Αφηρημένο

Όγκου εισβολή και μεταστάσεις αποτελούν μια σύνθετη σειρά μοριακών γεγονότων που προμηνύει μια φτωχή πρόγνωση. Η συμβολή των φλεγμονωδών μονοπατιών μεσολαβούν αυτή τη διαδικασία δεν είναι πλήρως κατανοητή. NOD-όπως υποδοχείς (ΕΜΑΜ) της έμφυτης ανοσίας λειτουργίας ως ενδοκυτταρική αισθητήρες των μοτίβων παθογόνου και μορίων κινδύνου. Προτείνουμε ένα ρόλο ΕΜΑΜ στην επιτήρηση του όγκου και σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο προγραμματισμού (TILs). Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την κατάντη σερίνης /θρεονίνης και τυροσίνης κινάσης RIP2 σε ένα μοντέλο ποντικού για καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Σε RIP2-ανεπαρκή ποντίκια C57BL6, μεγαλύτερα ορθοτοπικό όγκοι MB49 αναπτυχθεί με περισσότερο πολυάριθμες και μεγαλύτερη συχνότητα εμφάνισης μεταστάσεων συγκριτικά με ελέγχους άγριου τύπου. Ως εκ τούτου, η αυξημένη διείσδυση του όγκου του CD11b

+ Gr1

hi μυελοειδή προερχόμενα κατασταλτικών κυττάρων (MDSCs) με ταυτόχρονη μείωση σε Τ-λεμφοκύτταρα και κύτταρα ΝΚ παρατηρήθηκαν σε ζώα RIP2 ανεπάρκεια που φέρουν όγκο χρησιμοποιώντας ορθοτοπική και υποδόρια μοντέλα όγκου. RIP2 ανεπάρκεια όγκων έδειξαν αυξημένη επιθηλιακή-προς-μεσεγχυματικών μετάβασης, με αυξημένη έκφραση του

zeb1

,

zeb2

,

συστροφή

, και

σαλιγκάρι

στην το μικροπεριβάλλον του όγκου. Βρήκαμε ότι η απουσία RIP2 παίζει εγγενή ρόλο στην προώθηση της ανάπτυξης της κοκκιοκυτταρικής MDSCs από αυτοκρινείς και παρακρινείς επίδραση των κοκκιοκυττάρων παράγοντα διέγερσης αποικίας έκφρασης (G-CSF). Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι οδοί NLR μπορεί να είναι ένα μυθιστόρημα τροπικότητα να προγραμματίσετε TILs και μεταστάσεις των όγκων επιρροή

Παράθεση:. Zhang Η, Chin AI (2014) Ο ρόλος των RIP2 στην ανάπτυξη της διηθούν όγκο MDSCs και καρκίνο της ουροδόχου κύστης μετάσταση. PLoS ONE 9 (4): e94793. doi: 10.1371 /journal.pone.0094793

Επιμέλεια: Ρατζίβ Samant, Πανεπιστήμιο της Αλαμπάμα στο Μπέρμιγχαμ, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 19, Νοεμ 2013? Αποδεκτές: 20, Μαρ 2014? Δημοσιεύθηκε: 14 του Απριλίου 2014

Copyright: © 2014 Zhang, Chin. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αμερικανική Ένωση του Καρκίνου Βραβείο Ανάπτυξης ερευνητική σταδιοδρομία 10/20/14, Γενικοί Stem Cell Research Center μελετητές στο Translational Medicine Program, Βραβείο Ανάπτυξης STOP Cancer Research Καριέρα, Becton Dickinson Biosciences Research Grant (AI Chin) & amp? Ίδρυμα Perkins. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το πλαίσιο του ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον του όγκου μπορεί να είναι προγνωστικά της στάδιο του όγκου, ειδική για τον καρκίνο επιβίωση, καθώς και απόκριση σε χημειοθεραπεία [1] – [3]. Σε ορισμένες κακοήθειες, η παρουσία των διηθητικών CD8

+ Τ λεμφοκύτταρα συσχετίζεται με βελτιωμένα αποτελέσματα, ενώ διηθητικά κύτταρα Β, CD4

+ Τ λεμφοκύτταρα, και αρνητικοί ρυθμιστές συμπεριλαμβανομένων κυττάρων μυελοειδούς προερχόμενα καταστολής (MDSCs) και ρυθμιστικά κύτταρα Τ ( Tregs) αρνητικά συσχετίζονται με την επιβίωση [4]. Αυτές οι παρατηρήσεις υπογραμμίζουν τη σημασία στον καθορισμό οδών απαραίτητη για τον προγραμματισμό της σύνθεσης των λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο (TILs), όπως εκλεκτική ρύθμιση του ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον του όγκου αντιπροσωπεύει μια αναδυόμενη θεραπευτική τροπικότητα.

υποδοχείς αναγνώρισης προτύπων, όπως το πρωτότυπο Toll- όπως υποδοχέα (TLR) οικογένεια και ενδοκυτταρική νουκλεοτιδίων δεσμευτική τομέα ολιγομερισμού (NOD) -όπως υποδοχέα (NLR) οικογένεια αναγνωρίζουν συντηρημένα μοτίβα σε παθογόνους οργανισμούς, καθώς και ενδογενή μόρια που απελευθερώνονται από τα κατεστραμμένα κύτταρα [5]. Η ενεργοποίηση αυτών των οδών σηματοδότησης εκκινεί έμφυτη και προσαρμοστική ανοσοαποκρίσεις, και μπορεί να προωθήσει την επισκευή των ιστών και την αναγέννηση. Έχουμε προηγουμένως εμπλακεί TLR3 σε ένα μοντέλο ποντικού για καρκίνο του προστάτη επιτήρησης όγκου κρίσιμη στον προγραμματισμό της διήθηση των Τ λεμφοκυττάρων και ΝΚ κυττάρων, ενώ καταστέλλεται επέκταση Treg [6]. Στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης, η αποτελεσματικότητα του ανοσοποιητικού διαφοροποίησης τονίζεται από τη χρήση της ενδοκυστικής Bacillus Calmette Guerin, το οποίο προάγει την εισροή μακροφάγα και ουδετερόφιλα εντός μικροπεριβάλλον του όγκου που προκαλείται εν μέρει από TLR2 και 4 [7], [8].

Receptor-πρωτεΐνη αλληλεπίδρασης 2 (RIP2), μια σερίνη-θρεονίνη και κινάσης τυροσίνης κατάντη και κοινή για Nod1 και NOD2, ενεργοποιεί παράγοντες μεταγραφής όπως ΝΡ-κΒ και ΜΑΡ κινασών μέσω δραστικότητα κινάσης της, καθώς και μέσω της πρόσληψης του Ε3 ουβικιτίνης λιγάση [9] – [14]. RIP2-εξαρτώμενη μονοπάτια έχουν αναδειχθεί ως κρίσιμης σημασίας στην ανίχνευση διαφορετικών παθογόνων παραγόντων που κυμαίνονται από

Listeria monocytogenes

,

Staphylococcus aureus

, και

Legionella pneumophilia

να

Escherichia coli

καθώς και στην πρόκληση φλεγμονωδών διαταραχών όπως αυτοάνοση εγκεφαλομυελίτιδα [15] – [17]. Επιπλέον, πολυμορφισμοί του NOD2 έχουν συνδεθεί με την ευαισθησία σε νόσο του Crohn, ενώ πολυμορφισμοί του RIP2 έχουν συνδεθεί με συστηματικό ερυθηματώδη λύκο [18], [19]. Η ικανότητα του ΕΜΑΜ να μεσολαβήσει επιτήρησης όγκων δεν έχει ερευνηθεί μέχρι σήμερα. Εδώ, έχουμε υποθέτουν ότι RIP2 μπορεί να μεσολαβήσει επιτήρησης καρκίνο της ουροδόχου κύστης και να διερευνήσει το ρόλο του χρησιμοποιώντας ένα ορθοτοπικό και του υποδόριου μοντέλο καρκίνου της ουροδόχου κύστης ποντικού. Δείχνουμε ότι φέρουν όγκο RIP2 ανεπάρκεια προκαταλήψεις ποντίκια μυελοειδή διαφοροποίηση προς την καταγωγή MDSC και διαδραματίζει εγγενή ρόλο στην ανάπτυξη του CD11b

+ Ly6G

+ Ly6C

lo κοκκιοκυτταρικής πληθυσμού MDSC. Τα ευρήματά μας είναι τα πρώτα που εμπλέκουν RIP2 και ΕΜΑΜ στην επιτήρηση του όγκου και τη σημασία τους για τον προγραμματισμό του ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον του όγκου. Η οδός NLR μπορεί να αντιπροσωπεύει μια θεραπευτική ευκαιρία στη διαμόρφωση της ασυλίας του καρκίνου για την πρόληψη της εισβολής όγκων και μεταστάσεων.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλες οι εργασίες ζώο έχει διεξαχθεί σύμφωνα με την πολιτική δημόσιας υγείας Υπηρεσία για την ανθρώπινη φροντίδα και χρήση των πειραματόζωων και USDA Animal Welfare Act κανονισμών μέσω εγκεκριμένου UCLA φροντίδας ζώων και την Επιτροπή Χρήση του πρωτοκόλλου # 2010-023-11C.

Ποντίκια

RIP2-ανεπαρκή ποντίκια διασταυρώθηκαν με C57BL /6 υπόβαθρο για 10 γενιές γονότυπος όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10]. Ίδιας ηλικίας C57BL /6 ποντίκια (Jackson Laboratories) χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι. Έξι έως 8 εβδομάδων σε ηλικία θηλυκών ποντικών χρησιμοποιήθηκαν για τα πειράματα. Οι ποντικοί στεγάστηκαν σε συνθήκες άνευ παθογόνων σύμφωνα με τα πρωτόκολλα UCLA Επιτροπή Ερευνών των Ζώων.

Κυτταροκαλλιέργεια

MB49 κυτταρικές γραμμές (δώρο από τον Tim Ratliff) προήλθαν από καρκινογόνο επαγόμενη ουροθηλιακό καρκίνωμα κυττάρου σε C57BL6 ποντικούς και διατηρήθηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2 σε ϋΜΕΜ (Cellgro), συμπληρωμένο με 10% FBS (Omega Scientific) και 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη [20].

μοντέλα όγκου

για ενδοκυστική την εμφύτευση του όγκου, θηλυκά ποντίκια ναρκώθηκαν, σε καθετηριασμό με έναν καθετήρα 24 gauge (BD Biosciences), και ενστάλαξε με 10 μg του πολυ-L-λυσίνη (Sigma) σε 100 μΙ για 30 λεπτά πριν από την αποστράγγιση και την ενστάλαξη της 2 × 10

6 MB49 κύτταρα σε 100 μl για 60 λεπτά [21], [22]. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν 12 ημέρες μετά τον εμβολιασμό του όγκου, και εξετάστηκαν η κύστη και τα εσωτερικά όργανα. Της ουροδόχου κύστης, των πνευμόνων, και τα νεφρά σταθεροποιήθηκαν σε φορμαλίνη ή ενσωματωμένα σε OCT για χρώση με Η &? Ε ή ανοσοφθορισμό [23]. Πνευμονική και νεφρική μεταστάσεων προσδιορίστηκαν κατάφωρα και με μικροσκοπία φωτός της H & amp? Τμήματα Ε σε ένα ενιαίο αντιπροσωπευτικό τμήμα στεφανιαία σταυρό. Για προκλήσεις υποδόρια όγκου, 5 × 10

5 MB49 κύτταρα εμφυτεύθηκαν υποδορίως στα πλευρά των ποντικών με ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε κάθε δεύτερη μέρα. Μετά τη θυσία των ποντικών 14 ημέρες μετά τον εμβολιασμό με όγκο, οι όγκοι συλλέχθηκαν, ζυγίστηκαν, και διαχωρίστηκαν για ανάλυση.

Ανοσοφθορισμός και ανοσοϊστοχημεία

ανοσοφθορισμού διεξήχθη στις Οκτ-ενσωματωμένα τμήματα κατεψυγμένου ιστού. Τα τμήματα αποκλείστηκαν με 10% ορό κατσίκας και 10% BSA σε PBS για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα επί μία νύκτα στους 4 ° C, μετά πλύθηκαν και επωάστηκαν με Al-448 ή ΑΙ-466 δευτερογενές αντίσωμα αντι-αρουραίου κατσίκας (Invitrogen ) σε 1:800 αραίωση. Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε σε τομές όγκων εγκλεισμένους σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη. Οι τομές που υπόκεινται σε θερμαινόμενο αντιγόνο αποκάλυψης διάλυμα για 30 λεπτά, αποσβέστηκε σε 0,3% διοξείδιο του υδρογόνου σε PBS για 15 λεπτά, αποκλείστηκαν με 10% ορό κατσίκας και 10% BSA σε PBS για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, κατόπιν επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα επί μία νύκτα στους 4 ° C, επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα αντι-αρουραίου βιοτινυλιωμένο κατσίκα στο 1:800 αραίωση για 30 λεπτά σε RT, και αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ ABC (Vector Labs). Τα πλακίδια με αιματοξυλίνη. Οι τομές τοποθετείται με Vectorshield και αναλύθηκαν με φθορισμό ή οπτική μικροσκοπία (Zeiss). Τα αντισώματα περιλαμβάνουν CD11b (Μ1 /70, R & amp? D Systems), CD4 (RM4-5, Biolegend), CD8 (53,6 έως 7, R & amp? D Systems), CD49b (DX-5, Biolegend), Foxp3 (FJK-16, eBioscience), Ly6G (RB6-BC5, eBioscience), Ly6C (AL-21, BD Biosciences), Ε-καδχερίνη (MAB7481, R & amp? D Systems), Ν-cadherin (H-63, Santa Cruz Biotechnology), και φωσφο- ΙκΒα (Ser 32/36, # 9246, Cell Signaling).

συστοιχία Cytokine

Μία φλεγμονώδης κυτοκίνη συστοιχία συγκρίνοντας ορού από άγριου τύπου και RIP2-ανεπαρκή ποντίκια εμφυτευμένα με ενδοκυστική κύτταρα MB49 διεξήχθη όπως περιγράφεται (ARY006, R &? D Systems).

η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

Single-κυτταρικά εναιωρήματα παρασκευάζονται από τις σπλήνες, διαχωρισμένα κύτταρα του όγκου, ή διαφοροποιημένα κύτταρα του μυελού των οστών αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Αντισώματα, συμπεριλαμβανομένων CD4 (RM-4), CD8 (53-67), ΝΚ1.1 (pk-136), Β220 (ΚΑ3-6Β2), CD11b (Μ1 /70), CD45.2 (104), Gr1 (RB6- 8C5), Ly-6G (1Α8), και Ly-6C (al21) ελήφθησαν από την BD Biosciences. Η απόκτηση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε σε ένα FACS LSRII (BD Biosciences) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας FlowJo.

προερχόμενα από τον μυελό των οστών μυελοειδή διαφοροποίηση

BM-προερχόμενα κύτταρα που λαμβάνονται με έκπλυση μηριαία οστά και της κνήμης από C57BL /6 άγριου τύπου και RIP2

– /- ποντίκια. Μετά λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων με ρυθμιστικό ACK, τα υπόλοιπα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM συμπληρωμένο με 10% FBS και 20% των κυττάρων L929-ρυθμισμένα μέσα. Μετά από επώαση για 24 ώρες, τα μη προσκολλημένα κύτταρα συλλέχθηκαν και τοποθετήθηκαν σε 2 × 10

5 κύτταρα /mL σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 50 μΜ 2-μερκαπτοαιθανόλη, 10 mM HEPES, 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο, 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη, και συμπληρώθηκε με χρήση 20% L929 με 40 ng /mL G-CSF (Biolegend), 40 ng /mL GM-CSF (Invitrogen), ή σε συνδυασμό. Οι καλλιέργειες επωάστηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2 για 3 ημέρες. Την Ημέρα 3, προστέθηκε φρέσκο ​​μέσο με κατάλληλες κυτοκίνες. Την Ημέρα 4 καλλιεργημένα κύτταρα συλλέχθηκαν για FACS.

Απομόνωση των κυττάρων του ανοσοποιητικού διηθημένων από όγκο

όγκου ιστός τεμαχίστηκε σε PBS με αποστειρωμένο ψαλίδι σε τεμάχια περίπου 1 mm και υποβλήθηκε σε πέψη σε 0.25% κολλαγενάση IV σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FBS στους 37 ° C με 5% CO

2 για 3 ώρες [24]. Τα κυτταρικά εναιωρήματα διηθούνται μέσω ενός 70 μm πλέγμα κυττάρων, υποβλήθηκε σε ρυθμιστικό ACK για 5 λεπτά σε πάγο, και στη συνέχεια διηθείται μέσα από ένα σουρωτήρι κυψέλη 20 μΜ για κυτταρομετρία ροής. Κύτταρα ταξινομημένο χρησιμοποιώντας FACS Aria (BD Biosciences) σε CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi, CD45

+ CD11b

+ GR1

lo, και CD45

– κλάσματα συλλέχθηκαν για qPCR.

Ποσοτική RT-PCR

Ολικό RNA που εξάγεται από ταξινομημένα κύτταρα και φρέσκο ​​κατεψυγμένο όγκου κύστης όπως περιγράφεται (RNeasy Mini Kit, Qiagen) χρησιμοποιήθηκε για να συνθέσει cDNA χρησιμοποιώντας High Capacity cDNA Αντίστροφη Μεταγραφή Kits (Applied Biosystems). Σχετική έκφραση γονιδίου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems). Ένας Bio-Rad iCycler χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των δειγμάτων, ενώ η μέθοδος συγκριτικής κύκλος κατωφλίου χρησιμοποιήθηκε για να υπολογιστεί η έκφραση γονιδίου κανονικοποιήθηκε προς GAPDH ως αναφορά γονίδιο. χρησιμοποιήθηκαν εκκινητές σύνολα για τα ακόλουθα γονίδια: αργινάση-1, 5′-AGAGATACTTCCAACTGCCAGACT, 3′-ACCTGGCCTTTGTTGATGTCCCTA? iNOS, 5′-GCTGGAAGCCACTGACACTTCG, 3′-CGAGATGGTCAGGGTCCCCT? IL-4, 5′-GTCATCCTGCTCTTCTTTC, 3′-ATGGCGTCCCTTCTCCTGT? IL-10, 5′-GCTCTTACTGACTGGCATGAG, 3′-CGCAGCTCTAGGAGCATGTG? IL-12 ρ40, 5′-TGGTTTGCCATCGTTTTGCTG, 3′-ACAGGTGAGGTTCACTGTTT? ΙΡΝγ, 5′-GGATGCATTCATGAGTATTGC, 3′-CCTTTTCCGCTTCCTGAGG? M-CSF, 5′-AGGACCTGTTGGAGTTCCCTC, 3′-TTTCGCCCTCACACTTGATGA? G-CSF, 5′-CTCAACTTTCTGCCCAGAGG, 3′-AGCTGGCTTAGGCACTGTGT? GM-CSF, 5′-GCCATCAAAGAAGCCCTGAA, 3′-GCGGGTCTGCACACATGTTA? Zeb1, 5′-AACGGAGATTTGTCTCCCAGT, 3′-CTGTCCAGCTTGCATCTTTTC? Zeb2, 5′-TAGCCGGTCCAGAAGAAATG, 3′-GGCCATCTCTTTCCTCCAGT? Σαλιγκάρι, 5′-GCGGAAGATCTTCAACTGCAAATATTGTAAC, 3′-GCAGTGGGAGCAGGAGAATGGCTTCTCAC? Twist, 5′-CGGGTCATGGCTAACGTG, 3′-CAGCTTGCCATCTTGGAGTC? και GAPDH, 5′-GACCCCTTCATTGACCTCAAC, 3′-CTTCTCCATGGTGGTGAAGA.

Αποτελέσματα

Για να διερευνήσουν το ρόλο της RIP2 στην επιτήρηση των όγκων, που αμφισβήτησε άγριου τύπου και RIP2-ανεπαρκή ποντίκια με συγγενή MB49 κύτταρα σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Παρατηρήσαμε μια σχεδόν διπλάσια αύξηση στο βάρος του όγκου σε απουσία RIP2 (Σχήμα 1Α). Οι όγκοι συλλέχθηκαν από ποντικούς και των δύο γονότυπων έδωσαν στοιχεία εισβολή στον εξωστήρα μυ με Η &? Χρώση Ε υπό οπτικό μικροσκόπιο με μεγαλύτερους όγκους φαίνεται στο RIP2 ανεπάρκεια ζώα (Σχήμα 1Β). Gross και ιστολογική εξέταση των εσωτερικών οργάνων αποκάλυψε έναν μεγαλύτερο αριθμό των μεταστάσεων στους πνεύμονες και τα νεφρά του RIP2-ανεπαρκή ποντίκια σε μία περίπου τριπλάσια και δύο φορές υψηλότερη συχνότητα αντίστοιχα έναντι των μαρτύρων άγριου τύπου (Σχήμα 1C-D). Κανένα άλλο ακαθάριστο μεταστάσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ άλλων στο συκώτι

RIP2

+ /+ και RIP2

-. /- Ποντίκια ενδοκυστικά εμφυτεύονται με MB49 κύτταρα και θυσιάστηκαν στις 12 ημέρες αξιολογήθηκαν για όγκων της ουροδόχου κύστης (Α ) βάρος, (Β) ιστολογία με Η &? χρώση Ε σε x5 και x20 μεγέθυνση. C, οι πνεύμονες εξετάστηκαν για μετάσταση από τον αριθμό των μεταστατικών βλαβών ανά στεφανιαία τομή,% συχνότητα εμφάνισης, ιστολογία με Η &? Ε χρώση σε x10 και x40 μεγέθυνση, και το ακαθάριστο εξέταση. D, οι νεφροί εξετάσθηκαν για μετάσταση από τον αριθμό των μεταστατικών βλαβών ανά στεφανιαία τομή,% συχνότητα εμφάνισης, και ιστολογία με Η &? Ε χρώση στο x5 και x20 μεγέθυνση. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα που παρουσιάζονται. Στήλες, σημαίνει 33 RIP2

+ /+ και 19 RIP2

– /- ποντίκια συγκεντρώθηκαν από 5 ανεξάρτητα πειράματα? μπαρ, SEM. Όλα

σ τιμές

προσδιορίστηκαν από

t

δοκιμασία two-tailed του Student, με στατιστικά σημαντική ορίζεται ως p & lt? 0,05

Η

Έχουμε εμπλακεί στο παρελθόν RIP2 στην ανάπτυξη. του Th1 και ΝΚ κυττάρων [10], ενώ άλλοι ανέφεραν ένα ρόλο στην δενδριτικών κυττάρων διείσδυση [17]. Για να ερευνηθεί ο ρόλος του RIP2 στο πλαίσιο της ογκογένεσης, όγκου κύστης TILs εξετάστηκαν με ανοσοφθορισμό και ανοσοϊστοχημεία. Αυτό αποκάλυψε μειωμένη διείσδυση του CD8

+ Τ λεμφοκύτταρα, CD4

+ Τ λεμφοκύτταρα, και κύτταρα ΝΚ απουσία RIP2 όπως προβλέπεται. Εξέταση των Foxp3

+ κυττάρων εκπρόσωπο των ρυθμιστικών κυττάρων Τ, έδειξε μια αυξανόμενη τάση στην RIP2-ανεπαρκή ποντίκια σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου παρόλο που δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι όγκοι έδειξαν αυξημένη διείσδυση των CD 11 b

+ μυελοειδή κύτταρα σε RIP2 με ανεπάρκεια σε σύγκριση με ποντικούς άγριου τύπου, ενώ επιπλέον χαρακτηρισμός αυτού του μυελοειδούς πληθυσμό έδειξαν μια αναμενόμενη αύξηση στην μακροφάγων F4 δείκτη /80 και στο Gr-1 υποτύπου Ly6G, αλλά όχι τον υπότυπο Ly6C σε όγκους από RIP2-ανεπαρκή ποντίκια (Σχήμα 2).

Διείσδυση CD8, CD4, ΝΚ, CD11b, F4 /80, Ly6G, και κύτταρα που εκφράζουν Ly6C όπως υποδεικνύεται, εξετάστηκαν από ανοσοφθορισμού, και Foxp3 με ανοσοϊστοχημεία σε όγκους της ουροδόχου κύστης από RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια ενδοκυστικά εμφυτεύθηκαν MB49 κύτταρα και θυσιάστηκαν στις 12 ημέρες. Αριστερά πάνελ παρουσιάζουν ειδική χρώση του αντισώματος, μεσαίο πάνελ δείχνει χρώση DAPI, δεξιός πίνακας δείχνει συγχώνευση των αντισωμάτων και DAPI λεκέδες. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα από κάθε ομάδα τεσσάρων έως έξι ποντίκια σε 4 ανεξάρτητα πειράματα παρουσιάζονται στο x40 μεγέθυνση. γραφικές παραστάσεις Bar απαριθμήσει μέσος αριθμός κυττάρων ανά πεδίο x40 3 αντιπροσωπευτικές τομές από ομάδες των τεσσάρων ποντικών? μπαρ, SD. Όλα

σ τιμές

προσδιορίστηκαν από

t

δοκιμασία two-tailed του Student, με στατιστικά σημαντική ορίζεται ως p & lt?. 0.05

Η

Για να εξεταστεί περαιτέρω η λειτουργία της πληθυσμούς που διεισδύουν σε όγκο, μπορούμε υποδορίως εμφυτευμένων MB49 κύτταρα να παράγουν μεγαλύτερους όγκους να διευκολυνθεί η μεταγενέστερη διαλογή των κυττάρων. Ομοίως με ορθοτοπική όγκους, υποδόριων όγκων αναπτύχθηκε σε RIP2-ανεπαρκή ποντίκια είχαν αυξημένο μέγεθος σε σύγκριση με τα αντίστοιχα άγριου-τύπου (Σχήμα 3Α). Διαχωρισμένα όγκων ταξινομημένο για CD45

+ ΝΚ1.1

+ ΝΚ κύτταρα παρουσίασαν μειωμένη αριθμούς σε RIP2 με ανεπάρκεια σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου όπως αναμενόταν (Σχήμα 3Β). Οι αριθμοί των κυττάρων που διηθούν CD4 και CD8 ήταν πολύ μικρά για να ποσοτικοποιηθεί με κυτταρομετρία ροής (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Συνεπής με τα προηγούμενα ορθοτοπική όγκους, διαχωριστεί υποδόριων όγκων ταξινομηθεί για επιφανειακούς δείκτες CD11b

+ και Gr1

+ έδειξε εμπλουτίζεται αριθμούς των CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα από RIP2 ανεπάρκεια σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου (Σχήμα 3C). Να εξετάσει περαιτέρω τα λειτουργικά χαρακτηριστικά του CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα, εξετάσαμε ένα πάνελ των γονιδίων που αντιπροσωπεύουν μια υπογραφή MDSCs και μυελοειδούς υποπληθυσμών. Η αργινάση-1 και iNOS μεσολαβούν τα Τ κατασταλτικά αποτελέσματα του MDSCs [25]. ΙΡΝγ υποστηρίζει τη διαφοροποίηση προς κύτταρα Μ1, διακρίνονται με τη σειρά του από την έκκριση της IL-12. IL-4 πολώνει προδρόμων μυελοειδή προς ένα φαινότυπο Μ2, η οποία συνδέεται στενά με MDSCs που σχετίζονται με όγκο και εκφράζουν IL-10 για να μεσολαβήσει ανοσοποιητικό κατασταλτικά αποτελέσματα τους [26]. Δείχνουμε ότι RIP2 ανεπάρκεια CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα εξέφρασαν υψηλότερα επίπεδα αργινάσης-1 σε σύγκριση με κύτταρα από ποντικούς άγριου τύπου, με μια παρόμοια τάση στην έκφραση iNOS (Σχήμα 3D). Σταθερά, αυξημένη IL-10 έκφραση σε RIP2 ανεπάρκεια CD11b

+ παρατηρήθηκαν Gr1

hi κυττάρων σε σύγκριση με κύτταρα από ελέγχους άγριου τύπου, ενώ δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην έκφραση ΙΡΝγ και IL-12, ενδεικτικό της Μ2 πόλωση (Σχήμα 3D). Τα επίπεδα της IL-4 ήταν ανιχνεύσιμα στο CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

RIP2

+ /+ και RIP2

-. /- Ποντίκια υποδορίως εμφυτευμένων με MB49 κύτταρα για 14 ημέρες αξιολογήθηκαν για το (α) βάρος του όγκου, και ταξινομούνται με κυτταρομετρία ροής για να εξετάσει

+ ΝΚ1.1

+ κύτταρα (Β) CD45, και (Γ) CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi και CD45

+ CD11b

+ Gr1

lo κύτταρα. Στήλη, σημαίνουν τα τέσσερα ποντίκια? μπαρ SD. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. D, ταξινομημένα CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi και CD45

+ CD11b

+ Gr1

lo κύτταρα RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια εξετάστηκαν για την έκφραση της αργινάσης-1 και iNOS από qPCR, ενώ CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια ήταν εξετάστηκαν για έκφραση του IL10, IL-12, και ΙΡΝγ με qPCR. Στήλη, σημαίνει από δύο ποντίκια? μπαρ SD. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα που παρουσιάζονται. Όλα

σ τιμές

προσδιορίστηκαν από

t

δοκιμασία two-tailed του Student, με στατιστικά σημαντική ορίζεται ως p & lt?. 0.05

Η

Για να εξετάσει το Rip-2- εξαρτώμενη συστημική συνθήματα που μπορούν να επηρεάσουν την ανάπτυξη του μικροπεριβάλλον του όγκου, κυτοκίνη επίπεδα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας μία φλεγμονώδη κυτοκίνη συστοιχίας συγκρίνοντας ορού από άγριου τύπου και RIP2-ανεπαρκή ποντίκια εμφυτεύεται με ορθοτοπικό όγκους της ουροδόχου κύστης MB49. Τα επίπεδα των κυτοκινών επτά από τον πίνακα που περιλαμβάνει 40 κυτοκίνες βρέθηκαν αυξημένα σε απουσία RIP2. Η πλειοψηφία συνδέθηκαν με μυελοειδή διαφοροποίηση και χημειόταξη, συμπεριλαμβανομένων G-CSF, Μ-CSF, IL-16, MCP-1, TREM-1, ΤΙΜΡ-1, και IL-1α με τα σχετικά επίπεδα φαίνεται σχηματικά [27] – [33 ] (Σχήμα 4Α). Σπληνοκύτταρα από ποντίκια που φέρουν όγκο αναλύθηκαν για να αξιολογηθεί η επίδραση των μεταβολών αυτών των κυτοκινών, αποκαλύπτοντας σημαντικές διαφορές στον αριθμό των CD4

+ και CD8

+ Τ λεμφοκύτταρα, Β220

+ Β λεμφοκύτταρα, και ΝΚ1.1

+ κύτταρα, αλλά αυξημένη ανάπτυξη των CD11b

+ Ly6G

hi κύτταρα RIP2 ανεπάρκεια σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου, που αντιπροσωπεύουν τον πληθυσμό κοκκιοκυτταρική MDSC (Σχήμα 4Β). Για να εξεταστεί περαιτέρω η μικροπεριβάλλον του όγκου της ουροδόχου κύστης, εξετάσαμε ένα πάνελ κυτοκινών που επηρεάζουν τη λειτουργική πόλωση των μακροφάγων καθώς και τη διαφοροποίηση των MDSCs στις ενδοκυστική όγκους της ουροδόχου κύστης [34]. Αυξημένα επίπεδα της IL-4, G-CSF και GM-CSF παρατηρήθηκαν σε όγκους της ουροδόχου κύστης από RIP2 με ανεπάρκεια σε σύγκριση με ποντικούς άγριου τύπου, ενώ δεν παρατηρήθηκαν διαφορές σε ΙΡΝγ και έκφραση του M-CSF, σε συνέπεια με ένα μικροπεριβάλλον του όγκου προώθηση ανάπτυξη των MDSCs που σχετίζονται με όγκους (Σχήμα 4C). Να γίνει διάκριση μεταξύ της παραγωγής κυτοκίνης από όγκου και του περιβάλλοντος στρώματος στα μυελοειδή πληθυσμούς, εξετάσαμε την έκφραση του G-CSF στο CD45

– πληθυσμού που εκπροσωπούν τα καρκινικά κύτταρα και στρωματικά και CD11b

+ Gr1

hi πληθυσμού που εκπροσωπούν μυελοειδή κύτταρα , και έδειξαν αυξημένη G-CSF σε RIP2 ανεπάρκεια σε σύγκριση με το αγρίου τύπου CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα, γεγονός που υποδηλώνει μια αυτοκρινείς και παρακρινείς ρύθμιση των MDSCs απουσία RIP2 (Σχήμα 4D).

Α, φλεγμονώδεις έκφραση κυτοκίνης στον ορό του RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια ενδοκυστικά εμφυτευθεί MB49 κύτταρα για 12 ημέρες εκτιμήθηκε με ανάλυση της σειράς κυτοκίνης. Οι κυτοκίνες αυξήθηκε σε RIP2

– /- ποντίκια απεικονίζονται στο σχηματικό όπως φαίνεται. (+) 2-5x, (++) κατά 5-10 φορές, (+++) & gt? 10x με βάση την ποσοτικοποίηση του ImageJ. Τα αποτελέσματα είναι από διπλότυπα και αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. Β, σπληνοκύτταρα από RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια εξετάστηκαν για έκφραση των CD4, CD8, Β220, ΝΚ1.1, ενώ CD11b

+ κύτταρα εξετάστηκαν για έκφραση Ly6G και Ly6C με κυτταρομετρία ροής όπως υποδεικνύεται. Στήλη, σημαίνουν τα τέσσερα ποντίκια? μπαρ SD. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. C, Total όγκου από RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια ενδοκυστικά εμφυτεύθηκαν MB49 κύτταρα και θυσιάστηκαν 12 ημέρες εξετάστηκαν για έκφραση του IL-4, ΙΡΝγ, M-CSF, G-CSF, και GM -CSF με qPCR. Στήλη, σημαίνουν τα τρία ποντίκια? μπαρ SD. D, όγκοι από RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια υποδορίως εμφυτευμένων με MB49 κύτταρα για 14 ημέρες τμηματική να CD45

– και CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα και εξετάστηκαν για την έκφραση του G-CSF με qPCR. Στήλη, σημαίνουν τα τρία ποντίκια? μπαρ SD. Όλα

σ τιμές

προσδιορίστηκαν από

t

δοκιμασία two-tailed του Student, με στατιστικά σημαντική ορίζεται ως p & lt?. 0.05

Η

Ο πληθυσμός MDSC αποτελείται από ανώριμα μυελοειδή κύτταρα και μυελοειδή προγονικά κύτταρο που μπορούν να διαφοροποιηθούν σε ώριμα μακροφάγα, κοκκιοκύτταρα, και δενδριτικά κύτταρα. Χαρακτηρίζονται από την ικανότητα Τ λεμφοκυττάρων κατασταλτική και την έκφραση της αργινάσης-1 και iNOS [25]. Στον ποντικό, μπορούν να είναι περαιτέρω διακρίνονται σε κοκκιοκυτταρική MDSCs από την έκφραση των δεικτών επιφανείας CD11b

+ Gr1

hi ή CD11b

+ Ly6G

+ Ly6C

lo και μονοκυτταρική MDSCs από την έκφραση των δεικτών CD11b

+ Gr1

lo ή CD11b

+ Ly6G

loLy6C

hi [35]. Για να ελέγξετε την εγγενή ρόλο της RIP2 σε μυελοειδή ανάπτυξη, αφελείς μυελού των οστών από άγριου τύπου και RIP2-ανεπαρκή ποντίκια υποβλήθηκαν σε

in vitro

διαφοροποίηση χρησιμοποιώντας Μ-CSF, G-CSF, GM-CSF, ή G -CSF και GM-CSF για 4 ημέρες και εξετάστηκαν για έκφραση CD11b, Ly6G και Ly6C. Με την παρουσία του G-CSF, GM-CSF και G-CSF συν GM-CSF, η απουσία RIP2 οδήγησε σε μια προκατάληψη προς το CD11b

+ Ly6G

+ Ly6C

lo κοκκιοκυτταρική πληθυσμού MDSC ( Σχήμα 5Α). Σε BM προερχόμενο MDSCs διαφοροποιήθηκαν χρησιμοποιώντας G-CSF ή G-CSF και GM-CSF, αυξημένη αργινάσης-1 και η έκφραση iNOS ήταν ομοιόμορφα παρατηρήθηκε σε RIP2 με ανεπάρκεια σε σύγκριση με κύτταρα άγριου τύπου, σε συμφωνία με την αυξημένη ανάπτυξη του MDSCs (Σχήμα 5Β )

Α, του μυελού των οστών από αφελείς RIP2

+ /+ και RIP2

-. /- ποντίκια διαφοροποιήθηκαν από την M-CSF, G-CSF, GM-CSF και G-CSF συν GM-CSF, όπως αναφέρεται για τέσσερις ημέρες πριν από την κυτταρομετρία ροής για να εξετάσει την έκφραση του Ly6G και Ly6C σε CD11b

+ κύτταρα (που κυμαίνονται από 70-90%, δεν παρουσιάζεται). CD11b

+ LYG

+ Ly6C

lo και CD11b

+ LYG

loLy6C

Τα hi πληθυσμούς για κάθε ομάδα παρουσιάζεται ως το σύνολο των κυττάρων μετρήσεις ανά 10

5 ξεκινώντας κύτταρα ΒΜ. Β, έκφραση της αργινάσης-1 και iNOS από qPCR στο G-CSF και G-CSF συν GM-CSF διαφοροποιούνται μυελού των οστών από αφελείς RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια. Στήλη, σημαίνουν τα τρία ποντίκια? μπαρ SD. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα που παρουσιάζονται. Όλα

σ τιμές

προσδιορίστηκαν από

t

δοκιμασία two-tailed του Student, με στατιστικά σημαντική ορίζεται ως p & lt?. 0.05

Η

MDSCs έχουν εμπλακεί στην προώθηση της EMT , μία διεργασία κρίσιμη για τη διευκόλυνση της εισβολής των όγκων και την επακόλουθη μεταστάσεις όγκου [36]. Ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα της ΕΜΤ είναι ένας διακόπτης σε δείκτες προσκόλλησης επιφανείας με την απώλεια της Ε-καδερίνης και έκφραση του Ν-cadherin [37]. Για να διερευνηθεί η επίδραση της RIP2 σε ανάπτυξη του ΕΜΤ, εξετάσαμε την έκφραση των δεικτών πρόσφυσης σε ενδοκυστική όγκους και παρατηρείται μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης σε όλο τον όγκο με ταυτόχρονη αυξημένη έκφραση Ν-καδερίνης στο περιφερειακό του όγκου σε RIP2 με ανεπάρκεια σε σχέση με τα άγρια -τύπου ποντίκια (Σχήμα 6Α). ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ έχει εμπλακεί στην προαγωγή της ΕΜΤ και έτσι εξετάσαμε την ενεργοποίηση του ελλείψει του RIP2 [38]. Συνεπής με προηγούμενη βιβλιογραφία, παρατηρήσαμε μειωμένη κανονική ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ που παρουσιάζεται από μειωμένη έκφραση ρ-ΙκΒ σε RIP2 ανεπάρκεια όγκους (Σχήμα 6Β), υποδηλώνοντας ΝΡ-κΒ ανεξάρτητους μηχανισμούς να αντιπροσωπεύουν ΕΜΤ [39]. Για τη διερεύνηση άλλων μηχανισμών προώθησης της EMT, μια ομάδα των μεταγραφικών παραγόντων που εμπλέκονται στην EMT συμπεριλαμβανομένων των

Zeb-1

,

Zeb-2

,

σαλιγκάρι

, και

συστροφή

εξετάστηκαν σε όγκο και στρωματικά κύτταρα από υποδόριους όγκους σε διάσταση απεμπλουτισμένο του CD45, με την έκφραση του

Zeb-1

,

Zeb-2

, και

σαλιγκάρι

βρέθηκε αυξήθηκε σε RIP2 με ανεπάρκεια σε σύγκριση με το αγρίου τύπου ποντικών που φέρουν όγκο, και η αυξημένη έκφραση του

συστροφή

πλησιάζει στατιστική σημασία (Σχ 6C). Εξετάσαμε, επίσης, την έκφραση αυτών των EMT επαγωγής γονιδίων στους πνεύμονες περιέχουν μεταστάσεις από RIP2 άγριου τύπου και ελλιπή ως ποντίκια, αποκαλύπτοντας μια παρόμοια τάση με στατιστική σημαντικότητα για αυξημένη

συστροφή

έκφραση σε απουσία RIP2 (Σχήμα 6D).

Α, RIP2

+ /+ και RIP2

– /- ποντίκια ενδοκυστικά εμφυτευθεί MB49 κύτταρα για 12 ημέρες αξιολογήθηκαν για Ε-καδερίνη και η έκφραση Ν-καντερίνης με ανοσοφθορισμό. Μεγέθυνση x40. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. Β, γραφικές παραστάσεις Bar παρακάτω αποκλειστική απαρίθμηση μέσος αριθμός κυττάρων ανά πεδίο x40 των 3 αντιπροσωπευτικές τομές από ομάδες των τεσσάρων ποντικιών? μπαρ, SD. C, έκφραση του

Zeb-1

,

Zeb-2

,

σαλιγκάρι

, και

συστροφή

εξετάστηκαν από CD45

– αποσυνδεθεί συνολική ιστού του όγκου με qPCR. Στήλη, σημαίνουν τα τέσσερα ποντίκια? μπαρ SD. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. Α, Έκφραση

Zeb-1

,

Zeb-2

,

σαλιγκάρι

, και

συστροφή

εξετάστηκαν από διαχωρισμένο πνεύμονες περιέχουν μεταστάσεις από qPCR. Στήλη, σημαίνουν τα τέσσερα ποντίκια? μπαρ SD. Όλα

σ τιμές

προσδιορίστηκαν από

t

δοκιμασία two-tailed του Student, με στατιστικά σημαντική ορίζεται ως p & lt?. 0.05

Η

Συζήτηση

το ανοσοποιητικό σύνθεση του μικροπεριβάλλοντος του όγκου μπορεί να είναι προγνωστική της ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση. Αυτό έχει δειχθεί στο πλαίσιο των CD4

+ Τ λεμφοκύτταρα και CD1α δενδριτικά κύτταρα σε μασχαλιαίους λεμφαδένες συσχέτιση με ελεύθερη νόσου επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού [40], να διηθούν όγκο CD3

+ κυττάρων και CD8

+ Τ λεμφοκύτταρα στο παχύ έντερο [1] και καρκίνου της ουροδόχου κύστης αντίστοιχα [2]. Το υπόλοιπο των TILs μπορεί να βελτιώσει την προγνωστική ικανότητα του ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον, όπως CD4

l ° CD48

l ° CD8

hi ασθενείς παρουσίασαν βελτίωση της επιβίωσης χωρίς υποτροπή, ενώ η αναλογία των CD8

+ Τ κύτταρα να CD68

+ μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους προβλεπόμενη συνολική επιβίωση και την απάντηση στην εισαγωγική χημειοθεραπεία σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού [3]. αντικαρκινικής ανοσίας μπορεί να αυξηθεί με στοχοθέτηση αρνητικοί ρυθμιστές της Τ κυττάρου συν-διέγερση όπως αποδεικνύεται από την ανάπτυξη των αντι-ΟΤΙ_Α4 και αντι-PD1 θεραπευτικά, και μπορεί να επεκταθεί σε στόχευση Tregs και MDSCs [41]. Αυτά τα στοιχεία δείχνουν ότι η ενεργός προγραμματισμός του όγκου ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον μπορεί να είναι μια βιώσιμη στρατηγική για την αξιοποίηση και την προκατάληψη ανοσία προς μια απόκριση κατά του όγκου.

Έχουμε υποθέσει ότι η ικανότητα των PRRs να αισθάνονται συμφραζόμενα σήματα από τους παθογόνους παράγοντες για την κίνηση ανοσοαπόκριση συνδέεται άμεσα με την ικανότητα των DAMPS απελευθερώνονται από κυτταρικές βλάβες στο περιβάλλον του όγκου να διαμορφώσει ανοσία όγκου. Οι ΕΜΑΜ συμπεριλαμβανομένων Nod1 και NOD2 ενοχοποιηθεί σε αίσθησης διάφορα παθογόνα καθώς και κυτταρική τάσεις [42]. Ο ρόλος του κυτοσολίου PRRs, όπως η οικογένεια NLR σε επιτήρηση όγκου είναι ασαφής. Πρόσφατα, η απώλεια της RIP2 έχει εμπλακεί στην ανάπτυξη μεγαλύτερων του παχέος εντέρου σε ένα μοντέλο ποντικού [43]. Σε αυτό το χειρόγραφο, δείχνουμε ότι ΕΜΑΜ μέσω RIP2 σηματοδότησης μπορεί να διαμορφώσει το μικροπεριβάλλον του όγκου προς διηθούν όγκο CD8

+ Τ λεμφοκύτταρα, κύτταρα ΝΚ, και την καταστολή των MDSCs. Ομοίως, σε περίπτωση απουσίας του RIP2, μεγαλύτερα ορθοτοπικό όγκοι της ουροδόχου κύστης αναπτυχθεί καθώς και της αυξημένης μεταστάσεις όγκου τόσο στο πνεύμονα και νεφρά.

RIP2 περιγράφηκε αρχικά με βάση την ομολογία αλληλουχίας προς C-τερματικό πεδίο CARD της [44] . Αναπτύξαμε RIP2-ανεπαρκή ζώα και περιγράφονται έναν ρόλο στην έμφυτη ανοσία εμπλέκουν RIP2 κατάντη Nod1, και της προσαρμοστικής ανοσίας μεσολάβηση αποκρίσεων ΙΡΝγ σε Th1 και την ανάπτυξη ΝΚ [10]. Από τότε, η σημασία της RIP2 σε λειτουργία σηματοδότησης και μακροφάγων NLR έχει επικυρωθεί και έχει αποδειχθεί ότι παίζουν κρίσιμο ρόλο στην έμφυτη ανοσοποιητικό μεταγωγής σήματος της Nod1 και NOD2 υποδοχείς [45]. Σε περίπτωση απουσίας της ανάπτυξης του όγκου, βρήκαμε σημαντικές διαφορές στην ανάπτυξη όλων των splenocytic σειρών που εξετάστηκαν συμπεριλαμβανομένων CD11b

+ Gr1

+ κύτταρα σε RIP2 με ανεπάρκεια σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου. Ωστόσο, με την παρουσία της αύξησης του όγκου που παρατηρείται αυξημένη splenocytic CD11b

+ Ly6G

+ κύτταρα που εκπροσωπούν κοκκιοκυτταρικής MDSCs απουσία RIP2 [35].

Εξετάσαμε τη συστημική macroenvironment καθώς και των τοπικών επίπεδα μικροπεριβάλλον κυτοκινών που μεταβάλλεται από την απουσία έκφρασης RIP2. Είναι ενδιαφέρον, αυξημένα κυτοκινών στον ορό σημαντικό σε μυελοειδή διαφοροποίηση βρέθηκαν σε RIP2 ανεπάρκεια ζώα που φέρουν όγκο, με αυξημένα επίπεδα του G-CSF και M-CSF, όπως επίσης και MCP-1 και TREM-1. MCP-1 έχει ενοχοποιηθεί για υψηλότερη επανάληψη και χειρότερη πρόγνωση καρκίνου της ουροδόχου κύστης μεσολαβώντας εισβολή όγκου, ενώ TREM-1 έχει ενοχοποιηθεί για την ενεργοποίηση των κυττάρων Kuffner σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [27], [30].