίσκονται εντός ή εκτός των ER αυλού [8], [9], [10], [11], [12], [13]. Διαφορετικές ικανότητες για παρουσίαση αντιγόνου παρατηρούνται επίσης μεταξύ ΤΑΡ αρνητικών και ΤΑΡ1-θετικά κύτταρα όγκου. Gabathuler, R et al. αναφέρουν ότι η εισαγωγή του γονιδίου ΤΑΡ1 σε καρκινικά κύτταρα ΤΑΡ αρνητικές αλλαγές του τρόπου παρουσίασης αντιγόνου να μοιάζει με εκείνη των ΤΑΡ1-θετικών κυττάρων RMA-S, όπως φαίνεται από το γεγονός ότι ένα ιό που προέρχεται από αντιγόνο μπορεί να παρουσιάζεται αποτελεσματικά στην επιφάνεια του καρκινικά κύτταρα ΤΑΡ1-θετικούς, αλλά δεν ΤΑΠ-αρνητικά [14]. Ακόμα κι αν ΤΑΡ ανεξάρτητος αντιγόνα μπορούν να παρουσιαστούν με ΤΑΡ1-θετικά ή ΤΑΡ-αρνητικά κύτταρα όγκου, η αποτυχία των κυττάρων να επάγουν αποτελεσματικά ένα μεγάλο πληθυσμό των ογκο-αντιγόνου ειδικού CD8

Τ-κυττάρων + τελεστές μπορεί να είναι ένας σημαντικός λόγος περιοριστικό αποτελεσματικότητα της αντικαρκινικής ανοσίας. Τέτοια ανοσία κατά του όγκου μπορεί να αυξηθεί με την εισαγωγή ενός γονιδίου Β7.1 σε καρκινικά κύτταρα με ανεπαρκές ΤΑΡ, όπως εκθέσεις έδειξαν [13], [15].

Β7.1 είναι ένα συνδιεγερτικό μόριο που αλληλεπιδρά με CD28 σε Τ λεμφοκύτταρα και παίζει σημαντικό ρόλο στην ανοσολογική διέγερση. Όγκοι μεταγωγή με Β7.1 μπορεί να αποσπάσει CD8

Τ-κυττάρων + εξαρτώμενη αντικαρκινική αποκρίσεις [16], [17], [18]. Ειδικότερα, Β7.1 επιμολυσμένα ΤΑΡ1 κύτταρα που εκφράζουν RMA-S μπορεί να αποσπάσει Τ-κυτταρικών κλώνων που αντιδρούν με ΤΑΡ1 ή κύτταρα με έλλειψη όγκου ΤΑΡ2, αλλά όχι με τα κύτταρα ΤΑΡ αρμόδια όγκου [13]. Ένα τέτοιο Τ-κυτταρικό κλώνο αναγνωρίζει ένα αντιγόνο-Lass5-πρωτεΐνη που προέρχεται από ER-εντοπισμένη που παρουσιάζεται αποκλειστικά από RMA-S και άλλα κύτταρα με ανεπαρκές ΤΑΡ1 ΤΑΡ2 ή και προστατεύει τα ποντίκια από την πρόκληση RMA-S όγκου [13]. Αυτές οι μελέτες παρέχουν χρήσιμες πληροφορίες σχετικά με την εκκίνηση του βασίζεται ανοσία Τ-κυττάρων έναντι καρκινικών παραλλαγών ανοσολογική διαφυγή στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου. Ωστόσο, σε πολλές περιπτώσεις, ο καρκίνος του ανθρώπου εμφανίζει μια ΤΑΡ αρνητικό φαινότυπο, και επομένως είναι ακόμα ασαφές εάν η έκφραση Β7.1 σε αυτά τα κύτταρα όγκου μπορεί να προκαλέσει την προστατευτική ανοσία Τ-κυττάρων ή εάν η έκφραση και των δύο γονιδίων Β7.1 και ΤΑΡ1 είναι που απαιτείται για να δημιουργήσει μια τέτοια ασυλία.

σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε ένα μυϊκό καρκίνωμα πνεύμονα CMT.64 κυτταρική σειρά ως ένα πρότυπο σύστημα τηλέφωνο για να εξετάσει το ζήτημα αυτό. Τα κύτταρα είναι ελαττωματικά CMT.64 τόσο ΤΑΡ1 και ΤΑΡ2 σε μεταγραφικές και μεταφραστικές επίπεδα και εκφράζουν χαμηλά επίπεδα μορίων MHC-I [14], [19]. Εμείς μορφομετατραπέντα τα κύτταρα CMT.64 είτε με Β7.1 γονιδίου μόνες ή Β7.1 μαζί με γονίδια ΤΑΡ1 ποντίκι, και βρήκαν ότι μορφομετατροπείς επάγεται διαφορετικά αντικαρκινική ανοσοαποκρίσεις. Β7.1 και ΤΑΡ1 συν-έκφραση σε καρκινικά κύτταρα ελαττώνει σημαντικά την ογκογονικότητα τους ενώ η έκφραση Β7.1 μόνα τους στα κύτταρα δεν έχει καμία αλλαγή. Ωστόσο, και οι δύο συν-κύτταρα που εκφράζουν Β7.1 εκφράζουν και Β7.1 και ΤΑΡ1 αυξηθεί δραματικά την ικανότητα για την παραγωγή προστατευτικών ασυλιών στην υψηλή δόση ανοσοποίησης του όγκου. Κατά τη χαμηλή δόση ανοσοποίησης του όγκου, μόνο Β7.1 και ΤΑΡ1 συν-κύτταρα που εκφράζουν παρέχεται προστατευτική ανοσία. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι Β7.1 και ΤΑΡ1 συν-έκφραση σε καρκινικά κύτταρα είναι σημαντική για την Τ-κυττάρων πλήρωσης.

Αποτελέσματα

Β7.1 και έκφραση ΤΑΡ1 μειώνει ογκογονικότητας ανεπαρκές ΤΑΡ CMT. 64 κύτταρα μόνο σε Τ-κυττάρων ποντικών αρμόδια

για να αξιολογηθούν τα αποτελέσματα της έκφρασης Β7.1 επί ΤΑΡ1-θετικών και ΤΑΡ αρνητικά κύτταρα όγκου την ανοσία κατά του όγκου, πρέπει πρώτα αναλύθηκαν έκφραση των εισαχθέντων γονιδίων σε CMT.64 επιμολύνσεις. CMT.64 /PP, CMT.B7.1 /p, CMT.TAP1 /p, CMT.TAP1 /Β7.1 και CMT.TAP1,2 cl.21 κύτταρα επιμολύνθηκαν με δύο κενούς φορείς, Β7.1 + κενό φορέα , ΤΑΡ1 + κενό φορέα, ΤΑΡ1 + Β7.1 ή ΤΑΡ1 + ΤΑΡ2, αντιστοίχως (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι για λεπτομέρειες). Μετά την επιλογή φαρμάκου, οι επιμολύνσεις εξέφρασε τη σχετική γονίδιο (-α), εκτός από ένα CMT.64 /pp μορφομετατροπέα τα οποία δεν παρουσίαζαν ΤΑΡ1, ΤΑΡ2 ή έκφραση Β7.1 (Σχήμα 1Α και 1Β). Η γονιδιακή έκφραση ήταν σταθερή κατά τη διάρκεια της μελέτης. K

b και D

b έκφραση στα περισσότερα προϊόντα επιμόλυνσης ήταν παρόμοια με τα κύτταρα CMT.64 άγριου τύπου, εκτός από τα κύτταρα cl.21 CMT.TAP1,2 που εκφράζονται K

b και D

b μόρια σε επίπεδα υψηλότερα από ότι εκφράζεται σε άλλους (Εικ. 1Γ).

TAP, Β7.1, Κ

b και D

β έκφραση σε CMT.64 επιμολύνσεις προσδιορίστηκε. Α) πρωτεΐνες ΤΑΡ1 και ΤΑΡ2 ανιχνεύθηκαν σε επιμολύνσεις CMT.64 και τα κύτταρα RMA ελέγχου από κηλίδες Western χρησιμοποιώντας αντι-ΤΑΡ1 και ΤΑΡ2 πολύκλωνα αντισώματα αντιστοίχως (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). Επίπεδα έκφρασης του GAPDH πρωτεΐνης ανιχνεύθηκαν σε κάθε δείγμα ως έλεγχος φόρτωσης. Β) έκφραση Β7.1 σε CMT.B7.1 /p και κύτταρα /Β7.1 CMT.TAP1 ανιχνεύθηκε με δοκιμασίες FACS χρησιμοποιώντας FITC-συζευγμένο Β7.1-ειδικό mAb 16-10Α1. Έλεγχος είναι κύτταρα CMT.64 χρωματίστηκαν με mAb 16-10Α1. Γ) Κ

β ή D

b έκφραση ανιχνεύθηκε από προσδιορισμούς FACS χρησιμοποιώντας πρωτογενή μονοκλωνικά αντισώματα Υ-3 κατά της H-2K

β ή 28-14-8S έναντι H-2D

β ακολουθούμενη από χρώση με ένα ΡΙΤΟ-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού IgG δευτερογενή Ab. κύτταρα CMT.64 χρωματίστηκαν με πρωτεύον mAb 15-5-5S (έναντι H-2D

k) ακολουθούμενη από χρώση με FITC-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού IgG δευτερογενή Ab χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός έλεγχος. Α: αρνητικός μάρτυρας? β: CMT.64? c: CMT.64 /σ? δ: CMT.B7.1 /p? e: CMT.TAP1 /p? f: CMT.TAP1 /Β7.1? και g:. CMT.TAP1,2 cl.21

Η

Για να εκτιμηθεί κατά πόσον η έκφραση Β7.1 στα καρκινικά κύτταρα θα μπορούσε να μειωθεί ογκογενετικότητας, C57BL /6 ποντίκια ένεση με ζωντανά κύτταρα CMT.64 ή επιμολύνσεων , και τα ποσοστά επιβίωσης ή /και τους χρόνους καταγράφηκαν. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ. 2Α. Όλα τα ποντίκια ενέθηκαν ί.ρ. με CMT.64 ή κύτταρα /σελ CMT.64 (2 ομάδες ελέγχου) έχασαν τη ζωή τους πριν από την ημέρα 27 μετά από ενοφθαλμισμό των νεοπλασματικών κυττάρων. Σε αντίθεση με τα δύο χειριστήρια, CMT.TAP1 /ποντίκια Β7.1 φέρουν έδειξε ένα πολύ σημαντικό ποσοστό επιβίωσης (P«0.05), ακόμη και σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες ποντικών (P«0.05). Την ημέρα 100, το 30% των ποντικών ήταν ακόμη ζωντανοί. Ωστόσο, CMT.B7.1 /p-ποντικών που φέρουν δεν έδειξε σημαντική διαφορά, σε σύγκριση με δύο ομάδες ελέγχου (Ρ & gt? 0,05). CMT.TAP1 /p φέρουν ποντικούς έδειξε σημαντικό χρόνο επιβίωσης σε σύγκριση με τους δύο ελέγχους (Ρ & lt? 0,05), αλλά καμία διαφορά από τις CMT.B7.1 /ποντίκια που φέρουν ρ-(Ρ & gt? 0,05). Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος δείχνουν ότι μια σημαντική μείωση στην ογκογονικότητας διαμεσολαβείται από την έκφραση του Β7.1 μαζί με μόρια ΤΑΡ1 σε καρκινικά κύτταρα CMT.64.

Ο χρόνος νοσηρότητα καταγράφηκε για ποντικούς (κάθε ομάδα, n = 10) εμβολιάσθηκαν με ζώντα κύτταρα όγκου ή ανοσοποιηθεί με κύτταρα γ-ακτινοβολημένα και ακολουθείται από πρόκληση με κύτταρα CMT.64. Στατιστικές για την επιβίωση ποντικών ελήφθησαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία επιβίωσης log rank Kaplan-Meier και οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές σε Ρ & lt? 0.05. Α) Ογκογονικότητα ανιχνεύθηκε με ένεση C57BL /6 ποντίκια ί.ρ. με ζωντανά κύτταρα CMT.64 ή επιμολύνσεις τους (5 × 10

4 κύτταρα ανά ποντίκι). Β) Γυμνοί ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της ογκογονικότητας με όρους την ένεση του όγκου η ίδια όπως φαίνεται στο Α), Ρ & gt? 0,05 για όλες τις συγκρίσεις. Γ) C57BL /6 ποντίκια ανοσοποιήθηκαν ε.π. με διαφορετικά κύτταρα όγκου γ-ακτινοβολημένα ή PBS σε μια υψηλή δόση (αριστερά, 5 × 10

6 κύτταρα ανά ποντικό) ή ένα χαμηλής δόσης (δεξιά, 5 × 10

5 κύτταρα ανά ποντικό). Μετά από μια 20-ημερών ανοσοποίηση, οι ποντικοί προκλήθηκαν ενδοπεριτοναϊκώς με ζωντανή καρκινικά κύτταρα CMT.64 (2.5 × 10

5 κύτταρα ανά ποντίκι). Παρατηρήθηκαν διαφορετικά ποσοστά επιβίωσης ή /και τους χρόνους.

Η

Για να καθοριστεί εάν μειωμένη ογκογονικότητα των κυττάρων /Β7.1 CMT.TAP1 επιτεύχθηκε με τη μεσολάβηση Τ κυττάρων, γυμνά ποντίκια εμβολιάστηκαν με κύτταρα CMT.64 ή μορφομετατροπείς , και η επιβίωση προσδιορίστηκε. Το Σχήμα 2Β δείχνει ότι όλα τα ποντίκια πέθαναν σε 25-27 ημέρες, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα Τ κύτταρα έπαιξαν σημαντικό ρόλο στην ανοσολογική αντίδραση κατά των κυττάρων CMT.TAP1 /Β7.1, με αποτέλεσμα τη μείωση της ογκογονικότητας.

CMT. Β7.1 /p-ανοσοποίηση σε υψηλή δόση επάγει μια ανοσολογική απόκριση τόσο αποτελεσματική όσο CMTTAP1 /Β7.1-ανοσοποίηση αλλά είναι λιγότερο αποτελεσματική σε χαμηλή δόση

Αντικαρκινική ανοσοαποκρίσεις μπορεί να αυξηθεί με B7.1- καρκινικό κύτταρο που εκφράζει την ανοσοποίηση [16], [17], [18]. Για να εκτιμηθεί εάν προστατευτική ανοσία έναντι κυττάρων όγκου ΤΑΡ αρνητικό μπορεί να δημιουργηθούν με ανοσοποίηση είτε με ΤΑΡ1 κύτταρα που εκφράζουν CMT.TAP1 /Β7.1 ή ΤΑΡ-αρνητικά CMT.B7.1 /p κύτταρα, C57BL /6 ποντίκια ανοσοποιήθηκαν με διαφορετικά ποσότητες κυττάρων γ-ακτινοβολημένα που ακολουθείται από πρόκληση με κύτταρα CMT.64. Τα ποντίκια ελέγχου ανοσοποιήθηκαν με γ-ακτινοβολημένα κύτταρα /PP CMT.64. Τα αποτελέσματα δείχνουν εξαρτώμενη από τη δόση προστασία. Στην υψηλή δόση ανοσοποίησης (5 × 10

6 κύτταρα ανά ποντικό), και τα δύο CMT.TAP1 /Β7.1-ανοσοποιημένα και CMT.B7.1 /ποντίκια ρ-ανοσοποιημένους ήταν καλά προστατευμένη από ζώντα προσβολή όγκου (Σχ. 2C αριστερό πάνελ). Οι δύο ομάδες ποντικών έδειξε πολύ σημαντική ποσοστό επιβίωσης (100% επιζώντες), σε σύγκριση με το /ρ-ανοσοποιημένη ομάδα CMT.TAP1 ποντικού (60% επιζώντες, ρ & lt? 0,05). Η τελευταία ομάδα έδειξε ένα ποσοστό επιβίωσης σημαντικά υψηλότερο από ό, τι μια ομάδα ελέγχου ανοσοποιήθηκε με κύτταρα CMT.64 /pp ΤΑΠ-αρνητικό (P«0.05). Ωστόσο, κατά την χαμηλή δόση της ανοσοποίησης (5 × 10

5 κύτταρα ανά ποντικό), CMT.TAP1 /ποντίκια Β7.1 ανοσοποιημένα είχαν ποσοστό επιβίωσης μεγαλύτερο από CMT.B7.1 /p-ανοσοποιημένους ποντικούς (Σχ. 2C δεξιό πίνακα, P & lt? 0,05). Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στην επιβίωση παρατηρήθηκε μεταξύ CMT.B7.1 /ρ-ανοσοποιημένα και CMT.TAP1 /p-ανοσοποιημένους ποντικούς (Ρ & gt? 0,05). Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι στην υψηλή δόση ανοσοποίησης, Β7.1 και ΤΑΡ1 συν-έκφραση ή έκφραση Β7.1 μόνα καθιστά τα καρκινικά κύτταρα ισχυρά ανοσογόνα, ενώ σε χαμηλή δόση ανοσοποίησης, ισχυρός ανοσογονικότητα απαιτεί καρκινικά κύτταρα συν-εκφράζουν τόσο ΤΑΡ1 και Β7.1 μόρια.

CD8

+ Τ κύτταρα παίζουν σημαντικό ρόλο στην προστασία του ποντικιού

Για να προσδιοριστεί εάν η αυξημένη προστασία μετά Β7.1 εκφράζουν ανοσοποίηση όγκου που προκαλείται από ένα Τ-κύτταρο βάση ανοσοαπόκριση, χρησιμοποιήσαμε mAbs να καταστρέφουν CD8

+ ή CD4

+ Τ κυττάρων σε ποντικούς C57BL /6 πριν από την πρόκληση ανοσοποίησης και καρκινικών κυττάρων. Ποντίκια ενέθηκαν ί.ρ. με σχετική mAb κάθε άλλη ημέρα για την πρώτη εβδομάδα αναλύθηκαν με προσδιορισμούς FACS για CD8

+ ή CD4

+ πληθυσμό Τ-κυττάρων στο αίμα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η θεραπεία μείωσε δραματικά τον CD8

+ Τ-κυττάρων ή CD4

+ πληθυσμό Τ-κυττάρων (Σχ. 3Α). Anti-CD8 θεραπεία ειδικό mAb ελαττωμένη CD8

+ Τ κύτταρα από 17,66% έως 0,65%, και αντι CD4-ειδική θεραπεία mAb ελαττωμένη CD4

+ Τ κύτταρα από 19,22% σε 0,11%. Τ-κυττάρων υποπληθυσμό εξαντλημένα ποντίκια ενέθηκαν με γ-ακτινοβολημένα μορφομετατροπείς CMT.64, που ακολουθείται από πρόκληση με ζώντα κύτταρα CMT.64. Τα αποτελέσματα επιβίωσης φαίνεται στο Σχ. 3Β. Η θεραπεία ειδικό mAb αντι-CD8 μείωσε σημαντικά την επιβίωση των ποντικών που φέρουν όγκο. Δεν υπήρχε βιολογικά σημαντική διαφορά μεταξύ κάθε δοκιμαζόμενο-ομάδας και της ομάδας ελέγχου (CMT.64 /PP-ανοσοποιημένους ποντικούς). Επιπλέον, η θεραπεία ειδικό mAb αντι-CD4 μειωθεί μερικώς επιβίωση της κάθε δοκιμή-ομάδα, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (P«0.05). Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η προστασία των ποντικών από πρόκληση όγκου πλήρως εξαρτάται από CD8

+ Τ κύτταρα και μερικώς εξαρτάται από CD4

+ Τ κύτταρα.

Ποντίκια (κάθε ομάδα, n = 10) εγχύθηκαν ί.ρ. με mAbs GK1.5 για CD4

+ Τ κύτταρα ή 2,43 για CD8

+ Τ κύτταρα (0,1 ml ανά ποντικό) κάθε δεύτερη ημέρα για την πρώτη εβδομάδα και μία φορά την εβδομάδα αργότερα να καταστρέφουν σχετικό Τ-κυττάρων υπο-πληθυσμός . Α) πριν από γ-ακτινοβολημένα κυττάρου όγκου ανοσοποίηση, εξάντληση των CD8

+ ή CD4

+ υποσύνολα κυττάρων Τ εκτιμήθηκε στο αίμα με δοκιμασίες FACS χρησιμοποιώντας ΡΙΤΟ-συζευγμένο αντι-ποντικού CD8a (5H1-1) ή ΡΙΤΟ-συζευγμένο CD4 αντι-ποντικού (RM4-4) μαζί με ΡΕ /Cy5-συζευγμένο αντι-ποντικού CD3 (145-2C11). Οι συχνότητες των CD8

+ ή CD4

+ Τ κύτταρα ανιχνεύθηκαν πριν από την αγωγή mAb (υποδεικνύεται ως κανονικό) και μετά από πρώτη εβδομάδα της θεραπείας mAb και πριν γ-ακτινοβολημένα κυττάρου όγκου ανοσοποίηση (που υποδεικνύεται ως mAb-θεραπεία). Β) Μετά από μια 20-ημερών ανοσοποίηση με κύτταρα όγκου γ-ακτινοβολημένα (5 × 10

6 κύτταρα ανά ποντικό) οι ποντικοί προκλήθηκαν ϊ.ρ. με ζωντανή καρκινικά κύτταρα CMT.64 (2.5 × 10

5 κύτταρα ανά ποντίκι). Ο χρόνος της νοσηρότητας καταγράφηκε.

Η

Παρουσίαση του ΤΑΡ ανεξάρτητου αντιγόνου Lass5 από τα καρκινικά κύτταρα με ανεπαρκές ΤΑΡ

Το γεγονός ότι Β7.1 εκφράζουν καρκινικά κύτταρα με ελαττωματικό ΤΑΡ μπορούν να δημιουργήσουν μια CD8

+ Τ-κυττάρου ανοσοαπόκριση έναντι κυττάρων όγκου ΤΑΡ αρνητικά υποδηλώνει ότι τα κύτταρα του όγκου παρόν ΤΑΡ ανεξάρτητο αντιγόνο (α) για Τ-κυττάρων αστάρωμα. Για να προσδιορίσετε αν αυτό είναι αλήθεια, έχουμε επικεντρωθεί στην D

b-περιορισμένη Lass5 επιτόπου MCLRMTAVM, ένα αντιγόνο που παρουσιάζεται από πολλούς ανεπαρκές ΤΑΡ κύτταρα [13]. CMT.64 και CMT.TAP1,2 κύτταρα cl.21 εκφράζουν το γονίδιο Lass5 όπως υποδεικνύεται με πραγματικού χρόνου PCR (Εικ. 4Α αριστερά). Ωστόσο, ΤΑΡ1-επιμολυσμένα κύτταρα CMT.64 ΤΑΡ αρνητικά και όχι ΤΑΠ-ικανά κύτταρα CMT.TAP1,2 cl.21 σκοτώθηκαν από έναν πληθυσμό Τ-κυττάρων που δημιουργούνται από την ανοσοποίηση με το πεπτίδιο Lass5 παλμικά RMA-S /κύτταρα Β7.1 όπως καθορίζεται από μια παρατεταμένη (12-16 h)

δοκιμασία 51Cr-απελευθέρωσης (Σχ. 4Α δεξιά). Τα κύτταρα cl.21 CMT.TAP1,2 ΤΑΡ αρμόδια σκοτώθηκαν μόνο όταν σημάνθηκαν με Lass5 πεπτίδιο (Εικ. 4α δεξιά), γεγονός που υποδηλώνει ότι τα κύτταρα δεν παρουσιάζουν αποτελεσματικά αυτό το επιτόπιο.

Α) αριστερά : RT-PCR πραγματοποιήθηκε για να ανιχνεύσει δύο συγκολλημένα (θετικές και αρνητικές) μεταγραφές γονίδιο Lass5 [13] σε CMT.64, CMT.TAP1,2, cl.2 και τα κύτταρα RMA-S. Μόνο η μεγάλη μεταγραφή κωδικοποιεί ένα επιτόπιο Lass5 [13]. Α) Δεξιά: Lass5 παρουσίαση επιτόπου με ανεπαρκές ΤΑΡ και ΤΑΠ-καλά κύτταρα CMT.64 ανιχνεύθηκε από 12-16 h

προσδιορισμούς 51Cr-απελευθέρωσης. Lass5 ειδικά Τ κύτταρα δημιουργήθηκαν από ί.ρ ανοσοποίηση με κύτταρα Β7.1 γ-ακτινοβολημένα RMA-S /παλλόμενα με 5 μΜ Lass5 πεπτιδίου. Τα ανοσοποιημένα σπληνοκύτταρα επανα-διεγέρθηκαν

in vitro

με εμφυτευμένα πεπτίδια γ-ακτινοβολημένα RMA-S /κυττάρων Β7.1 Lass5 για 5 ημέρες. Ένα από τα τρία πειράματα. Β) Αριστερά: 12-16 h

προσδιορισμούς 51Cr-απελευθέρωσης διεξήχθησαν για να επιβεβαιωθεί ότι η ΝΡ

366-374 επίτοπο ειδικό πληθυσμό Τ-κυττάρων που παράγονται από ανοσοποίηση με γ-ακτινοβολημένα RMA-S /κύτταρα Β7.1 παλμική με 5 μΜ NP

366-374 πεπτίδιο δεν περιείχαν Τ-κυττάρων υπο-πληθυσμούς αναγνωρίζοντας ΤΑΠ-ανεξάρτητο επιτόπων που υπάρχουν από CMT.64 και επιμολύνσεις του. Οι

51 Cr-επισημασμένο στόχοι φαίνεται στο σχήμα 4Β. Β) Δικαίωμα: Τυπική

προσδιορισμούς 51Cr-απελευθέρωσης διεξήχθησαν για να επιβεβαιωθεί ότι ανεπαρκές ΤΑΡ επιμολύνσεις CMT.64 δεν παρουσίασε ΤΑΠ-εξαρτάται από ΝΡ

366 – 374 επιτόπου όταν τα κύτταρα μολύνθηκαν για μία νύχτα με VV μεταφέρουν NP

366-374 μινιγονίδιο σε πολλαπλότητα μόλυνσης (ΜΟΙ) 3. Οι

51Cr-σημασμένο στόχοι φαίνεται στο σχήμα 4Β. Η ΝΡ

366-374 επίτοπο ειδικά Τ-κύτταρα που δημιουργούνται από την ανοσοποίηση με γ-ακτινοβολημένα RMA-S κυττάρων /Β7.1 παλλόμενα με 5 μΜ ΝΡ

366-374 πεπτίδιο και επαναδιεγείρονται με 5 μΜ ΝΡ

366-374 πεπτίδιο in vitro. Δοκιμασία Γ) Ο ELISPOT διεξήχθη για την ανίχνευση ειδικών προδρόμων IFN-γ που εκκρίνουν Lass5. Οι ποντικοί ανοσοποιήθηκαν με γ-ακτινοβολημένα CMT.64 /ΡΡ, CMT.TAP1,2, CMT.B7.1 /p και κύτταρα /Β7.1 όγκου CMT.TAP1. Τα ανοσοποιημένα σπληνοκύτταρα διεγέρθηκαν με ή χωρίς πεπτίδιο Lass5. Προσδιορίστηκε ο αριθμός των, IFN-γ που εκκρίνει προδρόμους Lass5 αντιγόνου-ειδική. συχνότητα προδρόμου αναφέρεται ως IFN-γ-κυττάρων που εκκρίνουν ανά 10

6 σπληνοκυττάρων (IFN-γ-SC /10

6 σπληνοκύτταρα).

Η

Επειδή ο πληθυσμός των Τ-κυττάρων παρήχθη με RMA-S /κυττάρων Β7.1 παλλόμενα με πεπτίδιο Lass5, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε την πιθανότητα ότι ο πληθυσμός των Τ-κυττάρων περιέχει υπο-πληθυσμούς άλλων επιτόπου-ειδικών Τ κυττάρων που σκοτώνουν τα καρκινικά κύτταρα με ελαττωματικό ΤΑΡ. Αυτό συμβαίνει επειδή τα κύτταρα RMA-S /Β7.1 χρησιμοποιούνται για ανοσοποίηση έχουν αναφερθεί ότι είναι σε θέση να παράγουν πολλούς διαφορετικούς K

b και D

b περιορισμένων Τ-κυτταρικών κλώνων [13]. Για να εξαλειφθεί αυτή η δυνατότητα, δημιουργήσαμε ένα D

b-περιορισμένη γρίπης ΝΡ

366-374 (ASNENMDTM) επιτόπιο ειδικό πληθυσμό Τ-κυττάρων από ανοσοποίηση με RMA-S /κύτταρα Β7.1 πάλλονται με ΝΡ

366 -374 πεπτιδίου χρησιμοποιώντας συνθήκες παρόμοιες με εκείνες για Lass5 συγκεκριμένη παραγωγή Τ-κυττάρων. Τα καρκινικά κύτταρα δεν εκφράζουν γρίπης ΝΡ

366-374 επίτοπο και έτσι ΝΡ

366-374 επιτόπιο ειδικά Τ κύτταρα δεν θα πρέπει να αναγνωρίσουν τα καρκινικά κύτταρα. Αν ο πληθυσμός των Τ-κυττάρων περιέχει ΝΡ

366-374 επίτοπο άσχετο Τ κύτταρα, ο πληθυσμός αυτός Τ-κυττάρων μπορεί είτε να σκοτώσουν τα καρκινικά κύτταρα με ανεπαρκές ΤΑΡ ή αποτυγχάνουν να σκοτώσουν τα κύτταρα. Εάν τα Τ-κύτταρα σκοτώνουν τα καρκινικά κύτταρα αυτό υποδηλώνει ότι ΤΑΡ ανεξάρτητο επίτοπο ειδικά Τ-κύτταρα, εκτός από ΝΡ

366-374 επίτοπο, μπορεί να συν-παράγονται από ανοσοποίηση με RMA-S /κυττάρων Β7.1 παλλόμενα με το NP

366-374 πεπτίδιο. Εάν τα Τ-κύτταρα δεν σκοτώνουν τα κύτταρα του όγκου Αυτό υποδηλώνει ότι η πεπτιδο-παλλόμενα RMA-S /κύτταρα Β7.1 δημιουργήσει ένα πληθυσμό Τ-κυττάρων που περιέχουν Τ-κύτταρα που αναγνωρίζουν επιλεκτικά το επιτόπιο πεπτίδιο που χρησιμοποιείται για ανοσοποίηση. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα παραγόμενα κύτταρα Τ δεν μπορεί να σκοτώσει είτε με ανεπαρκές ΤΑΡ ή ΤΑΡ αρμόδια κύτταρα όγκου εκτός από CMT.64 κύτταρα παλλόμενα με ΝΡ

366-374 πεπτίδιο (σχ. 4Β αριστερά). Έτσι, τα αποτελέσματά μας επιβεβαιώνουν ότι οι ανεπαρκές ΤΑΡ καρκινικά κύτταρα παρούσα επίτοπο Lass5 για αναγνώριση Τ-κυττάρων. Σε αντίθεση με ΤΑΡ ανεξάρτητη παρουσίαση επίτοπο Lass5, τα καρκινικά κύτταρα με ελαττωματικό ΤΑΡ δεν ήταν σε θέση να παρουσιάσει την ΤΑΡ εξαρτώμενα και D

b-περιορισμένο ΝΡ

366-374 επίτοπο όταν τα κύτταρα μολύνθηκαν με VV φέρει το ΝΡ

366-374 μικρογονίδιο (Σχήμα 4 Β δεξιά).

Για να προσδιορίσετε αν CMT.TAP1 /Β7.1, CMT.B7.1 /p, CMT.TAP1 /p και κύτταρα /σελ CMT.64 είναι σε θέση να αποσπάσουν Lass5 ειδικά Τ κύτταρα, τα κύτταρα εγχύθηκαν ΙΡ σε ποντικούς C57BL /6, και ΙΡΝ-γ που εκκρίνει σπληνοκύτταρα ποσοτικά χρησιμοποιώντας μία δοκιμασία ELISPOT. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4C, μια μεγάλη αύξηση στον αριθμό των Lass5 ειδικών ΙΡΝ-γ που εκκρίνει σπληνοκυττάρων παρατηρήθηκε σε ποντικούς που έχουν ανοσοποιηθεί είτε με CMT.TAP1 /Β7.1 ή /p κύτταρα CMT.B7.1 σύγκριση με ποντικούς ανοσοποιημένους με CMT.TAP1 /p ή κύτταρα CMT.64 /σελ. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι ΤΑΡ-αρνητικών και ΤΑΡ1-καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν ΤΑΡ μπορούν να παρουσιάσουν-ανεξάρτητα αντιγόνα, συμπεριλαμβανομένων αντιγόνων Lass5 και ότι η έκφραση Β7.1 στα κύτταρα όγκου παρέχει καλύτερη εκκίνηση των Τ-κυττάρων.

Ανοσοποίηση με CMT. 64 κύτταρα μολυσμένα με τους δύο VV-Β7.1 και VV-ΤΑΡ1 αυξάνει την προστασία ποντικών από πρόκληση όγκου

μια πιθανή μέθοδος για πιο αξιόπιστη ανοσοθεραπεία του καρκίνου είναι η χρήση ενός γονιδίου που φέρει τον φορέα που βασίζονται σε ιό για να μολύνει κύτταρα για ανοσοποίηση. Δεδομένου ότι η ανοσοποίηση με μια υψηλή δόση Β7.1 ή Β7.1 + ΤΑΡ1 επιμολυσμένα κύτταρα δραματικά προστάτευσε τα ποντίκια από πρόκληση όγκου (Σχ. 2C αριστερά), προσδιορίσαμε αν η ανοσοποίηση των ποντικών με κύτταρα CMT.64 γ-ακτινοβολημένα μολύνθηκαν με VV-B7 0.1 + VV-CR19 (ιός άγριου τύπου) ή VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1 έχουν προστασία παρόμοια με ποντικούς ανοσοποιημένους με κύτταρα όγκου γονίδιο-επιμολυσμένα. Αναλύσαμε πρώτα Β7.1 και την έκφραση ΤΑΡ1 σε κύτταρα που έχουν μολυνθεί CMT.64 τη διάρκεια της νύχτας με VV-Β7.1 + VV-CR19 ή VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1. Παρατηρήσαμε ότι Β7.1 και ΤΑΡ1 ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται στα κύτταρα μολυσμένα με σχετική ννε (Εικ. 5Α).

CMT.64 κύτταρα μολύνθηκαν επί μία νύκτα με ένα συνδυασμό των δύο ννε σε ΜΟΙ 3 για κάθε VV . Α) έκφραση Β7.1 ανιχνεύθηκε με FACS δοκιμασία χρησιμοποιώντας FITC-συζευγμένο Β7.1-ειδικό mAb 16-10Α1. κύτταρα CMT.64 χωρίς ιική μόλυνση χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός έλεγχος. έκφραση ΤΑΡ1 ανιχνεύθηκε με στύπωμα Western χρησιμοποιώντας ένα πολυκλωνικό ΤΑΡ1 κατσίκας αντι-ποντικού Ab. κύτταρα RMA-S, χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος. Β) Πρότυπο

προσδιορισμούς 51Cr-απελευθέρωσης διεξήχθησαν για να εντοπίσει αν ιικά μολυσμένα κύτταρα του όγκου που επλήγησαν παρουσίαση των αντιγόνων ενδογενούς όγκου. κύτταρα όγκου CMT.64 μολύνθηκαν επί μία νύκτα με VV-GFP + VV-GFP, VV-Β7.1 + VV-GFP, ή VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1, και χρησιμοποιούνται ως κύτταρα-στόχους. κυτταρικές σειρές ελέγχου ήταν CMT.64, CMT.B7.1 /p και CMT.TAP1 /Β7.1. Όγκου αντιγόνου-ειδικά Τ κύτταρα δημιουργήθηκαν με ανοσοποίηση με γ-ακτινοβολημένα CMT.B7.1 /p κύτταρα. αναλογία στόχου και τελεστή χρησιμοποιήθηκε σε 1:100. α: CMT.64? β: CMT.B7.1 /p? c: CMT.TAP1 /Β7.1? δ: CMT.64 + VV-GFP + VV-GFP? e: CMT.64 + VV-Β7.1 + VV-GFP και f: CMT.64 + VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1. ** Υποδεικνύει στατιστική σημασία (P«0.05) χρησιμοποιώντας ανάλυση ANOVA.

Η

μόλυνση VV Αγρίου τύπου μπορεί να αναστέλλει την παρουσίαση αντιγόνου σε δενδριτικά κύτταρα [20] και να μειώσει μολυσμένων βιωσιμότητα των κυττάρων. Για να αποφευχθούν αυτά τα αποτελέσματα, χρησιμοποιήσαμε ένα ανασυνδυασμένο VV-GFP να υποκαταστήσει άγριου τύπου VV-CR19 για μόλυνση που βασίζονται σε ιούς κυττάρων και ανοσοποίηση. Ποντίκια ανοσοποιήθηκαν ε.π. με κύτταρα CMT.64 (5 × 10

6 κύτταρα /ποντίκι) που έχουν μολυνθεί με VV-GFP + VV-GFP, VV-Β7.1 + VV-GFP, ή VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1, που ακολουθείται από πρόκληση με ζώντα κύτταρα CMT.64 και τα ποσοστά επιβίωσης προσδιορίστηκαν. Τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 1. Ποντικοί ανοσοποιημένοι με VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1 μολυσμένα CMT.64 κύτταρα έδειξαν σημαντικά αυξημένο ποσοστό επιβίωσης, σε σύγκριση με τα ποντίκια που ανοσοποιήθηκαν με τα κύτταρα που μολύνθηκαν με VV-GFP + VV-GFP (ποντίκια ελέγχου ? Ρ & lt? 0,05), ενώ δεν παρατηρήθηκε καμία διαφορά μεταξύ των ποντικών ελέγχου και ποντίκια ανοσοποιημένα με τα κύτταρα που έχουν μολυνθεί με VV-Β7.1 + VV-GFP (Ρ & gt? 0,05). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι για την ανοσοποίηση με ένα ιικά μολυσμένων κυττάρων σύστημα, η συν-έκφραση του Β7.1 και ΤΑΡ1 σε κύτταρα είναι απαραίτητο για να αυξήσει την προστατευτική ανοσία κατά του όγκου.

Η

Δεδομένου ότι η ανοσοποίηση με κύτταρα που εκφράζουν Β7. 1 μόνη έδειξαν διαφορετικά προστατευτικά Τ-κύτταρο ανοσοαποκρίσεων μεταξύ ενός ιικά μολυσμένων κυτταρικό σύστημα και ένα σύστημα κυττάρου γονίδιο-επιμολυσμένα σε δόση 5 × 10

6 κύτταρα ανά ανοσοποίηση ποντικού, εμείς εικάζουν ότι ιικώς προερχόμενα αντιγόνα επηρεάσει την παρουσίαση του ΤΑΡ ανεξάρτητη από ενδογενή αντιγόνα όγκου, μειώνοντας έτσι την ικανότητα των καρκινικών κυττάρων για Τ-κυττάρων αστάρωμα. Για να αξιολογηθεί αυτή η πιθανότητα, πρότυπο

δοκιμασίες 51Cr-απελευθέρωσης διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας κυτταρολυτικά Τ κύτταρα που παράγονται με ανοσοποίηση με γ-ακτινοβολημένα CMT.B7.1 /p κύτταρα (5 × 10

6 κύτταρα /ποντικό). κύτταρα CMT.64 μολυνθεί με VV-Β7.1 + VV-ΤΑΡ1, VV-Β7.1 + VV-GFP ή VV-GFP + VV-GFP τη διάρκεια της νύχτας, χρησιμοποιήθηκαν ως στόχοι και VV-μη μολυσμένα CMT.64, CMT.B7. 1 /p και CMT.TAP1 /Β7.1 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5Β, αναγνώριση των μολυσμένα με ιό κύτταρα από τα Τ κύτταρα ήταν σημαντικά μειωμένη, σε σύγκριση με σχετικούς ελέγχους.

Στο σύνολό τους, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η αποτελεσματική εμβολιασμός με μολυσμένα με ιούς TAP-αρνητικά κύτταρα απαιτεί τόσο Β7.1 και ΤΑΡ1 συνεργασία έκφραση στα κύτταρα του όγκου.

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη καταδεικνύει ότι Β7.1 και ΤΑΡ1 συν-έκφραση σε κύτταρα CMT.64 ΤΑΡ-αρνητικά καθιστά τα καρκινικά κύτταρα ισχυρά ανοσογόνα ικανά να επάγουν αποτελεσματικά μια CD8

Τ-κυττάρων + ανοσοαπόκριση έναντι ΤΑΡ-αρνητικών όγκων. Που προκαλείται από CD8

+ Τ κύτταρα πιθανό να αναγνωρίζουν τα αντιγόνα του ΤΑΠ-ανεξάρτητο παρουσιάζονται από τα καρκινικά κύτταρα με ελαττωματικό ΤΑΡ. Τρεις σημαντικοί παράγοντες, ΤΑΡ1, Β7.1 και η ποσότητα του αντιγόνου (ων) φαίνεται να συμβάλλουν στην CMT.64 κυττάρου όγκου εκκίνηση των Τ κυττάρων.

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι με μια χαμηλή δόση του γ-ακτινοβολημένων κυττάρων ανοσοποίηση, οι ΤΑΡ1 και Β7.1 συν-εκφράζουν CMT.TAP1 κύτταρα /Β7.1 δημιουργείται μια αντικαρκινική ανοσολογική απόκριση μεγαλύτερη από εκείνη που προκαλείται από τους ΤΑΡ-αρνητικών και Β7.1 εκφράζουν CMT.B7.1 /p κύτταρα (Σχ. 2C δικαίωμα). Αυτό δείχνει ότι η έκφραση ΤΑΡ1 διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ενίσχυση των Τ-κυττάρων εκκίνησης που υποδεικνύει ότι η έκφραση ΤΑΡ1 μπορεί να διευκολύνει την αποτελεσματική παρουσίαση των αντιγόνων όγκου ΤΑΡ ανεξάρτητη. Η δυνατότητα της αποδοτικής παρουσίαση του αντιγόνου (ων) υποστηρίζεται από το Σχ. 5Β (διαδρομές b και c) η οποία δείχνει ότι CMT.B7.1 /p επαγόμενη Τ κύτταρα θανατώνονται στόχους CMT.TAP1 /Β7.1 από την καλύτερη από /p στόχους CMT.B7.1. Ένας πιθανός μηχανισμός της αυξημένης παρουσίαση αντιγόνου από ΤΑΡ1 είναι ότι η παρουσίαση «στηρίγματα» έκφραση του ορισμένων αντιγόνων (εκτός από ER-αυλού προερχόμενο αντιγόνα τα οποία μπορούν να παρουσιαστούν από τα δύο ΤΑΡ-αρνητικά και ΤΑΡ1-postive κύτταρα) που εκφράζονται στην κυτταρική επιφάνεια για αναγνώριση Τ-κυττάρων και /ή Τ-κυττάρων αστάρωμα. Η δυνατότητα αυτή υποστηρίζεται από στοιχεία που αποδεικνύουν ότι μια πρωτεΐνη πυρηνοκαψιδίου του ιού της φυσαλιδώδους στοματίτιδας προέρχεται επιτόπου VSV-ΝΡ

52-59 που παράγεται στο κυτταρόπλασμα μπορεί να υποβληθεί από ΤΑΡ1 εκφράζοντας CMT.64 κύτταρα πιο αποτελεσματικά από τα κύτταρα CMT.64 ΤΑΠ-αρνητικό [14]. Τα ευρήματά μας υπογραμμίζουν την πολλαπλότητα των ανοσολογικών αποκρίσεων έναντι όγκων, τα οποία είναι ενσωματωμένο στο κυτταρικό ανοσοποιητικό σύστημα. Η σημασία αυτών των ευρημάτων θα πρέπει να μελετηθεί περαιτέρω, ειδικά για την αναγνώριση του ΤΑΡ ανεξάρτητων επιτόπων που είναι καλά διαμορφωμένα και για τα χαρακτηριστικά του επιτόπου ειδικών Τ κυττάρων.

έκφραση Β7.1 σε καρκινικά κύτταρα μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην μειώνοντας το όριο για το αντιγόνο-ειδικών Τ-κυττάρων αναρρόφησης [21], [22], [23]. Αυτή η δυνατότητα υποστηρίζεται από την παρατήρηση μας ότι Τ-κυττάρων που προκαλείται αντι-CMT.64 ανοσία όγκου μπορεί να αυξηθεί με Β7.1 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με Β7.1 αρνητικά κύτταρα όγκου (Σχ. 2C αριστερά). Μηχανισμοί που εμπλέκονται στην ενεργοποίηση Τ κυττάρων εναντίον όγκων CMT.64 με Β7.1 εκφράζουν κύτταρα με ανεπαρκές ΤΑΡ μπορεί να είναι κατά προτίμηση μέσω του όγκου απευθείας εκκίνηση και όχι δενδριτικά κύτταρα (DC) διασταυρούμενη εκκίνηση. Αυτό εξηγεί γιατί η ανοσοποίηση με Β7.1 εκφράζουν CMT.64 κυττάρων που επάγεται ένα υψηλό επίπεδο ανοσίας αντι-CMT.64-όγκου ενώ η ανοσοποίηση με κύτταρα CMT.64 Β7.1-αρνητικά παρέχονται σημαντικά λιγότερο ανοσία. Η διασταυρούμενη εκκίνηση απαιτεί επαγγελματική παρουσίασης αντιγόνου DCs να συλλάβει αντιγονικές πρωτεΐνες από αποπτωτικά κύτταρα και να επεξεργαστεί και να παρουσιάσει τα δημιουργούνται επιτόπων Τ-κυττάρων εκκίνησης σε ένα ΤΑΠ-εξαρτώμενο τρόπο [24]. Έτσι, ΤΑΡ-ανεξάρτητο επίτοπους που εκφράζονται σε κύτταρα CMT.64 δεν μπορούν να παρουσιάζονται στην επιφάνεια της DC για Τ-κυττάρων αστάρωμα, επειδή αυτά τα επιτόπια παρόμοια με τα πεπτίδια που παρουσιάζονται σε κύτταρα με ανεπαρκές ΤΑΡ RMA-S [25] γενικά εμφανίζουν χαμηλή ικανότητα για MHC-I δέσμευσης, και ως εκ τούτου δεν μπορεί να ανταγωνιστεί με ΤΑΡ εξαρτώμενα επιτόπια για δέσμευση MHC-I και επιφανειακή έκφραση της DC.

Η ποσότητα του αντιγόνου (ων) που χρησιμοποιούνται για ανοσοποίηση επηρεάζει άμεσα την αντοχή των παραγόμενων κατά του όγκου ανοσίας όπως επιβεβαιώνεται από τα αποτελέσματα μας σχετικά με δοσο-εξαρτώμενη ανοσοποίηση με κύτταρα γ-ακτινοβολημένα (Σχ. 2C αριστερά και δεξιά). Με ανοσοποίηση υψηλή δόση των κυττάρων, ιδιαίτερα προστατευτικό ασυλίες δημιουργήθηκαν τόσο από CMT.TAP1 /Β7.1 και CMT.B7.1 /p κύτταρα. Αυτό υποδηλώνει ότι και οι δύο γ-ακτινοβολημένα κυτταρικές γραμμές που τροφοδοτούνται αποτελεσματική ποσότητες ΤΑΡ ανεξάρτητων αντιγόνων για την επαγωγή των Τ-κυττάρων. Με μια χαμηλή δόση ανοσοποίησης, ΤΑΡ1-θετικά κύτταρα CMT.TAP1 /Β7.1 διεγερθεί το ανοσοποιητικό σύστημα να παράγει προστατευτική ανοσία καλύτερη από ΤΑΡ-αρνητικά CMT.B7.1 /p κύτταρα. Αυτό υποδηλώνει ότι ΤΑΡ1 και Β7.1 συν-έκφραση CMT.TAP1 κύτταρα /Β7.1 παρέχουν ΤΑΠ-ανεξάρτητα αντιγόνα για Τ-κυττάρων αναρρόφησης περισσότερο από αυτό που παρέχεται από τα Β7.1 εκφράζουν /p κύτταρα CMT.B7.1.

Μια πρόσφατη έκθεση απεικονίζεται ότι η ανοσοποίηση με ΤΑΡ1 κύτταρα που εκφράζουν Β7.1-επιμολυσμένα RMA-S προκάλεσε προστατευτική ανοσία βασίζεται Τ-κυττάρων εναντίον κυττάρων RMA-S [13]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν περαιτέρω ότι η ανοσοποίηση με είτε ΤΑΡ1 εκφράζουν ή ΤΑΡ-αρνητικά κύτταρα όγκου που εκφράζουν Β7.1 μπορεί να εκμαιεύσει αποτελεσματική Τ κύτταρο ανοσοαπόκριση έναντι ΤΑΡ-αρνητικών πρόκληση όγκου. Σε μια τέτοια προστατευτική ανοσία, CD8

+ Τ κύτταρα έπαιξε σημαντικό ρόλο στην απόκριση στο ΤΑΠ-αρνητικά καρκινικά κύτταρα, ενώ CD4

+ Τ κύτταρα είχαν σημαντικό ρόλο. Εφόσον τα κύτταρα CMT.64 δεν εκφράζουν MHC κατηγορίας II μόρια, μια σημαντική λειτουργία του CD4

+ Τ κυττάρων μπορεί να είναι η στήριξη CD8

Τ-κυττάρων + αποκρίσεις σε κύτταρα όγκου [26], [27], [28