Αφηρημένο

ειδική ανοσία των Τ κυττάρων σε ασθενείς με ενεργό φυματίωση συνδέεται με μείωση της πολυλειτουργικότητας. Ωστόσο, είναι άγνωστο αν τα προφίλ κυτοκίνης διαφέρουν σε ασθενείς με πρωτοπαθή μόλυνση και εκείνοι με προηγούμενη επαφή. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται ενδοκυστική ανοσοθεραπεία με εξασθενημένα ζωντανά Bacille Calmette-Guérin (BCG) σε ασθενείς με καρκίνωμα ουροθηλίου ως μοντέλο για τον χαρακτηρισμό της επαγωγής συστηματικού ανοσίας προς καθαρισμένη πρωτεΐνη παράγωγο (PPD) και να μελετήσουν κατά πόσο τα προφίλ κυτοκίνης διαφέρουν ανάλογα με προϋπάρχουσα ανοσία . Δεκαοκτώ ασθενείς με μη-μυϊκή καρκίνος της ουροδόχου κύστης επεμβατική προσλήφθηκαν κατά τη διάρκεια BCG-επαγωγής. Πενήντα τέσσερα υγιή άτομα χρησίμευσαν ως μάρτυρες. Η ιντερφερόνη (IFN) -γ και η ιντερλευκίνη (IL) -2 παράγουν PPD-ειδικά CD4 Τ κύτταρα αναλύθηκαν κατά μήκος πριν από κάθε ενστάλαξη χρησιμοποιώντας μια ταχεία ανοσοδοκιμασία ολικού αίματος ροής κυτομετρική. Baseline επίπεδα της ΙΡΝ-γ που παράγουν ΡΡϋ-ειδικά Τ κύτταρα ήταν συγκρίσιμα με τους ελέγχους. Τ κύτταρα έδειξαν ένα 5-πλάσια αύξηση σε 0,23% κατά εβδομάδα 2/3, και αυξήθηκε περαιτέρω 8 φορές την εβδομάδα 4/5 (στο 0,42%, ρ = 0.0007). Συστημική ανοσία προκλήθηκε σε όλους τους ασθενείς, αν και η αύξηση ήταν λιγότερο έντονη σε ασθενείς με προϋπάρχουσα ανοσία. Όπως και στην ενεργό φυματίωση, κυτοκίνη προφίλ κατά τη διάρκεια της θεραπείας αποκάλυψε ένα χαμηλότερο ποσοστό πολυλειτουργικά IFN-γ /IL-2 διπλά-θετικά Τ κυττάρων σε σύγκριση με τους ελέγχους (60,2% έναντι 71,9%, ρ = 0.0003). Αξίζει να σημειωθεί ότι, κατά τη σύγκριση των ασθενών με και χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία, προφίλ κυτοκινών σε ασθενείς με πρωτοπαθή ασυλία είχαν στραφεί προς την IL-2 μονά Τ κύτταρα που παράγουν (p = 0.02), ενώ εκείνες σε ασθενείς με προϋπάρχουσα ανοσία είχαν μετατοπιστεί προς IFN -γ single-θετικότητα (p = 0.01). Συμπερασματικά, η συστηματική Τ κυτταρικές αποκρίσεις επάγονται μετά BCG-θεραπεία, και την κινητική τους και το προφίλ κυτοκίνης εξαρτάται από προϋπάρχουσα ανοσία. Μειωμένη λειτουργικότητα είναι ένα τυπικό χαρακτηριστικό της ειδικής ανοσίας σε δύο ασθενείς με ενεργό φυματίωση και BCG-θεραπεία. Μεταξύ των ασθενών με ενεργό λοίμωξη, μια στροφή προς την IL-2 ή μονά-θετικά κύτταρα IFN-γ μπορεί να επιτρέψει διάκριση ανάμεσα σε ασθενείς με πρωτοπαθή μόλυνση και περιπτώσεις με ενισχυμένους ανοσία μετά από προηγούμενη επαφή, αντίστοιχα

Παράθεση:. Elsasser J, Janssen MW, Becker F, Suttmann Η, Schmitt Κ, Sester U, et al. (2013) αντιγόνο-ειδικών κυττάρων CD4 Τ επάγονται μετά από ενδοκυστική BCG-ενστάλαξης θεραπεία σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης και Εμφάνιση παρόμοια προφίλ κυτοκινών όπως και στην ενεργό φυματίωση. PLoS ONE 8 (9): e69892. doi: 10.1371 /journal.pone.0069892

Επιμέλεια: Delia Goletti, Εθνικό Ινστιτούτο Λοιμωδών Νόσων (L. Spallanzani), Ιταλία

Ελήφθη: 2η Μαΐου 2013? Αποδεκτές: 13 Ιούν, 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 του Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Elsasser et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε εν μέρει από ανεξάρτητη έρευνα στήριξη από medac GmbH. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου.

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε εν μέρει από ανεξάρτητη έρευνα στήριξη από medac GmbH. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου και αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. ΚΥΡΊΑ. και ΗΠΑ είναι συν-ιδρυτές της RedFlag Diagnostics GmbH και συν-εφευρέτες για μια αίτηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας με τίτλο «In vitro διαδικασία για την γρήγορη καθορισμό του καθεστώτος του ασθενούς σχετικά με την μόλυνση με το Mycobacterium tuberculosis» (διεθνής αριθμός ευρεσιτεχνίας WO2011113953 /Α1). H.S. ενεργεί ως σύμβουλος για medac GmbH. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Όλοι οι άλλοι συγγραφείς δεν δηλώνουν τυχόν ανταγωνιστικά οικονομικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Από το 1976, η ανοσοθεραπεία με ζωντανή βάκιλο Calmette Guérin (BCG) έχει αποδειχθεί ότι είναι μια αποτελεσματική επικουρική ενδοκυστική θεραπεία για την πρόληψη της προόδου και της υποτροπής μετά από διουρηθρική εκτομή του nonmuscle διηθητικού καρκίνου της ουροδόχου κύστης [1,2]. Η αντικαρκινική δράση του BCG-θεραπείας οφείλεται σε μεγάλο βαθμό την επαγωγή μιας ισχυρής έμφυτης ανοσολογικής απόκρισης [3] που ακολουθείται από διήθηση των Τ κυττάρων μέσα στην κύστη [4,5]. Αυτό γίνεται κυρίως χαρακτηρίζεται από μια απάντηση Τ-βοηθητικών κυττάρων τύπου [6,7], και η έκταση του φάνηκε να συσχετίζεται με την κλινική ανταπόκριση [8]. Αν και η θεραπευτική δράση περιορίζεται στην κύστη, τα μοντέλα ποντικού υποδεικνύουν ότι η ζωντανή βακίλλων εισάγετε κύστη-λεμφαδένες παροχέτευσης όπου έναυση Τ κυττάρων εκκινεί [9]. Αυτό υποδηλώνει ότι η τοπική ενστάλαξη BCG-μπορεί να συνδέεται με μια συστημική διέγερση ειδικών Τ κυττάρων, αν και οι ενδείξεις για επαγωγή κινητική τους και λειτουργικές ιδιότητες σε ανθρώπους είναι περιορισμένη [10]. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι μελέτες σε ποντίκια αποκάλυψε ότι η διήθηση των κυττάρων Τ μετά BCG-ενστάλαξη ταχύτερα παρατηρείται εάν τα ζώα είχαν προ-ανοσοποιηθεί με BCG εμβολιασμού, γεγονός που υποδηλώνει ότι μια προϋπάρχουσα ανοσία μπορεί να είναι ευεργετική για την επιτάχυνση επαγωγή κυττάρων Τ και ως εκ τούτου θεραπευτικό αποτέλεσμα . Αυτό υποστηρίχθηκε από τις παρατηρήσεις ότι προϋπάρχουσα ανοσία συνδέθηκε με βελτιωμένη απόκριση κατά του όγκου μετά BCG-ενστάλαξη τόσο στα ποντίκια όσο και σε ασθενείς [9]. Έτσι, υποδόρια ανοσοποίηση πριν από την ενστάλαξη μπορεί να αντιπροσωπεύει μια νέα θεραπευτική στρατηγική για τη βελτίωση της έκβασης της θεραπείας. Σε αυτό το πλαίσιο, η διαθεσιμότητα των ταχέων δοκιμασιών για την εκτίμηση της ποσότητας και της λειτουργικότητας της ειδικής ανοσίας σε ατομική βάση αποτελεί απαραίτητη προϋπόθεση για την παρακολούθηση αυτών των στρατηγικών [11].

Οι εκτιμήσεις σχετικά με την παρουσία της συστημικής ανοσίας έναντι BCG μπορεί να ληφθεί με τη χρήση της φυματίνης δέρμα-τεστ που ανιχνεύει πριμοδοτημένα κύτταρα Τ προς μυκοβακτηριακά αντιγόνα ως μια αντίδραση υπερευαισθησίας καθυστερημένου τύπου [12]. Η καθαρισμένη πρωτεΐνη-παράγωγο (PPD), το αντιγόνο που χρησιμοποιείται στο δέρμα δοκιμή, είναι ένα εκχύλισμα των διαφόρων μυκοβακτηριακών πρωτεϊνών που υπάρχουν σε διαφορετικά μυκοβακτηριακά είδη, συμπεριλαμβανομένου του BCG. Δέρμα δοκιμή έχει κάποιους περιορισμούς ως εργαλείο παρακολούθησης, δεδομένου ότι συχνά αποδίδει ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα [13], και μπορεί να προκαλέσει την ενίσχυση αντιδράσεις που δεν διακρίνονται από τις δυναμικές αλλαγές που προκαλούνται από την ενστάλαξη [14]. Τα τελευταία χρόνια,

in vitro

-assays έχουν αναπτυχθεί που επιτρέπουν μια πιο λεπτομερής ποσοτικοποίηση του

M. φυματίωση

-ειδικά Τ κύτταρα. Οι περισσότεροι

in vitro

-assays μπορεί να εκτελεστεί από μικρούς όγκους πλήρους αίματος μέσα σε μια ημέρα, είναι εφοδιαστικά λιγότερο απαιτητικές, και να επιτρέψει σειριακό δοκιμές και λειτουργικός χαρακτηρισμός του αντιγόνου-ειδικών Τ κυττάρων [15]. Στον καθορισμό της λοίμωξης με το

M. φυματίωση

, εκτίμηση της λειτουργικότητας από προφίλ κυτοκίνης έχει ήδη χρησιμοποιηθεί για τη διάκριση των ασθενών με και χωρίς ενεργό νόσο [16-21]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η μείωση των πολυλειτουργικότητα και η στροφή προς κυτοκίνη κυψελίδες μιας παράγουν δείχθηκε πρόσφατα ότι είναι ένα τυπικό χαρακτηριστικό των ειδικών για το αντιγόνο CD4 Τ κύτταρα σε ασθενείς με ενεργό φυματίωση [16-18]. Είναι ενδιαφέρον ότι, μεταξύ των ασθενών με μειωμένη ποσοστό IFN-γ /IL-2 διπλά-θετικά κύτταρα, μερικά έδειξε μια μετατόπιση προς τα κύτταρα που εκφράζουν IL-2, ενώ άλλες παρουσίασαν IFN-γ μονό-θετική κατάσταση [16]. Ο λόγος για αυτή την διχοτόμηση είναι προς το παρόν ασαφές, αλλά μπορεί να σχετίζεται με την παρουσία ή απουσία του προϋπάρχουσα ανοσία, πριν από την ανάπτυξη της ενεργού φυματίωσης.

θεραπεία ενστάλαξη BCG Ενδοκυστική μπορεί να θεωρηθεί ως πρότυπο για τη μελέτη της επαγωγής της μυκοβακτηριακής ανοσίας μετά ορίζεται επαφή αντιγόνου στον άνθρωπο. Ως εκ τούτου, έχουν χρησιμοποιήσει μια δοκιμασία πλήρους αίματος κυτταρομετρίας ροής για τον χαρακτηρισμό κατά μήκος της κινητικής επαγωγή και τη λειτουργικότητα των συστημικών ΡΡϋ-ειδικών Τ κυττάρων σε ασθενείς πριν και μετά από BCG-ενστάλαξη. Όπως προϋπάρχουσα ανοσία προς PPD μπορεί να επηρεάσουν την κινητική και λειτουργική προφίλ των ειδικών Τ κυττάρων μετά την πρόκληση, ιδιαίτερη έμφαση δόθηκε στον χαρακτηρισμό της επαγωγής της ειδικής ανοσίας σε ασθενείς με και χωρίς αποδεικτικά στοιχεία για την προηγούμενη ευαισθητοποίηση με μυκοβακτηριδιακά αντιγόνα.

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας (Ärztekammer des Saarlandes) και όλοι οι ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση.

ασθενείς

Η μελέτη διεξήχθη μεταξύ 18 ασθενών με καρκίνο της ουροδόχου κύστης που έλαβαν θεραπεία με BCG ενστάλαξη για πρώτη φορά (μέση ηλικία 66,7 ± 10,9 χρόνια). Όλα τα άτομα που υποβλήθηκαν σε διουρηθρική εκτομή όλων των ορατών όγκων. Τα ασθενή και του όγκου χαρακτηριστικά φαίνονται στον πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς αναλύθηκαν κατά τη διάρκεια ενός προτύπου πορεία επαγωγή που αποτελείται από έξι εβδομαδιαίες ενδοκυστική BCG-εγχύσεις (BCG-medac, στέλεχος RIVM που προέρχεται από το στέλεχος 1173-Ρ2), και ακολούθησε κλινικά σύμφωνα με τις ισχύουσες κατευθυντήριες γραμμές [ ,,,0],22]. Σε δύο ασθενείς, ο τρίτος και ο πέμπτος ενστάλαξη καθυστέρησε για 2 και 1 εβδομάδα οφειλόμενη σε νιτρώδη θετική λοίμωξη του ουροποιητικού συστήματος και οργανωτικούς λόγους, αντίστοιχα. Λήφθηκε αίμα πριν από BCG-θεραπείας, καθώς και 1, 2 ή 3 και 4 ή 5 εβδομάδες μετά, σε κάθε περίπτωση πριν από την ενστάλαξη. Θεραπεία συντήρησης δόθηκε σε 7 άτομα, σύμφωνα με το κέντρο της πρακτικής. Όγκου υποτροπή ή εξέλιξη ορίστηκε με βάση την βιοψία και κυτταρολογική εξέταση ούρων. Πενήντα τέσσερις ίδιας ηλικίας υγιή άτομα (μέσης ηλικίας 65,3 ± 11,0 χρόνια, 45 άνδρες, 9 γυναίκες) που υποβλήθηκαν σε αναλύσεις για την ανίχνευση λανθάνουσας μόλυνσης με

M. φυματίωση

χωρίς κλινική υποψία της ενεργού νόσου είχαν προσληφθεί ως μάρτυρες.

Δημογραφικά χαρακτηριστικά

ασθενείς (n = 18)

ετών, μέσος όρος ± SD66.7 ± 10.9Sex, αρσενικό /female15 /3Tumor χαρακτηριστικά * Ενιαία tumor9 /18 (50,0%) Πολλαπλές tumor9 /18 (50,0%) pTa9 /18 (50,0%) pT16 /18 (33,3%) CIS3 /18 (16,6%) G2 /G3-βαθμού tumors15 /18 (83,3% ) G211 /15 (73,3%) G34 /15 (26,6%) το χαμηλό /υψηλό βαθμό tumors14 /18 (77,8%) Χαμηλή grade9 /14 (64,3%) υψηλή grade5 /14 (35,7%) Associated CIS0 /18 (0%) επαναλαμβανόμενες tumor9 /18 (50,0%) Περιεγχειρητική μιτομυκίνη treatment5 /18 (27,7%) Ημέρες για θεραπεία, μέση τιμή ± SD34 ± 25Non responders8 /18 (44,4%) μήνες έως την υποτροπή, μέση τιμή ± SD7.5 ± 5.9Table 1. Δημογραφικά και κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με Βάκιλλος Calmette-Guérin (BCG)

* Ta /T1 – θηλώδες όγκων.? CIS – καρκίνωμα in situ? SD – τυπική απόκλιση. CSV Λήψη CSV

Η ποσοτικοποίηση του ΡΡϋ-ειδικά CD4 Τ κυττάρων από ολόκληρο αίμα

Χαρακτηρισμός PPD-ειδικά CD4 Τ κυττάρων πραγματοποιείται απευθείας από ηπαρινοποιημένο πλήρες αίμα για συνολικά 6 ώρες σύμφωνα με ένα καθορισμένο πρότυπο διαδικασία λειτουργίας όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23]. Τα κύτταρα διεγέρθηκαν με PPD (7,32 μg /ml, Tuberkulin για

in vitro

χρήση (RT-50)? Statens Serum Institute, Κοπεγχάγη, Δανία). Η θεραπεία με αραιωτικό (PBS) και με 2.5 μ§ /ml

Staphylococcus aureus

εντεροτοξίνη Β (SEB, Sigma, Deisenhofen, Γερμανία) χρησίμευσε ως αρνητικός και θετικός έλεγχος, αντίστοιχα. Κάθε αντίδραση διεγερτική διεξήχθη από 300 μΐ αίματος με την παρουσία 1 μg /ml αντι-CD28 (κλώνος L293) και 1 μg /ml αντι-CD49d (κλώνος 9F10? BD, Heidelberg, Germany). Για την ώρα επώασης τελευταία 4h (37 ° C, 5% CO

2) 10 μg /ml Brefeldin Α (Sigma, Deisenhofen, Germany) προστέθηκε σε συσσωρεύονται κυτοκίνες ενδοκυτταρικά. Στη συνέχεια, τα ερυθροκύτταρα λύθηκαν και λευκοκύτταρα σταθεροποιήθηκαν χρησιμοποιώντας 10 ml BD διαλύματος λύσεως /ml πλήρους αίματος. Η χρώση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση αντι-CD4 (κλώνος SK3), αντι-ΙΡΝ-γ (κλώνος 4S.B3), αντι-IL-2 (κλώνος MQ1-17H12), και αντι-CD69 (κλώνος L78, όλα από BD). Τουλάχιστον 15.000 CD4 Τ κύτταρα αναλύθηκαν σε FACS Canto II (BD) με τη χρήση λογισμικού Diva. Το ποσοστό των ειδικών Τ κυττάρων υπολογίστηκε με αφαίρεση της συχνότητας που λαμβάνεται από τον αντίστοιχο διέγερση ελέγχου. Το κατώτερο όριο ανίχνευσης ήταν 0,05% CD4 Τ κύτταρα, όπως καθορίζονται και εφαρμόζονται σε άλλες μελέτες από μυκοβακτηρίδια Τ κυττάρων ανοσία [16,23-25] στο παρελθόν.

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε χρησιμοποιώντας GraphPad Prism-5.03 (La Jolla, Ca.). Οι διαφορές μεταξύ δύο ομάδων προσδιορίστηκαν με Mann-Whitney-test. Ο Friedman-test για διαμήκη ανάλυση. Για να συγκρίνετε PPD-κατάστασης ανάμεσα σε δύο ή περισσότερες ομάδες εφαρμόστηκε η Fisher ή chi-square test.

Αποτελέσματα

PPD-ειδική κυτταρική ανοσία CD4 Τ πριν από τη θεραπεία δεν διαφέρει μεταξύ των ασθενών και των υγιών άτομα

για να χαρακτηριστεί η έκταση της προϋπάρχουσας κυτταρική ανοσία προς PPD, βασική συχνότητες των ΡΡϋ-αντιδραστικών CD4 Τ κύτταρα από 18 ασθενείς σε σύγκριση με εκείνες των 54 ελέγχους της ίδιας ηλικίας. Αντιγόνου-ειδικές CD4 Τ κύτταρα ταυτοποιήθηκαν με βάση την επαγωγή του δείκτη ενεργοποίησης CD69 και των κυτοκινών ΙΡΝ-γ και IL-2 μετά PPD διέγερση. Αν και οι συχνότητες των κυττάρων CD4 Τ προκαλείται με τις αρνητικό ερέθισμα ελέγχου ήταν γενικά πολύ χαμηλή (διάμεσος 0,008%, 0,016% IQR), η ατομική ποσοστό των ΡΡϋ-ειδικά CD4 Τ κυττάρων υπολογίστηκε με αφαίρεση της συχνότητας που λαμβάνεται από τον αντίστοιχο διέγερση ελέγχου. Σε έναν ασθενή, η αρχική τιμή δεν ήταν διαθέσιμη. Ωστόσο, δεδομένου ότι αυτή η ασθενής δεν είχε καμία ειδική ανοσία μία εβδομάδα μετά την έναρξη της θεραπείας, την έναρξη της ασυλίας θεωρήθηκε κάτω από το όριο ανίχνευσης. Όπως δίδεται παραδειγματικά για κύτταρα που παράγουν ΙΡΝ-γ, 9/18 ασθενείς (50,0%) είχαν ΡΡϋ-ειδικά Τ κύτταρα ανωτέρω όριο ανίχνευσης. Αυτό ήταν συγκρίσιμο με τους ελέγχους, όπου ΡΡϋ-ειδικών Τ κυττάρων ήταν ανιχνεύσιμα σε 24/54 άτομα (44.4%, ρ = 0,79, Σχήμα 1Α). Παρόμοια αποτελέσματα βρέθηκαν όταν οι ασθενείς κατανεμήθηκαν σε σχέση με το IL-2 που παράγει ΡΡϋ-ειδικών Τ κυττάρων (Σχήμα 1Α), το οποίο ήταν 88,9% σύμφωνη με IFN-γ θετικότητα. Όταν ποσοτικές αναλύσεις διεξήχθησαν σε άτομα με PPD-αντιδραστικά συχνότητες CD4 Τ κυττάρων πάνω από το όριο ανίχνευσης, δεν υπήρχε διαφορά στο μέσο συχνότητες των IFN-γ ή IL-2 παραγωγή ΡΡϋ-αντιδραστικών Τ-λεμφοκυττάρων και στις δύο ομάδες (IFN-γ: ασθενείς 0,183 %, IQR 0,399% έναντι των ελέγχων 0,161%, 0,355 IQR, ρ = 0.73 ,; IL-2: ασθενείς 0,153%, 0,241% IQR έναντι των ελέγχων 0,156%, 0,347 IQR, ρ = 0,88, Σχήμα 1Β). Έτσι, η ασυλία προ-επεξεργασίας προς PPD σε ασθενείς δείχνει μια κατανομή που είναι συγκρίσιμη με υγιείς μάρτυρες.

(Α) Το ποσοστό των ατόμων με προϋπάρχουσα ανοσία προς PPD (≥0.05% CD69 θετικό ιντερφερόνη-γ ( IFN-γ) ή ιντερλευκίνη 2 (IL-2) παράγουν κύτταρα Τ CD4) και (Β) ΡΡϋ-αντιδραστικών Τ κυττάρων συχνότητες των IFN-γ ή IL-2 που παράγουν κύτταρα Τ CD4 προσδιορίστηκαν ποσοτικά σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης πριν από BCG-θεραπεία ( n = 18) και σε ίδιας ηλικίας υγιή δείγματα αναφοράς (n = 54). Σε έναν ασθενή, η αρχική τιμή δεν ήταν διαθέσιμη. Ωστόσο, δεδομένου ότι αυτή η ασθενής δεν είχε καμία ειδική ανοσία μία εβδομάδα μετά την έναρξη της θεραπείας, την έναρξη της ασυλίας θεωρήθηκε κάτω από το όριο ανίχνευσης. Οι συχνότητες των κυττάρων Τ του κάθε ατόμου (κύκλοι), καθώς και η διάμεση τιμή και διατεταρτημοριακό εύρος (IQR) παρουσιάζεται, και το όριο ανίχνευσης (0,05% αντιδραστικά CD4 Τ κύτταρα) αντιπροσωπεύεται από μια διακεκομμένη γραμμή.

Η

Ενδοκυστική BCG-εφαρμογή επάγει συστημική απόκριση Τ κυττάρων προς PPD

η επαγωγή της PPD ειδικής ανοσίας ακολούθως αξιολογούνται πριν καθώς και 1, 2 ή 3 και 4 ή 5 εβδομάδες μετά την πρώτη ενστάλαξη. Οι Dotplots του ΡΡϋ-ειδικών κυττάρων Τ που παράγουν IFN-γ προέρχεται από ένα τυπικό ασθενή που φαίνεται στο Σχήμα 2Α. Ενώ αυτή η ασθενής δεν έδειξε καμία ειδική ανοσία κατά την έναρξη και μία εβδομάδα μετά την ενστάλαξη, μια ισχυρή απόκριση PPD-ειδικών Τ κυττάρων ήταν ανιχνεύσιμη μία εβδομάδα μετά την 2

ος ενστάλαξη επίπεδα Τ κυττάρων (εβδομάδα 3) και αυξήθηκε περαιτέρω σε εβδομάδα 5 . Σε αντίθεση, η SEB-αντιδραστικών Τ κύτταρα ήταν εύκολα ανιχνεύσιμα και συχνοτήτων ήταν σε μεγάλο βαθμό σταθερό με την πάροδο του χρόνου. Αυτά τα ευρήματα επιβεβαιώθηκαν όταν διαμήκως ανάλυση ΡΡϋ-ειδικά Τ κύτταρα από όλους τους 18 ασθενείς. PPD-αντιδρώσα συχνότητες των κυττάρων Τ δεν άλλαξε μέσα στην πρώτη εβδομάδα. Ωστόσο, η διάμεση συχνότητα των IFN-γ που παράγουν ΡΡϋ-ειδικά Τ κύτταρα έδειξαν μία περίπου 5-πλάσια αύξηση από 0,05% κατά την έναρξη σε 0,23% την εβδομάδα 2/3, και αυξήθηκε περαιτέρω 8 φορές μετά από την εβδομάδα 4/5 (διάμεση 0,42% , ρ = 0,0007, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν στρωματοποιητικού ασθενείς με και χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία, η αύξηση των ΡΡϋ-αντιδραστικών Τ κυττάρων μετά BCG-ενστάλαξη ήταν σημαντικά ισχυρότερη στα άτομα όπου τα επίπεδα βασικής γραμμής ήταν κάτω από το όριο ανίχνευσης, το οποίο ίσχυε τόσο για ΙΡΝ-γ και IL-2 Τ κύτταρα που παράγουν (Σχήματα 2Β και 3). Ωστόσο, η μέγιστη συχνότητα ήταν σημαντικά υψηλότερες σε ασθενείς με προϋπάρχουσα ανοσία (ρ = 0.02, δεδομένα που δεν φαίνονται). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η SEB-αντιδραστικών Τ κυττάρων ήταν ανιχνεύσιμα καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης, και των συχνοτήτων τους δεν αλλάζουν με την πάροδο του χρόνου (Σχήμα 2C). Όταν ποσοτικοποίηση του ποσοστού των ατόμων που έχουν αποκτήσει PPD-ειδική ανοσία πάροδο του χρόνου, ΙΡΝ-γ Τ κύτταρα που παράγουν μετά από διέγερση με PPD ήταν ανιχνεύσιμα σε 16/18 ασθενείς (88,9%) κατά την εβδομάδα 2/3, και σε όλους τους ασθενείς μέχρι την εβδομάδα 4 /5 (ρ = 0,0004, πίνακας 2). Αυτό ίσχυε και όταν η IL-2 Τ κύτταρα που παράγουν ποσοτικοποιήθηκαν (p = 0,0013, πίνακας 2). Στο σύνολό τους, μια συστημική διέγερση της κυτταρικής ανοσίας προς PPD μπορεί να ποσοτικοποιηθεί κατευθείαν από πλήρες αίμα μετά BCG-ενστάλαξη, και PPD-ειδική ανοσία προκλήθηκε σε όλους τους ασθενείς.

(Α) Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα της κινητικής της IFN -γ θετική CD69 /CD4 Τ κύτταρα πριν και 1, 3 και 5 εβδομάδες μετά την έναρξη της BCG-θεραπείας. Σε αυτόν τον ασθενή, η τρίτη ενστάλαξη καθυστέρησε κατά 2 εβδομάδες λόγω λοίμωξη του ουροποιητικού συστήματος χωρίς πυρετό. Οι αριθμοί στην άνω δεξιά τεταρτημόριο αναφέρονται στο ποσοστό των CD69 /IFN-γ θετικών κυττάρων μεταξύ όλων των κυττάρων CD4 Τ μετά από διέγερση με PPD, PBS (αρνητικός έλεγχος), ή

Staphylococcus aureus

εντεροτοξίνη Β (SEB, θετικός έλεγχος ). Τα αποτελέσματα επί της IL-2 κύτταρα που παράγουν σε αυτόν τον ασθενή από την ίδια διεγερτική αντίδραση περιλαμβάνεται στο Σχήμα 4Α. Κινητική του ποσοστού του (Β) PPD-ειδικές ή (Γ) SEB-αντιδραστικά CD4 Τ κύτταρα που παράγουν ΙΡΝ-γ ή ιντερλευκίνης-2 (IL-2) από όλους τους ασθενείς κατά τη διάρκεια της επαγωγής. Επαγωγή PPD-αντιδραστικών κυττάρων Τ χωριστά εμφανίζεται σε ασθενείς με και χωρίς ανιχνεύσιμα ανοσία κατά την έναρξη. Όλοι οι ασθενείς μελετήθηκαν για PPD-ειδικά Τ κύτταρα, και 12 ασθενείς είχαν μήκος αναλύθηκαν για SEB-αντιδραστικά CD4 Τ κυττάρων (6/18 ασθενείς είχαν λείπει αρχική τιμή). Διακεκομμένες γραμμές αντιπροσωπεύουν κινητική του κάθε ασθενή, και να επαναληφθεί η μέτρηση από έναν ασθενή μετά από 2 ή 3 και 4 ή 5 εβδομάδες έχει ομαδοποιηθούν ως μέσες τιμές. Η έντονη γραμμή υποδεικνύει το διάμεσο ποσοστό αντιδραστικών CD4 Τ κυττάρων.

Η

Η αύξηση του PPD και SEB-αντιδρώσα CD69 θετικών ΙΡΝ-γ Τ κύτταρα που παράγουν μεταξύ βασικής γραμμής και της μέγιστης τιμής κατά την διάρκεια BCG-ενσταλάξεις ποσοτικοποιήθηκε για όλους τους ασθενείς και τα αποτελέσματα κατανεμήθηκαν για ασθενείς με αρνητικό και θετικό PPD-κατάσταση πριν από τη θεραπεία. Οι διάμεσοι και ενδοτεταρτημοριακό εύρος που υποδεικνύεται.

Η εβδομάδα της θεραπείας

βάσης

1

2-3

4-5

Η Συνολικός αριθμός patients18181818IFN-γ θετικό ( %) 9 (50,0%) 9 (50,0%) 16 (88,9%) 18 (100,0%) p = 0.0004IL-2 θετικά (%) 9 (50,0%) 11 (61,1%) 16 (88,9%) 18 (100,0 %) p = 0.0013Table 2. Ποσοστό των ατόμων με θετική ανοσολογική απόκριση πάνω από το όριο ανίχνευσης της τάξης του 0,05% έναντι PPD πριν και μετά από BCG-ενστάλαξη.

CSV Λήψη CSV

προφίλ κυτοκίνης του PPD-ειδικά Τ κύτταρα μετά από BCG-ενστάλαξη διαφέρει από εκείνη που παρατηρήθηκε σε υγιείς ελέγχους

Έχουμε προηγουμένως δείξει ότι η μείωση της διπλής κυτοκίνης θετικότητα του ΡΡϋ-ειδικών Τ κυττάρων παρατηρείται σε ασθενείς με ενεργό φυματίωση, ενώ ένα υψηλό ποσοστό της ΙΡΝ-γ /IL-2 διπλά-θετικά κύτταρα Τ είναι χαρακτηριστική για τα άτομα με μη ενεργά μέλη [16]. Για να εξεταστεί εάν η επαναλαμβανόμενη αντιγόνου επαφή με ζωντανές BCG συνδέεται με μια αλλαγμένη προφίλ κυτοκίνης και αν αυτό διαφέρει σε ασθενείς με και χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία, τα πρότυπα έκφρασης IFN-γ /IL-2 σε ασθενείς μετά από BCG-ενστάλαξη συγκρίθηκαν με εκείνες του ΡΡϋ-θετικούς μάρτυρες. Για να εξασφαλιστεί στατιστικά αξιόπιστη ανάλυση των υποπληθυσμών των Τ κυττάρων, η ανάλυση αυτή ήταν να περιοριστεί σε δείγματα όπου ο συνολικός αριθμός των Τ που παράγουν κυτοκίνη κύτταρα μετά από διέγερση υπερέβαινε το 20 γεγονότα πάνω από το υπόβαθρο. Αντιπροσωπευτικά dotplots του PPD- και SEB-αντιδρώσα προφίλ κυτοκίνης πριν και κατά τη διάρκεια της θεραπείας ενός ασθενούς και ένα στοιχείο ελέγχου που φαίνεται στο Σχήμα 4Α. Σύμφωνα με πρόσφατη επαφή με ζωντανά BCG, ο ασθενής είχε μόνο 48,1% και το 55,4% των IFN-γ /IL-2 διπλά-θετικά κύτταρα Τ μετά την εβδομάδα 2 και 5, αντίστοιχα, ενώ 78,2% των PPD-αντιδραστικών Τ-κυττάρων ήταν διπλά Θετικοί στον έλεγχο. Σε όλες τις ελεγχόμενες άτομα, το ποσοστό των διπλών θετικών κυττάρων μετά την ενστάλαξη ήταν σημαντικά χαμηλότερη στους ασθενείς συγκριτικά με τους μάρτυρες (ρ = 0,0003, Σχήμα 4Β). Το ποσοστό των διπλών θετικών κυττάρων μεταξύ SEB-αντιδρώντα κύτταρα Τ ήταν επίσης υψηλότερη σε ελέγχους, αν και αυτή η διαφορά ήταν λιγότερο έντονη (p = 0.03, Σχήμα 4Β). Είναι ενδιαφέρον ότι, πρόσφατα επαγόμενη PPD αντιδραστικών Τ-λεμφοκυττάρων σε ασθενείς χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία είχαν υψηλότερο ποσοστό IL-2 μονά Τ κύτταρα που παράγουν σε σύγκριση με ασθενείς με προϋπάρχουσα ανοσία (ρ = 0,02, Σχήμα 4C). Αντίθετα, PPD-ειδική ανοσία στην τελευταία έδειξε μια στροφή προς IFN-γ single-θετικών Τ κυττάρων (ρ = 0.01, Σχήμα 4C). Μαζί αυτό δείχνει ότι η επαναλαμβανόμενη BCG-επαφή σχετίζεται με αλλαγές στο προφίλ κυτοκίνης είναι παρόμοια σε ασθενείς με ενεργό φυματίωση. Μια στροφή προς την IL-2 μονά-θετικότητα είναι τυπικό για ασθενείς με πρωτοπαθή ασυλία, ενώ μια στροφή προς IFN-γ single-θετικότητα φαίνεται να σχετίζεται με ανοσία μετά την επανενεργοποίηση.

(Α) Εκπρόσωπος dotplots της ροής -cytometric ανάλυση της ΙΡΝ-γ και IL-2 προφίλ έκφρασης του PPD και SEB-αντιδραστικά CD4 Τ κυττάρων σε έναν ασθενή πριν, 3 και 5 εβδομάδες μετά από BCG-θεραπεία (ίδιου ασθενή όπως στο σχήμα 2Α), και σε ένα υγιές ελέγχου. Τα ποσοστά των τριών τεταρτημόρια αναφέρονται στο σχετικό ποσοστό της ΙΡΝ-γ μίας θετικής, ΙΡΝ-γ /IL-2 διπλά-θετικά και IL-2 μονά-θετικών κυττάρων μεταξύ όλων των κυτοκινών-θετικά κύτταρα Τ CD4. (Β) Τα ποσοστά ΙΡΝ-γ /IL-2 διπλά-θετικά κύτταρα ανάμεσα PPD- (κύκλοι) ή SEB-αντιδρώσα (τετράγωνα) CD4 Τ κύτταρα ποσοτικοποιήθηκε για όλους τους ασθενείς σε εβδομάδες 2/3 (PPD n = 16? SEB n = 18), καθώς και εβδομάδες 4/5 (PPD n = 18? SEB n = 18) που είχαν επαρκείς αριθμούς κυττάρων που παράγουν κυτοκίνη μετά από ειδική διέγερση (≥20 γεγονότα). Λιγότερο από 20 εκδηλώσεις μετρήθηκαν σε 2/9 ασθενείς στους οποίους συνολικό ποσοστό PPD ειδικά CD4 Τ κύτταρα κατά την έναρξη ήταν πάνω από 0,05%. Μέχρι την εβδομάδα 2/3, τα 9 βάσης θετικούς ασθενείς είχαν αριθμό εκδήλωση άνω των 20, ενώ οι αρνητικές ασθενείς 2/9 αρχική τιμή ήταν ακόμα κάτω από το όριο ανίχνευσης της τάξης του 0,05% και είχε & lt? 20 εκδηλώσεις. Όλα τα άλλα δείγματα είχαν μετρήσεις περίπτωση περισσότερο από 20. κυτοκίνης χαρακτηριστικών των CD4 Τ κυττάρων πραγματοποιήθηκε σε 16 ελέγχους μετά PPD-διέγερση (μαύροι κύκλοι) και σε 7 ελέγχους μετά SEB-διέγερση (μαύρα τετράγωνα). (Γ) Το ποσοστό της IL-2 μονά-θετικά και IFN-γ single-θετικά κύτταρα ανάμεσα σε ΡΡϋ-ειδικά Τ κύτταρα μετά από εβδομάδες 2/3 στρωματοποιήθηκε για ασθενείς με αρνητικό (n = 7) και θετική PPD-κατάσταση (n = 9) πριν από τη θεραπεία. Σε δύο βασική αρνητικούς ασθενείς ο αριθμός των κυτοκινών θετικών Τ κυττάρων ήταν ακόμα κάτω από 20 εκδηλώσεις. Διάμεσοι και ενδοτεταρτημοριακό το εύρος που υποδεικνύεται.

Η

Pre-υπάρχουσα κυτταρική ανοσία ενάντια PPD δεν φαίνεται να προβλέψει την επιτυχία της θεραπείας

Τέλος, αν και η μελέτη αυτή περιορίζεται από ένα μικρό μέγεθος του δείγματος και ετερογενή θεραπεία συντήρησης, μια προκαταρκτική ανάλυση της προ-επεξεργασίας PPD-αντιδραστικότητα και PPD ειδικά αύξηση των Τ κυττάρων σε σχέση με την επιτυχία της θεραπείας έγινε. Οκτώ ασθενείς ταξινομήθηκαν ως μη ανταποκρινόμενοι (μέσος χρόνος μέχρι την υποτροπή 7,5 ± 5,9 μήνες) και 10 ανταποκρίθηκαν (μέση παρακολούθηση 30 ± 22,7 μήνες). Η παρουσία του ΡΡϋ-ειδικών Τ κυττάρων κατά την έναρξη δεν φαίνεται να σχετίζεται με την επακόλουθη επιτυχία της θεραπείας, ως βασική γραμμή PPD-ειδική ανοσία, όπως μετρήθηκε από αντιδραστικά κύτταρα IFN-γ, ήταν παρούσα σε 4 από τα 8 δεν ανταποκρίθηκαν και 5 από 10 ανταποκρίθηκαν (ρ = 1.0), και δεν υπήρχε διαφορά στην επιβίωση χωρίς υποτροπή σε αμφότερες τις ομάδες (Εικόνα 5Α). Ομοίως, η έκταση της PPD ειδικής αύξησης των κυττάρων Τ δεν προέβλεψαν την επιτυχία της θεραπείας, όπως η αύξηση των IFN-γ αντιδραστικά συχνότητες CD4 Τ κυττάρων μετά BCG ενστάλαξη ήταν 7,1 φορές (IQR 10,7) σε μη αποκρινόμενους και 8,2 φορές (IQR 11,7) Στους ασθενείς που ανταποκρίθηκαν (ρ = 0,83, Σχήμα 5Β). Έτσι, η επίδραση της προϋπάρχουσα ανοσία ή συστηματική αύξηση PPD-αντιδραστικών Τ-κύτταρα μετά από BCG-πρόκληση για την επιτυχία της θεραπείας δεν ήταν διακριτά στο πλαίσιο αυτής της μελέτης.

(Α) επιβίωση χωρίς υποτροπή, ανάλογα με PPD-κατάσταση πριν από τη θεραπεία. (Β) Η αύξηση των ποσοστών των IFN-γ που παράγουν κύτταρα Τ CD4 μεταξύ όλων των ειδικών Τ κυττάρων μετά από διέγερση με PPD μεταξύ βασικής γραμμής και της μέγιστης τιμής συγκρίθηκε σε μη-ανταποκρινόμενους (λευκοί κύκλοι, η = 8) και ανταποκρίθηκαν (μαύροι κύκλοι, n = 10).

η

Συζήτηση

η ενστάλαξη του live BCG-βάκιλοι είναι μια αποτελεσματική θεραπεία για την πρόληψη της προόδου των μη μυϊκών διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης [26]. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης για να χαρακτηρίσει την επαγωγή της PPD ειδικής ανοσίας Τ κυττάρων πριν και κατά BCG θεραπεία. Δείχνουμε ότι μια τυπική πορεία BCG-επαγωγή προκαλεί μια συστημική PPD-ειδική απόκριση Τ κυττάρου ότι οι αυξήσεις σε μέγεθος την πάροδο του χρόνου, και είναι σαφώς ανιχνεύσιμη σε όλους τους ασθενείς μετά από 4-5 εβδομάδες θεραπείας. Συνεπής με ευρήματα από την ασυλία έναντι άλλων παθογόνων ή εμβόλια [27,28], τόσο στην κινητική επαγωγής και τα προφίλ κυτοκίνης διέφεραν ανάλογα με την προϋπάρχουσα ανοσία προς PPD. Καθώς το προφίλ ανοσολογικής απόκρισης μετά την ενστάλαξη της ζωντανής BCG-βάκιλοι φαίνεται να είναι παρόμοια με αυτή του ενεργού λοίμωξης με

M. φυματίωση

[16,29], αυτή η θεραπεία μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα βιώσιμο μοντέλο για τη μελέτη διαμήκως την επαγωγή αντιγονο-ειδικής ανοσίας πριν και μετά από φυσική μόλυνση με

M. φυματίωση

στον άνθρωπο, όπου η γνώση σχετικά περιορίζεται από το γεγονός ότι ο χρόνος της μόλυνσης είναι σπάνια γνωστή.

Οι παρατηρήσεις μας σε ασθενείς χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία δείχνει ότι η

de novo

επαγωγή μιας συστημικής απόκρισης Τ κυττάρου προς PPD παρατηρείται μόνο 2-3 εβδομάδες μετά την πρώτη ενστάλαξη. Αυτή καθυστερημένη χρονική πορεία είναι τυπικό για αργά αντιγραφής βακτηρίων, και παρόμοια με εκείνη του Τ κυτταρική ανοσία μετά από φυσική

M. φυματίωση

μόλυνση ή μετά τον εμβολιασμό που διαρκεί αρκετές εβδομάδες για την επαγωγή [30,31]. Σύμφωνα με την ενεργό αναδιπλασιασμό του BCG-βακτήρια, το προφίλ κυτοκίνης-έκφραση του BCG που προκαλείται Τ κύτταρα και στους δύο ασθενείς με και χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία επέδειξε μία μείωση στην διπλής θετικότητας η οποία είναι παρόμοια με τις παρατηρήσεις μας σε ασθενείς με ενεργό φυματίωση [16 ]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, παρά την ομοιόμορφη μείωση της διπλής θετικά Τ κύτταρα σε ασθενείς με ενεργό φυματίωση, δεν ήταν σαφές, γιατί το προφίλ κυτοκίνης σε ορισμένους ασθενείς έδειξαν μια μετατόπιση προς ΙΡΝ-γ και άλλων μάλλον μετατοπίζεται προς IL-2 [16]. Τα αποτελέσματα από αυτή τη μελέτη δείχνουν τώρα, ότι αυτό φαίνεται να σχετίζεται με την παρουσία ή απουσία προϋπάρχουσα ανοσία, ως ένα υψηλότερο ποσοστό των πρόσφατα επαγόμενη Τ κυττάρων σε ασθενείς χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία μετατοπίστηκε προς IL-2 single-θετικότητα . Αυτό είναι σύμφωνο με μια κυριαρχία στην IL-2 θετικό PPD-ειδικών Τ κυττάρων έναντι της IFN-γ θετικά κύτταρα που περιγράφηκε πρόσφατα σε βρέφη νωρίς μετά τον εμβολιασμό BCG [31]. Αυτό το προφίλ κυτοκίνης μοιάζει επίσης ότι με οξεία επίλυση λοιμώξεις και μπορεί να υποστεί πολλαπλασιαστική δραστηριότητα για να εξασφαλιστεί επέκταση της ειδικής ανοσίας [27]. Είναι ενδιαφέρον ότι, το BCG προκαλούμενη ανοσία σε ασθενείς με προϋπάρχουσα ανοσία μάλλον εμφάνισε μια μετατόπιση προς ΙΡΝ-γ single-θετικότητα, η οποία είναι συνεπής με τα προφίλ κυτοκίνης των αντιγονο-ειδικών Τ κυττάρων κατά τη διάρκεια επανενεργοποίησης μολύνσεις όπως ο κυτταρομεγαλοϊός, που χαρακτηρίζεται επίσης από μια μείωση στην IFN-γ /IL-2 διπλά-θετικότητα και η συνακόλουθη στροφή προς μονά-θετικά κύτταρα IFN-γ [32]. Αυτές οι παρατηρήσεις μπορεί επίσης να είναι χρήσιμη για ασθενείς με ενεργό φυματίωση ή τις επαφές τους, όπου η κατάσταση προ-λοίμωξη είναι σπάνια γνωστή. Σε αυτήν την περίπτωση, η διαφορά στο προφίλ κυτοκίνης του

M. φυματίωση

-ειδικά Τ κύτταρα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διάκριση των ατόμων με πρωτοπαθή λοίμωξη από επαναδραστηριοποίηση και ως εκ τούτου μπορεί να είναι χρήσιμη για τον εντοπισμό της φυσικής ιστορίας του

M. φυματίωση

λοίμωξη.

PPD-ειδικές αποκρίσεις των Τ κυττάρων παρουσιάζουν σημαντικές ατομικές διαφορές σε μια δεδομένη χρονική στιγμή, πριν και μετά την ενστάλαξη. Αυτό φαίνεται από το γεγονός ότι τα επίπεδα των κυττάρων Τ που είχαν φθάσει 4-5 εβδομάδες μετά την ενστάλαξη σε ασθενείς χωρίς προϋπάρχουσα ανοσία ήταν στο ίδιο εύρος με τα βασικά επίπεδα σε ασθενείς με προϋπάρχουσα ανοσία. Καθώς η πολλαπλασιαστική ικανότητα έδειξε να αυξάνει κατά τη διάρκεια της BCG-θεραπείας [10], αυτό σημαίνει ότι υπάρχουν επαρκή επίπεδα Τ κυττάρου μπορεί να επιτευχθεί νωρίτερα και απαιτούν λιγότερους κύκλους ενστάλαξη σε άτομα με προϋπάρχουσα ανοσία. Ο ιδιαίτερος ρόλος της προϋπάρχουσας ανοσίας για τη μείωση του χρόνου από την ενστάλαξη στη διείσδυση του όγκου υποστηρίζεται από μια πρόσφατη μελέτη σε ποντίκια που πειστικά έδειξε ότι η παρεντερική προ-ανοσοποίηση με το BCG, όχι μόνο επιταχυνόμενη διείσδυση του όγκου αλλά και της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας [9]. Αν και συστημική ανοσία μπορεί επίσης να αξιολογηθεί χρησιμοποιώντας δέρμα δοκιμή ή προσδιορισμούς πολλαπλασιασμού [33,34], η δοκιμασία κυτταρομετρίας ροής μπορεί να διεξάγεται εντός μιας ημέρας και χρησιμοποιούνται σε κλινικό περιβάλλον για την εξατομικευμένη παρακολούθηση της επαγωγής μιας ειδικής ανοσίας. Αυτή η προσέγγιση θα μπορούσε επίσης να χρησιμοποιηθεί για να διερευνήσει την αποτελεσματικότητα των άλλων στρατηγικών ενστάλαξη με μειωμένη δόσεις ή λιγότερες κύκλους, και ως εκ τούτου να συμβάλει στη μείωση της τοξικότητας.

ποντικών μοντέλα έχουν δείξει ότι η συστηματική ανοσία μετά από BCG-ενστάλαξη μπορεί να χρησιμεύσει ως εκτίμηση για το ποσό των Τ κυττάρων με θεραπευτικό δυναμικό στην θέση του όγκου [9]. Αποδεικτικά στοιχεία για ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ και η σύνδεσή της με απόκριση στη θεραπεία σε ανθρώπους έχει επίσης αποδειχθεί με ανοσοϊστοχημεία από βιοψίες [35], αλλά αυτό είναι δύσκολο να πραγματοποιηθεί ως εργαλείο διαλογής σε βάση ρουτίνας. Ωστόσο, ένα θετικό δέρμα της δοκιμής μπορεί να θεωρηθεί ως μια φλεγμονώδης απόκριση με βάση Τ κυττάρων διεισδύει στο σημείο της δερματικής σκλήρυνση, και το δέρμα-test σκλήρυνση συσχετίζεται γενικά με ΡΡϋ-αντιδραστικών Τ κυττάρων που αναλύθηκαν από το πλήρες αίμα [23,25]. Ως εκ τούτου, πολλές μελέτες σε ανθρώπους έχουν, επομένως, αποσκοπούν στη συμμετοχή μετατροπής του δέρματος-test με μακροπρόθεσμο αποτέλεσμα μετά τη θεραπεία, αλλά τα αποτελέσματα ήταν ετερογενές [36,37]. Αν και η μελέτη μας δεν κινούνται για ισχυρή ανάλυση αποτελέσματος, ούτε συχνότητες προεπεξεργασίας ούτε επαγωγή κινητική της PPD-ειδικά Τ κύτταρα έδειξαν κάποια ορατή σύνδεση με μακροχρόνια έκβαση της θεραπείας.