Αφηρημένο

Για να εξερευνήσετε την αποδοτική αξιοποίηση των φυτικών πόρων από τεχνητών υγροτόπων, των πιθανών αντι-μεταστατικές επιδράσεις των φλαβονοειδών από το

Potamogeton crispus

L. διερευνήθηκαν σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (ES-2). Δύο σημαντικές φλαβονοειδή, λουτεολίνη-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη και flavone-6-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη, απομονώθηκαν από

P

.

crispus

και εντοπίστηκαν. Τα αποτελέσματα αυτών των φλαβονοειδών στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη μορφολογία των κυττάρων, του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση, και μετανάστευση κυττάρων και εισβολή στη συνέχεια διερευνήθηκαν. Επιπλέον, αντίστροφη μεταγραφάση πολυμεράσης δοκιμασίες αλυσιδωτής αντίδρασης και ανάλυση Western blotting πραγματοποιήθηκαν για να εξεταστεί το επίπεδο έκφρασης του mRNA και της πρωτεΐνης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι Luteolin-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη ανέστειλε ES-2 κυτταρική μετανάστευση και εισβολή και κατέστειλε την έκφραση δύο μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας (MMPs), ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9, και Flavone-6-Ο-β -D-γλυκοπυρανοσίδη δεν είχαν σημαντικά παρεμποδιστικά αποτελέσματα σε κύτταρα ES-2. Έτσι, αυτή η μελέτη κατέδειξε τις πιθανές αντι-μεταστατικές ιδιότητες του

P

.

crispus

φλαβονοειδών, και παρείχε μια επιστημονική προσέγγιση για τη διαλογή των πολλά υποσχόμενων φυσικών πόρων από τεχνητών υγροτόπων για τον εντοπισμό χρήσιμων προϊόντων για χρήση στη φαρμακευτική και υγειονομική περίθαλψη βιομηχανίες

Παράθεση:. Du Υ, Feng J , Wang Ε, Zhang Η, Liu J (2015) Επιδράσεις των φλαβονοειδών από το

Potamogeton crispus

L. για πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και εισβολή των ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 10 (6): e0130685. doi: 10.1371 /journal.pone.0130685

Επιμέλεια: Jung Weon Lee, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ, Δημοκρατία της Κορέας

Ελήφθη: 3η Φεβρουαρίου, 2015? Αποδεκτές: 24η Μαΐου 2015? Δημοσιεύθηκε: 22, Ιουνίου του 2015

Copyright: © 2015 Du et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή υποστηρίζεται οικονομικά από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 31200426), Εθνική Νερό Ειδικό Πρόγραμμα (Αρ 2012ZX07203-004), Επιστήμη και τεχνολογία Σχεδιασμού Έργου της επαρχίας Shandong (Αρ 2011GGH21605), και Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Shandong της Κίνας (No.ZR2014YL001). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Τα φυτά παίζουν καθοριστικό ρόλο στην κατασκευή της μηχανικής περιβάλλοντα υγρότοπο και θα πρέπει να αντιμετωπίζονται αυστηρά να διατηρούν την αποτελεσματικότητα των υγροτόπων, ελαχιστοποιώντας ταυτόχρονα τον κίνδυνο δευτερογενούς ρύπανσης και αρνητικές οικολογικές επιπτώσεις στο οικοσύστημα. Αποτελεσματική αξιοποίηση της υψηλής βιομάζας των φυτών των υγροτόπων πόρων είναι σημαντική, διότι ενθαρρύνει τη συγκομιδή και τη βιώσιμη διαχείριση των τεχνητών υγροτόπων.

Potamogeton crispus

L. είναι ένα από τα πιο σημαντικά φυτά που χρησιμοποιούνται στην κατασκευάστηκε υγροτοπικών οικοσυστημάτων [1]. Προηγούμενες εκθέσεις έχουν εντοπίσει τα καροτενοειδή, τα λιπαρά οξέα, λιγνανών, λαβδανίου διτερπενοειδή, φλαβονοειδή, και phytosterins στο

P

.

crispus

[2-5], και καροτενοειδών αποσπάσματα από

P

.

crispus

αναφέρθηκαν για να επάγει απόπτωση σε κύτταρα HeLa

in vitro

[6]. προκαταρκτική μελέτη μας έδειξε τις δραστηριότητες αντι-όγκου του

P

.

crispus

εκχύλισμα σε ανθρώπινο καρκίνο του μαστού και κυτταρικές σειρές των ωοθηκών [7], και χημικές αναλύσεις πρότεινε φλαβονοειδή είναι τα κύρια συστατικά του εκχυλίσματος.

Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι τα φλαβονοειδή έχουν μια μεγάλη γκάμα βιοχημικών δραστηριοτήτων και παίζουν σημαντικό ρόλο στη βιομηχανία υγείας για τον άνθρωπο [8-9]. Επιδημιολογικά και κλινικά δεδομένα υποδεικνύουν ότι η διαιτητική φλαβονοειδή κάνουν κρίσιμη συνεισφορές στην πρόληψη ή /και τη διαχείριση των χρόνιων ασθενειών όπως ο καρκίνος, ο διαβήτης, καρδιαγγειακά νοσήματα και της μόλυνσης από ανθρώπινο ιό ανοσοανεπάρκειας, [10-14]. Η πρόσφατη έρευνα για φλαβονοειδές ιδιότητες έχει επικεντρωθεί στην κυτταροτοξική δραστηριότητα κατά του όγκου τους, και πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ότι τα φλαβονοειδή καταστέλλουν τη μετανάστευση και την εισβολή, επηρεάζουν την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, και επάγουν απόπτωση σε αρκετές κυτταρικές σειρές όγκου [15-16].

μετάστασης του καρκίνου είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας σε ασθενείς με κακοήθεις όγκους, και εκτιμάται ότι είναι υπεύθυνη για το 90% των ανθρώπινων θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με [17]? Έτσι, παραμένει μια σημαντική πρόκληση για την θεραπεία του καρκίνου. Η αποδόμηση της εξωκυττάριας ουσίας (ECM) είναι ένα κρίσιμο χαρακτηριστικό των μεταστατικών όγκων και αυτή η διαδικασία που σχετίζεται με την υπερ-έκφραση μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας (MMPs) [18-19]. Έχει αναφερθεί ότι luteolin και βαϊκαλεΐνη φλαβονοειδή αναστέλλουν μετάσταση καταστέλλοντας την έκφραση και την έκκριση του ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 σε καρκινικά κύτταρα ανθρώπινου μαστού (MCF-7 και MDA-MB-231) κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος και (MHCC97H) [20-22] . Ωστόσο, δεν είναι σαφές αν τα φλαβονοειδή έχουν αντι-μεταστατικό επιδράσεις σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών.

Στην παρούσα μελέτη, καθαρίζεται δύο φλαβονοειδών από το

P

.

crispus

και εξέτασε τις επιπτώσεις τους στο ανθρώπινο καρκίνο των ωοθηκών ES-2 κυτταρική σειρά. Ο πολλαπλασιασμός, τη μορφολογία, την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση, μετανάστευση, και εισβολή αυτών των κυττάρων διερευνήθηκαν με στόχο την αποσαφήνιση των επιδράσεων του

P

.

crispus

φλαβονοειδών στα κύτταρα ES-2 και οι μηχανισμοί που εμπλέκονται.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Η έρευνα πεδίου και συλλογή δειγμάτων που εμπλέκονται σε αυτό το μελέτη διεξήχθησαν με την επίσημη άδεια του Γραφείου Περιβαλλοντικής Προστασίας των Weishan County και της Επιτροπής διαχείρισης του Xinxue ποταμού κατασκευάστηκε υγρότοπο. Η επιτόπια έρευνα δεν περιελάμβανε καμία απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη φυτών ή οποιοδήποτε είδος ζώου. Το πρωτόκολλο του εργαστηρίου εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Shandong.

Προετοιμασία του φυτικού υλικού

P

.

crispus

υλικό συλλέχθηκε στον ποταμό Xinxue κατασκευασμένο υγρότοπο (117,16 ° E, 34,78 ° N), σε Νάνσυ λίμνη, Weishan County, Κίνα. Η συλλογή διεξήχθη στις αρχές Ιουλίου, όταν

P

.

crispus

είχε τη μέγιστη βιομάζα. Το σύνολο των φυτών στέγνωσε, σε σκόνη, και εκχυλίζεται με αιθανόλη υπό θέρμανση αναρροής τρεις φορές, για 90 λεπτά ανά εκχύλιση. Το εκχύλισμα αιθανόλης στη συνέχεια εναιωρήθηκε σε νερό πριν τη στεγανοποίηση με πετρελαϊκό αιθέρα (ΡΕ), οξικό αιθυλεστέρα (EtOAc), και η-βουτανόλη διαδοχικά? αυτά συμπυκνώθηκαν υπό κενό για να δώσει ένα εκχύλισμα ΡΕ, ένα εκχύλισμα EtOAc, και ένα εκχύλισμα κ-βουτανόλη. Με βάση προηγούμενες μελέτες μας [7], επιλέχθηκε το εκχύλισμα EtOAc για περαιτέρω διαχωρισμό. Το εκχύλισμα EtOAc εχρωματογραφήθη επί στήλης πήγματος MCI, που ακολουθείται από LH-20 χρωματογραφία στήλης Sephadex, οι δύο κύριες ενώσεις στη συνέχεια παρασκευάζεται χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) (Agilent 6270, USA). Οι δύο ενώσεις ταυτοποιήθηκαν με HPLC, φασματοσκοπία πυρηνικού μαγνητικού συντονισμού (NMR) (AVANCE 600, Bruker, Germany), και φασματομετρία μάζας ιονισμού ηλεκτροψεκασμού υψηλής ανάλυσης (HR-ESI-MS) (LTQ Orbitrap XL, ThermoFisher, USA).

κυτταρική καλλιέργεια και θεραπεία

Η ανθρώπινη κυτταρική σειρά καρκίνου των ωοθηκών ES-2 ελήφθη από την ανάλυση και Κέντρο δοκιμών Shandong τον Αύγουστο του 2014. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (HyClone, USA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) (Gibco, Life Technologies, USA) και αντιβιοτικά (100 μg /mL πενικιλλίνη και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη) (HyClone). Οι κυτταρικές καλλιέργειες διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα με 5% CO

2. Οι ενώσεις διαλύθηκαν σε συγκέντρωση 0,1 Μ σε 100% διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) (Solarbio, Κίνα) για να σχηματίσουν διαλύματα αποθέματος, φυλαγμένο στους -20 ° C, και αραιώνεται με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις με το μέσο πριν από κάθε πείραμα. Η τελική συγκέντρωση DMSO δεν υπερέβη το 0,1% σε όλη την μελέτη, και όλες οι ομάδες ελέγχου εκτέθηκαν σε 0.1% DMSO.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δοκιμασία

Φλαβονοειδών αποτελέσματα επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την ΜΤΤ (θειαζολυλο μπλε βρωμιούχο τετραζόλιο) (Solarbio) δοκιμασία. ES κύτταρα-2 σπάρθηκαν (1 × 10

4 ανά φρεάτιο) σε μια πλάκα 96 φρεατίων σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% FBS. Μετά από ολονύκτια επώαση στους 37 ° C σε 5% CO

2, διαφορετικές συγκεντρώσεις (15 έως 240 μg /mL) των ενώσεων προστέθηκαν σε φρεάτια εις τριπλούν. Μετά από επώαση για 48 ώρες, ΜΤΤ προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο για να επιτευχθεί μια τελική συγκέντρωση 0.5 mg /mL και η επώαση πραγματοποιήθηκε για επιπλέον 4 ώρες. Το μέσο στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με το διάλυμα διακοπής (DMSO? 150 μL ανά φρεάτιο) και η απορρόφηση στα 490 nm μετρήθηκε με ένα μετρητή πλακιδίων (EnSpire, Perkin Elmer Corporation, USA). Οι έλεγχοι DMSO 0,1% μετρήθηκαν παράλληλα. Η κυτταροτοξικότητα εκφράζεται ως το ποσοστό αναστολής, η οποία υπολογίστηκε ως ακολούθως: όπου το Α

ελέγχου = η απορρόφηση των φρεατίων ελέγχου? Ένα

δείγματος = η απορρόφηση των φρεατίων αντιμετωπίζονται? Ένα

0 = η απορρόφηση τυφλά βυθίσματα. Προέλευση 7.5 λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των δεδομένων και τον υπολογισμό IC

50 αξίες. Οι δοκιμασίες επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές.

Παρατήρηση μορφολογία κυττάρων

ES-2 κύτταρα καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφεται για την δοκιμασία πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 30 ή 60 μg /mL λουτεολίνη-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3’O-GP) ή 100 μg /mL φλαβόνης-6-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP ). παρατηρήσεις μορφολογία των κυττάρων διεξήχθησαν μετά από επώαση για 48 ώρες, χρησιμοποιώντας ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού (Ti-S, Nikon, Ιαπωνία).

κυτταρικού κύκλου δοκιμασία εξέλιξης

ES-2 κύτταρα (5 × 10

4 ανά φρεάτιο) σπάρθηκαν σε 6-φρεατίων και επωάζονται όλη τη νύκτα στους 37 ° C σε 5% CO

2 πριν από την προσθήκη των υποδεικνυόμενων ενώσεων που παρασκευάστηκαν σε πλήρες μέσο για 48 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέγονται με θρυψινοποίηση, πλύθηκαν σε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο (PBS) και σταθεροποιήθηκαν σε 70% αιθανόλη στους 4 ° C για 2 ώρες. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με PBS, και φυγοκεντρήθηκαν στις 2000 rpm για 5 λεπτά? το υπερκείμενο απορρίφθηκε. Τα κύτταρα επανα-εναιωρήθηκαν σε 100 μL PBS που περιείχε RNAse (50 μg /mL) και επωάστηκε στους 37 ° C για 30 λεπτά? η αντίδραση στη συνέχεια διακόπηκε με την τοποθέτηση επί πάγου για 2 λεπτά. ES-2 κύτταρα χρωματίστηκαν με επώαση με 10 μg /mL ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) με 0.1% Triton Χ-100 στο σκοτάδι στους 4 ° C για 30 λεπτά. Τα δείγματα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (FACSAria, BD, ΗΠΑ) και τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με FlowJo 7.6.1.

κυτταρικής απόπτωσης δοκιμασία

Η αννεξίνη-V-PE /7-AAD κιτ ανίχνευσης απόπτωσης (BD Pharmingen, USA) χρησιμοποιήθηκε για τη διερεύνηση των επιδράσεων των ενώσεων δοκιμής επί της απόπτωσης σε κύτταρα ES-2. Αννεξίνης V είναι μια πρωτεΐνη που έχει υψηλή συγγένεια για φωσφατιδυλοσερίνη (PS). Κατά τη διάρκεια της απόπτωσης, η PS μετατοπίζεται από την εσωτερική όψη της μεμβράνης πλάσματος στην επιφάνεια του κυττάρου, όπου μπορεί να ανιχνευθεί με τη χρήση ενός φθορίζοντος συζυγούς αννεξίνης V. ES κύτταρα-2 καλλιεργήθηκαν και σπάρθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω για τη δοκιμασία εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου. Μετά την επώαση με το

P

.

crispus

φλαβονοειδή για 48 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν με θρυψινοποίηση, πλύθηκαν δύο φορές με PBS, και επαναιωρήθηκαν σε 400 μι ρυθμιστικού διαλύματος δέσμευσης, πριν από την προσθήκη 5 μί αννεξίνη V-ΡΕ, επώαση στο σκοτάδι στους 4 ° C για 15 λεπτά, και χρώση με 10 μL διαλύματος 7-AAD. Τα δείγματα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (FACSAria, BD) μετά από επώαση στο σκοτάδι στους 4 ° C για 15 λεπτά, και τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με FlowJo 7.6.1 λογισμικού. Αποπτωτικών και νεκρωτικών κυττάρων ταυτοποιήθηκαν με αννεξίνης V θετική /7-AAD αρνητική χρώση και αννεξίνης V θετική θετική χρώση /7-AAD, αντίστοιχα.

Η μετανάστευση των κυττάρων δοκιμασία

δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας Transwell θαλάμων (Corning Costar, USA) Ο θάλαμος Transwell γέμισε με λευκωματίνη ορού μέσο και 0,1% (BSA) (Gibco, Life Technologies) συμπεριλήφθηκε στο μέσο χωρίς ορό στον άνω θάλαμο, για να διατηρηθεί η οσμωτική πίεση. ES κύτταρα-2 εκτέθηκαν στις υποδεικνυόμενες φλαβονοειδές συγκεντρώσεις σε ένα μέσο χωρίς ορό για 48 ώρες πριν από την προσθήκη των κυττάρων (2 χ 10

5) στον άνω θάλαμο Transwell. Το κάτω θάλαμος περιείχε καλλιέργειας με 5% FBS για να χρησιμεύσει ως χημειο-προσελκυστικό. Οι θάλαμοι επωάστηκαν για 24 h και τα μη-μετανάστευση κυττάρων στην πάνω πλευρά της μεμβράνης Transwell απομακρύνθηκαν χρησιμοποιώντας μπατονέτες. Η μεμβράνη σταθεροποιήθηκε σε 100% μεθανόλη? τα μετανάστευσαν κύτταρα στη συνέχεια βάφτηκαν με 0.1% κρυσταλλικό ιώδες επί 10 λεπτά, και πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Η μεμβράνη φωτογραφήθηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο πριν πλυθεί με 33% οξικό οξύ? η απορρόφηση του μέσου έκλουσης μετρήθηκε στα 590 nm σε μια συσκευή ανάγνωσης πλάκας (EnSpire, Perkin Elmer Corporation).

Κυττάρων εισβολή δοκιμασία

κυττάρων εισβολή αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το πρωτόκολλο που περιγράφηκε παραπάνω για την κυτταρική μετανάστευση δοκιμασία, εκτός από το ότι ο θάλαμος Transwell επικαλύφθηκε με Matrigel (BD Pharmingen) και το μέσο ήταν ελεύθερο από BSA.

Απομόνωση ολικού RNA και αντίστροφη μεταγραφάση αντίδραση αλύσου πολυμεράσης (RT-PCR)

ES-2 κύτταρα σπάρθηκαν σε 6-φρεατίων (4 χ 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο) και επωάστηκαν για μία νύχτα πριν από την επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις LU3’O-GP (0, 30, 60, 90 μg /mL ) για 48 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με θρυψινοποίηση και πλύθηκαν σε PBS. Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Invitrogen, Life Technologies) και 5 mg χρησιμοποιήθηκε για να συνθέσει cDNA χρησιμοποιώντας τα M-MLV (Invitrogen, Life Technologies). Το cDNA ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες αλληλουχίες εκκινητή (BGI, Κίνα):

ΜΜΡ2, προς τα εμπρός, 5′-GTTCATTTGGCGGACTGT-3 ‘, αντίστροφη, 5′-AGGGTGCTGGCTGAGTAG-3’?

MMP9 , προς τα εμπρός, 5′-AATCTCACCGACAGGCAGCT-3 ‘, αντίστροφη, 5′-CCAAACTGGATGACGATGTC-3’?

γλυκεραλδεΰδη 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH), προς τα εμπρός, 5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGT-3 ‘, αντίστροφη, 5’ -CATGGGTGGAATCATATTGGAA-3 ‘

PCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρόγραμμα:. 95 ° C για 5 λεπτά? τότε 45 κύκλοι των 95 ° C για 10 s? 55 ° C για 15 s? και 72 ° C για 10 s. Τα δείγματα στη συνέχεια θερμάνθηκαν (72 ° C για 10 λεπτά) και ψύχθηκε στους 4 ° C. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης RNA. Τα προϊόντα PCR διαχωρίστηκαν σε πηκτές αγαρόζης 1% και ανιχνεύεται με χρώση βρωμιούχου αιθιδίου. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με BandScan5.0.

κηλίδωση Western ανάλυση

ES-2 κύτταρα σπάρθηκαν σε 6-φρεατίων (4 χ 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο) και επωάστηκαν όλη τη νύκτα πριν από τη θεραπεία με διάφορες συγκεντρώσεις LU3’O-GP (0, 30, 60, 90 μg /ml) για 48 ώρες. Τα κύτταρα αιωρήθηκαν σε 500 μι ρυθμιστικού διαλύματος λύσης στους 4 ° C (40 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 150 mM ΚΟΙ, 100 mM NaVo3, 1% Triton Χ-100, 1 mM PMSF, ρΗ 7.5). Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση θειικού δωδεκυλ-πολυακρυλαμιδίου 10% γέλη και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF. Οι μεμβράνες στη συνέχεια δεσμεύτηκαν χρησιμοποιώντας αποβουτυρωμένο γάλα σε 5% Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα με Tween-20 (TBST) στους 37 ° C για 1 ώρα και επωάστηκαν για μία νύχτα με πρωτεύοντα αντισώματα (ΜΜΡ-2 αντίσωμα: Santa Cruz Biotechnology, USA? ΜΜΡ-9 αντίσωμα: RabMab, Abcam, UK) σε TBST που περιείχε 5% αποβουτυρωμένο γάλα σε 4 ° C. Οι μεμβράνες στη συνέχεια επωάστηκαν με ένα δευτερεύον αντίσωμα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι ζώνες ανιχνεύθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια και φωτογραφήθηκαν? Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με το λογισμικό Image J.

Στατιστική ανάλυση

Για κάθε δοκιμασία, εις τριπλούν πειράματα πραγματοποιήθηκαν, και τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD). Η σημασία των διαφορών ομάδα εξετάστηκε χρησιμοποιώντας δύο-tailed t-test του Student (λογισμικό Microsoft Excel).

Αποτελέσματα

Αναγνώριση των δύο κύρια

P

.

crispus

φλαβονοειδή

HPLC, NMR, και HR-ESI-MS διεξήχθησαν για να απομονώσει και να εντοπίσει τις δύο κύριες ενώσεις εντός του

P

.

crispus

εκχύλισμα EtOAc. Αυτές οι ενώσεις ταυτοποιήθηκαν και χαρακτηρίστηκαν ως Luteolin-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3’O-GP) και Flavone-6-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP) με σύγκριση φασματικά δεδομένα τους (HPLC , HR-ESI-MS,

1 και

13C NMR) και φυσικοχημικές ιδιότητες με εκείνες που αναφέρονται στη βιβλιογραφία [23-25]. Αυτή είναι η πρώτη έκθεση της εξαγωγής αυτών των δύο φλαβονοειδών από το

P

.

crispus

. Η μοριακή δομή της δύο ενώσεις που φαίνεται στο σχήμα 1, και η καθαρότητα των δύο ενώσεων ήταν πάνω από 90% (Σχ Α και Β στο S1 File).

Η

LU3’O-GP ανέστειλε ES- 2 κυτταρικού πολλαπλασιασμού

ES-2 καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών επωάστηκαν για 48 ώρες με πέντε διαφορετικές συγκεντρώσεις LU3’O-GP ή FL6C-GP. Τα αποτελέσματα της δοκιμασίας ΜΤΤ έδειξε μία εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση μείωση στη βιωσιμότητα των κυττάρων υπό την παρουσία LU3’O-GP (Σχήμα 2). Η βιωσιμότητα των κυττάρων μειώθηκε κατά 63,8% και 73,6% μετά από 48 ώρες έκθεσης σε 120 και 240 μg /mL LU3’O-GP, αντίστοιχα, και το IC

50 τιμή ήταν 57,1 μg /mL. Οι ίδιες συγκεντρώσεις FL6C-GP είχαν σημαντικά χαμηλότερη επίπτωση στην βιωσιμότητα των κυττάρων και η ένωση αυτή είχε μια IC

50 αξία των 182,7 μg /mL. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι LU3’O-GP ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό κυττάρων ES-2 σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο

Τα κύτταρα επωάστηκαν με πέντε διαφορετικές συγκεντρώσεις φλαβονοειδών ή διμεθυλοσουλφοξείδιο. (DMSO? Έλεγχος) επί 48 ώρες. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τα μέσα του τριπλούν πειραμάτων ± τυπική απόκλιση (SD) *

σ

& lt? 0.01.

Η

LU3’O-GP επηρεάζονται ES-2 μορφολογία

Οι μορφολογικές εξετάσεις διεξήχθησαν για να διερευνήσει περαιτέρω την επίδραση της LU3’O-GP σε κύτταρα ES-2. Τα κύτταρα ES-2 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με συγκεντρώσεις LU3’O-GP που σχετίζονται με χαμηλή κυτταροτοξικότητα (30 και 60 μg /mL), ή 100 μg /mL FL6C-GP. Οι εικόνες που λαμβάνονται με ανεστραμμένο μικροσκόπιο μετά από επωάσεις 48 ωρών φαίνεται στο σχήμα 3. Ο έλεγχος και κύτταρα σύγκριση FL6C-GP έδειξε το κλασικό πρότυπο της ατράκτου των κυττάρων που παρατηρείται σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Τα κύτταρα κατεργασμένα με LU3’O-GP έδειξε σημαντική απώλεια της κινητικότητας και τις αλλαγές στην κυτταρική μορφολογία? η κύρια μορφολογική αλλαγή ήταν στο σχήμα cytomere, η οποία έγινε σφαιρικό, με μια συντομευμένη πλοκάμι. Αυτές οι αλλαγές πραγματοποιήθηκαν σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο. Η θεραπεία FL6C-GP δεν παρήγαγε σημαντική αλλαγή, σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι LU3’O-GP θα μπορούσε να αλλάξει την κυτταρική μορφολογία των κυττάρων ES-2 και πρότεινε δυνητική επιρροή της σχετικά με την κινητικότητα των κυττάρων.

ES-2 κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το υποδεικνυόμενο

P

.

crispus

φλαβονοειδή για 48 ώρες, και απεικονίζεται χρησιμοποιώντας ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού.

Η

προκαλείται από LU3’O-GP διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα ES-2

Για να καθορίσει εάν

P

.

crispus

φλαβονοειδή επηρεάζεται τον κυτταρικό κύκλο, ES-2 κύτταρα κατεργασμένα με είτε LU3’O-GP ή 100 μg /mL του FL6C-GP για σύγκριση, πριν από την ανάλυση με κυτταρομετρία ροής. Τα αποτελέσματα (Σχήμα 4) έδειξε ότι η θεραπεία LU3’O-GP προκάλεσε εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση αύξηση του αριθμού των κυττάρων σε φάση G0 /G1, και μειώσεις στον αριθμό των κυττάρων στην φάση S, ενώ θεραπεία FL6C-GP δεν είχε σημαντικές επιδράσεις στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα ES-2. Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι LU3’O-GP επηρεάζονται ES-2 εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου προκαλώντας διακοπή του κυτταρικού κύκλου στο όριο φάσης της φάσης G1 και S φάση

(α) Αρνητικός μάρτυρας.? (Β) κύτταρα κατεργασμένα με 100 μg /mL φλαβόνης-6-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP)? (Γ) κύτταρα κατεργασμένα με 30 μg /mL λουτεολίνη-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3’O-GP)? και κυττάρων (δ) κατεργασία με 60 μg /mL LU3’O-GP. Τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με αιθανόλη και βάφτηκαν με ιωδιούχο προπίδιο πριν από την ανάλυση κατανομής του κυτταρικού κύκλου με κυτταρομετρία ροής. Ο αριθμός των κυττάρων σε Ο0 /Ο1 φάση αντιπροσωπεύεται από την πρώτη κορυφή, και εκείνες στις G2 /M φάση αντιπροσωπεύονται από το δεύτερο κορυφής. Κύτταρα σε φάση S είναι παρόντες στην περιοχή μεταξύ της G0 /G1 και G2 /M κορυφές. Αυτά τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή των πειραμάτων εις τριπλούν. *

p & lt?

0,01 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

P

..

crispus

φλαβονοειδή δεν είχε καμία επίδραση επί της απόπτωσης σε κύτταρα ES-2

Η απόπτωση είναι μια ενεργός και φυσιολογική λειτουργία του κυτταρικού θανάτου που συνήθως αποκαθίσταται με αντικαρκινικούς παράγοντες. Η κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί εάν LU3’O-GP επηρεάζονται ES-2 απόπτωση. Όπως απεικονίζεται στο σχήμα 5, ο κυτταρικός πληθυσμός στη ζώνη Q3 αντιπροσωπεύεται τα αποπτωτικά κύτταρα, τα οποία ήταν Αννεξίνη V θετική και 7-AAD αρνητικά. Αυτός ο πληθυσμός δεν έδειξε καμία εμφανή αλλαγή στην παρουσία LU3’O-GP ή FL6C-GP, γεγονός που υποδηλώνει ότι

P

.

crispus

φλαβονοειδή δεν είχε καμία επίδραση επί της απόπτωσης σε κύτταρα ES-2

(α) Αρνητικός μάρτυρας.? (Β) κύτταρα κατεργασμένα με 100 μg /mL φλαβόνης-6-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP)? (Γ) κύτταρα κατεργασμένα με 30 μg /mL λουτεολίνη-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3’O-GP)? (Δ) κύτταρα κατεργασμένα με 60 μg /mL LU3’O-GP. Τα αποπτωτικά κύτταρα φαίνονται στο Q3.

Η

LU3’O-GP ανέστειλε τη μετανάστευση και την εισβολή του ES-2 κύτταρα

Η κυτταρική κινητικότητα θεωρείται ότι είναι ένας σημαντικός καθοριστικός παράγοντας του μεταστατικού δυναμικού των τα καρκινικά κύτταρα. Η επίδραση της LU3’O-GP για την κινητικότητα του ES-2 καρκινικά κύτταρα εξετάστηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία κυτταρική μετανάστευση. Όπως φαίνεται στο σχήμα 6, η μετανάστευση των κυττάρων ES-2 ήταν σημαντικά μειωμένη σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο μετά από έκθεση σε LU3’O-GP. Αυτή η αναστολή ήταν περίπου 67,7% και 88,1%, σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου, με την παρουσία των 30 και 60 μg /mL LU3’O-GP, αντίστοιχα. Τα κύτταρα κατεργασμένα με FL6C-GP δεν έδειξε σημαντική αλλαγή στην δραστηριότητα μετανάστευση, σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου.

Τα κύτταρα εκτέθηκαν στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις λουτεολίνη-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3 ‘ O-GP) και φλαβόνης-6-Ο-β-d-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP), και η μετανάστευση τους ποσοστώθηκε χρησιμοποιώντας ένα θάλαμο Transwell. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν το μέσο πειραμάτων εις τριπλούν. *

σ

& lt? 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο? #

σ

& lt? 0,05, σε σύγκριση με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση.

Η

Κατά τη διάρκεια της μετάστασης όγκου, τα κύτταρα πρέπει να περάσουν μέσα από το ECM. Για να αξιολογηθεί το κατά πόσον LU3’O-GP επηρεάζονται ES-2 εισβολή κυττάρων, δοκιμασίες κυτταρικής εισβολής διεξήχθησαν σε ένα θάλαμο Transwell επικαλυμμένο με Matrigel. Η κατεργασία των κυττάρων ES-2 με αυξανόμενες συγκεντρώσεις LU3’O-GP, οδήγησε σε σημαντική εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση μείωση στο ρυθμό εισβολή των κυττάρων, σε σύγκριση με τον έλεγχο (Σχήμα 7). Αυτή η διαδικασία ανεστάλη κατά περίπου 73,7% και 89,9%, παρουσία 30 και 60 μg /mL LU3’O-GP, αντίστοιχα, ενώ η αναστολή που επάγεται από 100 μg /mL FL6C-GP ήταν μόνο 6,7%. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης έδειξαν ότι LU3’O-GP ανέστειλε δραματικά την εισβολή των κυττάρων ES-2.

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με λουτεολίνη-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3’O-GP ) ή flavone-6-Ο-β-d-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP), και εισβολή τους ποσοτικοποιήθηκε σε μια μεμβράνη θάλαμο Transwell με Matrigel. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν το μέσο των πειραμάτων που πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. *

σ

& lt? 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο? #

σ

& lt? 0,05, σε σύγκριση με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση.

Η

Για να προσδιοριστεί περαιτέρω η επίδραση της LU3’O-GP για τα ανάντη παράγοντες που είναι σημαντικοί για τη ρύθμιση της εισβολής καρκινικών κυττάρων, το mRNA και η πρωτεΐνη έκφρασης ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 ερευνήθηκαν. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης RT-PCR που φαίνεται στο Σχ 8. Τα επίπεδα του ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 mRNAs μειώθηκαν κατά εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο με κατεργασία με LU3’O-GP, κηλίδωση Western ανάλυση (Σχήμα 9) έδειξε παρόμοια καταστολή της MMP- 2 (προ-ΜΜΡ2 και δραστικότητα ΜΜΡ-2) και ΜΜΡ-9 έκφραση πρωτεΐνης με LU3’O-GP. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η φλαβονοειδών, LU3’O-GP, κατέστειλε την έκφραση της ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 τόσο σε επίπεδο mRNA και πρωτεΐνης

(α) επιδράσεις LU3’O-GP στην έκφραση της ΜΜΡ-2.? (Β) επιπτώσεις LU3’O-GP για MMP-9 έκφρασης. mRNA επίπεδα ερευνήθηκαν με αντίστροφη αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μεταγραφάσης (RT-PCR), χρησιμοποιώντας γλυκεραλδεΰδη 3-φωσφορική αφυδρογονάση ως έλεγχος φόρτωσης. προϊόντα RT-PCR ανιχνεύθηκαν με χρώση βρωμιούχου αιθιδίου. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν το μέσο πειραμάτων εις τριπλούν. *

σ

& lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

(α) επιδράσεις LU3’O-GP για ΜΜΡ-2 (προ-ΜΜΡ-2 και δραστικότητα ΜΜΡ-2).? (Β) επιπτώσεις LU3’O-GP για MMP-9 έκφρασης. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ερευνήθηκαν με ανάλυση δυτικής boltting. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν το μέσο πειραμάτων εις τριπλούν. *

σ

& lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, δύο σημαντικά φλαβονοειδή, LU3’O-GP και FL6C-GP, απομονώθηκαν και ταυτοποιήθηκαν από

P

.

crispus

με στόχο τη διερεύνηση των πιθανών αντι-μεταστατική επιπτώσεις αυτής κατασκευάστηκε πόρων φυτό υγροτόπου. Η μετάσταση είναι η κύρια αιτία θανάτου σε ασθενείς με καρκίνο και η ανάπτυξη νέων θεραπευτικών αγωγών που αναστέλλουν διάδοση όγκου είναι ζωτικής σημασίας για την επιτυχή θεραπεία του καρκίνου και την πρόληψη. Ωστόσο, πιο ιδιαίτερα κυτταροτοξικά συνθετικά αντικαρκινικά φάρμακα έχουν μια χαμηλή ειδικότητα? Αυτό παράγει αποτελέσματα επί των φυσιολογικών ιστών, εκτός από τα καρκινικά κύτταρα, οδηγώντας σε κακή κλινική έκβαση. Ιδιαίτερη έμφαση έχει, ως εκ τούτου δόθηκε στον εντοπισμό νέων αντικαρκινικών παραγόντων από φυσικές πηγές, και βρώσιμα πόροι είναι ιδιαίτερα πολύτιμη λόγω της υψηλής περιθώριο ασφαλείας? πολλά φυσικά διαιτητικά παράγοντες είναι επί του παρόντος σε κλινικές δοκιμές πρώιμη φάση [26]. Τα φλαβονοειδή παρέχουν ένα από τα πιο σημαντικά τους φυσικούς πόρους στο πλαίσιο αυτό. Διαιτητικά φλαβονοειδή σχεδόν όλα υπάρχουν ως γλυκοζίτες στη φύση και τα πιο άφθονα φυτικά φλαβονοειδή γλυκοσίδια είναι flavone O /C-γλυκοζίτες και flavonol Ο-γλυκοζίτες [27].

LU3’O-GP είναι ένα flavone Ο-γλυκοζίτη και FL6C-GP είναι ένα flavone C-γλυκοζίτη. Ωστόσο, η παρούσα μελέτη έδειξε ότι LU3’O-GP παρήγαγε σημαντικές επιπτώσεις στο ES-2 πολλαπλασιασμό, τη μορφολογία, την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, τη μετανάστευση και την εισβολή, ενώ FL6C-GP δεν είχε εμφανείς επιδράσεις σε αυτά τα κύτταρα. Υποθέσαμε ότι αυτή η διαφορά σχετίζεται με δύο διαφορές μεταξύ αυτών των ενώσεων. Πρώτον, φλαβονοειδή άγλυκα μπορεί να παρουσιάζουν διαφορετικά βιοδραστηριοτήτων. έχουν Luteolin, οι αγλυκόνες των LU3’O-GP, και μερικές λουτεολίνη C-γλυκοζίτες δειχθεί ότι αναστέλλει την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση σε διάφορους ανθρώπινους επιθηλιοειδή καρκινικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων MCF-7, MDA-ΜΒ231 και κύτταρα LNM35 [21, 28- 29]. Δεύτερον, οι φλαβονοειδείς γλυκοζίτες είναι πολύ υδατοδιαλυτά να διαχέονται διαμέσου της κυτταρικής μεμβράνης, ενώ οι αγλυκόνες είναι πιο υδρόφοβα και μπορούν εύκολα να εισέλθουν τα κύτταρα με παθητική διάχυση? απογλυκοσυλίωση των φλαβονοειδών γλυκοζιτών άγλυκα τους, ως εκ τούτου θεωρείται ότι είναι το πρώτο στάδιο του μεταβολισμού, παράγει αποτελέσματα

in vivo

[30]. Επομένως, διαφορετικές ομάδες σακχάρου συνδεδεμένο με φλαβονοειδών αγλυκόνες θα μπορούσε να επηρεάσει την απογλυκοζυλίωση και το μεταβολισμό τους, σε κάποιο βαθμό και οδηγεί σε διαφορές μεταξύ βιοδραστικότητα [31]. Στην παρούσα μελέτη, LU3’O-GP δεν προκάλεσε απόπτωση σε κύτταρα ES-2, αν και λουτεολίνη προηγουμένως αναφέρθηκε ότι διεγείρει απόπτωση σε μερικές ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα και σε κύτταρα νευροβλαστώματος ποντικού [32-33]. Έτσι, τα αποτελέσματα μας μπορεί επίσης να παρέχει αποδείξεις για φλαβονοειδών παραλλαγή γλυκοζυλίωσης που σχετίζονται με δραστηριότητα.

Ωστόσο, είναι πιθανό ότι τα αποτελέσματα της γλυκοζυλίωσης επί φλαβονοειδών βιοδραστικότητα

σε vitr

o μπορεί να διαφέρουν από αυτά που παρατηρήθηκαν

in vivo

. Οι φλαβονοειδείς γλυκοζίτες έχουν αναφερθεί ότι εμφανίζουν παρόμοια ή ακόμη μεγαλύτερη αντι-διαβητικό, αντι-φλεγμονώδη, αντι-αποκοκκοποιήσεως, αντι-στρες, και αντι-αλλεργία δραστηριότητες από φλαβονοειδείς αγλυκόνες τους

in vivo

[31]. Συνολικά, είναι πολύ δύσκολο να εξαχθούν γενικά συμπεράσματα σχετικά με την επίδραση της γλυκοζυλίωσης σε φλαβονοειδή βιοδραστικότητες και απαιτείται περαιτέρω έρευνα για να κατανοήσουμε τη σχέση μεταξύ των φλαβονοειδών γλυκοζυλίωση και βιοδραστικότητα

in vivo

και

in vitro

.

ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 είναι κρίσιμα ένζυμα τα οποία θεωρούνται ότι είναι σημαντικοί συνεισφέροντες στις διαδικασίες επεμβατική μετάσταση και την αγγειογένεση σε διάφορους όγκους [34-37]. Τα επίπεδα έκφρασης ΜΜΡ-2 ΜΜΡ-9 και σημαντικά αυξημένα σε μια σειρά από καρκινώματα [36, 38]. Ως εκ τούτου, η αναστολή της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 έκφραση θα πρέπει να είναι υψηλή προτεραιότητα κατά τη διάρκεια της θεραπείας του καρκίνου. Στην παρούσα μελέτη, τα κύτταρα ES-2 υποβλήθηκαν σε αγωγή με LU3’O-GP σε συγκεντρώσεις που σχετίζονται με χαμηλή κυτταροτοξικότητα, προκειμένου να αξιολογηθεί η αντι-μεταστατική δράση αυτής της ένωσης, και μια δοκιμασία απόπτωσης διεξήχθη επίσης. Αυτά τα ευρήματα έδειξαν ότι LU3’O-GP ανέστειλε σημαντικά ES-2 κυτταρική μετανάστευση και εισβολή και αυτά τα αποτελέσματα ήταν στενά σχετιζόμενη με καταστολή της έκφρασης της ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε mRNA και το επίπεδο πρωτείνης απουσία των κυτταροτοξικών ή αποπτωτικά αποτελέσματα. Επιπλέον, δεδομένου ότι η μεταστατική εξάπλωση των κυττάρων όγκων είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων που περιλαμβάνει μια σειρά πολύπλοκων φυσιολογικών γεγονότων, ΜΜΡ-2 και την έκφραση ΜΜΡ-9 ρυθμίζεται από ένα πολύπλοκο δίκτυο από μονοπάτια σηματοδότησης που μπορεί να ενεργοποιηθεί από μια σειρά ανάπτυξης παράγοντες, κυτοκίνες, και χημικές ουσίες όπως ΡΙ3Κ /Akt, p38-ΜΑΡΚ, ΝΡ-κΒ, EGFR, ERK1 /2, και ΤΡΑ, ενεργώντας μέσω ενός αριθμού οδών, όπως το μονοπάτι ΜΑΡΚ /ΕΚΚ [39-45]. Αυτό δείχνει ότι οι μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω μετάσταση μπορεί να είναι ειδικά για διαφορετικούς τύπους κυττάρου όγκου. Το διαυγές LU3’O-GP-επαγόμενη αναστολή της ES-2 μετάσταση πρέπει επομένως να διερευνηθεί σε άλλους τύπους κυττάρου όγκου.

P

.

crispus

είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο είδος στην τεχνητών υγροτόπων και θα πρέπει να συλλέγονται την κατάλληλη στιγμή για να διατηρηθεί η αποτελεσματική απομάκρυνση των ρύπων και για την αποφυγή δευτερογενών ρύπανση και τις αρνητικές οικολογικές επιπτώσεις. Η μεγάλη ποσότητα των

P

.

crispus

βιομάζα μπορεί να κάνει τις διαδικασίες μετά τη συγκομιδή προκλητική. Τα φυσικά προϊόντα και τα φυτικά φάρμακα υποσχόμενες πηγές νέων θεραπευτικών παραγόντων για την βιομηχανία υγείας για τον άνθρωπο [46]. Σε αυτή τη μελέτη, τα φλαβονοειδή με αντι-μεταστατική δραστηριότητα απομονώθηκαν από

P

.

crispus

, δείχνουν ότι το είδος είχε πιθανά οφέλη για την υγεία. Η μελέτη μας παρείχε μια επιστημονική βάση για τον έλεγχο των πολλά υποσχόμενων φυσικών πόρων ως πηγές των φαρμάκων και πρότεινε μια πιθανή προσέγγιση για την αποτελεσματική και βιώσιμη χρήση των φυτικών πόρων σε τεχνητών υγροτόπων.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 αρχείου. υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) ανάλυση των δύο φλαβονοειδή απομονωθεί από

P

.

crispus

.

Luteolin-3′-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (LU3’O-GP) (Εικ α). flavone-6-Ο-β-D-γλυκοπυρανοσίδη (FL6C-GP) (Εικ β). Η HPLC χρησιμοποιείται μια στήλη Agela C18 (συμμετρία R 4.6 χ 250 mm) με μεθανόλη και H

2O (40%: 60%) ως κινητή φάση, σε μία ταχύτητα ροής 1 ml /min για 40 λεπτά και χρησιμοποιήθηκε . UV ανίχνευση /V

doi: 10.1371 /journal.pone.0130685.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες για την ακαδημαϊκή συντάκτης και τους κριτικούς για την πολύτιμη τους υποδείξεις. Θέλουμε επίσης να ευχαριστήσουμε τους επαγγελματίες συντάκτες του Editage για τα αγγλικά επεξεργασία τους.