Αφηρημένο

Η κλινική σημασία των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) στην μετάσταση στους λεμφαδένες του λαιμού από καρκίνο αγνώστου πρωτοπαθούς (CUP) είναι όχι καλά εδραιωμένη. Έχουμε στόχο να αντιμετωπιστεί η σχέση της κατάστασης HPV μεταξύ του κόμβου μετάσταση και του πρωτογενούς όγκου, καθώς επίσης και τη σημασία της κατάστασης HPV σχετικά με ακτινολογικά ανιχνεύεται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες στο κεφάλι και το λαιμό ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (HNSCC) και κύπελλο. HPV DNA εξετάστηκε σε 68 ζεύγη των κόμβων μετάστασης και πρωτογενούς όγκου, και στον κόμβο μετάσταση από 27 κύπελλα. Σε χειρουργική θεραπεία κύπελλα, p16 εξετάστηκε ανοσοϊστοχημικά. Όταν αμυγδαλεκτομή αποδείχθηκε απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνο στο Κύπελλο, HPV DNA και p16 εξετάστηκαν επίσης με τον αποκρυφισμό πρωτοβάθμια. Κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες σε αντίθεση με ενισχυμένη υπολογιστική τομογραφία συσχετιζόταν με την αρχική τοποθεσία και την κατάσταση του HPV σε μια άλλη σειρά 255 HNSCCs και κύπελλα με γνωστή κατάσταση HPV. μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν HPV-θετικές 19/37 ΤΣΡ (51%) στοματοφαρυγγική (OPSCCs) και 10/27 (37%) κύπελλα, αλλά όχι σε μη-OPSCCs. Υγρό συλλέχθηκε από κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες χρησιμοποιώντας λεπτή βελόνη σε δύο OPSCCs και ένα κύπελλο, και όλες οι συλλογές υγρού ήταν HPV-θετικές. κατάσταση HPV, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας HPV DNA, γονότυπο, και φυσικής κατάστασης, καθώς και το πρότυπο έκφρασης του ρ16 ήταν συνεπή μεταξύ κόμβου μετάσταση και πρωτογενή ή απόκρυφη πρωτογενούς όγκου. Απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνου βρέθηκε συχνότερα σε p16-θετικά CUP από ό, τι σε p16-αρνητικά CUP (αναλογία πιθανοτήτων (OR), 39.0? 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI), 1,4 έως 377,8? P = 0.02). Ακτινολογικά, κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν ειδικά για OPSCC και κύπελλο, και συνδέθηκε με τον HPV θετικότητας σε σχέση με νεκρωτικό ή στερεά μετάσταση στους λεμφαδένες (OR, 6.2? 95% CI, 1,2 έως 45,7? P = 0.03). Εν κατακλείδι, το καθεστώς HPV παραμένει αμετάβλητη μετά την μετάσταση. Η απόκρυφη πρωταρχική του HPV-θετικών κύπελλο είναι πιθανότατα εντοπίζεται στο στοματοφάρυγγα. κατάσταση HPV καθορίζεται από το πρόστιμο αναρροφήσεις βελόνα διευκολύνει τη διάγνωση της κυστικής μετάσταση στους λεμφαδένες

Παράθεση:. Yasui Τ, Morii Ε, Yamamoto Υ, Yoshii Τ, Takenaka Υ, Nakahara S, et al. (2014) ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων και Κυστική Κόμβος μετάσταση σε Στοματοφαρυγγική καρκίνου και αγνώστου πρωτοπαθούς προέλευσης. PLoS ONE 9 (4): e95364. doi: 10.1371 /journal.pone.0095364

Συντάκτης: Craig Meyers, Penn State University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 του Δεκέμβρη 2013? Αποδεκτές: 25, Μαρτίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 21 του Απρίλη 2014

Copyright: © 2014 Yasui et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τραχήλου της μήτρας λεμφαδένα μετάστασης από καρκίνο αγνώστου πρωτοπαθούς ( CUP) είναι μια σπάνια κλινική οντότητα και σήμερα αντιπροσωπεύει πάνω από το 3% του κεφαλιού και ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα τραχήλου (HNSCC) [1]. Σε πολλές περιπτώσεις, μετά την αρχική παρουσίαση του ως CUP, ο κύριος δικτυακός τόπος έχει αποκαλυφθεί κυρίως στο στοματοφάρυγγα, ιδιαίτερα στην αμυγδαλή Palatine και η βάση της γλώσσας [2]. Στοματοφαρυγγική καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OPSCC) είναι αιτιολογικά ταξινομούνται σε δύο διακριτούς υποτύπους? το ένα είναι συναφή με τον καπνό, ενώ η άλλη προκαλείται από ιό των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) [3], [4]. Η υπερέκφραση του ρ16 χρησιμεύει ως υποκατάστατος δείκτης της μόλυνσης από HPV, αν και ένα υποσύνολο των ρ16-θετικών όγκων είναι HPV-αρνητικά [4]. HPV-θετικά ή /και p16-θετικά OPSCC ανακύπτει κατά προτίμηση στην αμυγδαλή Palatine και τη βάση της γλώσσας [4], γεγονός που υποδηλώνει τη σημασία του HPV σε CUP.

HPV επικράτηση στον κόμβο μετάσταση από HNSCC έχει καλά μελετημένος; έχει αποδειχθεί ότι ο HPV-θετικών μετάσταση στους λεμφαδένες είναι ειδικά για OPSCC [5], [6], ενώ η σχέση του κατάσταση HPV μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και των αντίστοιχων μετάσταση στους λεμφαδένες του δεν είναι καλά εδραιωμένη. Παρά το γεγονός ότι μια σειρά από μελέτες έχουν δείξει καλή συμφωνία της κατάστασης HPV μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση στους λεμφαδένες, το μέγεθος του δείγματος της κάθε μελέτης ήταν μικρό, και HPV φυσικής κατάστασης δεν απευθυνόταν [7] – [9]. επικράτηση HPV στον κόμβο μετάσταση από CUP έχει αναφερθεί να κυμαίνονται από 28 έως 92%, ανάλογα με τον ορισμό του CUP [8] – [11], ενώ η σχέση του κατάσταση HPV μεταξύ μετάσταση στους λεμφαδένες και το αντίστοιχο του απόκρυφων πρωτογενούς όγκου δεν έχει τεκμηριωθεί.

η σύνδεση των OPSCC με ιστολογικά εντοπιστεί μετάσταση κυστική κόμβος είναι γνωστό [12], ενώ η πλειοψηφία των απόκρυφων προκριματικές στο φλιτζάνι με ιστολογικά προσδιορίζονται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες εντοπίζονται στην αμυγδαλή Palatine ή στη βάση του η γλώσσα [13]? Αυτό υποδηλώνει την εμπλοκή της λοίμωξης HPV στο σχηματισμό της κυστικής μετάσταση στους λεμφαδένες. Goldenberg et al. ανέλυσε την κατάσταση του HPV σε εκτομή ιστών από τους λαιμούς των OPSCC και κύπελλο ασθενείς, και διαπίστωσαν ότι το 87% (13/15) των κυστική μεταστατικό κόμβων ήταν HPV-θετικές [14]. Σε μια άλλη μελέτη, έχει αναφερθεί ότι ένα βραγχιακής σχισμή κύστη αποδεικνύεται συχνά να είναι η κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες μετά από χειρουργική επέμβαση που ακολουθείται από ιστοπαθολογική εξέταση [15]. Ο λόγος για αυτό είναι ότι και οι δύο κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες και ένας βραγχιακής σχισμή κύστη παρούσα ακτινογραφικά ως πλευρική τραχήλου κύστεις, και ότι η ευαισθησία όσον αφορά την ανίχνευση των κυττάρων SCC σε κυστικό υγρό μέσω κυτταροπαθολογικά εξέτασης είναι κακή. Κατά συνέπεια, μια μη χειρουργική διαφορική διάγνωση μεταξύ των δύο οντοτήτων όσον αφορά την κατάσταση του HPV είναι κλινικό ενδιαφέρον. Η διαφορική διάγνωση δεν απαιτεί μόνο την εγκαθίδρυση σύνδεσης μεταξύ της κατάστασης HPV και ακτινολογικά προσδιορίζονται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες, αλλά και την ανάπτυξη του HPV ανάλυση των κυστικό υγρό που συλλέγονται από λεπτή βελόνα (FNA).

Σχεδιάσαμε την παρούσα μελέτη για να να κατανοήσουν καλύτερα την κλινική σημασία του καθεστώτος του HPV που αφορούν τον κόμβο μετάσταση από CUP. Για το σκοπό αυτό ερευνήσαμε την κατάσταση του HPV, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας HPV DNA, γονότυπο, και φυσική κατάσταση, σε ζεύγη του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση στους λεμφαδένες σε μια μεγάλη σειρά από HNSCC, και αξιολόγησαν την σχέση μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και του κόμβου μετάσταση του σχετικά κατάσταση HPV. Ερευνήσαμε περαιτέρω, όχι μόνο για τον HPV επικράτηση σε μετάσταση στους λεμφαδένες από CUP, αλλά και η σχέση μεταξύ της μετάσταση στους λεμφαδένες και της αντίστοιχης απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνο (αποδείχθηκε μετά από αμυγδαλεκτομή) όσον αφορά το καθεστώς του HPV και πρότυπο έκφρασης p16. Επιπλέον, μελετήθηκε η σχέση μεταξύ ακτινολογικά ανιχνεύεται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες και την κατάσταση του κύριου χώρου και του HPV, με έμφαση στην ανίχνευση του HPV σε κυστικό υγρό.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review του Πανεπιστημίου της Οσάκα, το Δεκέμβριο του 2004. Όλοι οι ασθενείς παρείχαν ενυπόγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση.

ασθενείς

Η κατάσταση HPV του πρωτογενούς όγκου και αντίστοιχη μετάσταση στους λεμφαδένες της, καθώς και η κατάσταση HPV των μετάσταση στους λεμφαδένες από CUP, εξετάστηκαν και στις δύο αναδρομικές και προοπτικές ρυθμίσεις. Στην αναδρομική ρύθμιση, φορμόλη σταθερό εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) δείγματα από 28 ζεύγη του πρωτογενούς και του κόμβου μετάσταση και από 17 κύπελλα εγγραφεί. Όλες οι όγκοι χειρουργικά μεταξύ του Ιανουαρίου 2005 και του Μαρτίου του 2010 χωρίς καμία προηγούμενη θεραπεία, και ήταν ιστοπαθολογικά διαγνωσθεί ως καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων. Στην προοπτική ρύθμιση, συνολικά 53 ύποπτα θετικούς λεμφαδένες HNSCCs και κύπελλα εγγράφηκαν. Δείγματα βιοψίας ύποπτων πρωτοπαθών όγκων και FNA δείγματα ύποπτων μετάσταση στους λεμφαδένες ελήφθησαν από εξωτερικούς ασθενείς από τον Απρίλιο του 2010 και τον Σεπτέμβριο του 2012. δείγματα βιοψίας και δείγματα FNA ήταν αποθηκευμένα σε RNAlater αντιδραστήριο σταθεροποίησης RNA (QIAGEN Inc., Valencia, CA, USA) και ρυθμιστικό διάλυμα ATL (QIAamp Mini Kit: QIAGEN Inc.), αντίστοιχα. Όταν συλλογή υγρού πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας FNA, φυγοκέντρησης του αποθηκεύτηκε όπως περιγράφεται παραπάνω. Μόνο ένα ενιαίο κύκλο του FNA διεξήχθη για την ανάλυση του HPV, ενώ FNA επαναλήφθηκε όπως απαιτείται για κυτταροπαθολογικά ανάλυση. Όταν αμυγδαλεκτομή αποκάλυψε μια απόκρυφη πρωτοπαθούς όγκου σε ασθενείς CUP, το δείγμα FFPE της απόκρυφης πρωτογενούς αναλύθηκε για HPV DNA και p16. Έκφραση της p16 εξετάστηκε επίσης σε χειρουργικά κόμβο μετάσταση από CUP, ανεξάρτητα από τις ρυθμίσεις. Για την ακτινογραφική ανάλυση, συνολικά 255 HNSCC και κύπελλο ασθενείς, οι οποίοι είχαν υποστεί προεπεξεργασία με σκιαγραφικό αξονική τομογραφία και είχε αποδειχθεί παθολογικά να είναι κόμβος θετικά, είχαν εγγραφεί. Ο πληθυσμός αυτός περιελάμβανε την αναδρομική σειρά 45 HNSCCs /Κύπελλα, ο μελλοντικός σειρά 50 HNSCCs /Κύπελλα, και την πρόσθετη σειρά 160 HNSCCs. Η κατάσταση HPV της συμπληρωματικής σειράς είχαν αξιολογηθεί χρησιμοποιώντας δείγματα βιοψίας FFPE από τον πρωτογενή όγκο [16]. Η διάγνωση της CUP έγινε μετά από ενδελεχή επεξεργασία απέτυχε να ανιχνεύσει μια πρωτοπαθούς όγκου παρά παθολογικά αποδεδειγμένη μετάσταση στους λεμφαδένες. Η κατεργασία περιελάμβανε τα εξής: ιατρικό ιστορικό? σωματική εξέταση; λαιμό αξονική τομογραφία ή /και μαγνητική τομογραφία? φαρυγγολαρυγγικός ενδοσκόπηση? ανώτερο γαστρεντερικό ενδοσκόπηση? βλεννογόνου βιοψία του στοματοφάρυγγα και του ρινοφάρυγγα? και

18F-φθοριοδεοξυγλυκόζη τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων (FDG-PET) ή FDG-PET /CT. Αμυγδαλεκτομή δεν περιλαμβάνεται στα κριτήρια, διότι, κατ ‘αρχήν αμυγδαλεκτομή διεξήχθη ταυτόχρονα με ανατομή λαιμό όταν ο όγκος ήταν χειρουργήσιμη.

Ανίχνευση και τυποποίηση του ιού HPV DNA και αξιολόγηση της HPV16 φυσικής κατάστασης

υψηλού κινδύνου

DNA εκχυλίστηκε από δείγματα FFPE χρησιμοποιώντας το κιτ ιστού DNeasy (QIAGEN Inc.), και από φρέσκα δείγματα με τη χρήση του QIAamp Mini Kit (QIAGEN Inc.). Η παρουσία του HPV DNA διαλέχτηκε με τη βοήθεια ενός ένθετη αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) με τη χρήση του /11 σετ εκκινητών PGMY09 (για την πρωτογενή PCR) και την /6 + σετ GP5 + εκκινητή (για δευτερογενή PCR), όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [17] . Τα δευτερεύοντα προϊόντα της PCR καθαρίστηκαν και αλληλουχήθηκαν απευθείας χρησιμοποιώντας ένα γενετικό αναλυτή 3100 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Typing επιτεύχθηκε με σύγκριση της αλληλουχίας με αυτές των γνωστών τύπων HPV χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα BLAST NCBI (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Η φυσική κατάσταση του HPV16 απευθύνθηκε σύμφωνα με την αναλογία του

Ε2

να

Ε6

αντιγράψετε αριθμούς, η οποία προσδιορίστηκε με τη βοήθεια πραγματικού χρόνου PCR ενίσχυση του

Ε2

και

Ε6

ανοιχτά πλαίσια ανάγνωσης όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [18]. Το τραχηλικό καρκίνο κυτταρική γραμμή Caski χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος [19].

Ανοσοϊστοχημεία της ρ16

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση ρ16 πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τα τμήματα 4-μm FFPE ιστού με ένα κατάλληλο θετικό έλεγχο . Μετά ανάκτηση αντιγόνου χρησιμοποιώντας ένα Pascal υπό πίεση θάλαμο θέρμανσης (ϋΑΚΟ, Glostrup, Denmark), οι τομές επωάστηκαν με αντίσωμα αντι-ρ16 σε αραίωση 1:500 (κλώνος LC8: Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TA, USA) . Μετά την επώαση, το αντίσωμα αντι-ρ16 ανιχνεύτηκε χρησιμοποιώντας το κιτ ChemMate EnVision (ϋΑΚΟ) και παρατηρήθηκαν με τη βοήθεια διαμινοβενζιδίνης ως χρωμογόνου. χρώση Αρνητικός έλεγχος διενεργήθηκε με την απουσία του πρωτογενούς αντισώματος. Περιπτώσεις ταξινομήθηκαν ως θετικά για την p16 κατά 50% ή περισσότερο των κυττάρων έδειξαν πυρηνική και κυτταροπλασματική χρώση.

Ορισμός της κυστικής κόμβου στην αξονική τομογραφία με σκιαγραφικό σάρωσης

Ο ορισμός της κυστικής κόμβων για contrast- ενισχυμένη αξονική τομογραφία ήταν σύμφωνη με τα κριτήρια που αναφέρθηκαν από Goldenberg et al. [14]. Κόμβοι με ένα στρογγυλό ή ωοειδές σχήμα, ένα λεπτό (& lt? 2 mm) ενίσχυση της κάψουλας, ομοιογενές εξασθένηση νερό και χωρίς εσωτερική συγκρότημα που ήταν ετερογενείς, ή είχαν σταθερή περιοχή ταξινομήθηκαν ως κυστική (Σχήμα 1α.). Κόμβοι με παχύτερα συμπαγείς τοίχους ή /και ετερογενή, πολύπλοκο κεντρικό χαμηλή εξασθένηση ταξινομήθηκαν ως νεκρωτικές (Σχήμα 1β.)? ενώ οι κόμβοι με ένα ομοιογενές στερεό περιεχόμενο ταξινομήθηκαν ως στερεό (Εικ. 1γ).

Σημειώστε ένα ενίσχυσης της αντίθεσης λεπτό τοίχωμα και ομοιογενές περιεχόμενο χαμηλής πυκνότητας στην κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες.

Η

Η στατιστική ανάλυση

Η συμμετρία της κατάστασης HPV και /ή την έκφραση p16 μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και την αντίστοιχη μετάσταση στους λεμφαδένες της εξετάστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία κάπα. Η διαφορά στο φαινότυπο του HPV /p16 μεταξύ μετάσταση στους λεμφαδένες από CUP (με και χωρίς απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνο) εξετάστηκε χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher-Freeman-Halton. Οι σχέσεις μεταξύ των απόκρυφων αμυγδαλών του καρκίνου και την κατάσταση του HPV και μεταξύ των απόκρυφων αμυγδαλών έκφραση του καρκίνου και p16 εξετάστηκαν μέσω μονοπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο της λογιστικής παλινδρόμησης και το ακριβές τεστ Clopper-Pearson, αντίστοιχα. Οι διαφορές στον επιπολασμό της κυστικής μετάσταση στους λεμφαδένες, σύμφωνα με την αρχική τοποθεσία αξιολογήθηκαν με τη βοήθεια της μονοπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο της λογιστικής παλινδρόμησης ή την ακριβή δοκιμασία Clopper-Pearson, ανάλογα με την περίπτωση. Η σχέση μεταξύ της κατάστασης του HPV και κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες αξιολογήθηκε μέσω μονοπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο ουρά. Οι τιμές Ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκαν ως στατιστικά σημαντικές. Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας JMP Έκδοση 10.02 λογισμικό (SAS Institute, Cary, NC, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

Αποτελέσματα

Σχέσεις της κατάστασης HPV μεταξύ πρωτοβάθμιας και κόμβο μετάσταση σε OPSCC

στην αναδρομική ρύθμιση, 40% (6/15) του OPSCCs ήταν HPV-θετικές και 60% (9/15) ήταν HPV-αρνητικά, όσον αφορά τόσο του πρωτογενούς όγκου και των αντίστοιχων μετάσταση στους λεμφαδένες της (Πίνακας 1). Η παρουσία ή απουσία λοίμωξης HPV ήταν συνεπής μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και των αντίστοιχων κόμβων μετάσταση του, υποδεικνύει την ομοιότητα στην κατάσταση HPV μεταξύ των δύο (Ρ & lt? 0,0001). Αξιοσημείωτο είναι το γεγονός ότι το 17% (1/6) του HPV-θετικών OPSCCs είχε πολλαπλές μεταστατικές κόμβους, όλα από τα οποία ήταν HPV-θετικές. Αντίθετα, το 33% (3/9) του HPV-αρνητικών OPSCCs είχε πολλαπλές μεταστατικές κόμβους, όλα από τα οποία ήταν HPV-αρνητικά. Κανένα από τα 13 μη-OPSCCs (5 υποφάρυγγα, 4 λάρυγγα, και 4 μορφές καρκίνου του στόματος) ήταν HPV-θετικές.

Η

Όσον αφορά το μελλοντικό σκηνικό, η ανάλυση PCR ήταν ανεπιτυχής σε 6% (3/53 ) των περιπτώσεων, λόγω της κακής προετοιμασίας DNA από FNAs. Ωστόσο, επανέλαβε FNAs αποδεικνύεται κακοήθεια σε όλες τις τρεις από αυτές τις περιπτώσεις. Κατά συνέπεια, η ανάλυση των προοπτικών περιορίστηκε σε 50 περιπτώσεις, οι οποίες τελικά διαγνωστεί από ενδελεχή κλινική επεξεργασία για να είναι οι εξής καρκίνους: 22 στοματοφαρυγγική? 2 ρινοφαρυγγικής? 7 υποφάρυγγα? 7 λάρυγγα? 2 στόματος? και 10 κύπελλα. Τόσο στην πρωτοπαθή όγκο και μετάσταση κόμβο της, 59% (13/22) των OPSCCs ήταν HPV-θετικά, ενώ το 41% ​​(9/22) των OPSCCs και 100% (18/18) των μη OPSCCs ήταν HPV- αρνητικός τόσο στην πρωτογενή όγκο και μετάσταση κόμβο του? Και πάλι, αυτό έδειξε την ομοιότητα στην κατάσταση HPV μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση κόμβο του (Ρ & lt? 0,0001? Πίνακας 1). Συλλογικά, 51% (19/37) των OPSCCs ήταν HPV-θετικά, τα οποία προέρχονται είτε στην αμυγδαλή Palatine ή τη βάση της γλώσσας. Όπως φαίνεται στους πίνακες 2 και 3, και τα δύο HPV γονότυπο και φυσικής κατάστασης ήταν συνεπή μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση κόμβο του (Ρ & lt? 0,0001). HPV16 αντιπροσώπευαν το 95% (18/19) των HPV-θετικών περιπτώσεων και HPV33 ανιχνεύθηκε στο υπόλοιπο μία περίπτωση. Πλήρης ιική ολοκλήρωση βρέθηκε στο 56% (10/18) των HPV16-θετικές περιπτώσεις, ενώ το υπόλοιπο 44% (8/18) του HPV16-θετικών περιπτώσεων παρουσίασαν ένα μείγμα από επισωμικά και ολοκληρωμένων ιογενείς μορφές.

HPV επικράτηση στο Κύπελλο και η σχέση της κατάστασης HPV μεταξύ τον αποκρυφισμό πρωτοβάθμιας και κόμβο μετάσταση

στις αναδρομικές και προοπτικές ρυθμίσεις, το 35% (6/17) και 40% (4/10 ) των κυπέλλων ήταν HPV-θετικά, αντίστοιχα, υποδεικνύοντας ότι συνολικά 37% (10/27) των κυπέλλων ήταν HPV-θετικά (Πίνακας 1). Τα λεπτομερή χαρακτηριστικά κυπέλλων σε σχέση με HPV που παρουσιάζονται στον Πίνακα S1 για την αναδρομική ρύθμιση και στον Πίνακα S2 για τον μελλοντικό σκηνικό. HPV16 και HPV18 αντιπροσώπευαν το 80% (8/10) και 20% (2/10) των 10 HPV-θετικές περιπτώσεις, αντίστοιχα. Πλήρης ιική ολοκλήρωση βρέθηκε στο 63% (5/8) του HPV16-θετικών περιπτώσεων, ενώ το υπόλοιπο 38% (3/8) του HPV16-θετικών περιπτώσεων έδειξε μικτή ιογενείς μορφές. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι το υγρό συλλέχθηκε από FNA σε τρεις περιπτώσεις (2 OPSCCs και 1 φλιτζάνι) στο μελλοντικό περιβάλλον. Όλα τα τρία συλλογών υγρού βρέθηκαν να είναι θετικοί στον HPV, αν και επανειλημμένες κυτταρολογία FNA απέτυχαν να ανιχνεύσουν κακοήθη κύτταρα σε ένα από αυτά.

Από 27 ασθενείς με CUP, 19 υποβλήθηκαν σε αμυγδαλεκτομή μαζί με ανατομή λαιμό, η οποία αποκάλυψε απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνο σε 32% (6/19). Η σχέση μεταξύ του κόμβου μετάσταση και το αντίστοιχο του απόκρυφων αμυγδαλών καρκίνος σχετικά με την κατάσταση του HPV και την έκφραση ρ16 συνοψίζονται στον Πίνακα 4. Ο φαινότυπος του κατάσταση HPV και της έκφρασης p16 ήταν συνεπής μεταξύ κόμβου μετάσταση και αντίστοιχων απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνος του (Ρ = 0,01). Επιπλέον, όπως φαίνεται στους πίνακες 2 και 3, HPV γονότυπο και φυσικής κατάστασης ήταν συνεπή μεταξύ κόμβου μετάσταση και αντίστοιχων απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνος του. Σύκο. 2 απεικονίζει χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη και p16 ανοσοϊστοχημεία των απόκρυφων αμυγδαλών καρκίνου με κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες. Το επιφανειακό στρώμα του βλεννογόνου του αμυγδαλής βρέθηκε να είναι άθικτη, ενώ τα καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν ρ16 ήταν εμφανής σε ένα στρώμα κρύπτη με εισβολή στο στρώμα υποβλεννογόνια (Σχ. 2α και 2β). Καρκινικό ιστό που οριοθετείται ένα λεπτό κυστική τοίχο εκφράζεται διάχυτα p16 (Σχ. 2γ και 2δ).

Το μπαρ κλίμακα αντιστοιχεί σε 1 mm.

Η

Αξίζει να σημειωθεί ότι, κατά 100% (6/6) των κυπέλλων με τα αποκαλυπτήρια απόκρυφη των αμυγδαλών του καρκίνου εξέφρασαν p16, ενώ το 50% (3/6) ήταν HPV-θετικές. Σε έντονη αντίθεση, μόνο το 23% (3/13) και 15% (2/13) των κυπέλλων χωρίς παρουσίασε απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνου ήταν p16-θετικά και HPV-θετικά, αντίστοιχα. Η διαφορά στην κατανομή των HPV φαινοτύπων /p16 ήταν στατιστικά σημαντική μεταξύ των κυπέλλων, με και χωρίς τα αποκαλυπτήρια απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνου (P = 0,004)? η διαπίστωση αυτή μας ώθησε να διερευνήσει τη σχέση μεταξύ των απόκρυφων αμυγδαλών του καρκίνου και την κατάσταση του HPV ή έκφραση p16 σε μετάσταση στους λεμφαδένες από CUP. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 5, η πιθανότητα ότι λανθάνουσα καρκίνο των αμυγδαλών θα μπορούσε να ανακαλυφθεί μετά αμυγδαλεκτομή ήταν σημαντικά υψηλότερη όταν κόμβος μετάσταση από CUP ήταν ρ16-θετικά, από ό, τι όταν ήταν ρ16-αρνητικό (αναλογία πιθανοτήτων (OR), 39,0? 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI), 1,4 έως 377,8? P = 0.02). Αν και απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνου αποδείχθηκε πιο συχνά σε HPV-θετικά CUP από ό, τι σε HPV-αρνητικό CUP, η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (P = 0,17)

Η

Σύλλογος ακτινολογικά προσδιορίζονται κυστική κόμβο μετάσταση με πρωτοπαθή θέση του όγκου και HPV κατάσταση

Η ενισχυμένη αξονική τομογραφία από συνολικά 255 ασθενείς με θετικούς λεμφαδένες HNSCC ή CUP εξετάστηκαν (Πίνακας 6). Κανένας από 146 μη OPSCCs (18 ρινοφαρυγγικής, 91 υποφάρυγγα, 25 λάρυγγα, και 12 μορφές καρκίνου του στόματος) έδειξε ακτινολογικά ανιχνεύεται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες, ενώ το 6% (5/82) των OPSCCs και 11% (3/27) των κυπέλλων έκανε. Όλα τα πέντε OPSCCs με ακτινολογικά ανιχνεύεται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες προέρχεται είτε στην αμυγδαλή Palatine ή στη βάση της γλώσσας. Η συχνότητα εμφάνισης της κυστικής μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε μη OPSCC ό, τι στην OPSCC (OR, 0,05? 95% CI, 0,004 έως 0,8? Ρ = 0,03). Από τις περιπτώσεις με κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες, 38% (3/8) έδειξε πολλαπλούς κομβικά μετάσταση, όλα εκ των οποίων εμπλέκονται νεκρωτικό μετάσταση στους λεμφαδένες. Όλες οι υπόλοιπες πέντε περιπτώσεις έδειξαν μοναχική κομβικά μετάσταση, η οποία ήταν η κυστική. Επειδή και οι δύο HPV λοίμωξης και κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν ειδικά για OPSCC και κύπελλο, διερευνήθηκε η συσχέτιση της κατάστασης HPV με ακτινογραφικό εύρημα μετάσταση στους λεμφαδένες σε OPSCC και CUP (Πίνακας 7). Σε σύγκριση με νεκρωτικό ή /και στερεά μετάσταση στους λεμφαδένες, κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν πιο πιθανό να είναι HPV-θετικά (33 έναντι 75%? OR, 6.2? 95% CI, 1,2 έως 45,7? Ρ = 0,03). Με τη σειρά του, η συχνότητα των ακτινογραφικά αναγνωρίσιμων κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν υψηλότερη σε HPV-θετικών όγκων σε σχέση με το HPV-αρνητικών όγκων (15 έναντι 3%? OR, 6.2? 95% CI, 1,3 έως 43,8? Ρ = 0,02).

η

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι HPV-θετικά μετάσταση στους λεμφαδένες είναι ειδικά για OPSCC, ειδικά όταν OPSCC προκύπτει στην αμυγδαλή Palatine και τη βάση της γλώσσας. Δείξαμε επίσης ότι η ιδιότητα του HPV, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας HPV DNA, γονότυπο, και φυσικής κατάστασης, ήταν συνεπής μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και των αντίστοιχων μετάσταση στους λεμφαδένες της. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η απόκρυφη πρωτογενή όγκο του CUP με HPV-θετικά μετάσταση στους λεμφαδένες είναι πιθανότατα εντοπίζεται στο στοματοφάρυγγα, ιδιαίτερα στην αμυγδαλή Palatine ή τη βάση της γλώσσας. Ευρήματα σχετικά με σειρά μας των κύπελλα, σύμφωνα με την πρόταση αυτή. Αμυγδαλεκτομή αποκάλυψε απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνο σε 60% (3/5) των κυπέλλων με HPV-θετικό κόμβο μετάσταση και 67% (6/9) των κυπέλλων με ρ16-θετικά μετάσταση στους λεμφαδένες, αλλά σε καμία από 10 κύπελλα με HPV-αρνητικό /p16-αρνητικά κόμβο μετάσταση. Επιπλέον, έχουμε δείξει για πρώτη φορά ότι η κατάσταση του HPV, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας HPV DNA, γονότυπο, και φυσικής κατάστασης, καθώς και το πρότυπο έκφρασης του ρ16 είναι συνεκτικές μεταξύ κόμβου μετάσταση και αντίστοιχων απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνος του. Συλλογικά, έχουμε δημιουργήσει όχι μόνο ότι η κατάσταση HPV του όγκου παραμένει αμετάβλητη μετά την μετάσταση, αλλά και ότι υπάρχει η απόκρυφη πρωτεύουσα θέση CUP με HPV που σχετίζονται με μετάσταση στους λεμφαδένες στον στοματοφάρυγγα.

Λαμβάνοντας υπόψη αυτές τις διαπιστώσεις, είναι πιο πιθανό να συμβεί σε περίπτωση CUP με HPV που σχετίζονται με μετάσταση στους λεμφαδένες που η απόκρυφη πρωτοπαθούς όγκου εντοπίζεται στη βάση της γλώσσας, εκτός εάν απόκρυφη αμυγδαλών ο καρκίνος έχει αποδειχθεί μετά από αμυγδαλεκτομή. Weiss et al. ανέφεραν ότι αμυγδαλεκτομή και τυφλή βιοψία της βάσης της γλώσσας παρουσίασε την απόκρυφη πρωτογενή όγκο σε όλες τις 12 κύπελλα με HPV-θετικά μετάσταση στους λεμφαδένες, και σε όλες τις 11 κύπελλα με ρ16-θετικών μετάσταση στους λεμφαδένες [8]. Στη σειρά μας, αμυγδαλεκτομή απέτυχε να αποκαλύψει απόκρυφη αμυγδαλών καρκίνο σε 40% (2/5) των κυπέλλων με HPV-θετικά μετάσταση στους λεμφαδένες, και σε 33% (3/9) των κυπέλλων με ρ16-θετικά μετάσταση στους λεμφαδένες, στο οποίο το απόκρυφο πρωτογενής όγκος αναμενόταν να εντοπίζεται στη βάση της γλώσσας. Επιπλέον, βρήκαμε ότι αμυγδαλεκτομή ήταν ανεπιτυχής στην ανίχνευση της απόκρυφη πρωτογενή όγκο σε όλες τις 10 κύπελλα με HPV-αρνητική /p16-αρνητικά μετάσταση στους λεμφαδένες. Ομοίως, Park et al. ανέφεραν ότι αμυγδαλεκτομή και βιοψία βλεννογόνου ήταν επιτυχείς στον προσδιορισμό της απόκρυφης OPSCC μόνο σε 7% (2/27) των κυπέλλων με HPV-αρνητικό μετάσταση στους λεμφαδένες και σε 14% (4/29) των κυπέλλων με ρ16-αρνητικά μετάσταση στους λεμφαδένες [10 ]. Φαίνεται ότι είναι δύσκολο να προσδιοριστεί η απόκρυφη πρωτοπαθούς όγκου χρησιμοποιώντας αμυγδαλεκτομή όταν κόμβο μετάσταση από CUP είναι HPV-αρνητικό /p16-αρνητικά.

Σύμφωνα με μια συστηματική ανασκόπηση των τύπων HPV σε HNSCC, την επικράτηση του HPV 18 στις OPSCC ήταν χαμηλή? HPV18 αντιπροσώπευαν μόνο 9 από 909 (1,0%) HPV-θετικών κρουσμάτων OPSCC [20]. Επιπλέον, η συντριπτική πλειοψηφία (& gt? 95%) του HPV 18-θετικοί HNSCCs δεν ήταν OPSCCs. Σε αντίθεση, HPV18 αντιπροσώπευαν 2 από 10 (20%) HPV-θετικά κούπες στο σειρά μας? Δυστυχώς, και οι δύο από τους ασθενείς με HPV 18-θετικός κύπελλα δεν υφίστανται αμυγδαλεκτομή (Πίνακας S1 και S2). Παραμένει ασαφές ως προς το εάν ή όχι η απόκρυφη πρωταρχική θέση σε αυτές τις δύο φλιτζάνια ήταν η αμυγδαλή. Δεδομένης της ανωτέρω εύρημα ότι μη-στοματοφαρυγγική SCC αποτελούν τη μεγάλη πλειονότητα των περιπτώσεων HNSCC HPV 18-θετικός, είναι πιθανό ότι η απόκρυφη πρωταρχικός του HPV 18-θετικός CUP υφίσταται σε θέσεις άλλες από στοματοφάρυγγα. Αυτό είναι ένα ενδιαφέρον θέμα που θα πρέπει να αντιμετωπιστούν στο μέλλον.

OPSCC και κύπελλο συχνά αποτελούν ιστολογικά αναγνωρίσιμα κυστική κόμβο μετάσταση [12], [13]. Αντίθετα, η κυστική κόμβο μετάσταση είναι κακοί συχνά ως μια βραγχιακό σχισμή κύστη [15]. Με τη σειρά του, δεν είναι μέχρι τη χειρουργική επέμβαση που ακολουθείται από την ιστοπαθολογική εξέταση, ότι η βραγχιακό σχιστία κύστη μπορεί να αποδειχθεί ότι είναι κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες. Αυτό συμβαίνει επειδή τόσο η κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες και βραγχιακής σχισμή κύστη παρούσα ακτινογραφικά ως πλευρική τραχήλου κύστεις, και επειδή η ευαισθησία της εξέτασης κυτταροπαθολογικά είναι φτωχή στην ανίχνευση κακοηθών κυττάρων σε κυστικό υγρό. Στην κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες, η ευαισθησία της διάγνωσης κυτταροπαθολογικά έχει αναφερθεί ότι είναι στην περιοχή από 33-50% [15], [21]. Για να βρούμε μια λύση για τη διαφορική διάγνωση των δύο αυτών φορέων, που απευθύνεται πρώτα τη σχέση ανάμεσα στην πρωταρχική θέση και ακτινολογικά αναγνωρίσιμα κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες σε αντίθεση με ενισχυμένη αξονική τομογραφία. Βρήκαμε ότι ακτινολογικά αναγνωρίσιμες κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν ειδικά για OPSCC και κύπελλο, και ότι η δευτερεύουσα τοποθεσία της OPSCC με ακτινολογικά αναγνωρίσιμα κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν είτε η αμυγδαλή Παλατινή ή η βάση της γλώσσας. Επειδή η κύρια περιοχή ειδική για κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες ήταν πανομοιότυπη με την πρωτογενή θέση ειδικά για HPV μόλυνσης, εμείς επόμενο διερευνήθηκε η σχέση μεταξύ της κατάστασης HPV και κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες. Βρήκαμε ότι ακτινογραφικά αναγνωρίσιμες κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες είναι πιο πιθανό να είναι HPV-θετικά σε σχέση με στερεά ή νεκρωτικές κόμβος μετάστασης σε OPSCC και κύπελλο. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι ο HPV θετικότητα της κυστικό υγρό που συλλέγονται από FNA θα βοηθήσει στη λήψη μια οριστική διάγνωση, ότι δηλαδή η κύστη του ενδιαφέροντος είναι κακοήθης. Η in situ υβριδοποίηση, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί στην ανίχνευση του HPV DNA σε όγκους κυττάρων παρασκευάζονται από συλλογή κυστικό υγρό, φαίνεται ανεπαρκής για το σκοπό αυτό λόγω της χαμηλής κυτταροβρίθειας. PCR, η οποία είναι ανώτερη από την υβριδοποίηση in situ σε ευαισθησία, είναι πιθανό να εξυπηρετούν αποτελεσματικότερα για την ανίχνευση του HPV DNA σε συλλογή κυστικό υγρό. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε για πρώτη φορά η δυνατότητα ανίχνευσης του HPV DNA χρησιμοποιώντας ένθετη PCR στο υγρό συλλογές αναρροφάται από κυστική μεταστάσεις κόμβο. Συλλογικά, έχουμε δείξει ότι ακτινογραφικά αναγνωρίσιμες κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες είναι πιθανότατα HPV-θετικά, και ότι η PCR επιτρέπει την ανίχνευση του HPV DNA σε συλλογή υγρού χρησιμοποιώντας FNA. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι ένα πλευρικό του τραχήλου της μήτρας κύστη του οποίου η FNA υγρού είναι θετικοί στον HPV είναι η κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες, αλλά δεν είναι μια βραγχιακό σχιστία κύστη.

Σε αντίθεση με ενισχυμένη αξονική τομογραφία, το 6% των θετικούς λεμφαδένες OPSCC και 11% του κόμβου-θετική CUP έδειξε κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες. Αυτή η επικράτηση της ακτινογραφικά αναγνωρίσιμων κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες σε OPSCC και CUP είναι σχετικά χαμηλό, σε σύγκριση με εκείνη των ιστολογικά προσδιορίζονται κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες. Όσο 56 και 73% των θετικούς λεμφαδένες καρκίνο του αμυγδαλών Palatine και τη βάση της γλώσσας, αντίστοιχα, έχουν αναφερθεί για τον σχηματισμό ιστολογικά αναγνωρίσιμα κυστική κόμβος μετάσταση [12]. Η διαφορά αυτή αντανακλά πιθανότατα την περιορισμένη ικανότητα της αντίθεσης με ενισχυμένη αξονική τομογραφία για να απεικονίσει μια κυστική βλάβη. Είναι δύσκολο να διαφοροποιήσει ένα κυστική βλάβη από μια νεκρωτική αλλοίωση, ιδίως όταν η βλάβη του ενδιαφέροντος είναι μικρή. Επιπλέον, ακόμη και όταν ένας μεγάλος μετάσταση στους λεμφαδένες εμφανίζεται νεκρωτικές επί αυξημένης αντίθεσης CT απεικόνισης, FNA αποδίδει μερικές φορές μια συλλογή υγρού, που δείχνει ότι ο κόμβος ακτινογραφικά φαίνεται να είναι νεκρωτικές αλλά ιστολογικά φαίνεται να είναι η κυστική.

Εν κατακλείδι, έχουμε καθιερώσει ότι η κατάσταση HPV του όγκου παραμένει αμετάβλητο μετά τη μετάσταση. Σε HPV-θετικά CUP, η απόκρυφη πρωτογενούς όγκου πιθανότατα εντοπίζεται στο στοματοφάρυγγα, ιδιαίτερα είτε στην αμυγδαλή Palatine ή στη βάση της γλώσσας. HPV-θετικά OPSCC και CUP τείνουν να σχηματίσουν κυστική μετάσταση στους λεμφαδένες. PCR ανάλυση του υγρού FNA επιτρέπει χειρουργική ανίχνευση του HPV DNA, το οποίο μπορεί να διευκολύνει τη διαφορική διάγνωση της κυστικής μετάσταση στους λεμφαδένες και το βραχιόνιο σχισμή κύστη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. .

Χαρακτηριστικά του καρκίνου του αγνώστου πρωτοπαθούς στην αναδρομική ρύθμιση

doi: 10.1371 /journal.pone.0095364.s001

(xlsx)

Πίνακας S2.

Χαρακτηριστικά του Καρκίνου του Αγνώστου Πρωτοβάθμιας σε Υποψήφιοι Περιβάλλον

doi:. 10.1371 /journal.pone.0095364.s002

(XLSX)