Αφηρημένο

Ιστορικό

Συστατικώς ενεργές παραλλαγές υποδοχέα ανδρογόνων (AR-V) λείπει το πεδίο σύνδεσης συνδετήρα (LBD) μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη του ευνουχισμού ανθεκτικών καρκίνου του προστάτη (CRPC). Η έκφραση του AR-Vs στην κλινικά πιο σημαντική μεταστατική θέση, το οστό, έχει, ωστόσο, δεν είναι καλά τεκμηριωμένη. Ο στόχος μας ήταν να γίνει σύγκριση των επιπέδων του AR-Vs σε ορμόνη-naive (ΗΝ) και CRPC οστικές μεταστάσεις, σε σύγκριση με τον κύριο υπολογιστή και μη κακοήθη ιστό προστάτη, καθώς επίσης και σε σχέση με την AR έκφραση πρωτεΐνης, το πλήρες γονιδίωμα προφίλ μεταγραφής και δείγματα της επιβίωσης των ασθενών.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

ορμόνη-αφελή (n = 10) και CRPC οστικές μεταστάσεις (n = 30) ελήφθησαν από 40 ασθενείς σε χειρουργική επέμβαση μετάσταση. Μη-κακοήθεις και κακοήθεις δείγματα προστάτη αποκτήθηκαν από 13 προστατεκτομή άνδρες. Επίπεδα πλήρους μήκους AR (ARfl) και AR-Vs ονομάζεται AR-V1, AR-V7, και AR-V567es mRNA μετρήθηκαν με RT-PCR και προφίλ μεταγραφή ολόκληρου του γονιδιώματος με μία συστοιχία Illumina Beadchip. Τα επίπεδα πρωτεΐνης εξετάστηκαν με κηλίδωση Western και ανοσοϊστοχημεία. Μεταγραφές για ARfl, AR-V1, και AR-V7 ανιχνεύθηκαν στους περισσότερους πρωτογενείς όγκους και μεταστάσεις, και τα επίπεδα αυξήθηκαν σημαντικά σε CRPC οστικές μεταστάσεις. Η μεταγραφή AR-V567es ανιχνεύθηκε στο 23% μόνο των CRPC οστικές μεταστάσεις. Μια υπο-ομάδα CRPC οστικές μεταστάσεις εξέφρασε LBD-κομμένων πρωτεϊνών AR σε επίπεδα συγκρίσιμα με την ARfl. Ανιχνεύσιμα AR-V567es και /ή AR-V7 mRNA στο ανώτερο τεταρτημόριο, φαίνεται στο 1/3 όλων των CRPC οστικές μεταστάσεις, συνδέθηκε με μια υψηλή βαθμολογία πυρηνικής AR ανοσοχρώση, διαταραχή στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και σύντομο επιβίωση.

Συμπεράσματα /Σημασία

η έκφραση του AR-Vs είναι αυξημένη σε σύγκριση με CRPC HN οστικές μεταστάσεις, και συνδέεται με μια ιδιαίτερα κακή πρόγνωση. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να ελέγξετε αν οι ασθενείς εκφράζουν τέτοιες AR-Vs στις οστικές μεταστάσεις τους να επωφεληθούν περισσότερο από φάρμακα που δρουν στο ή κατάντη αυτών AR-Vs παρά από τις θεραπείες που αναστέλλουν τη σύνθεση των ανδρογόνων

Παράθεση:. Hornberg Ε, Ylitalo EB, Crnalic S, Antti Η Stattin P, Widmark A, et al. (2011) Έκφραση των ανδρογόνων υποδοχέων Splice Παραλλαγές σε καρκίνο του προστάτη οστικές μεταστάσεις συνδέεται με Ευνουχισμός-Αντίσταση και Short επιβίωσης. PLoS ONE 6 (4): e19059. doi: 10.1371 /journal.pone.0019059

Επιμέλεια: Παύλος Dent, Βιρτζίνια Πανεπιστήμιο της Κοινοπολιτείας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25, Φεβ, 2011? Αποδεκτές: 23, Μάρ, 2011? Δημοσιεύθηκε: 28 Απρίλη 2011

Copyright: © 2011 Hornberg et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από τη σουηδική Εταιρεία Καρκίνου, το σουηδικό Συμβούλιο Έρευνας, το Ίδρυμα Έρευνας Καρκίνου Lions, και το Ίδρυμα Βόρειας Σουηδίας Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Τα ανδρογόνα ρυθμίζουν τη φυσιολογική ανάπτυξη των ιστών του προστάτη και της διαφοροποίησης, μέσω της ενεργοποίησης των ανδρογόνων υποδοχέων σε επιθηλιακά κύτταρα και στρώμα, και επίσης να διαδραματίσουν σημαντικό ρόλο κατά τη διάρκεια όλων των φάσεων του καρκίνου του προστάτη (PC) ανάπτυξη. Η καθιερωμένη θεραπεία για ασθενείς με προχωρημένο PC είναι, κατά συνέπεια, για τη μείωση των ανδρογόνων, είτε με χειρουργική ή ιατρική ευνουχισμό. Μετά από μια περίοδο αρχικής όγκων διαγραφής τελικά υποτροπιάζουν, κυρίως μέσα στο οστό, και στη συνέχεια ονομάζονται ευνουχισμός ανθεκτικά PC (CRPC). Οι μηχανισμοί που ελέγχουν CRPC ανάπτυξης σε μεταστάσεις στα οστά είναι, ωστόσο, σε μεγάλο βαθμό άγνωστη και σπάνια διερευνηθεί από πραγματικά εξέταση τέτοιων μεταστάσεων σε ασθενείς.

Είναι ενδιαφέρον ότι, ο υποδοχέας ανδρογόνου (AR) είναι συνήθως ενεργή σε CRPC παρά επίπεδα ευνουχισμού τεστοστερόνης κυκλοφορούντος [1 ], [2] και έντονη ανοσοχρώση πυρηνικών AR σε CRPC οστικές μεταστάσεις σχετίζεται με μία ιδιαίτερα μικρή επιβίωση [3]. Διαφορετικές μηχανισμοί έχουν προταθεί για να συμβάλει στην ενεργοποίηση AR σε CRPC, συμπεριλαμβανομένης της σύνθεσης intracrine των ανδρογόνων, γενετικές και επιγενετικές μεταβολές του AR καθιστά πιο ευαίσθητα σε ενεργοποίηση από ανδρογόνα ή άλλα προσδέματα [1], [4], [5] και το έκφραση μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές (AR-V, βλέπε παρακάτω). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι CRPC μπορούσε να αντιμετωπιστεί επιτυχώς με τις νέες ουσίες, τώρα σε κλινικές δοκιμές που μπλοκάρουν την σύνθεση ανδρογόνων ή AR σε μεταστάσεις (που επισκοπείται στο [6]), αλλά ότι ουσιαστικά δραστική υποδοχείς θα μπορούσε ακόμα να είναι ένα πρόβλημα. Ως εκ τούτου, οι μελέτες για να διερευνήσει αν αυτά AR-Vs συνήθως εκφράζονται σε CRPC οστικές μεταστάσεις ή όχι.

Δομικά η ανθρώπινη

AR

γονίδιο αποτελείται από οκτώ εξόνια που κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη 110 kDa που αποτελείται από α

2 τομείς τρανς-ενεργοποιήσεως ΝΗ τερματικό (NTD), μια περιοχή δέσμευσης DNA (DBD), μια περιοχή άρθρωσης, και η τελική περιοχή COOH (CTD) η οποία είναι επίσης η περιοχή δέσμευσης συνδέτη (LBD) [7]. Το LBD, που κωδικοποιείται από τα εξόνια 4-8, δεν είναι απαραίτητη για την μεταγραφική δραστηριότητα [8]. Κολοβωμένα AR-Vs λείπει η LBD και προτείνεται να είναι συστατικώς οι δραστικές υποδοχείς έχουν ανιχνευθεί σε κυτταρικές σειρές PC καθώς και σε κλινικά δείγματα, συμπεριλαμβανομένων καλοήθη, κακοήθη και μεταστατικά ιστού, όπως προκύπτει από εναλλακτικό μάτισμα ή μη-νόημα μεταλλάξεις του ανθρώπινου

AR

γονίδιο [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]. Αυξημένα επίπεδα των παραλλαγών ματίσματος AR έχουν ανιχνευθεί σε CRPC σε σύγκριση με ορμόνες αφελή (ΗΝ) PC [13], [14], [16]. Οι μελέτες αυτές περιλαμβάνονται δείγματα CRPC που λαμβάνονται από πρωτογενείς όγκους σε χειρουργική επέμβαση, ή μεταστάσεις μαλακών ιστών και μερικά οστικές μεταστάσεις που συλλέγονται κατά την αυτοψία. Η έκφραση του AR-Vs στον κλινικά πιο σχετικό μεταστατική εντόπιση, το οστό, δεν έχει τεκμηριωθεί καλά.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν, επομένως, να αναλυθεί η έκφραση της πλήρους μήκους AR (ARfl) και κλινικά της πιο άφθονα παραλλαγές ματίσματος εδώ ονομάζεται AR-V1, AR-V7 [14] (που αναφέρεται επίσης ως AR3 [13], [17], και AR-V567es [16] σε ΗΝ και CRPC οστικές μεταστάσεις σε σύγκριση με την έκφραση σε πρωτογενή PC και σε μη κακοήθη ιστό του προστάτη. Επιπλέον, τα επίπεδα μεταγραφής AR είχαν σχέση με AR έκφραση της πρωτεΐνης, τα προφίλ μεταγραφής ολόκληρου γονιδιώματος και την κλινική έκβαση.

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική ηθική επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Umea και οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή ή προφορική συγκατάθεση.

ασθενείς

Οι οστικές μεταστάσεις ελήφθησαν από μια σειρά φρέσκων-κατεψυγμένων και φορμόλη σταθερό παραφίνη ενσωματωμένο βιοψίες που ελήφθησαν από ασθενείς με τον υπολογιστή σε λειτουργία για μεταστατική συμπίεση του νωτιαίου μυελού ή παθολογικά κατάγματα στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Umea (2003-2009). Αυτές οι ασθενείς έχουν περιγραφεί λεπτομερώς στο [3] και τα κλινικά χαρακτηριστικά και θεραπείες συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η μελέτη περιλαμβάνει επίσης 13 ασθενείς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ριζική προστατεκτομή στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Umea, μεταξύ Φλεβάρη του 2005 και Σεπτέμβριο του 2006. Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 60 έτη (εύρος 48-68 έτη) και διάμεση τιμή του PSA ήταν 6.6 ng /ml (εύρος 3,5 έως 24 ng /ml). Έντεκα από τους ασθενείς είχαν όγκους κατατάσσονται ως αποτέλεσμα Gleason (GS) 7 και δύο ως GS 8. Τέσσερις από τους όγκους ήταν στο στάδιο Τ2 και εννέα στο στάδιο Τ3. Αμέσως μετά την χειρουργική αφαίρεση των προστάτες έφεραν στο τμήμα Παθολογίας και κομμένα σε 0,5 εκατοστά χοντρές φέτες. Από αυτά τα 20 δείγματα φέτες τρυπήθηκαν από κάθε προστάτη χρησιμοποιώντας ένα χαλύβδινο κύλινδρο 0,5 cm και καταψύχθηκαν σε -70 ° C εντός 30 λεπτών μετά τη χειρουργική επέμβαση. Οι φέτες του προστάτη στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε 4% φορμαλδεΰδη για 24 ώρες, αφυδατώνονται, εγκλείστηκαν σε παραφίνη, κόβονται σε 5 τμήματα πάχους μικρόν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη-ηωσίνη. Η φύση των κατεψυγμένων δειγμάτων ιστών (μη κακοήθεις ή κακοήθεις) προσδιορίστηκε με τη θέση τους στις τομές ολόκληρο-mount, αλλά επαλήθευσε επίσης με μικροσκοπία φωτός της αιματοξυλίνης τμήμα κρυοστάτη /ηωσίνη-χρωματίζονται από καθένα από τα δείγματα ιστού αναλύθηκαν όπως περιγράφεται παρακάτω . Σε αυτά τα τμήματα το ποσοστό του ιστού του όγκου ήταν ποσοτικά και ο όγκος GS καθοριστεί.

Η

Η παρασκευή του ιστού και του RNA εξόρυξη

Εκπρόσωπος περιοχές οστικών μεταστάσεων, πρωτογενείς PC και μη κακοήθη ιστό του προστάτη ήταν κρυο-τομές σε σωλήνες εκχύλισης και RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το πρωτόκολλο ΤπζοΙ (Invitrogen, Στοκχόλμη, Σουηδία). Το ποσοστό των κυττάρων του όγκου στα δείγματα κυμαινόταν μεταξύ 25-95%. Οι συγκεντρώσεις RNA προσδιορίστηκαν ποσοτικά με μετρήσεις απορρόφησης χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο (ND-1000 φασματοφωτόμετρο? NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, DE). Η ποιότητα του RNA αναλύθηκε με το 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) και επαληθεύεται να έχει έναν αριθμό ακεραιότητα του RNA ≥6.

Real time RT-PCR

Δύο- εκατό (200) ng του RNA μεταγράφηκαν αντιστράφηκαν με Superscript II αντίστροφη μεταγραφάση (Invitrogen) σε συνολικό όγκο 10 μΙ. Η επακόλουθη ενίσχυση PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το Biorad iQ5 iCycler (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Οι αντιδράσεις έγιναν σε ένα όγκο 20 μΐ χρησιμοποιώντας το IQ SYBR Green Supermix (εργαστήρια Bio-Rad). Οι ακόλουθες ομάδες εκκινητών χρησιμοποιήθηκαν? ARfl: 5′-CCATCTTGTCGTCTTCGGAAATGTTATGAAGC-3 ‘και 5′-AGCTTCTGGGTTGTCTCCTCAGTGG-3′, AR-V1: 5’-CCATCTTGTCGTCTTCGGAAATGTTATGAAGC-3 ‘και 5′-CTGTTGTGGATGAGCAGCTGAGAGTCT-3′, AR-V7: 5’-CCATCTTGTCGTCTTCGGAAATGTTATGAAGC-3 ‘και 5’-TTTGAATGAGGCAAGTCAGCCTTTCT-3 ‘, και AR-V567es: 5′- CCAAGGCCTTGCCTGATTGC και 5′-TTGGGCACTTGCACAGAGAT-3′, οδηγώντας σε αμπλικόνια 143, 145, αντίστοιχα 125 bp, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14], [16]. Εκκινητές για το γονίδιο οικοκυρική RPL13A (5’-GTACGCTGTGAAGGCATCAA-3 ‘και 5′-GTTGGTGTTCATCCGCTTG-3’) ενίσχυσε ένα τμήμα των 125 bp. Κάθε δείγμα εις διπλούν και προσαρμόζονται για τα αντίστοιχα επίπεδα RPL13A. Ανάλυση καμπύλης τήξης επιβεβαίωσε τα ενισχυμένα προϊόντα, τα οποία αναλύθηκαν επίσης με ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης 1% για την επιβεβαίωση της αναμενόμενο μέγεθος (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Western ανάλυση κηλίδος

Καταψυγμένα οστικών μεταστάσεων και δείγματα προστάτη κρυο-τομές και οι πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από 20 τμήματα (10 μm το κάθε ένα) με χρήση του κιτ AllPrep Mini, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Qiagen, Hilden, Germany). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με τη δοκιμασία πρωτεΐνης BCA (Pierce Chemical Co., IL, USA). 22RW1 κύτταρα διατηρήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (ATCC) και οι πρωτεΐνες εκχυλίσθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18].

Δείγματα (20 μg πρωτεΐνης) διαχωρίστηκαν με 7.5 SDS-PAGE υπό αναγωγικές συνθήκες και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Immobilon-P, Millipore, Billerica, ΜΑ). Οι μεμβράνες βάφτηκαν με Ponceau κόκκινο για να επιβεβαιωθεί ίση δείγμα φόρτωσης και μεταφοράς (τα αποτελέσματα δεν φαίνονται). Οι μεμβράνες στη συνέχεια δεσμεύθηκαν σε 5% γάλα που ακολουθείται από επωάσεις αντίσωμα αντι-AR? Ν-20 (αραιωμένο 1:500, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ή PG-21 (αραιωμένο 1:1000, Upstate, Lake Placid, ΝΥ) για την ανίχνευση της ARfl και AR-Vs, και C-19 (Santa Cruz) με σκοπό την ανίχνευση ARfl αλλά όχι Ar-Vs λείπει το LBD. Πρωτογενή αντισώματα αραιώθηκαν σε 1% γάλα /PBST και επωάστηκαν σε 4 ° C όλη τη νύχτα. Η δευτερεύουσα IgG αντι-κουνελιού (Dako, Glostrup, Denmark) αντίσωμα (αραιώθηκαν 1:20 000 σε 2,5% γάλα) εφαρμόστηκε μετά το πλύσιμο σε PBST και επωάστηκαν για 1 ώρα σε RT. έκφραση της πρωτεΐνης οπτικοποιήθηκε μετά από εκτεταμένη πλύση χρησιμοποιώντας το Advanced κιτ ανίχνευσης ECL (GE Healthcare, Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο) και ποσοτικά με ένα σαρωτή ChemiDoc και την Ποσότητα One 4 λογισμικού (Bio-Rad Laboratories).

Ανοσοϊστοχημεία

Οι οστικές μεταστάσεις εξετάστηκαν σε αυτήν την μελέτη έχουν προηγουμένως ανοσοβαφή για το AR, Κί67 (πολλαπλασιασμό των κυττάρων), ενεργοποιημένα κασπάσης 3 (αποπτωτικά κύτταρα) και αντιγόνα PSA (Πίνακας 2) ακολουθώντας τα πρωτόκολλα που περιγράφονται πριν από την [3]. Πυρηνική AR και κυτταροπλασματική ανοσοχρώση PSA βαθμολογήθηκαν ανάλογα με την ένταση (0, 1, 2, ή 3) και το κλάσμα των βαμμένων κυττάρων (0, 1, 2, 3, ή 4). Μια συνολική βαθμολογία (που κυμαίνονται 0-12) λήφθηκε πολλαπλασιάζοντας τις βαθμολογίες έντασης χρώσης και του κλάσματος. Μία συνολική βαθμολογία AR 8 ή παραπάνω (διάμεσος και παραπάνω) προηγουμένως ορίζεται ως υψηλό και βρέθηκε να συνδέεται με μια βραχύτερη επιβίωση μετά από ορθοπεδική επέμβαση μετάσταση από ένα AR συνολική βαθμολογία κάτω από το 8 [3]. Ένα σκορ PSA από 8 και κάτω (μέση και κάτω) συνδέθηκε με μια δυσμενή έκβαση σε CRPC ασθενείς [3]. Τα κλάσματα (%) του Κί67 και την ενεργό κασπάση 3 βάφονται τα καρκινικά κύτταρα είχαν προηγουμένως καθοριστεί και διαπιστώθηκε ότι δεν πρέπει να συνδέεται με το αποτέλεσμα σε αυτό το υλικό των ασθενών [3].

Η ανάλυση

Η γονιδιακή έκφραση

διακόσια-πενήντα (250) ng του συνολικού RNA ανά δείγμα χρησιμοποιήθηκε για την παραγωγή cRNA από το κιτ ενίσχυσης RNA Illumina TotalPrep (Ambion Inc, St. Austin, TX, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που παρέχονται. Η ποιότητα του cRNA αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ RNA 6000 pico (Agilent Technologies) και την Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies). Ένα σύνολο 750 ng cRNA χρησιμοποιήθηκε για υβριδοποίηση σε ένα HT12-V3 συστοιχία έκφραση ανθρώπινου γονιδίου Illumina Beadchip (Illumina, San Diego, CA, USA), συμπεριλαμβανομένων των 48.803 καθετήρες και 37.846 σχολιασμένα γονίδια, σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Οι συστοιχίες σαρώθηκαν και τα σήματα φθορισμού που λαμβάνεται με τη χρήση της Illumina Bead Array Reader (Illumina, San Diego, CA, USA). ανάλυση των δεδομένων Array έγινε με το λογισμικό GenomeStudio (έκδοση 2009.1, Illumina). Τα δείγματα κανονικοποιήθηκαν από την κυβική spline αλγόριθμο και ανιχνευτές με όλα τα σήματα κάτω από δύο φορές τα μέσα επίπεδα υποβάθρου εξαιρέθηκαν από την ανάλυση. Διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια ταυτοποιήθηκαν με το Mann-Whitney διαφορική αλγόριθμος έκφραση (

P

& lt? 0,05) και ορίζεται να έχει μια πτυχή αλλαγή σε-μεταξύ των ομάδων μεγαλύτερο από 1,5. γονιδιακή ανάλυση οντολογία έγινε με το λογισμικό Metacore (GeneGoInc. Αγίου Ιωσήφ, ΜΙ, USA).

Η στατιστική ανάλυση

Οι συσχετίσεις μεταξύ των μεταβλητών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ κατάταξης Spearman. Ομάδες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U για τις συνεχείς μεταβλητές και το Chi-square test για τις μεταβλητές κατηγοριών. ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier διεξήχθη με το θάνατο του υπολογιστή ως εκδήλωση και ο χρόνος παρακολούθησης καθώς ο χρόνος μεταξύ χειρουργική επέμβαση μετάσταση και την τελευταία εξέταση παρακολούθησης. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου για τις Κοινωνικές Επιστήμες, το λογισμικό SPSS 17.0 (SPSS, Inc, Chicago, USA). Μια τιμή Ρ μικρότερη ή ίση με 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Υψηλά επίπεδα mRNA των παραλλαγών AR ματίσματος σε CRPC οστικές μεταστάσεις

Οι μεταγραφές για την κανονική ARfl και τα πιο άφθονα παραλλαγές ματίσματος AR γνωστές μέχρι σήμερα [16]? AR-V1, AR-V7, και AR-V567es, ανιχνεύθηκαν και τα επίπεδα τους να ποσοτικοποιηθούν σε μη κακοήθη και GS7-8 τμήματα ιστού των πρωτογενών όγκων του προστάτη και σε οστικές μεταστάσεις δείγματα, χρησιμοποιώντας σε πραγματικό χρόνο ανάλυση RT-PCR. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, οι ARfl, AR-V1, και AR-V7 μεταγραφές ανιχνεύτηκαν στα περισσότερα από τα μη-κακοήθη, πρωτογενούς όγκου, και τα δείγματα μεταστάσεις εξετάστηκαν, ενώ η μεταγραφή AR-V567es ανιχνεύθηκε σε 7 (23%) της CRPC οστικές μεταστάσεις μόνο. ​​

η

υπήρχε μια τάση για υψηλότερα επίπεδα ARfl, AR-V1, και AR-V7 mRNA σε οστικές μεταστάσεις ΠΝ από ό, τι στην πρωτοβάθμια ιστό PC, αλλά οι διαφορές ήταν μη σημαντική (Σχήμα 1). Είναι σαφές ότι τα επίπεδα μεταγραφής αυξημένα ARfl, AR-V1 και AR-V7 ήταν ωστόσο φαίνεται στα CRPC οστικές μεταστάσεις, η οποία έδειξε 8, 44, αντίστοιχα, 120 φορές υψηλότερη διάμεση επίπεδα από τις μεταστάσεις HN (

P

≤0.001, Εικόνα 1). Το ARfl, AR-V1, και AR-V7 mRNA επίπεδα στα μη κακοήθη δείγματα προστάτη ήταν συγκρίσιμα με τα επίπεδα στους όγκους πρωτογενή προστάτη (Σχήμα 1).

Όλα τα επίπεδα mRNA προσαρμόστηκαν για αντίστοιχου γονιδίου housekeeping ( RPL13a) επίπεδα mRNA, ομαλοποιούνται στη μέση τιμή για τα βασικά δείγματα όγκων, και να μετατραπεί από το φυσικό λογάριθμο. Επίπεδα σε μη κακοήθη ιστό προστάτη (

n

= 13), πρωτοπαθούς όγκου του προστάτη (

n

= 13), ορμόνη-αφελή οστικές μεταστάσεις (

n

= 10) , και ο ευνουχισμός ανθεκτικά οστικές μεταστάσεις (

n

= 30) τα δείγματα που παρουσιάζονται σε λευκό, ανοιχτό γκρι, σκούρο γκρι και μαύρο, αντίστοιχα. Μη ανιχνεύσιμα επίπεδα δεν αναφέρονται, αλλά εκπροσωπείται από κίονες που συμβολίζει το χαμηλότερο μετρήσιμο επίπεδο στην ανάλυση RT-PCR της κάθε παραλλαγής μεταγραφής.

Η

Η έκφραση των παραλλαγών πρωτεΐνης AR LBD-περικοπεί στο CRPC οστικές μεταστάσεις

επίπεδα Πρωτεΐνες του AR-Vs εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western των 13 δειγμάτων του CRPC οστικών μεταστάσεων που επιλέγονται τυχαία να εκπροσωπήσει τις περιπτώσεις με τα υψηλά επίπεδα AR-V7 mRNA (επίπεδα στο ανώτερο τεταρτημόριο, Q4), θήκες με χαμηλά και ενδιάμεσα επίπεδα του AR-V7 mRNA (επίπεδα στο χαμηλότερο? Q1, και τα ενδιάμεσα? Q2-Q3, τεταρτημόρια αντίστοιχα), καθώς και ανιχνεύσιμη /μη-ανιχνεύσιμα επίπεδα του AR-V567es mRNA (Σχήμα 2). Η κυτταρική σειρά 22Rv1 γνωστό ότι εκφράζουν την παραλλαγή AR-V7 [13], αλλά επίσης και πρόσθετες παραλλαγές ματίσματος [15] χρησίμευσε ως θετικός έλεγχος. Ένα βασικό δείγμα του προστάτη με μη ανιχνεύσιμο AR-V7 mRNA χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος (Σχήμα 2). μπάντες πρωτεΐνης με το αναμενόμενο μοριακό βάρος των περίπου 110 kDa (ARfl) και 80 kDa (presumingly AR-V1, AR-V7 ή -V567es) ανιχνεύθηκαν σε CRPC οστικές μεταστάσεις, με αντισώματα που στοχεύουν το Ν-τερματικό πεδίο του AR, ενώ η 80 kDa AR-Vs δεν ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας το αντίσωμα που στοχεύει το C-τερματικό πεδίο LBD (Σχήμα 2Α). Οι πιο έντονες ζώνες 80 kDa ανιχνεύθηκαν σε δείγματα με επίπεδα Q4 AR-V7 mRNA, ενώ CRPC οστικές μεταστάσεις, με χαμηλότερα επίπεδα AR-V7 mRNA έδειξε χαμηλότερα σε μη ανιχνεύσιμα επίπεδα, ανεξάρτητα από τα αντίστοιχα επίπεδα AR-V567es mRNA (Σχήμα 2Β). Με βάση την ένταση των κηλίδος, οι παραλλαγμένες πρωτεΐνες AR συσταθεί στο μεσαίο 32% του επιπέδου της πρωτεΐνης ARfl (εύρος 0 έως 95%,

n

= 13, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτό ήταν σε αντίθεση με το αντίστοιχο αναλογίες σχετικά με το επίπεδο του RNA, όπου το AR-V7 και AR-V567 μεταγραφές εκπροσωπούνται στο μεσαίο μόνο 0,4% (εύρος 0,03 έως 7%, τα δεδομένα δεν φαίνονται) και 1,0% (εύρος 0,3 έως 1,2%, τα δεδομένα δεν φαίνεται), αντίστοιχα, του επιπέδου mRNA ARfl, σύμφωνα με την διαφορά στα επίπεδα ct RT-PCR. έτσι τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι AR-Vs έλλειψη του πεδίου LBD είναι δυνατές μετα-μεταγραφικά σταθεροποιηθεί σε CRPC οστικές μεταστάσεις σε σχέση με την ARfl

Α) Αντισώματα (Ν-20 και PG-21) με στόχο την Ν-. τερματικό πεδίο (NTD) του AR ανίχνευσε τις ARfl και AR παραλλαγές (AR-V? presumingly AR-V1, AR-V7, και /ή AR-V567es). Αντίσωμα C-19 που στοχεύουν στην LBD ανίχνευσε την ARfl του -110 kDa, αλλά όχι τα LBD-συντετμημένες παραλλαγές AR περίπου ~ 80 kDa. Β) Ανάλυση του CRPC οστικών μεταστάσεων που αντιπροσωπεύουν τα δείγματα με υψηλά επίπεδα AR-V7 mRNA (επίπεδα στο υψηλότερο τεταρτημόριο, Q4, σύμφωνα με την ανάλυση RT-PCR), καθώς και τα δείγματα με επίπεδα AR-V7 mRNA στο Q1, Q2, και Q3, με τη χρήση του αντισώματος Ν-20. 22Rv1 εκχύλισμα κυττάρων χρησίμευσε ως θετικός μάρτυρας για ARfl και -80 παραλλαγές kDa AR και ένα δείγμα πρωτοπαθούς καρκίνου του προστάτη (Ρ) χρησίμευσε ως αρνητικός μάρτυρας για τις παραλλαγές AR.

Η

Η έκφραση του AR-V7 και AR- V567es mRNA συνδέεται με πτωχή πρόγνωση

το AR-V1, AR-V7, και ARfl mRNA επίπεδα συσχετίστηκαν σε όλα τα δείγματα που εξετάστηκαν (τα δεδομένα δεν φαίνονται,

n

= 66) και η υπο-ομάδα των οστικών μεταστάσεων CRPC (AR-V1 εναντίον AR-V7?

Rs

= 0,91,

P

& lt? 0.001, AR-V1 εναντίον ARfl?

Rs

= 0.47,

P

& lt? 0,01, και AR-V7 εναντίον ARfl?

Rs

= 0.58,

P

& lt? 0.001,

n

= 30). οστικές μεταστάσεις, με ανιχνεύσιμα AR V567es-mRNA είχε περίπου 3 φορές υψηλότερη ARfl επίπεδο μεσαίο mRNA από τα άλλα CRPC μεταστάσεις (

P

= 0,004).

Οι ασθενείς με επίπεδα AR-V7 mRNA στο Q4 είχαν σημαντικά μικρότερη ειδική για τον καρκίνο επιβίωση μετά την επέμβαση μετάσταση από τα άλλα CRPC ασθενείς και ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε για τους ασθενείς με ανιχνεύσιμα επίπεδα του AR-V567es σε σύγκριση με τις υπόλοιπες (Σχήμα 3Α-Β). Δέκα ασθενείς με οστικές μεταστάσεις CRPC είτε περιλαμβάνονται στο AR-V7 Q4 υπο-ομάδα και /ή είχαν ανιχνεύσιμα επίπεδα του AR-V567es, και αναφέρονται περαιτέρω ως υψηλής ασθενείς AR-V. Οι υψηλές ασθενείς AR-V είχαν διάμεσο χρόνο επιβίωσης μετά την επέμβαση μετάσταση του μόνο 2 μήνες, όπως σε σύγκριση με 8 μήνες για την υπόλοιπο των CRPC ασθενείς (Σχήμα 3C). Δεν βρέθηκε κάποια σχέση μεταξύ ARfl ή επίπεδα και επιβίωση μετά τη χειρουργική επέμβαση μετάσταση (τα δεδομένα δεν φαίνονται) AR-V1 mRNA.

Οι ασθενείς με Α) AR-V7 [14] τα επίπεδα mRNA στο υψηλότερο τεταρτημόριο (Q4), Β ) ανιχνεύσιμο AR-V567es [16] τα επίπεδα του mRNA, και Γ) ανιχνεύσιμο AR-V567 ή /και AR-V7 Q4 (AR-V υψηλή) επίπεδα mRNA είχαν μικρότερη επιβίωση από άλλους ασθενείς με νόσο CRPC.

Η

μεταστάσεις με τα υψηλά επίπεδα των παραλλαγών AR ματίσματος δείχνουν έντονη ανοσοχρώση πυρηνική AR

Όπως έχουμε διαπιστώσει στο παρελθόν ότι τα αποτελέσματα ανοσοχρώση υψηλής AR συνδέθηκαν με ένα ιδιαίτερα σύντομο επιβίωσης μετά την επέμβαση μετάσταση και τώρα αυτό το AR-V υψηλής ασθενείς είχε μια κακή πρόγνωση, θελήσαμε να εξετάσουμε αν η βαθμολογία χρώση υψηλής AR συσχετίστηκε με τα επίπεδα του AR-Vs. Οι AR-V υψηλής μεταστάσεις είχε όλα βαθμολογίες χρώσης υψηλής AR σε σύγκριση με άλλες CRPC μεταστάσεις στα οστά η οποία έδειξε μεταβλητής χρώση κυμαίνεται από αδύναμη να ισχυρή (Πίνακας 2,

P

= 0,02).

Επιπλέον , AR-V υψηλής μεταστάσεις έδειξαν σημαντικά χαμηλότερη βαθμολογία PSA ανοσοχρώση (Πίνακας 2,

P

= 0,038) και τις τάσεις του έχουν υψηλότερα κλάσματα πολλαπλασιαζόμενων επιθηλιακών κυττάρων και αποπτωτικών όγκου (

P

= 0.12 και

P

= 0.085, αντίστοιχα) σε σχέση με άλλες CRPC μεταστάσεις (Πίνακας 2).

έκφραση παραλλαγών ματίσματος AR σχετίζεται με διαταραγμένη

έλεγχο του κυτταρικού κύκλου

Το προφίλ γονιδιακής έκφρασης του η υπο-ομάδα των AR-V μεταστάσεις υψηλή οστική συγκρίθηκε με το προφίλ των άλλων CRPC οστικές μεταστάσεις, με τη χρήση ενός Illumina με βάση σειρά cDNA συμπεριλαμβανομένων των 48.803 γονιδίων ανιχνευτές. Περίπου 17.700 ανιχνευτές ορίστηκαν να δώσει σήματα πάνω από το υπόβαθρο στις οστικές μεταστάσεις PC. Εκατόν ενενήντα πέντε (195) ανιχνευτές που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ των AR-V μεταστάσεις υψηλής οστών και άλλες οστικές μεταστάσεις CRPC σύμφωνα με μια πολλαπλή μεταβολή τουλάχιστον 1,5-μεταξύ ομάδων (

P

& lt? 0.05) και περιλαμβάνεται περαιτέρω στην ανάλυση οντολογία για την αξιολόγηση των εμπλουτισμένο διαδικασιών. Πολλοί (60) της διαφοροποίησης γονιδιακά προϊόντα προτάθηκαν να αλληλεπιδρούν απευθείας μέσω του AR, C-MYC, και πρωτεΐνες CDK1 (Σχήμα 4 και Πίνακας S1). C-myc και CDK1 είναι δύο βασικούς ρυθμιστές του κυτταρικού κύκλου και, κατά συνέπεια, το top 5 εμπλουτισμένα δίκτυα διαδικασία βρεθεί σε μεταστάσεις AR-V υψηλής οστών ήταν? Κύτταρο Πυρήνας του κύκλου, τη φάση του κύκλου των κυττάρων S, κυτταρικού κύκλου Μίτωση, Κυτταροσκελετού μικροσωληνίσκων της ατράκτου και του κύκλου των κυττάρων G2-M. C-MYC και CDK1 είναι επίσης παράγοντες προ-επιβίωσης αναστολής της απόπτωσης και επιπλέον βρήκαμε αυξημένα επίπεδα μεταγραφής των αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών survivin και BCL2L12 στο AR-V υψηλό σε σύγκριση με τις άλλες CRPC οστικές μεταστάσεις (Σχήμα 4). Αξιοσημείωτα, όμως, τα επίπεδα των άλλων βασικών ρυθμιστές της απόπτωσης, όπως οι υποδοχείς θανάτου, ΒΑΧ, BCL2, και κασπασών δεν ήταν αλλάξει σημαντικά και, επιπλέον, τα δίκτυα διαδικασία σχετική με απόπτωση δεν εμπλουτίστηκαν σημαντικά δεδομένα μας (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αρκετές μεταγραφές γονίδιο που είναι γνωστό ότι ρυθμίζονται θετικά από το AR βρέθηκαν σε υψηλά επίπεδα στα AR-V υψηλής μεταστάσεις, όπως CDK1, CYCLINA2, HSP27, C-MYC, UGT2B17, CDC20, UBE2C, ενώ άλλες, όπως η KLK3 (PSA) , KLK2, NKX3-1, FKBP5 και TMPRSS2 δεν ήταν (Σχήμα 4).

Κόκκινο κύκλοι δείχνουν υψηλότερα και μπλε κύκλοι δείχνουν χαμηλότερα επίπεδα μεταγραφής του AR-V υψηλό από ό, τι σε άλλες CRPC οστικές μεταστάσεις. Σημειώστε ότι πολλά από τα διαφοροποίηση των προϊόντων του γονιδίου είναι άμεσα αλληλεπιδρούν μέσω AR, c-myc και CDK1.

Η

Συζήτηση

Αυτό το έγγραφο περιγράφει, για πρώτη φορά, το πρότυπο έκφρασης του LBD-περικοπεί ματίσματος AR παραλλαγές AR-V1, AR-V7 [14] και AR-V567es [16] σε οστικές μεταστάσεις PC σε ασθενείς και, επιπλέον, ότι τα επίπεδα αυτών των παραλλαγών είναι αυξημένα σε CRPC οστικές μεταστάσεις και ότι η έκφραση του AR -V567es ή /και πολύ υψηλά επίπεδα του AR-V7 βρίσκεται σε άτομα με ιδιαίτερα κακή πρόγνωση.

Πολλά δομικά διαφορετικά, ουσιαστικά δραστική AR-Vs έχουν εντοπιστεί μέχρι στιγμής σε κλινικά δείγματα PC [10], [11], [13], [14], [16], [17], και εμείς εδώ δείχνουν τον εμπλουτισμό των παραλλαγών AR ματίσματος LBD-περικοπεί σε οστικές μεταστάσεις PC. Σε αντίθεση με τον Ήλιο και τους συναδέλφους, οι οποίοι βρήκαν το AR-V567es να είναι η παραλλαγή πιο άφθονο ματίσματος που εξετάστηκαν [16], βρήκαμε το AR-V7 να είναι πιο συχνά εκφράζεται από το AR-V567es στην CRPC. Αυτή η διαφορά θα μπορούσε ενδεχομένως να εξηγηθεί τεχνικά από διαφορετικές ευαισθησίες των RT-PCR τεχνικές που χρησιμοποιούνται, αλλά θα μπορούσε ενδεχομένως να αντανακλούν επίσης ετερογενειών σε παραλλαγή έκφρασης AR συναρμογής μεταξύ διαφορετικών προελεύσεων ιστού, όπως εξετάσαμε CRPC στα οστά, ενώ Sun et al περιλαμβάνονται CRPC από διάφορες θέσεις. Μπορούμε επίσης σημαντικό σημειωθεί ότι πολλά από τα εξετάστηκαν οστικές μεταστάσεις CRPC (AR-V υψηλής περιπτώσεις) εκφράζεται LBD-κολοβωμένες πρωτεΐνες AR σε επίπεδα συγκρίσιμα με τα επίπεδα της πρωτεΐνης ARfl, ακόμη και αν τα αντίστοιχα προϊόντα μετεγγραφής παραλλαγή AR βρέθηκαν σε σχετικά πολύ χαμηλότερα επίπεδα από το ARfl mRNA. Μια μετα-μεταγραφική σταθεροποίηση των παραλλαγών ματίσματος AR σε σχέση με την ARfl σε επιλεκτική CRPC οστικές μεταστάσεις Είναι συνεπώς εύλογο, αν και ο μηχανισμός για αυτό δεν είναι γνωστός.

Η κακή πρόγνωση των ασθενών με μεταστάσεις CRPC εκφράζουν το AR- V567es ή /και τα υψηλά επίπεδα του AR-V7 μεταγραφές είναι πιθανόν να σχετίζονται με την υποτεθεί συστατική δραστικότητα αυτών των παραλλαγών. Η AR-V567es περιέχει την αλληλουχία πυρήνα εντοπισμού (NLS) της περιοχής άρθρωσης στο εξώνιο 4 [16] και την AR-V7, σε αντίθεση με AR-V1, έχουν προταθεί για να περιέχει ένα NLS στην κρυπτικό εξόνιο του [14]. Κατά συνέπεια, η AR-V7 και AR-V567es έχουν δείξει να μετατοπίζεται μέσα στον πυρήνα, προσδένονται σε AR στοιχεία απόκρισης, και την ενεργοποίηση /μεταγραφή του γονιδίου καταστέλλουν

in vitro

χωρίς την ανάγκη για δέσμευση συνδέτη [14], [ ,,,0],16], [17]. Είναι ενδιαφέρον, Watson και συν-εργαζόμενος έδειξαν πρόσφατα μια στιγμιαία αύξηση των επιπέδων AR-V7 και AR-V1 mRNA σε μοντέλα ξενομοσχεύματος για PC μετά τον ευνουχισμό, καθώς επίσης και μια μείωση μετά ανδρογόνου συμπλήρωση, υποδεικνύοντας ότι ορισμένοι AR-Vs μπορεί να ρυθμίζεται άμεσα από ανδρογόνων και έτσι πιθανώς προκαλείται σε ασθενείς αμέσως μετά τη θεραπεία ευνουχισμό [17]. Είναι δελεαστικό να υποθέσουμε ότι αυτά και άλλα AR-Vs θα επιλεγούν για να κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του ευνουχισμού ανθεκτική νόσο και με τον τρόπο αυτό να συμβάλει στην υποτροπή από θεραπείες που αποσκοπούν στη μείωση των επιπέδων στεροειδών ή συνδετήρα σύνδεση με την κανονική AR. Επομένως, βρήκαμε υψηλότερα επίπεδα των παραλλαγών ματίσματος AR σε CRPC ό, τι στην ΗΝ οστικές μεταστάσεις. Οι μεταγραφές AR-V1 και AR-V7 ήταν ωστόσο ανιχνεύθηκε επίσης σε ένα σημαντικό μέρος των μη κακοήθων και κακοήθων ρίζα δείγματα προστατεκτομή, αν και σε χαμηλότερο επίπεδο σε σχέση με τις οστικές μεταστάσεις, και άλλοι έχουν δείξει ότι τα επίπεδα του AR-V7 ( AR3) σε πρωτογενείς όγκους του προστάτη ήταν προβλέψιμο για το αποτέλεσμα μετά από ριζική προστατεκτομή, με μικρότερο χρόνο σε χημικούς υποτροπής σε άτομα με υψηλότερα επίπεδα [13], [14]. Ο λόγος για αυτό δεν είναι γνωστός, αλλά δείχνει ότι ουσιαστικώς δραστικής AR-Vs μπορούσε να είναι μέρος της κανονικής φυσιολογίας του προστάτη και ότι μια επιλογή αυτών των παραλλαγών συμβαίνει κατά τη διάρκεια της εξέλιξης PC.

Ο εμπλουτισμός των δομικά διαφορετικές, ουσιαστικά δραστική AR-Vs κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του CRPC μεταστάσεων επισημαίνει πολύπλοκη και ετερογενή μοριακά γεγονότα τα οποία από τη διαφορά σημαίνει φαίνεται να εξασφαλίσει την ενεργοποίηση AR απουσία των όρχεων ανδρογόνων. Οι ασθενείς που εκφράζουν συστατικώς δραστική AR-Vs θα σε μακροπρόθεσμη πιθανότατα δεν επωφελούνται από αντι-ανδρογόνο θεραπείες με στόχο τη μείωση στεροειδή σύνθεση, όπως ο χειρουργικός ευνουχισμός, LHRH ανάλογα, ή την νεοεισαχθείσα αμπιρατερόνη παράγοντα που αναστέλλει CYP17 και ως εκ τούτου στεροειδών σύνθεση όχι μόνο σε όρχεις, αλλά και στα επινεφρίδια και στον ιστό του όγκου [19], [20]. Παραδόξως, ο ανταγωνιστής MDV3100 νέα AR στοχεύουν στην LBD του ARfl και επί του παρόντος σε κλινικές δοκιμές για CRPC [21], [22] βρέθηκαν να αναστέλλουν ευνουχισμό ανθεκτικά ανάπτυξη που προκαλείται από την έκφραση συστατικής AR-V7 σε ένα ζωικό μοντέλο για PC [17]. Αυτό είναι ενθαρρυντικό ως ανταγωνιστές μυθιστόρημα AR αναστολή μετατόπιση του υποδοχέα μέσα στον πυρήνα έτσι μπορεί να έχει θεραπευτικά αποτελέσματα επίσης σε ασθενείς που εκφράζουν μόνιμα ενεργό AR-Vs. Δεν είναι όλοι οι CRPC οι ασθενείς ωστόσο ανταποκρίνονται στις αμπιρατερόνη και MDV3100 φάρμακα, ακόμα και εκείνοι που στη συνέχεια υποτροπιάζουν μέσα σε λίγους μήνες [20], [22]. Εάν αυτό το είδος αντίστασης θεραπεία σχετίζεται με την έκφραση του ουσιαστικώς δραστικής AR-Vs σε οστικές μεταστάσεις (ο πρωταρχικός στόχος για την θεραπεία) αυτή τη στιγμή δεν είναι γνωστό και δεν μπορεί να προσδιοριστεί μέχρι κλινικές μελέτες αρχίζει να περιλαμβάνουν βιοψίες από μεταστάσεις στα οστά. Επιπλέον, πρέπει να αναπτυχθούν [23], [24] θεραπευτικούς παράγοντες αναστέλλουν εκείνα τα AR-Vs ή των αποτελεσμάτων κάτω-ροή τους. Μια άλλη πιθανή εξήγηση για την αντίσταση στη θεραπεία ευνουχισμός είναι η παρουσία του AR αρνητικά κύτταρα όγκου και έτσι AR by-pass κατά την διάρκεια της προόδου του όγκου [25]. Πλήρης έλλειψη έκφρασης AR βρίσκεται μόνο σε μια μικρή υπο-πληθυσμού των CRPC οστικές μεταστάσεις, αλλά AR αρνητικά καρκινικά κύτταρα διάσπαρτα ανάμεσα στο θετικό βρίσκονται στα περισσότερα CRPC οστικές μεταστάσεις [3], και έτσι έμφαση η ανάγκη και για θεραπείες δεν στηρίζεται μόνο σε μια λειτουργική AR.

στα κλινικά δείγματα που εξετάστηκαν στην παρούσα μελέτη, ανιχνεύσιμα επίπεδα του AR-V567es ή /και τα υψηλά επίπεδα των μεταγραφών AR-V7 συσχετίστηκαν με την απορυθμισμένη επίπεδα γνωστών γονιδίων AR-ελεγχόμενη , αλλά συγκεκριμένα όχι μερικών κλασικών ανδρογόνων ρυθμιζόμενα γονίδια όπως KLK3 (PSA), TMPRSS2 και FKBP5 που επάγονται από την υπερβολική έκφραση των AR-V7 ή AR-V567es σε LNCaP κύτταρα

in vitro

[14] , [16]. Κατά συνέπεια, τα AR-V υψηλής περιπτώσεις έδειξαν λιγότερο PSA ανοσοχρώση από άλλες CRPC μεταστάσεις. Αντ ‘αυτού βρήκαμε τα επίπεδα μεταγραφής γονιδίων που διαφοροποιούνται AR-V μεταστάσεις υψηλή οστική από άλλες οστικές μεταστάσεις CRPC υποδεικνύοντας υψηλή δραστικότητα c-myc και CDK1, και ένα διαταραγμένο έλεγχο του κυτταρικού κύκλου για G1-S, καθώς και τη μετάβαση G2-M, παρά τη μη σημαντική αύξηση στην επισήμανση Κί67. Η ανάπτυξη των CRPC έχει χαρακτηριστεί από μια μη ισορροπημένη αναλογία πολλαπλασιασμό απόπτωση και αντοχή σε αποπτωτικά ερεθίσματα [26], [27]. Σε προχωρημένο στάδιο της νόσου που εξετάζονται στην παρούσα μελέτη δεν το κάναμε, ωστόσο, με λίγες εξαιρέσεις, να βρούμε σαφείς ενδείξεις αλλαγμένη έκφραση των γονιδίων της απόπτωσης-ρύθμιση ή την περαιτέρω απορρύθμιση της αποπτωτική διαδικασία στο AR-V υψηλό σε σχέση με άλλες CRPC οστικές μεταστάσεις. Με βάση τα δεδομένα μας, δεν είμαστε σε θέση να διακρίνουν αν το διαταραγμένο έλεγχο του κυτταρικού κύκλου που βρέθηκε τις AR-V μεταστάσεις υψηλή οστική αληθινά σχετίζεται με την έκφραση του AR-Vs, το ARfl, ή απλά συνδέεται με την ιδιαίτερα προχωρημένη νόσο σε αυτές οι CRPC περιπτώσεις.