Αφηρημένο

Ο ενεργός μεταβολίτης της βιταμίνης D

3, 1,25 -dihydroxyvitamin D

3 (καλσιτριόλη) έχει αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις σε μη επιθετικό καρκίνο του προστάτη, ωστόσο, τα αποτελέσματά της σε πιο επιθετική συστήματα μοντέλου είναι ακόμα ασαφής. Σε αυτές τις μελέτες, τα αποτελέσματα των καλσιτριόλη και ένα λιγότερο ασβεστιαιμική ανάλογο βιταμίνης D, QW-1624F

2-2 (QW), ελέγχθηκαν

in vivo

, χρησιμοποιώντας την επιθετική αυτόχθονη διαγονιδιακό αδενοκαρκίνωμα του προστάτη ποντικού ( TRAMP) μοντέλο. Για τη μελέτη της πρόληψης των ανδρογόνων που διεγείρεται καρκίνο του προστάτη, του οχήματος, καλσιτριόλη (20 μg /kg), ή QW (50 μg /kg) χορηγήθηκαν σε 4 εβδομάδες ποντικών ηλικίας TRAMP ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) 3 χ /εβδομάδα σε ένα χρονοδιάγραμμα MWF για 14 εβδομάδων. Calcitriol και QW επιβραδυνόμενη πρόοδο του καρκίνου του προστάτη όπως υποδεικνύεται από μειωμένη ουρογεννητικού συστήματος (p = 0,0022 καλσιτριόλη? P = 0,0009, QW) και βάρη του προστάτη (ρ = 0,0178 καλσιτριόλη? P = 0,0086, QW). Ωστόσο, μόνο η καλσιτριόλη αυξημένη έκφραση του δείκτη προ-διαφοροποίηση, καντερίνη 1 (p = 0,0086), και μειωμένο πολλαπλασιασμό του όγκου (ρ = 0,0467). Αντίθετα, ούτε ανάλογο βιταμίνης D είχαν οποιαδήποτε επίδραση επί ευνουχισμό καρκίνο του προστάτη ανθεκτικού σε ποντίκια με αγωγή πριν ή μετά τον ευνουχισμό. Είναι ενδιαφέρον ότι, αν και η βιταμίνη D έδειξε ανασταλτική δραστικότητα έναντι πρωτογενών όγκων σε ορμόνες ανέπαφο ποντίκια, απομακρυσμένες μεταστάσεις όργανο φάνηκε να ενισχυθεί μετά από θεραπεία (p = 0,0823). Ως εκ τούτου, TRAMP ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή μακροχρόνιας με καλσιτριόλη να εξετάσει περαιτέρω επιπτώσεις στην μετάσταση. Calcitriol αύξησε σημαντικά τον αριθμό των μεταστάσεων μακρινό οργάνου όταν τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή από 4 εβδομάδες-της-ηλικίας μέχρι ανάπτυξη ψηλαφητών όγκων (20-25 εβδομάδων-της-ηλικίας) (p = 0,0003). Συνολικά, τα στοιχεία δείχνουν ότι η έγκαιρη παρέμβαση με βιταμίνη D σε TRAMP επιβράδυνε την εξέλιξη του όγκου των ανδρογόνων που διεγείρονται, αλλά παρατεταμένη θεραπεία είχε ως αποτέλεσμα την ανάπτυξη ενός ανθεκτικού και πιο επιθετική ασθένεια που συνδέεται με αυξημένη μετάσταση μακρινό όργανο

Παράθεση:. Ajibade AA, Kirk JS, Karasik Ε, Gillard Β, Moser MT, Johnson CS, et al. (2014) Early Growth Αναστολή ακολουθείται από αύξηση των ασθενειών μεταστατική με βιταμίνη D (καλσιτριόλη) Θεραπεία στο TRAMP μοντέλο του καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 9 (2): e89555. doi: 10.1371 /journal.pone.0089555

Επιμέλεια: Karl X. Chai, University of Central Florida, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6η Σεπτεμβρίου, 2013? Αποδεκτές: 21 Ιανουαρίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 26η Φεβρουαρίου 2014

Copyright: © 2014 Ajibade et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από Roswell Park Αντικαρκινικό Ινστιτούτο και το Εθνικό Ίδρυμα Καρκίνου (NCI) επιδότηση # P30 CA016056, από ΝΙΗ /NCI επιχορήγησης # 5R01 CA95367 (σε BAF), και από το Υπουργείο άμυνας (DOD) προ-διδακτορική υποτροφία επιχορήγησης # W81XWH-05 -1 έως 0.571 (με ΑΑΑ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι μία από τις κύριες αιτίες του καρκίνου και τη θνησιμότητα του καρκίνου που σχετίζονται με Αμερικανούς άνδρες [1]. Πρώιμο στάδιο, όργανο-περιορισμένο, προστάτη μπορεί να αντιμετωπιστεί με χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία ή άγρυπνο αναμονής, ενώ οι άνδρες με τοπικά προχωρημένο ή μεταστατικό προστάτη αντιμετωπίζονται κυρίως από θεραπεία στέρησης ανδρογόνων [2]. Ωστόσο, πολλοί ασθενείς τελικά αναπτύσσουν ανθεκτικά ευνουχισμό του προστάτη, για την οποία τρέχουσες επιλογές θεραπείας είναι μόνο παρηγορητική. Ο επιπολασμός, μακρά λανθάνουσα κατάσταση, τη νοσηρότητα και τη θνησιμότητα που σχετίζεται με προστάτη έχουν προκαλέσει σημαντικό ενδιαφέρον για την ανάπτυξη παραγόντων για χημειοπροφύλαξη της ασθένειας [3].

Οι επιδημιολογικές συσχετίσεις μεταξύ της βιταμίνης D και του προστάτη δείχνουν ότι η βιταμίνη D μπορεί να είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της ανάπτυξης και της διαφοροποίησης προστάτη [4]. Ωστόσο, οι μελέτες που συνδέουν τα επίπεδα της βιταμίνης D και του προστάτη επίπτωση και τη θνησιμότητα του ορού δεν συσχετίζονται ισχυρώς (αναθεωρηθούν [5]). Σε αντίθεση, προκλινικές μελέτες αποδεικνύουν ότι η βιταμίνη D έχει ισχυρή αντικαρκινική δράση σε κύτταρα προστάτη

in vitro

, περιλαμβανομένης της αναστολής του κυτταρικού πολλαπλασιασμού [6] και διεισδυτικότητα [7], διέγερση διακοπής κύκλου κυττάρου [8], διέγερση του απόπτωση [9], και την προώθηση της διαφοροποίησης [10]. Επιπλέον, πολυάριθμες

in vivo

μελέτες στις οποίες χρησιμοποιήθηκαν συστήματα ξενομοσχεύματος ποντικού αποδεικνύουν ότι οι ενώσεις της βιταμίνης D καταστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση [6], [11], [12]. Επιπλέον, η χρήση των γενετικά μοντέλα ποντικών που αναπτύσσουν αυθόρμητα καρκίνο, αποδεικνύουν ότι η βιταμίνη D μπορεί να αποτρέψει την εξέλιξη της προ-καρκινικές βλάβες του προστάτη [13] και να καταστείλει την ανάπτυξη του όγκου στον ευνουχισμό ανθεκτικά προστάτη [14].

Οι κλινικές δοκιμές που εκτελούνται σε ασθενείς προστάτη έχουν ως επί το πλείστον απογοητευτικά [15], [16], [17], [18], αν και υπήρξαν κάποια θετικά αποτελέσματα [19], [20], και τα κέρδη έχουν γίνει στην κατανόηση της φαρμακοκινητικής της βιταμίνης D και φαρμακοδυναμική. Ένας λόγος για την κακή κλινική απόδοση της βιταμίνης D είναι σημαντικές περιοριστική της δόσης τοξικότητα, υπερασβεστιαιμία της. Παρά το γεγονός ότι η υπερασβεστιαιμία μπορεί εύκολα να διαχειρίζεται, μπορεί να εμποδίζει την βέλτιστη αξιοποίηση των καλσιτριόλη. Ως εκ τούτου, έχουν λιγότερο ασβεστιαιμική ανάλογα της βιταμίνης D έχουν αναπτυχθεί με την πρόθεση της διατήρησης των ισχυρών αντικαρκινικών επιδράσεων της καλσιτριόλης. QW-1624F

2-2 (QW) είναι ένα φθοριωμένο ανάλογο υβρίδιο καλσιτριόλης που είναι 100 φορές λιγότερο ασβεστιαιμική, ιδιαίτερα αντιπολλαπλασιαστική, και προκαλεί παρόμοια αποτελέσματα με κατάντη καλσιτριόλη [21], [22]. Επιπλέον, η χορήγηση υψηλών δόσεων QW (3 μg) αναστέλλουν 7,12-διμεθυλβενζ [α] ανθρακένιο-κινήθηκε και ΤΡΑ-προωθείται καρκινογένεση του δέρματος σε ποντικούς χωρίς υπερασβεστιαιμική παρενέργειες [23].

Το διαγονιδιακό αδενοκαρκίνωμα του προστάτη ποντικού (TRAMP) μοντέλο είναι μια επιθετική, αυτόχθων μοντέλο του προστάτη [24]. Από 10 εβδομάδες-της-ηλικίας, τα ποντίκια TRAMP αναπτύσσουν χαμηλής ποιότητας, μη επεμβατική προστάτη καρκίνο [25]. Καθώς τα ποντίκια να συνεχίσει με την ηλικία, ο όγκος εξελίσσεται από μη επεμβατικές σε υψηλής ποιότητας, διηθητικό αδενοκαρκίνωμα, και στη συνέχεια ελάχιστα διαφοροποιείται νευροενδοκρινείς όγκους από 20-25 εβδομάδες-της-ηλικίας. Η προοδευτική φύση του μοντέλου παρουσιάζει μια ευκαιρία να εξετασθούν τα αποτελέσματα του χημειοαποτρεπτικών παραγόντων και στις δύο πρώιμα και όψιμα στάδια της ανάπτυξης προστάτη, σε αντίθεση με μόνο το ένα ή το άλλο. Μέχρι στιγμής, έχουν ακόμα να διεξαχθεί κατά μέτωπον συγκρίσεις των χημειοπροληπτική αποτελέσματα των διαφορετικών ενώσεων βιταμίνης D επί ανδρογόνων που διεγείρονται και ευνουχισμός ανθεκτικά PCa εξέλιξης. Δεδομένου ότι η θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη εμφανίζεται σε άνδρες με προχωρημένο, καρκίνο τελικού σταδίου, επιδιώξαμε να εξεταστεί η αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών ενώσεων βιταμίνης D με τη χρήση του πιο επιθετική μοντέλο TRAMP. Σε αυτές τις μελέτες, το μοντέλο TRAMP χρησιμοποιήθηκε για να διερευνηθεί κατά πόσο η καλσιτριόλη ή QW μπορεί να αποτρέψει ή να επιβραδύνει ανδρογόνων που διεγείρεται και ο ευνουχισμός ανθεκτικά προστάτη έναρξη, εξέλιξη και μετάσταση

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής.

Πειραματική χρήσεις πειραματόζωα διεξήχθησαν αυστηρά σύμφωνα με τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας Οδηγός για τη Φροντίδα και χρήση των ζώων εργαστηρίου και το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από το Roswell Park Cancer Institute (RPCI) Φροντίδα ζώων και Επιτροπής χρήσης (Assurance # A3143-01). RPCI είναι μια AALAC διεθνής ερευνητική εγκατάσταση διαπιστευμένο ζώων. Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις έγινε χρησιμοποιώντας ισοφλουράνιο για εισπνεόμενη αναισθησία και όλες οι προσπάθειες έγιναν για την ελαχιστοποίηση της ταλαιπωρίας των ζώων.

Ζώα

αποικίες αναπαραγωγής διατηρήθηκαν στο Τμήμα Εργαστηρίου και των πόρων των Ζώων (DLAR) πυρήνα εγκατάσταση σε Roswell Park Cancer Institute (Buffalo, NY). Τα ομόζυγα αρσενικά ποντίκια TRAMP εκτράφηκαν με άγριου τύπου FVB θηλυκά ποντίκια (Taconic, Germantown, ΝΥ) για να ληφθεί C57BL /6 × FVB 50:50 αρσενικών ποντικών TRAMP. Οι ποντικοί γονότυπος να επιβεβαιώσουν μετάδοση βλαστικής γραμμής του διαγονιδίου [24]. Όλα τα πειραματόζωα ήταν ετερόζυγα για το διαγονίδιο, και διατηρείται για το Harlan Teklan Diet S2335 που περιέχει 2980 IU /kg βιταμίνης D3.

μελέτες χημειοπροφύλαξη βιταμίνη D

1α-υδροξυμεθυλ-16-ενο -24,24-διφθορο-25-υδροξυ-26,27-δις-homovitamin D

3 (QW-1624F

2-2, QW) ελήφθη από τον Dr. Gary Posner (Πανεπιστήμιο Johns Hopkins, Βαλτιμόρη, MD). Calcitriol και QW αποθέματα διαλύθηκαν σε 100% αιθανόλη, και είχαν προσφάτως επαναιωρήθηκαν σε αλατούχο πριν από κάθε ένεση. Τα ζώα ζυγίστηκαν, παρακολουθούνται για τοξικότητα, και να ψηλαφείται να εκτιμηθεί το φορτίο του όγκου σε εβδομαδιαία βάση. Οι μελέτες γενικά τερματίστηκε 72 ώρες μετά χορηγήθηκε η τελευταία φαρμακευτική αγωγή. Κατά το χρόνο της ευθανασίας, οι τελικές σωματικά βάρη μετρήθηκαν και η ουρογεννητική (UG) σωλήνα (κύστη, σπερματοδόχος κύστη και προστάτη) αποκόπηκε και ζυγίστηκε. Η ραχιαία, πλευρική και κοιλιακό λοβό του προστάτη μικροτομή από την UG οδό και ζυγίζονται για να αποκτήσουν τα βάρη του προστάτη. Μεταστατικό επίπτωση προσδιορίστηκε με βάση το ακαθάριστο εξέταση του πυελικού λεμφαδένων, συκώτια, νεφρά και πνεύμονες, και με ανοσοϊστοχημική χρώση του ιστού με ειδικό αντίσωμα αντιγόνου SV40 Τ. Οι ακόλουθοι ιστοί συλλέχθηκαν σε κασέτες 9 θαλάμων για ιστολογία: ραχιαία, πλευρική, κοιλιακά και πρόσθια προστάτες, η σπερματοδόχος κύστη, περι-αορτική λεμφαδένες, τους νεφρούς, το έντερο και το ήπαρ. Η συλλογή των ιστών για ιστολογική εξέταση ως προτεραιότητα, έτσι, μόνο απομείνει ιστούς από μεγάλους όγκους του προστάτη καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C για ανάλυση Western blot.

Για να μελετηθεί η επίδραση της καλσιτριόλης ή QW στην εξέλιξη της ανδρογόνου που διεγείρεται PCa, τρεις ομάδες των 4 εβδομάδων οι ποντικοί TRAMP υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα (n = 40), καλσιτριόλη (n = 41) ή QW (n = 42) ip 3 × /εβδομάδα Δευτέρα, Τετάρτη και Παρασκευή (MWF) για 14 εβδομάδες (Εικόνα 1Α). τερματίστηκε Η μελέτη όταν τα ποντίκια ήταν ηλικίας 18 εβδομάδων και οι ιστοί συλλέχθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Μερικά δείγματα δεν ήταν σε θέση να αναλυθούν, ή όχι αξιολογηθεί με βάση δηλωμένα κριτήρια αποκλεισμού. Μία δεύτερη μελέτη πραγματοποιήθηκε για να διερευνηθεί η επίδραση της

μακροχρόνια

χορήγηση καλσιτριόλης επί των ανδρογόνων που διεγείρονται PCa εξέλιξης. Δύο ομάδες των 4 εβδομάδων οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε αγωγή TRAMP

μακροχρόνια

με όχημα (n = 47) ή καλσιτριόλη (n = 49) ε.π. 3 χ /εβδομάδα MWF, μέχρι ψηλαφητών όγκων αναπτυχθεί (Σχήμα 1Α). Οι όγκοι συλλέχθηκαν όταν ανιχνευθεί με κοιλιακή ψηλάφηση.

(Α) Σχηματική του χρόνου των σπουδών χημειοπροφύλαξη. Όλοι οι ποντικοί ευνουχίστηκαν στις 12 εβδομάδες στο ορμονοάντοχο μελέτες. (Β-Ο) Τέσσερα ποντίκια TRAMP εβδομάδων υποβλήθηκαν σε αγωγή με φορέα (έλεγχος), καλσιτριόλη (20 μg /kg) ή QW (50 μg /kg) ε.π. 3 χ /εβδομάδα για 14 εβδομάδες. (Β) Τελική βάρη σώματος (g) του ελέγχου (n = 40), καλσιτριόλη (n = 41) και QW (η = 42) ποντικοί που μετράται 72 ώρες μετά την τελευταία θεραπεία. (Γ) Το ασβέστιο ορού (mg /dL) επίπεδα για τον έλεγχο (n = 39), καλσιτριόλη (n = 40) και QW (η = 42) ποντικοί που μετράται 72 ώρες μετά την τελευταία θεραπεία. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως οικόπεδα κουτί με διαμέσους και μουστάκια που αντιπροσωπεύουν το 5

ου και 95

ου εκατοστημόρια. • (τελείες), αποτελούν σημεία έξω από το 5

ου και 95

ου εκατοστημόριο. Όλες οι p-τιμές παρήχθησαν χρησιμοποιώντας το τεστ Mann-Whitney.

Η

Δύο μελέτες που σχεδιάστηκαν για να αξιολογήσουν την επίδραση των καλσιτριόλη ή QW για την πρόληψη των ανθεκτικών ευνουχισμού PCA σε χειρουργικά ευνουχισμένα ποντίκια TRAMP. Στο

μετά τον ευνουχισμό

μελέτη, η θεραπεία ξεκίνησε αμέσως μετά τον ευνουχισμό των TRAMP ποντικών στις 12 εβδομάδες-της-ηλικίας. Τρεις ομάδες των 12 εβδομάδων ευνουχισμένων ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα (n = 33), καλσιτριόλη (n = 31) ή QW (n = 30) ε.π. 3 χ /εβδομάδα MWF για 12 εβδομάδες (Σχήμα 1Α). Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία στις 24 εβδομάδες-της-ηλικίας και δείγματα ιστού αγοραστεί όπως περιγράφεται ανωτέρω. Η

προ-ευνουχισμό

μελέτη, 4 ποντικοί TRAMP εβδομάδων υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα (n = 29) ή καλσιτριόλη (n = 34) ε.π. 3 × /εβδομάδα MWF για 8 εβδομάδες. Στις 12 εβδομάδες-της-ηλικίας, όλοι οι ποντικοί ευνουχίστηκαν και θεραπεία συνεχίστηκε για επιπλέον 12 εβδομάδες (Σχήμα 1Α). Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία στις 24 εβδομάδες-της-ηλικίας και δείγματα ιστού αγοραστεί όπως περιγράφεται ανωτέρω.

Η ιστοπαθολογική ανάλυση

Ιστοί συλλέχθηκαν, σταθερό, επεξεργασία, εγκλεισμένο σε παραφίνη και τομές ιστών (5 μm ) κόπηκαν για ιστολογική ανάλυση. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) χρώση τομών ιστών και τάξεων όγκου ανατεθεί από τυφλωθεί αξιολόγηση από A.A.A. και B.A.F. χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο σύστημα ιστοπαθολογική ταξινόμησης που αναπτύχθηκε για το μοντέλο TRAMP [25]. Σε αυτό το σύστημα ταξινόμησης, η κανονική του προστάτη (βαθμός 1) αναπτύσσει σταδιακά προστάτη βλάβες συμπεριλαμβανομένων των χαμηλού βαθμού προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) (βαθμός 2), καρκίνωμα

in situ

(βαθμός 3), διηθητικό καρκίνο (βαθμοί 4 και 5) και κακώς διαφοροποιημένο καρκίνο τελικού σταδίου (βαθμός 6) [25]. Οι ορολογίες που χρησιμοποιούνται για να περιγράψουν προστάτη βλάβες στις τρέχουσες μελέτες προσαρμοστεί από το προαναφερθέν σύστημα βαθμολόγησης, όπου

χαμηλού βαθμού

(LG) βλάβες είναι ισοδύναμες με τις κατηγορίες όγκου 1 και 2,

ενδιάμεσου βαθμού

(IG) βλάβες αντιπροσωπεύουν βαθμού 3 και

καρκίνου

είναι ισοδύναμη με βαθμούς 4, 5 και 6. Η ραχιαία, πλευρική και κοιλιακό λοβό του προστάτη ατομικά βαθμολογούνται και αποδίδεται μια συνολική βαθμό και χειρότερο βαθμό. Ο συνολικός βαθμός καθορίζεται από την αξιολόγηση του βαθμού κυρίαρχο όγκου που υπάρχουν σε κάθε λοβό του προστάτη. Μεταστατικό επίπτωση επιβεβαιώθηκε με εξέταση των λεμφαδένων, το συκώτι, τα νεφρά, τους πνεύμονες και υπό μικροσκόπιο φωτός μετά την ανοσοϊστοχημική χρώση για SV40 μεγάλο Τ αντιγόνο. Εκπρόσωπος μικροφωτογραφίες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα χρώμα KP-D50 ψηφιακή φωτογραφική μηχανή (Hitachi, Brisbane, CA).

Η ανοσοϊστοχημεία

Οι ιστικές τομές-παραφινοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν με διαβαθμισμένες αλκοόλες. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη με βρασμό με 1 χ ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού, ρΗ 6,0 (Zymed Laboratories, San Francisco, CA) για 20 λεπτά. Η ενδογενής υπεροξειδάση παρεμποδίστηκε με εμβάπτιση πλακίδια σε 3% Η

2O

2 σε μεθανόλη για 15 λεπτά. Διαφάνειες επωάστηκαν με τα ακόλουθα πρωτογενή αντισώματα: SV40 μεγάλο Τ αντιγόνο (Tag) (1:400, BD Pharmingen, San Diego, CA), MKI67 (1:1000, Novocastra Laboratories, Newcastle upon Tyne, Ηνωμένο Βασίλειο), καντερίνη 1 (Cdh1 ) (1:500, BD Pharmingen), ανδρογόνων υποδοχέων (AR) (1:200, Upstate, Lake Placid, ΝΥ) και συναπτοφυσίνη (SYP) (1:400, Zymed). Δευτερογενής αντίσωμα μόνο χρησιμοποιήθηκε σαν αρνητικός έλεγχος για όλα τα αντισώματα. Τα πλακίδια πλύθηκαν με 1 χ Tris ρυθμιστικό φωσφορικού, ρΗ 7.8 (8.4 mM Na

2HPO

4, 3,5 mM ΚΗ

2 ΡΟ

4, 10 mM Tris, 120 mM NaCl) που ακολουθείται από επώαση με το ακόλουθη δευτερογενή αντισώματα: συζευγμένο με HRP κουνελιού αντι-ποντικού (DakoCytomation, Carpinteria, CA), HRP-συζευγμένο χοίρων αντι-κουνελιού (DakoCytomation) και βιοτινυλιωμένη αίγας αντι-κουνελιού (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Η ανοσοαντιδραστικότητα ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Vectastain ABC (Vector Laboratories) και 3,3′-διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική (DAB, Sigma, St. Louis, ΜΟ). Οι ιστοί με αιματοξυλίνη, αφυδατώνονται με βαθμονομημένων αλκοολών, καθαρίσθηκαν με ξυλόλιο και τοποθετήθηκαν χρησιμοποιώντας γυάλινες καλυπτρίδες.

Το σκορ Cdh1 της κοιλιακό λοβό υπολογίσθηκε μετρώντας τον αριθμό των θετικών Cdh1 αδένων ανά 15 αδένες σε 10 × πεδίο. Η πολλαπλασιαστική δείκτης του κοιλιακού λοβού προσδιορίστηκε με μέτρηση του αριθμού των MKI67 θετικών κυττάρων σε τρία πεδία (μεγέθυνση 40 φορές), που ήταν αντιπροσωπευτικές περιοχών με τη χειρότερη βαθμολογία του όγκου, διαιρούμενο με το συνολικό αριθμό των πυρήνων σε κάθε τομέα.

κηλίδος Western ανάλυση

Ανοσοκηλίδωση διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Εν συντομία, καταψύχθηκαν ταχέως ιστοί ομογενοποιήθηκαν με triton Χ-/SDS ρυθμιστικό λύσης που περιέχει 1 χ Κοκτέιλ Αναστολέα Πρωτεάσης (BD PharMingen) και αναστολείς φωσφατάσης. Τα δείγματα αναλύθηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF όλη τη νύχτα στους 4 ° C με ηλεκτροφόρηση. Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για τουλάχιστον 1 ώρα, χρησιμοποιώντας 5% (w /v) γάλα σε 1 χ TBST. Μετά από ολονύκτια επώαση με πρωτογενή αντισώματα για SV40 μεγάλο Τ αντιγόνο (1:250, BD Pharmingen) και ακτίνη (CP01, Calbiochem, San Diego, CA), οι μεμβράνες πλύθηκαν με TBST, επωάστηκαν με συζευγμένο με HRP δεύτερα αντισώματα για ένα ελάχιστο 1 h και η πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε έκφραση με χημειοφωταύγεια.

Serum ανάλυση

αίμα ελήφθη με παρακέντηση τερματικό καρδιακής κατά το χρόνο της νεκροψίας και ορός συλλέχθηκε από δείγματα αίματος με φυγοκέντρηση. επίπεδα ασβεστίου μετρήθηκαν στα Roswell Park Cancer Institute Κλινικά Εργαστήρια.

Η στατιστική ανάλυση

Όλα τα γραφήματα και στατιστική ανάλυση παρήχθησαν χρησιμοποιώντας GraphPad Prism έκδοση 5.0d για Mac OS X, GraphPad Software, San Diego California USA, www.graphpad.com. Η μη παραμετρική δοκιμασία Mann-Whitney διεξήχθη για να συγκρίνει μεταξύ των ποσοτικών αποτελεσμάτων, ενώ η κατηγορική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με την ανάπτυξη πινάκων έκτακτης ανάγκης και τη χρήση Chi-Square ή Ακριβής τεστ του Fisher. Τα ποσοτικά αποτελέσματα παρουσιάζονται ως οικόπεδα κουτί που απεικονίζουν την 5

ου, 25

ου, 50

ου, 75

ου και 95

ου εκατοστημόρια των συνόλων δεδομένων σε κάθε ομάδα θεραπείας και κατηγορηματική Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως ποσοστά του κάθε ομάδα θεραπείας.

αποτελέσματα

ενώσεων της βιταμίνης D είναι μη τοξικά και δεν αλληλεπιδρούν με μεγάλες έκφραση Τ αντιγόνο SV40

Οι επιδράσεις της βιταμίνης ενώσεις D στην εξέλιξη της ανδρογόνου που διεγείρεται προστάτη αξιολογήθηκαν σε ποντικούς σε σεξουαλική ωριμότητα, η οποία αρχίζει σε περίπου 4 εβδομάδες-of-ηλικία σε TRAMP. Τρεις ομάδες από 4 εβδομάδων οι ποντικοί TRAMP υποβλήθηκαν σε αγωγή με καλσιτριόλη (20 μg /kg), QW (50 μg /kg) ή φορέα για 14 εβδομάδες σε μια χρονοδιάγραμμα MWF (Σχήμα 1Α). Τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ενώσεις της βιταμίνης D δεν παρουσίασαν καμία απώλεια βάρους μετά τη θεραπεία (Σχήμα 1Β). Τελικό σωματικό βάρος ήταν 31,5 ± 2,1 g για το όχημα, 31,5 ± 2,5 g για την καλσιτριόλη, και 30,7 ± 2,7 g για τα ποντίκια QW θεραπεία. Επιπλέον, τα επίπεδα του ασβεστίου ήταν αμετάβλητη μετά από 14 εβδομάδες θεραπείας με όχημα (8,6 ± 1,0 mg /dL), καλσιτριόλη (8,5 ± 1,4 mg /dL, p = 0,3334), ή QW (8.5 ± 0.9 mg /dL, p = 0,9096) , υποδηλώνοντας παρατεταμένη υπερασβεστιαιμία δεν είναι ένα πρόβλημα (Σχήμα 1 C). Τα επίπεδα ασβεστίου ήταν αυξημένα σε λίγες ποντικούς που φέρουν όγκο (ελέγχου του οχήματος, η = 2/39? καλσιτριόλη, η = 1/40? και QW, n = 1/42), αλλά αυτό είναι πιθανό σχετίζεται με τον φαινότυπο όγκου και ανεξάρτητη της θεραπείας. Επειδή προστάτη-ειδική έκφραση των πρώιμων γονιδίων SV40 (Τ και Τ αντιγόνα? Tag) είναι αναγκαία για την εξέλιξη του όγκου σε TRAMP [24], ήταν σημαντικό να προσδιοριστεί εάν θεραπευτικούς παράγοντες μεταβάλλουν έκφραση διαγονιδίου. Παρόμοια με την ομάδα ελέγχου (Σχήματα 2Α, D, G), Tag εκφράστηκε στο ραχιαίο (Σχήματα 2Β-C), πλευρική (Σχήματα 2Ε-F) και κοιλιακή (Σχήματα 2Η-Ι) λοβούς του προστάτη μετά από θεραπεία με καλσιτριόλη ή QW αντίστοιχα. Η ανάλυση στυπώματος Western επιβεβαίωσε περαιτέρω ότι οι ενώσεις της βιταμίνης D δεν παρεμβαίνει με την έκφραση Tag (Σχήμα 2 λίτρα).

ποντίκια TRAMP υποβλήθηκαν σε αγωγή με φορέα (έλεγχος), καλσιτριόλη (20 μg /kg) ή QW (50 μg /kg ) ip 3 χ /εβδομάδα για 14 εβδομάδες. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης Tag στο ραχιαίο (A-C), πλευρική (D-F), και κοιλιακή (G-I) λοβούς 18 εβδομάδων ποντικούς. χρώση Tag (J) SV40 του κοιλιακού λοβού ίδιας ηλικίας μη διαγονιδιακά ποντίκια. (Κ) αριθ αντισώματος χρώση αρνητικού ελέγχου. Μικροφωτογραφίες πάρθηκαν σε 20 × μεγέθυνση. (L) ανάλυση Western blot της έκφρασης Tag σε πτωχά διαφοροποιημένα δείγματα όγκου προστάτη του ελέγχου, calcitriol- και QW-αγωγή ποντικούς. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. WT, Άγριου-τύπου και ίδιας ηλικίας μη διαγονιδιακά ιστούς του προστάτη. Ο αριθμός του δείγματος που χρησιμοποιείται για την ανοσοαποτύπωση ποικίλλει (έλεγχος = 5, καλσιτριόλη = 2, QW = 5), διότι δόθηκε προτεραιότητα στη συλλογή ιστών για ιστολογική εξέταση. Μόνο απομείνει ιστούς από μεγάλους όγκους του προστάτη ήταν διαθέσιμα για ανοσοαποτύπωση.

Η

Επίδραση των ενώσεων βιταμίνης D σε συχνότητα εμφάνισης όγκου και της εξέλιξης

Η ικανότητα της καλσιτριόλη ή QW να αναστέλλει ή να καθυστερήσει τον σχηματισμό όγκων σε TRAMP αναλύθηκε μετά την επεξεργασία των ανδρογόνων που διεγείρεται και ο ευνουχισμός ανθεκτικά προστάτη (Σχήμα 1Α). Στα ποντίκια ανδρογόνων που διεγείρεται αγωγή με όχημα, καλσιτριόλη, ή QW, από 4 εβδομάδες-της-ηλικίας μέχρι 18 εβδομάδων-της-ηλικίας, συχνότητα εμφάνισης όγκου ήταν εμφανής σε 35,0% των ποντικών ελέγχου του οχήματος (n = 14/40), 26,8% των ποντικών που θεραπεύτηκαν καλσιτριόλη (n = 11/41) και 35,6% των QW αγωγή ποντικών (n = 15/42) (Σχήμα S1). Παρά το γεγονός ότι υπήρξε μια μείωση 8,2% στη συχνότητα εμφάνισης όγκων με τη θεραπεία με καλσιτριόλη, η μείωση αυτή δεν ήταν σημαντική (p = 0,6337, Chi-Square test).

Μετά τον ευνουχισμό στις 12 εβδομάδες-της-ηλικίας, τα ποντίκια TRAMP αναπτύσσουν ευνουχισμό ανθεκτικών όγκων με 24 εβδομάδων της ηλικίας [25], [26]. Για να προσδιοριστεί εάν οι ενώσεις της βιταμίνης D μπορεί να επιβραδύνει ή να αποτρέψει PCa επανάληψη, τρεις ομάδες ποντικών TRAMP ευνουχισμού υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα, καλσιτριόλη (20 μg /kg), ή QW (50 μg /kg) για 12 εβδομάδες

μετά τον ευνουχισμό

(Εικόνα 1Α). Περίπου 64% (21/33) των ποντικών ελέγχου του οχήματος ανέπτυξαν ανθεκτικά ευνουχισμός όγκους, σε σύγκριση με το 68% (21/31) και 57% (17/30) των ποντικών στην καλσιτριόλη και ομάδες QW αντιστοίχως (Σχήμα S1). Ωστόσο, οι αλλαγές αυτές δεν ήταν σημαντική (p = 0,6648, δοκιμασία Chi-Square). Ερευνήσαμε επίσης αν η παρέμβαση με τη θεραπεία με βιταμίνη D

προ-ευνουχισμό

θα μπορούσαν να αλλάξουν τον ευνουχισμό υποτροπή. Δύο ομάδες των 4 εβδομάδων οι ποντικοί TRAMP υπέστησαν αγωγή είτε με όχημα ή καλσιτριόλη (20 μg /kg) ξεκινώντας στις 4 εβδομάδες-της-ηλικίας. Στις 12 εβδομάδες-της-ηλικίας ποντίκια ευνουχίστηκαν και θεραπεία συνεχίστηκε μέχρι ποντικοί ήταν 24 εβδομάδων της-ηλικίας (Σχήμα 1Α). Περίπου 62% (18/29) των ποντικών που έλαβαν όχημα και το 74% (25/34) των ποντικών που έλαβαν καλσιτριόλη αναπτυχθεί ανθεκτικά ευνουχισμό νόσο (Εικόνα S1), αλλά δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά (ρ = 0,4184 με ακριβή δοκιμή Fisher). Συνολικά, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι οι ενώσεις της βιταμίνης D δεν ήταν σε θέση να μειώσουν την επανάληψη των ανθεκτικών ευνουχισμό του προστάτη σε TRAMP.

Επίδραση των ενώσεων της βιταμίνης D στο βαθμό του όγκου και βάρους της νόσου

Για την περαιτέρω εκτίμηση των επιπτώσεων της ενώσεις της βιταμίνης D στο ανδρογόνων που διεγείρονται προστάτη εξέλιξη σε ποντίκια μετά από 14 εβδομάδες θεραπείας, προστάτη ασθένεια ο τυπική ιστολογική αξιολόγηση (δείτε το

Υλικά και Μέθοδοι

). Συνολικά βαθμούς όγκου είχαν ανατεθεί μετά από τυφλή εξέταση της H & amp? E-χρώση διαφάνειες. Πριν από τις εκθέσεις αποδεικνύουν ότι το κοιλιακό λοβό είναι πιο ευαίσθητο σε θεραπευτική παρέμβαση [27], [28], επομένως συνολικά βαθμούς όγκου του κοιλιακού προστάτη συγκρίθηκαν μεταξύ των ομάδων θεραπείας (Σχήμα 3). Χαμηλή Βαθμός (LG) αλλοιώσεις ήταν μη επεμβατική και χαρακτηρίστηκαν από αυξημένη επιθηλιακά διαστρωμάτωσης με ανέπαφη αδενικό αρχιτεκτονική (Σχήμα 3Α). Ενδιάμεσο Βαθμός (IG) αλλοιώσεις ήταν επίσης μη επεμβατική, αλλά εμφανίζεται εξέχοντα πυρήνια, επιθηλιακά τουφών, μικροθηλωματώδης δομές, αρχιτεκτονική ηθμοειδή, και ένα ανέπαφο αδενικό αρχιτεκτονική (Σχήμα 3Β). Τέλος, οι καρκίνοι προχωρημένου σταδίου σε περίοπτη θέση αποτελούνταν από φύλλα αναπλαστικό κυττάρων με απώλεια αδενικό αρχιτεκτονική (Σχήμα 3C). Η συχνότητα εμφάνισης της LG βλαβών ήταν 40% το όχημα υποβάλλεται σε θεραπεία, 54% στην καλσιτριόλη αγωγή, και 39% σε QW αγωγή ποντίκια (Σχήμα 3D). Σε αντίθεση, IG βλάβες και καρκίνο τελικού σταδίου αναπτύχθηκαν συχνότερα στον έλεγχο (60%) και QW (61%) ομάδες σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν καλσιτριόλη (46%) (Σχήμα 3D). Επιπλέον, η συχνότητα εμφάνισης των καρκινικών αλλοιώσεων ήταν 25% στον έλεγχο, 34% στην ομάδα QW και 20% στην ομάδα καλσιτριόλη (Σχήμα 3D), ωστόσο αυτές οι αλλαγές δεν ήταν σημαντικές (ρ = 0,4699, Chi-Square test). Παρέμβαση επίσης δεν είχαν επίδραση επί βαθμός όγκου σε ραχιαία και την πλευρική λοβοί του προστάτη (δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

Η &.? χρώση Ε εκτελέστηκε σε τομές ιστών από ποντικούς TRAMP αγωγή με φορέα (έλεγχος), καλσιτριόλη (20 μg /kg) ή QW (50 μg /kg) ε.π. 3 χ /εβδομάδα για 14 εβδομάδες. ιστούς του προστάτη βαθμολογήθηκαν με βάση την ιστοπαθολογική σύστημα ταξινόμησης συζητείται στο

Υλικά και Μέθοδοι

ενότητα. Αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες (20 × μεγέθυνση) της H & amp? Ε χρώση του κοιλιακού λοβούς που απεικονίζει (Α) Χαμηλή Βαθμός (LG) προστατικό βλάβη από την ομάδα καλσιτριόλη, (Β) το ενδιάμεσο Βαθμός (IG) αλλοίωση, και (Γ) τον καρκίνο στο τελευταίο στάδιο στην ομάδα ελέγχου. (D) επίπτωσης (%) του LG αλλοιώσεις, IG αλλοιώσεις, και ο καρκίνος στα κοιλιακά λοβούς του ελέγχου (n = 40), καλσιτριόλη (n = 41) και QW (n = 41) ομάδες. Μια δοκιμασία Chi-Square πραγματοποιήθηκε για να προσδιοριστεί εάν υπήρξε κάποια σχέση μεταξύ της θεραπείας και στάδιο της νόσου.

Η

επιβάρυνσης λόγω ασθενειών σε TRAMP μπορεί να συνδεθεί άμεσα με προστάτη και ουρογεννητικού συστήματος (UG) βάρους [25]. Η επίδραση των ενώσεων βιταμίνης D σε βάρος της νόσου αρχικά εξετάστηκε σε όλα τα δείγματα, συμπεριλαμβανομένων LG, IG, και καρκίνων προχωρημένου σταδίου. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές, πιθανότατα προκύπτει από την ανάπτυξη ογκωδών όγκων σε καρκίνους προχωρημένου σταδίου. Μόλις έχουν αναπτύξει ογκώδη όγκους, τα βάρη από αυτούς τους όγκους μπορεί να καλύψει οποιαδήποτε επίδραση της βιταμίνης D έχει στην LG και η IG βλάβες. Ως εκ τούτου, όλες οι επόμενες αναλύσεις για ανδρογόνων που διεγείρεται PCa έγιναν στις μη επεμβατικές LG και IG προστάτη αλλοιώσεις. Η καλσιτριόλη (p = 0,0022) και QW (p = 0,0009) μειώθηκε σημαντικά βάρος UG σε σύγκριση με όχημα στη νόσο των ανδρογόνων που διεγείρεται (Σχήμα 4Α). Επιπλέον, η καλσιτριόλη (p = 0,0178) και QW (0,0086) και οι δύο το μειωμένο βάρος του προστάτη (Σχήμα 4Β). Ωστόσο, σε ανθεκτικά ευνουχισμό όγκους TRAMP ιστολογικά συγκρίσιμη με καρκίνο τελικού σταδίου, οι ενώσεις της βιταμίνης D δεν μετέβαλε στατιστικά επιβάρυνση της νόσου όταν λαμβάνουν θεραπεία μετά τον ευνουχισμό (Σχήμα 4C) ή προ-ευνουχισμό (Σχήμα 4D). Συνολικά, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι ενώσεις της βιταμίνης D ήταν αποτελεσματικό στην επιβράδυνση της ανάπτυξης των πρώιμο στάδιο ανδρογόνων που διεγείρεται PCa, αλλά αναποτελεσματική σε ανθεκτικούς προχωρημένο στάδιο της νόσου ευνουχισμός TRAMP.

(Α-Β) Ποντικοί υποβλήθηκαν σε αγωγή με φορέα (έλεγχος) , καλσιτριόλη (20 μg /kg) ή QW (50 μg /kg) ίρ 3 χ /εβδομάδα για 14 εβδομάδες. Μόνο δείγματα με τη συνολική μη επεμβατική χαμηλής ποιότητας (LG) και ενδιάμεσο Βαθμός (IG) προστάτη βλάβες στο ραχιαίο, πλευρική και κοιλιακό λοβούς αναλύθηκαν, ενώ όλοι οι καρκίνοι του εξαιρέθηκαν από τις αναλύσεις. (Α) Ουρογεννητικού (UG) βάρη (mg) του ελέγχου (n = 30), καλσιτριόλη (n = 32) και QW (η = 28) ποντικών. βάρη (Β) του προστάτη (mg) του ελέγχου (n = 29), καλσιτριόλη (n = 32) και QW (n = 28) ομάδες. (Γ) UG βάρη (mg) του 24 εβδομάδων ποντικούς ευνουχισμού TRAMP αγωγή με έκδοχο ελέγχου (n = 33), καλσιτριόλη (n = 30) ή QW (n = 30)

μετά τον ευνουχισμό

. (D) UG βάρος (mg) 24 εβδομάδων ποντικούς ευνουχισμού TRAMP αγωγή με έκδοχο ελέγχου (n = 29) ή καλσιτριόλη (n = 34)

προ-ευνουχισμό

. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως οικόπεδα κουτί με διαμέσους και μουστάκια που αντιπροσωπεύουν το 5

ου και 95

ου εκατοστημόρια. • (τελείες), αποτελούν σημεία έξω από το 5

ου και 95

ου εκατοστημόριο. Όλες οι p-τιμές παρήχθησαν χρησιμοποιώντας το τεστ Mann-Whitney.

Η

Η καλσιτριόλη προωθεί τη διαφοροποίηση και αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό σε ποντίκια TRAMP ανδρογόνων που διεγείρεται

Με βάση τις παρατηρήσεις που καλσιτριόλη ανέστειλε UG και το βάρος του προστάτη στο κοιλιακό λοβό (Σχήμα 4), περαιτέρω αναλύσεις διεξήχθησαν σε μη επεμβατικές LG και IG αλλοιώσεις. Απώλεια cadherin 1 (Cdh1) έκφραση συνδέεται με την εξέλιξη του προστάτη και μειωμένη διαφοροποίηση σε TRAMP [25], [29]. έκφραση Cdh1 κατά κύριο λόγο βρίσκεται στη μεμβράνη του πλάσματος. Ωστόσο, όταν τα καρκινικά κύτταρα χάνουν κατάστασης διαφοροποίησης, ρύθμιση των Cdh1 μπορεί να διαταραχθεί με αποτέλεσμα κυτοσολίου και μοτίβα πυρηνική έκφραση [30]. Επιπλέον, οι αυξήσεις στην έκφραση του Cdh1 συσχετίζονται με επαγωγή της διαφοροποίησης που επάγεται από ανάλογα της βιταμίνης D σε κυτταρικές σειρές προστάτη [31]. Ως εκ τούτου, η έκφραση της Cdh1 εκτιμήθηκε να προσδιοριστεί η επίδραση της καλσιτριόλης επί της διαφοροποίησης. Σε αντίθεση με τα ποντίκια ελέγχου (Σχήματα 5Α-Β), Cdh1 έντονα εκφράζεται στα κοιλιακά λοβούς των ποντικών που έλαβαν καλσιτριόλη (Σχήματα 5C-D). Αν και παρατηρήθηκε κάποια κυτταροπλασματική χρώση Cdh1 στις δύο ομάδες θεραπείας, η πλειονότητα της χρώσης Cdh1 παρέμεινε δεσμευμένη μεμβράνη. Μεταγενέστερες ποσοτικοποίηση επιβεβαίωσε ότι η καλσιτριόλη αύξησε σημαντικά τον αριθμό των θετικών Cdh1 αδένων σε σύγκριση με όχημα (Εικόνα 5G) (p = 0,0086). Εκτός από Cdh1, ανδρογόνων υποδοχέων (AR) έκφραση εξετάστηκε επίσης στα κοιλιακοί προστάτες των οχημάτων και τα ποντίκια έλαβαν καλσιτριόλη (Σχήματα 5Ε και 5F). Παρά το γεγονός ότι δεν παρατηρήθηκε καμία διαφορά στην έκφραση AR, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η έκφραση AR διατηρήθηκε. Τέλος, υπάρχει μια στοχαστική εμφάνιση του νευροενδοκρινικού καρκίνων στο μοντέλο TRAMP που χαρακτηρίζεται από αυξημένη έκφραση του synaptophysin κατά την διάρκεια της εξέλιξης του όγκου [25]. Εξέταση της εκφράσεως synaptophysin έδειξε ότι η καλσιτριόλη και η θεραπεία QW δεν μετέβαλε επίπτωση του φαινοτύπου νευροενδοκρινικών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε με αντι-Cdh1, αντι-AR και αντι-MKI67 αντισώματα σε τομές ιστών από ελέγχου, καλσιτριόλη και ομάδες θεραπείας QW. (Α-ϋ, G) Cdh1 έκφραση σε μη επεμβατικές χαμηλής ποιότητας (LG) και ενδιάμεσο Βαθμός (IG) κοιλιακός ιστούς του προστάτη. Αντιπροσωπευτικά φωτομικρογραφίες χρώσης Cdh1 στον έλεγχο (Α-Β) και καλσιτριόλη (C-D) ομάδες. Ένθετο στο (Α) αντιπροσωπεύει θετική χρώση Cdh1 των φυσιολογικών επιθηλιακών κυττάρων παχέως εντέρου. Μικροφωτογραφίες πάρθηκαν σε μεγέθυνση 40 φορές (A, C) και εγκιβωτισμένες περιοχές αντιπροσωπεύουν το 100 Χ μεγέθυνση (Β, D). Αντιπροσωπευτικά μικροφωτογραφίες (μεγέθυνση 40 φορές) της έκφρασης AR σε μη επεμβατικές προστάτη βλάβες από κοιλιακό λοβούς του (Ε) και έλεγχος (F) ομάδα καλσιτριόλη. σκορ (G) Cdh1 μη επεμβατικών κοιλιακό βλάβες λοβού από τον έλεγχο (η = 25) και καλσιτριόλη (n = 27), ομάδων υπολογίστηκε με ποσοτικοποίηση αριθμό Ε-καδερίνης θετικών αδένων, όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

τμήμα. (H) Πολλαπλασιαστική δείκτης LG και IG κοιλιακό αλλοιώσεις του λοβού του ελέγχου (n = 30), καλσιτριόλη (n = 33) και QW (n = 27), ομάδων προσδιορίστηκε με ποσοτικοποίηση MKI67 χρώση όπως περιγράφεται στο

Υλικά και Μέθοδοι

ενότητα. Μόνο LG και η IG προστάτη αλλοιώσεων αναλύθηκαν, ενώ οι καρκίνοι προχωρημένου σταδίου αποκλείστηκαν τόσο για Cdh1 βαθμολόγησης και χρώση MKI67. Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως οικόπεδα κουτί με διαμέσους και μουστάκια που αντιπροσωπεύουν το 5

ου και 95

ου εκατοστημόρια. • (τελείες), αποτελούν σημεία έξω από το 5

ου και 95

ου εκατοστημόριο. Όλες οι τιμές ρ παρήχθησαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney test.

Η

Εκτός από την εξέταση της κατάστασης διαφοροποίησης των LG και IG κοιλιακό λοβούς, ανοσοϊστοχημική χρώση διεξήχθη με αντίσωμα MKI67 να εξετάσει την επίδραση της καλσιτριόλης και QW επί του πολλαπλασιασμού του κοιλιακού λοβού. Σε σύγκριση με όχημα, καλσιτριόλη μειώθηκαν σημαντικά τον πολλαπλασιασμό στο κοιλιακό λοβό (p = 0,0467), ενώ ήταν αναποτελεσματικό QW (p = 0.2667) (Σχήμα 5Η). Ανάλυση της απόπτωσης έδειξαν ότι η συνολική έκφραση της προ-αποπτωτικών κασπάσης 3 ήταν πολύ χαμηλή (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).