Αφηρημένο

Το εξωκυττάριο 5′-τριφωσφορική αδενοσίνη (ΑΤΡ) είναι ένας μόριο που επάγει μια πληθώρα αποτελεσμάτων που κυμαίνονται από τη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε διαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων συμπεριφορά σηματοδότησης. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, ΑΤΡ αναφέρθηκε ότι διεγείρει τον πολλαπλασιασμό των επιθηλιακών κυττάρων και πιθανώς προάγουν ανθεκτικότητα σε θεραπείες κατά του καρκίνου. Ωστόσο, ο ακριβής ρόλος αυτού του κινδύνου σηματοδότησης μόριο επί καρκινικό εντερικά επιθηλιακά κύτταρα (IECS) σε απόκριση σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες παραμένει άγνωστος. Για την αντιμετώπιση πώς ΑΤΡ μπορεί να επηρεάσουν την απόκριση των καρκινικών IECS σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, χρησιμοποιήσαμε κύτταρα Caco-2, που εμφανίζουν εντεροκυττάρων-όπως χαρακτηριστικά, για να προσδιοριστεί η επίδραση του ΑΤΡ στην έκφραση της αντοχής πολυφαρμάκου που σχετίζεται με πρωτεΐνη 2 (MRP2). Γονιδιακή έκφραση και η πρωτεΐνη προσδιορίστηκαν με ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qRT-PCR) και κηλίδωση Western. Αντοχή σε ετοποσίδη, σισπλατίνη και ντοξορουμπικίνη προσδιορίστηκε με προσδιορισμούς ΜΤΤ σε απόκριση προς διέγερση ΑΤΡ των κυττάρων Caco-2 και σε κύτταρα των οποίων η έκφραση MRP2 ήταν κάτω-ρυθμίζονται από shRNA. ATP αύξησε την έκφραση του MRP2 τόσο σε επίπεδο mRNA και πρωτεΐνης. έκφραση MRP2 εμπλέκεται μια ΑΤΡ-εξαρτώμενη διέγερση του μονοπατιού σηματοδότησης MEK /ERK που σχετίστηκε με μια αύξηση στην σχετική αντίσταση των κυττάρων Caco-2 για να ετοποσίδη. Κατάργηση της έκφρασης MRP2 χρησιμοποιώντας shRNA μείωσε σημαντικά την προστατευτική δράση των MRP2 προς ετοποσίδη, καθώς και στη σισπλατίνη και δοξορουβικίνη. Αυτή η μελέτη περιγράφει τον μηχανισμό με τον οποίο το ΑΤΡ μπορεί να συνεισφέρει στην χημειοαντίσταση καρκινικών IECS σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Δεδομένης της ετερογένειας του παχέος απαντήσεις αδενοκαρκίνωμα σε αντικαρκινικά φάρμακα, τα ευρήματα αυτά απαιτούν περαιτέρω μελέτη για να κατανοήσουν το ρόλο των υποδοχέων Ρ2 στη θεραπεία του καρκίνου των ναρκωτικών και την ανάπτυξη νέων θεραπειών που στοχεύουν στη ρύθμιση της δραστηριότητας υποδοχέα Ρ2

Αιτιολογική αναφορά.: Vinette V, Placet Μ, Arguin G, Gendron ΠΠ (2015) σε πολλαπλά σχετιζόμενες με την αντοχή Έκφραση πρωτεΐνης 2 απορυθμίζεται από 5′-τριφωσφορική αδενοσίνη στα κύτταρα του καρκίνου του παχέος εντέρου και ενισχύει την επιβίωσή τους σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα. PLoS ONE 10 (8): e0136080. doi: 10.1371 /journal.pone.0136080

Επιμέλεια: Hendrik W. van Veen, Πανεπιστήμιο του Cambridge, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 25 Μαρ 2015? Αποδεκτές: 29 Ιούλη του 2015? Δημοσιεύθηκε: 21 του Αυγούστου, 2015

Copyright: © 2015 Vinette et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η έρευνα υποστηρίχθηκε από μια καναδική Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας που λειτουργούν επιχορήγησης (MOP-286567) με FPG F.P.G. Είναι μέλος της FRQS που χρηματοδοτούνται «Centre de Recherche du νοσοκομειακό κέντρο de Sherbrooke»

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του παχέος (CRC) περιλαμβάνει την ανώμαλο πολλαπλασιασμό των εντερικών επιθηλιακών κυττάρων (IECS) που προκύπτει από αυθόρμητες γενετικές αλλοιώσεις ή ως αποτέλεσμα της συνεχούς προσβολές όπως παρατηρείται σε ασθενείς με χρόνιες φλεγμονώδη νόσο του εντέρου [1,2]. Πρόοδος από ένα απλό νεοπλασματικής βλάβης σε αδενοκαρκίνωμα περιλαμβάνει όχι μόνο τις εγγενείς παράγοντες, όπως την έκφραση των ογκογονιδίων όπως

c-myc

ή η καταστολή /μετάλλαξη των γονιδίων καταστολής, όπως

TP53

,

αλλά

επίσης τη συμμετοχή μιας σειράς διαλυτών ρυθμιστικών παραγόντων που περιλαμβάνουν κυτοκίνες, εκ των οποίων ο ΤΟΡ-β είναι μία καλά τεκμηριωμένη προ-ογκογόνο παράγοντα [1,3]. Πρόσφατα, εξωκυτταρικό 5′-τριφωσφορική αδενοσίνη (ΑΤΡ) έχει ταυτοποιηθεί ως ένα μόριο σηματοδότησης κίνδυνος εκκρίνονται κατά τη διάρκεια της φλεγμονής και στο μικροπεριβάλλον του όγκου για να προσελκύσουν κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος και να συντονίζουν τα καρκινικά κύτταρα συμπεριφορά [4,5]. Στην περιοχή του όγκου, αναφέρθηκε ότι η συγκέντρωση ΑΤΡ θα μπορούσε να φθάσει 100 mM, η οποία είναι πέρα ​​από την συγκέντρωση που απαιτείται για να ενεργοποιήσει τους υποδοχείς νουκλεοτιδίου [6,7].

Το εξωκυτταρικό ΑΤΡ είναι η ενδογενής αγωνιστής του υποδοχέα Ρ2Χ οικογένεια του συνδέτη διαύλων ιόντων και ένας περιορισμένος αριθμός του Ρ2γ υποοικογένεια των συζευγμένου με πρωτεΐνη υποδοχείς, δηλαδή το ανθρώπινο Ρ2Υ

2 και Ρ2Υ

11 υποδοχείς [8]. Σε συμπαγείς όγκους, όπως CRC, ΑΤΡ αποδειχθεί ότι μειώνει την ανάπτυξη των υψηλής ποιότητας καρκινικών κυττάρων κύστης τόσο

in vitro

και

in vivo

[9]. Σε κλινικές ρυθμίσεις, ΑΤΡ εγχύσεις σε ασθενείς με προχωρημένο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα βρέθηκε ότι ενισχύει σημαντικά την ποιότητα ζωής και τη συνολική επιβίωση σε αυτούς που λαμβάνουν εγχύσεις

vs

. η ομάδα του εικονικού φαρμάκου [10-12]. Ωστόσο, ο αντίκτυπος της ΑΤΡ επί εντερικών επιθηλιακών καρκινικών κυττάρων δεν είναι όπως σαφώς καθορισμένη.

In vitro

, ΑΤΡ αναφέρθηκε ότι αυξάνεται πολλαπλασιασμό των κυττάρων Caco-2 μέσω της ενεργοποίησης του καταρράκτη σηματοδότησης ΜΑΡΚ [13], που οδηγεί τους συγγραφείς να προτείνουν ότι το ΑΤΡ μπορεί να δράσει ως μιτογόνο για καρκινικό IECS και ενδεχομένως να εμπλέκονται σε αντίσταση στη θεραπεία. Μια άλλη μελέτη ανέφερε ότι οι υψηλές συγκεντρώσεις ΑΤΡ (& gt? 1 mM) κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Caco-2 [14]. Ήταν ακόμη και πρότεινε ότι η ανοσία κατά του όγκου που προκύπτει από χημειοθεραπεία μπορεί να προκαλείται από ΑΤΡ απελευθέρωση από κύτταρα όγκου και την ενεργοποίηση της οικογένειας υποδοχέων NOD-όπως, περιοχή pyrin περιέχει 3 (NLRP3) inflammasome [15], υποδηλώνοντας έτσι τη συμμετοχή του η πουρινεργικών Ρ2Χ7 υποδοχέα [16,17]. Ωστόσο, Ρ2Χ7 μαζί με τους υποδοχείς Ρ2Υι έχουν επίσης συσχετιστεί με την προώθηση του όγκου [18,19]. Υπάρχει επομένως σαφής ανάγκη να διευκρινιστεί η δράση της ΑΤΡ στο CRC.

Για περισσότερα από 40 χρόνια, η επικρατούσα τάση θεραπεία για προχωρημένη CRC όπως ήταν ο συνδυασμός των φαρμάκων προκαλούν βλάβη στο DNA, όπως ετοποσίδη ή 5-φθοριοουρακίλη (5 -FU) σε συνδυασμό με παράγοντες αλκυλίωσης σισπλατίνη ή οξαλιπλατίνη, καθώς και δοξορουβικίνη και των παραγώγων της [20-24]. Αν και οι περισσότερες περιπτώσεις του CRC είναι ετοποσίδη ανθεκτικά, υπάρχουν μελέτες που δείχνουν τη χρήση αυτού του αναστολέα της τοποϊσομεράσης II σε συνδυασμό με ρεσβερατρόλη ή FTY720 (φινγκολιμόδη) για να αποφευχθεί η αντίσταση των ναρκωτικών [24,25]. Παρ ‘όλα αυτά, μία συγκεκριμένη κατηγορία πρωτεϊνών που ανήκουν στην ΑΤΡ-Binding Cassette (ABC) υπεροικογένεια μπορεί να επηρεάσει την αποτελεσματικότητα αυτών των θεραπειών οφείλεται στην ικανότητά τους να εξάγουν χημειοθεραπευτικούς παράγοντες έξω από τα κύτταρα [26]. Οι μεταφορείς ABC περιλαμβάνουν επτά υποοικογένειες (Α-G). Οικογένεια C (ABCC) αποτελείται από 13 μέλη εκ των οποίων εννέα έχουν περιγραφεί ως πολυφαρμακευτική αντίσταση που συνδέονται με πρωτεΐνες (MRPs) που περιλαμβάνουν MRP2 (ABCC2) [26]. Στον καρκίνο, η θετική έκφραση του MRP2 έχει συσχετισθεί με την επιθετικότητα καρκίνωμα της χοληδόχου κύστης και φτωχή πρόγνωση [27], καθώς και χημειοαντίσταση και κακή πρόγνωση σε ασθενείς με οισοφαγικό καρκίνωμα πλακώδους κυττάρου [28]. Παρά το γεγονός ότι η αύξηση στην έκφραση μεταγραφή MRP2 έχει μετρηθεί σε ιστούς του καρκίνου του παχέος εντέρου, καμία συσχέτιση έχει γίνει μέχρι σήμερα μεταξύ των επιπέδων έκφρασης MRP2 και τη σοβαρότητα της νόσου ή την πρόγνωση [26]. Παρ ‘όλα αυτά, η έκφραση της MRP2 έχει σημαντικά συσχετίζεται με αυξημένη αντοχή στη σισπλατίνη αλλά όχι σε 5-FU, υποδηλώνοντας ένα ρόλο στην αντίσταση καρκίνου του παχέος εντέρου σε επιλεγμένες χημειοθεραπευτικά φάρμακα [26,29]. Λαμβάνοντας υπόψη τα παραπάνω, ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί κατά πόσο η διέγερση των εντερικών επιθηλιακών καρκινικών κυττάρων με ΑΤΡ οδηγεί σε μία διαμόρφωση της έκφρασης MRP2, την οποία αξίωμα συνεπάγεται αυξημένη αντίσταση των καρκινικών κυττάρων σε ορισμένους χημειοθεραπευτικά φάρμακα και ως εκ τούτου να είναι επιζήμια για η θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου με την αύξηση της επιβίωσης των καρκινικών κυττάρων.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

τροποποιημένο μέσο Eagle του Dulbecco (DMEM), πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη, HEPES και εμβρυϊκό βόειου ορού (FBS) αγοράσθηκαν από Wisent (St. Bruno, QC, Canada). Glutamax ήταν από την Life Technologies (Burlington, ON, Καναδάς). ΑΤΡ, σουραμίνη και pyridoxalphosphate-6-αζοφαινυλ-2 ‘, 4’-δισουλφονικού οξέος (ΡΡΑϋδ) ήταν από τη Sigma-Aldrich (Oakville, ΟΝ, Canada). Η ΜΕΚ1 /2 (UO126), ρ38 ΜΑΡΚ (SB203580), ΡΙ3Κ (LY294002) και ΝΡ-κΒ (ΒΑΥ-11-7082) αναστολείς, καθώς και 3- (4,5-διμεθυλο-2-θειαζολυλ) -2,5 βρωμιούχο -διφαινυλ-2Η-τετραζολίου (ΜΤΤ) αποκτήθηκαν από την Calbiochem (Mississauga, ON, Καναδάς). Διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) ήταν από την Fisher Scientific (Ottawa, ΟΝ, Canada). Τα πολυκλωνικά αντισώματα κουνελιού έναντι MRP2 και β-τουμπουλίνης αγοράσθηκαν από τη Cell Signaling Technology (Pickering, ΟΝ, Canada). Η υπεροξειδάση χράνου (HRP), συζευγμένης γαϊδάρου αντι-κουνελιού IgG ήταν από την Santa Cruz (Santa Cruz, CA, USA) και το αντιδραστήριο ECL από την Millipore (Toronto, ΟΝ, Canada). Τα κυτταροτοξικά φάρμακα ετοποσίδη, σισπλατίνη και δοξορουβικίνη αγοράστηκαν από το φαρμακείο χημειοθεραπεία στο Université de Sherbrooke Νοσοκομείο Κέντρο (Sherbrooke, QC, Καναδάς).

Cell Culture

Το καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου σειρά ανθρώπινου Caco -2 (ATCC, HTB37) και ανθρώπινη ΗΕΚ293Τ κυτταρική οικογένεια νεφρού εμβρύου (ATCC, CRL-11268) αναπτύχθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30]. Ειδικοί αναστολείς κινάσης προστέθηκαν σε μέσο ελεύθερο ορού 30 λεπτά πριν από την διέγερση νουκλεοτίδιο όπως παρουσιάζεται στα σχήματα. Για τις δοκιμασίες κυτταροτοξικότητας του φαρμάκου, τα κύτταρα Caco-2 αναπτύχθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ χωρίς ερυθρό φαινόλης.

Δημιουργία κυτταρικών γραμμών MRP2 shRNA

Οι 21-μερές shRNA κατασκευάσματα κατευθύνεται έναντι του ανθρώπινου MRP2 (NM_000392) αγοράστηκαν από Sigma-Aldrich ΑΠΟΣΤΟΛΗ shRNA (St. Louis, ΜΟ). Λεντιϊοί παρήχθησαν σε κύτταρα ΗΕΚ293Τ και χρησιμοποιήθηκαν για τη μόλυνση Caco-2 κυττάρων, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [31]. Για την επικύρωση της αποτελεσματικότητας shRNA, τα κύτταρα Caco-2 συλλέχθηκαν και η έκφραση MRP2 αναλύθηκαν με κηλίδωση Western και ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qRT-PCR).

Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Caco- 2 κύτταρα διεγέρθηκαν με 100 μΜ ΑΤΡ για 3 και 6 ώρες. Ολικό RNA απομονώθηκε από κύτταρα Caco-2 με ΤΚΙζοΙ αντιδραστήριο (ϋίβ Technologies) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Συμπληρωματικό DNA (cDNA) συντέθηκε από 2 μg καθαρισμένου RNA με ανάστροφη μεταγραφή χρησιμοποιώντας το σύστημα SuperScript II (Invitrogen Life Technologies, Burlington, ΟΝ, Canada). Πέντε τοις εκατό του συντίθεται cDNA χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο για qRT-PCR χρησιμοποιώντας το Brilliant ΙΙΙ Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix (Agilent Technologies, Mississauga, ON, Καναδάς). Οι αλληλουχία-ειδικοί εκκινητές για

ABCC2

(το γονίδιο που κωδικοποιεί την ανθρώπινη MRP2) ήσαν 5′- AGAGCTGGC CCTTGTACTCA -3 ‘και 5′-AGGGACAGGAACCAGGAGTT – 3’. Η γονιδιακή έκφραση κανονικοποιήθηκε σε γλυκεραλδεϋδη 3-φωσφορική αφυδρογονάση (

GAPDH

) έκφραση γονιδίων, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [32,33].

δοκιμασίες κυτταροτοξικότητας Drug

κύτταρα Caco-2 ήταν σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 7500 κύτταρα /φρεάτιο. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν για 24 ώρες, μετά την οποία η ετοποσίδη, σισπλατίνη ή δοξορουβικίνη προστέθηκε στα κατάλληλα φρεάτια σε διάφορες συγκεντρώσεις (από 10 έως 500 μΜ) και τα κύτταρα επωάστηκαν για 84 ώρες. Για πειράματα με διεγέρσεις νουκλεοτιδίων, 100 μΜ ΑΤΡ προστέθηκε στα κατάλληλα φρεάτια 6 ώρες πριν από την προσθήκη του κυτταροτοξικού φαρμάκου. Φρέσκα νουκλεοτίδια προστίθενται κάθε 24 ώρες. Αντοχή στα διαφορετικά φάρμακα προσδιορίστηκε με προσδιορισμό κυτταρικής βιωσιμότητας ΜΤΤ όπως περιγράφεται από τον κατασκευαστή. Εν συντομία, 20 μΐ 10 mg /ml ΜΤΤ προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκαν στους 37 ° C για 4 ώρες. Το μέσο απομακρύνθηκε, 100 μΐ DMSO προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και οι πλάκες αναδεύονται σε συσκευή ανακίνησης για 5 λεπτά σε 1500 rpm για να διαλυτοποιηθούν φορμαζάνης. Οι οπτικές πυκνότητες μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη μικροπλακών (Molecular Devices VERSAmax ανάγνωσης μικροπλάκας, Guelph, ΟΝ, Canada) στα 560 nm και στα 670 nm για να προσδιοριστεί το σήμα υποβάθρου.

κηλίδωση Western

Caco-2 κύτταρα διεγέρθηκαν με 100 μΜ ΑΤΡ επί 6 και 18 ώρες. Τα κύτταρα πλύθηκαν με παγωμένο PBS και λύθηκαν σε ρυθμιστικό Triton (40 mM Tris (ρΗ 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% Triton Χ-100, 0.2 mM ορθοβαναδικό νάτριο, 40 mM γλυκεροφωσφορικό, 0,1 mM φαινυλομεθανοσουλφονυλο φθορίδιο και μείγμα αναστολέα πρωτεάσης από την Sigma-Aldrich). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Protein Assay Bio-Rad. Τα δείγματα θερμαίνονται για 5 λεπτά στους 95 ° C, υποβλήθηκε σε 7% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες πολυβινυλιδενο φθορίδιο για ανοσοκηλίδωση πρωτεΐνης όπως περιγράφηκε προηγουμένως [32,33]. Ανοσοκηλίδωση για MRP2 εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας αραίωση 1 /1.000 πολυκλωνικών κουνελιού αντι-MRP2 και την ειδική πρωτεϊνική ζώνη ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας αραίωση 1: 10.000 του HRP-συζευγμένου IgG γαϊδάρου αντι-κουνελιού και έγιναν ορατά σε φιλμ αυτοραδιογραφίας με τη χρήση του συστήματος χημειοφωτισμού Millipore ECL . Σήμα ομαλοποιήθηκε όπως περιγράφεται με 1 /5.000 αραίωση αντι-β-τουμπουλίνης αντίσωμα κουνελιού [32,33].

Μέτρηση της εξω- νουκλεοτιδάσης δραστηριότητα

Η δράση της ΑΤΡάσης προσδιορίστηκε σε προσκολλημένα Caco -2 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε 24-πηγαδιών πλάκα ακολουθώντας το πρωτόκολλο που περιγράφεται από Wink et al. [34]. Εν συντομία, προσκολλημένα κύτταρα Caco-2 επωάστηκαν το μέσο αντίδρασης (80 mM Tris-base, 5 mM CaCl2, 150 mM NaCl (ρΗ 7,4)), και ενζυμική την ενζυμική αντίδραση ξεκίνησε με την προσθήκη 0,2 mM ΑΤΡ για 20 λεπτά στους 37 ΝΤΟ. Η απελευθέρωση ανόργανου φωσφορικού (Ρ

i) στο μέσο επώασης μετρήθηκε με πράσινου του μαλαχίτη μέθοδο [35], και η συγκέντρωση πρωτεΐνης του ομογενοποιήματος κυττάρου προσδιορίστηκε όπως περιγράφεται παραπάνω. Η ειδική δραστικότητα εκφράστηκε ως nmol P

i απελευθερώνονται /min /mg πρωτεΐνης.

Στατιστική ανάλυση

Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση τιμή ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM). Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μη ζευγαρωμένο

t

δοκιμή ή ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) με πολλαπλή σύγκριση μετα-τεστ Dunnett όπως περιγράφεται στο σχήμα λεζάντες. Ο αριθμός των επαναλήψεων για κάθε πείραμα παρουσιάζεται επίσης στο σχήμα θρύλους. IC

50 τιμές υπολογίστηκαν από τις καμπύλες επιβίωσης χρησιμοποιώντας ανάλυση μη γραμμικής παλινδρόμησης από τη μέση τιμή των τριών έως τεσσάρων πειραμάτων. Η σχετική συντελεστής αντίστασης (RR) προσδιορίστηκε διαιρώντας την IC

50 διεγερμένων ή shMRP2-επιμολυσμένα κύτταρα με την IC

50 κυττάρων ελέγχου, όπως έχει ήδη αναφερθεί [36,37].

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Προς τα πάνω ρύθμιση έκφρασης MRP2 από ΑΤΡ διαμεσολαβείται στο επίπεδο της μεταγραφής και πρωτεϊνών από υποδοχείς Ρ2Υ

το στερεό μικροπεριβάλλον του όγκου είναι πλούσιο σε αυξητικούς παράγοντες, κυτοκίνες και χημειοκίνες. Αυτοί οι παράγοντες συμβάλλουν στο σχηματισμό μιας φλεγμονώδους μικροπεριβάλλον που διεγείρουν την ογκογένεση [1,38]. Εξωκυτταρική ΑΤΡ βρίσκεται επίσης σε αφθονία στην περιοχή του όγκου [6,7], όπου μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του πνεύμονα, του μαστού και του παχέος εντέρου [13,39,40], καθώς και την υποστήριξη της εισβολής των καρκινικών κυττάρων του προστάτη και τη μετανάστευση του πνεύμονα και καρκινικές IECS [41-43]. Σε αυτή τη μελέτη, προτείναμε ότι η παρουσία του ΑΤΡ στη γειτονία του όγκου θα μπορούσε να συμβάλει στην αντοχή φαρμάκου όπως συχνά αναφερθεί σε ασθενείς υπό χημειοθεραπεία για καρκίνο του παχέος εντέρου [44]. Στην πραγματικότητα, η ανάλυση της έκφρασης mRNA σε MRP2 IECS διεγερμένα με 100 μΜ ΑΤΡ επί 3 και 6 ώρες με τη χρήση qRT-PCR αποκάλυψε ότι θεραπείες νουκλεοτιδίου οδήγησε σε μια αύξηση 1,5 έως 2 φορές στην έκφραση του MRP2 μεταγραφής (Σχήμα 1Α). Δεδομένου ότι η MRP2 ρυθμίζεται στο μεταγραφικό επίπεδο, η έκφραση της πρωτεΐνης MRP2 στη συνέχεια αναλύθηκαν. Η διέγερση των κυττάρων Caco-2 με 100 μΜ ΑΤΡ επί 6 ή 18 ώρες αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης MRP2, όπως προσδιορίζεται με ανοσοκηλίδωση (Εικόνα 1Β και 1Γ). Η έκφραση του MRP2 επίσης ρυθμίζεται αυξητικά από 1,5 έως 2 φορές μετά τη θεραπεία νουκλεοτιδίων, όπως εκτιμήθηκε με πυκνομετρία (Σχήμα 1 C). Για να επικυρωθεί ότι η προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης MRP2 σε IECS πράγματι ρυθμίζεται από υποδοχείς νουκλεοτιδίων Ρ2, τα κύτταρα Caco-2 υποβλήθηκαν σε αγωγή με δύο γνωστές γενικές ανταγωνιστές υποδοχέων Ρ2, δηλαδή ΡΡΑϋδ και σουραμίνη. Μετά την προσθήκη του τελευταίου σε κύτταρα Caco-2 πριν από τη διέγερση με 100 μΜ ΑΤΡ για 6 ώρες (Σχήμα 2), ανάλυση κηλίδας Western απεκάλυψε ότι ΡΡΑϋδ δεν είχε σημαντική επίδραση επί της έκφρασης πρωτεΐνης MRP2 λαμβάνοντας υπόψη ότι η παρουσία του σουραμίνη οδήγησε σε σημαντική μείωση της ΑΤΡ-εξαρτώμενη επαγωγή της έκφρασης MRP2 (Σχήμα 2). Λαμβάνοντας υπόψη ότι το ΑΤΡ είναι η κύρια αγωνιστής του ανθρώπινου Ρ2Χ και Ρ2Υ

2 και 11 υποδοχείς, και ότι η σουραμίνη είναι ένας πιο ισχυρός ανταγωνιστής του Ρ2γ

2 ενώ ΡΡΑϋδ είναι πιο ισχυρός ανταγωνιστής του Ρ2γ

1, 4, 6 και Ρ2Υ

13 καθώς επίσης και P2X1, 2, 3 και 5 υποδοχείς [45,46], η παρούσα αποτέλεσμα υποδηλώνει ότι Ρ2Υ

2 μπορεί να εμπλέκεται στην ρύθμιση της έκφρασης MRP2. Παρά το γεγονός ότι ελήφθησαν παρόμοια αποτελέσματα με άλλες καρκινικές εντερικών επιθηλιακών κυτταρικών σειρών Τ84, DLD-1, ΗΤ-29 και HCT116 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), η εστίασή μας δόθηκε σε κύτταρα Caco-2 δεδομένου ότι αυτά τα κύτταρα εμφανίζουν τυπικά χαρακτηριστικά του εντεροκυττάρων [47]. Αυτή η αυξημένη έκφραση σε ΑΤΡ-ευαίσθητους υποδοχείς Ρ2 έχει προηγουμένως αναφερθεί σε δύο ανθρώπινα κύτταρα καρκινώματος παχέος εντέρου και κυτταρικές σειρές [48]. Πράγματι, η έκφραση του

2 υποδοχέα Ρ2Υ, καθώς και Ρ2Υ

4, αναφέρθηκε ότι ρυθμίζεται προς τα πάνω σε ανθρώπινους ιστούς καρκίνου του κόλου [49]. Η ενεργοποίηση αυτών των υποδοχέων έχει συσχετιστεί με τη ρύθμιση της καρκινικής κυτταρικής ανάπτυξης και αντοχή σε απόπτωση [18]. Ομοίως με Ρ2Υ έκφραση

2 υποδοχέα, καρκινικούς ιστούς που απομονώθηκαν από ασθενείς CRC έδειξαν αυξημένη έκφραση των επιπέδων μεταγραφής MRP2 σε σύγκριση με μη-καρκινικές περιθώρια [29]. Παρά το γεγονός ότι το ΑΤΡ φαίνεται να είναι ο κύριος διαλυτός παράγοντας που συμβάλλει στην αύξηση της έκφρασης MRP2 σε κύτταρα Caco-2, δεν μπορούμε να αποκλειστεί ότι η αδενοσίνη 5′-διφωσφορική (ΑϋΡ) θα μπορούσε να διαδραματίσει έναν δευτερεύοντα ρόλο στη διαδικασία αυτή. Επειδή ADP θα μπορούσε να δημιουργηθεί μέσω της υδρόλυσης του ΑΤΡ από εξω- τριφωσφορικό νουκλεοσίδιο diphosphohydrolase (Ε-NTPDase, ΕΚ 3.6.1.5) που υπάρχουν στην επιφάνεια των κυττάρων Caco-2 [33,50], διαπιστώσαμε ότι προσκολλημένα κύτταρα Caco-2 έχουν μια δραστηριότητα ΑΤΡάσης 1,32 ± 0,04 nmol /min /mg πρωτεΐνης. Η δράση της ΑΤΡάσης είναι ο μέσος όρος ± SEM τριών πειραμάτων που έγιναν εις τριπλούν. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν περαιτέρω ότι η διέγερση των καρκινικών IECS με ΑΤΡ αυξάνει την έκφραση του MRP2, μια πρωτεΐνη γνωστή για το ρόλο της στην αντίσταση των κυττάρων σε έναν αριθμό χημειοθεραπευτικών παραγόντων που χρησιμοποιούνται στη θεραπεία του ορθοκολικού καρκίνου [26].

Ανθρώπινο εντερικού αδενοκαρκινώματος κύτταρα Caco-2 διεγέρθηκαν με 100 μΜ ΑΤΡ για 3 ή 6 ώρες, ή με όχημα ελέγχου μόνο (Ctrl). (Α) Διέγερση με ΑΤΡ αυξήθηκε σημαντικά

ABCC2

γονίδιο έκφρασης (κωδικοποιεί για MRP2) κατά 1,5 έως 2 φορές σε σύγκριση με μη-διεγερμένα Ctrl όπως προσδιορίζεται με ανάλυση qRT-PCR. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM των πέντε επιμέρους πειράματα που πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με μονόδρομη ANOVA με πολλαπλές συγκρίσεις post-test Dunnett. * P & lt? 0.05, ** p & lt? 0.01 σε σύγκριση με το Ctrl. (Β) Τυπικό αποτέλεσμα στυπώματος Western δείχνει ενισχυμένη έκφραση MRP2 σε ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα. Ανάλυση (Γ) Η πυκνομετρική αποκάλυψε ότι 100 μΜ ΑΤΡ προκαλούμενη έκφραση πρωτεΐνης MRP2 κατά περισσότερο από 1,5 φορές μετά από 6 και 18 ώρες διέγερσης σε σύγκριση με τον έλεγχο (Ctrl). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM των πέντε ξεχωριστά πειράματα. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με μονόδρομη ANOVA με πολλαπλές συγκρίσεις post-test Dunnett. * P & lt? 0.05 σε σύγκριση με Πίν.

Η

κύτταρα Caco-2 υποβλήθηκαν σε αγωγή με 100 μΜ ΡΡΑϋδ ή σουραμίνη 30 λεπτά πριν από την προσθήκη 100 μΜ ΑΤΡ για 6 ώρες. έκφραση MRP2 αναλύθηκε με κηλίδωση Western. ΑΤΡ διέγειρε την έκφραση του MRP2 σε σύγκριση με μη-διεγερμένα κύτταρα (N-S), ενώ η προσθήκη σουραμίνη πριν από την διέγερση ΑΤΡ μειώθηκαν έντονα έκφραση MRP2 σύγκριση με ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα με την παρουσία του οχήματος (DMSO (-)) μόνο. Το παρουσίασε κηλίδα είναι χαρακτηριστικό των τριών ξεχωριστών σετ των πειραμάτων.

Η

Ρύθμιση της έκφρασης MRP2 ρυθμίζεται από τον καταρράκτη MEK /ERK σηματοδότησης

Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι εξωκυττάριο ΑΤΡ, μέσω της ενεργοποίηση των υποδοχέων Ρ2γ, διεγείρει πολλές ενδοκυττάριων οδών σηματοδότησης [13,30,41,51]. Αυτά τα μονοπάτια είναι κατά κύριο λόγο συνδέονται με την ΑΤΡ-εξαρτώμενη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού [13,14], κυτταρική κινητικότητα και μικροσωληνίσκων αναδιοργάνωση [41], η έκκριση φλεγμονωδών παραγόντων, όπως PGE

2 σε μια ΝΡκΒ-εξαρτώμενο τρόπο [30] και της διαφοροποίησης του οξαλικό, ηλεκτρολύτες και τη μεταφορά της γλυκόζης [52-55]. Για τον προσδιορισμό των καταρρακτών σηματοδότησης που εμπλέκονται στη ρύθμιση της έκφρασης MRP2, τα κύτταρα Caco-2 προκατεργάστηκαν με διάφορους αναστολείς, κυρίως BAY11-7082 (ΝΡκΒ), U0126 (ΜΕΚ 1/2), LY294002 (ΡΙ3Κ) και SB203580 (p38) για 30 λεπτά και στη συνέχεια διεγείρονται με 100 μΜ ΑΤΡ επί 6 ώρες. Κύτταρα κατεργασμένα με τον αναστολέα καταρράκτη σηματοδότησης ΜΕΚ /ERK U0126 παρουσίασαν σημαντική μείωση της έκφρασης MRP2 σε σύγκριση με ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα (σχήμα 3Α). πυκνομετρική ανάλυση επιβεβαίωσε ότι η αναστολή της οδού ΜΕΚ-ΕΚΚ μείωσε σημαντικά την έκφραση MRP2 κατά 2-φορές (Σχήμα 3Β). Αξίζει να σημειωθεί ότι η αναστολή της ΑΤΡ-εξαρτώμενη ενεργοποίηση της /2 μονοπάτι ERK1 έχει προηγουμένως συσχετιστεί με μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων αδενοκαρκινώματος κόλου [13] και, αντιστρόφως, σε αυξημένη βιωσιμότητα των ανθρώπινων στρωματικών κυττάρων του ενδομητρίου [56]. Η οδός ERK έχει επίσης συσχετιστεί με αντίσταση στη θεραπεία του καρκίνου με τη ρύθμιση της έκφρασης του ανθεκτικού σε πολλά φάρμακα πρωτεϊνών (MDR), συμπεριλαμβανομένων των MRP2, σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [57], καθώς και σε Caco-2 κύτταρα [58]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η σηματοδότηση ERK ενέχεται στην ΑΤΡ-επαγόμενη έκφραση MRP2 σε Caco-2 κύτταρα ανθρώπινου αδενοκαρκινώματος.

κύτταρα Caco-2 προκατεργάστηκαν με ΝΡκΒ (2 μΜ, Bay, BAY11-7082), ΜΕΚ1 /2 (10 μΜ, U0, U0126), ΡΙ3Κ (20 μΜ, LY, LY294003) και ρ38 (20 μΜ, SB, SB203580) αναστολείς για 30 λεπτά και διεγείρονται με 100 μΜ ΑΤΡ επί 6 ώρες. (Α) Μια τυπική κηλίδα Western έναντι MRP2 εμφανίζεται από την ανάλυση η οποία (Β) πυκνομετρία έδειξαν σημαντική μείωση στην έκφραση MRP2 παρουσία U0126, ένας εκλεκτικός αναστολέας ΜΕΚ 1/2. Τα κύτταρα προκατεργάστηκαν με U0126 οδήγησε σε μείωση κατά 75% στην έκφραση της MRP2 σύγκριση με ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα μόνο (-). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως η μέση τιμή ± SEM τριών ξεχωριστών πειραμάτων που εκτελούνται εις διπλούν. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε από ένα αταίριαστο

t-test

, όπου * ρ & lt? 0.05 έναντι μη διεγερμένα (NS) ή ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα όπως υποδεικνύεται στο σχήμα.

Η

Η αυξημένη έκφραση του MRP2 σε καρκινικά κύτταρα παρέχει αντίσταση στο κυτταροτοξικό φάρμακο ετοποσίδη

Αυξημένη έκφραση της MRP2 σε καρκίνο του παχέος εντέρου έχει συνδεθεί με την αντοχή στη σισπλατίνη, αλλά όχι σε 5-FU [29], αν και

ΑΤΡ-δέσμευσης μέλος κασέτα υπο-οικογένεια C 2

(

ABCC2

) απλότυπος παρουσιάστηκε ως προγνωστικός παράγοντας της μεταβλητότητας στη φαρμακοκινητική απάντηση FOLFIRI σχήμα σε Ιάπωνες ασθενείς CRC, το οποίο περιλαμβάνει 5-FU [59]. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η MRP2 μπορούν να εξάγουν μία ποικιλία ενώσεων, ιδιαίτερα κυτταροτοξικών φαρμάκων [60-62], μελετήσαμε την επίδραση του ΑΤΡ σε κυτταρικές επιβίωση των κυττάρων Caco-2 κατά την κατεργασία με την ετοποσίδη αντικαρκινικό φάρμακο. Σε μια πρώτη φάση, η αντίσταση των κυττάρων Caco-2 σε διάφορες συγκεντρώσεις αυτού του φαρμάκου μετρήθηκε με ή χωρίς διέγερση ΑΤΡ. Η επιβίωση των κυττάρων προσδιορίστηκε με την χρωματομετρική δοκιμή ΜΤΤ. Μια αυξημένη επιβίωση των κυττάρων παρατηρήθηκε σε κύτταρα διεγερμένα με ΑΤΡ σε σύγκριση με μη-διεγερμένα κύτταρα (Σχ 4Α), το οποίο μεταφράζεται σε σημαντική αύξηση του IC

50 τιμές (Σχήμα 4Β). Τα σχετική αντίσταση (RR) τιμές των διαφόρων καταστάσεων που υπολογίστηκαν επίσης και βρέθηκαν να είναι υψηλότερη σε κύτταρα διεγερμένα με ΑΤΡ σε σύγκριση με μη-διεγερμένα κύτταρα. Η αξία RR 1,84 δείχνει ότι οι ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα ήταν 1,84 φορές πιο ανθεκτικά στο ετοποσίδη αντικαρκινικό φάρμακο (Σχήμα 4Β). Αυτό το εύρημα υποδηλώνουν ότι η ΑΤΡ-εξαρτώμενη διέγερση της έκφρασης MRP2 οδήγησε σε αυξημένη αντίσταση των Caco-2 ανθρώπινου ορθοκολικού αδενοκαρκινώματος κύτταρα να ετοποσίδη, και έτσι να πιθανή συμμετοχή του εξωκυτταρικού ΑΤΡ και Ρ2Υ υποδοχέων σε CRC αντικαρκινικό αντίσταση φαρμακοθεραπεία. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η έκφραση MRP2 παρελθόν ήταν σχετίζονται με την αντίσταση στη σισπλατίνη, τα αποτελέσματα αυτά είναι έτσι σύμφωνη με την υπόθεση ότι οι εξαγωγές MRP2 χημειοθεραπευτικά φάρμακα έξω από τα καρκινικά κύτταρα [27,28,61] και έτσι ευνοεί την επιβίωσή τους. Ως εκ τούτου, αυτά τα ευρήματα είναι επίσης, σύμφωνα με τον προτεινόμενο ρόλο για τους υποδοχείς Ρ2Υ στην ανάπτυξη του όγκου μέσω της αντίστασης στη θεραπεία όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [13].

κύτταρα Caco-2 επωάστηκαν με αυξανόμενες συγκεντρώσεις ετοποσίδης για 84 h σε η παρουσία ή απουσία 100 μΜ ΑΤΡ προστίθενται κάθε 24 ώρες. δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί η ευαισθησία στο φάρμακο. (Α) Μια καμπύλη δόσης-απόκρισης προσαρμόστηκε στα δεδομένα για να προσδιοριστεί η τοξικότητα (IC

50 τιμή) του φαρμάκου. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μια μη γραμμική καμπύλη επιβίωσης ενός τυπικού απόκρισης. Τα (Β) IC

50 και RR αξίες που παρουσιάζονται στο ιστόγραμμα και τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SEM τριών έως τεσσάρων ανεξάρτητων πειραμάτων που εκτελούνται εις τριπλούν. Η στατιστική σημαντικότητα καθορίστηκε με αταίριαστα

t-test

, όπου * ρ & lt? 0.05 σε σύγκριση με Πίν.

Η

Η ακύρωση της έκφρασης MRP2 οδηγεί σε μειωμένη αντίσταση των κυττάρων σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα

Μετά την παρατήρηση ότι το ΑΤΡ-διεγερμένα κύτταρα Caco-2 επεδείκνυαν μια αύξηση στην έκφραση MRP2 και ήταν πιο ανθεκτικά στην κυτταροτοξικότητα ετοποσίδη, διερευνήσαμε κατά πόσον η αναστολή της MRP2 θα μπορούσε να έχει το αντίθετο αποτέλεσμα. Για να επαληθευτεί αυτή η υπόθεση, η έκφραση MRP2 είχε ακυρωθεί σε κύτταρα Caco-2 με τη χρήση shRNA. Λεντοϊών μόλυνση των κυττάρων Caco-2 με shRNA κατευθύνεται εναντίον MRP2 (sh305 και sh307) κατήργησε την έκφραση πρωτεΐνης με 90-100% (Σχήμα 5Α). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Β, Caco-2 κύτταρα ακυρωθεί για MRP2 ήταν λιγότερο ανθεκτικά σε ετοποσίδη θεραπεία, με IC

50 τιμές των 328,2 μΜ και 108,5 μΜ για shNT και shMRP2, αντίστοιχα, για μία τιμή RR 0.33 (Πίνακας 1) . Η αναστολή της έκφρασης MRP2 ευαισθητοποιημένων επίσης κύτταρα Caco-2 στο κυτταροτοξική δράση της σισπλατίνης και δοξορουβικίνη (Πίνακας 1). Με την παρουσία της cisplatin ή doxorubicin, Caco-2 κύτταρα ακυρωθεί για έκφραση MRP2 ήταν περίπου 2,5 φορές λιγότερο ανθεκτικά σε θεραπεία όπως φαίνεται από τις αντίστοιχες τιμές RR 0,36 και 0,40 για σισπλατίνη και η δοξορουβικίνη, αντίστοιχα (Πίνακας 1). Αυτά τα αποτελέσματα είναι έτσι σύμφωνη με την υπόθεση ότι οι εξαγωγές MRP2 χημειοθεραπευτικά φάρμακα έξω από ορθοκολικό καρκίνο κυττάρων και έτσι ευνοεί την επιβίωσή τους. Μια αυξημένη έκφραση αυτού του μεταφορέα από εξωκυτταρικό ΑΤΡ αυξάνει περαιτέρω αυτή την αντίσταση. Από την άλλη πλευρά, η ρύθμιση προς τα κάτω της MRP2 με shRNA οδηγεί σε μείωση της αντίστασης των καρκινικών κυττάρων στα φάρμακα και στη συνέχεια μειώνει την επιβίωση των κυττάρων τους.

(Α) ανάλυση κηλίδας Western χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η κατάντη ρύθμιση της έκφρασης πρωτεΐνης MRP2 παρουσία δύο Τα siRNAs που κατευθύνονται εναντίον της πρωτεΐνης. Κάτω ρύθμιση επιτεύχθηκε με λεντοϊού μόλυνση των κυττάρων Caco-2 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [31]. shRNA στρέφεται κατά MRP2 (sh305 και sh307) κατήργησε την έκφραση πρωτεΐνης με 90-100% συγκριτικά με τα κύτταρα που εκφράζουν ένα μη-στόχευσης shRNA (shNT). (Β) κύτταρα Caco-2 που εκφράζουν σταθερά shNT ή shMRP2 (# 305) επωάστηκαν με την ετοποσίδη κυτταροτοξικό φάρμακο για 84 ώρες. Ευαισθησία στην αντικαρκινικό φάρμακο προσδιορίστηκε με τη δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας ΜΤΤ. Μια καμπύλη δόσης-απόκρισης προσαρμόστηκε στα δεδομένα για να προσδιοριστεί η τοξικότητα (IC

50 τιμή) των φαρμάκων. Οι καμπύλες μη γραμμικές επιβίωση παρουσιάζονται ως η μέση τιμή ± SEM τεσσάρων πειραμάτων που εκτελούνται εις τριπλούν. Η στατιστική σημαντικότητα υπολογίστηκε με τη χρήση πολλαπλών

t-test

συγκρίσεις, όπου * ρ & lt? 0.05 σε σύγκριση με shNT. Η αναστολή της έκφρασης ανθρώπινης shMRP2 μείωσε την αντίσταση των κυττάρων Caco-2 για ετοποσίδη σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Τα IC

50 και RR τιμές που παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

Συμπεράσματα

Στην παρούσα μελέτη, δείχνουν μια συσχέτιση μεταξύ της διέγερσης των κυττάρων αδενοκαρκινώματος ανθρώπινου κόλου με ΑΤΡ μέσω υποδοχέων Ρ2Υ και την ενεργοποίηση του μονοπατιού /ERK ΜΕΚ, καθώς και την έκφραση του MRP2. Ειδικότερα, αποδεικνύουν ότι η ενεργοποίηση των υποδοχέων Ρ2Υ από εξωκυτταρικό ΑΤΡ προκαλεί την προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης MRP2. Αυτή η αυξημένη έκφραση του MRP2 οδηγεί στην αυξημένη αντίσταση και την επιβίωση των εντερικών καρκινικών κυττάρων Caco-2 σε ορισμένα χημειοθεραπευτικά φάρμακα που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου. Αν και έχει προηγουμένως προταθεί ένας ρόλος για υποδοχείς Ρ2Υ στην ανάπτυξη του όγκου μέσω της αντίστασης στη θεραπεία [13], αυτή η μελέτη είναι η πρώτη που προτείνει ένα μηχανισμό με τον οποίο θα μπορούσε να μεσολαβεί ένα τέτοιο αποτέλεσμα. Ως εκ τούτου, τα ευρήματα αυτά απαιτούν περαιτέρω μελέτη για να περιγραφεί λεπτομερώς ο ρόλος των υποδοχέων Ρ2 σε φαρμακευτική θεραπεία του καρκίνου και την ανάπτυξη νέων θεραπειών που στοχεύουν στη ρύθμιση της δραστηριότητας υποδοχέα Ρ2. Δεδομένης της ετερογένειας του παχέος αποκρίσεων αδενοκαρκινώματος να αντικαρκινικά φάρμακα, διαλογή των ασθενών για τους υποδοχείς Ρ2 ή /και την ταυτοποίηση των μεταλλαγμένη μορφή των υποδοχέων Ρ2, καθώς και για την έκφραση MRP2 μπορούσε να είναι επωφελής για τη βελτιστοποίηση θεραπειών κατά του καρκίνου.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω τον κ Pierre Pothier για την προσεκτική ανάγνωση και την αναθεώρηση αυτού του χειρογράφου. F.P.G. Είναι μέλος της FRQS που χρηματοδοτούνται «Centre de Recherche du νοσοκομειακό κέντρο de Sherbrooke».