Αφηρημένο

Ιστορικό

Η μετάσταση είναι μια διαδικασία κατά την οποία τα καρκινικά κύτταρα να μάθουν να σχηματίσουν δορυφορική όγκων σε απομακρυσμένα όργανα και αντιπροσωπεύει την αρχή αιτία θανάτου των ασθενών με συμπαγείς όγκους. NSCLC είναι η πιο θανατηφόρος καρκίνος του ανθρώπου λόγω της υψηλής ρυθμό των μεταστάσεων.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Η έλλειψη ενός κατάλληλου ζωικού μοντέλου έχει μέχρι στιγμής παρεμποδίζεται ανάλυση μεταστατική εξέλιξη. Εξετάσαμε c-MYC για την ικανότητά της να προκαλεί μετάσταση σε ένα C-RAF με γνώμονα μοντέλο ποντικού για καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου. c-myc και μόνο που προκαλείται ειλικρινή ανάπτυξη του όγκου μόνο μετά από μακρά καθυστέρηση οπότε δευτεροβάθμιας μεταλλάξεις στο K-Ras ή LKB1 εντοπίστηκαν θυμίζει ανθρώπινο NSCLC. Συνδυασμός με C-RAF οδήγησε στην άμεση επιτάχυνση της ανάπτυξης του όγκου, τη μετατροπή σε θηλώδης επιθηλιακά κύτταρα και επαγωγή διακόπτης αγγειογενετική. Επιπλέον, η προσθήκη του c-myc ήταν αρκετή για να επάγει macrometastasis στο ήπαρ και τους λεμφαδένες με μικρή λανθάνουσα κατάσταση που συνδέεται με τα γεγονότα διακόπτη γενεαλογία. Έτσι έχουμε δημιουργήσει την πρώτη υπό όρους μοντέλο για μετάσταση του NSCLC και εντόπισε ένα γονίδιο, c-myc που είναι σε θέση να ενορχηστρώσει όλα τα βήματα αυτής της διαδικασίας.

Συμπεράσματα /Σημασία

Οι πιθανοί δείκτες για την ανίχνευση της μετάστασης εντοπίστηκαν και επικυρώθηκαν για τη διάγνωση της ανθρώπινης βιοψίες. Αυτοί οι δείκτες μπορούν να αντιπροσωπεύουν στόχους για τη μελλοντική θεραπευτική παρέμβαση που περιλαμβάνουν γονίδια όπως Gata4 που εκφράζονται αποκλειστικά κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των πνευμόνων

Παράθεση:. Rapp UR, Korn C, Ceteci F, Karreman C, Luetkenhaus Κ, Serafin V, et al. (2009) Myc Είναι μια μετάσταση Gene για μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 4 (6): e6029. doi: 10.1371 /journal.pone.0006029

Επιμέλεια: Syed A. Αζίζ, Health Canada, Καναδάς

Ελήφθη: 29 Απριλίου, 2009? Αποδεκτές: 25 του Μάη 2009? Δημοσιεύθηκε: 24 Ιούνη του 2009

Copyright: © 2009 Rapp et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο υποστηρίχθηκε από την Deutsche Krebshilfe – Ίδρυμα Mildred Scheel (επιχορήγηση 106.253) και από τις DFG (επιχορηγήσεις TR17). Emanuele Zanucco υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση της Πρωτοβουλία Αριστείας γερμανικά στο Graduate School of Life Sciences, Πανεπιστήμιο του Würzburg. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η μετάσταση είναι μια σύνθετη διαδικασία πολλών σταδίων με την οποία τα κύτταρα στον πρωτογενή όγκο γίνει σε θέση να εισέλθουν και να αφήσει το αγγειακό σύστημα, εγκαθίστανται σε απομακρυσμένες περιοχές και τελικά να αυξηθεί σε μακροσκοπική δευτερογενείς όγκους [1]. Είναι γενικά πιστεύεται ότι μεταστατικό μετατροπής είναι μια διαδικασία μετάλλαξης οδηγείται. Ένας αριθμός γονιδίων και γονιδιακών προϊόντων έχουν ταυτοποιηθεί ότι θετικά ή αρνητικά να επηρεάσουν την πιθανότητα των καθιερωμένων κυτταρικών γραμμών όγκου ανθρώπου σε μετάσταση [2], [3], [4]. γονιδιακά προϊόντα περιλαμβάνουν υποδοχείς αυξητικού παράγοντα και τα στοιχεία των ενδοκυτταρικών καταρρακτών μεταγωγής σήματος τους. Ρυθμιστές κύτταρο πολικότητας αντιπροσωπεύουν μία δεύτερη κατηγορία γονιδίων που μπορεί να προωθήσει την μετάσταση [5], [6]. Με τη χρήση μιας καρκινικής κυτταρικής γραμμής πνεύμονα ποντικού, καρκίνωμα Lewis πνεύμονα (LLC), μια τρίτη κατηγορία των ρυθμιστικών αρχών μετάσταση έχει περιγραφεί προσφάτως ότι τόνισε τη σημασία της φλεγμονής ως κινητήρια δύναμη [7]. Επιπλέον, τα υποψήφια μετάσταση επάγουν ή -suppressing γονίδια περιλαμβάνουν επίσης γονίδια που κωδικοποιούν micro RNAs που ρυθμίζουν σύνολα γονιδίων που σχετίζονται με τον πολλαπλασιασμό, εισβολή ή μετανάστευση [8], [9].

Ενώ εργασία με κυτταρικές σειρές ανθρώπινων όγκων σε ποντίκια έχει διαφωτιστική, η έλλειψη γνώσης σχετικά με ρεπερτόριο τους των γονιδίων του καρκίνου, καθώς και την αδυναμία να μελετηθεί η κινητική της αυθόρμητης εξέλιξης του όγκου σε αυτά τα μοντέλα περιορίζουν τη χρησιμότητά τους. Επομένως, έχουμε δημιουργήσει ένα μοντέλο ποντικού για καρκίνο του πνεύμονα ανθρώπινου μη-μικρού κυττάρου (NSCLC), στην οποία προ-κακοήθη αδένωμα επάγεται από ένα

RAF

διαγονίδιο εκφράζεται ειδικά στον τύπο πνεύμονα κυψελιδικά II επιθηλιακά κύτταρα [10]. NSCLC είναι η πιο συχνή ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα και η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στον άνθρωπο. Δημιουργία ένωσης ποντίκια που φέρουν επιπρόσθετα

RAF

άλλα διαγονίδια που κωδικοποιούν πρωτεΐνες διαμόρφωσης οδών σηματοδότησης μεταβάλλονται συχνά σε ανθρώπινο NSCLC μας επέτρεψε να διαλευκάνουν δύο βασικά στάδια της διαδικασίας της μετάστασης, επαγωγή του αγγειογόνου διακόπτη και εξέλιξης σε μικρομεταστάσεων που συνδέονται με τον επαναπρογραμματισμό του εντερικού γονιδίων επιλογέα [11]. β-κατενίνης ταυτοποιήθηκε ως κρίσιμη επαγωγέα διακόπτη για τα δύο στάδια και προωθούνται επίσης επεμβατική ανάπτυξη [11].

Καθώς το 50% των ανθρώπινων NSCLC φέρουν μεταλλάξεις στα γονίδια που κωδικοποιούν ενεργοποιητές της μιτογόνο καταρράκτη (RAS-RAF- ΜΕΚ-ΕΚΚ) [12] και αυτό καταρράκτη είναι γνωστό ότι προκαλεί ένα γονίδιο-στόχο των β-κατενίνης, c-MYC [13], αποφασίσαμε να εξετάσουμε άμεσα την ικανότητα του c-myc για την προώθηση της εξέλιξης του όγκου σε RAF γνώμονα ποντικού μας μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα. Επιπλέον MYC ήταν υποψήφιος επειδή ήταν γνωστό ότι επηρεάζουν τον επαναπρογραμματισμό σε όγκους με βάση προηγούμενα ευρήματα μας RAF συνεργασία /MYC στο αιμοποιητικό σύστημα του ποντικού [14], [15]. Στους ανθρώπους, η ενίσχυση και αναδιατάξεις των γονιδίων Myc βρέθηκαν σε ένα κλάσμα του NSCLC [16]. Αρκετές ομάδες έχουν αρχίσει να αξιολογούν c-MYC σε μοντέλα ποντικών με NSCLC. Η ενδογενής c-MYC εμπλέκεται σε μη μεταστατικό K-Ras-επαγόμενη NSCLC όπως δείχθηκε με τη χρήση ενός κυρίαρχο αρνητικό μετάλλαγμα C-MYC [17]. Διεγέρσιμη έκφραση ή λειτουργία των διαγονιδιακών c-MYC καταδειχθεί συνεργασία με μεταλλαγμένο K-Ras στην πρόοδο του όγκου σε διάφορους βαθμούς [18], [19], αλλά ούτε μοντέλο έδωσε αφορμή για μετάσταση. Εδώ μπορούμε να δείξουμε ότι συστατική ή επαγώγιμη έκφραση του c-myc επιπροσθέτως C-RAF σε κύτταρα τύπου II είναι επαρκής για να επάγει ταχέως μετάσταση στο συκώτι και τους λεμφαδένες. Συνδυάζοντας c-myc και C-RAF διαγονιδίων προκάλεσε την εμφάνιση ενός φαινοτυπική μετάβαση από κυβοειδές σε κυψελιδικά επιθηλιακά κύτταρα θηλώδη /στήλες (APECs), που είναι τα πιο ταχέως αναπτυσσόμενα κύτταρα του όγκου και επίσης κυριαρχούν σε μετάσταση στο ήπαρ. Επιπλέον C-MYC επάγει την παραγωγή του VEGF από τα καρκινικά κύτταρα που οδηγούν στην αγγείωση του όγκου με ασυνήθιστο σκάφη που είναι μωσαϊκά που περιέχουν PECAM-1 θετική και PGP 9.5 θετικά ενδοθηλιακά κύτταρα. PGP 9.5 ήταν προηγουμένως γνωστός ως ένας δείκτης των ανώριμων νευροενδοκρινών κυττάρων [20]. Μεταστατικό μετατροπή από c-myc μπορεί να ανακατασκευαστεί σε καλλιέργεια κυττάρων με τη χρήση μη-μεταστατικά κύτταρα Α-549 NSCLC και τη μόλυνση με MYC μεταγωγής ρετροϊού.

Αποτελέσματα

c-myc συνεργάζεται με C- RAF στην πρόκληση που σχετίζονται με τον καρκίνο θάνατο

Για να ελέγξετε αν C-RAF και c-myc συνεργάζονται στο μετασχηματισμό του πνεύμονα τύπου επιθηλιακά κύτταρα II in vivo, ποντίκια SPC-C-RAF BXB διασταυρώθηκαν με SPC-c-myc διαγονιδιακών ποντίκια. Παρατήρηση για περίοδο ≥2 ετών έδειξε επιταχυνόμενη θανάτου στην ένωση (SPC-C-RAF BXB /SPC-c-MYC) ποντικούς (Σχήμα 1Α), αν και ο βαθμός της επιτάχυνσης ήταν μικρότερη από δει προηγουμένως στο αιμοποιητικό σύστημα με MYC /RAF ρετροϊούς [21]. Παρ ‘όλα αυτά, ένωση ποντίκια είχαν ένα μεσαίο λανθάνουσα κατάσταση που διέφερε σημαντικά από την ενιαία SPC-c-myc διαγονιδιακών ποντικών με ανάλυση log-rank. Η ιστολογική εξέταση σε διαφορετικά χρονικά σημεία έδειξε ότι ενιαίας διαγονιδιακά ποντίκια διέφεραν σε όγκο επιβίωση ελεύθερη. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η SPC-C-RAF BXB ή ένωση ποντίκια ήταν ομοιόμορφα όγκων θετικά σε ηλικία δύο εβδομάδων, SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν όγκους αργά και με ατελή διεισδυτικότητα που δείχνει ότι c-myc δεν περιορισμού της ταχύτητας για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων τύπου ΙΙ και /ή ότι τα κύτταρα που αποκρίνονται εξαλειφθεί με απόπτωση (Σχήμα 1Β).

(Α) Kaplan-Meier οικόπεδο για SPC-C-RAF BXB (n = 24), SPC-c-MYC (n = 52 ), η ένωση (n = 35) και άγριου τύπου (n = 28) ποντίκια ελέγχου της ίδιας γέννας. Log-rank ανάλυση για το ποσοστό επιβίωσης για ένωση ποντίκια vs SPC-C-RAF BXB = p & gt? 0,05? SPC-C-RAF BXB vs SPC-c-myc = p & lt? 0,0001? ένωση ποντίκια vs SPC-c-myc = p & lt? 0,0001. n: αριθμός των ζώων. (Β) την εμφάνιση όγκων σε SPC-C-RAF BXB (n = 51), SPC-c-MYC (n = 30), η ένωση ποντικών (η = 109) και ποντίκια ελέγχου της ίδιας γέννας αγρίου τύπου (n = 58). Log-rank ανάλυσης για όγκο επιβίωση ελεύθερη για SPC-C-RAF BXB vs SPC-c-myc = p & lt? 0,0001? ένωση ποντίκια vs SPC-c-myc = p & lt? 0,0001? άγριου τύπου vs SPC-c-myc = p & lt? 0,0001. n: αριθμός των ζώων. (Γ) Κινητική εξέλιξης του όγκου. Αντιπροσωπευτικές τομές όγκων του πνεύμονα χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε). Το κίτρινο κουτί και τα βέλη τονίζει κυβοειδές αδένωμα κυττάρων (ένθετο) σε ποντίκια SPC-C-RAF BXB? το κόκκινο πλαίσιο και τα βέλη δείχνουν πλειομορφικές κύτταρα (ένθετο) σε ποντίκια SPC-c-myc και τα λευκά κουτιά δείχνουν στήλες αδένωμα κυττάρων (ένθετο) στην ένωση ποντίκια. Για την αξιολόγηση της ικανότητας εισβολής στη διεπαφή όγκο στρώματος, οι εγκιβωτισμένες περιοχές του τρίτου πάνελ μεγεθύνεται στον κάτω πίνακα. Γονότυποι και τις ηλικίες των ποντικών όπως υποδεικνύεται. Απομονωμένα μικρά συμπλέγματα των καρκινικών κυττάρων γύρω από τον κύριο όγκο υποδείχθηκαν με κόκκινα βέλη. bar κλίμακας: 100 μm. (D, Ε) Η &? Ε χρώση σε τομές παραφίνης τομών πνεύμονα από την ένωση (D) και SPC-c-MYC μονά διαγονιδιακά (Ε) ποντίκια δείχνουν θηλοειδής όγκων σε βρογχιόλια. Ηλικία των ποντικών όπως υποδεικνύεται. (F) δεσμοπλαστικού εξέλιξη των όγκων του πνεύμονα από μία ένωση του ποντικιού. Ηλικία των ποντικών όπως υποδεικνύεται. μπαρ κλίμακα, 100 μm.

Η

βλάβες Προκακοήθεις στο SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια

Πριν από την έναρξη της ειλικρινούς κακοήθειας στο SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια συστάδες των πλειομορφικές κυττάρων ανιχνεύονται στους πνεύμονες που αποτελούν πιθανές πηγές για μετάσταση κύτταρα έναρξης (MICs) (Σχήμα 1 C). Περιέργως, πλειομορφικές clusters στους πνεύμονες από μακροχρόνια επιζώντες συχνά μειωμένη ή απουσιάζει πλήρως (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για να χαρακτηριστεί το δυναμικό αυτών των προκακοήθων βλαβών, η έκφραση των γονιδίων που ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό και την πνευμονική ανάπτυξη εξετάστηκε με ανοσοχρώση (Σχήμα S1). Όπως ήταν αναμενόμενο, ισχυρή πυρηνική c-myc και έκφραση του C-RAF σε χαμηλά επίπεδα ενδογενούς ανιχνεύθηκε σε αυτά τα συμπλέγματα (Σχήμα S1). Πλειομορφικές κύτταρα πολλαπλασιάζονται όπως κρίνεται από χρώση PCNA και έχουν ένα υψηλό ποσοστό της απόπτωσης η οποία είναι πιθανώς υπεύθυνη για την έλλειψη των υπερπλαστικών διαστολής (Σχήμα S1 και S2 Σχήμα), η οποία ορίζει επίσης των βλαβών αυτών εκτός από άτυπη αδενωματώδη υπερπλασία (AAH). Οι δείκτες του πνευμονοκύτταρα τύπου II διατηρείται στον θετικό εστίες c-MYC συμπεριλαμβανομένων Gata6 που κινεί TTF-1 έκφραση [22]. Σε αντίθεση Gata4 και γονιδίου στόχου βλεννίνη του δεν εκφράζονται (Σχήμα S1). Από τους καθοδικούς τελεστές της Gata6-TTF-1 καταρράκτη μόνο pro SP-C, αλλά όχι CCSP εκφράζεται σε χαμηλά επίπεδα σε σύγκριση με τα πνευμονοκύτταρα τύπου II εκτός των συστάδων καταδεικνύοντας απουσία βρογχο κυψελιδικά βλαστικά κύτταρα (BASCs) (Σχήμα S1) [ ,,,0],23]. έκφραση c-myc σε πλειομορφικές συστάδες συνδέεται με επαγωγή του πολλαπλασιασμού και της απόπτωσης (Εικόνα S1 και S2 Σχήμα). Στην πραγματικότητα χρησιμοποιώντας ένα δοξυκυκλίνη (DOX) επαγώγιμη διαγονίδιο c-myc, παρατηρήσαμε μαζική απόπτωση μετά την επαγωγή μία ημέρα και εκτεταμένη απώλεια πνευμονικού ιστού τέσσερις εβδομάδες μετά την επαγωγή (Σχήμα S3A-S3C). Παράταση της περιόδου προσαρμογής οδήγησε στο σχηματισμό της πλειομορφικούς ομίλων και απομονωμένες θηλώδη καρκινώματα του πνεύμονα (Σχήμα S3D-S3E).

επόμενο κοίταξε Aquaporin 5 έκφραση που μοιράζεται μεταξύ του τύπου Ι και τύπου II πνευμονοκύτταρα [24] και διαπίστωσε ότι είναι διατηρείται σε πλειομορφικές συμπλέγματα (Σχήμα S1). Να αποκτήσουν περαιτέρω γνώσεις σχετικά με τα χαρακτηριστικά προγονικά αυτών των κυττάρων, εξετάστηκε μια σειρά από δείκτες των αναπτυξιακών μονοπατιών. Αυτές περιλαμβάνουν HNF-3SS, SOX9 [20], και παράγοντες που εμπλέκονται στην εμφανώς βλαστικά ή προγονικά κύτταρα όπως Bmi-1 [25], β-κατενίνης και ID2 [20]. Όλα αυτά τα γονίδια βρέθηκαν να εκφράζονται (Σχήμα S1). ID2 έχει περιγραφεί ότι μεσολαβεί Myc σηματοδότηση σε συνδυασμό με μια πρωτεΐνη ρετινοβλαστώματος [26]. Καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι τα κύτταρα στην υψηλή c-myc εκφράζουν συστάδες έχουν χαρακτηριστικά αρχέγονων κυττάρων, αλλά διαφέρουν από BASCs.

Διάσωση και την επιτάχυνση της ανάπτυξης των c-myc μετατραπεί πνευμονοκύτταρα τύπου II από την C-RAF

αντίθεση με τους πνεύμονες του SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια που αναπτύσσουν μόνο προκαρκινικές βλάβες, οζίδια όγκων στους πνεύμονες της ένωσης ή αργά SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια με ταχείς ρυθμούς και συχνά περιέχονται μακροσκοπική όγκους με κυλινδρικά κύτταρα που απουσίαζαν στο SPC -C-RAF BXB με γνώμονα αδενώματα (Σχήμα 1C). Αρκετές γραμμές των αποδεικτικών στοιχείων δείχνουν ότι κυλινδρικά κύτταρα προκύπτουν από κυβοειδή κύτταρα στην ένωση ποντίκια. Πρώτον, η συχνότητα εμφάνισης όγκου σε δύο εβδομάδες έως δύο μήνες της ηλικίας είναι η ίδια για SPC-C-RAF BXB ενιαία και SPC-C-RAF BXB /SPC-c-myc ένωση ποντίκια (Εικόνα 2Α). Δεύτερον, κυλινδρικά κύτταρα προκύπτουν κυρίως μέσα κυβοειδές εστίες όγκου (Σχήμα S4A). Τέλος, κυλινδρικά κύτταρα μπορεί να ταχέως και συχνά επάγεται in νίνο με αγωγή DOX της τριπλής ένωσης διαγονιδιακά ποντίκια (SPC-C-RAF BXB /SPC-rtTA /tet-O-C-MYC) (Σχήμα S4B και S4C). Για να δοκιμαστεί η αναστρεψιμότητα του c-myc έκφραση διαγονιδίου DOX απομακρύνθηκε μία εβδομάδα μετά την επαγωγή για μια περίοδο τεσσάρων εβδομάδων (Εικόνα S4D). Η ιστολογική ανάλυση του απεικονίστηκαν όγκου πνεύμονα έδειξε επιμονή στηλοειδών κυττάρων στο κέντρο ενός όγκου που απομένει που διαφορετικά εμφανίζει ένα κυβοειδές φαινότυπο (Σχήμα S4D). Παράταση της περιόδου παρατήρησης μετά την απομάκρυνση DOX έως 10 εβδομάδες απέδειξε εξάλειψη των κυλινδρικά κύτταρα σε όγκους όλων των ποντικών που αναλύθηκαν (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σύγκριση φορτίου όγκου μεταξύ συνεχώς προκαλούμενη ποντίκια και τα ποντίκια που είχαν ληφθεί από DOX για δέκα εβδομάδες μετά από μία περίοδο επαγωγής τέσσερα εβδομάδα δεν έδειξε σημαντικές διαφορές (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι ένα «σοκ από το ογκογονίδιο απόσυρση» -Επίδραση [27] είναι υπεύθυνη για την εξαφάνιση της APECs αν και αναστρεψιμότητα του MYC που προκαλείται κυβοειδές σε στήλες φαινοτυπική αλλαγή είναι μια εναλλακτική δυνατότητα.

(Α) Tumor επίπτωση στο SPC-C-RAF BXB (μπλε τετράγωνα) και ένωση ποντίκια (κόκκινο τρίγωνο). Κάθε σύμβολο αντιπροσωπεύει έναν πνεύμονα. Οι τιμές κανονικοποιήθηκαν για το μέγεθος του πνεύμονα για να αντισταθμίσει τις διαφορές ηλικίας. Δεν υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ των μέσων. (Β) Ποσοστό pro SP-C θετικά κύτταρα που είναι θετικά PCNA. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν SD του μέσου όρου. Οι γονότυποι και οι κατηγορίες των όγκων υποδεικνύονται ως εξής: SPC-C-RAF BXB κυβοειδές (μπλε τετράγωνα), ένωση κυβοειδές (κόκκινο ανοιχτά τετράγωνα) και ένωση στήλες (κόκκινο ανοιχτοί κύκλοι). Κάθε σύμβολο αντιπροσωπεύει έναν όγκο. (Γ) Δύο εβδομάδες και δύο μηνών ενέθηκαν καθημερινά με BrDU κατά τη διάρκεια μιας εβδομάδας και εκδιώχθηκαν για μία ημέρα. Ενσωματωμένα σε παραφίνη τμήματα του πνεύμονα από το SPC-C-RAF BXB μόνο διαγονιδιακών και ένωση ποντίκια διπλή χρώση για BrDU (πράσινο) και Ki67 (κόκκινο) για τον εντοπισμό των κυττάρων σε κύκλο. χρώση DAPI τονίζει όγκων του πνεύμονα. Κλίμακα Bar: 100 μm. (D, E) Ποσοστό BrDU και Κί67 θετικά κύτταρα σε όγκους από τους δύο γονότυπους σε διαφορετικές ηλικίες. 30 όγκους από 3 ποντικούς αναλύθηκαν ανά γονότυπο. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν SD του μέσου όρου. (F) Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε με μέτρηση περιοχή του όγκου υποθέτοντας σφαιρικό σχήμα των όγκων. Σύμβολα αντιπροσωπεύουν επιμέρους όγκους. Κάθε στήλη αντιπροσωπεύει ένα ποντίκι. Γονότυποι και οι κατηγορίες των όγκων είναι όπως περιγράφονται στο Β Όλες οι όγκοι από κάθε κατηγορία συγκρίθηκαν μεταξύ των γονότυπων. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν SD του μέσου όρου. Οι στατιστικές διαφορές μεταξύ των ομάδων, όπως υποδεικνύεται. ns: Όχι σημαντική

Η

θηλώδες όγκοι αναπτύσσονται ταχύτερα από ό, τι κυβοειδές όγκων και των δύο γονότυπων. Με συνέπεια το κλάσμα της PCNA θετικών, pro SP-C κύτταρα που εκφράζουν ήταν υψηλότερη σε θηλώδεις όγκους (Σχήμα 2Β). Παρόμοια δεδομένα ελήφθησαν με BrDU και επισήμανση Κί67 (Σχήμα 2C-2Ε). Όπως αναμένεται από τα δεδομένα πολλαπλασιασμού, οι όγκοι του όγκου αυξήθηκε ταχύτατα σε θηλώδεις όγκους της ένωσης ποντικών (Σχήμα 2F). Για τον περαιτέρω χαρακτηρισμό κιονοειδή κύτταρα που είναι τα κύρια χαρακτηριστικά των προηγμένων αδενοκαρκινώματος, τους πληκτρολογήσει για γράμμωσης και προγονικών κυττάρων δεικτών, όπως στην περίπτωση των προ-κακοήθεις αλλοιώσεις σε SPC-c-MYC ενιαίο διαγονιδιακά ποντίκια. Παρόμοια με πλειομορφικές clusters, κυλινδρικά κύτταρα στις αρχές εστίες όγκου από την ένωση ποντίκια που εκφράζονται δείκτες προγονικών κυττάρων (Σχήμα S5A). Μια σημαντική διαφορά όμως ήταν το υψηλό επίπεδο έκφρασης C-RAF από το διαγονίδιο το οποίο μεσολαβεί διάσωση των κρυπτικών μεταμόρφωσης c-MYC από απόπτωση (Σχήμα S2A και S2B) που οδηγεί σε επέκταση της πρόωρης εστιών του όγκου. Σε αντίθεση, πλειομορφικές συστάδες σε σύνθετες ποντικούς ήταν παρόμοια με εκείνα στους πνεύμονες του SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακών ποντικών από την άποψη του ρυθμού απόπτωσης (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Έκφραση των δεικτών προγονικών κυττάρων σε εστίες όγκου της ένωσης ποντίκια επίσης διαφέρουν στην έκφραση id2 στα στάδια τέλη του όγκου όταν θετικά κύτταρα ήταν πολύ σπάνια (Σχήμα S5B). Αυτά τα δεδομένα συμφωνούν με αναφορές μιας συνάρτησης ογκοκατασταλτικών του ID2 στο εντερικό επιθήλιο όπου οδηγεί διαφοροποίηση [28]. Μία τρίτη διαφορά σχετίζεται με την ομοιογένεια της έκφρασης του διαγονιδίου. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η c-myc έκφραση ήταν ομοιόμορφες σε όλες τις πλειομορφικές συστάδες, C-RAF και c-myc έκφραση του διαγονιδίου σε στήλες εστίες όγκου ήταν ετερογενής και μειώθηκε σε όψιμα στάδια (Σχήμα S5B) υποδηλώνει διακύμανση της γονιδιακής έκφρασης [29]. Τέλος, όπως στην περίπτωση της πλειομορφικά συστάδες και στα αδενώματα SPC-C-RAF BXB [30], BASCs δεν είχαν ανιχνευθεί σε πρώιμη ή όψιμη στάδια ένωση όγκους (Σχήμα S5A και S5B).

c-MYC προάγει την εξέλιξη του όγκου ταυτόχρονη με την αγγειογένεση εν απουσία των επιθηλιακών μετάβασης μεσεγχυματικών (ΕΜΤ)

επιτάχυνση ένωση ποντίκια όγκου ήταν εμφανής ιστολογικά σε όλες τις ηλικίες που αναλύθηκαν με συχνές μη επεμβατική μακροσκοπική όγκων του πνεύμονα τα οποία ήταν απούσα σε SPC-C-RAF BXB μονά διαγονιδιακά ποντίκια (Εικόνα 1C κάτω πάνελ). Μακροσκοπική όγκων του πνεύμονα ήταν γενικά του θηλώδους τύπου και ταξινομούνται ως αδενοκαρκίνωμα. Σε σπάνιες περιπτώσεις (2 σε 50 περιπτώσεις για κάθε γονότυπο) βρήκαμε θηλώδη καρκινώματα φράζοντας βρόγχους και παραδείγματα desmoplasia στις σύνθετες και SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια, τα πρόσθετα χαρακτηριστικά που θυμίζουν την ανθρώπινη NSCLC παθολογίας (Σχήμα 1D-1F).

c-MYC έχει αναφερθεί ότι επάγει την αγγειογένεση [31]. Σημαντικά αυξημένα επίπεδα στο αίμα και των λεμφικών αγγείων ανιχνεύθηκαν σε όγκους του πνεύμονα της ένωσης και SPC-c-MYC μονά διαγονιδιακά ποντίκια (Σχήματα S6a-C). Ο μηχανισμός της επαγωγής διακόπτη αγγειογόνων με c-myc δεν συνεπάγεται παρέμβαση στην έκφραση Ε-καδερίνης σε αντίθεση με προηγούμενα ευρήματα μας τονίζοντας SS-κατενίνης [11], όπως καμία πυρηνική SS-κατενίνη ανιχνεύθηκε (Σχήμα S5c). Επιπλέον μαστοκύτταρα που απαιτούνται για Myc-επαγόμενη αγγειογένεση σε παγκρεατικά νησί όγκους ([17] είναι απόντα από αδενοκαρκινώματα πνεύμονα σε ποντικούς αμφοτέρων των γονότυπων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αντ ‘αυτού η έκφραση του VEGF ανιχνεύθηκε σε κύτταρα όγκου των όγκων του πνεύμονα από SPC-c Myc έχει ενιαία διαγονιδιακά ποντίκια ή ένωση (Σχήμα S7A). Myc είναι επίσης σε θέση να επάγουν VEGF σε ανθρώπινα κύτταρα σε καλλιέργεια Α-549 και το ποντίκι MLE-15 NSCLC (Σχήμα S7B). Τα συνδυασμένα στοιχεία υποδηλώνουν ότι Myc επάγει την αγγειογένεση με αυξητική ρύθμιση του VEGF στα κύτταρα NSCLC.

μια εντυπωσιακή παρατήρηση έγινε όταν ερευνήσαμε το δυναμικό χαρακτηριστικά νευροενδοκρινείς των NSCLC μας με χρώση με PGP 9.5. PGP 9.5 είναι ένα ανώριμο δείκτης νευροενδοκρινείς και ένα δείκτη υποψήφιος όγκου για ανθρώπινη NSCLC, όπου είναι που εκφράζεται σε καρκινικά κύτταρα από & gt?.. το 70% των όγκων ΙΙΙΑ σταδίου II και [32] στο μοντέλο NSCLC μας, το μεγαλύτερο μέρος των καρκινικών κυττάρων είναι αρνητικά για το ένζυμο αυτό αποουβικιτινίωσης σε όλα τα στάδια ανεξάρτητα από γονότυπους (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) Αντ ‘αυτού, η χρώση φαίνεται να σηματοδοτήσει σκάφη στις πρωτογενείς όγκους του SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακών και ένωση ποντίκια (σύγκριση Σχήμα S6D). Στην πραγματικότητα συν-χρώση τομών όγκου με PGP 9.5 και PECAM-1 έδειξε colocalisation αυτών των δεικτών στα ίδια δοχεία (Σχήμα S6E). Προκειμένου να εξετάσει κατά πόσον PGP 9.5 είναι ένας δείκτης της παθολογικής αγγειογένεσης, θα βάφονται επίσης τα τμήματα του πνεύμονα άγριου τύπου, όπου χρώση βρέθηκε αποκλειστικά σε μεγάλα σκάφη, αλλά όχι σε τριχοειδή (Σχήμα S6E), σύμφωνα με μια πρόσφατη δημοσίευση που δείχνει την έκφραση του PGP 9.5 σε ανθρώπινο καρωτίδες αρτηρίες [33]. Τα ευρήματά μας είναι η πρώτη έκθεση σχετικά με εμφάνιση αυτών των ενδοθηλιακών κυττάρων στο αγγειακό σύστημα του όγκου.

Η αγγειογενετική διακόπτης ήταν προφανώς δεν συνοδεύονται από τυπική επιθηλιακά μετάβαση μεσεγχυματικά (EMT) στα άκρα του όγκου, καθώς δεν ανιχνεύουν κύτταρα διπλά θετικά για pro SP-C και βιμεντίνης ή προ SP-C και Ν-καδερίνης (Εικόνα S8B). Επιπλέον διασταυρώσεις E-cadherin των κυλινδρικά κύτταρα σε καρκινικά παρέμεινε ανέπαφη (Εικόνα S8A). Συνέπεια δεν παρατηρήσαμε επεμβατική μέτωπα σε θηλώδη καρκινώματα (Σχήμα 1C). Αντί απομονωμένες ομάδες των καρκινικών κυττάρων βρέθηκαν σε γειτονία των πρωτογενών όγκων που θυμίζει συλλογικής μετανάστευση [34] (Εικόνα 1 C).

Long όγκων λανθάνοντα χρόνο σε ποντίκια SPC-c-MYC είναι θετικές για

K -ras

ή

μεταλλάξεις LKB1

η

καθώς η κινητική της ανάπτυξης του όγκου καθυστέρησε σε ποντίκια SPC-c-myc σε σύγκριση με SPC-C-RAF BXB ή ένωση ποντίκια και τον αριθμό καθυστερημένης όγκων ανά πνεύμονα ήταν χαμηλότερη (Σχήμα 3Α) ψάξαμε για δευτερογενή μεταλλάξεις. Προς το σκοπό αυτό, ένα πάνελ γονιδίων (Κείμενο S1) που συχνά μεταβάλλονται σε ανθρώπινο NSCLC εξετάστηκε σε μια τυχαία συλλογή όγκους από δέκα ποντίκια που οδήγησε στον προσδιορισμό των συχνών μεταλλάξεων σημείου σε

K-Ras

και

LKB1

γονίδια (Εικόνα 3Β). Οι περισσότεροι

K-Ras μεταλλάξεις

ήταν στο εξόνιο 1 και ήταν ετερόζυγα. Υπήρξε μία περίπτωση ενός εξωνίου 2 μετάλλαξη (Σχήμα 5Β) και σε τρεις περιπτώσεις δεν βρέθηκαν μεταλλάξεις σε

K-Ras

ή οποιαδήποτε άλλα γονίδια στον πίνακα εκτός

LKB1

(Σχήμα 3Β) . Στην πραγματικότητα μεταλλάξεις στο εξόνιο 6 του παρόντος καταστολής του όγκου που είναι μεταλλαγμένο σε 34% των ανθρώπινων NSCLC [35] βρέθηκαν σε κάθε μια από τρεις

K-Ras

αρνητικός SPC-c-MYC όγκων του πνεύμονα (Σχήμα 3Β). Μόνο σε μία περίπτωση ήταν

LKB1

– και

K-Ras

– μεταλλάξεις βρέθηκαν να συνυπάρχουν. Στο παράδειγμα αυτό, παρατηρήθηκε μια διαφορετική μετάλλαξη του

LKB1

η οποία ήταν παρούσα στα δύο αλληλόμορφα (Σχήμα 3Β). Σε όλες τις άλλες περιπτώσεις,

K-Ras

μεταλλάξεις ή παρουσία ογκογόνο C-RAF ήταν αμοιβαία αποκλειόμενα με το

LKB1

μετάλλαξη (Εικόνα 3Β). Αυτό το εύρημα μπορεί να υποδηλώνει ότι η K-Ras /C-RAF σηματοδότηση σε κύτταρα τύπου II μπορεί κανονικά να οδηγήσει σε απενεργοποίηση αυτής της καταστολής του όγκου. Παρόμοια σχέση βρέθηκε μεταξύ

K-Ras

μεταλλάξεις και η παρουσία του ογκογόνο C-RAF, συνεπής με την αμοιβαία αποκλειστική μοτίβο

RAF

και

RAS

μεταλλάξεις σε ανθρώπινους όγκους [36] [37] (Εικόνα 3Β).

(Α) Tumor συχνότητα εμφάνισης ανά πνεύμονα σε ποντικούς SPC-c-MYC ως συνάρτηση της ηλικίας. Ο αριθμός των ζώων είναι 17 για 2 μήνες, 10 για 6 έως 10,5 μήνες και 15 για 13-17 μήνες. Κάθε σύμβολο αντιπροσωπεύει ένα άτομο πνεύμονα. Σημειώστε ότι η τεταγμένη είναι εστίες /cm

2, σε αντίθεση με mm

2 στο Σχήμα 2. (Β) Η εμφάνιση του

K-Ras

και

LKB1

μεταλλάξεις στην πρωτοβάθμια πνεύμονα όγκων. 10 επιλέγεται τυχαία όγκου θετικά ποντικοί εξετάσθηκαν για ένα πάνελ υποψήφιων γονιδίων (

EGFR

,

K-Ras

,

B-RAF

,

C-RAF

,

p53

,

PI3K

,

PTEN

,

Akt

και

LKB1

). Που παρουσιάζονται εδώ είναι τα στοιχεία για

K-Ras

και

LKB1

, τα μόνα γονίδια του πίνακα στο οποίο βρέθηκαν μεταλλάξεις. Ζυγωτίας είναι όπως υποδεικνύεται. Τα μεμονωμένα ποντίκια που απαριθμούνται με τους αριθμούς ταυτότητας για να διευκολυνθεί η σύγκριση μεταξύ των πινάκων.

Η

Myc είναι αρκετή για να προκαλέσει μετάσταση

Όπως έχουμε δει στο παρελθόν εξέλιξη σε μικρομεταστάσεων σε ποντίκια SPC-C-RAF BXB στην οποία προκάλεσε την αγγειογένεση εκτομή του Ε-καδερίνης, εξετάσαμε τα ποντίκια για μετάσταση σε διαφορετικές ηλικίες. Παραδόξως πολλαπλές μακροσκοπική liver- (Σχήμα 4Α και 4Β) και παρατηρήθηκαν λέμφου λεμφαδένες μεταστάσεις (Εικόνα 4C), ήδη δέκα μηνών στην ένωση (SPC-C-RAF BXB /SPC-c-myc) και SPC-C- MYC μόνο trasngenic ζώα. ποντίκια ανέπτυξαν Ενωση μετάσταση σημαντικά νωρίτερα, σε μεγαλύτερη συχνότητα από ό, τι SPC-c-MYC μονά διαγονιδιακά ποντίκια (Σχήμα 5Α). Ενώ στο παρατηρήθηκαν λεμφαδένες μακρο-και μικρο μετάσταση, μόνο μακρο μεταστάσεις βρέθηκαν στο ήπαρ. λεμφαδένων και μετάσταση στο ήπαρ ήταν ανεξάρτητες εκδηλώσεις, όπως ήταν μακρο- και μικρο-μετάσταση υποδεικνύοντας ότι η μετάσταση έναρξη κύτταρα (ΜΙΟ) μπορεί να διαφέρει για κάθε κατηγορία (Εικόνα 5Α). Εκτός SPC-c-MYC ενιαίο διαγονιδιακά ποντίκια, ϋΟΧ επαγώγιμη έκφραση του c-myc η οποία δίνει αφορμή για ταχέως θηλωδών όγκων του πνεύμονα στο φόντο C-RAF BXB (Σχήμα S4) εξετάστηκε για την παραγωγή της μετάστασης. Αυτοί οι ποντικοί ανέπτυξαν όγκους του πνεύμονα (Σχήμα S9A) και μετάσταση ήπατος (Σχήμα S9C και 9D) που αποτελείται από κιονοειδή κύτταρα. Συνεπής με τη συχνότητα της μετάστασης σε συστατική ποντικούς, σε μία ομάδα από 10 ποντίκια ένωσης επαγώγιμο που επάγονται 11-12 μήνες, ένα ποντίκι ανέπτυξε μακροσκοπική συκώτι metastastasis και ένα δεύτερο ζώο ήταν θετικό για τις πολύ μικρές μετάσταση σε ένα περιφερειακό λεμφαδένα (Εικόνα S9B) . Μια ομάδα των αντίστοιχης ηλικίας μάρτυρες (μη επαγόμενο) ποντίκια που ήταν 14-17 μηνών δεν έδειξε μετάσταση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρόμοια με συστατική ποντίκια, τμήματα από μετάσταση στο ήπαρ του επαγώγιμου ένωσης ποντικών (SPC-C-RAF BXB /SPC-rtTA /tet-O-C-MYC) ήταν θετικά για pro SP-C και παν-κυτοκερατίνης (Σχήμα S9E και S9F). Σε αντίθεση με συστατική ποντίκια, μετάσταση στο ήπαρ σε σύνθετες ποντίκια επαγώγιμης προκάλεσε έντονη αντίδραση στρωματικά που χωρίζει ιστού του όγκου από το φυσιολογικό ήπαρ (Σχήμα S9D). Αξίζει να σημειωθεί ότι, σε αυτό το στρώμα πλούσιο σε παραμεθόρια περιοχή απομονωμένη συστάδες των καρκινικών κυττάρων που ήταν θετικά για παν-Cytokeratin ή pro SP-C ήταν παρόντες (Σχήμα S9E και S9F) συνεπής με εισβολή από τη συλλογική της μετανάστευσης [34]. Κατά την εξέταση της κατάστασης μεταλλάξεων του K-Ras, ένα 1mutation εξόνιο βρέθηκε σε πρωτογενείς όγκους πνεύμονα και αντίστοιχη μετάσταση στο ήπαρ (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

(Α) Επιθεώρηση των ηπατικών μεταστάσεων (αριστερά) από ένα SpC- c-myc και μόνο διαγονιδιακό ποντικό. Ένα φυσιολογικό ήπαρ (δεξιά) από ένα μη-μεταστατικό SPC-C-RAF BXB μονό διαγονιδιακό ποντικό. (Β) Η &? Ε χρώση σε τομές παραφίνης τομών ήπατος από SPC-c-MYC και ένωση ποντίκια. Τα αντιπροσωπευτικά τμήματα του θηλώδους και κυστική μεταστάσεις εμφανίζονται. Οι εγκιβωτισμένες περιοχές παρουσιάζονται σε μεγαλύτερη μεγέθυνση. Ηλικίες και γονότυπους όπως υποδεικνύεται. bar κλίμακας: 100 μm. (Γ) Χρώση ήπατος και των λεμφαδένων μεταστάσεων από την ένωση ποντικούς για δείκτες όπως υποδεικνύεται. Μεταστάσεις από ποντίκια SPC-c-MYC ήταν αδιάκριτοι σε σύγκριση με την ένωση ποντίκια για ίδιο δείκτες. Κύκλο περιοχές λεμφαδένες σηματοδοτήσει μετάσταση (Μ). bar κλίμακας: 100 μm

Η

(Α) Περίληψη μοτίβο μετάστασης για SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακών και ένωση ποντίκια.. Τα ζώα που απαριθμούνται ξεχωριστά από τον αριθμό ταυτότητας και ομαδοποιούνται ανάλογα με το γονότυπο. Η διάμεση ηλικία έναρξης των μεταστάσεων μεταξύ των ομάδων είναι σημαντική (ρ = 0,03). (Β) Έλλειψη

K-Ras

μετάλλαξη σε macrometastasis της RAF /MYC και όγκους /MYC πνεύμονα RAS. N.m: δεν υπάρχει μετάσταση. μ.π. .: δεν έγινε. Δ: Διαγραφή. -:. Αρνητική

Η

Αν οξεία έκφραση του c-myc είναι επαρκής για τη μεταστατική μετατροπή στη συνέχεια εισαγωγή σε μη-μεταστατικά κύτταρα NSCLC θα πρέπει να παράγουν μεταστατικό κλώνους. Για να δοκιμαστεί αυτή η πιθανότητα χρησιμοποιήσαμε κύτταρα ανθρώπινου Α-549. Ένα υψηλό c-myc που εκφράζουν Α-549 κυττάρων κλώνος (Α-549 J5-1) (Σχήμα 6Α) εγχύθηκε υποδορίως σε ανοσοανεπαρκείς RAG1

– /- ποντίκια. Η συχνότητα εμφάνισης (Σχήμα 6Β) και το ποσοστό των τοπικών ανάπτυξης του όγκου (Σχήμα 6C) αυξήθηκε κατά MYC έκφραση σε τέτοιο βαθμό που έπρεπε να θυσιαστούν μετά από έξι εβδομάδες τα ζώα. Παρά αυτή την περιορισμένη χρονική διάρκεια του πειράματος, μετάσταση στο πνεύμονα και το ήπαρ παρατηρήθηκε σε χαμηλή συχνότητα (σχήμα 6 Α και 6Ε). Ανάλυση των τμημάτων του πνεύμονα από το Α-549 J5-1 κύτταρα εμβολιάζονται ποντίκια έδειξαν έκφραση της MYC κοτόπουλο στη μετάσταση του πνεύμονα που επιβεβαιώνουν την προέλευση των κυττάρων (Σχήμα S10). Τα συνδυασμένα δεδομένα δημιουργία c-myc ως μια ισχυρή μετάσταση επαγωγής του γονιδίου για NSCLC.

(Α) χρώση ανοσοφθορισμού των Α-549 κύτταρα μολυσμένα με κοτόπουλο v-myc έκφραση του ιού J5 δείχνει MYC (κόκκινο) έκφρασης. DAPI χαρακτηρίζει πυρήνες. bar Κλίμακα: 50 μm. (Β) Tumor συχνότητα ελέγχου και MYC εκφράζουν Α-549 κύτταρα έξι εβδομάδες μετά την υποδόρια ένεση. του αριθμού των ζώων (n) είναι όπως φαίνεται. (Γ) παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου κατά την διάρκεια των έξι εβδομάδων περιόδου. Οι όγκοι μετρήθηκαν κάθε εβδομάδα. MYC κύτταρα που εκφράζουν προκάλεσε στατιστικά μεγαλύτερους όγκους σε RAG1

– /- ποντίκια. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν SD του μέσου όρου. *: P & lt? 0,05. n = 17 ποντικοί για κάθε ομάδα. (Δ) ανάλυση των μεταστάσεων. Παραφίνη ενσωματωμένα τμήματα του πνεύμονα, λεμφαδένα και τους ιστούς του ήπατος από μεταμοσχευμένα ποντίκια υποβλήθηκαν σε διαλογή για μετάσταση χρησιμοποιώντας κυτοκερατίνη-7 (CK-7) αντίσωμα. Για να καταδειχθεί η ειδικότητα της έκφρασης CK-7 σε Α-549 κύτταρα πρωτογενείς όγκους υπέστησαν χρώση εν απουσία (αρνητικός έλεγχος) ή παρουσία (θετικός έλεγχος) της CK 7 αντισώματος. Για κάθε όργανο τουλάχιστον 3 τομές χρωματίστηκαν και προσεκτικά ελέγχονται τουλάχιστον δύο άτομα. n = 17 ποντικοί για κάθε ομάδα. bar Κλίμακα: 50 μm. (Ε) Επίπτωση της μετάστασης. LN:. Λεμφαδένων

Η

Χρήση των μεταλλάξεων σε πρωτοπαθείς όγκους του SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια για γενεαλογία εντοπισμό της μετάστασης

Η ανακάλυψη των συχνών

K-Ras

και

LKB1

μεταλλάξεις στους όγκους των πνευμόνων κυρίως των SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακά ποντίκια πρότεινε ότι θα μπορούσε να είναι σε θέση να χρησιμοποιούν τα δεδομένα μετάλλαξης για γενεαλογία εντοπισμό. Συνεπώς εξετάσαμε το DNA του ήπατος και των λεμφαδένων μεταστάσεων για τις μεταλλάξεις που υπάρχουν στα πρωτογενείς όγκους. Παραδόξως, σε περίπτωση

K-Ras μεταλλάξεις

, τέσσερις από τις πέντε περιπτώσεις του c-myc που προέρχονται μεταστάσεων όγκου που θα μπορούσε να εξεταστεί με αυτόν τον τρόπο ήταν αρνητικά για την μετάλλαξη, όπως ήταν η περίπτωση ενός μιας ένωσης ποντίκι που είχε μια

K-Ras

εξονίου 1 μετάλλαξη στον πρωτογενή όγκο και μετάσταση στους λεμφαδένες (Σχήμα 5Β). Ωστόσο, μία από τις πέντε περιπτώσεις

K-Ras

θετικών c-myc όγκου που προέρχεται μετάσταση ήταν θετικό για μετάλλαξη

K-Ras

. Η μετάλλαξη ήταν ταυτόσημο με εκείνο στον όγκο πνεύμονα. Αυτό το ποντίκι είχε πολλαπλές μεταστάσεις όργανο που περιλαμβάνονται εκτός του ήπατος, των νεφρών, του παγκρέατος και του εγκεφάλου. Επιπλέον, η μετάσταση σε διαφορετικές θέσεις από κοινού έκφραση των δεικτών του πνεύμονα. Το σχήμα δείχνει ότι S11 διάσπαρτα pro θετικά κύτταρα SP-C είναι παρόντα σε μακρινή μετάσταση στο ήπαρ, το πάγκρεας, τον εγκέφαλο και τους νεφρούς. Επιπρόσθετα στο νεφρό, Clara κύτταρο εκκριτική πρωτεΐνη (CCSP) θετικά καρκινικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν (Σχήμα S11). Σε μία περίπτωση ένα

LKB1

μεταλλαγμένου όγκου πνεύμονα που έδωσε αφορμή για μετάσταση στο ήπαρ, η μετάσταση σημείωσε αρνητικές για την μετάλλαξη. Το γεγονός ότι οι μεταλλάξεις που υπάρχουν στα πρωτογενείς όγκους των πνευμόνων είναι συνήθως απουσιάζουν σε ηπατικές μεταστάσεις τους υποδηλώνει έντονα ότι η μετάσταση είναι ένα πρώιμο συμβάν.

Παθολογικής Ανατομικής της μετάστασης από την SPC-c-myc και μόνο διαγονιδιακών και ένωση ποντίκια

Στις ιστοπαθολογική εξέταση μεταστάσεις των δύο γονότυπων ήταν αδιάκριτοι εκτός από την αφθονία τους (Σχήμα 4Α και το Σχήμα 5Α). Σε αμφότερες τις περιπτώσεις βρίσκουμε δύο τύπους μετάσταση στο ήπαρ και λεμφαδένες, θηλώδες και μικτές κυστική-θηλώδες (Σχήμα 4Β). Συνήθως δύο μορφές συνυπάρχουν στο ίδιο όργανο-στόχο (Σχήμα S12). Εάν αυτές οι δύο μορφές μπορούν να interconvert ή αν κύστεις είναι νωρίς πρόδρομες μορφές των μικτών κυστική-θηλώδες μετάσταση είναι προς το παρόν άγνωστη. bar Κλίμακα: 50 μm. bar Κλίμακα: 50 μm.