Αφηρημένο

Σκοπός

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να καθοριστεί εάν microRNA προφίλ των ούρων και το πλάσμα σε ριζική προστατεκτομή μπορεί να διακρίνει δυνητικά θανατηφόρα από νωχελικός καρκίνο του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Μια ομάδα microRNAs είχε προφίλ στο πλάσμα των 70 ασθενών και τα ούρα των 33 ασθενείς που συλλέγονται πριν από ριζική προστατεκτομή. Έκφραση των microRNAs συσχετίστηκε με τις κλινικές παραμέτρους σε μια περίοδο παρακολούθησης 3,9 ετών για τον προσδιορισμό microRNAs που μπορεί να προβλέψει την κλινική ανταπόκριση μετά από ριζική προστατεκτομή. Μια προσέγγιση μηχανικής μάθησης εφαρμόστηκε για να δοκιμαστεί η προβλεπτική ικανότητα όλων των microRNAs προφίλ στα ούρα, πλάσμα, και ένα συνδυασμό και των δύο, και την παγκόσμια επίδοση αξιολογούνται χρησιμοποιώντας την περιοχή κάτω από το χειριστή του δέκτη χαρακτηριστική καμπύλη (AUC). Επικύρωση του ουροποιητικού έκφραση miRNAs διεξήχθη σε περαιτέρω ανεξάρτητη ομάδα των 36 ασθενών.

Αποτελέσματα

Ο καλύτερος προγνωστικός δείκτης στο πλάσμα με οκτώ Mirs απέδωσε μόνο μέτριες πρόβλεψης απόδοσης (AUC = 0,62). Ο καλύτερος προγνωστικός δείκτης της νόσου υψηλού κινδύνου επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας miR-16, miR-21 και miR-222 που μετράται στα ούρα (AUC = 0,75). Αυτός ο συνδυασμός των τριών microRNAs στα ούρα ήταν καλύτερος προγνωστικός δείκτης της νόσου υψηλού κινδύνου από κάθε επιμέρους microRNA. Χρησιμοποιώντας μια διαφορετική μεθοδολογία βρήκαμε ότι αυτό το σύνολο των miRNAs δεν ήταν σε θέση να προβλέψει υψηλού όγκου, υψηλής ποιότητας νόσο.

Συμπεράσματα

αρχικές διαπιστώσεις μας πρότεινε ότι πλάσματος και ούρων των χαρακτηριστικών των microRNAs σε ριζική προστατεκτομή μπορεί να επιτρέψει την πρόγνωση της συμπεριφοράς του καρκίνου του προστάτη. Ωστόσο, βρήκαμε ότι η υπογραφή έκφραση microRNA απέτυχε να επικυρώσει σε μια ανεξάρτητη ομάδα ασθενών χρησιμοποιώντας μια διαφορετική πλατφόρμα για την PCR. Αυτό τονίζει την ανάγκη για ανεξάρτητες ομάδες επικύρωση του ασθενούς και υποδηλώνει ότι η ακράτεια υπογραφές microRNA σε ριζική προστατεκτομή δεν μπορεί να είναι ένα ισχυρό τρόπος για να προβλέψουμε την πορεία της κλινικής νόσου μετά την οριστική θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Sapre Ν, το Χονγκ MKH, Macintyre G, Lewis Η Kowalczyk Α, Costello AJ, et al. (2014) Επιμέλεια: Τα microRNAs στα ούρα και το αίμα Fail για την επικύρωση ως έξυπνη βιοδείκτες για υψηλού κινδύνου του καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 9 (4): e91729. doi: 10.1371 /journal.pone.0091729

Επιμέλεια: Rui Medeiros, IPO, Inst Λιμάνι Ογκολογίας, Πορτογαλία

Ελήφθη: 24 Σεπτεμβρίου 2013? Αποδεκτές: 14 Φεβ 2014? Δημοσιεύθηκε: 4η, Απριλίου 2014

Copyright: © 2014 Sapre et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. NS είναι υποστηρίζονται από υποτροφίες για μεταπτυχιακές σπουδές από το Αντικαρκινικού Συμβουλίου Βικτώριας, Cybec Ίδρυμα και η Royal Australasian College of Surgeons. Η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από τη χρηματοδότηση από την Αυστραλιανή Κυβέρνηση της Αυστραλίας Καρκίνος του προστάτη Έρευνα Epworth. AK και GM υποστηρίζονται από NICTA. NICTA χρηματοδοτείται από την Αυστραλιανή Κυβέρνηση, όπως εκπροσωπείται από το Υπουργείο Ευρυζωνικότητας, Επικοινωνιών και Ψηφιακής Οικονομίας και το Συμβούλιο Έρευνας της Αυστραλίας μέσω του Κέντρου ΤΠΕ του προγράμματος Excellence. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη χαρακτηρίζεται από σαφώς μεταβλητή και απρόβλεπτη αποτελεσμάτων της. Η εισαγωγή των συγκεκριμένων δοκιμών (PSA) του προστάτη αντιγόνο έχει οδηγήσει σε δραματική αύξηση έγκαιρη ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη (ΚΓΠ) και η μετανάστευση στάδιο, ώστε περισσότεροι άνδρες με πρόωρη CaP στάδιο τώρα διαγνωστεί με τη νόσο [1], [2 ]. Ωστόσο, η δοκιμή δεν είναι ούτε ειδική για κάλυμμα [3], ούτε επιτρέπει την ακριβή διαστρωμάτωση κινδύνου και την επιλογή εκείνων των ασθενών που είναι πιθανό να υποκύψει στην ασθένεια τους, μετά την πρώιμη ριζική θεραπεία [4], [5]. Η νοσηρότητα που σχετίζεται με τυπικές θεραπείες έχει οδηγήσει σε μια πληθώρα μελετών ανάπτυξης βιοδείκτη σε μια προσπάθεια να εντοπιστούν οι ασθενείς είναι πιθανότερο να ωφεληθούν από την έγκαιρη παρέμβαση για να μειώσουν τον κίνδυνο της υποτροπής και της μετάστασης [6].

Παρά το γεγονός ότι μεγάλο μέρος της έρευνας έχει ως στόχο την εξεύρεση βιοδείκτες που μπορούν να βελτιώσουν τα ποσοστά ανίχνευσης του καρκίνου του προστάτη πάνω από την PSA, το βασικό ζήτημα κλινικά, είναι η ανίχνευση του Cap υψηλού κινδύνου σε πρώιμο, ιάσιμη φάση. Ενώ η πλειοψηφία των περιπτώσεων ακολουθούν μια νωχελικός πορεία και δεν χρειάζονται θεραπευτική αγωγή, ορισμένοι καρκίνοι έχουν τη δυνατότητα να κάνουν μετάσταση και απαιτούν επιθετική, νωρίς, κλινική παρέμβαση. Ωστόσο, οι τρέχουσες κλινικοπαθολογοανατομικές μοντέλα δεν επιτρέπουν στους γιατρούς να διακρίνουν με ακρίβεια σε πρώιμο στάδιο μεταξύ υψηλού κινδύνου και νωχελικός CaP [7]. Υπάρχει επείγουσα κλινική ανάγκη για νέα δείκτες που θα κάνουν διακρίσεις νωχελικός από επιθετικών καρκίνων του προστάτη σε πρώιμο στάδιο.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι περίπου 22 νουκλεοτιδίων μήκους, μονόκλωνο, μη-κωδικοποίησης RNAs που συνδέονται με συμπληρωματική «σπόροι» περιοχές που βρίσκονται στο 3 ‘μη μεταφραζόμενη περιοχή (UTR) του ιδιαίτερα αγγελιοφόρου RNA (mRNA) είδη. MiRNAs ρυθμίζουν την έκφραση του mRNA των στόχων τους, είτε τη σήμανση τους για την καταστροφή ή αναστολή της δέσμευσης τους σε μεταφραστικό μηχανισμό [8]. έχουν miRNAs δειχθεί ότι εμπλέκεται σε ένα ευρύ φάσμα σημαντικών φυσιολογικών και παθολογικών διαδικασιών που περιλαμβάνουν διαδικασίες του κυτταρικού κύκλου, την ανάπτυξη, την επιβίωση, τη διαφοροποίηση, την ανάπτυξη, την απόπτωση και ανοσολογική απόκριση [8].

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει την απορρύθμιση του miRNA είναι ένας σημαντικός μηχανισμός στην καρκινογένεση προστάτη [9] και ότι τέτοιες αλλαγές μπορεί να ανιχνευθεί σε ορούς ασθενών CaP [10], [11], [12], [13]. Υπάρχουν πολλά πλεονεκτήματα της miRNAs ως βιοδείκτες στην Biofluids. Biofluids όπως το πλάσμα και τα ούρα είναι λιγότερο επεμβατική για την απόκτηση σύγκριση με ιστό και miRNAs συχνά απορυθμισμένη στον καρκίνο και εκθεσιακό ιστού ειδική έκφραση. Επιπλέον, η έκφραση τους στο αίμα και τα ούρα είναι σταθερή και μπορεί να ποσοτικοποιηθεί με ευαισθησία με ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (RT-PCR) [14]. Έχει ως εκ τούτου ήταν πολύ ενθουσιασμό για τις δυνατότητες των miRNAs ως βιοδείκτες της ΚΓΠ. Ωστόσο, μερικές από αυτές τις μελέτες έχουν πραγματοποιηθεί συστηματικές επικύρωση αυτών των βιοδεικτών, η οποία έχει εμποδίσει την κλινική μετάφρασή τους στη διαχείριση της ΚΓΠ. Επιπλέον, η πλειοψηφία αυτών των μελετών που έχουν σχέση νωρίς καπάκι για να προχωρημένο /μεταστατικό ΚΓΠ που χρησιμοποιούνται δείγματα που συλλέχθηκαν μόλις οι ασθενείς έχουν αναπτύξει μεταστατική νόσο. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί εάν το προφίλ μιας ομάδας miRNAs στο πλάσμα και στα ούρα των ασθενών με πρωτοπαθή καρκίνο του προστάτη πριν από ριζική προστατεκτομή μπορεί να διακρίνει νωχελικός καπάκι από το φαινότυπο υψηλού κινδύνου και για την επικύρωση τυχόν ευρημάτων σε μια ανεξάρτητη κοόρτη ασθενών.

Υλικά και Μέθοδοι

ηθική Δήλωση

Το έργο αυτό είχε την έγκριση πλήρη ηθική από τη θεσμική συμβούλια αναθεώρηση. Οι εγκρίσεις δεοντολογία σχετικά με αυτό το χειρόγραφο είναι το Royal Melbourne Hospital Επιτροπή Ανθρωπίνων Έρευνας Ηθικής (HREC) αριθ 2006.073 και Epworth Υγείας HREC Νο 34506. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν πλήρη γραπτή συγκατάθεση για τα δείγματα τους για να αποθηκευτεί και να χρησιμοποιηθεί για την έρευνα με τη χρήση πληροφοριών του ασθενούς και έντυπα συγκατάθεσης ότι εγκρίθηκαν από τις επιτροπές δεοντολογίας.

πίνακας microRNA

επιλογή

Μια συστηματική ανασκόπηση της βιβλιογραφίας διεξήχθη στο PubMed για να βρει microRNAs εμπλέκονται στον προστάτη και επιθηλιακά έναρξη του καρκίνου, την εξέλιξη και τη μετάσταση με τη χρήση των όρων «προστάτη του καρκίνου »και« microRNA »τον Ιούλιο του 2011. Ο παραπομπές μελετών ελέγχθηκαν για περαιτέρω άρθρα που παρουσιάζουν ενδιαφέρον. θεωρήθηκαν Όλα τα άρθρα συμπεριλαμβανομένων πρωτότυπα άρθρα, κριτικές και αποσπάσματα. Με βάση την επισκόπησή μας, επιλέξαμε μια ομάδα 12 Mirs για προφίλ στο πλάσμα και 13 Mirs για προφίλ στα ούρα, το σύνολο των οποίων είχε τουλάχιστον 2 ανεξάρτητες μελέτες που δημοσιεύθηκαν δείχνουν εμπλοκή στην καρκινογένεση του καρκίνου του προστάτη, με προτίμηση να δίνεται σε εκείνους με ταυτόχρονη υποστήριξη μηχανιστικά δεδομένα . Επιπλέον θα περιλαμβάνονται RNU48 στο πάνελ μας ως υποτιθέμενο ενδογενούς ελέγχου [15].

Επιλογή ασθενών

Όλοι οι ασθενείς με διάγνωση του καπακιού που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή στο Νοσοκομείο Epworth 2003-2010 με λεπτομερείς PSA παρακολούθηση και πλήρη κλινική και παθολογική δεδομένα προσδιορίστηκαν από μελλοντικά καταγράφονται και να διατηρούνται ειδική βάση δεδομένων του καρκίνου του προστάτη. Η πρώτη ομάδα αποτελούνταν από ασθενείς με καρκίνο υψηλού κινδύνου φαινότυπο του προστάτη (η = 33 δείγματα πλάσματος, 16 δείγματα ούρων) και ασθενείς με χαμηλού κινδύνου ή βραδείας εξέλιξης του καρκίνου του φαινοτύπου (n = 37 δείγματα πλάσματος, 17 δείγματα ούρων). Η δεύτερη (επικύρωση) κοόρτη αποτελούνταν από ασθενείς με καρκίνο υψηλού κινδύνου φαινότυπο του προστάτη (δείγματα n = 22 τα ούρα) και ασθενείς με καρκίνο του προστάτη βραδείας φαινότυπο (n = 14 δείγματα ούρων). καρκίνο υψηλού κινδύνου ορίστηκε ως Gleason βαθμολογία μεγαλύτερη ή ίση με 7 και ο όγκος του όγκου & gt? 1cc ή ανάπτυξη μεταστατικής νόσου ή νωρίς βιοχημικής υποτροπής που υποδηλώνουν συστημικής μικρο μεταστάσεων (σύντομη PSA χρόνος διπλασιασμού, απέτυχε διάσωσης ακτινοθεραπεία, PSA επιμονή). καρκίνος νωχελικός ορίστηκε ως Gleason 6, Τ2α, PSA & lt? 10 και PSA επιβίωσης χωρίς επί τουλάχιστον 3 έτη (κριτήρια Epstein) [16]. Πλάσματος και ούρων συλλέχθηκαν από ασθενείς πριν από προστατεκτομή αμέσως μετά από μια δακτυλική εξέταση, καταψύχθηκαν ταχέως και αποθηκεύτηκαν σε υγρό άζωτο.

συλλογή Κλινικά δεδομένα

Σχετικές κλινικά και παθολογικά δεδομένα καταγράφηκαν προοπτικά και αναλύθηκαν αναδρομικά. Λεπτομέρειες του PSA παρακολούθησης καταγράφηκαν προοπτικά και ενημερώνεται σε ετήσια βάση. Οι όγκοι του όγκου μετρήθηκαν με ακρίβεια με υπολογιστική επιπεδομετρία κατά τη στιγμή της ιστολογική εξέταση, όπως περιγράφεται προηγουμένως [17]. Το σύστημα (2002) ταξινόμησης ΤΝΜ χρησιμοποιήθηκε για να οργανώσει τα δείγματα. Η βαθμολογία ποσό Gleason, και το στάδιο παθολογική όγκου ήταν όλα αξιολογούνται χωριστά. Για τους ασθενείς που δεν βιώνουν μια βιοχημική υποτροπή κατά τη διάρκεια της περιόδου της μελέτης, παρακολούθησης λογοκρίθηκε κατά τη χρονική στιγμή της τελευταίας καταγράφεται τεστ PSA τους. Για τους ασθενείς με περισσότερες από μία μετεγχειρητική PSA καταγράφονται, PSA διπλασιασμό του χρόνου (PSAdt) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο κλίσης log [18]. Για τη μελέτη αυτή, βιοχημική υποτροπή ορίστηκε ως η μετεγχειρητική τιμή του PSA μεγαλύτερη ή ίση με 0,2 ng /ml και η άνοδος, ή αύξηση του επιπέδου του PSA κάτω από αυτό το όριο το οποίο θεωρήθηκε από τον θεράποντα ιατρό να αντιπροσωπεύει μια υποτροπή και οδήγησε στο φορέα του διασώσουν θεραπεία. Σημαντικές βιοχημικές υποτροπή ορίστηκε ως PSA επανάληψη με ένα χρόνο διπλασιασμού & lt? 6 μήνες, όπως αυτό έχει αποδειχθεί ότι είναι μια πιο ακριβή προγνωστικό της ανάπτυξης των μεταστάσεων και τη θνησιμότητα του καρκίνου-ειδικές από PSA επανάληψη μόνος [19], [20]. Για τους ασθενείς με πρωτοπαθή επιμονή PSA οι οποίοι αμέσως αντιμετωπίζονται με θεραπεία διάσωσης η PSAdt αυθαίρετα υποτίθεται ότι είναι & lt? 6 μήνες. Συλλογή και χρήση των πληροφοριών αυτών είχε την έγκριση της Μελβούρνης Επιτροπής Δεοντολογίας Υγείας.

RNA εξόρυξη

500 μl πλάσματος ή ούρων αποψύχθηκε πάνω σε πάγο για συνολική εκχύλιση του RNA χρησιμοποιώντας την mirVana miRNA Kit Απομόνωση (Ambion, TX, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή με τις ακόλουθες τροποποιήσεις /συνθήκες: 1,5 όγκους λύσης /ρυθμιστικού διαλύματος πρόσδεσης χρησιμοποιήθηκε για κυτταρική λύση, πριν από την προσθήκη του προϊόντος ομογενοποίησης, και το RNA εκλούεται σε 40 μΐ νερό. RNA εκλούσεις καταψύχθηκαν σε ξηρό πάγο και αποθηκεύτηκαν σε -80 ° C.

RT-PCR

RNA συμπυκνώθηκε από 40 μΐ έως 15 μΐ χρησιμοποιώντας ένα Savant SpeedVac (Thermo Fisher Scientific, NC, USA) στους 45 ° C /υψηλής πίεσης. Αντίστροφη μεταγραφή εκτελέστηκε σε συσκευή θερμικού κύκλου (Applied Biosystems, CA, USA) χρησιμοποιώντας το Taqman microRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, CA, USA) σύμφωνα με το μικρό πρωτόκολλο του προσδιορισμού RNA κατασκευαστή με τις ακόλουθες τροποποιήσεις: 7 μΙ RNA χρησιμοποιήθηκε ως εκμαγείο και συγκεντρώθηκαν εκκινητές που χρησιμοποιούνται για τα προ-επιλεγμένα 14 είδη miRNA.

Original Cohort.

Ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR διεξήχθη με την προκύπτουσα cDNA για έθιμο Taqman χαμηλής πυκνότητας κάρτες Array (Applied Biosystems , CA, USA) που περιέχουν εκκινητές για πάνελ miRNA μας σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και η μέση περιλαμβάνονται στην τελική ανάλυση. TLDA κάρτες τρέχει σε ένα σύστημα PCR 7900HT Fast Real-Time.

Επικύρωση Cohort.

προενίσχυση του συντίθεται cDNA έγινε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, 2.5 cDNA μΙ προστέθηκε σε 12,5 μl προενίσχυση βασικού μείγματος, πισίνα αστάρι 3,75 ul και 6.25 μλ ύδατος άνευ νουκλεάσης. Αυτή η αντίδραση θερμάνθηκε στους 95 ° C για 10 λεπτά, 55 ° C για 2 λεπτά, 72 ° C για 2 λεπτά που ακολουθείται από 12 κύκλους ενίσχυσης πριν από τη θέρμανση στους 99 ° C για 10 λεπτά. Τα ενισχυμένα προϊόντα της αντίδρασης αραιώθηκε σε 200 μΐ χρησιμοποιώντας 0,1 χ ρυθμιστικό διάλυμα Tris-EDTA (ρΗ = 8). RT-PCR διεξήχθηκε στο VIIa 7 (Applied Biosystems, CA, USA) χρησιμοποιώντας 0.5 υΙ 20 χ miRNA δοκιμασίας, 0.1 μλ προϊόν προενισχυτή, 5.0 μλ TaqMan Fast καθολική PCR Master Mix (2⊥), 4,4 μΙ ύδατος άνευ νουκλεάσης ήταν συνδυάζονται για μία αντίδραση 10 ul PCR. Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και η μέση περιλαμβάνονται στην τελική ανάλυση.

Ανάλυση

Δεδομένα

Προ-επεξεργασία.

κατώτατα όρια για την PCR πειράματα που χρησιμοποιούν RQ Manager ( Applied Biosystems) και να ελέγχεται με το χέρι για να εξασφαλιστεί το cT αντιστοιχεί στην μέσο της λογαριθμικής ενίσχυσης. Όλα τα παρατηρούμενα Ct τιμές μεγαλύτερες από 34 δεν θεωρήθηκαν εκφράζονται και ρυθμίστε έως 34. Οποιεσδήποτε απροσδιόριστες τιμές Ct επίσης οριστεί σε 34. Καθώς κάθε miR σκιαγραφήθηκε εις τριπλούν, οποιαδήποτε τιμή επαναληπτικές περισσότερο από το 20% διαφορετική από τις υπόλοιπες δύο τιμές θεωρήθηκε ακραία τιμή και να απομακρύνονται από την ανάλυση. Η μέση τιμή Ct στη συνέχεια προσδιορίζεται για κάθε δείγμα και miR όλη επαναλήψεις.

Ομαλοποίηση.

RNU48 είχε περίγραμμα σε κάθε δείγματα ως ενδογενή έλεγχο, αλλά κρίθηκε ακατάλληλη για το πλάσμα όπως στην πλειοψηφία των δείγματα δεν ανιχνεύθηκε (Σχήμα 1α), θεωρείται ακατάλληλη για τα ούρα όπως ήταν το miR με το τρίτο υψηλότερο τυπική απόκλιση (Σχήμα 1β), και έδειξε μεταβλητή έκφραση μεταξύ των ομάδων υψηλού κινδύνου και χαμηλού κινδύνου. Ως εκ τούτου, γεωμετρικός μέσος ομαλοποίηση χρησιμοποιήθηκε, ένα ομαλοποίηση δειχθεί ότι είναι αποτελεσματική σε miR PCR profiling [21]

α) τιμές Ct για το ενδογενές ελέγχου σε όλα τα δείγματα στην κοόρτη πλάσμα. Μια Ct των 34 θεωρείται απαρατήρητα. β) η τυπική απόκλιση των τιμών Ct όλη δείγματα για κάθε miR στην αρχική ομάδα των ούρων.

Η

ανάλυση Διαφορική έκφραση.

Η μέση τιμή Ct των δειγμάτων που ανήκουν σε υψηλού κινδύνου και χαμηλής ομάδες -Κίνδυνος χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό ΔΔCt. Διπλώστε-αλλαγή αυτή υπολογίζεται ως 2

-ΔΔCt. Ένα t-test σπουδαστών χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό της σημαντικότητας της διαφοράς μεταξύ των ομάδων υψηλού και χαμηλού κινδύνου και την π-αξία προσαρμόστηκε για πολλαπλές διόρθωση δοκιμές με τη μέθοδο Benjamini-Hochberg [22]

Επιλογή Χαρακτηριστικών και classifiaction .

υποθέτουμε τα δεδομένα δίνονται ως μήτρα, Ν χαρακτηριστικά (Mirs) για

M

δείγματα, δηλαδή και με το διάνυσμα ετικέτα διατεταγμένα κατά τέτοιο τρόπο ώστε για και για τα υπόλοιπα δείγματα. Έχουμε χρησιμοποιήσει δύο διαφορετικές μεθόδους για την επιλογή /παραγγελία των χαρακτηριστικών /Mirs από τα περισσότερα προς το λιγότερο «διακρίσεις». Η πρώτη μέθοδος που χρησιμοποιήθηκε ήταν t-test του Student κλασική, που διατίθεται στο

i

-ου χαρακτηριστικό το scorewheredenote τα μέσα anddenote τις διακυμάνσεις του

i

-ου μεταβλητή για δείγματα των δύο ομάδες ενδιαφέροντος, αντίστοιχα. Στη συνέχεια, τα χαρακτηριστικά κατατάσσονται στην φθίνουσα σειρά απόλυτων τιμών του στατιστικού αποτελέσματος, για. Η δεύτερη τεχνική, που ονομάζεται

το κέντρο βάρους

επιλογής χαρακτηριστικών, κατατάσσει τη δυνατότητα στην φθίνουσα σειρά του μεγέθους της διαφοράς μεταξύ των μέσων του

i

-ου μεταβλητή για τα δείγματα των δύο ομάδων ενδιαφέροντος.

Για διαφόρων υποσυνόλων του

t

κορυφαία χαρακτηριστικά,, δημιουργήσαμε γραμμική classifiersfor ένα δείγμα, χρησιμοποιώντας έναν αλγόριθμο μηχανή φορέα υποστήριξης, η οποία επιλέγεται βάρη

w

k

και το σημείο τομής

β

ελαχιστοποιώντας την ακόλουθη λειτουργική: Εδώ

C

είναι ρυθμιζόμενο συνεχή νομιμοποίηση, με ένα σχετικά αδύναμο αντίκτυπο στο τελικό αποτέλεσμα στην περίπτωσή μας. Τα αποτελέσματα που αναφέρθηκαν έχουν χρησιμοποιηθεί

C

= 1.

Αποτελέσματα

Τα δημογραφικά στοιχεία και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά των ασθενών χαμηλού κινδύνου και υψηλού κινδύνου στην ομάδα 1 (ανακάλυψη ομάδα) στο πλάσμα και στα ούρα προφίλ βραχίονες περιγράφονται στον πίνακα 1.

Η

microRNA χαρακτηριστικών των

πλάσματος

Η πλειοψηφία των miRNAs ήταν σε ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις στο πλάσμα των ασθενών με προστάτη υψηλού κινδύνου καρκίνο και καρκίνο του προστάτη χαμηλού κινδύνου (Σχήμα 2). Τρία δείγματα έδειξαν συνολικά χαμηλά ποσοστά ανίχνευσης και απομακρύνθηκαν από περαιτέρω ανάλυση. Χωρίς επίβλεψη ομαδοποίησης εφαρμόστηκε σε δείγματα σε όλα τα 12 Mirs προφίλ στο πλάσμα να καθορίσει αν υπήρχε διαχωρισμός μεταξύ των ομάδων υψηλού κινδύνου και χαμηλού κινδύνου. φαίνεται να υπάρχει εμφανής διαχωρισμός μεταξύ υψηλής και χαμηλής επικινδυνότητας ομάδες εκεί. Εφαρμόσαμε μια διαδικασία επιλογής χαρακτηριστικών και δοκιμαστεί η απόδοση των 12 Mirs για την ικανότητά τους να οριοθετηθούν καρκίνου του προστάτη υψηλού κινδύνου από καρκίνο του προστάτη χαμηλού κινδύνου. Ο Πίνακας 2 δείχνει τα αποτελέσματα από τη διαδικασία επιλογής χαρακτηριστικό μας. Χρησιμοποιώντας τόσο το t-test και κεντροειδές διαδικασία επιλογής χαρακτηριστικών, επελέγη mir16 ως το πιο προγνωστική χαρακτηριστικό, ωστόσο, η κατάταξη έδειξε ασταθής αποτελέσματα από όλους τους Mirs. Σχήμα 3, δείχνει μια καμπύλη ROC για mir16, αποδεικνύοντας ότι το miR έχει συνολική αρκετά φτωχή απόδοση με μια περιοχή κάτω από την καμπύλη των 0,62. Ενώ πρόβλεψης, αποφασίσαμε αυτή η απόδοση δεν ήταν επαρκή για να δικαιολογήσουν περαιτέρω επικύρωση.

Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε ανεξέλεγκτους ιεραρχική ομαδοποίηση και τα αποτελέσματα απεικονίζονται με το δενδρόγραμμα στο πάνω μέρος της εικόνας.

miR-16 δεν προβλέψουμε με ακρίβεια πιθανότητα εμφάνισης της νόσου υψηλού κινδύνου σε ριζική προστατεκτομή (AUC = 0,62).

Η

microRNA προφίλ των ούρων

Discovery κοόρτη.

διαλογής ούρων, όλα τα δείγματα έδειξαν ανιχνεύσιμο επίπεδο έκφρασης για τις επιλεγμένες Mirs (Σχήμα 4). Ανεξέλεγκτη ομαδοποίηση των δειγμάτων σε όλες τις Mirs έδειξε μια μέτρια διαχωρισμό των χαμηλού κινδύνου και τα δείγματα υψηλού κινδύνου (Σχήμα 4). Mirs 16, 20α, 21, 34α, 145, 106β, 182, 205, 221, 222, 331 και 375 ανιχνεύθηκαν σε υψηλότερα επίπεδα στην ομάδα υψηλού κινδύνου, ενώ miR 218 ανιχνεύθηκε σε χαμηλότερα επίπεδα στα ούρα υψηλού κινδύνου ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Από αυτές τις Mirs όλα αλλά miR 218 ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων υψηλού και χαμηλού κινδύνου (τιμή Q & lt? 0,1) όπως φαίνεται στον Πίνακα 3. Η πολλαπλή μεταβολή για τα miRNAs, τα οποία ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω κυμαίνονταν από 2,17 (MIR 145) έως 8.09 (mIR 222), όπως φαίνεται στον πίνακα 3. Για τον προσδιορισμό της ελάχιστο σύνολο Mirs οποία έδειξε τον καλύτερο διαχωρισμό των ομάδων υψηλού και χαμηλού ρίσκου, χρησιμοποιήσαμε μία διαδικασία επιλογής χαρακτηριστικό της οποίας τα αποτελέσματα μπορεί να φανεί στον πίνακα 4. Τόσο το t- διαδικασία επιλογής χαρακτηριστικό δοκιμής και το κέντρο βάρους διαδικασία επιλεγμένη mir16 και miR222 ως η πιο έξυπνη χαρακτηριστικά. Πέρα από αυτό, η κατάταξη των επιδόσεων miR ήταν ασταθής. Ως εκ τούτου, επιλέξαμε miR222 και mir16 για την επικύρωση. Επιπλέον, εμείς επιλέξαμε επίσης miR21. Ακόμα κι αν δεν τοποθετούν σε υψηλή βαθμίδα για τη διαδικασία επιλογής χαρακτηριστικών, έχουμε επιλέξει ως ένα χαρακτηριστικό που ήταν πιθανό να είναι ανεξάρτητη από miR222 και mir16, καθώς η τουλάχιστον συσχετίζεται miR μέσα στο σύμπλεγμα που περιέχει miR222 και mir16 (Σχήμα 4). Ελέγξαμε την απόδοση όλων των συνδυασμών των 3 Mirs και οι τρεις συνδυασμένες έδειξε την καλύτερη απόδοση του AUC = 0,75 (Σχήμα 5). Εμείς έκρινε πως αυτή η απόδοση επαρκή για περαιτέρω συνέχισης και αναζήτησε μια ομάδα επικύρωσης.

Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε ανεξέλεγκτους ιεραρχική ομαδοποίηση και τα αποτελέσματα απεικονίζονται με το δενδρόγραμμα στο πάνω μέρος της εικόνας.

Η

miR 16, miR 222 και miR 21 προβλέψουμε τον καρκίνο του προστάτη υψηλού κινδύνου με την AUC του 0,75.

Η

Η

Επικύρωση ομάδα.

Τα δημογραφικά στοιχεία και οι κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των ασθενών χαμηλού κινδύνου και υψηλού κινδύνου στην ομάδα 2 (επικύρωση ομάδα) που περιγράφονται στον πίνακα 5. η επαλήθευση πραγματοποιείται μόνο για την ακράτεια έκφραση ως ταξινομητής για την έκφραση των miRNA πλάσμα απέδωσε μόνο μέτριες επιδόσεις.

Εμείς επιλέξαμε miR 16, 21 και 222 για την επικύρωση σε μια ανεξάρτητη ομάδα των καρκίνων του χαμηλού κινδύνου και του προστάτη υψηλού κινδύνου. Επιλέξαμε μια διαφορετική μέθοδο των χαρακτηριστικών των miRNAs στην ομάδα επικύρωσης για τη δοκιμή για την ευρωστία, όπως περιγράφεται στις μεθόδους. Για να ελέγξετε για την ομοιομορφία της ανίχνευσης στις δύο πλατφόρμες, μπορούμε προφίλ των δειγμάτων από την αρχική ομάδα για την νέα πλατφόρμα και παρατήρησε τον συσχετισμό των τιμών Ct μεταξύ των πλατφορμών για τις τρεις Mirs. Και οι τρεις Mirs έδειξαν υψηλή συσχέτιση μεταξύ των πλατφορμών (Σχήμα 6) υποδηλώνοντας ότι η ανίχνευση αυτών των Mirs ήταν εύρωστη. επιδόσεις τους ως προγνωστικοί παράγοντες της νόσου υψηλού κινδύνου ήταν επίσης συγκρίσιμο σε όλες τις πλατφόρμες (Σχήμα 7, AUC = 0,72). Εντούτοις, όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, στην κοόρτη επικύρωσης, βρήκαμε ότι οι τρεις miRNAs ήταν εκπληκτικά ανιχνεύθηκαν σε χαμηλότερα επίπεδα στην ομάδα υψηλού κινδύνου, σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλού κινδύνου: miR 16 (FC = 0,07, q = 0,08 ), miR 21 (FC = 0,14, q = 0,10) και miR 222 (FC = 0,14, p = 0,10). Όταν ο ταξινομητής χτισμένο στην αρχική ομάδα, χρησιμοποιώντας τα τρία Mirs χρησιμοποιήθηκε στην ομάδα επικύρωσης, πετύχαμε μια παράσταση της AUC = 0.35 (Σχήμα 7).

R

2 τιμές αντιπροσωπεύουν Pearson συσχέτιση.

προστάτη ασθενών με καρκίνο από την αρχική ομάδα (μπλε). ασθενείς με καρκίνο του προστάτη από την ομάδα επικύρωσης (κόκκινο).

Η

Αξιολόγηση της μεθοδολογίας των miRNA προφίλ.

Για να αξιολογήσει εάν αυτή η αλλαγή στο πρότυπο έκφρασης των miRNAs οφειλόταν σε μεθοδολογική διαφορά, εμείς προφίλ για τις τρεις miRNAs που χρησιμοποιούν και τις δύο μεθοδολογίες για την αρχική ομάδα ανακάλυψη. Βρήκαμε ότι η χρήση των δύο μεθόδων, οι τρεις miRNAs ανιχνεύθηκαν σε υψηλότερα επίπεδα στην ομάδα υψηλού κινδύνου στην αρχική ομάδα ανακάλυψη. Σύγκριση της έκφρασης αυτών των τριών miRNAs χρησιμοποιώντας και τις δύο μεθοδολογίες για την αρχική ομάδα έδειξε καλή συσχέτιση (συντελεστής συσχέτισης R

2 = 0,96 (miR 16), R

2 = 0,91 (miR 222) και R

2 = 0.86 (miR 21)), επιβεβαιώνοντας ότι η διαφορά που παρατηρείται οφείλεται σε βιολογικές διαφορές παρά τις μεθοδολογικές διαφορές.

Συζήτηση

Πρόβλεψη CaP υψηλού κινδύνου παραμένει μια πρόκληση και αυτό ενισχύει την τρέχουσα υπερθεραπεία μας βιολογικά ασήμαντη καρκίνους. Για οποιοδήποτε βιοδείκτη που πρέπει να μεταφραστεί με επιτυχία στην κλινική αρένα, θα πρέπει να αντέχει επαρκή επικύρωση σε ανεξάρτητες ομάδες ασθενών και να αποδείξει μεθοδολογικές ευρωστία. Σε αυτή τη μελέτη έχουμε επισημάνει τη σημασία της επικύρωσης αποτελέσματα σε μια ανεξάρτητη ομάδα, χρησιμοποιώντας εναλλακτική μεθοδολογική πλατφόρμες. Στην αρχική ομάδα, βρήκαμε ότι το miR 16, 222 και 21 υπερεκφράζεται στον καρκίνο του προστάτη υψηλού κινδύνου σε σχέση με τον καρκίνο του χαμηλού κινδύνου και των ουροφόρων προφίλ του miR 16, miR 222 και miR 21, ήταν σε θέση να διακρίνουν μεταξύ αυτών των μορφών καρκίνου που ενδέχεται να έχουν ένας νωχελικός πορεία από τα βιολογικά σημαντικών καρκίνων μετά από ριζική προστατεκτομή. Ωστόσο, αυτά τα ίδια miRNAs βρέθηκαν να να ανιχνευθεί σε χαμηλότερα επίπεδα σε μια ανεξάρτητη κοόρτη καρκίνων του προστάτη υψηλού κινδύνου σε σύγκριση με καρκίνους χαμηλού κινδύνου. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με τα αποτελέσματα από την αρχική ομάδα. Έτσι προφίλ για αυτά τα miRNAs στο πλάσμα ή στα ούρα, στη μελέτη μας, δεν σθεναρά διάκριση μεταξύ χαμηλού κινδύνου και υψηλού κινδύνου Κεφ.

Δεδομένου ότι miRNA προφίλ χρησιμοποιώντας και τις δύο αυτές διακριτές μεθοδολογίες σχετικά με την αρχική ομάδα ανακάλυψη έδωσε παρόμοια αποτελέσματα, αυτό είναι πιο πιθανό να αντιπροσωπεύει πραγματική βιολογική παραλλαγή αντί διαφορά οφείλεται σε μεθοδολογικές παραλλαγή. Οι κάρτες TLDA είναι μια σχετικά νέα πλατφόρμα για διεξαγωγή PCR που δεν έχουν υποβληθεί σε έντονη επικύρωσης αλλά έχουν χρησιμοποιηθεί από πολλές ομάδες προηγουμένως για τον ποσοτικό προσδιορισμό γονιδιακής έκφρασης [23], [24], [25]. Ο χαρακτηρισμός του miR 16, 21 και 222 επί των δειγμάτων στο αρχικό κοόρτη χρησιμοποιώντας τις δύο διαφορετικές μεθοδολογίες έδειξαν ότι τα αποτελέσματα συσχετίζονται καλά. Αυτό επιβεβαίωσε ότι η πειραματική μεθοδολογία ήταν ισχυρή και τα αποτελέσματα είναι ενδεικτικά μιας πραγματικής βιολογικής μεταβολή στην έκφραση αυτών των miRNAs στις δύο ανεξάρτητες ομάδες.

Η ανάλυση των ούρων ως διαγνωστικό ή προγνωστικό εργαλείο δεν είναι πρωτοφανής. Τα επίπεδα της πρωτεΐνης, mRNA, miRNA και ακόμη γονίδιο μεθυλίωσης στα ούρα έχουν συσχετιστεί με την παρουσία του καρκίνου και την επιθετικότητα σε προγενέστερες μελέτες [26], [27], [28], [29], [30]. Επιπλέον, άλλοι έχουν βρει ούρα να είναι μια καλύτερη πηγή υλικού προστάτη από πλάσμα [28]. Η μέθοδος αυτών των κυτταρικών ουσιών φθάνοντας τα ούρα είναι πιθανό μέσω μεταφοράς των καρκινικών κυττάρων μέσω του συστήματος προστατικής πορογενές [30] ή του μονοπατιού exosomal [27].

Πολλές προηγούμενες μελέτες έχουν μελετήσει τη ρύθμιση των ειδών miRNA στον προστάτη καρκινικούς ιστούς σε σχέση με καλοήθη προστάτη, υψηλής ποιότητας πρωτογενές σχέση με χαμηλής ποιότητας, ή μεταστατικό σχέση με πρωτοπαθή καρκίνο του [31], [32], [33]. Επιπλέον, πολλές από τις miRNAs που εμπλέκονται στην έναρξη του καρκίνου του προστάτη, της εξέλιξης και μετάστασης έχουν χαρακτηρισθεί λειτουργικά [34], [35]. Πρόσφατες εργασίες επίσης προφίλ είδη miRNA βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα πάνω ή προς τα κάτω ρυθμισμένη σε πλάσμα ή ορό ασθενών με καρκίνο του προστάτη [10], [11], [12], [13], [36], [37]. Αυτές οι μελέτες έχουν αποκαλύψει ότι οι ειδικές miRNAs μπορεί να είναι χρήσιμη για μια μη επεμβατική προγνωστική δοκιμή, αλλά μόνο με τη χρήση πλάσματος ή ορού. Λίγες μελέτες έχουν προφίλ για miRNAs στα ούρα από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Έχουν βρεθεί ότι διάφοροι κυκλοφορούν miRNAs εκφράζονται διαφορικά σε καρκίνο προστάτη [10], [11], [12], [13], [36], [37], [38]. Κάποιοι έχουν βρει ότι miR 26α, 30c και αφήστε 7 εκφράζονται διαφορικά σε πλάσμα ή ορό ασθενών με καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με εκείνους με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) [12], [36]. Άλλοι έχουν σχέση ασθενείς με χαμηλού κινδύνου για καρκίνο του προστάτη υψηλού κινδύνου και σε διάφορες μελέτες miR-141, miR-375, miR-221, miR-21 και miR-145 έχουν δείξει να είναι αυξημένα σε ασθενείς με υψηλού κινδύνου ή μεταστατικό καρκίνο του προστάτη [10], [11], [37], [38]. Ενώ miR 222 δεν έχει αποδειχθεί ότι είναι σημαντικά προγνωστική της νόσου υψηλού κινδύνου σε προηγούμενες μελέτες [39], miR 21 έχει αποδειχθεί ότι είναι αυξημένα σε πιο επιθετικό καρκίνο του προστάτη σε μερικές μελέτες [11], [37]. Shen et al βρήκαν ότι το miR 21 επίπεδα συσχετίζονται με τον καρκίνο του προστάτη Αξιολόγησης Κινδύνου (Capra) αποτελέσματα [11] και Agaoglu και οι συνεργάτες του διαπίστωσαν ότι το miR 21 επίπεδα ήταν αυξημένα σε ασθενείς με μεταστατικούς όγκους σε σύγκριση με εκείνους με εντοπισμένη νόσο [37]. Ομοίως miR 221 έχει αποδειχθεί ότι είναι αυξημένα σε αυτές τις δύο μελέτες, αλλά miR 221 δεν ήταν αυξημένα σταθερά σε όγκους υψηλού κινδύνου στην ομάδα μας.

Ωστόσο, αυτές οι μελέτες έχουν επανειλημμένα έδωσαν διαφορετικές υπογραφές miRNA να διακινδυνεύσει διαστρωμάτωση του καρκίνου του προστάτη, λόγω σε διαφορετικό πειραματική μεθοδολογία, η έλλειψη αξιοπιστίας των στατιστικών αναλύσεων και των μη τυποποιημένων ορισμών των υψηλού κινδύνου ή καρκίνο του προστάτη χαμηλού κινδύνου. Έχουμε προσπαθήσει να αντιμετωπίσει κάποια από αυτά τα προβλήματα χρησιμοποιώντας ισχυρή στατιστικές προσεγγίσεις για την ανάλυση των αποτελεσμάτων, καθώς και με τη χρήση τυποποιημένων ορισμών των ανώδυνων (κριτήρια Epstein) και η νόσος του υψηλού κινδύνου. Η πλειοψηφία των προηγούμενων μελετών δεν έχουν συμπεριλάβει την επικύρωση των σημαντικών miRNAs και ως εκ τούτου δεν έχουν την ικανότητα να επιδεικνύουν την αναπαραγωγιμότητα των δεδομένων [11], [12], [13], [36], [37].

Ένα άλλο σημείο που πρέπει να επισημανθεί είναι ότι τα δείγματα σε άλλες μελέτες που έγιναν μέχρι τώρα έχουν ληφθεί από ασθενείς όταν είχαν αναπτύξει μεταστατική νόσο. Ενώ αυτό προσφέρει μια εικόνα για τη βιολογία της εξέλιξης του όγκου, που δεν επιτρέπει τη διαστρωμάτωση του κινδύνου των ασθενών, όταν αυτοί εξακολουθούν να έχουν εντοπισμένη νόσο και ως εκ τούτου δεν έχει άμεση κλινική επίπτωση. Η μελέτη μας είναι μυθιστόρημα στο ότι όλα τα δείγματα πλάσματος και ούρων συλλέχθηκαν πριν από ριζική προστατεκτομή και ως εκ τούτου, κατά τη στιγμή διαστρωμάτωση του κινδύνου, η επιλογή για τη θεραπεία και την πρόγνωση των ασθενών είναι υψίστης σημασίας.

Άλλες εξετάσεις που διατίθενται στο εμπόριο για τη διαστρωμάτωση κινδύνου ο καρκίνος του προστάτη είναι ο PCA3 και η δοκιμή ΡΗΙ. Το τεστ PCA3, το οποίο είναι ένα τεστ ούρων mRNA που βασίζεται, είναι πιο ειδική για τον καρκίνο του προστάτη από την εξέταση PSA [30], [40]. Έχει αποδειχθεί ότι είναι χρήσιμη στην καθοδήγηση αποφάσεις για βιοψία του προστάτη με βάση μια αθροιστική βαθμολογία υπολογίζεται με τη μέτρηση της έκφρασης του mRNA του γονιδίου καρκίνου του προστάτη. Πιο πρόσφατα έχει αποδειχθεί ότι είναι προγνωστική της «σημαντικής» τον καρκίνο του προστάτη καθώς υπήρχε σημαντική διαφορά στη βαθμολογία PCA3 των ασθενών που πληρούσαν τα κριτήρια Epstein για νωχελικός καρκίνους [41] και «σημαντικές» καρκίνους που κρίθηκαν κατάλληλες για ριζική προστατεκτομή. Η δοκιμή PHI που μετρά μια διαφορετική ισομορφή του PSA, το [-2] προ-PSA, έχει βρεθεί ότι είναι χρήσιμη στην πρόβλεψη του καρκίνου του προστάτη με Gleason score≥7 σε ασθενείς με PSA 2-10 ng /ml, ωστόσο, δεν σχετίζεται με τον όγκο του προστάτη [42]. Ωστόσο, καμία από αυτές τις δοκιμές βοηθήσει να καθορίσει αυτούς τους ανθρώπους πιθανό να αναπτύξουν μεταστατική νόσο μετά από ριζική προστατεκτομή.

Υπάρχουν μερικοί περιορισμοί αυτής της μελέτης που πρέπει να αναφερθούν. Χωρίς αποδεκτή βιολογικό έλεγχο για miRNAs σε Biofluids, δεν έχουμε ομαλοποιηθούν τα αποτελέσματά μας με ένα γονίδιο «σπίτι διατήρησης». Αρκετά ενδογενή έλεγχοι που χρησιμοποιούνται σε μελέτες προφίλ ιστού. Ωστόσο, όταν χρησιμοποιείται RNU48 ως ενδογενή έλεγχο, βρήκαμε ότι η έκφραση της δεν ήταν συνεπής στις ομάδες χαμηλού κινδύνου και υψηλού κινδύνου. Με μια τέτοια συστηματική διαταραχή στην έκφραση του, ήταν ακατάλληλη ως ενδογενή έλεγχο. Με τον καιρό, καθώς οι miRNAs μελετηθεί περαιτέρω στο Biofluids, ορισμένα βιολογικά έλεγχοι θα μπορούσαν να προκύψουν. Δεύτερον ούρων είναι μια δυναμική υγρών του σώματος και συγκεντρώσεις μπορεί να αλλάξει με την κατάσταση ενυδάτωσης και νεφρική παθολογία. Στη μελέτη μας, όλα τα δείγματα ούρων συλλέχθηκαν αμέσως πριν από την ριζική προστατεκτομή, ως εκ τούτου είναι πιθανό να είναι ο υψηλός βαθμός ομοιομορφίας εντός των συνθέσεων των ούρων. Μετρώντας 24-ωρη όγκους ούρων θα είναι ο χρυσός κανόνας για να αξιολογήσει την κατάσταση υδάτωσης, αλλά αυτό είναι επίπονη, δαπανηρή και γεμάτη με χαμηλά ποσοστά συμμόρφωσης σε κλινικό περιβάλλον. Η μέτρηση της αναλογίες της κρεατινίνης ή ειδικού βάρους παραμένουν άλλες δυνατότητες και δυνητικά πιο εφικτές εναλλακτικές λύσεις. Τέλος μέγεθος του δείγματος μας είναι μικρό.

Για να ολοκληρώσω, εδώ έχουμε δείξει πλάσματος και ούρων των χαρακτηριστικών των miRNAs δεν μπορεί να είναι ένα ισχυρό δείκτη για την πρόγνωση της επιθετικότητας του καρκίνου του προστάτη και η νόσος του υψηλού κινδύνου. Η μελέτη αυτή υπογραμμίζει τη σημασία της ενσωμάτωσης ομάδες επικύρωσης και μεθοδολογικές ευρωστία για να εξασφαλίζεται η επαναληπτικότητα των δεδομένων σε όλες τις μελλοντικές μελέτες βιοδεικτών.