Αφηρημένο

Ο μηχανισμός πίσω από τη χωροχρονική έλεγχο της δυναμικής των καρκινικών κυττάρων και την πιθανή σύνδεσή της με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων δεν ήταν καλά καθιερωμένος. Με την αξιοποίηση της τεχνικής έμβια απεικόνισης, βρήκαμε ότι ο καρκίνος των κυττάρων κινητικότητα και επεμβατική ιδιότητες ήταν στενά συνδεδεμένοι με τον κυτταρικό κύκλο.

In vivo

εμβολιασμό των καρκινικών κυττάρων ανθρώπινου παχέος εντέρου φέρουν φθορισμού ουμπικουιτίνωση με βάση το δείκτη κυτταρικού κύκλου (Fucci) έδειξε ένα απροσδόκητο φαινόμενο: S /G2 /M κυττάρων ήταν πιο κινητικό και επεμβατική από κύτταρα G1. Οι αναλύσεις έδειξαν ότι Microarray

Arhgap11a

, ένα μη χαρακτηρισμένο πρωτεΐνη Rho ΟΤΡάσης ενεργοποίησης (RhoGAP), εκφράστηκε σε ένα κύτταρο-κύκλου-εξαρτώμενο τρόπο. Έκφραση ARHGAP11A σε καρκινικά κύτταρα κατέστειλαν RhoA-εξαρτώμενοι μηχανισμοί, όπως ο σχηματισμός ινιδίων του στρες και εστιακή προσκόλληση, η οποία κατέστησε τα κύτταρα πιο επιρρεπείς να μεταναστεύσουν. Δείξαμε επίσης ότι RhoA καταστολή από ARHGAP11A επαγόμενη αύξηση της σχετικής δραστηριότητας Rac1, οδηγώντας σε αύξηση των επεμβατική ιδιότητες. RNAi με βάση την αναστολή της Arhgap11a μείωσε την εισβολή και

in vivo

επέκταση των καρκίνων. Επιπλέον, η ανάλυση των δειγμάτων έδειξε ανθρώπινης τη σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση του

Arhgap11a

σε καρκίνους του παχέος εντέρου, η οποία συσχετίστηκε με την κατάσταση κλινικής εισβολή. Η παρούσα μελέτη δείχνει ότι ARHGAP11A, ένα κυτταρικό κύκλο εξαρτάται RhoGAP, είναι ένα κρίσιμο ρυθμιστής της κινητικότητας των καρκινικών κυττάρων και έτσι είναι μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική στόχος σε διηθητικό καρκίνο

Παράθεση:. Kagawa Υ, Ματσουμότο S, Kamioka Υ, Mimori Κ, Naito Υ, Ishii Τ, et al. (2013) Cell Cycle-Εξαρτημένων Rho ΟΤΡάσης Δραστηριότητα Ρυθμίζει δυναμικά Κινητικότητα Cancer Cell και εισβολή

In Vivo

. PLoS ONE 8 (12): e83629. doi: 10.1371 /journal.pone.0083629

Επιμέλεια: Jung Weon Lee, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ, Δημοκρατία της Κορέας

Ελήφθη: 29 Αυγούστου, 2013? Αποδεκτές: 5 Νοέμ 2013? Δημοσιεύθηκε: 30 Δεκ 2013

Copyright: © 2013 Kagawa et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από επιχορηγήσεις-in-ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα για τα καινοτόμα Περιοχές (22113007), από το πρώτο πρόγραμμα από το Υπουργείο Παιδείας, Επιστήμης, Αθλητισμού και Πολιτισμού της Ιαπωνίας, με επιχορηγήσεις από το Διεθνές Πρόγραμμα Human Frontier Science (RGY0077 /2011) ? και από τις επιχορηγήσεις από το Ίδρυμα Takeda Επιστημών, το κύτταρο Ίδρυμα Επιστημών Ερευνών, το Ίδρυμα Kanae για την Προώθηση της Ιατρικής Επιστήμης, και το Ίδρυμα Nakajima. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Απεριόριστη επέκταση λόγω της ανεξέλεγκτης εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και την αυξημένη διείσδυση στην κανονική γειτονικές περιβάλλον είναι μια τρομερή και απειλητική για τη ζωή πτυχή των καρκινικών κυττάρων. Στην πραγματικότητα, η ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου έχει αποτελέσει σημαντικό θέμα έρευνας στον τομέα του καρκίνου κυτταρικής βιολογίας.

Επιπλέον, ο καρκίνος έχει εξαιρετικά δυναμικές ιδιότητες, συμπεριλαμβανομένης της εισβολής των περιβαλλόντων ιστών, διήθηση του στη συστηματική κυκλοφορία, και πρωτοποριακή του μια νέα «θέση» για τον αποικισμό μακριά από την καταγωγή του [1], [2]. Παρά το γεγονός ότι παράγοντες που καθορίζουν την κινητοποίηση των κυττάρων του καρκίνου, όπως της οικογένειας Rho μικρές πρωτεΐνες G, έχουν μελετηθεί εκτενώς [3], η σχέση μεταξύ ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και την κυτταρική κινητικότητα των καρκινικών κυττάρων παραμένει ασαφής. Για να διαλευκανθεί αυτή η δυναμική αλληλεπίδραση θα ήταν πολύτιμη για την παρατήρηση των χωροχρονικών ιδιοτήτων ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και την κινητικότητα των κυττάρων ταυτόχρονα

in vivo

.

Πρόσφατα, έμβια μικροσκοπία πολυφωτονικών χρησιμοποιήθηκε για την ανατομία άθικτα κυτταρικά φαινόμενα στην διάφορα βιολογικά συστήματα, όπως το ανοσοαπόκριση [4], [5], φλεγμονώδεις αντιδράσεις [6], και οστική ανακατασκευή [7]. Αυτή η προηγμένη τεχνική απεικόνισης μας επέτρεψε να κατανοήσουν τις δυναμικές συμπεριφορές των ζωντανών κυττάρων σε ιστούς και όργανα. Τα καρκινικά κύτταρα είναι επίσης μεγάλη κινητικότητα και έχουν μεταναστευτικών συμπεριφορές τους έχουν αξιολογηθεί χρησιμοποιώντας αυτήν την τεχνική απεικόνισης [8] -. [10], αν και ο συσχετισμός της με την πολλαπλασιαστική φύση των κυττάρων παραμένει άπιαστο

Εδώ, έχουμε καταφέρει να οπτικοποίηση δυναμική εκδηλώσεις κατά τη διάρκεια του καρκίνου εισβολή των κυττάρων και τη μετάσταση με τη χρήση έμβια μικροσκοπία πολυφωτονικών. Μέσω του φθορισμού ουβικιτινίωση που βασίζονται δείκτης κυτταρικού κύκλου (Fucci), μια ειδική φθορίζουσα πρωτεΐνη ιχνηλάτης χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση του κυτταρικού κύκλου σε ζωντανά κύτταρα, ταυτοποιήσαμε μια στενή συσχέτιση μεταξύ της κινητοποίησης των ιδιοτήτων των καρκινικών κυττάρων του κυτταρικού κύκλου και.

Αποτελέσματα

Δυναμική απεικόνιση ανιχνεύει την κινητοποίηση του καρκίνου του κυτταρικού κύκλου που σχετίζονται κυττάρων και εισβολή

in vivo

η

Αξιοποιήσαμε έμβια μικροσκοπία πολυφωτονικών και την τεχνολογία Fucci [11] για τη μελέτη της κυτταρικής κύκλου και η μετανάστευση σε ένα ζωντανό σύστημα. Σε αυτό το σύστημα Fucci, Geminin (GMNN), μια πυρηνική πρωτεΐνη εμπλουτισμένο σε S /G2 /M φάσεις, και Cdt1, εμπλουτισμένο στην G1 φάση, αντιστοίχως σημειωμένα με θερμοκήπια και κόκκινο-φθορίζουσες πρωτεΐνες (Σχήμα 1Α,

ανώτερο

πίνακα). Fucci εκφράζουν HCT116 ανθρώπινο διηθητικού καρκίνου του κόλον κύτταρα (Σχήμα 1Α,

κάτω

πάνελ) εμβολιάσθηκαν εντός του τυφλού εντέρου ή υποδόρια ιστούς ενός ανοσοκατεσταλμένους ποντικού NOD /SCID [12] – [14]. Τέσσερις εβδομάδες μετά την εμφύτευση, παρατηρήθηκαν όγκοι intravitally. Εμείς κατά προτίμηση ανιχνεύεται S /G2 /M φάση Fucci-πράσινα κύτταρα κατά μήκος των περιθωριακές περιοχές των κεφαλών προσβολή καρκινικών μετά εμβολιάζεται εντός του τοιχώματος του τυφλού εντέρου (Εικόνα 1Β). Παρόμοιες μεταβολές στην κατανομή σε Fucci-πράσινο και -Κεά κύτταρα ανιχνεύθηκαν όταν τα καρκινικά κύτταρα εμβολιάστηκαν εντός του μεσεντερίου ή κόλον τοιχώματος (Σχήμα S1). Η προτιμησιακή κατανομή των καρκινικών κυττάρων στις S /G2 /M φάσεις παρατηρήθηκε επίσης σε χειρουργικά δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου (Εικόνα S2). Τα καρκινικά κύτταρα σε κεφάλια εισβολή ήταν κατά προτίμηση χρωματίζονται με αντισώματα εναντίον GMNN [15], [16] σε σύγκριση με εκείνα στις περιοχές μη-καρκινικά ή τα κέντρα των όγκων.

(Α) Ίδρυση και αναλύσεις HCT116 καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα σταθερά εκφράζοντας Fucci. (

Άνω

) Το σύστημα επιτρέπει την παρακολούθηση Fucci του κυτταρικού κύκλου σε ζωντανά κύτταρα σε πραγματικό χρόνο. Οι πυρήνες των κυττάρων στην G1 /G0, νωρίς S, και S /G2 /M είναι φάσεις σημασμένο κόκκινο, κίτρινο, και πράσινο, αντίστοιχα. (

Κάτω

) Στιγμιότυπα από Fucci-κυττάρων που εκφράζουν HCT116. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 20 μm. (Β) ενδοζωικής πολυφωτονική απεικόνιση Fucci-θετικών κυττάρων HCT116 εμβολιάζεται σε NOD ποντίκια /SCID. (

Αριστερά

) Μια αντιπροσωπευτική εικόνα της Fucci-κυττάρων που εκφράζουν HCT116 εμφυτεύεται στο τυφλό έντερο (πράσινο: Fucci-πράσινο (MAG), S /G2 /M? Κόκκινο: Fucci-κόκκινο (mKO2), G1? Μπλε : ίνες κολλαγόνου (δεύτερης αρμονικής γενιάς (ΓΔΑ) απεικόνιση)). Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 75 μm. (

Δικαίωμα

) Ποσοτικοποίηση των αριθμών των Fucci-πράσινο και -Κεά HCT116 κύτταρα σε διαφορετικές περιοχές της εμβολιάζεται όγκων. Κεντρική και περιθωριακές ζώνες ορίστηκαν ως περιοχές περαιτέρω ή πιο κοντά από 75 μm από τα σύνορα μεταξύ των όγκων και των φυσιολογικών ιστών, αντίστοιχα. (C) Εκπρόσωπος εικόνα στην άκρη ενός Fucci εκφράζουν μάζα HCT116 όγκου. Ολόκληρη η περιοχή (

αριστερά

) και μια χρονική σειρά (

δεξιά

) του μεγεθυσμένων εικόνων (μία ανά 400 s) των καρκινικών κυττάρων εισβάλλουν στο διάμεσο (πράσινο: Fucci-πράσινο (MAG), S /G2 /M? κόκκινο: Fucci-κόκκινο (mKO2), G1? μπλε:. κολλαγόνο ίνες (απεικόνιση SHG) (βλέπε επίσης Movie S1) πραγματικές εικόνες (

πάνω

πάνελ) και οι τροχιές των κυττάρων (

τα χαμηλότερα

πάνελ) εμφανίζεται. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 100 μm (

αριστερά

) και 10 μm (

δεξιά

). (Δ) Εκπρόσωπος εικόνα της εξαγγείωσης Fucci εκφράζουν κύτταρα HeLa. Ολόκληρη η περιοχή (

αριστερά

) και μια χρονική σειρά (

δεξιά

) της μεγεθύνεται τις εικόνες των καρκινικών κυττάρων εξαγγείωσης από τα αιμοφόρα αγγεία (ένα ανά 12 λεπτά) (πράσινο: Fucci-πράσινο (mAG) , S /G2 /M? κόκκινο: Fucci-κόκκινο (mKO2), G1? μπλε: κολλαγόνο ίνες (απεικόνιση SHG) (βλέπε επίσης την ταινία S2) πραγματικές εικόνες (

πάνω

πάνελ) και οι τροχιές των κυττάρων (

μειώσει πάνελ

) εμφανίζονται Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 100 μm (

αριστερά

) και 10 μm (

δεξιά

) (Ε) Κυτταρική κινητικότητα στο Fucci-θερμοκηπίου και. – κόκκινο-θετικών κυττάρων μετρήθηκε για 4 ώρες (βλέπε επίσης Ταινία S3). (

Αριστερά

) Πράσινο και κόκκινο σφαίρες αντιπροσωπεύουν Fucci-θερμοκηπίου και -Κόκκινο-θετικών κυττάρων, αντίστοιχα, και κίτρινες γραμμές δείχνουν τις σχετικές τροχιές. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 100 μm. (

Δικαίωμα

) ταχύτητες Μέση εντοπισμό των Fucci-θερμοκηπίου και -Κόκκινο-θετικά κύτταρα. Δεδομένων (n = 379 για Fucci πράσινο και n = 259 για Fucci κόκκινο) ελήφθησαν από μεμονωμένα κύτταρα σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. Οι ταχύτητες των δύο ομάδων συγκρίθηκαν με Mann-Whitney

U-test

(p = 0,0191). Τα μεσαία και διατεταρτημοριακά εύρη για κάθε ομάδα επικαλύπτονται στα οικόπεδα τελεία.

Η

Στη συνέχεια, εξετάσαμε τη δυναμική φύση των καρκινικών κυττάρων

in vivo

. Fucci εκφράζουν HCT116 καρκινικά κύτταρα ήταν άκρως κινητό κατά εμβολιασμό στον υποδόριο ιστούς, και μερικά καρκινικά κύτταρα ενεργά την εισβολή, εμφανίζεται να «βουτιά» στον περιβάλλοντα διάμεσο κατά τη διάρκεια της απεικόνισης του χρόνου μαθημάτων (Εικόνα 1Γ? Movie S1). Αξίζει να σημειωθεί ότι, σχεδόν όλοι οι καταδύσεις κυττάρων ήταν πράσινο (Σχήμα 1 C,

αιχμές βελών

), υποδηλώνοντας ότι ο καρκίνος κυτταρική κινητικότητα και εισβολή θα μπορούσε να εξαρτάται από τον κυτταρικό κύκλο. Επιπλέον, θα μπορούσε να ανιχνεύσει τις μεταναστευτικές κινήσεις τους κατά τη διάρκεια εξαγγείωση για μετάσταση (Σχήμα 1D? Movie S2). Μερικά κύτταρα βρέθηκαν να μεταναστεύουν έξω από συσσωματώματα κυττάρων καρκίνου κολλήσει εντός των αιμοφόρων αγγείων, και αυτά ήταν επίσης όλα πράσινα. Μια ορισμένη περίοδος παρατήρησης (για μέχρι 2 ώρες) των κεντρικών περιοχών όγκου κατέληξε σε σύλληψη της βασικής υποτονική συμπεριφορές, καθώς και την κίνηση ροής με τη ροή του αίματος, των διαφόρων τύπων καρκινικών κυττάρων, η οποία μας επέτρεψε να εικόνα επαρκή αριθμό κυττάρων για ποσοτικοποίηση (Σχήμα 1D? Movie S3). Λεπτομερής στατιστικές αναλύσεις της ταχύτητας ανίχνευσης κυττάρου έδειξαν σαφώς ότι το πράσινο καρκινικά κύτταρα (σε S /G2 /M φάση) έχουν σημαντικά υψηλότερη κινητικότητα από ό, τι τα ερυθρά κύτταρα G1 (μέση ταχύτητα tracking 1,39 ± 0,08 μm /min για Fucci-πράσινο vs. 1.09 ± 0.06 μm /min για Fucci-κόκκινο? ρ = 0,00191) (Σχήμα 1 Ε). Επιβεβαιώσαμε ότι μια ορισμένη χρονική ενδοζωικής απεικόνισης (μέχρι 3 ώρες) δεν επηρέασε την κινητικότητα των καρκινικών κυττάρων (Σχήμα S3). Με την παρακολούθηση μεμονωμένων κυττάρων κατά τη διάρκεια μιας χρονικής περιόδου, θα αποκλείεται η πιθανότητα ότι μια τέτοια αλλαγή κινητικότητα στα S /G2 /M φάσεις αντανακλούσε την κίνηση αναφορικά με την κυτοκίνηση. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ορισμένα μόρια εκφράζονται κατά προτίμηση στις S /G2 /M Fucci-πράσινο φάσεις διευκολύνουν τη μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων.

Ταυτοποίηση ARHGAP11A ως κυτταρικό κύκλο που εξαρτάται από την κινητικότητα ελέγχουσα μόριο

Για τη διαλεύκανση της μοριακής βάσης του ελέγχου του κυτταρικού κύκλου που εξαρτάται από την κινητικότητα, εκτελέσαμε cDNA που βασίζεται σε μικροδιάταξη συγκριτικές αναλύσεις μεταξύ Fucci-πράσινο και -Κεά κύτταρα καλλιεργήθηκαν

in vivo

(Σχήμα 2Α). Στην ανάλυση μικροσυστοιχιών, 2032 ανιχνευτές (1656 γονίδια) έδειξε & gt? Δύο φορές αλλαγές στην έκφραση (Σχήμα 2Β? Πίνακας S1). Όπως αναμενόταν, τα περισσότερα από αυτά τα γονίδια κωδικοποιούν πρωτεΐνες που σχετίζονται με την κυτταρική διαίρεση και μίτωση. Με βάση τις κατηγορίες γονιδίων οντολογίας, εξάγαμε γονίδια που σχετίζονται με την κυτταρική κίνηση από τα 1.656 υποψήφιοι και διαπίστωσε ότι μια μη χαρακτηρισμένη πρωτεΐνη Rho ΟΤΡάσης-ενεργοποίησης (RhoGAP),

Arhgap11a

, ήταν κατά προτίμηση εκφράζεται σε πράσινο S /G2 /M φάση καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 2Β, πίνακας S1). Όλες οι τρεις ανιχνευτές για

Arhgap11a

γονίδιο υψηλή θέση (5η, 12η, και 41η) μεταξύ των 2.023 ανιχνευτές. Έχει αποδειχθεί ότι η οικογένεια Rho μικρές πρωτεΐνες G όπως Rho, Rac και Cdc42, και ρυθμιστικά μόρια τους, όπως RhoGAP, ελέγχουν συνεργατικά κυτταρική κινητικότητα σε φυσιολογικά και καρκινικά κύτταρα [17] – [21]. Η προτιμησιακή έκφραση του

Arhgap11a

σε Fucci-πράσινα κύτταρα επιβεβαιώθηκε τόσο στο mRNA (Σχήμα 2C) και τα επίπεδα πρωτεΐνης (Εικόνα 2D). Επιπλέον, έχουμε καταδείξει μια εξαρτώμενη από το χρόνο σταδιακή αύξηση

Arhgap11a

έκφραση κατά την διάρκεια της εξέλιξης μέσω του κυτταρικού κύκλου από G1 σε S /G2 /M (Σχήμα 2Ε? Σχήμα S4), ενισχύοντας την ιδέα ότι

Arhgap11a

έκφραση ελέγχεται σε ένα κυτταρικό κύκλο εξέλιξης-εξαρτώμενο τρόπο. Κυτταρικό κύκλο-εξαρτώμενη έκφραση Arhgap11a ανιχνεύθηκε επίσης σε άλλες καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρικές γραμμές εκτός HCT116, όπως DLD1, ΗΤ29 και KM125M (Σχήμα 2F) και HeLa (Σχήμα S5), καθώς και σε κυτταρικές γραμμές μη καρκινικά όπως κύτταρα ΗΕΚ293 ( Σχήμα S6), γεγονός που υποδηλώνει την παρουσία ενός γενικού μηχανισμού για αυτό το χαρακτηριστικό ρύθμισης έκφρασης του

Arhgap11a

σε πολλούς τύπους κυττάρων. Για να διαλευκανθεί ο μηχανισμός που υπογραμμίζει την κύκλο-εξαρτώμενη κυτταρική έκφραση του Arhgap11a, εξετάσαμε περαιτέρω τον μεταγραφικό έλεγχο αυτού του γονιδίου. Οι παράγοντες E2F οικογένειας μεταγραφής έχουν τεκμηριωθεί για να λειτουργήσει σε ένα κυτταρικό κύκλο με τρόπο που εξαρτάται [1]. Παρατηρήσαμε ότι μια υποθετική αλληλουχία E2F-σύνδεσης (TTTCGCGC) [23] βρισκόταν στο -27 να -20 ζεύγη βάσης από τη θέση έναρξης μεταγραφής του Arhgap11a. Χρωματίνης ανοσοκαταβύθιση (μάρκας) πειράματα απέδειξαν την άμεση σύνδεση των E2F1 με την εν λόγω περιοχή (Σχήμα 2G), που μπορεί να εμπλέκεται στην ενεργοποίηση της μεταγραφής εξαρτάται από τον κύκλο των κυττάρων αυτού του τόπου. Μία δοκιμασία λουσιφεράσης έδειξε E2F1-εξαρτώμενη μεταγραφική ενεργοποίηση του υποκινητή Arhgap11a, το οποίο έχει αποκλειστεί από την ένωση με την πρωτεΐνη Rb (Σχήμα 2Η), υποδηλώνοντας τον πιθανό ρόλο της E2F /Rb οδοί στη ρύθμιση της μεταγραφής του Arhgap11a. Αντιλαμβανόμαστε πλήρως τη συμμετοχή άλλων μεταγραφικών παραγόντων, δεδομένου Arhgap11a ουσιαστικά εξέφρασε επίσης στη φάση G1 (Σχήμα 2D), αν και μπορούμε να υποθέσουμε Rb /E2F οδός θα ήταν τουλάχιστον υπεύθυνη για την αύξηση στην έκφραση Arhgap11a στη φάση S.

αναλύσεις (Α) Fucci σήμα που βασίζεται μικροσυστοιχιών. Fucci-θετικά κύτταρα HCT116 χωρίστηκαν σε Fucci-πράσινο (MAG) – και Fucci-κόκκινο (mKO2) – θετικών κυττάρων με FACS. mRNA εκχυλίζεται από αυτά τα κύτταρα και σε σύγκριση με ανάλυση μικροσυστοιχιών (δύο πειράματα dye-swap, δίνοντας τέσσερις ανεξάρτητες μικροσυστοιχιών αναλύσεις). (Β) Συνολικά, 2.023 ανιχνευτές (1.656 γονίδια) παρουσίασαν & gt? Διπλή αλλαγές στην έκφραση (Πίνακας S1) (P & gt? 0,05). Από αυτούς,

Arhgap11a

είχε υψηλή θέση, και οι τρεις ανιχνευτές για

Arhgap11a

ήταν μεταξύ των κορυφαίων κατάταξη ανιχνευτές για RhoGAPs. Οι τρεις ανιχνευτές ήταν ειδικά για τις υποδεικνυόμενες φίλτρα του

Arhgap11a

mRNA (

αριστερά

). Οι τρεις έντονη τελείες (# 1, # 2, # 3) στα διαγράμματα διασποράς αντιπροσωπεύουν φορές αλλαγές (

δεξιά

). (C) κυττάρων εξαρτάται από τον κύκλο έκφραση

Arhgap11a

mRNA επιβεβαιώθηκε με qPCR. Τα δεδομένα έκφρασης κανονικοποιήθηκαν σε

GAPDH

(n = 3). (D) των κυττάρων εξαρτάται από τον κύκλο έκφραση

Arhgap11a

πρωτεΐνες. (

Δικαίωμα

) κυτταρομετρίας ροής αναλύσεις Fucci-κυττάρων που εκφράζουν HCT116. προφίλ του κυτταρικού κύκλου ήταν χρωματική κωδικοποίηση: G1, κόκκινο? πρώιμη S, κίτρινο? και S /G2 /M, πράσινο (

επάνω δεξιά

). περιεχόμενο DNA μετρήθηκαν με Hoechst