Αφηρημένο

Ιστορικό

KRAS

μεταλλάξεις σε καρκίνο του παχέος εντέρου πρωτογενείς όγκους προβλέψει αντίσταση σε αντι-υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) θεραπεία με μονοκλωνικά αντισώματα σε ασθενείς με μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο, και ως εκ τούτου αποτελούν μια πραγματική ένδειξη της κατάστασης ενεργοποίησης της οδού EGFR.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

KRAS

μεταλλάξεις αναδρομικά μελετήθηκαν χρησιμοποιώντας αντιδράσεις αλυσίδας πολυμεράσης και μετέπειτα αλληλούχιση των κωδικονίων 12 και 13 (εξόνιο 2) σε 110 ασθενείς με μεταστατικό ορθοκολικό όγκους. Αυτές οι μελέτες διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας δείγματα ιστού από τόσο του πρωτογενούς όγκου και των συναφών μεταστάσεις τους (93 ήπατος, 84%? 17 πνευμόνων, 16%). Όλοι οι ασθενείς έλαβαν πολυχημειοθεραπεία ανοσοενισχυτικό 5-φθοριοουρακίλη με βάση μετά την εκτομή των μεταστάσεων. Καμία έλαβαν αντι-ΕΟΡΚ θεραπεία. Μεταλλάξεις σε

KRAS

παρατηρήθηκαν σε 37 (34%) των πρωτογενών όγκων και σε 40 (36%) των σχετικών μεταστάσεων, αποδίδοντας ένα επίπεδο 94% των αντιστοιχίας (κάπα δείκτης 0,86). Οι ασθενείς με πρωτοπαθείς όγκους που έχουν

KRAS

μεταλλάξεις είχε ένα μικρότερο χρονικό διάστημα ελεύθερο νόσου μετά την μετάσταση εκτομή (12,0 έναντι 18,0 μήνες? P = 0,035) σε σχέση με εκείνους που δεν το έκανε. Ένα υψηλότερο ποσοστό των

KRAS

μεταλλάξεις ανιχνεύθηκε σε πρωτοπαθείς όγκους του patiens με μεταστάσεις στους πνεύμονες από ό, τι σε ασθενείς με μεταστάσεις στο ήπαρ (59% έναντι 32%? P = 0,054). Για να αξιολογηθεί περαιτέρω το εύρημα αυτό αναλύσαμε 120 επιπλέον ασθενείς με ανεγχείρητο μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο οι οποίοι είχαν προηγουμένως πρωτοπαθείς όγκους τους αξιολογούνται για

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων για κλινικούς σκοπούς. Ξεχωριστά, η ανάλυση αυτών των 120 ασθενών έδειξαν μια τάση προς έναν υψηλότερο βαθμό

KRAS

μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες, αν και δεν έφτασε στατιστική σημασία. Στο σύνολό τους, η ομάδα των 230 ασθενών έδειξε ότι

KRAS

μεταλλάχθηκε πολύ πιο συχνά στις πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες (57% έναντι 35%? P = 0,006).

Συμπεράσματα /σημασία

Τα αποτελέσματά μας προτείνουν ένα ρόλο για

KRAS

μεταλλάξεις στην τάση των πρωτογενών όγκων του παχέος εντέρου σε μεταστάσεις στον πνεύμονα

Παράθεση:. Cejas P, López-Gómez Μ, Aguayo C, Madero R, de Castro Carpeño J, Belda-Iniesta C, et al. (2009)

KRAS

Μεταλλάξεις στο Δημοτικό καρκίνο του παχέος εντέρου όγκοι και Συναφών μεταστάσεις: ένα πιθανό ρόλο στην πρόβλεψη με μετάσταση στους πνεύμονες. PLoS ONE 4 (12): e8199. doi: 10.1371 /journal.pone.0008199

Επιμέλεια: Alfons Navarro, Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης, Ισπανία

Ελήφθη: 1 Σεπτεμβρίου 2009? Δημοσιεύθηκε: 18 Δεκεμβρίου 2009

Copyright: © 2009 Cejas et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο έλαβε την υποστήριξη επιχορήγηση από την Amgen, Red Temática de Investigación Cooperativa en καρκίνου (RTICC, RD06-0020-1022), Fundación Mutua Madrileña και από Fundación para la Investigación Biomedica del Hospital Universitario Λα Παζ (FIBHULP), Μαδρίτη, Ισπανία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες και μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται στις αναπτυγμένες χώρες [1]. Μακρινές μεταστάσεις είναι η κύρια αιτία θανάτου σε ασθενείς με CRC. Ανάλογα με το στάδιο του πρωτογενούς όγκου, ηπατικές μεταστάσεις συμβαίνουν σε 20% έως 70% των ασθενών, και οι μεταστάσεις πνεύμονα σε 10% έως 20% των ασθενών [2]. Η χειρουργική εκτομή παραμένει η μόνη δυνητικά θεραπευτική επιλογή για τους ασθενείς με μεταστατικό CRC. Ωστόσο, θεραπευτική εκτομή είναι δυνατή σε λιγότερο από 25% των ασθενών με νόσο σταδίου IV [3], και λιγότερο από 5% των ασθενών με ανεγχείρητο μεταστατικό CRC είναι ζωντανός μετά από 5 χρόνια. Σημαντικές προσπάθειες γίνονται για να βελτιωθεί η πρόγνωση για τους ασθενείς με μεταστατικό CRC, ειδικά στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών. Το μονοπάτι σηματοδότησης υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) έχει γίνει ένα βασικό στόχο για θεραπευτική παρέμβαση, επειδή δύο μονοκλωνικά αντισώματα που κατευθύνονται εναντίον του EGFR έχουν γίνει σημαντικά εργαλεία για τη διαχείριση της νόσου σε προχωρημένο στάδιο: cetuximab και panitumumab [4], [5]. EGFR ενεργοποιεί πολλαπλασιαστική και αντι-αποπτωτικά μονοπάτια σηματοδότησης, όπως οι οδοί φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3 ‘κινάσης /Akt και Ras /Raf /ενεργοποιείται από μιτογόνο κινάσης πρωτεΐνης (ΜΑΡΚ) [6]. Η ανώμαλη ενεργοποίηση του μονοπατιού EGFR σε CRC θα μπορούσε να προκληθεί από είτε EGFR υπερέκφραση ή μεταλλακτική ενεργοποίηση κατάντη στοιχεία της οδού EGFR [7].

KRAS

είναι μια μικρή πρωτεΐνη σύνδεσης GTP ότι μετάγει σήματα από ενεργοποιημένους υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας προς τον πυρήνα. Συστατική

KRAS

ενεργοποίηση από σημειακές μεταλλάξεις στα κωδικόνια 12 και 13 του εξονίου 2 έχει περιγραφεί ως σημαντική αιτία της οδού EGFR υπερενεργοποίηση [7], [8]. Η συχνότητα των

KRAS

μεταλλάξεις σε όγκους παχέος εντέρου κυμαίνεται από 35% έως 45% [9], και

KRAS

μεταλλάξεις φαίνεται να εμφανίζονται νωρίς στην καρκινογένεση [10]. Κατά συνέπεια, ένας υψηλός βαθμός αντιστοιχίας στο

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων μεταξύ πρωτογενών όγκων και των σχετικών ηπατικές μεταστάσεις τους έχει αναφερθεί [11], [12]. Πρόσφατα στοιχεία έχουν δείξει σύνδεση μεταξύ

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων στον πρωτογενή όγκο και αντοχή στην cetuximab και panitumumab σε ασθενείς με μεταστατικό CRC [13], [14]. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων και η πρόγνωση είναι αμφιλεγόμενη για τους ασθενείς με μεταστατικό CRC που δεν έχουν υποστεί επεξεργασία με αντι-EGFR αντισώματα, με ορισμένες μελέτες αναφέρουν μια σύνδεση μεταξύ των

KRAS

μεταλλάξεις και φτωχή πρόγνωση [15] και κάποια αναφορά καμία συσχέτιση [12]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η μεγαλύτερη πολυκεντρική μελέτη που διεξήχθη σχετικά με τη σύνδεση μεταξύ

KRAS

μετάλλαξης και πρόγνωση, η οποία περιελάμβανε 3439 ασθενείς CRC, έδειξε ότι η παρουσία μιας μετάλλαξης γλυκίνης προς βαλίνη στο κωδικόνιο 12 του

KRAS

μειώθηκε σημαντικά χωρίς εξέλιξη και τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης, ανεξάρτητα από τη θεραπεία που έλαβε [16].

Σας ζητείται να διευκρινιστεί η συσχέτιση μεταξύ των

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων, κλινικοπαθολογική παράγοντες, πρόγνωση, πρότυπο μετάσταση και αντιστοιχία μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και συμφωνημένα μεταστάσεων σε ασθενείς με μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο.

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά ασθενών

αναδρομικά ανέλυσε δείγματα από 110 πρωτοπαθείς όγκους και 110 αντίστοιχες μεταστατικές θέσεις για το παρουσία του

KRAS

μεταλλάξεις στα κωδικόνια 12 και 13. η πιο κοινή μεταστατική εντόπιση ήταν το ήπαρ, το οποίο ήταν το μεταστατικό ιστοσελίδα σε 93 δείγματα (84%). Ο πνεύμονας ήταν η μεταστατική θέση στα υπόλοιπα 17 δείγματα (16%). Μεταστάσεις εμφανίστηκε σε συγχρονισμό με την πρωτογενή βλάβη σε 57 περιπτώσεις και metachronously σε 53 περιπτώσεις. Η κύρια θέση του όγκου ήταν η κόλου σε 79 ασθενείς και το ορθόν σε 31 ασθενείς. Η ομάδα των ασθενών συμπεριελάμβανε 32 γυναίκες και 78 άνδρες. Η διάμεση ηλικία ήταν 64 έτη (29-86). Όλοι οι καρκίνοι ήταν αδενοκαρκινώματα και βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια του ΠΟΥ (Πίνακας 1).

Η

KRAS

Μεταλλάξεις και ιστοπαθολογικών παραμέτρων

Οι μεταλλάξεις στο

KRAS

ανιχνεύθηκαν σε 37 (34%) πρωτογενείς όγκους και σε 40 (36%) που σχετίζονται με μεταστατικές αλλοιώσεις, με βαθμό 94% της αντιστοιχίας μεταξύ πρωτογενών και μεταστατικών δείγματα (κάππα δείκτης 0,86). Ασυμφωνία παρατηρήθηκε σε 7 ασθενείς. Πέντε ασθενείς είχαν

KRAS

μεταλλάξεις στα μεταστάσεις (τέσσερις με ηπατικές μεταστάσεις και ένα με μεταστάσεις στους πνεύμονες) και άγριου τύπου

KRAS

στον πρωτογενή όγκο, ενώ οι δύο άλλοι ασθενείς είχαν

KRAS

μεταλλάξεις μόνο στον πρωτογενή όγκο (1 με ηπατικές μεταστάσεις και 1 με μετάσταση στους πνεύμονες)

υπήρχε μικρή διακύμανση μεταξύ του τύπου μετάλλαξη που υπάρχει στον πρωτογενή όγκο και μεταστάσεις του:. όλες εκτός από τέσσερις ασθενείς είχαν την ίδια μετάλλαξη τόσο στην πρωτογενή και μεταστατικών δείγματα. Οι τύποι των μεταλλάξεων συνοψίζονται στον Πίνακα 2. Δεν υπήρχε σχέση μεταξύ του τύπου των μεταλλάξεων και κάθε κλινικοπαθολογικών παράμετρο.

Η

Δεν υπάρχουν συσχετίσεις μεταξύ

παρατηρήθηκαν KRAS

μεταλλάξεις και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά ( Πίνακας 3).

η

KRAS

Μεταλλάξεις και πρόγνωση

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν χαμηλότερα ποσοστά επιβίωσης ελεύθερης νόσου μετά την μετάσταση εκτομή σε ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν ένα

KRAS

σημείο μετάλλαξης στον πρωτογενή όγκο? διάμεση ελεύθερη νόσου επιβίωση ήταν 12 μήνες σε ασθενείς με

KRAS

μεταλλάξεις στους όγκους τους και 18 μήνες σε εκείνους που δεν έχουν

KRAS

μεταλλάξεις (p = 0,035) (Εικόνα 1). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι το πιο σημαντικό ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για την επιβίωση ελεύθερη νόσου ήταν

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων (πολυμεταβλητή HR = 2,068? 95% CI, 1,136 έως 3,766, P = 0,018) (Πίνακας 4). Δεν βρέθηκε κάποια σχέση μεταξύ της συνολικής επιβίωσης και

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων (σχήμα 1).

Καμπύλες για την επιβίωση ελεύθερη νόσου (Α) και τη συνολική επιβίωση (Β) σύμφωνα με το

KRAS

κατάσταση.

η

KRAS Ιστοσελίδα Μεταλλάξεις και Μεταστατικό

Μεταλλαγμένα

KRAS

ανιχνεύθηκε σε ένα υψηλότερο ποσοστό των πρωτογενών όγκων της patiens με μεταστάσεις στους πνεύμονες σε σχέση με εκείνους με μεταστάσεις στο ήπαρ (59% έναντι 32%, P = 0,054). Όταν στρωματοποιημένη κατά προέλευση του πρωτοπαθούς όγκου (του παχέος εντέρου ή του ορθού), από τις 10

KRAS

-mutated πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες, 7 ήταν παχέος προέλευσης (70%), ενώ τα άλλα 3 προέρχεται από το ορθού (30%). Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι παχέος πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες ήταν σημαντικά πιο πιθανό να έχουν

KRAS

μεταλλάξεις από παχέος πρωτογενείς όγκους των ασθενών με ηπατικές μεταστάσεις (P = 0,046), ενώ το ορθό προκριματικές είχε μια παρόμοια συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις σε ασθενείς με πνευμονική ή μετάσταση στο ήπαρ (Πίνακας 5). Για να διερευνήσουν περαιτέρω την παρουσία του

KRAS

μεταλλάξεις ως προγνωστικός δείκτης της μετάστασης του πνεύμονα, εξετάσαμε επίσης μια σειρά από 120 ασθενείς με ανεγχείρητο μεταστατικό CRC. Οι πρωτογενείς όγκους από αυτούς τους ασθενείς είχαν αναλυθεί για την παρουσία

KRAS

μεταλλάξεις από ένα κεντρικό εργαστήριο πριν να cetuximab χορήγηση. Από τους 120 μεταστατικό ασθενείς, 86 είχαν μεταστάσεις στο ήπαρ και 34 είχαν μεταστάσεις στους πνεύμονες. Επιπλέον, υπήρξε μια τάση προς ένα υψηλότερο ποσοστό των

KRAS

μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες σε σχέση με εκείνους με μεταστάσεις στο ήπαρ, αν και δεν ήταν στατιστικά σημαντική (56% έναντι 38%? P = 0,1027). Όταν αναλύσαμε ολόκληρη τη σειρά των 230 ασθενών, τη συχνότητα των

KRAS

μεταλλάξεις στα πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σύγκριση με ηπατικές μεταστάσεις (57% έναντι 35%? Ρ = 0,006). Όταν οι ασθενείς στρωματοποιήθηκαν με πρωτογενή προέλευση του όγκου, μόνο ασθενείς με κολονικής προέλευση πρωτογενή όγκο έδειξαν σημαντικά υψηλότερη συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες σε σύγκριση με εκείνους με ηπατικές μεταστάσεις (59% vs 34 %?. P = 0,019) (Πίνακας 6)

Η

Συζήτηση

Η πρόγνωση για τους ασθενείς με μεταστατικό CRC έχει βελτιωθεί από την εισαγωγή νέων θεραπευτικών παραγόντων, όπως αντι- EGFR αντισώματα [17]. Αυτή η θεραπευτική επιτυχία υπογραμμίζει τη σημασία της αντιμετώπιση της οδού EGFR για τον έλεγχο της νόσου σε προχωρημένο στάδιο. Η ανώμαλη ενεργοποίηση της οδού EGFR συμβαίνει μερικές φορές με μεταλλακτική ενεργοποίηση του

KRAS

. Πρόσφατες κλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι η παρουσία της ενεργοποίησης μεταλλάξεων στο

KRAS

εντοπίζει τους ασθενείς οι οποίοι είναι μη-ανταποκρίθηκαν στο cetuximab [13] ή panitumumab [14]. Στην πραγματικότητα, με βάση αυτά τα αποτελέσματα, ανάλυση μεταλλάξεων του

KRAS

τώρα που συνιστώνται από τον Αμερικανικό Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) πριν από cetuximab ή panitumumab χορήγηση σε ασθενείς με μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο. Ανάλυση μεταλλάξεων του

KRAS

συνήθως εκτελείται από τον πρωτογενή όγκο, επειδή είναι συχνά η μόνη διαθέσιμη ιστού. Επιπλέον, η αξία εκτέλεση αυτής της ανάλυσης σχετικά με την πρωτοπαθούς όγκου ενισχύεται περαιτέρω από την απόδειξη ότι

KRAS

σημειακές μεταλλάξεις συμβαίνουν νωρίς το CRC καρκινογένεση [10]. Ωστόσο, πρόσφατα δεδομένα έχουν δείξει αυξημένη συχνότητα μεταλλάξεων σε μεταστάσεις λεμφαδένα σε σύγκριση με τα συνδεδεμένα τους πρωτογενείς όγκους [18]. Με αυτό κατά νου, η πιθανή ανάγκη για επαναληπτική βιοψία και ανάλυση των

KRAS

στις μεταστάσεις έχει προταθεί [9]. Άλλες πρόσφατες μελέτες έχουν αναφέρει υψηλό βαθμό αντιστοιχίας στο

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων μεταξύ πρωτογενών όγκων και των σχετικών ηπατικές μεταστάσεις τους [11], [12], [19]. Τα αποτελέσματα από τη σειρά μας 110 ασθενείς βρίσκονται σε πλήρη συμφωνία με τις εκθέσεις αυτές, τόσο στη συχνότητα του

KRAS

μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους, το οποίο ήταν 34% στη μελέτη μας, και στον υψηλό βαθμό αντιστοιχίας μεταξύ της πρωτοβάθμιας όγκων και των σχετικών μεταστάσεις τους. Όλα αυτά τα ευρήματα επιβεβαιώνουν ότι η ανάλυση του

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων του πρωτοπαθούς όγκου είναι επαρκές υποκατάστατο δείκτη του

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων σε μεταστάσεις. Η μελέτη μας περιλαμβάνει μια ανάλυση τόσο του ήπατος και των μεταστάσεων του πνεύμονα. Όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για την ανάλυση πρωτογενών όγκων του παχέως εντέρου και των σχετικών μεταστάσεις στους πνεύμονες τους και συσχετίζονται

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων που βασίζονται στις δύο κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και δεδομένα επιβίωσης. Το ήπαρ και ο πνεύμονας είναι και οι δύο κοινές θέσεις της CRC μεταστάσεων. Δευτεροβάθμια στις αντίστοιχες ανατομική κατανομή των αιμοφόρων αγγείων τους, μεταστάσεις στους πνεύμονες είναι πιο κοινά με του ορθού και ηπατικές μεταστάσεις είναι πιο συχνές με καρκίνο του παχέος εντέρου. Ωστόσο, ορισμένοι ασθενείς καρκίνου του παχέος εντέρου βιώνουν πνευμονικών μεταστάσεων χωρίς ενδείξεις της προηγούμενης ηπατικές μεταστάσεις. Αυτή η ανεξήγητη ανατομική πρότυπο μετάστασης, παρατηρήθηκε με αυξανόμενη συχνότητα λόγω της περισσότερο ακριβείς διαγνώσεις βασίζονται σε υψηλής απόδοσης σαρώσεις CT [20], προτείνει μια περίεργη βιολογικός μηχανισμός της ογκογένεσης ή μια ειδική ευαισθησία του πνευμονικού παρεγχύματος σε όγκους σε αυτούς τους ασθενείς. Τα αποτελέσματά μας καταδεικνύουν ένα υψηλότερο ποσοστό του

KRAS

μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες σε σύγκριση με εκείνους με ηπατικές μεταστάσεις (59% έναντι 32%). Επιπλέον, όταν στρωματοποιημένη τα αποτελέσματά μας με βάση την αρχική τοποθεσία του όγκου, μόνο οι όγκοι του παχέος προέλευσης είχαν σημαντικά υψηλότερη συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους των ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες. Αντίθετα, το ορθό πρωτογενών όγκων έδειξε μια παρόμοια συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις σε ασθενείς με μεταστάσεις του πνεύμονα σε σχέση με εκείνους με ηπατικές μεταστάσεις. Να αναλύσει περαιτέρω το εύρημα αυτό μελετήσαμε μια ανεξάρτητη σειρά των πρωτογενών όγκων από ασθενείς με ανεγχείρητο μεταστατικό CRC και εξέτασε τη σχέση μεταξύ των

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων στον πρωτογενή όγκο και η περιοχή της μετάστασης του όγκου. Σε αυτούς τους ασθενείς,

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων στον πρωτογενή όγκο προηγουμένως αναλύθηκε για κλινικούς σκοπούς πριν από τη χορήγηση cetuximab. Στατιστική ανάλυση όλων των σειρών (230 ασθενείς) έδειξε ότι

KRAS

συχνότερα μεταλλάσσεται σε πρωτογενείς όγκους ασθενών με μεταστάσεις στους πνεύμονες σε σύγκριση με τους ασθενείς με ηπατικές μεταστάσεις (57% έναντι 35%, Ρ = 0,006). Όταν τα αποτελέσματα στρωματοποιημένη σύμφωνα με την ιστοσελίδα του πρωτοπαθούς όγκου, η ανάλυση που πραγματοποιήθηκε συμπεριλαμβανομένων όλων των 230 ασθενών επιβεβαίωσε τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με το μικρότερο δείγμα 110 ασθενών: ότι η σημαντικά αυξημένη συχνότητα του

KRAS μεταλλάξεις στο

πρωτογενών όγκων σε ασθενείς με μεταστάσεις πνεύμονα περιορίζεται σε εκείνες τις πρωτογενείς όγκους που προέρχονταν από το κόλον. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει ότι η ενεργοποίηση της οδού του EGFR μπορούν να επιτρέπουν κολονική καρκινικά κύτταρα να φωλιάζουν κατά προτίμηση στο πνευμονικό παρέγχυμα αποφεύγοντας ένα αρχικό στάδιο ηπατικών μεταστάσεων. Μια προηγούμενη μελέτη η οποία αξιολόγησε

KRAS

κατάσταση στην πρωτοπαθείς όγκους του παχέος εντέρου και μη συμφωνημένα του ήπατος και των πνευμόνων μεταστάσεις έδειξε σύμφωνη αποτελέσματα με τη μελέτη μας και αποκάλυψε μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης

KRAS

μεταλλάξεις σε μεταστάσεις στους πνεύμονες σε σχέση με το ηπατικές μεταστάσεις (57% έναντι 50%) [21]. Ωστόσο, σε αυτή τη μελέτη, μια σημαντική διαφορά σε

KRAS

ενεργοποίησης μεταξύ των πρωτογενών και μεταστατικών όγκων θα μπορούσε να είχε επικαλυφθεί από την απουσία σχετικών πρωτογενών και μεταστατικών δείγματα. Το εύρημα αυτό έχει κλινική σημασία, επειδή μπορούν να επιτρέπουν την ταυτοποίηση των ασθενών που είναι πιο πιθανό να αναπτύξουν μεταστάσεις στους πνεύμονες με βάση

KRAS

ανάλυση του πρωτοπαθούς όγκου. Αυτοί οι ασθενείς θα πρέπει να λάβει ενδεχομένως μια πιο λεπτομερή κλινική επεξεργασία, συμπεριλαμβανομένου ενός θώρακα σάρωσης, η οποία δεν συμπεριλαμβάνεται πάντα στο πρότυπο κλινική κατεργασία για CRC.

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν, επίσης, ότι η παρουσία του

KRAS

μεταλλάξεις είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την πρόβλεψη της επιβίωσης ελεύθερης νόσου (φθάνοντας στατιστική σημασία). Συστατική ενεργοποίηση της Ras-Raf-MAP-κινάσης είναι γνωστή η οποία προσδίδει πολλαπλασιαστικές και disseminative πλεονέκτημα σε καρκινικά κύτταρα. Ωστόσο, υπάρχει διαμάχη σχετικά με την προγνωστική ρόλο των μεταλλάξεων KRAS στο CRC. Η μεγαλύτερη κλινική δοκιμή σχεδιάστηκε για να αναλύσει την προγνωστική αξία του

KRAS

κατάστασης ήταν η μελέτη Rascal, η οποία έδειξε ότι μια μετάλλαξη γλυκίνης-to-βαλίνη στο κωδικόνιο 12 αυξάνει τον κίνδυνο υποτροπής και θανάτου κατά 30%, ανεξάρτητα από τη το είδος της θεραπείας που χορηγείται [16]. Ωστόσο, μια πρόσφατη μελέτη που πραγματοποιήθηκε με ένα μικρό αριθμό ασθενών δεν αναπαράγουν αυτό το αποτέλεσμα και δεν επιδεικνύουν καμία επιρροή

KRAS

μεταλλάξεις στην επιβίωση [12]. Έτσι, η προγνωστική αξία του

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων παραμένει αμφιλεγόμενη. Τα αποτελέσματα μας είναι σε συμφωνία με τη μελέτη Rascal και προτείνουν μια φτωχότερη πρόγνωση για τους ασθενείς με

KRAS

-mutated πρωτογενείς όγκους, με μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων και μικρότερη ελεύθερη νόσου επιβίωση . Αντίθετα, δεν διαπιστώθηκε καμία συσχέτιση μεταξύ

KRAS

κατάσταση και η συνολική επιβίωση. Αυτό μπορεί να εξηγηθεί από τη χορήγηση χημειοθεραπείας μετά από υποτροπή. Η πολυπαραγοντική ανάλυση δείχνει ότι η παρουσία της

KRAS

μεταλλάξεις είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την πρόβλεψη της επιβίωσης ελεύθερης νόσου (φθάνοντας στατιστική σημασία), τονίζοντας έτσι τη σημασία του

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων στο η παρούσα σειρά ασθενών. Όσον αφορά μια πιθανή επίδραση του τύπου μετάλλαξης στην πρόγνωση, τα αποτελέσματά μας, σε αντίθεση με τη μελέτη κάθαρμα, δεν παρουσιάζουν διαφορές σε σχέση με τον τύπο μετάλλαξης. Φυσικά, η δυνητική αξία της

KRAS

μεταλλάξεων ως προγνωστικός παράγοντας που φαίνεται στη μελέτη αυτή θα πρέπει να ληφθούν προσεκτικά, λόγω της περιορισμένης και ιδιαίτερη σειρά ασθενών που αξιολογήθηκαν.

Εν περιλήψει, τα ευρήματά μας δείχνουν ότι

KRAS

-mutated πρωτογενείς όγκους CRC τείνουν να κάνουν μετάσταση συχνότερα στον πνεύμονα και σχετίζονται με υψηλότερο ποσοστό υποτροπής μετά την εκτομή των μεταστάσεων. Το εύρημα αυτό θα μπορούσε να είναι κλινικό ενδιαφέρον σε σχέση με την παρακολούθηση των ασθενών με

KRAS

-mutated πρωτοπαθείς όγκους CRC, και, συνεπώς, χρήζει περαιτέρω διερεύνησης.

Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Η Επιτροπή Ηθικής του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Λα Παζ στη Μαδρίτη, Ισπανία, ενέκρινε την παρούσα μελέτη. Όλοι οι ασθενείς είχαν ενημερωθεί και συναινέσει εγγράφως.

Επιλέξιμες ασθενείς

Εκατόν δέκα ασθενείς με μεταστατικό CRC με τις διαθέσιμες πρωτοπαθή όγκο και σε συνδυασμό μεταστατικό δείγματα επιλέχθηκαν από μια βάση δεδομένων των ασθενών από Paz Πανεπιστήμιο La νοσοκομείο στη Μαδρίτη. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του νοσοκομείου. Οι ασθενείς διαγνώστηκαν με μεταστατικό CRC μεταξύ του 1997 και του 2007. Από τις 326 περιπτώσεις του μεταστατικού CRC διαγνωστεί κατά τη διάρκεια αυτής της χρονικής περιόδου, συμπερίληψη μελέτη περιορίστηκε σε άτομα με θεραπευτική μετάσταση εκτομή, διαθέσιμα δείγματα ιστών (τόσο από τον πρωτογενή όγκο και σχετίζονται με μεταστάσεις), τα διαθέσιμα δεδομένα παρακολούθησης μετά την απομάκρυνση μετάσταση, και την επιτυχή

KRAS

ανάλυση κατάστασης μεταλλάξεων. Η διάμεση παρακολούθηση μετά την επέμβαση ήταν 10 μήνες (εύρος: 0-144 μήνες). Όλες οι όγκοι ιστολογικά επιβεβαιωμένη να παχέος αδενοκαρκινώματα. Επιπλέον, οι εκθέσεις παθολογία περιλαμβάνονται πληροφορίες σχετικά με τη θέση του όγκου, το μέγεθος του όγκου, παθολογική στάδιο, βαθμός του όγκου (με βάση το βαθμό της ιστολογικής διαφοροποίησης), παρουσία ή απουσία μετάστασης λεμφαδένα, πρότυπο ανάπτυξης όγκου (διηθητική ή επεκτατική), παρουσία ή απουσία των αγγειακών και λεμφικών εισβολή, και η παρουσία ή απουσία διηθήσεων λεμφοκυτταρικής όγκου. Το πρωτογενές στάδιο έχει ταξινομηθεί σε 4 στάδια σύμφωνα με τα κριτήρια του ΠΟΥ. Ο αριθμός και το μέγεθος των μεταστάσεων προσδιορίστηκαν με διαγνωστική απεικόνιση, είτε με κοιλιακή και πυελική αξονική τομογραφία ή με μαγνητική τομογραφία. Μετάσταση εκτομή πραγματοποιήθηκε όταν δεν υπήρχε καμία ένδειξη της εξω-ηπατικής νόσου, εξασφαλίζοντας αρκετό λειτουργία υπολειμματική ήπατος μετά από εκτομή (περίπου 25% -30% του κανονικού όγκου του ήπατος) για να παράσχει ηπατική λειτουργία μετεγχειρητικά, ρυθμίστηκε με βάση την υπάρχουσα ηπατική νόσο όπως κίρρωση ή ηπατίτιδα. Μεταστατικό δείγματα ελήφθησαν είτε από το ήπαρ ή τον πνεύμονα. Αυτά τα μεταστατικά δείγματα λήφθηκαν από είτε σύγχρονη ή metachronous αλλοιώσεις. Οι ασθενείς έλαβαν μία από τρεις διαφορετικές αγωγές χημειοθεραπείας μετά μετάσταση εκτομή (περιγράφονται στον Πίνακα 1).

Μετά την ανακάλυψη του ασυμφωνία μεταξύ

KRAS

μεταλλάξεις στο ήπαρ και πνεύμονα μεταστάσεις, μια πρόσθετη σειρά 128 CRC ασθενείς με μεταστατικό (86 με μετάσταση στο ήπαρ, 34 με μετάσταση στους πνεύμονες, και 8 με άλλους τύπους μεταλλάξεων (τα τελευταία 8 ασθενείς δεν συμπεριλήφθηκαν στη στατιστική ανάλυση) από την Λα Παζ Νοσοκομείο προοπτικά συλλέχθηκαν μεταξύ 2007 και 2009, να επικυρώσει την υπόθεση ένα υψηλότερο ποσοστό

KRAS

μεταλλάξεις σε ασθενείς με μεταστάσεις στους πνεύμονες. Οι ασθενείς αυτοί είχαν ανεγχείρητο μεταστατική νόσο.

KRAS

κατάσταση στον πρωτογενή όγκο προσδιορίστηκε για κλινικούς σκοπούς πριν από cetuximab διοίκηση. το μόνο κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένα που συλλέγονται για αυτούς τους ασθενείς ήταν η περιοχή του πρωτογενούς όγκου (άνω και κάτω τελεία εναντίον του ορθού).

KRAS

ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του TheraScreen κιτ K-RAS δοκιμή μετάλλαξης (DXS Διαγνωστικό Καινοτομίες) από ανεξάρτητο κεντρικό εργαστήριο στη Μαδρίτη , ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή.

DNA Extraction

εγκλεισμένα σε παραφίνη (n = 110) και μεταστατικό δειγμάτων όγκου (n = 110) που περιέχει τουλάχιστον 70% καρκινικά κύτταρα επιλέχθηκαν δείγματα πρωτογενούς όγκου για κάθε ασθενής. μπλοκ ιστού ήταν μακρο-τεμαχίζεται χρησιμοποιώντας μια λεπίδα ασφαλείας όταν τα δείγματα ήταν λιγότερο από το 70% εμπλουτισμένο με κύτταρα όγκου. Οι μεταστατικοί όγκοι βρίσκονται στο ήπαρ (η = 93) και τον πνεύμονα (n = 17). DNA απομονώθηκε από 15 τομές παραφίνης 7-μm. τομές ιστών deparaffinated με xilol και επανυδατώνεται με υποβάθμισε αλκοόλες. Οι ιστοί υποβλήθηκαν σε πέψη με πρωτεϊνάση Κ, και το DNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας MasterPure DNA Kit (Epicentre, Biotechnologies). Σε κάθε περίπτωση, αρνητικοί έλεγχοι ενισχύθηκαν με PCR και συμπεριλαμβάνονται στο πείραμα.

KRAS

Mutation Ανάλυση

Μια αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) διά την ενίσχυση 139 bp του εξωνίου 2 σε KRAS χρησιμοποιώντας ειδικούς εκκινητές (ευγενική δωρεά εργαστήριο Dr. Laurent-Puig) και υπό συνθήκες PCR που περιγράφεται προηγουμένως [15]. αλληλουχίες των εκκινητών PCR /συνθήκες είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος. Η αποτελεσματικότητα και η ποιότητα της ενίσχυσης PCR επιβεβαιώθηκαν με τη λειτουργία των προϊόντων της PCR σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 2%. Ένας αρνητικός έλεγχος περιέχει όλα τα συστατικά της PCR εκτός από το πρότυπο συμπεριλήφθηκε σε κάθε αντίδραση PCR. DNA προϊόντα ενισχυμένου καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας μια QuickStep TM 2 Kit Καθαρισμός 96 φρεατίων PCR (BioSystems Edge, Gaithersburg, MD), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. προϊόντα ενίσχυσης αμφίδρομα αλληλουχία μέσω της μεθόδου τερματισμού χρωστικής φθορισμού σε ένα πολυ-τριχοειδή sequencer DNA χρησιμοποιώντας τις υπηρεσίες του επιστημονικού πάρκου της Μαδρίτης (Μαδρίτη, Ισπανία). Παρουσία της μετάλλαξης έγινε αποδεκτή όταν χρωματογραφίας ύψος της κορυφής ήταν 25% ή υψηλότερη είναι η κορύφωση της αναφοράς άγριου τύπου.

Στατιστικές Αναλύσεις

ακριβές τεστ του Fisher χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει τη σχέση μεταξύ

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων και διάφορα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά. Συμφωνία μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και μεταστάσεων που σχετίζονται αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το δείκτη κάππα, και ασυμφωνία αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ McNemar συμμετρίας. Ελεύθερη νόσου επιβίωση και τη συνολική επιβίωση αναλύσεις υπολογίστηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan Meier, και καμπύλες επιβίωσης συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Ελεύθερη νόσου επιβίωση ορίστηκε ως ο χρόνος από τη χειρουργική εκτομή των μεταστάσεων μέχρι τη στιγμή της εξέλιξης του όγκου τεκμηριωμένη ή θάνατο. Διεξήχθη μια αναλογικού κινδύνου πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox. P & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS έκδοση 12.0 (Chicago, IL, USA).

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Esther Díaz και María de Miguel για εξειδικευμένη τεχνική βοήθεια.