Αφηρημένο

Προηγούμενες μελέτες παρατήρησης έχουν αναφερθεί συσχετίσεις μεταξύ του καρκίνου του προστάτη και άλφα-λινολενικό οξύ (ALA). Ωστόσο, λίγες έρευνες έχουν τη δυνατότητα να μελετήσει τη σχέση αυτή μελλοντικά και σε καλά ελεγχόμενες ρυθμίσεις. Επιπλέον, καμία μελέτη δεν έχει εξακριβωθεί αν οι πολυμορφισμοί ενός νουκλεοτιδίου (SNPs) που επηρεάζουν το μεταβολισμό ΑΛΑ που σχετίζονται με αυτό το κοινό καρκίνο. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνήσει τις ενώσεις μεταξύ του προστάτη επίπεδα του ALA, SNPs και τον καρκίνο του προστάτη-ειδικών βιοδεικτών σε δείγματα που συλλέχθηκαν από μια προηγούμενη τυχαιοποιημένη κλινική δοκιμή που διεξάγεται χρησιμοποιώντας ένα προεγχειρητικές μοντέλο και οι οποίες εξέτασαν τα αποτελέσματα της λιναρόσπορο συμπληρώματα, μια πλούσια πηγή ALA , πριν από την προστατεκτομή (n = 134). Ορός προστατικό ειδικό αντιγόνο (PSA) προσδιορίστηκε και ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση του ρυθμού πολλαπλασιασμού του όγκου (Κί67). Προστάτη ALA προσδιορίστηκε με αέρια χρωματογραφία. Επτά προηγουμένως εντοπιστεί SNPs που σχετίζονται με την δέλτα-6 δεσατουράσης (rs99780, rs174537, rs174545, rs174572, rs498793, rs3834458 και rs968567) ελέγχθηκαν για συσχετίσεις με προστάτη ALA, PSA και Κί67. Παρά καταναλώνει επτά φορές περισσότερο ALA ανά ημέρα, οι άνδρες στο λιναρόσπορο βραχίονα είχαν παρόμοιες ποσότητες του προστάτη ALA σε σχέση με τους άνδρες που δεν καταναλώνουν λιναρόσπορο. Σε αδιόρθωτη ανάλυση, υπήρχαν σημαντικές θετικές συσχετίσεις μεταξύ του προστάτη ΑΛΑ και PSA (ρ = 0,191, p = 0,028) και Ki67 (ρ = 0.186, p = 0.037). Μετά από προσαρμογή για συμπαράγοντες (λιναρόσπορος, την ηλικία, τη φυλή, το ΒΜΙ και στατίνη χρήση), η συσχέτιση μεταξύ της ΑΛΑ και PSA παρέμειναν (p = 0,004), αλλά ήταν ελαφρώς εξασθενημένος για Ki67 (p = 0,051). Εμείς δεν τήρησε τις ενώσεις μεταξύ οποιουδήποτε από τα SNPs μελετηθεί και του προστάτη ALA? Ωστόσο, σε μοντέλα για την PSA υπήρχε μια σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ rs498793 και ΑΛΑ και για Ki67 υπήρχαν σημαντικές αλληλεπιδράσεις με ALA και rs99780 και rs174545. Ανεξάρτητη και οι αρνητικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ rs174572 και Κί67. Αυτή η μελέτη παρέχει στοιχεία που αποδεικνύουν ότι προστάτη ALA, ανεξάρτητα από το ποσό του ALA που καταναλώνεται, συνδέεται θετικά με βιοδείκτες της επιθετικό καρκίνο του προστάτη και ότι η γενετική παραλλαγή μπορεί να τροποποιήσει αυτή τη σχέση

Παράθεση:. Azrad Μ, Zhang Κ, Vollmer RT , Madden J, Polascik TJ, Snyder DC, et al. (2012) του προστάτη άλφα-λινολενικό οξύ (ALA) συνδέεται θετικά με επιθετικό καρκίνο του προστάτη: Μια σχέση που μπορεί να εξαρτάται από γενετική παραλλαγή στο ΑΛΑ μεταβολισμού. PLoS ONE 7 (12): e53104. doi: 10.1371 /journal.pone.0053104

Επιμέλεια: Rui Medeiros, IPO, Inst Λιμάνι Ογκολογίας, Πορτογαλία

Ελήφθη: 20, Αυγούστου του 2012? Αποδεκτές: 23 Νοέμβρη, 2012? Δημοσιεύθηκε: 28 του Δεκεμβρίου 2012

Copyright: © 2012 Azrad et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Χρηματοδότηση η μελέτη αυτή προβλέπεται από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (CA85740, CA07464830 και M01-RR-30). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Ο λιναρόσπορος χρησιμοποιείται στη μελέτη δωρήθηκε από ENRECO, Inc. Αυτό δεν αλλάζει τήρηση των συντακτών σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ένας στους έξι Αμερικανούς άνδρες θα διαγνωστεί με καρκίνο του προστάτη κατά τη διάρκεια της ζωής τους, και κάθε χρόνο πάνω από 33.000 οι άνδρες πεθαίνουν από την ασθένεια αυτή [1]. Οι παράγοντες που διαχωρίζουν νωχελικός από την επιθετική νόσο παραμένουν άγνωστα. Επειδή ο καρκίνος του προστάτη είναι πιο διαδεδομένη στις δυτικές κοινωνίες, είναι η υπόθεση ότι τόσο γενετικοί όσο και περιβαλλοντικοί παράγοντες διαδραματίζουν εξέχοντα ρόλο στην αιτιολογία της. Δίαιτα θεωρείται ένας από τους σημαντικότερους τροποποιήσιμους περιβαλλοντικούς παράγοντες που επηρεάζουν την πορεία της νόσου. [2]

Διατροφική πρόσληψη ωμέγα-3 πολυακόρεστα λιπαρά οξέα (PUFA), προτείνεται να συνδέεται με την παθογένεση και την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη [3 ]. Ενώ το εικοσιπεντανοϊκό οξύ 20 άνθρακα (EPA) θεωρείται ότι είναι προστατευτική [4], 18 πρόδρομος άνθρακα, α-λινολενικό οξύ του (ALA), έχει συνδεθεί με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη σε ορισμένα (αλλά όχι όλα) μελέτες [5 ], [6]. Λαμβάνοντας υπόψη τα αντιφατικά αποτελέσματα από επιδημιολογικές μελέτες, μια μετα-ανάλυση 16 μελετών κατέληξε στο συμπέρασμα ότι υπάρχει έλλειψη ενός σημαντική συσχέτιση μεταξύ της διατροφικής πρόσληψης ALA και τον κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη [7]. Είναι ενδιαφέρον ότι η μετα-ανάλυση διαπιστώθηκε ότι τα υψηλότερα φυσιολογικά επίπεδα του ALA σε ορούς, ερυθροκύτταρα ή λιπώδη ιστό, συνδέθηκαν με 54% αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη [7]. Η ασυμφωνία μεταξύ διατροφικών ALA και τον κίνδυνο καρκίνου του προστάτη και φυσιολογικά επίπεδα του ALA και τον καρκίνο του προστάτη μπορεί να είναι συνάρτηση των δυσκολιών στη συλλογή ακριβή διατροφικών στοιχείων. Ωστόσο, η ασυμφωνία μπορεί να σχετίζεται με μεταβολή στο μεταβολισμό του ALA.

επίπεδα ιστού του ALA είναι εν μέρει εξαρτάται από την διαιτητική πρόσληψη. Επίσης, δέλτα-6 δεσατουράσης, το ένζυμο δεσατουράσης που καταλύει το βήμα περιορισμού του ρυθμού του μεταβολισμού ALA καθορίζει επίπεδα ιστού του ALA. Αυτό το ένζυμο εκφράζεται κυρίως στο ήπαρ αλλά και σε άλλα όργανα, συμπεριλαμβανομένου του προστάτη, και διαιτητικής πρόσληψης PUFAs έχει δειχθεί να ρυθμίζει την έκφρασή του σε ιστό [8]. Επιπλέον, διαιτητικό λινελαϊκό οξύ (LA) απαιτεί δέλτα-6 δεσατουράσης για την βιοσύνθεση του αραχιδονικού οξέος και έτσι ανταγωνίζεται με ALA για δεσατουράση [8]. Έτσι, μια υψηλότερη LA σε ALA αναλογία, όπως αυτή που παρατηρείται σε μια δυτική διατροφή, οδηγεί σε μια μετατόπιση που ευνοεί LA και εμποδίζει το μεταβολισμό ΑΙΑ [9]. Επιπλέον, γενετική παραλλαγή παίζει σημαντικό ρόλο στο μεταβολισμό ΑΙΑ. Ενιαία πολυμορφισμοί (SNPs) σε και κοντά

FADS2

, το γονίδιο το οποίο κωδικοποιεί δέλτα-6 δεσατουράσης, έχουν ιδιαίτερα σχετίζεται με τα επίπεδα της ALA στα ερυθροκύτταρα, πλάσμα και τον ορό σε γενετικές μελέτες πληθυσμού προηγούμενα [10], [ ,,,0],11], καθώς και ολοκληρωμένες μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος σε επίπεδο [12], [13]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η παρουσία του αλληλόμορφου ανηλίκου σε αρκετές SNPs συνδέεται σημαντικά με υψηλότερα επίπεδα στο αίμα του ΑΛΑ [10] – [13]. Τα ισχυρά και συνεπή ενώσεις που αναφέρθηκαν για SNPs σε αυτό το γενετική περιοχή δείχνουν ότι η γενετική παραλλαγή μεταβάλλει δέλτα-6 δεσατουράσης, τη λειτουργικότητα, ή έκφραση, με αποτέλεσμα σε τροποποιημένο μεταβολισμό ΑΛΑ [14]. Ο ρόλος που παίζει γενετική παραλλαγή στο προστατικό ιστό τα επίπεδα του ALA και του καρκίνου του προστάτη είναι προς το παρόν άγνωστη, αλλά έρευνα εντάλματα [15].

Μέχρι σήμερα, δεν έχει υπάρξει καμία κλινικές μελέτες που διερεύνησαν τις επιπτώσεις των διατροφικών συμπληρωμάτων ΑΛΑ άνδρες με καρκίνο του προστάτη [7]. Ωστόσο, σε προηγούμενη φάση ΙΙ τυχαιοποιημένη κλινική μελέτη μας (RCT), δίαιτες που συμπληρώθηκαν με 30 g /d της λιναρόσπορο και υπό τον όρο 6,51 g /d του ALA, ελέγχθηκαν έναντι δίαιτες με κανονική πρόσληψη ALA σε άνδρες διαγνώστηκαν με εντοπισμένο καρκίνο του προστάτη για -31 ημέρες πριν από την προστατεκτομή [16]. Ανδρών στην λιναρόσπορο όπλα είχαν σημαντικά χαμηλότερα ποσοστά πολλαπλασιασμό του όγκου σε προστατεκτομή ιστό. Η προηγούμενη μελέτη παρείχε τη μοναδική ευκαιρία να εξερευνήσουν τις ενώσεις μεταξύ του προστάτη ALA, SNPs που σχετίζονται με την δέλτα-6 δεσατουράσης, και βιοδείκτες της επιθετικής νόσου π.χ., ρυθμό πολλαπλασιασμού (Ki67) και PSA ορού σε άνδρες που καταναλώνουν μια δίαιτα υψηλή σε ALA σε σχέση με την τακτική πρόσληψη ALA. υποθέσεις μας ήταν ως εξής: (1) Προτείνουμε ότι η αναστολή του μεταβολισμού ALA προάγει τον καρκίνο του προστάτη και θα οδηγήσει σε θετική συσχέτιση μεταξύ των συγκεντρώσεων ΑΛΑ στο προστατικό ιστό και τιμές PSA στον ορό και τον πολλαπλασιασμό του όγκου? και (2) Προτείνουμε επίσης ότι η γενετική παραλλαγή στο μεταβολισμό ΑΛΑ τροποποιήσετε τη σχέση μεταξύ ΑΛΑ και αυτών των βιοδεικτών για επιθετικό καρκίνο του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλες οι διαδικασίες και οι δοκιμές είχαν εγκριθεί από το Πανεπιστήμιο Duke Medical Center, Ιατρικό Κέντρο Διοίκησης του Βετεράνων Durham και το Πανεπιστήμιο του Michigan Κοινότητας Κλινικής Ογκολογίας Πρόγραμμα Institutional Review Boards και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε πριν από όλα δείγματος και συλλογή δεδομένων.

μελέτη και συμμετέχοντες

Αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε δεδομένα και βιολογικών δειγμάτων από την προηγούμενη φάση multi-site μας II RCT (NCT00049309) σε άνδρες με καρκίνο του προστάτη περιμένουν προστατεκτομή [16], [

17]. Η RCT περιλαμβάνονται 161 άνδρες εκχωρηθεί για τον έλεγχο (n = 41), λιναρόσπορος (FS) (n = 40), χαμηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά δίαιτα (LF) (n = 40) ή FS + LF (n = 40) για -31 ημέρες πριν σε χειρουργική επέμβαση. Μετά από την αρχική τιμή εκτίμησης, κατά την οποία συλλέχθηκαν χρόνο αίματος, ούρων, ανθρωπομετρικά και ιατρικά δεδομένα, οι συμμετέχοντες τυχαιοποιήθηκαν σε σκέλη της μελέτης με βάση τη φυλή (μαύρο έναντι μη-μαύρο) και βιοψία άθροισμα Gleason (& lt? 7 εναντίον ≥7). Η τακτική χρήση των στατινών και μη-στεροειδή αντι-φλεγμονώδη φάρμακα (ΜΣΑΦ) συλλέχθηκε κατά την έναρξη. Όπως περιγράφηκε προηγουμένως, οι άνδρες έχουν ανατεθεί στους βραχίονες FS δόθηκαν με εντολή και να καταναλώνουν προ-μερίδες ποσότητες λιναρόσπορου (30g /d)? ανδρών στην αγκαλιά LF καταναλώνονται & lt? 20% των θερμίδων από λίπος? και το βραχίονα ελέγχου δόθηκε εντολή να διατηρήσει το συνηθισμένο διαιτολόγιό τους [16]. Συνταγές και προτάσεις μενού (π.χ., αναμειγνύοντάς το με γιαούρτι, μήλου, ή κόκκους) για την ενσωμάτωση λιναρόσπορο στη διατροφή δόθηκαν σε άνδρες ανατεθεί σ ‘αυτές σκέλη της μελέτης. δείγματα Παρακολούθηση συλλέχθηκαν μέσα σε 48 ώρες πριν από την επέμβαση (τα δεδομένα ερωτηματολόγιο και δείγματα αίματος) ή κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης (κατεψυγμένα και παραφίνη-ενσωματωμένες προστατικό ιστό).

Διαιτητικά Αξιολόγηση

η NCI Διατροφή Ιστορία ερωτηματολόγιο χορηγήθηκε κατά την έναρξη και παρακολούθηση [18]. Τα δεδομένα εξετάστηκαν από έναν διαιτολόγο για τη λογική και την πληρότητα. Για τους άνδρες αποδίδεται στα χέρια FS, το μέσο ποσό των λιναρόσπορο καταναλώνονται καθημερινά (g /d) προσδιορίστηκε με βάση ημερολόγια που τηρούνται από τους συμμετέχοντες. Παρόμοια με τη μεθοδολογία χάπι-καταμέτρηση, κάθε μη χρησιμοποιηθέν λιναρόσπορο επέστρεψε και μετράται [19], [20]. Ένα γραμμάριο λιναρόσπορο παρέχεται 0,057 g και 0.217 g των LA και ALA, αντίστοιχα. Υπολογίσαμε την συνολική πρόσληψη των LA και ALA παρέχονται από λιναρόσπορο συμπληρώματα πολλαπλασιάζοντας τη μέση g /d της λιναρόσπορο που καταναλώνεται από τα ποσά των LA και ALA παρέχονται ανά 1 g λιναρόσπορο. Η ποσότητα των LA και ALA από λιναρόσπορο συμπληρώματα προσετέθησαν σε τιμές των LA και ALA προσδιορίζεται από την DHQ.

Βιολογικά δείγματα και τους προσδιορισμούς

προστατικού ιστού που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση των λιπαρών οξέων ελήφθη από το περιφερικό ζώνη του προστάτη εξής προστατεκτομή και φλας καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -70 ° C μέχρι να αναλυθούν. Προστατικό ιστό λιπαρά οξέα αναλύθηκαν με αέριο χρωματογραφία τριχοειδούς ακόλουθη ομογενοποίηση του ιστού και την εκχύλιση σε χλωροφόρμιο: μεθανόλη (2:01) [21], [22]. Οι τιμές για προστάτη PUFAs που αναφέρθηκαν ως ποσοστό του συνόλου των λιπαρών οξέων που προσδιορίζονται στο προστατικό ιστό. Χρησιμοποιώντας διαδικασίες που περιγράφονται προηγουμένως [23], ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί δείκτης πολλαπλασιασμού (Κί67 (Biocare, Walnut Creek, CA)) από τομές ιστών κόπηκαν από τεμάχια προστατικής όγκων εγκλεισμένους σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη. Διαφάνειες εξετάστηκαν και βαθμολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους παθολογοανατόμους που δεν γνώριζαν για τη μελέτη ανάθεση βραχίονα [16].

FADS2

Παραλλαγές και Γονοτυπικές

Η επιλογή των SNPs έγινε με βάση την πορίσματα των προηγούμενων ερευνών στην καρδιαγγειακή νόσο που έχουν δείξει γενετικές διαφορές να σχετίζονται σημαντικά με τα επίπεδα του δέλτα-6 δραστηριότητα deaturase, το μεταβολισμό ALA και τον ιστό της ΑΛΑ [10], [11], [12], [13], [14]. Με βάση την τρέχουσα βιβλιογραφία, επιλέξαμε SNPs που συσχετίζονται με τα επίπεδα του ALA στα ερυθροκύτταρα, πλάσμα ή τον ορό (rs99780, rs174537, rs174545, rs174572, rs498793, rs3834458, και rs968567), προκειμένου να διερευνήσει τις συσχετίσεις μεταξύ αυτών των SNPs και του προστάτη ALA και του προστάτη του καρκίνου βιοδείκτες. Αυτές οι SNPs βρίσκονται στο χρωμόσωμα 11 εντός ή πλησίον των

FADS

γονίδιο συμπλέγματος.

Γονιδιωματικό DNA από ολικό αίμα απομονώθηκε και καθαρίστηκε με τη Gentra Puregene αίμα Kit (Qiagen, Valencia, CA). SNPs γονότυπος χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Pyrosequencing. Εν συντομία, 20 ng γενωμικού DNA ενισχύθηκε με εκκινητές ειδικούς για κάθε SNP. Primer επιλογή έγινε χρησιμοποιώντας το λογισμικό σχεδιασμού Δοκιμασία PSQ από την Qiagen. Μια πρότυπη αντίδραση PCR έγινε με 5 PRIME Taq πολυμεράσης (Fisher Scientific) που αποτελείται από 500 mM ΚΟΙ, 100 mM Tris-HCl ρΗ 8,3, 15 mM Mg (OAc)

2, 1% Triton Χ 100, 0.1 mM κάθε PCR εκκινητή και 0,2 mM dNTPs. Εκκινητές PCR πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση μιας στρατηγικής PCR touchdown χρησιμοποιώντας διαφορετικές θερμοκρασίες ανόπτησης. Όλα τα προϊόντα PCR ελέγχθηκαν επί πηκτώματος αγαρόζης 1,5% για να εξασφαλισθεί η ενίσχυση και η εξειδίκευση πριν από την εκτέλεση των αντιδράσεων Pyrosequencing. Οι Pyrosequencing αντιδράσεις διεξήχθησαν όπως περιγράφεται από τον κατασκευαστή (Qiagen, Valencia, CA). Εν συντομία, το προκύπτον βιοτινυλιωμένο PCR προϊόν αραιώθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα (10 mM Tris-HCL, 2 Μ NaCl, 1 mM EDTA, 0,1% Tween 20) και συνδεδεμένο με σεφαρόζη-στρεπταβιδίνη (SA) σφαιρίδια (GE Healthcare, Piscataway, NJ) δέσμευσης . Το συγκρότημα dsDNA-SA-σφαιρίδια πλύθηκε σε 70% αιθανόλη, μετουσιώνεται σε 0.2 Ν ΝαΟΗ και πλύθηκε σε 10 mM Tris-Acetate ρΗ 7,6. Τα σφαιρίδια στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα ανόπτησης (20 mM Tris-Acetate, 2 mM MgAc

2) που περιέχει το κατάλληλο εναρκτήρα αλληλούχησης (0.3 μΜ τελική), θερμαίνεται στους 80 ° C για 2 λεπτά και αφέθηκε να ψυχθεί στους 25 ° C . Pyrosequencing έγινε στο PyroMark HS-96 μηχανή Pyrosequencing (Qiagen, Valencia, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Στατιστικές Αναλύσεις

Αυτή η δίκη και οι στατιστικές αναλύσεις του στηρίχτηκαν από 2 × της 2 του σχεδιασμού? έτσι λιναρόσπορο όπλα συνδυάστηκαν (FS και LF + FS) και σε σύγκριση με τα μη-λιναρόσπορο συμπληρώνεται βραχίονες (έλεγχος + LF). Αυτό επέτρεψε τη σύγκριση των ανδρών που καταναλώνουν μια δίαιτα υψηλή σε ALA (FS και LF + FS) έναντι των ανδρών που δεν καταναλώνουν δίαιτα υψηλή ALA (έλεγχος + LF). Wilcoxon-υπογεγραμμένο δοκιμές rank και ακριβής δοκιμασία Fisher χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί διαφορές μεταξύ των ομάδων σε βασική γραμμή χαρακτηριστικά, διατροφικές και προστατικής PUFAs, καθώς και βιοδείκτες του καρκίνου του προστάτη. συντελεστές βαθμό συσχέτισης Spearman αδιόρθωτη ήταν αποφασισμένοι να αξιολογήσει τις ενώσεις μεταξύ του προστάτη πολυακόρεστα λιπαρά οξέα με PSA και Κί67. Για να ελέγξετε τις ενώσεις μεταξύ της PSA ή το αρχείο καταγραφής του Κί67 με ALA, χρησιμοποιήθηκαν γραμμικά μοντέλα. Και στα δύο μοντέλα, BMI, την ηλικία, τη φυλή (μαύρο έναντι μη-μαύρο), στατίνες ή ΜΣΑΦ, και λιναρόσπορο βραχίονα χρησιμοποιήθηκαν ως συμπαράγοντες. Η μεταβλητή ALA χρησιμοποιήθηκε ως διακριτή μεταβλητή και ALA ήταν κωδικοποιημένα 1 και η απουσία του ALA κωδικοποιήθηκε ως 0. Για να ελέγξετε τη σύνδεση των PSA και συνδεθείτε του Κί67 με την SNPs και τις αλληλεπιδράσεις τους με ALA, τον γονότυπο του κάθε SNP και του αλληλεπίδραση με ALA προστέθηκαν στο μοντέλο. Συγκεκριμένα, το κυρίαρχο μοντέλο χρησιμοποιήθηκε λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος: η πιο κοινή γονότυπος σε κάθε τόπο SNP θεωρήθηκε ως ομάδα (ομάδα αναφοράς), ενώ τα άλλα δύο γονότυπους θεωρήθηκαν ως μια άλλη ομάδα. Συνεπώς, οι γονότυποι κάθε SNP κωδικοποιήθηκαν ως 0, 1 και 1 για κοινές ομοζυγώτη, ετεροζυγώτη, και σπάνια γονότυπους ομοζυγώτη, αντίστοιχα. Ο όρος αλληλεπίδρασης των SNP γονότυπου και ALA στο μοντέλο παλινδρόμησης κωδικοποιηθεί ως το γινόμενο του SNP γονότυπου και του ALA. Bonferroni διόρθωση χρησιμοποιήθηκε για την προσαρμογή για πολλαπλές δοκιμές. Ο γονότυπος και αλληλόμορφο συχνότητες κάθε SNP εκτιμήθηκαν και Hardy-Weinberg ισορροπία ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ chi-square υλοποιείται στο πακέτο γενετικής στην R (www.r-project.org/). Χρησιμοποιώντας μια τιμή p 0,001, όπως προτείνεται από Balding [24], όλα τα SNPs ήταν σε ισορροπία Hardy-Weinberg.

Αποτελέσματα

Αυτή η έρευνα περιελάμβανε 134 άνδρες από το 149, όταν ο οποίος ολοκλήρωσε την αρχική δίκη. Καταψυγμένα ιστός δεν ήταν διαθέσιμη εξής προστατεκτομή για 15 συμμετέχοντες και ως εκ τούτου του προστάτη επίπεδα PUFAs δεν μπορούσε να προσδιοριστεί και συμμετεχόντων αυτών εξαιρέθηκαν από την ανάλυση. Τα χαρακτηριστικά του προκύπτοντος πληθυσμού της μελέτης παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Δεν παρατηρήσαμε διαφορές μεταξύ των ομάδων ως προς την ηλικία, φυλετική κατανομή (μαύρο έναντι μη-μαύρο), ΔΜΣ ή Gleason Sum.

Η

Διατροφική πρόσληψη τα επίπεδα PUFAs και PUFA σε προστατικό ιστό μετά λιναρόσπορο συμπλήρωση φαίνονται στον πίνακα 1. Δεν μεταξύ των ομάδων παρατηρήθηκαν διαφορές για διαιτητική πρόσληψη του LA, ΑΑ και ολικών ωμέγα-6 καθώς και EPA και DHA. Ωστόσο, και όπως αναμενόταν, οι άνδρες στο λιναρόσπορο βραχίονα καταναλώνεται σημαντικά υψηλότερο ALA και το σύνολο των ωμέγα-3 και ως εκ τούτου είχαν σημαντικά υψηλότερη αναλογία των διατροφικών 3:06 σε σύγκριση με τους άνδρες στην αριθ Λιναρόσπορος βραχίονα (p & lt? .0001 Για όλους). Ωστόσο, παρά τις σημαντικές διαφορές στην πρόσληψη ALA, δεν παρατηρήσαμε στατιστικά σημαντικές διαφορές σε προστατική επίπεδα ALA μεταξύ των δύο ομάδων. LA, ΑΑ, ολικών ωμέγα-6 και ωμέγα-σύνολο 3 ήταν επίσης παρόμοιες. Σημειώσαμε ότι η λιναρόσπορο βραχίονα είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα EPA δείχνει ότι ALA μετατρέπεται σε EPA στον ιστό στόχο. Επίσης, περιλαμβάνονται στον Πίνακα 1 είναι PSA και του προστάτη του όγκου του ορού Κί67. Παρατηρήσαμε ότι το PSA ορού έτειναν να είναι υψηλότερη στο λιναρόσπορο βραχίονα, αν και αυτό δεν έφθασε στατιστική σημασία. Συνεπής με τα προηγούμενα ευρήματα μας, Ki67 ήταν σημαντικά χαμηλότερες στην λιναρόσπορο βραχίονα σε σύγκριση με εκείνα που δεν έλαβαν λιναρόσπορο (p = 0,001).

Ερευνήσαμε συσχετίσεις μεταξύ του προστάτη PUFAs και του καρκίνου του προστάτη βιοδείκτες (Πίνακας 2). Σε μη προσαρμοσμένες αναλύσεις, προστάτη ALA βρέθηκε να είναι σημαντικά συσχετίζεται θετικά τόσο με PSA ορού και Κί67 (ρ = 0,191, ρ = 0,028 και ρ = 0,0186, p = 0,037). Αξίζει να σημειωθεί ότι, δεν υπάρχουν άλλα πολυακόρεστα λιπαρά οξέα συσχετίστηκαν με τα ποσοστά πολλαπλασιασμού PSA και του όγκου.

Η

Με βάση αυτές τις αναλύσεις, θα διερευνηθεί περαιτέρω κατά πόσον προστάτη ALA συσχετιζόταν ανεξάρτητα με την PSA και του όγκου Ki67 μετά την προσαρμογή για πιθανούς συγχυτικούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων του ΔΜΣ, ηλικία , τη φυλή, στατίνες χρήση ναρκωτικών, και λιναρόσπορο βραχίονα (Πίνακας 3). Στο γραμμικό μοντέλο για την PSA, παρατηρήσαμε ότι το ALA συσχετιζόταν θετικά με την PSA (p = 0,004), όπως λιναρόσπορο βραχίονα (p = 0,023) και BMI (p & lt? .0001). Στο γραμμικό μοντέλο όγκου Ki67, η συνεργασία με τις χώρες ΑΛΑ ήταν εξασθενημένος, αλλά ακόμη φαίνεται να σχετίζεται θετικά με υψηλότερο Κί67 (p = 0,051) και το λιναρόσπορο βραχίονα παρέμεινε αντίστροφα με πολλαπλασιασμό (p = 0,006). Στα ίδια μοντέλα θα διερευνηθεί κατά πόσον ΜΣΑΦ αλλάξει τη θετική συσχέτιση μεταξύ του προστάτη ΑΛΑ και PSA ορού και Ki67 (Πίνακας S1). Σε αυτά τα μοντέλα, προστάτη ALA παρέμεινε σημαντικά σχετίζονται με την PSA ορού (p = 0,004) και παρέμεινε σχετίζεται θετικά με Κί67 παρόλο που συνορεύουν με στατιστική σημαντικότητα (p = 0.058). ΜΣΑΦ είχαν σημαντικά αντίστροφα με Κί67 (p = 0,017). Έχουμε διερευνηθούν επίσης διαιτητική πρόσληψη του LA, προστάτη των επιπέδων των ιστών του LA, ή ΑΑ ως συμπαράγοντες σε αυτό το μοντέλο, αλλά οι μεταβλητές αυτές δεν ήταν σημαντικές και δεν μεταβάλλει τις συσχετίσεις μεταξύ του προστάτη ΑΛΑ και PSA ή Κί67 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Επειδή προστάτη ALA συσχετιζόταν θετικά με βιοδείκτες του καρκίνου του προστάτη σε αυτές τις προηγούμενες αναλύσεις, ερευνήσαμε αν SNPs δείξει πρόσφατα ότι επηρεάζει το μεταβολισμό ΑΛΑ συσχετίστηκαν ανεξάρτητα με προστάτη ALA. Η κατανομή του επτά SNPs παρουσιάζεται στον Πίνακα S2. Σε αυτές τις αναλύσεις, δεν παρατηρήσαμε σύνδεση μεταξύ οποιοδήποτε από τα SNPs που δοκιμάστηκαν ή άλλες συμπαράγοντες με προστάτη ALA.

Σε πρόσθετες αναλύσεις, ερευνήσαμε αν SNPs, προστάτη ALA ή αλληλεπιδράσεις τους συσχετίστηκαν ανεξάρτητα με την PSA ή Κί67 (Πίνακας 4). Στα μοντέλα που περιλαμβάνονται rs174572, rs498793, rs3834458 και rs968567, προστάτη ALA συσχετιζόταν θετικά με την PSA (p = 0,002, p & lt? 0,001, p = 0,011 και p = 0,033, αντίστοιχα) και η αλληλεπίδραση μεταξύ rs498793 και του προστάτη ALA συσχετίστηκε αντίστροφα με PSA (p = 0.017). Μετά από προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις η σημαντική συσχέτιση μεταξύ ΑΛΑ και PSA παρέμειναν στα μοντέλα που περιλαμβάνονται rs174572 και rs498793. Το SNP, rs174572, ήταν σημαντικά και αντίστροφα με ρυθμό πολλαπλασιασμού του όγκου (p = 0,007). Σε επιπλέον μοντέλα που περιλαμβάνονται rs99780 και rs174545 σημαντικές αλληλεπιδράσεις βρέθηκαν μεταξύ του SNP και ALA (p = 0,033 και p = 0,047, αντίστοιχα). Μετά από προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις μόνο το μοντέλο με SNP rs174572 παρέμειναν στατιστικά σημαντικές.

Η

Συζήτηση

Αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να διερευνήσει την επίδραση της διατροφής ALA τροφίμων πλούσιων σε επίπεδα λιπαρά οξέα στον ιστό στόχο, και την τελική ένωσή τους με δείκτες της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη. Βρήκαμε ότι ενώ λιναρόσπορο συμπληρώματα οδήγησε σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα του ALA στη διατροφή, η κατανάλωση αυτή δεν μεταφράστηκε σε υψηλότερες προστάτη επίπεδα του ALA. Αυτό ήταν ένα σημαντικό εύρημα, διότι σε πρόσθετες αναλύσεις, προστάτη ALA συσχετίστηκε με σημαντικά υψηλότερα ποσοστά πολλαπλασιασμού PSA και του όγκου. Ενώ η παρουσία του ALA στον προστάτη φαίνεται να είναι ανεξάρτητη από τα SNPs που ερευνήσαμε, καθώς επίσης και άλλες συμμεταβλητές συμπεριλαμβανομένων των διαιτητικών LA, κάναμε παρατηρούμε συσχετίσεις μεταξύ SNPs που σχετίζονται με το μεταβολισμό ΑΙΑ και τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ αυτών των SNPs και ALA τόσο με PSA και του όγκου ποσοστά πολλαπλασιασμού. Έτσι, τα ευρήματα από αυτή τη διερευνητική μελέτη παρέχει νέα στοιχεία που να υποδηλώνουν ότι προστάτη μεταβολισμό ALA μπορεί να συνδέεται με επιθετικό καρκίνο του προστάτη.

μεταβολισμό PUFA είναι πολύπλοκη και η μοίρα των διατροφικών ΑΛΑ δυνητικά περιλαμβάνει β-οξείδωση, αποθήκευση σε λιπώδεις ιστοί , ενσωμάτωση σε κυτταρικές μεμβράνες και /ή αποκορεσμό και επιμήκυνση σε μακρύτερης αλυσίδας ωμέγα-3 πολυακόρεστα λιπαρά οξέα [25]. Στην παρούσα μελέτη δεν περιλαμβάνει μέτρα της κυτταρικής βιοενεργειακό αντικατοπτρίζουν την αξιοποίηση της ΑΛΑ ως πηγή ενέργειας ή την αποθήκευση? Ωστόσο, τα δεδομένα μας δείχνουν σαφώς ότι τα υψηλότερα διαιτητική πρόσληψη του ALA στο λιναρόσπορο βραχίονα δεν οδήγησε σε υψηλότερα φυσιολογικά επίπεδα του ALA σε προστατικού ιστού, αλλά, αντίθετα, είχε ως αποτέλεσμα υψηλότερα επίπεδα του προστάτη του ΕΡΑ. Δεδομένου ότι και οι δύο σκέλη της μελέτης είχαν παρόμοια διαιτητική πρόσληψη EPA, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι λιναρόσπορο προέρχεται ALA μετατρέπεται σε EPA. Είναι ενδιαφέρον, τα υψηλότερα επίπεδα EPA δεν συνδέθηκαν με μειωμένους συντελεστές PSA ή όγκου πολλαπλασιασμούς. Αυτά τα δεδομένα είναι σε αντίθεση με πρόσφατη μελέτη στην οποία χρησιμοποιήθηκε μία παρόμοια προ-χειρουργικών σχεδιασμού της μελέτης και έδειξε ότι ένα χαμηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά δίαιτα συμπληρωμένη με 5 g /d ΕΡΑ είχε ως αποτέλεσμα υψηλότερα προστάτη επίπεδα EPA και μειωμένους συντελεστές πολλαπλασιασμού του όγκου σε ένα υποσύνολο των ανδρών στην RCT [4]. Ενώ η μελέτη μας δεν ήταν σε θέση να επιβεβαιώσει τις αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις του προστάτη EPA, είμαστε σε θέση να επιβεβαιώσει ότι ένα υψηλό ALA αποτελέσματα δίαιτα σε υψηλότερες ΕΡΑ στον ιστό στόχο και δεν οδηγεί σε συσσώρευση του προστάτη ALA.

Αρκετές μελέτες έχουν διερευνήσει το μεταβολισμό PUFA στο πλάσμα, ορό και τα ερυθροκύτταρα και έχουν διαπιστώσει ότι SNPs που σχετίζονται με το μεταβολισμό ΑΛΑ διαδραματίσουν σημαντικό ρόλο στον καθορισμό των επιπέδων των ιστών του ALA. Αυτοί οι SNPs εντοπίζεται κοντά στο

FADS

σύμπλεγμα γονιδίων στο χρωμόσωμα 11q12-11q13, που γειτνιάζουν άμεσα με γενετική περιοχή σχετίζεται σε μεγάλο βαθμό με τον κίνδυνο για αρκετές καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη [26], [27], [28], [29 ]. Η εγγύτητα αυτών των SNPs στο γενετικό hotspot? η ισχυρή συσχέτιση μεταξύ αυτών των SNPs και φυσιολογικά επίπεδα του ALA? και η παρατήρηση ότι τα φυσιολογικά επίπεδα του ALA σχετίζεται με τον καρκίνο του προστάτη μας ώθησε να διερευνήσει κατά πόσον η γενετική παραλλαγή σχετιζόταν με προστατική ALA και βιοδείκτες ενδεικτικό της επιθετικής νόσου.

Στην παρούσα μελέτη ούτε διαιτητική πρόσληψη των πολυακόρεστων λιπαρών οξέων ούτε SNPs σχετικών σε PUFA μεταβολισμό εξήγησε την παρουσία του προστάτη ALA. Η ασυμφωνία στα ευρήματα μπορεί να οφείλεται στο γεγονός ότι προσδιορίστηκαν ALA στα προστάτες των ανδρών με επιβεβαιωμένη νόσο ενώ οι άλλες μελέτες αναλύθηκαν τα επίπεδα στο αίμα και ήταν σε υγιείς πληθυσμούς. Αυτό είναι μια σημαντική διάκριση, επειδή προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι ορισμένα, αλλά όχι όλα, του καρκίνου του προστάτη κυτταρικές γραμμές υπερ-εκφράζουν τον υποδοχέα της LDL σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα του προστάτη, ένα χαρακτηριστικό που βρέθηκε επίσης σε ένα μικρό σύνολο των όγκων του προστάτη με έξι από 12 όγκοι υπερεκφράζουν τον υποδοχέα της LDL [30]. Παρόμοια ευρήματα έχουν αναφερθεί σε καρκίνο του παχέος εντέρου [31]. Επειδή LDL είναι ο κύριος όχημα για την παράδοση του ALA σε περιφερικούς ιστούς, η υπερ-έκφραση του υποδοχέα LDL σε μερικούς όγκους προστάτη μπορεί να αυξήσει την μεταφορά του ALA στον ιστό.

Παρατηρήσαμε επίσης ότι τέσσερις από τις επτά SNPs που ελέγχθηκαν, είχαν σημαντικά σε σχέση είτε με PSA ή όγκου τιμές πολλαπλασιασμό είτε αυτόνομα είτε μέσω της αλληλεπίδρασης με προστάτη ALA. Ωστόσο, δεν είναι όλες αυτές οι ενώσεις παρέμεινε μετά την προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις πιθανόν λόγω του περιορισμένου μεγέθους του δείγματος μας. Για παράδειγμα, παρατηρήσαμε θετικές συσχετίσεις με πολλαπλασιασμό του όγκου για τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ του προστάτη ALA και της παρουσίας του ανηλίκου αλληλόμορφου στα rs99780 SNPs και rs174545, καθώς και μια αντίστροφη συσχέτιση με PSA για την αλληλεπίδραση μεταξύ του προστάτη ALA και της παρουσίας του ανηλίκου αλληλόμορφο στα rs498793 SNP. Προηγούμενες μελέτες έχουν αποδείξει ότι η παρουσία του αλληλόμορφου ανηλίκου σε όλα τα SNPs δοκιμάστηκαν συσχετίστηκε με υψηλότερα επίπεδα στο αίμα του ΑΛΑ [7] – [11]. Στην παρούσα μελέτη, ενώ δεν παρατηρήσαμε ότι αυτά τα SNPs συσχετίστηκαν ανεξάρτητα με προστατική ALA, είχαμε παρατηρήσει ότι κάποιοι από αυτούς τροποποιημένων τη σχέση μεταξύ του προστάτη ΑΛΑ και PSA ή του όγκου του πολλαπλασιασμού. Μία πιθανή εξήγηση για το εύρημα αυτό σχετίζεται με ιστο-ειδικούς διαφορές στη γονιδιακή έκφραση των ενζύμων δεσατουράσης [8], [

32]. Συνεπής με αυτή την υπόθεση, έχει αναφερθεί ότι SNPs έχουν διαφορετικές επιδράσεις στην γονιδιακή έκφραση μέσα σε διαφορετικές πηγές ιστών που υποδηλώνει ότι οι παραλλαγές ματίσματος ιστού-ειδικό παίζουν σημαντικό ρόλο στον προσδιορισμό γονιδιακής έκφρασης [33].

Η μελέτη μας επιβεβαιώνει ο παρατηρήσεις του Christensen et al. ο οποίος ανέφερε ότι οι άνδρες με καρκίνο του προστάτη είχαν υψηλότερα επίπεδα ALA σε σύγκριση με τους άνδρες με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη [34]. Παρόμοια με τα ευρήματά μας, Christensen και οι συνεργάτες του παρατήρησαν επίσης μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του προστάτη ΑΛΑ και PSA? Ωστόσο, δεν μετρούν τα ποσοστά πολλαπλασιασμούς όγκων. Ορισμένοι δυνητικοί μηχανισμοί που συνδέουν υψηλότερο του προστάτη ΑΛΑ με πιο επιθετικό καρκίνο του προστάτη μπορεί να είναι μέσω της αύξησης της ενεργοποίησης των οδών σηματοδότησης κυττάρου. Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι ALA επάγει γονιδιακή έκφραση του ΜΕΚ1 και ΜΕΚΚ1 που μπορούν να διεγείρουν μεταγραφική δραστικότητα του υποδοχέα ανδρογόνων [35], [36]. Περαιτέρω, με τις γνώσεις μας, καμία μελέτη δεν έχει καθορίσει τις συσχετίσεις μεταξύ των SNPs που σχετίζονται με το μεταβολισμό ΑΙΑ και δέλτα-6 έκφραση του γονιδίου δεσατουράσης στο προστατικό ιστό. Με βάση τα ευρήματά μας, οι πρόσθετες μελέτες δικαιολογημένη και μπορεί να διαφωτίσει τις ενώσεις που παρατηρείται μεταξύ SNPs και προστάτη βιοδείκτες του καρκίνου.

Όπως με όλες τις μελέτες, η μελέτη αυτή έχει πλεονεκτήματα και περιορισμούς. Μια απομίμηση είναι η σχετική σύντομο χρονικό διάστημα που τα υποκείμενα κατανάλωσαν μια δίαιτα υψηλή σε ALA και την έλλειψη βασικών φρέσκο ​​κατεψυγμένο ιστό του προστάτη για την αξιολόγηση PUFA αλλαγές στον ιστό στόχο. Αναγνωρίζουμε ότι αυτή η μελέτη είναι μια δευτερεύουσα ανάλυση και ότι η αρχική μελέτη δεν είχε σχεδιαστεί για να ελεγχθεί η υπόθεση διερευνάται στην παρούσα έρευνα. Επιπλέον, δεν αναπαράγουν διερευνητική τα ευρήματά μας σε ένα ανεξάρτητο πληθυσμό. Ως εκ τούτου, οι μελλοντικές μελέτες με μεγαλύτερα μεγέθη δειγμάτων που απαιτούνται για να επιβεβαιώσουν αυτά τα ευρήματα. Ωστόσο, ένα βασικό πλεονέκτημα αυτής της μελέτης είναι ότι τα δεδομένα και τα βιολογικά δείγματα προέρχονταν από έναν από τους μεγαλύτερους προχειρουργική δοκιμές σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη μέχρι σήμερα. Επιπλέον, φθορά ήταν ελάχιστη και προσκόλληση στο πρωτόκολλο ήταν εξαιρετικό [16]. Η μελέτη αυτή είναι επίσης ένα από τα λίγα που έχει παράσχει διαιτητική πρόσληψη, καθώς και τις άμεσες φυσιολογικές μετρήσεις των πολυακόρεστων λιπαρών οξέων στον ιστό-στόχο και να διερευνηθούν οι ενώσεις τους με γενετικούς παράγοντες και βιοδείκτες ενδεικτικό της πορείας της νόσου.

Εν ολίγοις, αυτό μελέτη έδειξε ότι μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη, του προστάτη ALA, ανεξάρτητα από τη διατροφή, ήταν σημαντικά και θετικά που σχετίζονται με τους βιοδείκτες της επιθετικής νόσου, δηλαδή, τα δύο υψηλότερα ποσοστά πολλαπλασιασμού PSA και του όγκου. Βρήκαμε επίσης νέα στοιχεία ότι η γενετική παραλλαγή που σχετίζονται με το μεταβολισμό ΑΙΑ επηρεάζει τη σχέση μεταξύ ΑΛΑ και βιοδείκτες του καρκίνου του προστάτη. Έτσι, τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης δείχνουν διερευνητικών ένα γονίδιο θρεπτικό αλληλεπίδραση που μπορεί να είναι ένας σημαντικός μεσολαβητής του επιθετικό καρκίνο του προστάτη, και ένα που θα μπορούσε να αξιοποιηθεί για τη διάκριση βραδείας εναντίον παθογόνου νόσου. Οι μελλοντικές μελέτες για να επιβεβαιώσουν αυτά τα ευρήματα.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

ανεξάρτητη συσχέτιση μεταξύ ΑΛΑ και PSA και Log Κί67.

doi: 10.1371 /journal.pone.0053104.s001

(DOCX)

Πίνακας S2.

Κατανομή των SNPs μεταξύ των συμμετεχόντων.

doi: 10.1371 /journal.pone.0053104.s002

(DOCX)

Ευχαριστίες

Το υλικό αυτό είναι το αποτέλεσμα της δουλειάς που υποστηρίζονται με τους πόρους και τη χρήση των εγκαταστάσεων κατά τη Durham VA Medical Center. Η UAB Heflin Κέντρο Γονιδιωματική Επιστήμη Πυρήνας Εργαστήρια πραγματοποιούνται αναλύσεις του γονότυπου. Λιναρόσπορος δωρήθηκε από ENRECO, Inc.