Αφηρημένο

Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η αλλαγμένη microRNA-9 (miR-9) έκφραση έχει εμπλακεί σε η εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου. Ωστόσο, οι ακριβείς ρόλοι και των υποκείμενων μηχανισμών miR-9 στον πολλαπλασιασμό, εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου παραμένουν άγνωστες. Σε αυτή τη μελέτη, miR-9 βρέθηκε να είναι ρυθμίζεται προς τα κάτω και αντιστρόφως ανάλογη με την έκφραση της κυκλίνης D1 και ιός ερυθροβλάστωση v-ETS E26 ογκογονιδίου ομόλογο 1 (Ets1) σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές σειρές. ανάλυση βιοπληροφορικής αποκάλυψε τις πιθανές θέσεις πρόσδεσης miR-9 στα 3′-αμετάφραστες περιοχές (3′-UTR) του κυκλίνης D1 και Ets1 mRNA. Η έκτοπη έκφραση ή knockdown του miR-9 οδήγησε σε responsively αλλοιωμένη έκφραση της κυκλίνης D1, Ets1 και κατάντη τους στόχους φωσφορυλιωθεί ρετινοβλάστωμα και μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας 9 σε καλλιεργημένα κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου SGC-7901 και AGS. Στο σύστημα αναφοράς της λουσιφεράσης, miR-9 στοχεύουν άμεσα το 3′-UTR της κυκλίνης D1 και Ets1, και τα αποτελέσματα αυτά καταργήθηκαν με μετάλλαξη των θέσεων δέσμευσης miR-9. Υπερ-έκφραση του miR-9 κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση του SGC-7901 και τα κύτταρα AGS

in vitro

και

in vivo

. Αποκατάσταση miR-9-μεσολαβούμενη ρύθμιση προς τα κάτω της κυκλίνης D1 και Ets1 με παροδική επιμόλυνση, διασώζονται τα καρκινικά κύτταρα από μείωση σε πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και εισβολή. Επιπλέον, ο αναστολέας αντι-miR-9 προήγαγαν τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού καρκινικά κύτταρα, ενώ να χτυπήσει κάτω από κυκλίνη D1 ή Ets1 phenocopied μερικώς τις επιδράσεις των miR-9 υπερ-έκφραση. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι miR-9 καταστέλλει την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 μέσω των θέσεων σύνδεσης σε 3′-UTR τους, αναστέλλοντας έτσι τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου

Παράθεση:. Zheng L, Qi Τ, Yang D, Qi Μ, Li D, Xiang Χ, et al. (2013) microRNA-9 καταστέλλει την διάδοση των πυρηνικών όπλων, εισβολή και μετάσταση των κυττάρων του καρκίνου του γαστρικού μέσω Στόχευση κυκλίνης D1 και Ets1. PLoS ONE 8 (1): e55719. doi: 10.1371 /journal.pone.0055719

Επιμέλεια: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Universidad Catolica de Chile, Χιλή

Ελήφθη: 14 Σεπ, 2012? Αποδεκτές: 29, Δεκ 2012? Δημοσιεύθηκε: 31, Ιανουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Zheng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Υποστηρίζεται από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 30600278, Αρ 30772359, Αρ 81071997, Αρ 81072073, Αρ 81272779), Πρόγραμμα για New Century εξαιρετικά ταλέντα στο Πανεπιστήμιο (NCET-06-0641), Επιστημονικό Ίδρυμα Ερευνών για την επέστρεψε Overseas κινέζικα Υποτρόφων (2008-889), και των θεμελιωδών Κονδυλίων Έρευνας για τις Κεντρικές πανεπιστήμια (2012QN224). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι η τέταρτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στον κόσμο [1]. Παρά τη βελτίωση στην χειρουργική και πολυτροπικών θεραπεία, η πρόγνωση του προχωρημένου γαστρικού καρκίνου παραμένει χαμηλή λόγω της υποτροπής, εισβολή και μετάσταση, με ποσοστό επιβίωσης 5-ετών κάτω από 30% [1]. Η καλύτερη γνώση των μηχανισμών που διέπουν την εξέλιξη του όγκου δικαιολογείται να ανακαλύψουν νέα παραδείγματα για τη διάγνωση και τη θεραπεία του καρκίνου του στομάχου [2]. Τα microRNAs (miRNAs), ένα πρόσφατα εντοπιστεί κατηγορία των μικρών και άκρως συντηρημένες μη κωδικοποιητική RNAs, μπορούν να συμμετέχουν στη μετα-μεταγραφική ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης μέσω μερικής συμπληρωματική σύνδεση με το 3 ‘αμετάφραστες περιοχές (3’-UTRs) του mRNA στόχου, με αποτέλεσμα μεταγραφική καταστολή ή mRNA αποικοδόμηση [3]. Αναδυόμενες στοιχεία δείχνουν ότι τα miRNAs που εμπλέκονται στις βιολογικές διαδικασίες που σχετίζονται με την απόπτωση, τον πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση, την εισβολή και τη μετάσταση, ενώ η απορρύθμιση των οποίων είναι ζωτικής σημασίας για την έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου [3]. Προς το παρόν είναι επείγον να διερευνήσει τους ρόλους των miRNAs και γονιδίων-στόχων τους στην πρόοδο του όγκου με πειραματικά μοντέλα.

ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο, ένας αριθμός miRNAs έχουν αναφερθεί ότι είναι παρεκκλίνοντα υπερεκφράζεται ή προς τα κάτω ρυθμισμένα κατά τη διάρκεια η εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου, συμπεριλαμβανομένων miR-21 [4], miR-15b [5], miR-16 [5], και miR-101 [6]. These miRNAs παίξει ογκογόνο ή ογκο-κατασταλτική ρόλους στη ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης, τη μετανάστευση και εισβολή από την καταστολή γονιδίων στόχων τους. Για παράδειγμα, ογκογόνο miR-21 είναι με παρεκκλίνοντα υπερεκφράζεται σε καρκίνο του στομάχου, και ενισχύει τον πολλαπλασιασμό και διεισδυτικότητα του γαστρικού καρκίνου κύτταρα με τη στόχευση αναστροφή επάγουν πλούσια σε κυστεΐνη πρωτεΐνη με Kazal μοτίβα [4]. Εν τω μεταξύ, miR-15b και miR-16 είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω σε γαστρικό καρκίνο, και συμβάλλουν στην αντίσταση σε πολλά φάρμακα γαστρικών καρκινικών κυττάρων με ρύθμιση της απόπτωσης μέσω στόχευσης Β-κυττάρου λευχαιμία /λέμφωμα 2 [5]. miR-101 είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές σειρές, ενώ έκτοπη έκφραση της miR-101 αναστέλλει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού καρκίνου κύτταρα με τη στόχευση ενισχυτή του Zeste ομολόγου 2, του κυτοχρώματος c οξειδάσης υπομονάδα II, και μυελοειδή αλληλουχία κυτταρικής λευχαιμίας 1 [6]. Ως εκ τούτου, υπήρξε το επίκεντρο να διερευνηθεί περαιτέρω η έκφραση και η λειτουργία των miRNA στη βιολογία του όγκου του καρκίνου του στομάχου.

microRNA-9 (miR-9) αναγνωρίστηκε για πρώτη φορά ως μία από τις κρίσιμες ρυθμιστικές αρχές για την ανάπτυξη , φυσιολογία και παθολογία του νευρικού συστήματος σε διάφορους οργανισμούς, συμπεριλαμβανομένων

Drosophila

, zebrafish, και τα θηλαστικά [7] – [9]. Μια σειρά από μελέτες που ακολούθησαν έδειξαν ότι αλλαγμένη έκφραση miR-9 σχετίζεται με την ανάπτυξη και την εξέλιξη των καρκίνων [10] – [14]. Προηγούμενες μελέτες υποδεικνύουν ότι miR-9 είναι σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται σε γαστρικό καρκίνο, υποδηλώνοντας εν δυνάμει ρόλο της στην πρόοδο του όγκου [15] – [18]. Επισημαίνεται επίσης ότι miR-9 μπορούν να διαμορφώσουν τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω στόχευση του ουραίου τύπου ομοιοακολουθίας 2 (CDX2) [19] και NF-kappa Β (NF-κΒ) [16]. Ωστόσο, η ακριβής λειτουργία και των υποκείμενων μηχανισμών miR-9 στην εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου ακόμη απαιτούν περαιτέρω έρευνα. Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε για πρώτη φορά, ότι miR-9 στοχεύει άμεσα κυκλίνη D1 και v-ETS ιός ερυθροβλάστωση E26 ογκογονιδίου ομόλογο 1 (Ets1), και καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων

στο vitro

και

in vivo

.

Αποτελέσματα

miR-9 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω και αντιστρόφως ανάλογη με την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές σειρές

Για να διερευνηθεί η έκφραση του miR-9 σε καρκίνο του στομάχου, γαστρικό καρκινικούς ιστούς και τις παρακείμενες μη-νεοπλασματικές βλεννογόνου συλλέχθηκαν από 86 πρωτοβάθμια περιπτώσεις. Πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR αντίστροφης μεταγραφής (RT-PCR) αποκάλυψε ότι miR-9 ρυθμισμένα προς τα κάτω σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς από ότι σε παρακείμενες μη νεοπλασματικά βλεννογόνου (

P

= 0.001, Σχ. 1Α). Η έκφραση του miR-9 ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε γαστρικό περιπτώσεων καρκίνου με βαθύτερες γαστρικό εισβολή τοίχο (

P

& lt? 0.001), λεμφαδένα μετάσταση (

P

& lt? 0.001), μακρινή μετάσταση (

P

= 0.022), και προχωρημένο στάδιο ΤΝΜ (

P

= 0,01) (Πίνακας S1). Αντίθετα, τα υψηλότερα D1 κυκλίνης και τα επίπεδα μεταγραφής Ets1 ανιχνεύτηκαν σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς (

P

& lt? 0,0001 και

P

& lt?.. 0,0001, αντίστοιχα, Σχήμα 1Β και το Σχήμα 1 C). Υπήρχε μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ του miR-9 έκφρασης και κυκλίνης επίπεδα μεταγραφής D1 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς (

P

& lt?. 0.001, εικ 1D). Επιπλέον, ένας αντίστροφος συσχετισμός μεταξύ miR-9 έκφρασης και τα επίπεδα μεταγραφής Ets1 παρατηρήθηκε επίσης σε αυτούς τους καρκινικούς ιστούς (

P

& lt?. 0,001, σχ 1Ε). Κάτω miR-9 έκφραση και υψηλότερα επίπεδα μεταγραφής κυκλίνης D1 και Ets1 παρατηρήθηκαν σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου από εκείνα σε κανονικό γαστρικού επιθηλίου GES-1 κύτταρα [20] (Σχ. 1 F). Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε για να παρατηρήσει την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 σε αυτά τα δείγματα καρκίνου (Εικ. S1). Πυρηνική κυκλίνη D1 παρατηρήθηκε σε 26/86 (30,2%) περιπτώσεις, ενώ η πυρηνική ενέργεια και κυτταρόπλασμα χρώση των Ets1 παρατηρήθηκε σε 58/86 περιπτώσεις (67,4%) (Πίνακας S1). Η ανοσοαντιδραστικότητα της κυκλίνης D1 και Ets1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε γαστρικό περιπτώσεων καρκίνου με βαθύτερες γαστρικό εισβολή τοιχώματος (

P

& lt? 0.001 και

P

= 0,001), μετάσταση λεμφαδένα (

P

& lt? 0.001 και

P

& lt? 0.001), μακρινή μετάσταση (

P

& lt? 0.001 και

P

& lt? 0.001), και προχωρημένο στάδιο ΤΝΜ (

P

& lt? 0.001 και

P

= 0,004) (Πίνακας S1). Χαμηλότερη έκφραση του miR-9 παρατηρήθηκε σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς με υψηλότερες ανοσοχρώση της κυκλίνης D1 (

P

& lt? 0,0001, Σχήμα 1G.) Ή Ets1 (

P

& lt?. 0,0001, Σχήμα 1 ). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι miR-9 ρυθμισμένα προς τα κάτω και αντιστρόφως ανάλογη με την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές σειρές.

Α, Β και C, πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι σε σύγκριση με παρακείμενες μη νεοπλασματικών βλεννογόνου (n = 86), προς τα κάτω ρύθμιση miR-9 και υψηλότερα επίπεδα μεταγραφής κυκλίνης D1 και Ets1 ανιχνεύθηκαν σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς (n = 86). D και Ε, υπήρξε μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ miR-9 έκφρασης και τα επίπεδα μεταγραφής κυκλίνης D1 ή Ets1 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς. F, κατώτερο miR-9 έκφρασης και υψηλότερες κυκλίνης D1 και Ets1 επίπεδα μεταγραφής παρατηρήθηκαν σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (ΜΚΝ-74, SGC-7901 και AGS), σε σύγκριση με εκείνες στην κανονική του γαστρικού επιθηλίου GES-1 κύτταρα. G και Η, κατώτερο έκφραση miR-9 παρατηρήθηκε σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς με υψηλότερη ανοσοχρώση της κυκλίνης D1 ή Ets1. Τα σύμβολα (* και #) δείχνουν σημαντική μείωση και μια σημαντική αύξηση από GES-1, αντίστοιχα.

Η

miR-9-κάτω ρυθμίζεται η έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 μέσω μετα-μεταγραφική καταστολή

Για να διερευνηθεί η υπόθεση ότι miR-9 μπορούν να επηρεάσουν την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 σε γαστρικό καρκίνο, υπολογιστική πρόβλεψη πραγματοποιήθηκε με τις βάσεις δεδομένων miRNA. Πιθανές θέσεις πρόσδεσης του miR-9 με υψηλή συμπληρωματικότητα σημειώθηκαν στις βάσεις 2974-2995 της κυκλίνης D1 3′-UTR και 2648-2670 του Ets1 3′-UTR (Εικ. 2Α). Για τη διερεύνηση των άμεσων επιπτώσεων της miR-9 σχετικά με την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 στο γαστρικό καρκινικά κύτταρα, εκτελέσαμε τα πειράματα miRNA υπερ-έκφραση. Σταθερή επιμόλυνση του miR-9 πρόδρομο σε SGC-7901 και AGS κύτταρα οδήγησε σε αύξηση των επιπέδων miR-9 (Εικ. S2). κηλίδα Western, RT-PCR και πραγματικού χρόνου ποσοτικής RT-PCR έδειξε ότι η υπερ-έκφραση του miR-9 οδήγησε σε μειωμένη πρωτεΐνης και μεταγραφική επίπεδα κυκλίνης D1 και Ets1 σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα από εκείνα επιμολυσμένα με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock) ( Σχ. 2Β, Σχ. 2C, και το Σχ. 2D). Επιπλέον, τα επίπεδα φωσφορυλιωμένης ρετινοβλάστωμα (pRB, ένας καθοδικός τελεστής της κυκλίνης D1) [21] και μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας 9 (ΜΜΡ-9, ένα κατάντη γονίδιο του Ets1) [22] ήταν μειωμένες σε miR-9 υπερεκφράζουν καρκινικών κυττάρων (Εικ. 2Β, Σχ. 2C, και το Σχ. 2D). Για να εξεταστεί περαιτέρω η κατασταλτική ρόλος του miR-9 στην έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1, πραγματοποιήσαμε τα πειράματα knockdown miR-9 με επιμόλυνση των αναστολέων αρνητικού ελέγχου (αντι-NC) αντι-miR-9 ή σε GES-1, SGC -7901 και AGS κύτταρα. Η επιμόλυνση του αναστολέα αντι-miR-9 μειώθηκε προφανώς την ενδογενή έκφραση miR-9 (Σχ. S3A), και ρυθμίζεται προς τα πάνω τα επίπεδα πρωτεΐνης της κυκλίνης D1, pRB, Ets1 και ΜΜΡ-9 από αυτά που μορφομετατρέπονται με αντι-NC (Σχ. 2Ε και Εικ. S4A). Οι αναλύσεις πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR έδειξε τις ενισχυμένα επίπεδα μεταγραφής κυκλίνης D1, Ets1 και ΜΜΡ-9 σε καλλιεργημένα κύτταρα επιμολυσμένα με αναστολέα αντι-miR-9, σε σύγκριση με εκείνες επιμολυσμένα με αντι-NC (Σχ. 2F και το Σχ. S4B). Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι miR-9 ανέστειλε σημαντικά την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 μέσω μετα-μεταγραφική καταστολή.

Α, σχήμα των δυνητικών θέσεων σύνδεσης του miR-9 στο 3′-UTR του κυκλίνης D1 και Ets1, εντοπίζοντας σε βάσεις 2974-2995 και 2648-2670, αντίστοιχα. Β, σταθερή επιμόλυνση των πρόδρομων miR-9 οδήγησε σε μειωμένα επίπεδα πρωτεΐνης της κυκλίνης D1, Ets1 και κατάντη στόχοι pRB τους και ΜΜΡ-9 σε καρκίνο του στομάχου SGC-7901 και AGS κύτταρα από εκείνα επιμολυσμένα με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock). Γ και Δ, τα επίπεδα μεταγραφής κυκλίνης D1, Ets1 και ΜΜΡ-9 μειώθηκαν σε miR-9 πρόδρομο επιμολυσμένα SGC-7901 και AGS κύτταρα, σε σύγκριση με εκείνες στις εικονικές κύτταρα. Ε, η επιμόλυνση του miR-αντι-9 αναστολέα (100 nmol /L) είχε σαν αποτέλεσμα αυξημένα επίπεδα πρωτεΐνης της κυκλίνης D1, Ets1 και κατάντη στόχοι pRB τους και ΜΜΡ-9 σε SGC-7901 και AGS κύτταρα από εκείνα επιμολυσμένα με αναστολέα αρνητικό μάρτυρα ( αντι-NC, 100 nmol /L). F, τα επίπεδα μεταγραφής κυκλίνης D1, Ets1, και ΜΜΡ-9 αυξήθηκαν σε SGC-7901 και AGS κύτταρα επιμολυσμένα με αντι-miR-9 αναστολέα (100 nmol /L), σε σύγκριση με εκείνες επιμολυσμένα με αντι-NC (100 nmol /L). Τα σύμβολα (* και #) δείχνουν σημαντική μείωση και μια σημαντική αύξηση από εικονικές ή αντι-NC, αντίστοιχα.

Η

miR-9 άμεσα στοχευμένες κυκλίνης D1 και Ets1 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

Για να καθοριστεί εάν miR-9 θα μπορούσε να καταστείλει την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 με στόχευση θέσεις πρόσδεσης του στην 3′-UTR, τα PCR προϊόντα που περιέχουν άθικτο θέσεις στόχους ή μετάλλαξη του miR-9 αλληλουχίες αναγνώρισης των σπόρων (Εικ. 3Α) εισήχθησαν εντός του φορέα αναφοράς λουσιφεράσης. Τα πλασμίδια επιμολύνθηκαν σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock) ή πρόδρομο miR-9. Η

Renilla

λουσιφεράσης δραστηριότητες κανονικοποιήθηκαν προς εκείνες των πυγολαμπίδας μειώθηκαν σημαντικά στην SGC-7901 και AGS κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με miR-9 πρόδρομο (Σχ. 3Β), και αυτά τα αποτελέσματα καταργήθηκαν μεταλλάσσοντας το υποτιθέμενο miR-9 θέσεις εντός του 3′-UTR της κυκλίνης D1 και Ets1 (Σχ. 3Β) σύνδεση. Επιπλέον, νοκ ντάουν του miR-9 με miR αντι–9 αναστολέας αύξησε τις λουσιφεράσης δραστηριότητες στην GES-1, SGC-7901 και τα κύτταρα AGS (Σχ. 3C και Εικ. S4C), ενώ η μετάλλαξη του miR-9 θέση αναγνώρισης καταργηθούν αυτά τα αποτελέσματα (Εικ. 3C και το Σχ. S4C). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι miR-9 άμεσα και συγκεκριμένα αλληλεπίδρασε με τις θέσεις-στόχους στην 3′-UTR της κυκλίνης D1 και Ets1.

Α, σχήμα και η αλληλουχία του άθικτου θέσης δέσμευσης miR-9 (WT) και μετάλλαξη του (Mut) εντός των φορέων αναφοράς λουσιφεράσης. Β, σταθερή επιμόλυνση των πρόδρομων miR-9 σε SGC-7901 και AGS κύτταρα οδήγησε σε μειωμένη λουσιφεράσης δραστηριότητες του 3′-UTR ρεπόρτερ της κυκλίνης D1 και Ets1 από εκείνα επιμολυσμένα με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock), που καταργήθηκαν με μετάλλαξη στο υποθετική miR-9 θέσεις πρόσδεσης. C, η επιμόλυνση του miR-αντι-9 αναστολέα (100 nmol /L) σε SGC-7901 και AGS κυττάρων αυξήθηκε η λουσιφεράση δραστηριότητες από εκείνες επιμολυσμένα με αντι-NC (100 nmol /L), ενώ η μετάλλαξη του miR-9 θέση αναγνώρισης καταργηθεί αυτά τα αποτελέσματα. Τα σύμβολα (* και #) δείχνουν σημαντική μείωση και μια σημαντική αύξηση από εικονικές ή αντι-NC, αντίστοιχα.

Η

miR-9 κατέστειλε την

in vitro

πολλαπλασιασμό του καρκίνου του στομάχου κυττάρων μέσω στόχευσης κυκλίνη D1

από ανωτέρω απόδειξη έδειξε ότι miR-9 ανέστειλε την έκφραση D1 κυκλίνης, και συνδυάζοντας τα γεγονότα ότι η κυκλίνη D1 παίζει κρίσιμο ρόλο στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων [21], ερευνήσαμε περαιτέρω οι επιδράσεις του miR-9 υπερέκφραση και αποκατάσταση του γονιδίου-στόχου επί καλλιεργημένων γαστρικά καρκινικά κύτταρα. κηλίδα Western και πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι η επιμόλυνση της κυκλίνης D1, αλλά όχι από Ets1, διασώθηκε η miR-9-επαγόμενη μειορύθμιση της κυκλίνης D1 (Εικ. 4Α και Εικ. 4Β). Στην δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, miR-9 υπερέκφραση εξασθένησε την αύξηση του SGC-7901 και AGS κύτταρα, σε σύγκριση με εκείνες που μορφομετατρέπονται με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock) (Σχ. 4C). Η κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι miR-9 υπερ-έκφραση επάγεται διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G

0 /G

1 φάση SGC-7901 και τα κύτταρα AGS (Εικ. 4D). Επιπλέον, η επιμόλυνση της κυκλίνης D1, αλλά όχι από Ets1, σε SGC-7901 και τα κύτταρα AGS αποκατέστησε την αναστολή του πολλαπλασιασμού και του κυτταρικού κύκλου που επάγεται από τη σύλληψη υπερέκφραση miR-9 (Σχ. 4C και το Σχ. 4D). Από την άλλη πλευρά, εξέτασαν τις επιδράσεις του miR-9 νοκ ντάουν για GES-1, SGC-7901 και τα κύτταρα AGS. Εισαγωγή αντι-miR-9 αναστολέα σε αυτά τα κύτταρα είχε σαν αποτέλεσμα ενισχυμένη ικανότητες στον πολλαπλασιασμό (Εικ. S3b) και την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου (σχ. S3C). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το miR-9 κατέστειλε σημαντικά την

in vitro

πολλαπλασιασμό και την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω της στόχευσης κυκλίνης D1.

Α και Β, Western Blot και σε πραγματικό χρόνο ποσοτική RT -PCR έδειξε ότι η επιμόλυνση της κυκλίνης D1, αλλά όχι από Ets1, αποκατέστησε την ρύθμιση προς τα κάτω της κυκλίνης D1 προκαλείται από την miR-9 υπερέκφραση σε καρκίνο του στομάχου SGC-7901 και AGS κύτταρα, σε σύγκριση με εκείνες που μορφομετατρέπονται με αρνητικό φορέα ελέγχου ( κοροϊδεύω). C, σε δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, miR-9 υπερέκφραση εξασθένησε την αύξηση του SGC-7901 και τα κύτταρα AGS από εκείνη του mock κυττάρων, η οποία διασώθηκε με επιμόλυνση της κυκλίνης D1, αλλά όχι από Ets1. D, κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι miR-9 υπερ-έκφραση επάγεται τη διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G

0 /G

1 φάση SGC-7901 και τα κύτταρα AGS σε σχέση με mock κύτταρα, τα οποία διασώθηκε με επιμόλυνση της κυκλίνης D1 , αλλά όχι από Ets1. Το σύμβολο (*) υποδεικνύει μια σημαντική μείωση από παρωδία.

Η

miR-9 εξασθενεί το

in vitro

μετανάστευση και την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω της στόχευσης Ets1

από προηγούμενες μελέτες υποδεικνύουν τις σημαντικούς ρόλους του Ets1 στην εισβολή και τη μετάσταση των καρκινικών κυττάρων [23], [24], ερευνήσαμε περαιτέρω οι επιδράσεις του miR-9 υπερέκφραση και αποκατάσταση του γονιδίου-στόχου για τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού SGC καρκίνο -7901 και AGS κύτταρα. κηλίδα Western και πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι επιμόλυνση Ets1, αλλά όχι από την κυκλίνη D1, διασώθηκε η miR-9-επαγόμενη μειορύθμιση Ets1 (Σχ. 5Α και Σχ. 5Β). Σε Transwell δοκιμασία μετανάστευσης, γαστρικό καρκίνο κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με πρόδρομο miR-9 παρουσίασε μια εξασθενημένη ικανότητα μετανάστευσης από εκείνα επιμολυσμένα με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock) (Σχ. 5C). Σε δοκιμασία Matrigel εισβολής, miR-9 υπερέκφραση εξασθενημένο της εισβολής της ΓΓΕ-7901 και τα κύτταρα AGS (Εικ. 5D). Επιπλέον, η επιμόλυνση των Ets1, αλλά όχι από την κυκλίνη D1, σε SGC-7901 και κυτταρικές σειρές AGS αποκατέστησε το miR-9-meditaed αναστολής για τη μετανάστευση και την εισβολή (Εικ. 5C και Σχ. 5D). Επιπλέον, εξετάσαμε τις επιδράσεις των miR-9 νοκ ντάουν για GES-1, SGC-7901 και τα κύτταρα AGS. Η επιμόλυνση του αναστολέα αντι-miR-9 οδήγησε σε αυξημένη μετανάστευση και εισβολή αυτών των κυττάρων (Εικ. S3D και το Σχ. S3E). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το miR-9 εξασθενεί σημαντικά το

in vitro

μετανάστευση και την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω της στόχευσης Ets1.

Α και Β, Western Blot και σε πραγματικό χρόνο ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι η επιμόλυνση του Ets1, αλλά όχι από την κυκλίνη D1, αποκατέστησε τη ρύθμιση προς τα κάτω των Ets1 επάγεται από miR-9 υπερέκφραση σε καρκίνο του στομάχου SGC-7901 και AGS κύτταρα, σε σύγκριση με εκείνες που μορφομετατρέπονται με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock). C, σε Transwell δοκιμασία μετανάστευσης, γαστρικό καρκίνο κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με πρόδρομο miR-9 παρουσίασε μια εξασθενημένη ικανότητα μετανάστευσης από εκείνο στο mock κύτταρα, τα οποία διασώθηκε με επιμόλυνση Ets1, αλλά όχι της κυκλίνης D1. D, σε δοκιμασία εισβολή matrigel, miR-9 υπερέκφραση εξασθενημένα τις δυνατότητες εισβολή του SGC-7901 και τα κύτταρα AGS από εκείνα του mock κυττάρων, η οποία διασώθηκε από επιμόλυνση Ets1, αλλά όχι της κυκλίνης D1. Το σύμβολο (*) υποδεικνύει μια σημαντική μείωση από παρωδία.

Η

miR-9 εξασθενεί την ανάπτυξη και μετάσταση του καρκίνου του στομάχου κυττάρων

in vivo

Η

Στη συνέχεια ερευνήσαμε η αποτελεσματικότητα του miR-9 κατά την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση

in vivo

. Σταθερή διαμόλυνση των πρόδρομων miR-9 σε SGC-7901 ή AGS κύτταρα οδήγησε σε μειωμένη ανάπτυξη και το βάρος του υποδόριου ξενομοσχεύματος όγκων σε αθυμικά γυμνά ποντίκια, σε σύγκριση με εκείνες σταθερά επιμολυσμένα με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock) (Σχ. 6Α και το Σχ. 6Β ). Επιπλέον, η έκφραση της κυκλίνης D1, Ets1 και κατάντη ΜΜΡ-9 ήταν μειωμένη κατά σταθερή επιμόλυνση των πρόδρομων miR-9 (Σχ. 6C). Η μέση πυκνότητα σκάφος CD31-θετικών μειώθηκε κατά όγκων που σχηματίζονται από την ένεση των καρκινικών κυττάρων σταθερά επιμολυσμένων με πρόδρομο miR-9 (Σχ. 6D). Στις πειραματικές μελέτες μετάστασης, ΓΓΕ-7901 ή AGS κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με πρόδρομο miR-9 ιδρύθηκε στατιστικά λιγότερες πνεύμονα μεταστατικό αποικίες από εικονικές ομάδα (Σχ. 6Ε). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι miR-9 ανέστειλε την ανάπτυξη και μετάσταση του καρκίνου του στομάχου κυττάρων

in vivo

.

Α και Β, υποδερμική ένεση SGC-7901 ή AGS κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με miR-9 πρόδρομος σε αθυμικά γυμνά ποντίκια (η = 5) κατέληξε σε μειωμένο μέγεθος και το βάρος του υποδόριου ξενομοσχεύματος όγκους από αυτούς που μορφομετατρέπονται με αρνητικό φορέα ελέγχου (mock, η = 5). C, αιματοξυλίνη και εοσίνη (Η &? Ε) και την ανοσοϊστοχημική χρώση αποκάλυψε ότι σταθερή επιμόλυνση των πρόδρομων miR-9 οδήγησε σε μειωμένη έκφραση της κυκλίνης D1, Ets1, και ΜΜΡ-9 εντός όγκων. Ράβδοι κλίμακας: 100 μm. D, η μέση πυκνότητα σκάφος CD31-θετικών μειώθηκε κατά όγκων που σχηματίζονται από τα καρκινικά κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με πρόδρομο miR-9. Ράβδοι κλίμακας: 100 μm. Ε, στη δοκιμασία πειραματική μετάσταση, τα καρκινικά κύτταρα σταθερά επιμολυσμένα με miR-9 πρόδρομο εγκατεστημένος σημαντικά λιγότερες μεταστατικών αποικιών στους πνεύμονες (βέλη) σε αθυμικά γυμνά ποντίκια (η = 6). Ράβδοι κλίμακας: 100 μm. Το σύμβολο (*) υποδεικνύει μια σημαντική μείωση από παρωδία.

Η

Νοκ ντάουν της κυκλίνης D1 και Ets1 phenocopied miR-9 υπερ-έκφραση με τη μεσολάβηση αναστολή στον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων em

in vitro

η

από το παραπάνω αποτελέσματα έδειξαν την αρνητική ρύθμιση της κυκλίνης D1 και έκφραση Ets1 από miR-9, υποθέσαμε ότι νοκ ντάουν της κυκλίνης D1 και Ets1 μπορεί να ασκήσει παρόμοια αποτελέσματα σε καλλιεργημένα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Τα μικρά RNAs παρεμβολής (siRNAs) που στοχεύουν την περιοχή κωδικοποίησης της κυκλίνης D1 και Ets1, si-CCND1 και si-Ets1, σχεδιάστηκαν και μεταφέρθηκε σε SGC-7901 και AGS κύτταρα. Η επιμόλυνση του si-CCND1 και SI-Ets1 οδήγησε σε μειωμένη έκφραση της κυκλίνης D1, pRB, Ets1 και ΜΜΡ-9 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα, αντίστοιχα, σε σύγκριση με εκείνες που μορφομετατρέπονται με σκαρφάλωμα siRNA (si-Scb) (Σχ. 7Α, το Σχ . 7D και η Εικ. S5). Knockdown της κυκλίνης D1 κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό και επαγόμενη διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G

0 /G

1 φάση SGC-7901 και τα κύτταρα AGS (Σχ. 7Β και το Σχ. 7C). Επιπλέον, νοκ ντάουν της Ets1 στη ΓΓΕ-7901 και AGS κύτταρα οδήγησε σε μείωση των δυνατοτήτων της μετανάστευσης και της εισβολής (Σχ. 7Ε και Σχ. 7F). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι knockdown της κυκλίνης D1 και Ets1 phenocopied (διέθετε τα παρόμοια φαινοτύπους σε) miR-9 υπερ-έκφραση στην αναστολή του πολλαπλασιασμού, τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού καρκίνου κυττάρων

in vitro

.

Α, επιμόλυνση του si-CCND1 (100 nmol /L) σε γαστρικό καρκίνο SGC-7901 και AGS κύτταρα οδήγησε σε μειωμένη έκφραση της κυκλίνης D1 και προς τα κάτω το στόχο της pRB από εκείνα επιμολυσμένα με αγωνίζομαι siRNA (si-Scb, 100 nmol /L ). Β, νοκ ντάουν της κυκλίνης D1 κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό της ΓΓΕ-7901 και AGS κύτταρα από εκείνα επιμολυσμένα με το si-Scb. C, knockdown της κυκλίνης D1 επάγεται διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G

0 /G

1 φάση από εκείνα επιμολυσμένα με si-Scb. D, η επιμόλυνση του si-Ets1 (100 nmol /L) σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα οδήγησε σε μειωμένη έκφραση του Ets1 και κατάντη γονίδιο ΜΜΡ-9 από αυτά που μορφομετατρέπονται με SI-Scb (100 nmol /L) του. Ε, οι δυνατότητες μετανάστευσης της ΓΓΕ-7901 και AGS κύτταρα μειώθηκαν κατά επιμόλυνση του si-Ets1 από εκείνα επιμολυσμένα με το si-Scb. F, οι δυνατότητες εισβολή της ΓΓΕ-7901 και AGS κύτταρα μειώθηκαν κατά επιμόλυνση του si-Ets1 από εκείνα επιμολυσμένα με το si-Scb. Το σύμβολο (*) υποδεικνύει μια σημαντική μείωση από το si-Scb.

Η

Συζήτηση

Έχει επίσης αποδειχθεί ότι το προφίλ έκφρασης του miR-9 σε καρκίνο βασίζεται στην κατανομή στους ιστούς. Σε πρωτοπαθείς όγκους του εγκεφάλου, miR-9 είναι αυξημένα και λειτουργεί ως ουσιαστικό παράγοντα για την νευρική καρκινογένεση [10]. miR-9 είναι επίσης υπερ-εκφράζεται σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [11], υποδηλώνοντας το ρόλο υποκινητή όγκου της στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου. Ωστόσο, miR-9 ρυθμίζεται προς τα κάτω σε πολλαπλούς ανθρώπινους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παγκρέατος [12], τον καρκίνο των ωοθηκών [13] και του παχέος εντέρου [14], και συνδέεται με την κακοήθη εξέλιξη του καρκίνου του μαστού [25] και του παχέος εντέρου ( 14). Luo

et al.

Σημείωσε την κάτω ρύθμιση των miR-9 σε 24 γαστρικό δείγματα καρκίνου [15], η οποία επιβεβαιώθηκε στη συνέχεια σε 9 [16], 72 [17], και 13 [18] καρκίνο του στομάχου περιπτώσεις. Ωστόσο, Inoue

et al.

Ανέφεραν την προς τα πάνω ρύθμιση του miR-9 σε 5 ασθενείς με γαστρικό καρκίνο με συστοιχίες πραγματικού χρόνου που βασίζεται στην PCR miRNA [26], και αυτό το εύρημα σε διαφορετικές miR-9 προφίλ έκφρασης μπορεί να οφείλεται με την ετερογένεια των περιορισμένων δειγμάτων. Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε ότι miR-9 είναι σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται σε 86 πρωτογενείς γαστρικό καρκίνο δείγματα από ότι σε γειτονικό μη νεοπλασματικά ιστούς, η οποία είναι συνεπής με τα προηγούμενα ευρήματα [15] – [18]. Σημαντικά, μπορούμε επίσης να επιβεβαιώσει ότι miR-9 έκφραση αντίστροφα με τα κλινικά στάδια, εισβολή, και μετάσταση του καρκίνου του στομάχου. Στους ανθρώπους, η ώριμη miR-9 κωδικοποιείται από τρεις ανεξάρτητες γονίδια, miR-9-1, miR-9-2 και miR-9-3, εντοπίζοντας σε χρωμοσώματα 1, 5 και 15, αντίστοιχα [27]. Προηγούμενες μελέτες υποδεικνύουν ότι η κάτω-ρυθμιζόμενη miR-9 έκφραση σε γαστρικό καρκίνο οφείλεται σε παρεκκλίνουσα υπερμεθυλίωση της περιοχής του υποκινητή του miR-9 γονιδίων που κωδικοποιεί [17]. Ομοίως, παρεκκλίνουσα υπερμεθυλίωση miR-9 οικογένεια γονιδίων επίσης αναφερθεί σε κάποιους πρωτογενείς όγκους με μετάσταση λεμφαδένα, όπως ο καρκίνος του παχέος εντέρου, ο καρκίνος του πνεύμονα, ο καρκίνος του μαστού, το μελάνωμα και [14], [28]. Είναι σημαντικό ότι, η τρέχουσα μελέτη ανέφερε την αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ miR-9 επίπεδα και την έκφραση της κυκλίνης D1 και Ets1 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, υπονοώντας ότι η κυκλίνη D1 και Ets1 μπορεί να ρυθμίζεται αρνητικά από miR-9.

Η λειτουργία και τα γονίδια-στόχους του miR-9 είναι ογκο-ειδικό και εξαρτάται από την κυτταρική έννοια. miR-9 είναι σε θέση να καταστείλει την έκφραση Ε-καδερίνης στον καρκίνο του μαστού [29], με αποτέλεσμα την πυρηνική μετατόπιση του β-κατενίνης και της δέσμευσης με παράγοντες μεταγραφής παράγοντας Τ-κυττάρων /λεμφοειδών παράγοντας ενισχυτή 1, και μετέπειτα επάνω ρυθμισμένη μεταγραφή του γονίδια που διευκολύνουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την αγγειογένεση [29]. Εξαναγκασμένη έκφραση miR-9 σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού έχει επίσης ως αποτέλεσμα σημαντικές αλλαγές έκφραση πολλαπλών γονιδίων στο αποπτωτικό μονοπάτι ρ53 που σχετίζονται με [30]. Μέσω της άμεσης στόχευσης ΝΡ-κΒ, έκτοπη έκφραση της miR-9 αναστέλλει την

in vitro

και

in vivo

ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών [31] και την ανάπτυξη και μετάσταση του μελανώματος [32] . Σε neuroblatoma, υπερ-έκφραση του miR-9 αναστέλλει την εισβολή, μετάσταση, και την αγγειογένεση των κυττάρων του όγκου μέσω στόχευσης μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας 14 [33]. Wan

et al.

Ανέφερε ότι η υπερέκφραση του miR-9 ανέστειλε το

in vitro

και

in vivo

ανάπτυξη της κυτταρικής σειράς αδενοκαρκίνωμα στομάχου MGC803 μέσω καταστολή NF-κΒ στο επίπεδο της μετα-μεταγραφικό [16]. Ωστόσο, σε μια πρόσφατη μελέτη, Rotkrua

et al.

Έδειξε ότι το miR-9 θα μπορούσαν να συμμετέχουν σε γαστρική καρκινογένεση μέσω ρύθμισης προς τα κάτω CDX2, και νοκ ντάουν του miR-9 μειώθηκε το

in vitro

πολλαπλασιασμό του γαστρικού καρκίνου ΜΚΝ-45 κύτταρα [19], ενώ τα ευρήματά τους χρειάζεται να ενισχυθεί περαιτέρω με miR-9 υπερ-έκφραση, του γονιδίου-στόχου διάσωσης, και

in vivo

μελέτες. Επιπλέον, επί του παρόντος είναι αμφιλεγόμενο εάν CDX2 διαδραματίζει ογκογόνο ή ογκοκατασταλτικό ρόλο στη γαστρική καρκινογένεση [34], [35]. Επιπλέον, οι ρόλοι των δυνητικών miR-9 στην εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του στομάχου δεν έχουν διασαφηνιστεί μέχρι στιγμής. Έτσι, οι στόχοι λειτουργία και απευθείας από miR-9 σε γαστρικό καρκίνο ένταλμα περαιτέρω έρευνα.

Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η υπερ-έκφραση του miR-9 εξασθενημένο τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού καρκινικών κυττάρων, η οποία ήταν παρόμοια με εκείνη της κυκλίνης D1 ή Ets1 knockdown, γεγονός που υποδηλώνει την πιθανή εφαρμογή του miR-9 ως στόχος για τις θεραπευτικές ουσίες του γαστρικού καρκίνου. Επιπλέον, τα δεδομένα μας επιβεβαίωσαν ότι το miR-9 στοχεύουν άμεσα κυκλίνης D1 και Ets1 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα μέσω δοκιμασίας ανταποκριτή λουσιφεράσης 3′-UTR. Από πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι ορισμένες miRNAs μπορεί εναλλακτικά να ρυθμίζουν τη γονιδιακή έκφραση μέσω της αλληλεπίδρασης με τους υποψηφίους [36] – [38], οι εν δυνάμει ρόλο των miR-9 στη ρύθμιση της μεταγραφής κυκλίνης D1 και Ets1 μέσω της αλληλεπίδρασης με τους υποψηφίους παραμένουν ασαφείς και απαιτούν περαιτέρω μας έρευνα. Η κυκλίνη D1 είναι ένα πρωτο-ογκογονίδιο που ανήκει στην οικογένεια των G

1 κυκλίνες, και παίζει σημαντικό ρόλο σε κυτταρικό κύκλο G

1 έως μετάβαση S μέσω δέσμευσης των εταίρων της εξαρτώμενων από κυκλίνη κινάση 4 και 6 να φωσφορυλιώνει και απενεργοποιούν η πρωτεΐνη RB [21]. Υπερ-έκφραση της κυκλίνης D1 είναι ένα πρώιμο γεγονός στην καρκινογένεση στο ανθρώπινο ορθοκολικό, οισοφαγικό και της χοληδόχου κύστης καρκίνους [39], και είναι μια προγνωστικός δείκτης που σχετίζεται με κακή επιβίωση σε οισοφάγου, του μαστού και του ουροποιητικού καρκίνων [39]. Κυκλίνη D1 υπερ-έκφραση σε ανθρώπινους καρκίνους έχει διευκρινιστεί μέσω πολλαπλών μηχανισμών, συμπεριλαμβανομένης της γονιδιωματικής αλλαγές, μετα-μεταγραφική ρύθμιση, και τη σταθεροποίηση μετα-μεταφραστική πρωτεΐνη [39]. Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι το miR-16-1 καταστέλλει την έκφραση D1 κυκλίνης στο μετα-μεταγραφικό επίπεδο μέσω της δέσμευσης 3′-UTR της στην λεμφώματος κυττάρων του μανδύα [40]. Στην παρούσα μελέτη, τα ευρήματά μας έδειξαν ότι miR-9-διαμεσολαβούμενη αναστολή στην πρόοδο και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του κυτταρικού κύκλου διασώθηκε από αποκατάσταση της έκφρασης D1 κυκλίνης σε γαστρικό καρκινικά κύτταρα, υποδηλώνοντας ότι η αναγνώριση της κυκλίνης D1 ως γονίδιο στόχος miR-9, μπορεί να εξηγήσει, τουλάχιστον εν μέρει, γιατί η υπερ-έκφραση του miR-9 κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων.

Ets1, ένα μέλος της οικογένειας ETS παραγόντων μεταγραφής, δεσμεύεται με ειδικές αλληλουχίες DNA που περιέχει GGAA /T κεντρικό μοτίβο [22], και συμμετέχει σε εισβολή όγκου και μετάσταση μέσω μεταγραφικής ρύθμισης αρκετών γονιδίων που είναι υπεύθυνα για εξωκυτταρικό αναδιαμόρφωση μήτρας, μετανάστευση, και εισβολή, όπως μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας και ενεργοποιητή πλασμινογόνου ουροκινάσης [22]. Μέχρι σήμερα, ένας αυξανόμενος αριθμός κλινικών μελετών έχουν δείξει τα σημαντικούς ρόλους της Ets1 στην ανάπτυξη του όγκου και την πρόοδο των διαφόρων συμπαγών όγκων [23], [24].