Αφηρημένο

Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι πολλές microRNAs που εμπλέκονται στην ογκογένεση και την εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου, ενώ η κλινική σημασία των microRNA-214 στο γαστρικό καρκίνο είναι ελάχιστα κατανοητή και ο ακριβής ρόλος των microRNA-214 σε γαστρικού καρκίνου παραμένει ασαφής. Στην παρούσα μελέτη, τα επίπεδα έκφρασης του microRNA-214 σε 80 γαστρικό ιστούς καρκίνωμα, 18 nontumourous γαστρικό ιστούς, και 4 είδη γαστρικού καρκίνου κυτταρικών γραμμών προσδιορίστηκαν ποσοτικά με αντίστροφη μεταγραφή ακολουθούμενη από πραγματικού χρόνου αλυσίδα ποσοτική αντίδραση πολυμεράσης (RT-qPCR), και η σχέση μεταξύ της έκφρασης microRNA-214 και cliniopathological χαρακτηριστικά, καθώς και την πρόγνωση εξερευνήθηκε. Προκειμένου να διερευνηθεί ο πιθανός ρόλος των microRNA-214 σε γαστρικό καρκινικό κύτταρο βιολογική συμπεριφορά, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς πολλαπλασιασμού κυττάρου, απόπτωση, μετανάστευση και εισβολή σε τέσσερις κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου και μια αθανατοποιημένη κυτταρική σειρά γαστρικού

in vitro

. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι microRNA-214 ήταν δραματικά προς τα κάτω σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, σε σύγκριση με nontumourous γαστρικό ιστούς. Σταδιακή μειορρύθμιση της έκφρασης microRNA-214 παρατηρήθηκε μεταξύ nontumourous γαστρικό βλεννογόνο, nonmetastasis γαστρικό καρκινικούς ιστούς, και μετάσταση γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Η έκφραση του microRNA-214 ήταν σημαντικά αντιστρόφως ανάλογη με λεμφαδένα μετάσταση και το μέγεθος του όγκου, αλλά δεν είχε καμία συσχέτιση με πρόγνωση του ασθενούς. Έκτοπη έκφραση microRNA-214 θα μπορούσε να αναστείλει τη μετανάστευση των κυττάρων και την ικανότητα εισβολής στην SGC7901 και ΜΚΝ45 γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Και knockdown του microRNA-214 διευκολυνθεί σημαντικά τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή σε ένα κύτταρο-ειδικό τρόπο ΜΚΝ28, BGC823 και τα κύτταρα GES-1. Παράγοντα διέγερσης αποικιών 1 (ΚΠΣ 1) αναγνωρίστηκε ως ένα γονίδιο-στόχο των microRNA-214. Εν περιλήψει, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι microRNA-214 είναι μια πολλά υποσχόμενη νέα βιοδείκτης για λεμφαδένα μετάστασης σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Και προσδιορίσαμε ότι η προς τα κάτω ρύθμιση των microRNA-214 μπορεί να ρυθμίζει τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετανάστευση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων με την άμεση στόχευση ΚΠΣ 1

Παράθεση:. Wang YW, Shi DB, ο Τσεν Χ, Gao C, Gao P (2014 ) κλινικοπαθολογοανατομικές σημασία των microRNA-214 στο γαστρικό καρκίνο και την επίδρασή της στο τηλέφωνο Βιολογική συμπεριφορά. PLoS ONE 9 (3): e91307. doi: 10.1371 /journal.pone.0091307

Επιμέλεια: Terence Lee, Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 25 του Απρίλη 2013? Αποδεκτές: 11η Φεβρουαρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 10 Μάρτη 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Αρ 81172351 και 81372856). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) είναι η τέταρτη πιο κοινή μορφή καρκίνου και η δεύτερη κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο σε όλο τον κόσμο [1]. Παρά τις σημαντικές μελέτες σχετικά με την ογκογένεση και την εξέλιξη του GC, η παθογένεια αυτής της σύνθετης νόσου είναι ελάχιστα κατανοητή. Έτσι, είναι ζωτικής κλινική αξία για τον εντοπισμό και το χαρακτηρισμό της ακριβής μοριακός μηχανισμός που εμπλέκεται στην ανάπτυξη και την πρόοδο του γαστρικού καρκινώματος.

Εκτός από τις συμβατικές γενετικές και επιγενετικές μεταβολές των ογκογονιδίων που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη και ογκο-κατασταλτικά γονίδια σε η καρκινογένεση του GC, μη πρωτεϊνικό-κωδικοποίηση RNAs, ειδικά microRNAs (miRNAs), έχουν αναδειχθεί ως νέος παίκτης να ρίξει φως στο μηχανισμό της ανάπτυξης GC [2]. MiRNAs είναι ενδογενείς 19-25 nt μη κωδικοποιητική RNAs που ρυθμίζουν αρνητικά την έκφραση πρωτεΐνης με την προώθηση αποικοδόμηση mRNA ή καταστολή μετάφρασης πρωτεΐνης, μέσω της αλληλεπίδρασης με το 3′-UTR του mRNAs στόχου. Ένας αυξανόμενος αριθμός των miRNAs έχουν αναφερθεί να συμμετάσχουν στην καρκινογένεση και την ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων GC [2] – [4]. Αυτά τα miRNAs συνήθως απορρυθμισμένης και λειτουργία είτε ως καταστολείς όγκων ή ογκογονίδια στην έναρξη και την πρόοδο των ανθρώπινων καρκινωμάτων. Για παράδειγμα, Tsukamoto et al. έχουν δείξει ότι miR-375 ρυθμίζεται μειωτικά σε γαστρικό καρκίνωμα και ασκεί προαποπτωτικά επίδραση της μέσω προς τα κάτω ρύθμιση ΡϋΚ1, μια κινάση που φωσφορυλιώνει Akt, και με τη σειρά, καταστέλλει την ΡΙ3Κ /Akt μονοπάτι [5]. Ενώ miR-21 έχει βρεθεί ότι προάγει πολλαπλασιασμό όγκου και εισβολή σε GC με τη ρύθμιση αρνητικά σημαντικά καταστολείς όγκου όπως ΡΤΕΝ, PDCD4, και RECK, και στη συνέχεια προσδίδουν κύτταρα GC με αυξημένη διεισδυτικότητα και την ικανότητα να αποφευχθεί anoikis [6] – [8 ]. Προηγουμένως, έχουμε βρει ότι miR-145 προς τα κάτω σε πολλαπλή ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα και κατέστειλε τον καταρράκτη εισβολή-μετάσταση σε GC με αναστολή πρωτεΐνης Ν-καντερίνης μετάφραση [9], [10].

Προς το παρόν, ο κλινική σημασία των microRNA-214 (mIR-214) στην πρόγνωση των ασθενών με GC είναι ελάχιστα κατανοητή, και ο ακριβής ρόλος του miR-214 σε GC παραμένει ασαφής. Εδώ, ερευνήσαμε τη σχέση μεταξύ miR-214 έκφρασης και cliniopathological παραμέτρους, καθώς και αξιολόγησε την επίδραση του miR-214 για τη βιολογική συμπεριφορά συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, την απόπτωση, τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων του GC.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα ιστών

δείγματα ιστών παρασκευάσθηκαν με έναν παρόμοιο τρόπο όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Εν συντομία, 80 δείγματα (από 65 άνδρες, 15 γυναίκες? 58,3 ± 17,49 και 61,5 ± 9,162 χρόνια παλιά, αντίστοιχα) των ιστών GC ελήφθησαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή σε Qi Lu Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου της Shandong από το 2004 έως το 2006. Nontumourous γαστρικό βλεννογόνο περισσότερο από 3 cm μακριά από όγκους επιλέχθηκε τυχαία από 18 από αυτούς τους ασθενείς και χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Κανένας από τους ασθενείς έλαβαν προεγχειρητική θεραπεία, όπως ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία. Δείγματα δακτυλογραφημένες ιστολογικά σύμφωνα με Lauren και τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας (ΠΟΥ) ‘s ταξινομήσεις (IARC Press, Λυών, 2000), και κατηγοριοποιούνται σύμφωνα με την UICC 2002 ΤΝΜ ταξινόμηση.

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Shandong, Shandong, Κίνα (κωδικός έγκρισης: 201101015). Έχουμε λάβει γραπτή συγκατάθεση από όλους τους συμμετέχοντες στη μελέτη μας.

καλλιέργειας κυττάρων

Τέσσερις τύποι των ανθρώπινων κυτταρικών σειρών GC ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ΜΚΝ28 και ΜΚΝ45, Manassas, VA , USA) και το Ινστιτούτο της Σαγκάης τον Καρκίνο (BGC823 και SGC7901, Σαγκάη, Κίνα). Η απαθανάτισε γαστρικού βλεννογόνου επιθηλιακά κυτταρική σειρά GES-1 ελήφθη από το Πεκίνο ComWin Biotech Co., Ltd (Πεκίνο, Κίνα). Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε RPMI 1640 μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) σε υγροποιημένο επωαστή κυττάρου με ατμόσφαιρα 5% CO

2 στους 37 ° C.

miRNA εκχύλιση

Χρησιμοποιώντας ένα miRNeasy FFPE Kit (Bioteke, Πεκίνο, Κίνα), απομονώσαμε miRNA από ιστούς παραφίνης σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA από κυτταρικές γραμμές εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Takara, Dalian, Κίνα) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η ποιότητα και η ποσότητα των δειγμάτων RNA αξιολογήθηκαν με πρότυπες μεθόδους φασματοφωτομετρικής (BioPhotometer συν? Eppendorf, Hamburg, Germany) και αραιώθηκε έως 2 ng /μl για ανάλυση RT-qPCR

αντίστροφη μεταγραφή ακολουθούμενη από πραγματικό χρόνο. ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-qPCR)

επίπεδα έκφρασης των miRNAs ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SYBR Primescript miRNA RT PCR Kit (Takara, Dalian, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή με Bio-Rad CFX ™ 96 C1000 Ρεάλ -Ώρα σύστημα. Εν συντομία, τα δείγματα RNA μετατράπηκε σε cDNA από το ένα-βήμα Primescript miRNAcDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, Κίνα), που ακολουθείται από πραγματικό χρόνο qPCR και ομαλοποιήθηκε χρησιμοποιώντας U6 μικρού πυρηνικού RNA (RNU6B) από το 2

-ΔCT μέθοδος. Εκκινητές για miR-214 και U6 ήταν από GeneCopoeia (HmiRQP0320, HmiRQP9001). Ολες οι αντιδράσεις έτρεξαν εις διπλούν.

διαμόλυνσης κυττάρων

Εκθετικά αναπτυσσόμενα κύτταρα (1.5 × 10

5) σπάρθηκαν σε πλάκες 12 φρεατίων 12 ώρες πριν την επιμόλυνση και επιμολύνθηκαν με 30 ηΜ πρόδρομος miR-214 (mIR-214), αντι miR-214-αναστολέα (mIR-214 αναστολέα), ή ο αρνητικός μάρτυρας (Ambion, Austin, ΤΧ, USA) χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο διαμόλυνσης X-tremeGENE (Roche Applied Science, Indianapolis, ΙΝ, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης παρακολουθήθηκε με RT-qPCR στις 24, 48, και 72 ώρες μετά την επιμόλυνση.

Για σταθερή έκφραση του miR-214, SGC7901 και ΜΚΝ45 κύτταρα επιμολύνθηκαν με φακοϊό miR-214 που εκφράζουν τον φορέα LV3-HSA -miR-214 ή έναν αρνητικό έλεγχο LV3NC, η οποία έχει GFP ως πρωτεΐνη δείκτη, σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (GenePharma, Σαγκάη, Κίνα). Τρεις ημέρες μετά την επιμόλυνση, η έκφραση της GFP πρωτείνης παρακολουθήθηκε κάτω από μικροσκόπιο φθορισμού. Τα επιμολυσμένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε διαλογή με πουρομυκίνη (1.5 μg /mL) για αυτούς που εκφράζουν σταθερά miR-214.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δοκιμασία

Μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν, απαριθμήθηκαν, και σπάρθηκαν σε 96 -Καλά πλάκες σε πυκνότητα 5 χ 10

3 κύτταρα /φρεάτιο. Και στη συνέχεια πολλαπλασιασμό των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό πολλαπλασιασμού ΕΠΑ όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [11]. Εν συντομία, 24 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν εις τριπλούν σε 5 × 10

3 κύτταρα ανά φρεάτιο σε πλάκες 96-φρεατίων την ημέρα πριν από την επώαση edu (Ribobio, Guangzhou, Κίνα). Μετά την επισήμανση edu, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 μι 1 × Απόλλωνα κοκτέιλ αντίδρασης, χρωματίστηκαν με 100 μL Hoechst 33342 (5 μg /mL) και οπτικοποιήθηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Olympus, Japan). Το ποσοστό των θετικών κυττάρων edu ορίστηκε ως το ποσοστό πολλαπλασιασμού. Τα δεδομένα ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα και παρουσιάζονται ως μέσοι όροι ± τυπική απόκλιση (SD).

κυτταρικής απόπτωσης δοκιμασία

Τρεις ημέρες μετά την επιμόλυνση του miR-214 πρόδρομος ή αναστολέα, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν με τη χρήση της Annexin V-FITC /ΡΙ Apoptosis Detection Kit (BestBio, Σαγκάη, Κίνα) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Εν συντομία, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν, συλλέγεται και στη συνέχεια χρωματίζονται με τη χρήση της Annexin V-FITC /ΡΙ Apoptosis Detection Kit σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά την επώαση με Annexin V-FITC και ΡΙ, τα αποπτωτικά κύτταρα αναλύθηκαν αμέσως με κυτταρομετρία ροής. Πρόωρη αποπτωτικά κύτταρα ορίστηκαν ως ο πληθυσμός που ήταν ΡΙ αρνητικός και αννεξίνης V-FITC θετικά, ενώ αργά αποπτωτικά κύτταρα ήσαν ΡΙ θετικών και αννεξίνης V-FITC θετικές. Το συνολικό ποσοστό αποπτωτικών υπολογίστηκε ως τις αρχές του αποπτωτικό ποσοστό συν τέλη του αποπτωτικό ρυθμό. Annexin V-ΡΕ /7-AAD Apoptosis Detection Kit (keygen, Nanjing, Κίνα) χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμασία απόπτωσης φορέας λεντοϊού επιμολυσμένων κυττάρων, παρόμοια με τα παραπάνω πρωτόκολλα. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν και τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέσο ± SD.

μετανάστευση των κυττάρων και δοκιμασίες εισβολή

δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης και εισβολής διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [13]. δοκιμασία μετανάστευση διεξήχθη με Transwell ένθετα με μέγεθος πόρου μεμβράνης 8,0 mm (format 24-φρεατίων, Corning, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Για να μετρηθεί η ικανότητα εισβολής των κυττάρων GC, τα προηγουμένως αναφερθέντα ένθετα προ-επικαλυμμένες με Matrigel μήτρα (BD Science, Sparks, MD, USA). Τα κύτταρα (1 χ 10

5) επαναιωρήθηκαν σε μέσο άνευ ορού και σπάρθηκαν στον άνω θάλαμο. Τα χαμηλότερα θάλαμοι πληρώθηκαν με πλήρες μέσο καλλιέργειας που περιέχει 10% FBS. Μετά από επώαση στους 37 ° C για 24 ώρες, τα κύτταρα τα οποία μετανάστευσαν παρόντες στην κάτω πλευρά της μεμβράνης μονιμοποιήθηκαν, χρωματίστηκαν και μετρήθηκαν. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν.

δοκιμασία Λουσιφεράσης

Dual-λουσιφεράση δοκιμασίες διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Τα θραύσματα 3′-UTR του γονιδίου ΚΠΣ 1 περιέχει την θέση σύνδεσης miR-214 ενισχύθηκε με PCR από RNA κυττάρων ΜΚΝ45 χρησιμοποιώντας τους εκκινητές στον Πίνακα S1, και εισάγεται στη θέση Xba1 του φορέα έκφρασης στόχου pmirGLO miRNA (Promega, San Lius Obispo, CA, USA). Το προκύπτον φορέας ονομάστηκε pmirGLO-ΚΠΣ 1. Για τη δοκιμασία λουσιφεράσης, ΜΚΝ45 και BGC823 κύτταρα σπάρθηκαν σε 12 φρεατίων πλάκα την ημέρα πριν από την επιμόλυνση. Τα κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με 30 ηΜ miR-214 πρόδρομος ή αναστολέα miR-214, αρνητικό έλεγχο και 30 ng pmirGLO-ΚΠΣ 1 χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο διαμόλυνσης X-tremeGENE (Roche Applied Science). Μετά από 48 ώρες διαμόλυνσης, δραστικότητα λουσιφεράσης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα διπλής λουσιφεράσης δοκιμασίας (Promega) και ομαλοποιήθηκε ως προς δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν.

κηλίδος Western

Στις 48 ώρες μετά την επιμόλυνση με miR-214 πρόδρομος ή αναστολέα, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε ανάλυση κηλίδος Western όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Εν συντομία, η πρωτεΐνη εκχυλίστηκε από κύτταρα ή ιστούς. Τα προϊόντα λύσης διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση, μεταφέρθηκε σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης και γίνεται αποτύπωμα με αντισώματα έναντι ΚΠΣ 1 (1:1000, Epitomics) ή β-ακτίνης (1:1000, Σάντα). Τα δεδομένα ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Στατιστική ανάλυση

Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το στατιστικό πακέτο Prism 5 λογισμικού (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Οι διαφορές αναλύθηκαν με το Μαθητή

t-test

ανάμεσα σε δύο ομάδες ή με μονόδρομη ANOVA μεταξύ των τριών ομάδων. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-214 και το μέγεθος του όγκου στην πρωτοβάθμια GC ήταν υπολογίζονται συσχέτισης Spearman του. Στην καμπύλη επιβίωσης, τα δεδομένα αναλύθηκαν με δοκιμασία log-rank. Να καθοριστεί σε ποιο βαθμό η έκφραση του miR-214 θα μπορούσε αποτελεσματικά το διαχωρισμό διαφορετικών κλινικών subsettings, δέκτης λειτουργεί ανάλυση χαρακτηριστικών (ROC) καμπύλη κατασκευάστηκε και η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) υπολογίστηκε για να εκτιμηθεί η ικανότητα του miR-214 έκφρασης για να διαφοροποιηθούν μεταξύ των περιπτώσεων καρκίνου και nontumourous περιπτώσεις, και να διακρίνει τη μεταστατική τους ιστούς και τα μη μεταστατικό ιστούς.

P

-τιμές μικρότερες από 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

MiR-214 ρυθμίζεται μειωτικά σε γαστρικό καρκίνωμα ιστούς και τέσσερις κυτταρικές σειρές GC, σε σύγκριση με nontumourous γαστρικού βλεννογόνου

σε σύγκριση με το 18 nontumourous δείγματα γαστρικού βλεννογόνου, miR-214 ήταν σημαντικά μειωτικά (περίπου έξι φορές) σε 80 στοιχειώδη δείγματα γαστρικού ιστού (Εικόνα 1Α,

P

= 0,0001). Ο δέκτης λειτουργεί χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλη του miR-214 αντανακλάται ισχυρό διαχωρισμό μεταξύ των ιστών GC και nontumourous ιστούς, με εμβαδόν κάτω από την καμπύλη (AUC) του 0,7764 (Σχήμα S1 Α, 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI), 0,6466 – 0,9062). Με συνέπεια, προς τα κάτω ρύθμιση του miR-214 ελέγχθηκε σε τέσσερις γαστρικού κυτταρικές σειρές. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 C, το επίπεδο έκφρασης miR-214 στις κυτταρικές γραμμές ΜΚΝ28 GC, BGC823, ΜΚΝ45, και SGC7901 ήταν σημαντικά εξασθενημένος σε σύγκριση με 18 nontumourous δείγματα γαστρικού ιστού (

P

& lt? 0,05).

(Α) σε σύγκριση με το 18 nontumourous γαστρικό βλεννογόνο, miR-214 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε 80 πρωτοβάθμια γαστρικό ιστούς (

P

= 0,0001). έκφραση MiR-214 ήταν e en χαμηλότερη στην πρωτοβάθμια γαστρικό ιστούς με μετάσταση (μετάσταση) από την πρωτοβάθμια γαστρικό ιστούς χωρίς μετάσταση (Nonmetastais). (Β) την πρωτογενή γαστρικού ιστοί περαιτέρω διαιρέθηκαν σε ομάδα χαμηλής μετάστασης και μια ομάδα υψηλού μετάστασης ανάλογα με τον αριθμό των μεταστάσεων λεμφαδένα. (Η αποκοπής ορίστηκε ως έξι, το οποίο είναι ένα κατώτατο όριο για τη διάκριση N0~N1 και N2~N3 στο στάδιο ΤΝΜ (UICC, 2002). MiR-214 μειώθηκε δραματικά σε ομάδα υψηλού μετάσταση σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλής μετάστασης (

P

= 0,0455). (Γ) miR-214 προς τα κάτω ρύθμιση ελέγχθηκε σε τέσσερα γαστρικού κυτταρικές σειρές. σε σύγκριση με καλά μετρίως διαφοροποιημένη κυτταρική σειρά ΜΚΝ28, miR-214 ήταν σημαντικά εξασθενημένος σε πτωχά διαφοροποιημένη κυτταρική γραμμή ΜΚΝ45 και BGC823, και μετρίως-πτωχά διαφοροποιημένα και άκρως μεταστατική κυτταρική γραμμή SGC7901. Ωστόσο, ανιχνεύσαμε χαμηλότερη έκφραση του miR-214 σε GES-1, ένα αθανατοποιημένο γαστρικού επιθηλίου κυτταρική γραμμή, σε σύγκριση με τέσσερα γαστρικά καρκινικά κύτταρα (

*

P

& lt?.. 0.05) (Δ) σύνδεσης μεταξύ της έκφρασης του miR-214 και το μέγεθος του όγκου στην πρωτοβάθμια GC ήταν υπολογίζονται συσχέτισης Spearman για τα δεδομένα μας πρότεινε ότι το miR-214 έκφρασης αντιστρόφως ανάλογη με το μέγεθος του όγκου (Spearman r = -0,2673,

P

= 0,0083).

Η

Ωστόσο, εντοπίσαμε ακόμα χαμηλότερη έκφραση του miR-214 στην GES-1, ένα απαθανάτισε γαστρικού επιθηλίου κυτταρική σειρά, από ό, τι σε τέσσερις κυτταρικές σειρές GC (σχήμα 1Γ ,

P

& lt? 0,05). Υποθέτουμε η ασυμφωνία μπορεί να οφείλεται τουλάχιστον εν μέρει με τη διαφορά μεταξύ κλινικών δειγμάτων και κυτταρικών σειρών, επειδή μια κυτταρική γραμμή, που απομονώνεται από έναν ασθενή με μια ορισμένη ασθένεια, αντιπροσωπεύει την υπογραφή έκφραση miRNA από ένα μόνο κλινικό δείγμα και τον Μάιο μεταβολές κατά τη διάρκεια κύτταρο κουλτούρα

in vitro

? Με άλλα λόγια, τα δείγματα ιστών είναι πολύ περισσότερο σαν το ανθρώπινο πλαίσιο από κυτταρικές σειρές. Έτσι, σχολιάζουν ότι το miR-214 έκφρασης σε ανθρώπινους ιστούς GC ήταν πιο αντιπροσωπευτικό και αξιόπιστο από αυτό που διαπιστώθηκε σε κυτταρικές σειρές.

Μειωμένη έκφραση του miR-214 στο GC σχετίζεται με μετάσταση λεμφαδένα και το μέγεθος του όγκου, αλλά δεν έχει καμία συσχέτιση με την πρόγνωση των ασθενών

Για τον προσδιορισμό των πιθανών κλινικοπαθολογοανατομικών επιπτώσεις των αλλοιωμένη έκφραση miR-214, συνδυάσαμε τα αποτελέσματα qPCR και κλινικές παραμέτρους. Οι συσχετισμοί μεταξύ του επιπέδου έκφρασης του miR-214 και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά του GC συνοψίζονται στον Πίνακα 1. MiR-214 έκφρασης αντιστρόφως ανάλογη με το μέγεθος του όγκου (Πίνακας 1,

t-test

,

P

= 0,0265? Σχήμα 1D, Spearman r = -0,2673,

P

= 0,0083) και μετάσταση στους λεμφαδένες (Πίνακας 1, Figure1A,

t-test

,

P

= 0,0164). Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά σε άλλα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά, όπως το φύλο, περιφερική μετάσταση, ΠΟΥ ιστολογική ταξινόμηση, και ιστολογικό τύπο Lauren μεταξύ αυτών των δύο ομάδων.

Η

Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε κλιμακωτή ρύθμιση προς τα κάτω του miR-214 μεταξύ nontumourous γαστρικό βλεννογόνο, nonmetastasis ιστούς και ιστούς μετάσταση (Σχήμα 1Α, μονόδρομη ANOVA,

P

= 0,0006). Για την αξιολόγηση της έκφρασης του miR-214 σε GC ως ένα νέο βιοδείκτη για μετάσταση στους λεμφαδένες, ιδρύθηκαν καμπύλες ROC. Παρατηρήσαμε σαφή διαχωρισμούς ανάμεσα στους ασθενείς με μετάσταση στους λεμφαδένες και εκείνοι χωρίς μετάσταση στους λεμφαδένες, με μια AUC των 0,5880 (Σχήμα S1B, 95% CI, 0,4526 – 0,7166). Τα πρωτογενή γαστρικού ιστοί διαιρείται περαιτέρω σε μια ομάδα χαμηλής μετάστασης και μια ομάδα υψηλής μετάστασης ανάλογα με τον αριθμό των λεμφαδένων μεταστάσεων (LNM): χαμηλή μετάσταση ορίστηκε ως περιπτώσεις με λιγότερο από έξι LNM, και περιπτώσεις με περισσότερα από έξι LNM θεωρήθηκαν ως υψηλής μετάστασης. Όπως ήταν αναμενόμενο, η έκφραση του miR-214 μειώθηκε δραματικά στην ομάδα υψηλού μετάσταση σε σύγκριση με την ομάδα χαμηλής μετάστασης (Εικόνα 1Β,

P

= 0,045).

Σύμφωνα με το δείγμα ιστού δεδομένα που δείχνουν τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-214 και LNM, διαπιστώσαμε ότι, σε σύγκριση με την μετρίως καλά διαφοροποιημένο γραμμή κυττάρων ΜΚΝ28, miR-214 έκφραση ήταν σημαντικά μικρότερη στα ελάχιστα διαφοροποιημένες κυτταρικές σειρές ΜΚΝ45 και BGC823, και ειδικά η μεταστατική κυτταρική γραμμή SGC7901 [14] (

P

& lt? 0,05)

Ωστόσο, τα δεδομένα μας δεν έδειξαν σημαντική διαφορά του miR-214 έκφραση σε 18 δείγματα πρωτογενών γαστρικού ιστού και δευτερογενή loci μετάσταση τους (σχήμα 1Β. ,

P

= 0,2676). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης miR-214 συνέβη στο πρώιμο στάδιο της ανάπτυξης LNM και παρέμεινε σταθερή χωρίς περαιτέρω εξασθένηση στο τελευταίο στάδιο της μετάστασης.

Για να διερευνήσουν περαιτέρω το αποτέλεσμα του miR-214 για την πρόγνωση της ασθενείς, αναλύσαμε τα επίπεδα έκφρασης του miR-214 σε περιπτώσεις με διαφορετικές συνθήκες κατάσταση υποτροπής και επιβίωσης. Ωστόσο, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι δεν υπήρχε έντονη διαφορά μεταξύ της ομάδας υποτροπή και την ομάδα nonrelapse, ή μεταξύ της ομάδας επιβίωση και την ομάδα του θανάτου (Σχήμα 2Α-Β,

t-test

,

P

& gt? 0,05). Αξίζει να σημειωθεί ότι, χωρίσαμε τους ασθενείς σε ομάδες υψηλής έκφρασης και χαμηλής έκφρασης με βάση το μέσο επίπεδο της έκφρασης miR-214, και τις καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ miR-214 έκφρασης και ελεύθερη υποτροπής επιβίωση (Σχήμα 2C , αναλογία κινδύνου (HR) 1,23, 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI) 0,6596 – 2,285?

P

= 0,5781) ή τη συνολική επιβίωση (Σχήμα 2D, HR 1,20, 95% CI 0,6667 έως 2,151?

P

= 0,5832) σε ασθενείς με GC.

(Α) δείγματα ιστών χωρίστηκαν σε μια ομάδα απελευθέρωση και nonrelease ομάδα σύμφωνα με την έκβαση των ασθενών. Τα δεδομένα μας δεν έδειξαν σημαντική διαφορά στην έκφραση του miR-214 μεταξύ αυτών των δύο ομάδων (

P

& gt? 0,05). (Β) Όπως στο (Α), εκτός από τα κλινικά δείγματα ταξινομήθηκαν ως ομάδα η επιβίωση και η ομάδα του θανάτου (

P

& gt? 0,05). (C, D) Χωρίσαμε τους ασθενείς σε ομάδες υψηλής έκφρασης και χαμηλής έκφρασης με βάση το μέσο επίπεδο του miR-214 έκφρασης. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του miR-214 και υποτροπής επιβίωση χωρίς εξέλιξη (λόγος κινδύνου (HR) 1,23, 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI) 0.6596, 2.285?

P

= 0,5781) ή συνολικό επιβίωση (HR 1.20, 95% CI 0.6667, 2.151?

P

= 0,5832), αν και υπήρχε μια τάση ότι η υψηλή έκφραση του miR-214 σχετίστηκε με μικρότερη υποτροπής επιβίωση χωρίς (διάμεση επιβίωση: 28,00 μηνών έναντι 74.50 μήνες, για υψηλή έκφραση και χαμηλή έκφραση, αντίστοιχα) ή τη συνολική επιβίωση (μέση επιβίωση:. 40,00 μηνών έναντι 47,50 μηνών, για την υψηλή έκφραση και χαμηλή έκφραση, αντίστοιχα)

Η

Επίδραση του miR-214 στο κύτταρο τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων GC

Για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας διαμόλυνσης, προσδιορίσαμε miR-214 έκφρασης με RT-qPCR στις 24, 48, και 72 ώρες μετά την επιμόλυνση στον πρόδρομο miR-214 ή αναστολέα επιμολυσμένα κύτταρα και συνεχώς ανιχνεύεται ΜΙΚ 214 έκφρασης των φορέων λεντοϊού επεξεργασμένων κυττάρων για 4 εβδομάδες. Όπως ήταν αναμενόμενο, η επιμόλυνση του προδρόμου του miR-214 αποτελεσματικά οδήγησε σε σημαντική υπερέκφραση του miR-214 (Σχήμα S2A-Β,

P

& lt? 0,05) και ο αναστολέας miR-214 μείωσε εντυπωσιακά miR-214 έκφρασης σε ΜΙΚ 214 αναστολέα-επιμολυσμένα κύτταρα από τις αρνητικές ομάδες (Σχήμα S3E-F, σχήμα S4 Α,

P

& lt? 0,05). Επίσης, βρήκαμε ότι τα κύτταρα που επιμολύνθηκαν με τον φορέα φακοϊό LV3-HSA-miR-214 θα μπορούσε να οδηγήσει σε μια 7 έως 96 φορές την αλλαγή του miR-214 έκφραση σε SGC7901 και ΜΚΝ45 κύτταρα (Σχήμα S3A-D,

P

& lt? 0,05), με το 80% -90% των κυττάρων που εκφράζουν την πρωτεΐνη δείκτη GFP (Σχήμα S3A, Β)

για να καθοριστεί εάν miR-214 θα μπορούσε να επηρεάσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων GC, δοκιμασία πολλαπλασιασμού edu χρησιμοποιήθηκε για να. ανιχνεύουν την ικανότητα κυτταρικής ανάπτυξης. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η υπερέκφραση του miR-214 με lentiviurs φορείς ή πρόδρομος miR-214 δεν επηρέασε την ανάπτυξη των κυττάρων του SGC7901 (Σχήμα 3Α-Β, Σχήμα S2C-D, P & gt? 0,05) και κυτταρικές γραμμές ΜΚΝ45 (Σχήμα S2E-F, Εικόνα S5A-B, P & gt? 0,05). Ωστόσο, βρήκαμε ότι downregualtion του miR-214 θα μπορούσε να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των BGC823 (Σχήμα 3C-D,

P

= 0,0010) και GES-1 (Σχήμα S4B-C,

P

= 0,0474), αλλά όχι ΜΚΝ28 κυτταρική γραμμή (Σχήμα S5c-D,

P

= 0,0938), σε ένα κύτταρο-ειδικό τρόπο.

(A, C) Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες μετά από επιμόλυνση με φακοϊό miR -214 εκφράζουν φορέα σε SGC7901 κύτταρα και αναστολέα miR-214 στο BGC823 κύτταρα (μεγέθυνση 100 ×). (Β, Δ) Το ποσοστό της ΕΠΑ θετικών κυττάρων, η οποία υπολογίζεται από Edu-επισημασμένου κυττάρου (κόκκινο) αριθμός σε σύγκριση με το συνολικό αριθμό των κυττάρων (Hoechst-χρωματισμένο, μπλε), ορίστηκε ως ποσοστό πολλαπλασιασμού. Τα στοιχεία δεν έδειξαν σημαντική διαφορά του ρυθμού πολλαπλασιασμού μεταξύ LV3-HSA-miR-214-επιμολυσμένα ομάδα και την ομάδα αρνητικού ελέγχου στην SGC7901 κύτταρα (

P

& gt? 0,05). Ενώ βρήκαμε ότι το miR-214 επιμόλυνση αναστολέας θα μπορούσε να οδηγήσει σε εντυπωσιακά να αυξήσει την ικανότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων BGC823 (

P

= 0,0010).

Η

Ο ρόλος του miR-214 στη μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή των κυττάρων GC

Όπως miR-214 έκφρασης συσχετίστηκε αντίστροφα με μετάσταση στους λεμφαδένες, ήμασταν ενδιαφέρεται ιδιαίτερα για την ικανότητά του miR-214 για να επηρεάσει τη μετανάστευση κυττάρων και εισβολή. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι SGC7901 και ΜΚΝ45 κύτταρα επιμολυσμένα με LV3-HSA-miR-214 έδειξε μια σημαντικά μειωμένη μετανάστευση και την ικανότητα εισβολής, σε σύγκριση με την LV3NC επεξεργασμένα κύτταρα (Σχήμα 4Α-Β, Σχήμα S6a-Β,

P

& lt? 0,05). Και παρατηρήσαμε ότι downregualtion του miR-214 θα μπορούσε να διευκολύνει τη μετανάστευση και την εισβολή των ΜΚΝ28 (Σχήμα 4C-D,

P

= 0,0491 και

P

= 0,0127, αντίστοιχα). Παρά το γεγονός ότι νοκ ντάουν του miR-214 δεν επηρέασε τη μετανάστευση των GES-1 κύτταρα (Σχήμα S4D-E,

P

= 0,0879), αποσιώπηση του miR-214 οδήγησε σε μια αύξηση πάνω από 40% στις επεμβατικές ιδιότητες αυτών των κυττάρων (

P

= 0.0046). Ωστόσο, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι η επιμόλυνση του miR-214 πρόδρομος δεν είχε μια ισχυρή επίδραση στην κυτταρική μετανάστευση και εισβολή σε SGC7901 (Σχήμα S2G-Η,

P

& gt? 0,05) και ΜΚΝ45 (Σχήμα S2I-J,

P

& gt?. 0.05) κύτταρα, σε σύγκριση με τους αντίστοιχους αρνητικούς μάρτυρες

(A, C) Εκπρόσωπος εικόνες της μετανάστευσης και της εισβολής δοκιμασίες σε SGC7901 και ΜΚΝ28 κυττάρων (μεγέθυνση 200 ×) εμφανίζονται . (Β, D) Τα μεταναστεύσει κύτταρα μετρήθηκαν με την επιλογή πέντε πεδία κάθε θαλάμου τυχαία και τον υπολογισμό του μέσου όρου αριθμό. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι LV3-HSA-miR-214 επιμόλυνση αισθητά μειώσει την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα SGC7901 (

P

= 0,0143 και 0,0210, αντίστοιχα). Ενώ νοκ ντάουν του miR-214 με τον αναστολέα miR-214 προάγει την κυτταρική μετανάστευση (

P

= 0,0491) και της εισβολής (

P

= 0,0127) σε ΜΚΝ28 κύτταρα.

Η

επίδραση του miR-214 στην κυτταρική απόπτωση των κυττάρων GC

για να εξεταστεί η επίδραση του miR-214 στην κυτταρική απόπτωση, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς απόπτωσης χρησιμοποιώντας τον V-FITC μέθοδο χρώσης Αηηβχίη /ΡΙ. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η υπερέκφραση (MIR-214 πρόδρομος και φορέας λεντοϊού) και knockdown του miR-214 δεν μπορεί να επηρεάσει την κυτταρική απόπτωση προφανώς σε σύγκριση με τους αρνητικούς μάρτυρες σε κυτταρικές σειρές τέσσερα GC (Σχήμα 5, Σχήμα s2k-Ν,

P

& gt? 0,05) και αθανατοποιημένη κυτταρική γραμμή γαστρικού GES-1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στην πραγματικότητα, βρήκαμε μια τάση ικανότητα απόπτωση του miR-214 πρόδρομος στην κυτταρική σειρά ΜΚΝ45 (Σχήμα S2M-Ν,

P

= 0,0606), ωστόσο, η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική.

(A, C, E, G) κύτταρα σημάνθηκαν με αννεξίνη V-ΡΕ /7-AAD ή αννεξίνης V-FITC /PI, και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Όλα αυτά τα στοιχεία είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων προσδιορισμών. Quadrant στατιστικές: νέκρωση ή μηχανικά-τραυματισμένα κύτταρα στην επάνω αριστερή (UL), αργά την απόπτωση των κυττάρων στην επάνω δεξιά (UR), βιώσιμα κύτταρα στην κάτω αριστερή (LL) και πρώιμη απόπτωση των κυττάρων στην κάτω δεξιά (LR). (Β, D, F, Η) Το ποσοστό της πρόωρης κυττάρων απόπτωσης, αργά κύτταρα απόπτωσης και συνολική κύτταρα απόπτωση αντιστοίχως σε σύγκριση μεταξύ LV3hsa-miR-214 επιμολυσμένα ομάδας και της ομάδας NC, ή μεταξύ miR 214-αναστολέα-επιμολυσμένα ομάδα και αναστολέα NC ομάδα. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι LV3-HSA-miR-214 ή miR-214 αναστολέας έχει καμία επίδραση στην κυτταρική απόπτωση σε SGC7901, ΜΚΝ45, ΜΚΝ28 και BGC823 κυττάρων (

P

& gt? 0,05). Παρά το γεγονός ότι παρατηρείται μια τάση ικανότητα απόπτωση του miR-214 στην κυτταρική σειρά ΜΚΝ45, ωστόσο, η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

P

= 0,0950).

Η

ΜΙΚ 214 στοχεύει άμεσα και ρυθμίζει προς τα κάτω ΚΠΣ 1 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

για τον προσδιορισμό των στόχων του miR-214, χρησιμοποιήσαμε τον αλγόριθμο TargetScan να προβλέψει miR-214 στόχους σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο. Μεταξύ των πολυάριθμων πιθανών υποψηφίων, έχουμε διαλέξει αυτά που υπερεκφράζεται σε καρκίνους και proliferation- και γονιδίων που σχετίζονται με τη μετάσταση, συμπεριλαμβανομένων Notch2, FGFR1, ΚΠΣ 1 (Σχήμα 6Α), AGAP2, CREB1, για περαιτέρω ανάλυση. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι miR-214 πρόδρομος διαμόλυνση μείωσε σημαντικά τη δραστικότητα ενός γονιδίου αναφοράς λουσιφεράσης συντηγμένο με το ΚΠΣ 1 3′-UTR, με 29,60% και 30,61% μείωση, σε σύγκριση με τις αρνητικές ομάδες ελέγχου (Σχήμα 6Β,

P

= 0,0227 και 0,0093, αντίστοιχα, για κυτταρικές γραμμές ΜΚΝ45 και BGC823). Ενώ όταν αναστολέα miR-214 διαμολύνθηκε, δραστικότητα λουσιφεράσης αυξήθηκε κατά 34,49% και 42,25% σε ΜΚΝ45 και BGC823 κυττάρων σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Σχήμα 6C,

P

= 0,0115 και 0,0085, αντίστοιχα).

(Α) Οι συμπληρωματικές αλληλουχίες του ΚΠΣ 1 mRNA 3′-UTR δείχνεται με την αλληλουχία miR-214. (Β) Η δραστικότητα της λουσιφεράσης σε ΜΚΝ45 και BGC823 κύτταρα επιμολυσμένα με miR-214 και pmirGLO-ΚΠΣ 1 ήταν σημαντικά πτώματος σε σύγκριση με τους αρνητικούς μάρτυρες (

P

= 0,0227 και 0,0093, αντίστοιχα). (Γ) Μετά από αναστολέα miR-214 διαμολύνθηκε, δραστικότητα λουσιφεράσης αυξήθηκε δραματικά σε ΜΚΝ45 και BGC823 κυττάρων σε σύγκριση με τους μάρτυρες (

P

= 0,0115 και 0,0085, αντίστοιχα). (Δ) Η επίδραση του miR-214 σε επίπεδα ΚΠΣ 1 ελέγχθηκαν σε κυτταρολύματα GC με κηλίδα western. (ΜΙ). Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η σχετική έκφραση ΚΠΣ 1 μειώθηκε σημαντικά σε κύτταρα επιμολυσμένα με miR-214 precrusor σε σύγκριση με τα κύτταρα που επιμολύνθηκαν με αρνητικό έλεγχο (

P

= 0,0037 και 0,0066, αντίστοιχα).

Η

Εμείς καθορίζεται περαιτέρω την έκφραση του ΚΠΣ 1 πρωτεΐνης με κηλίδα western σε κύτταρα GC επιμολυσμένα με miR-214 πρόδρομος ή αναστολέα. Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα λουσιφεράση, η έκφραση της πρωτεΐνης ΚΠΣ 1 μειώθηκε σημαντικά σε SGC7901 και ΜΚΝ45 κύτταρα (Σχήμα 6D-Ε,

P

= 0,0037 και 0,0066, αντίστοιχα) επιμολυσμένα με miR-214 πρόδρομος και αυξήθηκαν σε ΜΚΝ28 και BGC823 κύτταρα (Σχήμα S7A-Β,

P

= 0,0049 και 0,0416, αντίστοιχα) επιμολυσμένα με αναστολέα miR-214, σε σύγκριση με τα αντίστοιχα στοιχεία ελέγχου. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι το miR-214 αναστέλλει ΚΠΣ 1 μετάφραση στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα.

Συζήτηση

Αναδυόμενες αποδείξεις ανέδειξε το κρίσιμο αντίκτυπο των miRNA απορρύθμισης στην ογκογένεση των ανθρωπίνων καρκινωμάτων [3], [4] . MiRNA απορύθμιση προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, προσδίδει αντοχή στην απόπτωση, και ενισχύει διεισδυτικότητα και μετάσταση, μέσω καταστολή των κατάντη καταστολείς όγκων ή επάγει τη συσσώρευση των ογκογονιδίων στόχου, και έτσι εμπλέκεται στην έναρξη, την εξέλιξη και τη μετάσταση ανθρώπινων όγκων.

Ανάμεσα στην πληθώρα των miRNAs, απορρύθμιση του miR-214 βρέθηκε σε άφθονο ανθρώπινων καρκίνων [15] – [22]. Προς τα κάτω ρύθμιση του miR-214 σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας έχει αναφερθεί από διάφορες ομάδες, και miR-214 έχει δειχθεί ότι αναστέλλει την ανάπτυξη, τη μετανάστευση, και η εισβολή του τραχήλου της μήτρας καρκινικών κυττάρων με τη στόχευση ογκογονίδια MEK3, JNK1, Plexin-Β1, και GALNT7 [15 ] – [17]. MiR-214 έχει επίσης βρεθεί να μειωθεί στον καρκίνο του μαστού και να συμβάλλουν στην ογκογένεση μαστού, επιτρέποντας με παρεκκλίνοντα αυξημένα ογκογονίδιο ΕΖΗ2 συσσώρευση και επακόλουθο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και ανεξέλεγκτη εισβολή [18]. [28].