Αφηρημένο

Το αυξημένο πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων εξαρτάται άμεσα από την αυξημένη δραστηριότητα των μηχανημάτων ενδοπλασματικό δίκτυο (ER), η οποία είναι υπεύθυνη για την αναδίπλωση πρωτεϊνών, τη συναρμολόγηση, και των μεταφορών. Στην πραγματικότητα, είναι τόσο κρίσιμη ώστε διαταραχές στο ενδοπλασματικό δίκτυο μπορεί να οδηγήσει σε απόπτωση. Αυτή η προσεκτικά ρυθμίζονται οργανίδιο αντιπροσωπεύει ένα μοναδικό στόχο των καρκινικών κυττάρων ενώ διαφυλάσσει τον υγιή κύτταρα. Σε αυτή τη μελέτη, ένα τυποποιημένο εκχύλισμα Mangosteen φρούτα (MFE) αξιολογήθηκε ως προς τη διαμόρφωση των πρωτεϊνών του στρες ER στον καρκίνο του προστάτη. Δύο ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη, LNCaP και 22Rv1, και του προστάτη επιθηλιακά κύτταρα (PRECs) που προμηθεύονται από δύο ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική προστατεκτομή υποβλήθηκαν σε θεραπεία με MFE. Η κυτταρομετρία ροής, ΜΤΤ, BrdU και κηλίδα Western χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση κυτταρικής απόπτωσης, τη βιωσιμότητα, τον πολλαπλασιασμό και ER στρες. Στη συνέχεια, αξιολογήσαμε MFE για σταθερότητα μικροσωμάτων και αντικαρκινική δράση σε γυμνά ποντίκια. MFE επαγόμενη απόπτωση, μειωμένη βιωσιμότητα και τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του προστάτη. MFE αύξησε την έκφραση των πρωτεϊνών ER στρες. Είναι ενδιαφέρον, MFE προωθεί επιλεκτικά ER στρες στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη ενώ διαφυλάσσει PRECs. MFE κατέστειλε την ανάπτυξη του όγκου σε ένα μοντέλο όγκου ξενομοσχεύματος χωρίς εμφανή τοξικότητα. εκχυλίσματα φρούτων Mangosteen προωθεί επιλεκτικά ενδοπλασματικό δίκτυο στρες στα καρκινικά κύτταρα ενώ διαφυλάσσει μη ογκογόνων προστάτη επιθηλιακά κύτταρα. Επιπλέον, σε μια in vivo ρύθμιση εκχύλισμα φρούτων Mangosteen μειώνει σημαντικά τον σχηματισμό ξενομοσχευμάτων όγκου

Παράθεση:. Li G, Petiwala SM, Pierce DR, Nonn L, Johnson JJ (2013) Επιλεκτική Διαμόρφωση ενδοπλασματικού δικτύου Μαρκαδόροι στρες στον προστάτη καρκινικών κυττάρων από ένα εκχύλισμα Τυποποιημένα Mangosteen φρούτα. PLoS ONE 8 (12): e81572. doi: 10.1371 /journal.pone.0081572

Επιμέλεια: Surinder Κ Batra, Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Ιούλη του 2013? Αποδεκτές: 14 Οκτ 2013? Δημοσιεύθηκε: 18 Δεκεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας /National Cancer Institute 1R03CA138953 (J. Johnson). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το αυξημένο πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων εξαρτάται άμεσα από την αυξημένη δραστηριότητα των μηχανημάτων ενδοπλασματικό δίκτυο (ER), η οποία είναι υπεύθυνη για την αναδίπλωση πρωτεϊνών, τη συναρμολόγηση, και τις μεταφορές [1], [2]. Στην πραγματικότητα, είναι τόσο κρίσιμη ότι η διαφοροποίηση της πρωτεϊνικής σύνθεσης αν δεν ρυθμίζεται σωστά μπορεί να οδηγήσει σε απόπτωση [3] – [6]. Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για τα καρκινικά κύτταρα τα οποία έχουν συσσωρεύσει μια ικανότητα να ξεπεράσουν τον κυτταρικό κύκλο και αποπτωτικά σημεία ελέγχου [7]. Καθώς η ζήτηση για τη σύνθεση πρωτεϊνών αυξάνει υπάρχει μια αναλογική αύξηση στην «μεταφραστική προχειρότητα» που οδηγεί στη συσσώρευση του ξετυλίγεται και mis-διπλωμένα πρωτεΐνες αλλάζοντας ομοιόσταση ER. Εάν αφεθεί ανεξέλεγκτο, αυτά τα κύτταρα θα υφίστανται απόπτωση, ωστόσο, είναι σαφές ότι δεν έχουν πρόθεση με αυτό τον τρόπο. Όπως ήταν αναμενόμενο, τα καρκινικά κύτταρα να αναπτύξει μια λύση που χρησιμοποιεί ένα μονοπάτι μεταγωγής σήματος γνωστή ως «ξεδιπλωμένη απόκριση πρωτεΐνης (UPR)». Αυτή η διαδικασία μπορεί να αλλάξει την μεταγραφή και μετάφραση των πρωτεϊνών αποκαθιστώντας έτσι την ομοιόσταση ER – σε ένα βαθμό. Αυτό με τη σειρά του προωθεί την αντίσταση στην απόπτωση και αυξάνει την επιβίωση των κυττάρων. Αυτό το φαινόμενο είναι καθιερωμένη σε πολλούς και διάφορους καρκίνους συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη.

Η επικρατούσα θεωρία της UPR, η οποία ρυθμίζεται από αρκετές διαφορετικές ER στρες πρωτεΐνες /μονοπάτια, είναι ότι μια θετική διαμόρφωση του ER στρες θα προωθήσει επιβίωση [2]. Στην ουσία, αυτό είναι αλήθεια, όμως, αυτό μπορεί να είναι πιο σημαντικός είναι ο βαθμός στον οποίο οι πρωτεΐνες διαμορφωμένο ER στρες. Όπως αποδεικνύεται από τις μελέτες μας που περιλαμβάνονται στην παρούσα, καθώς και μελέτες από άλλους ερευνητές, παρουσιάζουμε στοιχεία που υποδηλώνει ότι μια σημαντική αύξηση σε πρωτεΐνες ER στρες θα οδηγήσει σε απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα.

Για τις μελέτες μας αξιολογήθηκαν απόσπασμα η Mangosteen (

Garcinia mangostana

) φρούτων και διαπίστωσε ότι ρυθμίζουν σημαντικά πρωτεΐνες ER στρες. Ακόμη πιο ενδιαφέρουσα ήταν η φαινομενικά συγκεκριμένη απάντηση για την αύξηση πρωτεΐνες ER στρες σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη, ενώ μειώνεται πρωτεΐνες στρες ER σε προστάτη επιθηλιακά κύτταρα. Αυτή η επίδραση αποτελεί μια πολύπλοκη σχέση που υπάρχει σε μη-καρκινικά και καρκινικά κύτταρα. Εδώ παρουσιάζουμε ενδείξεις ότι η αύξηση του ER στρες πρωτεΐνη απάντηση CHOP /GADD153 είναι μια βιώσιμη προσέγγιση για νέες στρατηγικές για την ανάπτυξη θεραπευτικών.

Υλικά και Μέθοδοι

εκχύλισμα φρούτων Mangosteen, εξαρτήσεις και αντισώματα

Mangosteen Fruit Extract (MFE) ελήφθη από την Avesthagen, Inc. (Chatsworth, CA). Όλα τα αντισώματα για ανάλυση Western blot, κιτ δοκιμασίας πολλαπλασιασμού κυττάρου BrdU, και διασπασμένη κασπάση 3 κιτ ELISA ελήφθησαν από την Cell Signaling Technology (Danvers, ΜΑ). BCA κιτ προσδιορισμού πρωτεϊνών και υποστρώματα χημιφωταύγειας ελήφθησαν από την Pierce (Rockford, IL). κιτ APO-DIRECT ™ λήφθηκε από Συστήματα Ροής Phoenix (San Diego, CA). One-Step κιτ RT-PCR λήφθηκε από την Life Technologies (Grand Island, ΝΥ). RNeasy μίνι κιτ και RNase-Free DNase που ελήφθησαν από την QIAGEN (Santa Clarita, CA).

Υγρή χρωματογραφία

Για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης του α-mangostin στα δείγματα εκχύλισμα mangosteen φρούτα αναλύθηκαν σε μια μονάδα διαχωρισμού υδάτων HPLC 2695. Οι διαχωρισμοί επιτεύχθηκαν χρησιμοποιώντας μία κλίση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [8]. Για τον προσδιορισμό των επιπέδων της α-Mangostin ορού, δείγματα ορού αναλύθηκαν σε μία αντλία Thermoseparation SpectraSystem P4000 με ένα AS 3000 αυτόματο δειγματολήπτη, έναν ανιχνευτή Thermoseparation SpectraSystem UV2000 σε 243 nm, χρόνος λειτουργίας 20 λεπτά, και 10 μΙ όγκου έγχυσης σε θερμοκρασία δωματίου. Οι διαχωρισμοί επιτεύχθηκαν με ισοκρατικό σύστημα διαλύτη, σε 1,0 ml /min, και ένα Capcell Pak C-18, 3 μm, 4.6 χ 250 mm στήλη με inline φίλτρο προ-στήλη Upchurch. Το όριο ποσοτικοποίησης και ανίχνευσης είναι 0.039 μg /ml (δηλαδή 95 ηΜ), και 0,0098 μg /ml (δηλαδή 23,9 ηΜ), αντιστοίχως.

Κυτταρική καλλιέργεια και θεραπεία

LNCaP και 22Rv1 κύτταρα ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA). Αυτά τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) και 1% πενικιλίνη /στρεπτομυκίνη. Όλα τα κύτταρα διατηρήθηκαν υπό τυπικές συνθήκες καλλιέργειας κυττάρων όπως περιγράφεται προηγουμένως [9]. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στο προαναφερθέν μέσο συμπληρωμένο με μια περιοχή δόσεων του MFE για την επιθυμητή φορές, τότε έτοιμο για τους μεταγενέστερους πειράματα.

Πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη και θεραπεία

Πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη (PRECs ) ιδρύθηκαν από ριζική προστατεκτομή ιστού στο Πανεπιστήμιο του Ιλινόις στο Ιατρικό Κέντρο του Σικάγου όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10]. Φρέσκο ​​ιστού από την περιφερειακή ζώνη επιλέχθηκε από έναν παθολόγο σύμφωνα με ένα IRB-εγκεκριμένο πρωτόκολλο. Εν συντομία, ο ιστός υπέστη πέψη σε κολλαγενάση, και απλώθηκε σε κολλαγόνο επικαλυμμένα πιάτα σε PrEGM μέσο (Lonza, Walkersville, MD) για επιθηλιακό κύτταρο έκφυση. Όλα τα κύτταρα που χρησιμοποιούνται στη δευτεροβάθμια δίοδο και ~ 70% συρροή (κυτταρική πυκνότητα). PRECs υποβλήθηκαν σε αγωγή με 15 μg /ml MFE για 24 ώρες που ακολουθείται από καθοδικά πειράματα

Κυτταρική βιωσιμότητα

Η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με 3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ). – 2, βρωμιούχο 5-διφαινυλτετραζόλιο (ΜΤΤ) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11].

ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων

ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε με δοκιμασία BrdU σύμφωνα με το εγχειρίδιο του κατασκευαστή.

κυτταρομετρία ροής

Το κιτ APO-DIRECT ™ (Phoenix Συστήματα ροής, San Diego CA) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της απόπτωσης των επεξεργασμένων κυττάρων με κυτταρομετρία ροής [11]. Εν συντομία, 22Rv1 κύτταρα επιστρώθηκαν σε 50-60% συρροή και στη συνέχεια κατεργάζεται με πλήρες μέσο που περιέχει MFE. Το κιτ ακολουθήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του πρωτοκόλλου.

κηλίδες Western

κυτταρολύματα Σύνολο από επεξεργασμένα κύτταρα παρασκευάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [9], [12]. Τα προϊόντα λύσης μετρήθηκαν ποσοτικά χρησιμοποιώντας BCA δοκιμασία σύμφωνα με το εγχειρίδιο του κατασκευαστή. Ένα κοινό πρωτόκολλο κηλίδες Western ακολουθήθηκε. Εν συντομία, ίδια ποσότητα προϊόντων λύσης φορτώθηκαν σε κάθε φρεάτιο πηγμάτων προ-cast 12% (Bio-Rad, Hercules, CA). Μετά τη μεταφορά, οι μεμβράνες αποκλείστηκαν και επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα (1:1000) όλη τη νύκτα στους 4 ° C, ξεπλύθηκαν σύντομα, στη συνέχεια επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα (1:2000) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Οι μεμβράνες πλύθηκαν, επωάστηκαν με υποστρώματα και εκτίθενται σε ένα FluorChem Ε απεικονιστή (ProteinSimple, Santa Clara, CA).

RT-PCR

Εκκινητές για XBP-1 και GAPDH RT-PCR συνετέθησαν από IDT (Coralville, ΙΑ) σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [13]. Ακολουθίες ήταν? XBP-1 προς τα εμπρός, 5′-ΤΤΑ CGA GAG ΑΑΑ ACT CAT GGC C-3 ‘, XBP-1 αντίστροφη, 5′-GGG TCC ΑΑΟ TTG TCC AGA ATG C-3′, GAPDH προς τα εμπρός, 5’-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3 ‘, αντίστροφη GAPDH, 5′-TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA-3’. 22Rv1 και LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 15 μg /ml MFE για 24 ώρες. Ολικό RNA εκχυλίστηκε από επεξεργασμένα και ελέγχου κυττάρων. Ένα μικρογραμμάριο ολικού RNA χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο για ένα βήμα RT-PCR. το πρωτόκολλο του κατασκευαστή ακολουθήθηκε.

ELISA

διασπασμένη κασπάση-3 επίπεδα σε ίδιες ποσότητες των διαφόρων προϊόντων λύσης κυττάρων ανιχνεύθηκαν με ELISA. το εγχειρίδιο του κατασκευαστή ακολουθήθηκε.

Σταθερότητα της MFE τυποποιημένων σε α-mangostin σε ηπατικά μιτοχόνδρια

0.5 mg ml μικροσωμάτων ανθρώπινου ήπατος /(Invitrogen) και μικροσώματα ήπατος ποντικού (BD Biosciences) επωάστηκαν με η υπό δοκιμή ουσία, mangostin /MFE σε μια τελική συγκέντρωση 1 μΜ, σε διάλυμα που περιέχει 5 mM ισοκιτρικό οξύ, 5 mM MgCl

2, 0,2 U /ml ισοκιτρικό οξύ αφυδρογονάση και 1 mM NADP + σε 100 mM ρυθμιστικού Tris-HCI (ρΗ 7,4). Οι ενώσεις επωάστηκαν με μικροσώματα στους 37 ° C για 0, 10, 20 και 30 λεπτά εις διπλούν. σωλήνες ελέγχου επωάζονται χωρίς NADP +. Μετά την επώαση, τα δείγματα περιδινήθηκαν και διατηρήθηκαν σε πάγο μέχρι έτοιμο για φυγοκέντρηση στα 17.000 g για 15 λεπτά στους 4 ° C. Μετά τη φυγοκέντρηση τα υπερκείμενα μεταφέρθηκαν σε φιαλίδια και αναλύονται με χρήση μεθόδου LC-MS όπως περιγράφηκε προηγουμένως.

In vivo

22Rv1 μοντέλο ξενομοσχεύματος όγκου

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές που έχουν εγκριθεί από την Επιτροπή Φροντίδας ζώων και Χρήση του Πανεπιστημίου του Ιλινόις στο Σικάγο. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την επιτροπή φροντίδα των ζώων στο Πανεπιστήμιο του Ιλινόις στο Σικάγο (Αριθμός Πρωτοκόλλου: ACC-11-019) για να εξασφαλιστεί βήματα έγιναν για τη βελτίωση ταλαιπωρία των ζώων. Κατά την ολοκλήρωση της μελέτης, όλα τα ποντίκια έλαβαν γενική αναισθησία με εισπνοή (π.χ. ισοφλουράνιο) ακολουθούμενο από CO

2 ασφυξία σύμφωνα με τον εγκεκριμένο πρωτόκολλο ζώα για ευθανασία. Όλα τα ζώα παρακολουθήθηκαν σε καθημερινή βάση εκτός από το προσωπικό περίθαλψης ζώων. Αθυμικών (

ηυ /ηυ

) αρσενικά γυμνά ποντίκια (Harlan Laboratory, Madison, WI) επτά έως οκτώ εβδομάδες παλαιά στεγάστηκαν υπό συνθήκες χωρίς παθογόνα με 12 ώρες φως /12 ώρες σκοτάδι χρονοδιάγραμμα και τροφοδοτείται με ένα αυτόκλειστο ΑΙΝ-76Α διατροφής

κατά βούληση

όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9], [12]. 22Rv1 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό του

in vivo

επιδράσεις του MFE βασίζεται στο γεγονός ότι αυτά τα κύτταρα σχηματίζουν την ταχεία και επαναλήψιμη όγκων σε γυμνά ποντίκια με ξενομοσχεύματα όγκου. Δεκατέσσερα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε δύο ομάδες, με επτά ζώα σε κάθε ομάδα. Τα ζώα στην ομάδα 1 έλαβαν φορέα (100 μL βαμβακέλαιο) με ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) χορήγηση και υπηρέτησε ως έλεγχος. Τα ζώα στην ομάδα 2 έλαβαν εκχύλισμα mangosteen φρούτα (35 mg /kg) διαλύθηκε σε βαμβακέλαιο με ΙΡ δύο φορές την εβδομάδα. βάρη σώματος καταγράφηκαν σε όλη τη μελέτη.

Η στατιστική ανάλυση

Όλα στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του λογισμικού VassarStats. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος με τυπική απόκλιση για όλες τις ομάδες. Η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών σε όλες τις μετρήσεις μεταξύ ομάδων ελέγχου και θεραπείας προσδιορίστηκε με μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από δοκιμή Tukey HSD για πολλαπλές συγκρίσεις. paired t δοκιμή Student χρησιμοποιήθηκε για ζεύγος σοφό συγκρίσεις ομάδα, όπως απαιτείται. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και η P & lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

HPLC του Mangosteen φρούτα εκχύλισμα

Η χρήση HPLC διαπιστώσαμε ότι MFE περιείχε περισσότερα από 35% α-Mangostin και χρησιμοποιήθηκε σε όλη τη μελέτη (Εικ 1Α & amp?. Β). Πολλαπλές κορυφές δείχνουν ότι MFE περιέχει επίσης πρόσθετες xanthones, όπως β-Mangostin και γ-Mangostin (Εικ 1Α & amp?. Β).

[Α], πολυφαινολικές xanthones απομονώνεται από το φρούτο mangosteen. [B], HPLC χρωματογράφημα του εκχυλίσματος Mangosteen φρούτα. Υπο-πίνακα αντιπροσωπεύει την επέκταση του προφίλ για να αποκαλύψει πρόσθετα συστατικά στο εκχύλισμα.

Η

Mangosteen φρούτα εκχύλισμα μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη

Παρατηρήσαμε ότι MFE έχει προφανής τοξικότητα στα δύο κύτταρα 22Rv1 και LNCaP υπό μικροσκόπιο (Εικ. 2Α). Χρησιμοποιώντας δοκιμασία ΜΤΤ, παρατηρήσαμε ότι MFE μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων 22Rv1 και LNCaP σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο με μια καλύτερη επίδραση επί 22Rv1 κυττάρων (Σχήμα 2Β & amp?. C). MFE ανέστειλε επίσης τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων LNCaP και 22Rv1 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (εικ. 2D).

[Α], Μικροσκοπικές εικόνες του MFE-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα καρκίνου προστάτη, MFE δόση ενδείκνυται. [Β], LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αυξανόμενες δόσεις του MFE για 24, 48, ή 72 ώρες, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με ανάλυση ΜΤΤ. [C], τα κύτταρα 22Rv1 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με αυξανόμενες δόσεις του MFE για 24, 48, ή 72 ώρες, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με ανάλυση ΜΤΤ. [D], οι δύο 22Rv1 και LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αυξανόμενες δόσεις MFE, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων εκτιμήθηκε με δοκιμασία BrdU. Οι τιμές απορρόφησης στα 450 nm (Α450) αντιπροσωπεύουν πολλαπλασιαζόμενων αριθμούς κυττάρων. Αυτά τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και αντιπροσωπεύονται από τη μέση, μαζί με την τυπική απόκλιση.

Η

εκχύλισμα Mangosteen φρούτα απόπτωση που επάγεται σε κύτταρα καρκίνου προστάτη

Σε μια δόση των 15 μg /ml του MFE, το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων 22Rv1 ήταν κατά μέσο όρο 37% που προσδιορίζεται με κυτταρομετρία ροής (Σχ. 3Α). Αντίστοιχα, το επίπεδο του δείκτη απόπτωσης διασπασμένη κασπάση-3 και η πρωτεΐνη έκφρασης προ-αποπτωτικών Bax σε 22Rv1 και LNCaP κυττάρων αυξήθηκε με δόσεις MFE (σχήμα 3Β & amp?. C). Τα αποτελέσματα αυτά συμφωνούν με προηγούμενες αξιολόγηση μας από καθαρό α-mangsotin [9].

[Α], το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων σε MFE-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής. MFE δόση ήταν 15 μg /ml. [Β], διασπασμένη κασπάση 3 επίπεδα σε αυξανόμενες δόσεις του MFE κατεργασμένων κυττάρων 22Rv1 και LNCaP. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν από MFE-επεξεργασμένα κύτταρα και διασπασμένη κασπάση 3 επίπεδα αξιολογήθηκαν από ίδιες ποσότητες κυτταρολύματα με ELISA, λεπτομέρειες βλέπε

Υλικά και Μέθοδοι

. Σχετικά επίπεδα έκφρασης αναφέρονται ως τιμές απορρόφησης στα 450 nm (Α450). [C], έκφραση Bax σε αυξανόμενες δόσεις του MFE-αγωγή 22Rv1 και LNCaP. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν από MFE-επεξεργασμένα κύτταρα, η έκφραση Bax ανιχνεύθηκε με κηλίδα western, και β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Αυτά τα αποτελέσματα είναι εκπρόσωποι από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

εκχύλισμα Mangosteen φρούτα αύξησε την έκφραση του ξετυλίγεται πρωτεΐνες απόκρισης πρωτεϊνών στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη

Έχει καθιερωμένη ότι ER στρες ενεργοποιεί UPR να αποκαταστήσει κυττάρων homeostatsis. Έτσι, εξετάσαμε την έκφραση σημαντικών ER στρες /UPR πρωτεΐνες σε MFE-θεραπεία καρκίνου του προστάτη κύτταρα (22Rv1 και LNCaP). Η έκφραση τριών σημαντικών UPR πρωτεΐνες, παγκρεατική ER κινάση (PKR) -όπως κινάσης ER (PERK), ένζυμο ινοσιτόλη-απαιτώντας 1 (IRE1) και ομόλογη πρωτεΐνη Ο /ΕΒΡ (CHOP), σταδιακά επάνω ρυθμισμένη με αυξανόμενες δόσεις του MFE επί 22Rv1 και LNCaP κύτταρα (Σχ. 3Α).

εκχύλισμα Mangosteen φρούτα διαμορφωμένο το ER στρες-ειδικά κασπάσης-4

έχει αναφερθεί ότι η κασπάση-4 είναι εντοπισμένη σε μεμβράνη ER και μπορεί λειτουργία ως ER στρες-ειδικά κασπάση σε ανθρώπινα κύτταρα [14]. Διαπιστώσαμε διασπασμένης κασπάσης-4 και στις δύο 22Rv1 και LNCaP κύτταρα μετά κατεργασία κυττάρων με μια περιοχή δόσεων του MFE για 24 ώρες. Τα αποτελέσματα έδειξαν μια δοσοεξαρτώμενη αύξηση του διασπασμένη κασπάση 4 επίπεδα σε MFE-επεξεργασμένα κύτταρα (Εικ. 3Β).

εκχύλισμα Mangosteen φρούτα διαμορφωμένου chaperones ER

Επίσης διερευνήθηκε πιθανές αλλαγές έκφραση του chaperones ER σε MFE-θεραπεία καρκίνου του προστάτη κύτταρα. ΒίΡ (πρωτεΐνη σύνδεσης ανοσοσφαιρίνης), ένα κρίσιμο συνοδού ER εμπλέκονται στην ER στρες /UPR, ήταν επάνω ρυθμισμένη με αυξανόμενες δόσεις MFE (Σχ. 3C). Καλνεξίνη είναι μία πρωτεΐνη μεμβράνης ER για σωστή αναδίπλωση και τον έλεγχο της ποιότητας [15]. Παρατηρήσαμε μια μικρή αύξηση της έκφρασης καλνεξίνη από 0 έως 10 μg /ml του MFE στις δύο κυτταρικές σειρές. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση καλνεξίνη μειώθηκε δραματικά σε 15 μg /ml του MFE σε 22Rv1 κύτταρα (Σχ. 3C). πρωτεΐνη ER ενδοπλασματικό oxidoreductin-1 (Ero1-Lα) είναι μια οξειδάση ER και ρυθμίζεται προς τα πάνω με CHOP να αυξηθούν τα επίπεδα των πρωτεϊνών misfolded [16]. MFE αυξημένη Ero1-Lα με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 3C). MFE αυξήθηκε επίσης μια άλλη συνοδό ER, PDI με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 3C). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι MFE αύξησε την έκφραση της σαπερόνες ER στρες στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη.

εκχύλισμα Mangosteen φρούτα που προκαλείται από συγκολλημένα XBP-1 σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη

Κατά τη διάρκεια της ER στρες, δεσμευτικό πλαίσιο Χ σε πρωτεΐνες 1 (XBP-1) mRNA υφίσταται splice για την παραγωγή ενός παράγοντα μεταγραφής προς τα πάνω ρύθμιση UPR γονίδια. Έτσι χρησιμοποιήσαμε RT-PCR για την ανίχνευση συγκολλημένα XBP-1 σε MFE-αγωγή 22Rv1 και LNCaP κύτταρα. Μάτισμα και μη ματισμένου XBP-1 cDNA και οι δύο παρατηρήθηκαν σε κατεργασμένα κύτταρα με μόνο μη ματισμένου XBP-1 cDNA σε κύτταρα ελέγχου (Σχ. 4D).

22Rv1 και LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αυξανόμενες δόσεις του MFE ή α-Mangostin για 24 ώρες. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και υποβλήθηκαν σε Western Blot για την ανίχνευση της έκφρασης των κρίσιμων πρωτεϊνών ER στρες. [Α], έκφραση πρωτεϊνών ER στρες σε αυξανόμενες δόσεις του MFE-αγωγή 22Rv1 και LNCaP κύτταρα. [Β], Διασπασμένη κασπάση 4 επίπεδα σε αυξανόμενες δόσεις του MFE-αγωγή 22Rv1 και LNCaP κύτταρα. [C], έκφραση πολλαπλών σαπερόνες ER σε αυξανόμενες δόσεις του MFE-αγωγή 22Rv1 και LNCaP κύτταρα. Βήτα-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Αυτά τα αποτελέσματα είναι εκπρόσωποι από τρία ανεξάρτητα πειράματα. [D], Άνω πάνελ, σχηματικό διάγραμμα XBP-1 μάτισμα κατά τη διάρκεια ER στρες. Κάτω πάνελ, αγαρόζη εικόνες γέλη των προϊόντων RT-PCR. 22Rv1 και LNCaP κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 15 μg /ml MFE για 24 ώρες. Ολικό RNA εκχυλίστηκε και υποβλήθηκε σε RT-PCR. χρησιμοποιήθηκαν XBP-1primers που καλύπτουν το συγκολλημένα ακολουθία. προϊόντα RT-PCR έτρεξαν σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 2%. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως μάρτυρας.

Η

εκχύλισμα φρούτων Mangosteen επιλεκτικά προκαλούμενη ER στρες στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη ενώ διαφυλάσσει μη καρκινικά κύτταρα του επιθηλίου του προστάτη

Στη συνέχεια, ο στόχος μας ήταν να χαρακτηρίσει τις πιθανές του MFE για την προώθηση της ER στρες σε μη καρκινικά κύτταρα. επιθηλιακά κύτταρα προστάτη (PRECs) απομονώθηκαν από βιοψία του προστάτη δύο ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που υποβάλλονται σε ριζική προστατεκτομή. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε 60-70% συρροή και στη συνέχεια κατεργάζεται με MFE. Είναι ενδιαφέρον, 15 μg /ml του MFE μειώθηκε σημαντικά PERK έκφραση σε PRECs από τους δύο ασθενείς, ενώ ίδια δόση του MFE αυξήθηκε σημαντικά PERK έκφραση σε 22Rv1. Ως μεταγενέστερος πρωτεΐνη ρυθμίζεται από PERK, CHOP έκφραση δεν αύξησε σε MFE-αγωγή PRECs, ενώ δραματική αύξηση σε MFE-κατεργασμένα κύτταρα 22Rv1 (Εικ. 5). Αυτά τα δεδομένα κατέδειξαν ότι MFE προωθεί επιλεκτικά ER στρες /UPR σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη αλλά όχι σε μη καρκινικά κύτταρα του προστάτη επιθηλιακά, υποδηλώνοντας μια διαφορετική επίδραση σε αναλογικά πρωτεΐνες στρες ER στα καρκινικά κύτταρα έναντι μη καρκινικών κυττάρων.

PRECs απομονώθηκαν από ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική προστατεκτομή. Τα δείγματα στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν για την παρασκευή κυττάρων για θεραπεία με παράγοντες της μελέτης. PRECs από δύο διαφορετικούς ασθενείς με καρκίνο του προστάτη ή 22Rv1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 15 μg /ml του MFE για 24 ώρες και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε Western blots. Βήτα-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Μείον και συν σύμβολα αναπαριστούν αντίστοιχα απουσία και παρουσία υποδεικνύεται παραγόντων. Αυτά τα αποτελέσματα είναι εκπρόσωποι από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Σταθερότητα των α-mangostin σε εκχύλισμα Mangosteen φρούτα παρουσία μικροσωμάτων ήπατος

Για να χαρακτηρίζουν την έκταση του μεταβολισμού Ρ450, α-mangostin και εκχύλισμα mangosteen φρούτα επωάστηκε με την παρουσία μικροσωμάτων ήπατος από ποντικού και ανθρώπου πηγές. Για αυτό το συγκεκριμένο πείραμα θα αξιολογηθεί μικροσώματα του ήπατος, όπως η χορήγηση παράγοντα μελέτης. Με 30 λεπτά, η σταθερότητα του α-mangostin σε MFE βρέθηκε μείωση ελαφρώς σε μικροσώματα ποντικού και ανθρώπινου ήπατος κατά 30,8% και 17%, αντίστοιχα (Σχήμα 6Α & amp?. Β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι ο μεταβολισμός της φάσης Ι έχει ένα μικρό ρόλο στον μεταβολισμό του α-mangostin, η οποία είναι η πιο άφθονη xanthone σε MFE. Αυτά τα δεδομένα πρότειναν ότι ο μεταβολισμός φάσης ΙΙ σε μικροσώματα φαίνεται να είναι η κύρια οδός μεταβολισμού MFE.

ανθρώπου και ποντικού ηπατικά μικροσώματα παρασκευάστηκαν όπως περιγράφεται στα υλικά και μεθόδους. Μαύρες μπάρες αντιπροσωπεύουν το αντίστοιχο έλεγχο για το συγκεκριμένο άτομο χρονικό σημείο. Γκρι μπάρες αντιπροσωπεύουν την σταθερότητα μικροσωματική του α-Mangostin στη φάση Ι ενζύμου σύστημα τόσο ποντικού και ανθρώπινα ηπατικά μικροσωμάτια. Ένα «όχι προ-επώαση» πραγματοποιήθηκε (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) και δεν έχει καμία επίπτωση ως προς την ερμηνεία των δεδομένων. [Α], Mangosteen Fruit Extract (τυποποιημένο για να α-Mangostin) επωάστηκε με μικροσώματα ήπατος ποντικού. [B], Mangosteen Fruit Extract (τυποποιημένο για να α-Mangostin) επωάστηκε με ανθρώπινα ηπατικά μιτοχόνδρια. [C], Δώδεκα ζώα ενέθηκαν υποδορίως σε κάθε πλευρά του ποντικιού (δηλαδή δύο όγκοι ανά ποντίκια) με ~ 1 × 10

6 22Rv1 κύτταρα να κινήσει την ανάπτυξη του όγκου. Είκοσι τέσσερις ώρες μετά την εμφύτευση των κυττάρων, τα ζώα σε κάθε ομάδα που έλαβε όχημα ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση ή εκχύλισμα mangosteen φρούτα (35 mg /kg). Τα σωματικά βάρη των αθυμικών γυμνών ποντικών που έλαβαν θεραπεία με φορέα ελέγχου ή εκχύλισμα mangosteen φρούτα (35 mg /kg) ενδοπεριτοναϊκώς δύο φορές την εβδομάδα μετρήθηκαν δύο φορές την εβδομάδα. [D], ο μέσος όγκος του όγκου του ελέγχου και mangosteen φρούτα ποντικούς που υπέστησαν αγωγή εκχύλισμα χαράχθηκαν πάνω ημέρες μετά τον εμβολιασμό των καρκινικών κυττάρων. Τα σημεία των δεδομένων αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή των 12 όγκους από έξι ποντικούς? μπάρες αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση της μέσης, *

P

& lt? 0,01. [Ε], αντιπρόσωποι των ποντικών που φέρουν όγκο από τον έλεγχο και την ομάδα MFE-αγωγή.

Η

εκχύλισμα Mangosteen φρούτα ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη κυτταρικών 22Rv1 σε αθυμικούς γυμνούς ποντικούς χωρίς εμφανή τοξικότητα

Για να εξετάσει αντικαρκινική δράση MFE του

in vivo

, κατασκευάσαμε ξενομόσχευμα μοντέλα ποντικών με 22Rv1 κύτταρα και τις αντιμετώπισε με MFE ή όχημα. Σε σύγκριση με τον έλεγχο, 35 mg /kg του MFE ανάπτυξης αναστέλλει σημαντικά όγκου (Σχ 6D & amp?. Ε). Εν τω μεταξύ, δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στο βάρος σώματος ανάμεσα στην ομάδα MFE-αγωγή και της ομάδας υπό αγωγή με όχημα (Εικ. 6C), γεγονός που υποδηλώνει MFE έχει χαμηλή ή καθόλου τοξικότητα σε αποτελεσματική δόση.

Συζήτηση

Το Mangosteen (

Garcinia mangostana

) φρούτων αναφέρεται ότι έχει μια ποικιλία από φαρμακολογικές ιδιότητες συμπεριλαμβανομένης της αύξησης αποπτωτικών δεικτών σε αρκετές καρκίνου διαφορά κυτταρικές σειρές [17], [18]. Μια ποικιλία των πολυφαινολών είναι γνωστή ως xanthones οποία αποτελούνται από ένα τρικυκλικός σύστημα αρωματικού δακτυλίου μαζί με τα διάφορα ισοπρενύλιο, υδροξυ, ή μεθοξυ ομάδων έχουν απομονωθεί από το mangosteen. Το πιο άφθονο ξαντχονε είναι α-mangostin, ένα ισοπρενυλιωμένες xanthone, η οποία έχει λάβει την περισσότερη προσοχή για την προαγωγή της υγείας του ιδιότητες [9], [19] – [23]. Κατά την αξιολόγηση των καρπών και το ενδοκάρπιο και εξωκάρπιο μαζί με τα φύλλα, ο φλοιός και οι ρίζες περισσότερες από 60 διαφορετικές xanthones έχουν απομονωθεί μέχρι σήμερα από το mangosteen. Έχουμε αναφέρει προηγουμένως σχετικά με την αντικαρκινική δράση του α-mangostin σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη και έναν αθυμικούς γυμνούς μοντέλο ποντικού [9]. Σε αυτή την προηγούμενη μελέτη παρατηρήσαμε α-mangostin να αναστέλλουν CyclinD1 /CDK4 και προτείνουν ένα πιθανό μηχανισμό για ανταγωνιστική αναστολή στη θέση σύνδεσης της CDK4. Στην ίδια μελέτη παρατηρήσαμε επίσης γυμνά ποντίκια εμφυτευμένα με 22Rv1 κύτταρα για να εμφανιστεί ένα 65% μικρότερο όγκο όγκου μετά καθημερινή αγωγή με α-mangostin. Σύμφωνα με την εμπειρία μας, καθώς και άλλοι ερευνητές, α-mangostin είναι καλά ανεκτή με ορισμένες εκθέσεις δόσεων τόσο υψηλές όσο 200 mg /kg σωματικού βάρους δεν σχετίζονται με οποιαδήποτε συγκεκριμένη τοξικότητα. Πολλαπλές εκθέσεις μαζί με τις μελέτες μας έχουν παρατηρήσει α-mangostin να επάγει απόπτωση, ωστόσο, τα γεγονότα που συμβαίνουν πριν από την απόπτωση είναι λιγότερο κατανοητές. Επιπλέον, έχουμε αναφερθεί πρόσφατα στο φαρμακοκινητικό προφίλ του στόματος χορηγούμενου α-mangostin σε ποντίκια και έδειξαν ότι η γενική αίματος (CBC), συμπεριλαμβανομένων των λευκών αιμοσφαιρίων με διαφορική δεν αλλοιώθηκε [24]. Για το λόγο αυτό, αρχίσαμε να εξερευνήσετε το ενδοπλασματικό δίκτυο ως πιθανός στόχος μιας ιδιαίτερα χαρακτηρίζεται εκχύλισμα Mangosteen (& gt? 35% α-mangostin).

Το ενδοπλασματικό δίκτυο είναι εξαιρετικά ευαίσθητη σε μεταβολές στο γύρω περιβάλλον του που έχουν μια άμεση επίδραση στη δομή του, την ακεραιότητα και τη λειτουργία [1], [2]. Καθώς ο καρκίνος προωθείται και εξελίσσεται υπάρχει αυξημένη ζήτηση για τις απαιτήσεις του ενδοπλασματικού δικτύου όπως αποδεικνύεται από την αύξηση της πρωτεϊνικής σύνθεσης. Αυτή η αύξηση της ζήτησης διατρέχει τον κίνδυνο της κατασκευής πρωτεϊνών που ξεδιπλώνονται ή κακώς αναδιπλωμένο. Μια σημαντική πτυχή αυτής της αυξημένης ζήτησης για πρωτεϊνική σύνθεση είναι το «ξεδιπλωμένη απόκριση πρωτεΐνη» που περιλαμβάνει PERK, CHOP και αρκετές άλλες πρωτεΐνες ER στρες [25]. Όπως ομοιόσταση στο ER είναι «αποκατασταθεί», οι πρωτεΐνες μπορούν να διπλωθούν σωστά ή υφίστανται αποικοδόμηση που με τη σειρά θα επιτρέψει στα κύτταρα να επιβιώσουν. Αν ομοιόσταση δεν είναι εγκατεστημένος από το εκτυλίχθηκε απάντηση πρωτεΐνη ή διαταράσσεται από εξωτερικό παράγοντα, τα κύτταρα αυτά θα υφίστανται απόπτωση. Ως εκ τούτου, προσεγγίσεις για την αύξηση της ER στρες που σχετίζονται με απόκριση πρωτεΐνη μπορεί να είναι μια ελκυστική προσέγγιση για να αλλάξει την ομοιόσταση του ER σε καρκινικά κύτταρα με σκοπό την προώθηση της απόπτωσης. Τα αποδεικτικά στοιχεία από άλλους ερευνητές και τους εαυτούς μας δείχνει ότι η χρήση μικρών μορίων που διαμορφώνουν τις πρωτεΐνες ER στρες μπορεί επίσης να επιβραδύνει την ανάπτυξη των όγκων, την ανάπτυξη, την εισβολή, παρέχοντας έτσι μια νέα θεραπευτική στρατηγική [26], [27].

ER στρες ευνοεί όχι μόνο την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων, αλλά κάτω από συγκεκριμένες καταστάσεις μπορεί να προωθήσει την απόπτωση. Φυσικό παράγοντες, όπως η κουρκουμίνη από την κουρκουμά (

Curcuma longa

) έχουν αναφερθεί ότι επάγουν προ-αποπτωτικό στρες ER σε ανθρώπινη λευχαιμία κυττάρων HL-60 με προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης της φωσφορυλιωμένης PERK, CHOP, Bip και διασπασμένη κασπάση -4 [28]. Σε συμφωνία με αυτό, στη μελέτη μας μετά από θεραπεία με MFE τόσο κύτταρα 22Rv1 και LNCaP υφίστανται ER στρες όπως αποδεικνύεται από την αύξηση των πρωτεϊνών του στρες ER συμπεριλαμβανομένων PERK, CHOP, IRE1α, Bip και διασπασμένη κασπάση-4. CHOP είναι μια καθιερωμένη κατάντη ER στρες /UPR πρωτεΐνη και παίζει σημαντικό ρόλο στην ER στρες απόπτωση [29]. Οι μηχανισμοί που CHOP συμβάλλει στην απόπτωση περιλαμβάνουν αναστολή αντι-αποπτωτική Bcl-2 και up-ρύθμιση GADD34 και Ero1α. Up-ρύθμιση των GADD34 και Ero1α θα επιδεινώσει ER στρες με την ανάκαμψη της μετάφρασης και της αύξησης misfolded επίπεδα της πρωτεΐνης. Σε 22Rv1 κύτταρα, η πιο δραματική αύξηση του CHOP συνέβη στην δόση των 15 μg /ml MFE. Συμπτωματικά, καλνεξίνη, μία πρωτεΐνη μεμβράνης ER εξασφαλίζοντας σωστή αναδίπλωση και τον έλεγχο ποιότητας, μειώθηκε σημαντικά στα 15 μg /ml θεραπεία MFE. Αυτό υποδηλώνει ότι 15 μg /ml MFE προκάλεσε μια πιθανή κατάρρευση του συστήματος ελέγχου της ποιότητας του ER. Επίσης, PERK, IRE1 και Μπιπ όλα υποβλήθηκε σε μια εντυπωσιακή αύξηση κατά 15 μg /ml θεραπεία MFE. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι 15 μg /ml του MFE μπορεί να είναι μια ιδανική δόση για να ωθήσει ER στρες από προ-επιβίωσης σε προ-απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη.

Το επόμενο βήμα ήταν να καταλάβει αν MFE θα αποτέλεσμα σε ER στρες σε μη καρκινικά κύτταρα ή εάν φαίνεται να είναι μια επιλεκτική δράση προς τα καρκινικά κύτταρα εκεί. Για να γίνει αυτό κατανοητό περαιτέρω, προστάτη επιθηλιακά κύτταρα απομονώθηκαν από δύο ανθρώπινα υποκείμενα που υποβάλλονται σε ριζική προστατεκτομή. Η επίδραση της MFE εξετάστηκε σε καλοήθη επιθηλιακά κύτταρα του πρωτογενούς προστάτη (PRECs) και 22Rv1 κύτταρα. Σε αντίθεση με αθανατοποιημένες κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη σε κατεργασία με MFE, που έχουν ως αποτέλεσμα την αύξηση της PERK δραστηριότητας, PRECs έδειξε μια μείωση της τάξης του Perk. Αυτή η διφασική απόκριση εξαρτάται από τον τύπο του κυττάρου απεικονίζει περαιτέρω την πολυπλοκότητα της ER στρες στην καρκινογένεση του καρκίνου του προστάτη. Στο σύνολό τους, τα στοιχεία δείχνουν ότι MFE στοχεύουν επιλεκτικά τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη ενώ διαφυλάσσει τα φυσιολογικά κύτταρα. Θα απαιτηθεί περαιτέρω και πιο λεπτομερή κατανόηση αυτής της διαφορικό αποτέλεσμα.

Όπως έχουμε περιγράψει προηγουμένως α-mangostin όταν χορηγείται από το στόμα οδήγησε σε 65% μικρότερο όγκο σε 22Rv1 κύτταρα [9]. Σε 22Rv1 εμφυτευθεί ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με MFE παρατηρήσαμε μια 88% μικρότερο όγκο του όγκου σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου. Η δόση που χρησιμοποιήθηκε σε αυτό το πείραμα ήταν 35 mg /kg εκχυλίσματος mangosteen φρούτα που προσεγγίζει έως 12 mg /kg α-mangostin. Για να κατανοήσουμε εάν α-mangostin είναι το κύριο συστατικό του εκχυλίσματος φρούτων mangosteen 22Rv1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 35 mg /kg και 70 mg /kg α-mangostin. Η θεραπευτική αγωγή με μόνο α-mangostin αντιπροσωπεύει μια αύξηση 300 έως 600% σε α-mangostin έκθεση. Ακόμη και σε 70 mg /kg α-mangostin, η οποία οδήγησε σε 69% μικρότερο όγκο, η καθαρή φυτοχημικές δεν ήταν τόσο αποτελεσματική όσο MFE που περιέχει 12 mg /kg α-mangostin (μη δημοσιευμένα δεδομένα). Εκ των υστέρων, αυτό δεν είναι ότι προκαλεί έκπληξη, ως μίγμα των φυτοχημικών συχνά αναφερθεί ότι έχουν μια συνεργική επίδραση που είναι ανώτερη σε μεμονωμένα φυτοχημικά. Όπως αποδεικνύεται από χρωματογράφημα μας υπάρχει μια ποικιλία των xanthones που υπάρχουν στο εκχύλισμα μας, ίσως μεγαλύτερη από 20 επιπλέον xanthones, η οποία θα μπορούσε να είναι υπεύθυνη για τις ανώτερες αντικαρκινικές ιδιότητες του εκχυλίσματος Mangosteen σε σχέση με ένα άτομο xanthone.

Η συσσώρευση βλαστικής σειράς ή /και σωματικές μεταλλάξεις σε «φυσιολογικά» κύτταρα έχει ως αποτέλεσμα την ανικανότητα να ξεπεράσουν τον κυτταρικό κύκλο και αποπτωτικά σημεία ελέγχου προκύπτουν με αυτόν τον τρόπο στην έναρξη του καρκίνου. Καθώς ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων αυξάνει την αυξημένη ζήτηση για την πρωτεΐνη μηχανήματα ενός κυττάρου πρέπει να προσαρμόζεται μέσω διαφόρων μηχανισμών, συμπεριλαμβανομένων ενδοπλασματικό άγχος δίκτυο. Στις μελέτες μας έχουμε παρατηρήσει εκχύλισμα mangosteen φρούτα τυποποιηθεί σε α-mangostin να επάγει επιλεκτικά ER στρες στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη η οποία συσχετίζεται με την αύξηση των αποπτωτικών δεικτών. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη που προμηθεύονται από ασθενείς που διατρέχουν υψηλό κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου του προστάτη MFE παρατηρείται να μειώνεται ER στρες.