Αφηρημένο

Ποντίκια έχουν χρησιμοποιηθεί ως μοντέλα του καρκίνου για πάνω από έναν αιώνα, παρέχοντας σημαντικές προόδους στην κατανόηση αυτής της πολύπλευρης οικογένεια νόσων. Ειδικότερα, οι ορθοτοπικό μοντέλα ποντικού ξενομοσχεύματος όγκου αναδύεται ως η προτίμηση για την έρευνα του καρκίνου λόγω της αυξημένης κλινική σημασία πέρα ​​από υποδόρια μοντέλα ποντικού. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε αναπτύξει ορθοτοπική παγκρέατος μοντέλα ξενομοσχεύματος καρκίνου σε ποντίκια με μια ελάχιστα επεμβατική μέθοδο, υπερήχους καθοδηγούμενη έγχυση (USGI) συγκρίσιμη με εξαιρετικά επεμβατικές χειρουργικές μεθόδους ορθοτοπική ένεση (SOI). Αυτή η βελτιστοποιημένη μέθοδος εμπόδισε επιπλοκές ένεση όπως ανάκρουση των κυττάρων μέσω του καναλιού ένεση ή διαρροή των κυττάρων από το πάγκρεας μέσα στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε in vivo και ποσοτικοποιείται με εβδομαδιαία απεικόνιση υπερήχων, οι όγκοι ανιχνεύθηκαν επίσης με ίη νίνο απεικόνιση φθορισμού χρησιμοποιώντας έναν όγκο στοχευμένη μοριακό ανιχνευτή. Οι μέσες όγκοι του όγκου για τα μοντέλα USGI και SOI μετά από 2 εβδομάδες της ανάπτυξης του όγκου ήταν 205 mm

3 και 178 mm

3 αντιστοίχως. Με USGI ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, δημιουργήθηκαν τα ανθρώπινα ορθοτοπική παγκρεατικό ξενομοσχεύματα καρκίνου. Με βάση την απεικόνιση με υπερήχους, η ορθοτοπική ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου του ξενομοσχεύματος λαμβάνει ποσοστό ήταν 100% και για τα δύο ανθρώπινα παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές που χρησιμοποιήθηκαν, MiaPaCa-2 και Su86.86, με μέση όγκοι του όγκου των 28 mm

3και 30 mm

3 . Έχουμε αποδείξει ότι η μέθοδος αυτή USGI είναι εφικτό, να αναπαραχθεί, εύκολη, ελάχιστα επεμβατική και βελτιωμένη σε σύγκριση με την πολύ-επεμβατική μέθοδο SOI για την ίδρυση ορθοτοπική παγκρέατος μοντέλα ξενομοσχεύματος όγκου κατάλληλη για μοριακή απεικόνιση

Παράθεση:. Huynh AS, Abrahams DF , Τόρες MS, Baldwin ΜΚ, Gillies RJ, Μορς DL (2011) Ανάπτυξη ενός ορθοτοπική Ανθρωπίνων καρκίνο του παγκρέατος μοντέλο ξενομοσχεύματος χρήση υπερήχων Καθοδηγούμενη έγχυση κυττάρων. PLoS ONE 6 (5): e20330. doi: 10.1371 /journal.pone.0020330

Επιμέλεια: Μαρία Γ Castro, Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια, στο Λος Άντζελες, και Cedars-Sinai Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 Μαρτίου 2011? Αποδεκτές: 20 Απρ 2011? Δημοσιεύθηκε: May 27, 2011

Copyright: © 2011 Huynh et al. . Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση: Επιχορήγηση Υποστήριξη : ΝΙΗ /ΝΟΙ R01-CA123547 (https://www.nih.gov/, https://www.cancer.gov/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή έχουν

Ποντίκια έχουν χρησιμοποιηθεί ως μοντέλα του καρκίνου για πάνω από έναν αιώνα, παρέχοντας σημαντικές προόδους στην κατανόηση αυτής της πολύπλευρης οικογένεια νόσων. Υπάρχουν επί του παρόντος τέσσερις κύριους τομείς της έρευνας για τον καρκίνο που χρησιμοποιούν μοντέλα ποντικιών: βασική βιολογία και φυσιολογία, Experimental Therapeutics, την πρόληψη, και την ευαισθησία της γενετικής και των κινδύνων. Αυτά τα μοντέλα έχουν αποδειχθεί ότι είναι χρήσιμα στην επικύρωση της λειτουργίας των γονιδίων, ο χαρακτηρισμός των νέων γονιδίων του καρκίνου και καρκινικοί δείκτες, Η κατανόηση των μοριακών και κυτταρικών μηχανισμών που διέπουν την έναρξη του όγκου και πολυβάθμιες διαδικασίες της ογκογένεσης, και την παροχή καλύτερης κλινικά μοντέλα για να δοκιμάσουν νέες θεραπευτικές στρατηγικές [1]. Ειδικότερα, τα μοντέλα ξενομοσχεύματος όγκου ποντικού που χρησιμοποιούνται συνήθως σε προκλινικές μελέτες. Τα μοντέλα ξενομοσχεύματος ανθρώπινου όγκου που δημιουργείται από την έγχυση των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από καλλιέργεια σε ένα ποντίκι ή από την μεταμόσχευση μιας μάζας όγκου ανθρώπινου σε ένα ποντίκι. Η ξενομοσχεύματος μπορεί εύκολα να γίνει αποδεκτή από ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς όπως αθυμικά γυμνά ποντίκια ή σε σοβαρό κίνδυνο ανοσοανεπαρκή (SCID) [2]. Υπάρχουν διάφορα βασικά πλεονεκτήματα της χρήσης ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου όγκου: διαθέτουν την πολυπλοκότητα των γενετικών και επιγενετικών ανωμαλίες που υπάρχουν στον πληθυσμό ανθρώπινου όγκου? μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να βοηθήσει στην ανάπτυξη της εξατομικευμένης μοριακών θεραπευτικών προσεγγίσεων? και μπορεί να εμφυτευθεί ορθοτοπικά για να αναπαράγουν το περιβάλλον όργανο στο οποίο ο όγκος μεγαλώνει, έτσι ώστε η επίδραση του όγκου επί μικροπεριβάλλον του μπορεί να διαμορφωθεί [3].

Οι δύο κύριοι τύποι ανθρώπινων μοντέλων ξενομοσχεύματος ποντικού που χρησιμοποιείται για έρευνα για τον καρκίνο, ετεροτοπική και ορθοτοπική ορίζονται από τη θέση του εμφυτευμένου ξενομοσχεύματος. Για ετεροτοπική υποδόρια μοντέλα, η ξενομοσχεύματος εμφυτεύεται μεταξύ του χορίου και υποκείμενο μυ και βρίσκεται συνήθως στο πλευρό, από την πλάτη ή την πατούσα του ποντικιού. Για πάνω από 30 χρόνια, το μοντέλο υποδόριου ξενομοσχεύματος έχει το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο προκλινικό μοντέλο ποντικού για την έρευνα του καρκίνου επειδή είναι ταχεία, φθηνή, εύκολα επαναλήψιμη, και έχει θεωρηθεί επαρκώς προκλινικές να δοκιμάσει αντικαρκινικά φάρμακα. Η υποδόρια μοντέλο έχει επίσης τα πλεονεκτήματα της παροχής οπτική επιβεβαίωση ότι τα ποντίκια που χρησιμοποιούνται σε ένα πείραμα έχουν όγκους πριν από την θεραπεία? και παρέχοντας ένα μέσο για την αξιολόγηση της ανταπόκρισης του όγκου ή της ανάπτυξης με το χρόνο, σε σύγκριση με intracavitary μοντέλα όπου η επιβίωση των ζώων είναι ο μοναδικός μέτρο της απόκρισης [4]. Ωστόσο, σημαντικά μειονεκτήματα στην προκλινική χρήση του υποδόριου ξενομοσχεύματος μοντέλα έχουν γίνει εμφανή. Έχει παρατηρηθεί σταθερά ότι φαρμακευτικές αγωγές που είναι θεραπευτικές σε μοντέλα υποδόριου ξενομοσχεύματος ποντικού συχνά δεν έχουν σημαντική επίδραση στην ανθρώπινη ασθένεια. Η κύρια αιτία αυτής της αποτυχίας μπορεί να οφείλεται στην παρατήρηση ότι το υποδόριο μικροπεριβάλλον δεν είναι σχετική με εκείνη του χώρου οργάνου του πρωτογενούς ή μεταστατική νόσο. Επιπλέον, τα μοντέλα υποδόριου όγκου σπάνια σχηματίζουν μεταστάσεις. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι ετεροτοπική μοντέλα όγκων που δεν αποτελούν κατάλληλες τοποθεσίες για ανθρώπινους όγκους δεν είναι έξυπνη, όταν χρησιμοποιείται για τη δοκιμή απαντήσεις σε αντικαρκινικά φάρμακα [5].

Για την αντιμετώπιση των ελλείψεων του υποδόριου μοντέλα, ορθοτοπική ξενομοσχεύματα όγκου οι ολοένα και διερευνώνται για αυξημένη κλινική σημασία. Σε αυτό το μοντέλο, ο ξενομοσχεύματος όγκου είτε εμφυτεύεται ή εγχύεται στον ισοδύναμο όργανο από το οποίο προέρχεται ο καρκίνος, ή όπου οι μεταστάσεις βρίσκονται σε ασθενείς. Πλεονεκτήματα της ορθοτοπική μοντέλα περιλαμβάνουν τη χρήση της σχετικής περιοχή για αλληλεπιδράσεις όγκου-ξενιστή, η εμφάνιση μεταστάσεων ασθένειες σχετικές, η δυνατότητα να σπουδάσουν site-specific εξάρτηση της θεραπείας, έκφρασης όργανο ειδικά των γονιδίων και ότι τα κλινικά σενάρια μπορούν να αναπαραχθούν, π.χ. χειρουργική αφαίρεση του πρωτογενούς όγκου, ή συμπληρωματική θεραπεία της απόκρυφης μετάσταση [5]. Σημαντικές μειονεκτήματα είναι ότι ορθοτοπική γενιά ξενομοσχεύματος όγκου είναι εντατική, τεχνική πρόκληση της εργασίας, δαπανηρή, απαιτεί πλέον την επούλωση και την ανάκτηση του χρόνου και ότι ο όγκος παρακολούθηση του όγκου απαιτεί μεθόδους απεικόνισης σχετικά χαμηλότερη απόδοση σε σύγκριση με τη χρήση του δαγκάνες [5]. Παρ ‘όλα αυτά, οι ορθοτοπική μοντέλα όγκων αναδύεται ως η προτίμηση για την έρευνα του καρκίνου λόγω της αυξημένης κλινική σημασία.

Υπάρχει μεγάλη ανάγκη για την ανάπτυξη βελτιωμένων μοντέλων για την προ-κλινική έρευνα του καρκίνου του παγκρέατος. Υπολογίζεται ότι 43.140 άνθρωποι (21.370 άνδρες και 21.770 γυναίκες) θα διαγνωστεί με καρκίνο του παγκρέατος το 2010, και ότι 36.800 άνδρες και οι γυναίκες θα πεθάνουν από αυτήν την ασθένεια [6]. Η πρόγνωση είναι κακή, με λιγότερους από 5% επιβίωσης πέντε χρόνια μετά τη διάγνωση, και πλήρη ύφεση είναι σπάνια. Δεν έχουν αποτελεσματικές μεθόδους έγκαιρης ανίχνευσης έχουν αναπτυχθεί και η πρόοδος στην ανάπτυξη της θεραπείας και της θεραπείας είναι στάσιμη. Η γεμσιταβίνη υπήρξε η τυπική χημειοθεραπεία για περισσότερο από μια δεκαετία. Ωστόσο, το όφελος της θεραπείας με γεμσιταβίνη μονοθεραπεία σε προχωρημένο και μεταστατικό καρκίνο του παγκρέατος είναι μικρή [7]. Η χρήση των ορθοτοπική μοντέλα ξενομοσχεύματος για προκλινικές παγκρέατος έρευνα για τον καρκίνο μπορεί να βελτιώσει την ανάπτυξη θεραπειών και διαγνωστικών μεθόδων απεικόνισης κατά της νόσου αυτής.

Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η δυνατότητα ανάπτυξης ορθοτοπική ανθρώπινων μοντέλων καρκίνου του παγκρέατος ξενομόσχευμα χρησιμοποιώντας υπερήχους καθοδηγούμενη ένεση (USGI) των καρκινικών κυττάρων. Ορθοτοπική μοντέλα ποντικού ξενομοσχεύματος όγκου για τον καρκίνο του παγκρέατος έχουν καθιερωθεί εδώ και πολλά χρόνια. Ωστόσο, τα μοντέλα αυτά απαιτούν την εξαιρετικά επεμβατικές χειρουργικές ορθοτοπική εμφύτευση (SOI) των καρκινικών κυττάρων ή κομμάτια μέσα στο πάγκρεας. Αυτή η διαδικασία μπορεί να οδηγήσει σε σημαντική τραύμα, απαιτώντας μετεγχειρητική χρόνο αποκατάστασης, και μπορεί να οδηγήσει σε ανεπιθύμητες ενέργειες όπως λοίμωξη, αιμορραγία, συγκόλληση των όγκων σε άλλα όργανα, και άλλες επιπτώσεις από τη χειρουργική στρες, π.χ. επούλωση του τραύματος.

Οι πρόσφατες εξελίξεις επέτρεψαν την ανάπτυξη μεθόδων απεικονιστικά καθοδηγούμενη για ορθοτοπική ένεση κυττάρων ή ιστού σε εσωτερικά όργανα, δυνητικά εξάλειψη της ανάγκης για υψηλά επεμβατικές χειρουργικές διαδικασίες. Ειδικότερα, ελάχιστα επεμβατική πραγματικό χρόνο υπερήχους καθοδηγούμενη έγχυση (USGI) των κυττάρων του όγκου μπορεί να πραγματοποιηθεί για τη δημιουργία ορθοτοπική μοντέλα ξενομοσχεύματος. USGI των όγκων κυττάρων έχει γίνει αποδεκτή μέθοδος για την ανάπτυξη ορθοτοπική μοντέλα ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. Για παράδειγμα, μια ανθεκτική μοντέλο πολυφάρμακα ιδρύθηκε με επιτυχία σε γυμνά ποντίκια μέσω ορθοτοπική εμφύτευση των ανθεκτικών σε πολλαπλά φάρμακα ανθρώπινα κύτταρα HCC κατευθύνεται με υπερηχογράφημα [8]. Έχουμε αναπτύξει με επιτυχία ένα νέο ορθοτοπικό μοντέλο ξενομοσχεύματος για λεμφαδένα μετάσταση, όπου ο ακριβής αριθμός των κυττάρων του όγκου εγχύθηκαν εντός των μασχαλιαίων λεμφαδένων χρησιμοποιώντας υπερηχογραφική καθοδήγηση εικόνας [9].

Ένα συγγενικό ορθοτοπικό ποντικού παγκρεατικό μοντέλο ποντικού καρκίνος ήταν που αναπτύχθηκε από ένεση του παγκρεατικού πόρου κύτταρα αδενοκαρκινώματος ποντικού, Pan02, μέσα ή κοντά στο πάγκρεας C57BL /6 ποντίκια χρησιμοποιώντας SonoCT καθοδήγηση υπερήχων [10]. Η καθοδηγούμενη με υπέρηχο μέθοδος συνήφθη να είναι ευνοϊκή σε σχέση με το υποδόριο μοντέλο για τη διερεύνηση της επίδρασης της ανοσοθεραπείας στην αύξηση του όγκου [10]. Ωστόσο, οι όγκοι που προκύπτουν από τη μελέτη αυτή φάνηκε να διαδοθεί ευρέως σε όλη την κοιλιακή κοιλότητα και να μην απομονωθεί αποκλειστικά στο πάγκρεας, και δεν ήταν σαφές αν αυτή ήταν αποτέλεσμα της μετάστασης, ή, ενδεχομένως, τα κύτταρα που απελευθερώνονται στον περιβάλλοντα χώρο κατά τη διάρκεια της διαδικασίας.

τρέχουσα μελέτη μας είναι η πρώτη που αναφέρει την ορθοτοπική ένεση ανθρώπινης παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα απευθείας στο πάγκρεας των ποντικιών ανοσοκατεσταλμένους με την καθοδήγηση υπερήχων-εικόνα. Έχουμε χαρακτηριζόμενη πλήρως ο όγκος λάβει ποσοστά σε σχέση με το χειρουργικό μοντέλο και έχουν επιβεβαιωθεί από ιστολογία που οι όγκοι αρχικά απομονώθηκαν στο πάγκρεας που ακολουθείται από μετέπειτα μετάσταση στην περιτοναϊκή κοιλότητα σε μεταγενέστερες εβδομάδες. Επιπλέον, έχουμε αποδείξει ότι μια στοχευμένη παράγοντα μοριακής απεικόνισης μπορεί να παραδοθεί συγκεκριμένα μέσω του αγγειακού συστήματος με τις προκύπτουσες όγκων στο πάγκρεας.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλα διαδικασίες ήταν, σύμφωνα με τον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των εργαστηριακών ζώων Πόρων (1996), το Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας, και εγκρίθηκε από την Υγειονομική υπηρεσία και την Επιτροπή Χρήσης, Πανεπιστήμιο της Νότιας Φλόριντα στο πλαίσιο του εγκεκριμένου πρωτοκόλλου R3715. Τα ανοσοκατασταλμένα ποντίκια που στεγάζεται σε ένα καθαρό εγκατάσταση με ειδικούς όρους, που περιλαμβάνουν HEPA φιλτράρεται αεριζόμενα συστήματα κλουβιών, κυψελωτό κρεβάτι, κυψελωτό αλλαγή των διαδικασιών στέγασης, αυτόκαυστο νερό, τα ακτινοβολημένα τρόφιμα και ειδικές κλουβί. Τα ποντίκια αντιμετωπίζονται κάτω από άσηπτες συνθήκες, συμπεριλαμβανομένης της φορώντας γάντια, ποδιές και καλύμματα υποδημάτων.

Cell Culture

ΜΙΑΡΑΟΑ-2 κύτταρα (ATCC CRL-1420), κύτταρα SU86.86 (ATCC CRL- 1837), και τα γονικά κύτταρα HCT116 (ATCC CCL-247) αγοράστηκαν από την ATCC (Manassas, VA). Τα HCT116 /δOR + καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα γενετικά από την γονική κυτταρική σειρά HCT116 σε ιδιαίτερα υπερ-εκφράζουν το δ-υποδοχέα οπιοειδών [11]. Η έκφραση του δOR στην επιφάνεια των HCT116 και /δOR + κυττάρων HCT116 χαρακτηρίστηκε πριν από την ένεση χρησιμοποιώντας ένα

in vitro δοκιμασία πρόσδεσης

φθορισμό με ανάλυση χρόνου [12]. κύτταρα HCT116 /δOR +, και MiaPaCa-2 καλλιεργήθηκαν σε μέσα DMEM /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA) συμπληρωμένο με 10% φυσιολογικό ορό μόσχου (Atlanta Biologicals, Lawrenceville, GA) και 1% στρεπτομυκίνη διάλυμα πενικιλλίνης /(Sigma, St. Louis, ΜΟ). Τα κύτταρα SU86.86 καλλιεργήθηκαν σε RPMI μέσο (Invitrogen) συμπληρωμένου με 10% FBS (Atlanta Biologicals). Όλα τα κύτταρα αναπτύχθηκαν στους 37 ° C και 5% CO2.

Χειρουργική ορθοτοπική καρκίνο του παγκρέατος Ξενομοσχεύματος μοντέλο ποντικού

Για σύγκριση με την τεχνική USGI, 5 θηλυκών ποντικών ηυ /ηυ ηλικίας 6-8 εβδομάδων (Harlan Sprague Dawley Inc., Indianapolis, ΙΝ) υποβλήθηκαν καθιερωμένη χειρουργική μέθοδο για ορθοτοπική ένεση κυττάρων στο πάγκρεας. Για τη διαδικασία αυτή, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν υπό ισοφλουράνιο αέριο? το κοιλιακό δέρμα και τους μύες ήταν τέμνονται ακριβώς έξω από τη μεσαία γραμμή και ακριβώς πάνω από το πάγκρεας για να επιτρέψει την απεικόνιση των παγκρεατικών λοβούς? το πάγκρεας απαλά ανασυρθεί και τοποθετημένη ώστε να επιτρέπει την άμεση έγχυση ενός βώλου 20 μί 1 × 10

6 HCT116 /δOR + κύτταρα /PBS χρησιμοποιώντας σύριγγα 1 cc με μία βελόνη διαμετρήματος 30? επιτυχή παράδοση των κυττάρων στο πάγκρεας παρατηρήθηκε υπό μεγέθυνση χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο ανατομής? το πάγκρεας τοποθετήθηκε πίσω μέσα στην κοιλιακή κοιλότητα? και τόσο οι μυς και το δέρμα κλείστηκε με στρώματα χειρουργική κόλλα. Μετά την ανάρρωση από τη χειρουργική επέμβαση, τα ποντίκια παρακολουθούνται και να ζυγίζονται καθημερινά.

Ultrasound Imaging

Το 2100 Σταθμός Visual Sonics Vevo απεικόνισης χρησιμοποιήθηκε για όλα τα απεικόνισης υπερήχων. αποκτήσεις εικόνας διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το πακέτο ενισχυμένη κοιλιακή μέτρησης στην B-mode και ρυθμίσεις λειτουργίας 3-D. Φυσιολογική κατάσταση (ΗΚΓ, αναπνοή, την αρτηριακή πίεση και τη θερμοκρασία του σώματος) των ποντικών παρακολουθείται στενά κατά τη διάρκεια κάθε συνεδρίας απόκτησης εικόνας. Οι ποντικοί απεικονίστηκαν πριν από την ξενομεταμόσχευση όγκου για να δημιουργηθούν οι βασικές εικόνες και, στη συνέχεια, απεικονίζεται εβδομαδιαίως για έως και 4 εβδομάδες με τη χρήση υπερήχων για την παρακολούθηση της ανάπτυξης των παγκρεατικών ορθοτοπική ξενομοσχεύματα καρκίνου.

φθορισμού Imaging

Ποντικοί που φέρουν ορθοτοπική παγκρεατική ξενομοσχεύματα των /δOR + κυττάρων HCT116 χορηγήθηκαν 4,5 nmol /kg σωματικού βάρους του DMT-Tic-Cy5 με ένεση στην φλέβα της ουράς. DΜΤ-Tic-Cy5 είναι μια υψηλής συγγένειας (3 ηΜ Κί) peptidomimedic στοχευμένη καθετήρα συζευγμένο με φθορίζουσα χρωστική (Cy5) που χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η θέση των /δOR + κύτταρα HCT116 με

in vivo

και

ex vivo

φθορισμού απεικόνισης [12]. Μετά την ένεση, οι ποντικοί κρατήθηκαν σε ειδικό σκοτεινό θάλαμο και να προστατεύεται από την έκθεση στο φως όσο το δυνατόν περισσότερο για να αποτραπεί η φωτογραφία λεύκανση της χρωστικής. Μηδική-δωρεάν φαγητό και ειδικά κλινοσκεπάσματα κλουβί χρησιμοποιήθηκαν για την ελαχιστοποίηση αυτοφθορισμό.

In vivo

και

ex vivo

φθορισμού εικόνες αποκτήθηκαν με τη χρήση της σειράς δαγκάνα Επιστημών Ζωής Xenogen IVIS 200 Imaging System. Χρησιμοποιήθηκαν η διέγερση 615 – 665 nm και 695-770 nm φίλτρα εκπομπής. φορές Απόκτηση κυμαίνονταν από 0 s έως 10 s για να κρατήσει μετρήσεις ένταση μέσα στην κλίμακα από 15.000 έως 60.000 για την πρόληψη του κορεσμού. Πριν από την ανάλυση των δεδομένων, έγιναν αφαιρέσεις φόντο μέσο. Ζώντας Εικόνα 3.2 Λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για να επιστήσει περιοχές ενδιαφέροντος (ROI που) κατά τη διάρκεια των όγκων για τον προσδιορισμό του σήματος μέση φθορισμού (μονάδες απόδοσης). Οι μονάδες απόδοση που υπολογίζεται από την κανονικοποίηση εικόνες εκπομπή φθορισμού για τις διακυμάνσεις στην κατανομή φωτός που προσπίπτει διέγερσης στη σκηνή. φόντο αυτοφθορισμός αφαιρέθηκε με προσδιορισμό της μέσης σήμα φθορισμού του όγκου πριν από την ένεση.

Ιστολογία του παγκρέατος ξενομοσχευμάτων

Το πάγκρεας των ποντικών συλλέχθηκαν, επιθεωρείται οπτικά, σταθεροποιήθηκαν σε 10% ρυθμιστικό διάλυμα φορμαλίνης, επεξεργασμένα , ενσωματωμένο, τρι-τομή, η &? Ε χρώση και αναλύθηκαν με έναν παθολόγο για την παρουσία όγκων

Στατιστικά

τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD. και έλεγχος τ χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η σημασία.

Αποτελέσματα

Ανάπτυξη του Ανθρώπινου ορθοτοπική καρκίνο του παγκρέατος Ξενομοσχεύματος μοντέλο ποντικού Χρησιμοποιώντας USGI

Ο ορθοτοπικό ανθρώπινου παγκρεατικού μοντέλο ποντικού καρκίνος ήταν αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας ηλικίας 6-8 εβδομάδων θηλυκών αθυμικών γυμνών ποντικών. Οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας 3% ισοφλουράνιο αέριο μέσω θαλάμου επαγωγής και στη συνέχεια ασφαλίζεται στην ραχιαία κατάκλιση στην πλατφόρμα υπερήχων με έναν κώνο μύτη για διατήρηση της αναισθησίας κατά 1,5 έως 2%. Η πλατφόρμα υπερήχων τοποθετείται για να έχει την πλευρά του παγκρέατος του σώματος προς τον κάτοχο μηχανική βελόνας. Ultrasound γέλη εφαρμόστηκε στην κοιλιά και το πάγκρεας βρίσκεται με μηχανική ρύθμιση της θέσης του μετατροπέα υπερήχων, με την σπλήνα ως αναφορά. Μια Prescan εικόνα της κοιλιακής περιοχής ποντικού πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της δυνατότητας απόκτησης απεικόνισης λειτουργία 3D πριν από την ξενομεταμόσχευση για τη δημιουργία μιας βάσης για την συγκριτική ανάλυση. Ένα mL σύριγγα 0,5 με 30 g βελόνα τοποθετήθηκε στην υποδοχή μηχανική σύριγγα και παρατάσσονται παράλληλα με τον ανιχνευτή και κάθετα προς το σώμα. Η βελόνα της σύριγγας στη συνέχεια σωστά ευθυγραμμισμένο και προωθείται μέσα στο πάγκρεας, χρησιμοποιώντας τη δυνατότητα επικάλυψης οδηγό βελόνας που επιτρέπει την οπτικοποίηση της ευθυγράμμισης της βελόνας και του στόχου της ένεσης στην οθόνη ΗΠΑ. Ένας βώλος 20 μί 1 × 10

6 καρκινικά κύτταρα αιωρούνται σε PBS εγχύθηκε κατευθείαν μέσα στο πάγκρεας με την αυτοματοποιημένη λειτουργία μικρο-ένεση ακρίβειας απεικονιστικά καθοδηγούμενη. Μια βελτιστοποιημένη τεχνική έγχυσης χρησιμοποιήθηκε, στην οποία ο όγκος της ένεσης μειώθηκε από ένα αρχικό όγκο 50 μL σε 20 μL. Αντί αμέσως ανάσυρση της βελόνας, ένα δεύτερο παύση 5 μετά την ένεση των κυττάρων με μια αργή, εσκεμμένη απόσυρση της βελόνας που επιτρέπεται για την πλήρη απελευθέρωση κυττάρων στο πάγκρεας. Η βελτιστοποιημένη τεχνική εμπόδισε επιπλοκές ένεση όπως ανάκρουση των κυττάρων μέσω του καναλιού ένεση ή διαρροή των κυττάρων από το πάγκρεας μέσα στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Το Σχήμα 1 δείχνει το πραγματικό χρόνο υπερήχων αποκτήσει εικόνες της USGI 1 × 10

6 HCT116 /δOR + κυττάρων σε ένα βλωμό 20 μί στο πάγκρεας ποντικού. Μόλις ολοκληρώθηκε μια ένεση, η αναισθησία διεκόπη και ο ποντικός επέστρεψε στο αρχικό περίβλημα και παρατηρήθηκαν μέχρι ικανό σκόπιμη μετακίνηση. Η φυσιολογική κατάσταση (του καρδιακού ρυθμού, της θερμοκρασίας του σώματος, ΗΚΓ και ο ρυθμός της αναπνοής) των ποντικών παρακολουθούνται καθ ‘όλη τη διαδικασία χρησιμοποιώντας Μονάδα Παρακολούθησης Σύνθετη Φυσιολογικές του Vevo του. Μετά USGI ξενομεταμόσχευση, τα ποντίκια παρακολουθούνται και να ζυγίζονται καθημερινά για να εντοπίσει τυχόν σημάδια του άγχους ή τραύμα λόγω της διαδικασίας ή του όγκου επιβάρυνσης, και δεν παρατηρήθηκε σημαντική απώλεια βάρους ή άλλα τραύματα.

Α) Δείχνει το 30 gauge βελόνα στο πάγκρεας ποντικού προ-ένεση. Β) δείχνει την έγχυση μιας εφόδου 20 μί των καρκινικών κυττάρων στο πάγκρεας ποντικών.

Η

Η /δOR + μοντέλο HCT116 επιλέχθηκε επειδή έχουμε αναπτύξει ένα πολύ ειδικό ανιχνευτή μοριακή απεικόνιση (DMT-Tic-Cy5 ) για την ανίχνευση των κυττάρων που εκφράζουν τον ανθρώπινο δ-υποδοχέα οπιοειδών και έχουν χρησιμοποιηθεί στο παρελθόν αυτή ανιχνευτής για το

in vivo

και

ex vivo

ειδική ανίχνευση των κυττάρων HCT116 /δOR + με απεικόνιση φθορισμού [12] . Αν και δεν είναι ορθοτοπική, η χρήση αυτής της γραμμής είναι επίσης σημαντική, επειδή καρκίνο του παχέος εντέρου είναι γνωστό ότι σχηματίζουν μεταστάσεις στο πάγκρεας [13].

Αρχικά ποντίκια που φέρουν ορθοτοπική ξενομοσχεύματα των HCT116 /δOR + μέσω της SOI και USGI απεικονίστηκαν εβδομαδιαία με υπερήχους για έως και 4 εβδομάδες για την παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου. Το χαρακτηριστικό απόκτηση απεικόνισης 3D-mode χρησιμοποιήθηκε, στο οποίο ένα 3D κινητήρας μεταφράζει τη συστοιχία μεταλλάκτη Microscan σε όλη την κοιλιά για να ληφθεί πολλαπλές 2D φέτες που συναρμολογούνται και αποδίδεται από το λογισμικό Vevo σε ένα 3D σύνολο δεδομένων των ανατομικών δομών του παγκρέατος και άλλων κοιλιακά όργανα. Το Σχήμα 2 δείχνει υπερήχων εικόνες των παγκρέατα ποντίκι ξενομοσχευμάτων που φέρει όγκο που αποκτήθηκε κατά το χρόνο 0 (πριν από την ένεση των κυττάρων), 1 εβδομάδα και 2 εβδομάδες μετά USGI και SOI των κυττάρων. Μετά από 3 έως 4 εβδομάδες, τα ποντίκια είχαν εξαιρετικά μεγάλους όγκους με πρησμένα διαστέλλεται κοιλίες, και σε αυτές τις μετέπειτα χρονικά σημεία, μερικά ζώα είχαν μεταστάσεις σε διάφορες περιοχές της κοιλιακής κοιλότητας, π.χ. η ΓΕ σωλήνα, του ήπατος και των πνευμόνων.

Α) Κανονική παγκρέατος ποντικού, Β) 1 εβδομάδα μετά-USGI, Γ) 2 εβδομάδες μετά τη USGI, D) 1 εβδομάδα μετά-SOI, και Ε) 2 εβδομάδες μετα-SOI.

η

για να αποδειχθεί η σκοπιμότητα της ανάπτυξης ενός ορθοτοπικό παγκρέατος μοντέλο από USGI που είναι συγκρίσιμη με SOI μεθόδους, 5 ποντίκια κάθε υποβλήθηκαν USGI ή SOI 1 × 10

6 HCT116 /δOR + κυττάρων στο πάγκρεας. Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε και ποσοτικά με εβδομαδιαία απεικόνισης υπερήχων. Μετά από 2 εβδομάδες, τα μεγάλα παγκρεατικών όγκων ξενομοσχεύματος παρατηρήθηκαν σε όλες τις 10 ποντίκια με απεικόνιση με υπερήχους (Σχήμα 3). μετρήσεις όγκου 3D ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το εργαλείο Volume 3D-Mode, στην οποία οι όγκοι που δημιουργούνται από την κατάρτιση περιγράμματα γύρω από τον όγκο σε κάθε 10 φέτες τη σειρά των εικόνων για τη δημιουργία ενός 3D όγκου του όγκου και της εικόνας. Το Σχήμα 3 δείχνει αντιπροσωπευτικές εικόνες 3D υπερηχογράφημα του USGI (3Α) και SOI (3D) μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού 2 εβδομάδες μετά την ένεση των κυττάρων του όγκου. Η μέση όγκοι του όγκου (η = 5) για τα μοντέλα USGI και SOI απεικονίσθηκαν συναρτήσει του χρόνου στο Σχήμα 4 και καταγράφονται στον Πίνακα 1. Οι ποντικοί στη συνέχεια χορηγούνται 4.5 nmol /kg Dmt-Tic-Cy5 ανιχνευτή μέσω ένεσης στην ουραία φλέβα.

In vivo

φθορισμού εικόνες αποκτήθηκαν 24 ώρες αργότερα, η οποία προέβλεπε μέγιστη αντίθεση. Η

in vivo

φθορισμού εικόνες στο σχήμα 3 έδειξε πρόσληψη του φθορίζοντος ανιχνευτή στην περιοχή του παγκρέατος και για τα δύο μοντέλα ποντικού, υποδεικνύοντας την παρουσία των κυττάρων HCT116 /δOR + όγκου. Η

in vivo

σημαίνει σήμα φθορισμού (n = 5) ήταν 2 φορές υψηλότερη για SOI σε σύγκριση με το μοντέλο USGI, ρ & lt? 0.002 (Σχήμα 5). Βασισμένο σε

in vivo

υπερήχων και φθορισμού απεικόνισης, το ποσοστό απορρόφησης ήταν 100% και για τα δύο μοντέλα, ενώ χρησιμοποιώντας κύτταρα HCT116 /δOR + όγκου.

Το μπλε σκιασμένη περιοχή αντιπροσωπεύει τον όγκο που παράγεται από την εκτέλεση 3D όγκου μετρήσεις όγκου. Α) υπερήχων εικόνα USGI μοντέλο, Β)

in vivo

φθορισμού εικόνα USGI μοντέλο, C)

ex vivo

φθορισμού εικόνα του παγκρέατος ποντικού από το μοντέλο USGI, D) υπέρηχο εικόνα SOI μοντέλο, E)

in vivo

φθορισμού εικόνα του μοντέλου SOI, και F)

ex vivo

φθορισμού εικόνα του παγκρέατος ποντικού από το μοντέλο SOI.

η

Η

Για να προσδιοριστεί εάν USGI μπορεί να χρησιμοποιηθεί με ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές σειρές, 5 ποντίκια υποβλήθηκαν σε USGI των 2 × 10

6 MiaPaCa-2 κύτταρα σε ένα εφόδου 20 μί και άλλα 5 ποντίκια υποβλήθηκαν σε USGI 2 × 10

6 SU86.86 κύτταρα. Μετά από 2 εβδομάδες, όλα τα ποντίκια είχαν ορθοτοπική ξενομοσχεύματα παγκρεατικού όγκου παρατηρήθηκε με απεικόνιση με υπερήχους και οπτική επιθεώρηση (Σχήμα 6). Η μέση όγκοι του όγκου (η = 5) απεικονίσθηκαν συναρτήσει του χρόνου για τα ανθρώπινα παγκρεατικά καρκινώματα MiaPaCa-2 και Su86.86 (Σχήμα 7) και καταγράφονται στον Πίνακα 1. Με βάση

in vivo

απεικόνιση με υπερήχους, η ορθοτοπική ξενομόσχευμα λαμβάνουν ποσοστό ήταν 100%, ενώ με τη χρήση τόσο των ανθρώπων όσο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές, MiaPaCa-2 και Su86.86.

το μπλε σκιασμένη περιοχή αντιπροσωπεύει τον όγκο που παράγεται από την εκτέλεση 3D μετρήσεις όγκου των όγκων.

Η

Επικύρωση από ex vivo φθορισμού απεικόνισης και Ιστολογίας

Αμέσως μετά την

in vivo

φθορισμού απεικόνισης, η HCT116 /δOR + όγκου xeongraft ποντίκια που έφεραν ευθανασία, εξετάζονται οπτικά για την παρουσία όγκων σε άλλα σημεία του σώματος, και τα κύρια όργανα (καρδιά, πνεύμονες, νεφρά, ήπαρ, σπλήνα, πάγκρεας, ΓΕ σωλήνα) απομακρύνθηκε, και

ex vivo

φθορισμός εικόνες που αποκτήθηκαν από 24 ώρες μετά την χορήγηση του στοχευόμενου φθορίζοντος ανιχνευτή. Η

ex vivo

σημαίνει φθορισμού (n = 5) που αποκτήθηκαν από πάγκρεας και των δύο μοντέλων ήταν σχετικά το ίδιο (Σχήμα 5). Όπως καθορίζεται από

ex vivo

απεικόνισης, ανιχνευτή ειδικό φθορισμός ήταν παρούσα στο 100% της παγκρέατα ποντικού (n = 5) για τα δύο μοντέλα, και παρατηρήθηκε ένα χαμηλό επίπεδο φθορισμού στα νεφρά (Σχήμα 8).

Η

με την ιστολογία, παρατηρήθηκαν όγκοι στο 100% του πάγκρεας που υπέστη USGI ή SOI χρησιμοποιώντας HCT116 /δOR + κύτταρα. Οι όγκοι παρατηρήθηκαν σε μόνο 4 από τα 5 (80%) του παγκρέατα ένεση με MiaPaCa-2 ή SU86.86 κύτταρα, ακόμη και αν η απορρόφηση ήταν 100% με βάση το απεικόνισης των ΗΠΑ. Ιστολογία από αυτές πάγκρεας παρασκευάζεται μόνο από τις 3 ενότητες που ήταν 50 μm πέρα, ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι οι όγκοι χαθεί κατά την κοπή. Το Σχήμα 9 δείχνει αντιπροσωπευτικά Η &? Ε χρώση παγκρέατα ποντικού που περιέχει ξενομοσχεύματα όγκου και των τριών κυτταρικών γραμμών. Για HCT116 /δOR + κύτταρο ξενομοσχεύματα, το μέσο ποσοστό (n = 5) του κακοήθους ιστού σε σχέση προς ανεπηρέαστη ιστό βρέθηκαν σε ένα μόνο τμήμα του παγκρέατος ήταν 76 ± 15% για τη μέθοδο SOI και 62 ± 13% για USGI (Πίνακας 2) . Κάθε ξενομόσχευμα ήταν ιστολογικά βαθμολογούνται για τον τύπο κακοήθειας και σημαίνουν ποσοστό σημείωσε (n = 5) για SOI και USGI αντίστοιχα: 84% ± 9 και 85% ± 9 κυτταρική, 12% ± 5 και 11% ± 6 στρωματικά, και 4% ± 4 και 4% ± 3 νεκρωτικές (Πίνακας 2).

Η προβολή μεγέθυνση 20Χ δείχνει φυσιολογικό πάγκρεας (υποδεικνύεται με μαύρα βέλη) πλησίον προς κύτταρα όγκου (υποδεικνύεται με κόκκινα βέλη).

Η

Συζήτηση

Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη υπόψη ορθοτοπική ξενομεταμόσχευση ανθρώπινων παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων από USGI στο πάγκρεας ποντικών. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η μέθοδος αυτή USGI είναι εφικτό, επαναλήψιμη, εύκολη, ελάχιστα επεμβατική και βελτιωμένη σε σύγκριση με την πολύ επεμβατική μέθοδος SOI για τον καθορισμό ορθοτοπική παγκρεατική μοντέλα κατάλληλα για εφαρμογές μοριακής απεικόνισης. USGI είναι μία βελτίωση έναντι της μεθόδου SOI για απεικόνιση, επειδή η διεισδυτική τμήμα της διαδικασίας διαρκεί μόνο 30 δευτερόλεπτα έναντι 5 λεπτά και με μικρότερη ανάκτηση και χρόνο επούλωσης. Το χειρουργικό τραύμα ήταν ακόμη παρούσα κατά τη στιγμή της απεικόνισης φθορισμού δύο εβδομάδες αργότερα με την μέθοδο SOI, ενώ η USGI βελόνα πούτσος τραύμα δεν ήταν πλέον ορατά μετά από 1 ημέρα. Η παρουσία του χειρουργικού τραύματος αλλάξει τις ιδιότητες αυτοφθορισμού του δέρματος και μπορεί έτσι να μειώσει τις απεικονιστικές μελέτες ποιότητας φθορισμού.

Υπερηχογράφημα απεικόνισης χρησιμοποιήθηκε για να παρακολουθείτε την ένεση των καρκινικών κυττάρων

in vivo

. Η οπτικοποίηση σε πραγματικό χρόνο των ενέσεων κυττάρων επέτρεψε τη βελτιστοποίηση της μεθόδου έγχυσης. Σε αρχικά πειράματα, παρατηρήσαμε κύτταρα χύνεται έξω από έξω παγκρέατος μέσα στην περιτοναϊκή κοιλότητα, όταν ένας βώλος 50 μL των κυττάρων του όγκου εγχύθηκε κατευθείαν μέσα στο πάγκρεας τόσο από την μέθοδο USGI και SOI. Αυτός ο όγκος επελέγη αρχικά επειδή ήταν ο όγκος που χρησιμοποιείται στο συνγονιδιακό ορθοτοπικό παγκρεατική μοντέλο που αναπτύχθηκε από τη Schneider et al, στο οποίο παρατηρείται κοιλιακή μεταστάσεις στις περισσότερες περιπτώσεις [10]. Παρατηρήσαμε επίσης κοιλιακό μεταστάσεων σε ποντικούς που λαμβάνουν ένα εφ ‘άπαξ 50 μL και υποψιάζονται ότι αυτές οι μεταστάσεις μπορεί να οφείλεται σε κυτταρική διαρροή. Παρατηρήσαμε επίσης ανάκρουση των κυττάρων μέσω του καναλιού ένεση όταν η βελόνα απομακρύνεται από το πάγκρεας πολύ γρήγορα, η οποία κατέληξε σε 3 ποντικούς ανάπτυξη μικρό υποδόριο όγκο στο σημείο της ένεσης. Ως εκ τούτου, βελτιστοποιημένη τον όγκο ένεσης σε 20 μί και η μέθοδος ένεση για την πρόληψη διαρροής και ανάκρουση των κυττάρων έξω από το πάγκρεας.

Αρχικά πειράματα προσδιορίστηκε ότι ορθοτοπική παγκρεατική ξενομοσχευμάτων HCT116 /δOR + κύτταρα εμφανίζουν περιτοναϊκή διάχυση μετά από 3 έως 4 εβδομάδων, η οποία έχει αναφερθεί από άλλους, καθώς και [14], [15], [16]. Σε αυτό το χρονικό πλαίσιο, παρατηρήσαμε μεταστάσεις στο περιτόναιο, το ήπαρ, και τους πνεύμονες. Μεταστάσεις δεν ανιχνεύθηκαν σε 2 εβδομάδες. Άλλοι έχουν παρατηρηθεί σημαντικές μετάσταση στο περιτόναιο, το ήπαρ, οι πνεύμονες και λεμφαδένες μετά από χειρουργική ορθοτοπική ένεση των κυττάρων του όγκου στο πάγκρεας [17]. Αυτό υποδηλώνει ότι η παγκρεατική ξενομοσχεύματα καρκίνου χρησιμοποιώντας HCT116 /δOR + κύτταρα είναι παρόμοια με του παγκρέατος ξενομοσχεύματα καρκινικών κυττάρων. Από τότε που διερευνά τη σκοπιμότητα USGI καθορίζοντας ξενομόσχευμα όγκου λάβει ποσοστό και όχι μετάσταση, επιλέξαμε να πραγματοποιήσει το υπόλοιπο της μελέτης χρησιμοποιώντας ποντίκια με 2 εβδομάδων ορθοτοπική παγκρέατος ξενομοσχεύματα καρκίνου.

Υπερηχογράφημα και φθορισμού απεικόνισης χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η θέση των όγκων και να παρακολουθεί την πρόοδο της ανάπτυξης του όγκου

in vivo

. Αν και /δOR + κύτταρα HCT116 είναι ανθρώπινα ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα, που είναι σχετικές με τα μοντέλα του παγκρέατος ξενομοσχεύματος επειδή είναι γνωστό ότι σχηματίζουν απόκρυφη μεταστάσεις στο πάγκρεας [13]. Επιπλέον, θα μπορούσε να ακολουθηθεί από ένα ανιχνευτή μοριακή απεικόνιση είχαμε αναπτύξει προηγουμένως, το πεπτιδομιμητικό φθορίζοντα ανιχνευτή (DMT-Tic-Cy5) που στοχεύει ειδικά την δ-οπιοειδούς υποδοχέα που εκφράζεται επί της επιφανείας αυτής της κυτταρικής γραμμής όγκου με υπο ηΜ συγγένεια [12 ].

Η επιτυχία στην παραγωγή των ορθοτοπική παγκρεατικών ξενομοσχεύματος όγκων χρησιμοποιώντας USGI ήταν συγκρίσιμη με μεθόδους SOI μας χρησιμοποιώντας HCT116 /δOR + κύτταρα. Με βάση την απεικόνιση με υπερήχους,

in vivo

και

ex vivo

φθορισμού απεικόνισης, και η ιστολογική ανάλυση, το ξενομόσχευμα λάβει ποσοστό ήταν 100% και για τις δύο USGI και SOI χρησιμοποιώντας HCT116 /δOR + κύτταρα. Και για τα δύο μοντέλα, υπήρχε μια ισχυρή συσχέτιση στο σχηματισμό παρατηρούμενη όγκου χρησιμοποιώντας τόσο υπερήχων και φθορισμού απεικόνισης. Snyder et al., Ανέφεραν επίσης ότι ο φθορισμός και ο υπέρηχος απεικονιστικές είναι συμπληρωματικές προσεγγίσεις για την παρακολούθηση της προόδου του όγκου και την ανταπόκριση στη θεραπεία σε προκλινικές μελέτες με ορθοτοπική μοντέλα ποντικών του ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου [18]. Οι όγκοι ξενομοσχεύματος όγκου για SOI και USGI ήταν συγκρίσιμες τόσο σε 1 και 2 εβδομάδες μετά την εμφύτευση. Ωστόσο, η μέση ποσοτικά σήμα φθορισμού (n = 5) που αποκτήθηκαν από το

in vivo

απεικόνιση του μοντέλου SOI ήταν 2 φορές υψηλότερη σε βελτίωση σε σύγκριση με το μοντέλο USGI ενώ δεν υπήρξε καμία σημαντική διαφορά στην ποσοτικά

ex vivo

σήματα. Η αυξημένη

in vivo

φθορισμού σήμα που παράγεται από τα μοντέλα SOI σε σχέση με

ex vivo

σήμα μπορεί να οφείλεται σε χειρουργικές επιπλοκές, όπως τραύμα του ιστού σε αυτή την περιοχή προκαλώντας την επούλωση τραυμάτων. Το τραύμα στη θέση της χειρουργικής έγχυσης ήταν ακόμη παρούσα κατά τον χρόνο της απεικόνισης φθορισμού, η οποία μπορεί να έχουν αυξημένη φθορίζουσες ιδιότητες σε σύγκριση με ανεπηρέαστη ιστό. Ανεξάρτητα,

in vivo

φθορισμού απεικόνισης του μοντέλου USGI ήταν ανώτερη σε SOI, καθώς η ποσοτικά

in vivo

σήμα ήταν ισοδύναμη με την

ex vivo

σήμα που λαμβάνεται από το πάγκρεας . Κατά την 24 hr χρονικό σημείο μετά την έγχυση στοχευμένων φθορίζοντος ανιχνευτή, παρατηρήθηκε ένα χαμηλό επίπεδο φθορισμού στα νεφρά, σπλήνα, καρδιά και τους πνεύμονες. Ωστόσο, το μοντέλο SOI είχαν σημαντικά μεγαλύτερο σήμα, σ & lt? 0.002, σε αυτούς τους ιστούς σε σύγκριση με USGI. Αυτό πιθανόν να οφείλεται στο αυξημένο μετάσταση από ξενομοσχεύματα που παράγεται από SOI σε σχέση με USGI στο ίδιο χρονικό σημείο μετά την έγχυση των κυττάρων (2 εβδομάδες). Με βάση τη μέση ποσότητα της κακοήθειας σε σχέση με το φυσιολογικό ιστό του παγκρέατος, όπως καθορίζεται από τον παθολογοανατόμο (Πίνακας 1), τα 2 μέθοδοι έδωσαν σχεδόν ίση τύποι κακοήθειας? με μέσο όρο 85% κυτταρική, 11% στρωματικά και 4% νεκρωτικές συστατικά. Ως εκ τούτου, έχουμε αποδείξει ότι ορθοτοπική παγκρεατικού ξενομεταμόσχευση όγκου από USGI είναι εφικτή και συγκρίσιμα με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με SOI.

Δεδομένου ότι οι αρχικές φάσεις της μελέτης χρησιμοποιήθηκε ορθοκολικού καρκίνου, κύτταρα δύο ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές παγκρέατος, MiaPaCa-2 και