Αφηρημένο

Ιστορικό

Η ταυτοποίηση και ο χαρακτηρισμός των καρκινικών βλαστικών κυττάρων (ΚΕΠ) είναι επιτακτική ανάγκη για την κατανόηση του μηχανισμού της παθογένειας του καρκίνου. Καλλιέργεια στοιχεία δείχνουν ότι ΚΕΠ παίζουν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου. Ωστόσο, η διαμάχη υπάρχει ως προς το αν ΚΕΠ προκύπτουν από κύτταρα που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDCs).

Μεθοδολογία και ΚΥΡΙΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Στην παρούσα μελέτη, η-νιτροζοδιαιθυλαμίνη (DEN) χρησιμοποιήθηκε για την πρόκληση σχηματισμό όγκων σε θηλυκά ποντίκια που έλαβαν μυελού των οστών από αρσενικά ποντίκια. σχηματισμός όγκου προκλήθηκε σε 20/26 ποντίκια, συμπεριλαμβανομένων 12 όγκους ήπατος, 6 όγκων του πνεύμονα, 1 όγκου κύστης και 1 ρινοφαρυγγικού όγκου. Μέσω σύγκρισης του φθορισμού

in situ

υβριδισμού (FISH) οδηγεί σε αντίστοιχες περιοχές από σειριακές τομές όγκων χρωματίστηκαν με Η &? Ε, διαπιστώσαμε ότι BMDCs προσελήφθησαν τόσο ιστού όγκου και φυσιολογικό περιβάλλοντα ιστό σε πολύ χαμηλή συχνότητα ( 0.2-1% σε όγκους και 0-0.3% σε φυσιολογικούς ιστούς). Ωστόσο, περίπου 3-70% των κυττάρων στους ιστούς που περιβάλλουν τον όγκο ήταν BMDCs, και το ποσοστό των BMDCs ήταν ιδιαίτερα σχετίζεται με τη φλεγμονώδη κατάσταση του ιστού. Στην παρούσα μελέτη, δεν βρέθηκαν στοιχεία που να υποστηρίζουν την ύπαρξη των κυττάρων σύντηξης που σχηματίζεται BMDCs μορφή και τα βλαστικά κύτταρα των ιστών ειδικά.

Συμπεράσματα

Εν περιλήψει, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι αν και BMDCs μπορεί να συμβάλει εξέλιξης του όγκου, είναι αντίθετα να συμβάλει στην έναρξη του όγκου

Παράθεση:. Λιν Η, Χου L, Chen L, Yu H, Wang Q, Chen P, et al. (2012) Χημικώς Διεγειρόμενη Καρκίνοι Μην προέρχονται από μυελό οστών Cells. PLoS ONE 7 (1): e30493. doi: 10.1371 /journal.pone.0030493

Επιμέλεια: Ηλιάνα Σαούλ Furquim Werneck Abdelhay, Instituto Nacional de καρκίνο, Βραζιλία

Ελήφθη: 16, Νοεμβρίου 2011? Αποδεκτές: 16 Δεκέμβρη του 2011? Δημοσιεύθηκε: 24 Γενάρη του 2012

Copyright: © 2012 Lin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη Zhejiang Provincial Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Y2100464) και το Εθνικό Key Sci-Tech Ειδικό Πρόγραμμα Ειδικών Λοιμώξεων (2012ZX10002-013). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ένα αυξανόμενο σώμα της βιβλιογραφίας δείχνει ότι οι όγκοι προέρχονται από μια μικρή μερίδα των κυττάρων, που αναφέρονται ως καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) ή καρκινικά κύτταρα έναρξη (ΤΠΕ στο ολιγοθέσιο σχολείο), επειδή τα κύτταρα αυτά φέρουν βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με χαρακτηριστικά όπως η αυτο -renewal και διαφοροποίηση [1]. Μέχρι σήμερα, έχουν ΚΕΠ δειχθεί ότι υπάρχουν σε καρκίνους του αιμοποιητικού συστήματος [2], του μαστού [3], τον εγκέφαλο [4], του προστάτη [5], γαστρικό [6], του πνεύμονα [7], του παχέος εντέρου [8], και ήπαρ [9]. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά σχετικά με την προέλευση των ΚΕΠ. Μία πιθανή προέλευση της ΚΕΠ είναι ο μυελός των οστών, όπως συνάγεται κύτταρα του μυελού των οστών (BMDCs) βρίσκονται συχνά σε ιστούς όγκων και BMDCs έχουν την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε πολλούς διαφορετικούς τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων μεσεγχυματικά κύτταρα, μυϊκά κύτταρα και επιθηλιακά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των ηπατικών κυττάρων . Πρόσφατα, οι γνώσεις μας για τη σχέση μεταξύ BMDCs και εξέλιξης του καρκίνου έχει βελτιωθεί δραματικά. Μια ενδιαφέρουσα πτυχή είναι ότι τα καρκινικά κύτταρα προσλαμβάνουν ενεργά BMDCs με τις δικές τους μικροπεριβάλλον. BMDCs σε όγκους είναι υπεύθυνοι όχι μόνο για τη φλεγμονή, αλλά και για την αγγειογένεση όγκων [10]. Τα CD45-θετικά BMDCs ανευρίσκονται συχνά στον ιστό του όγκου, όπου εκφράζουν αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα κυττάρων υποδοχέα-1 (VEGFR-1) [11], ένα βασικό υποδοχέα του VEGF. Εκτός από την φλεγμονή, αυτά τα CD45 + /VEGFR1 + κυττάρων συμβάλλουν επίσης στην αγγειογένεση όγκου. Έτσι, τα στοιχεία αποδεικνύουν ότι BMDCs παρέχουν ένα κατάλληλο μικροπεριβάλλον για τη διευκόλυνση του καρκίνου μετάσταση [12].

Ωστόσο, δεν είναι σαφές αν τα καρκινικά κύτταρα προέρχονται από BMDCs, και αυτή η υπόθεση είναι συχνά συζητηθεί. Μια πρόσφατη έκθεση διαπίστωσε ότι μετά από χρόνια

Helicobacter

λοίμωξη, BMDCs συσσωρευτεί στο γαστρικό βλεννογόνο και τελικά οδήγησε σε καρκίνο του στομάχου [6]. Επιπλέον, πρόσθετες μελέτες πρότειναν ότι ογκογόνων μεταλλάξεων των βλαστικών κυττάρων των ιστών ή περαιτέρω διαφοροποιημένα κύτταρα μπορεί να δημιουργήσει μια ομάδα αυτο-ανανέωση των κυττάρων στα οποία αυτές οι μεταλλάξεις συσσωρεύονται και τελικά οδήγησε στον καρκίνο [4], [5]. Σε μοντέλα μεταμόσχευσης μυελού των οστών, αποδείχθηκε ότι BMDCs ήταν απίθανο να είναι η προέλευση του καρκίνου του ήπατος [13] και τον καρκίνο του δέρματος [14]. Για να ελεγχθεί αν ο καρκίνος προέρχεται από BMDCs, η χημική καρκινογόνο n-νιτροζοδιαιθυλαμίνη (DEN) χρησιμοποιήθηκε για να επάγει ανάπτυξη όγκου σε ποντικούς μετά από μεταμόσχευση μυελού των οστών. Ο μυελός των οστών θηλυκών ποντικών δέκτη εξαλείφθηκε με ακτινοβολία και στη συνέχεια ανασυσταθεί με μυελό των οστών από φυσιολογικούς αρσενικούς ποντικούς. Το χρωμόσωμα Υ χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης για τον χαρακτηρισμό της προέλευση των προκαλούμενων καρκινικών κυττάρων. Είκοσι όγκων, συμπεριλαμβανομένων 12 όγκους στο ήπαρ, 6 όγκων του πνεύμονα, 1 όγκων της ουροδόχου κύστης και 1 ρινοφαρυγγικής όγκου, επιτυχία που προκαλείται. Μεταξύ αυτών των όγκων, δεν παρατηρήθηκε κλωνική επέκταση του Υ-θετικών κυττάρων (Υ +). Ο αριθμός των κυττάρων Υ + στους όγκους συσχετίζεται στενά με τον αριθμό των διηθητικών λεμφοκυττάρων. Βρήκαμε επίσης ότι οι περισσότεροι + κύτταρα Y εκφράζεται τόσο CD45 και VEGFR-1. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι, τουλάχιστον σε ζωικά μοντέλο μας, BMDCs δεν είναι η προέλευση των καρκινικών βλαστικών κυττάρων, αν και αυτές συνδέονται με φλεγμονή του όγκου και μπορεί να συμβάλλει στο σχηματισμό του όγκου νεο-σκαφών.

Αποτελέσματα

Ανίχνευση Mouse Χ και Υ χρωμοσώματα με FISH

Για την μεταμόσχευση μυελού των οστών (ΒΜΤ), κύτταρα του μυελού των οστών που συλλέγονται από αρσενικά ποντίκια 6 δότες μεταμοσχεύθηκαν σε θηλυκά ποντίκια 60 παραλήπτη. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, οι ανιχνευτές FISH υβριδοποιήθηκαν με τα δύο μετάφαση και μεσόφαση χρωμοσώματα και απέδωσε ισχυρή και ειδικά σήματα. σήματα FISH του χρωμοσώματος Υ ανιχνεύθηκαν μόνο σε κύτταρα από το μυελό των αρσενικών δότη οστών ποντικού (Εικόνα 1Β).

(Α) μεταφάσεως λεμφοκυττάρων περιφερικού αίματος από ένα θηλυκό αποδέκτη ποντικό. (Β) Ένα μεταφάσεως λεμφοκυττάρων περιφερικού αίματος από ένα αρσενικό ποντίκι δότη. λεμφοκύτταρα (C) του περιφερικού αίματος από ένα θηλυκό αποδέκτη ποντικό μετά ΒΜΤ. Ένα θηλυκό λεμφοκυττάρων υποδεικνύεται με ένα βέλος. κύτταρα μυελού (D) Bone από ένα θηλυκό αποδέκτη ποντικό μετά ΒΜΤ. Ένα θηλυκό κυττάρων μυελού των οστών υποδεικνύεται με ένα βέλος. Μεγέθυνση, × 100 (Α και Β) ή × 40 (Γ και Δ). Κλίμακα μπαρ, 20 μm.

Η

Μεταμόσχευση Μυελού των Οστών

Όλα τα ποντίκια παραλήπτη επιβίωσαν της ΒΜΤ. Το συνολικό επίπεδο της μεταμόσχευσης ήταν 82,5 έως 94,5%, όπως εκτιμάται από τον υπολογισμό του ποσοστού των Υ-θετικών κυττάρων μεταξύ δύο περιφερικών λεμφοκυττάρων (Σχήμα 1 C) και τα κύτταρα του μυελού των οστών (Εικόνα 1D). Ένα σύνολο 500 κύτταρα αναλύθηκε σε κάθε δείγμα. Αυτό το αποτέλεσμα υποδεικνύει ότι οι διαδικασίες ΒΜΤ ήταν επιτυχείς.

DEN-Induced Carcinogenesis

Κατά τη διάρκεια των 30 εβδομάδων της χημικά επαγόμενης καρκινογένεσης, 34 ΒΜΤ ποντικών πέθαναν. Πλήρεις αυτοψίες πραγματοποιήθηκαν σε κάθε ένα από αυτά τα ποντίκια, με την κύρια αιτία θανάτου είναι εκτεταμένη πνευμονία και ηπατική ανεπάρκεια. Οι όγκοι επάγονται σε 20 από τα 26 που επιβιώνουν ποντίκια? Οι όγκοι αυτοί περιλαμβάνονται 12 όγκους στο ήπαρ, 6 όγκων του πνεύμονα, 1 όγκων της ουροδόχου κύστης και 1 ρινοφαρυγγικής όγκου. Αντιπροσωπευτικά εικόνες των πνευμόνων και του ήπατος όγκων δείχνονται στο Σχήμα 2Α και 2Β, αντίστοιχα. Αυτές οι όγκοι αποκόπηκαν, ενσωματωμένο σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και ιστολογικά χαρακτηρίζεται από τη χρήση Η &? Ε. Από τις 6 προκάλεσε καρκίνους του πνεύμονα, 4 χαρακτηρίστηκαν ως καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων, και τα υπόλοιπα 2 χαρακτηρίστηκαν ως αδενοκαρκίνωμα (Σχήμα 2C). Όλες οι 12 όγκοι ήπατος χαρακτηρίστηκαν ως ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (Εικόνα 2D). Τόσο η κύστη (Εικόνα 2Ε) και ρινοφαρυγγικής καρκίνους (Σχήμα 2F) χαρακτηρίστηκαν ως ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα.

(Α) Μικτό παθολογία του εκπροσώπου του καρκίνου του πνεύμονα. (Β) Ακαθάριστο παθολογία του εκπροσώπου του καρκίνου του ήπατος. Αντιπροσωπευτικά Η &? Ε τομές χρώση για αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (C), ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (D), πλακώδες καρκίνωμα της ουροδόχου κύστης (Ε), και ρινοφαρυγγικού καρκίνου (F). Μεγέθυνση, χ 20 (Γ, Δ, Ε, και F). Κλίμακα μπαρ, 50 μm.

Η

Διανομή BMDCs στο DEN-Induced όγκοι

Για να διερευνηθεί κατά πόσο οι καρκίνοι DEN που προκαλείται προήλθε από το μυελό των οστών, χρησιμοποιήσαμε FISH να προσδιοριστεί το ποσοστό των Υ -θετικό κύτταρα (Y +). Σε κάθε περίπτωση, 500-5000 κύτταρα μετρήθηκαν για να υπολογιστεί το ποσοστό των κυττάρων Υ + σε δείγματα όγκων. Σε όλους τους όγκους DEN-επαγόμενη, η συχνότητα των Y + κυττάρων ήταν 0.2-0.6% τους καρκίνους του ήπατος (Σχήμα 3Β και 3C), 0-0.3% κατά τους καρκίνους του πνεύμονα (Σχήμα 4), 0,6% στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης (Σχήμα 5 ) και 1% στην ρινοφαρυγγική καρκίνου (Σχήμα 6). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι συχνότητες των κυττάρων Υ + ήταν εξαιρετικά υψηλά στους ιστούς που περιβάλλουν τον όγκο, όπου ένα μεγάλο ποσοστό των διηθητικών φλεγμονωδών κυττάρων και ινοβλαστών διαμείνει. Η συχνότητα των κυττάρων Υ + στον ιστό που περιβάλλει τον όγκο ήταν 30-50% στους όγκους του ήπατος (Εικόνα 3Β, 3C), 3-8% στους όγκους του πνεύμονα (Σχήμα 4), 40% στον όγκο της ουροδόχου κύστης (Σχήμα 5) και 70% στην ρινοφαρυγγική όγκου (Σχήμα 6). Ωστόσο, μια σημαντική συχνότητα των κυττάρων Υ + δεν παρατηρήθηκε σε φυσιολογικούς ιστούς παρακείμενα στις ήπατος, των πνευμόνων και της ουροδόχου κύστης όγκων. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η κυτταρική προέλευση των καρκίνων δεν είναι ο μυελός των οστών

(Α) Ένα αντιπροσωπευτικό Η &?. Ε χρώση εικόνα καταδεικνύοντας τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του ιστού HCC και τον περιβάλλοντα ιστό. (Β) Ένα αντιπροσωπευτικό FISH εικόνα της ίδιας περιοχής από μία γειτονική σειριακή τομή κατασκευάζεται από τη σύντηξη αρκετών εικόνων. (C) μεγέθυνση των περιοχών από τον ιστό που περιβάλλει τον όγκο (Α) και ο ιστός του όγκου (β) στο (Β). Τ, καρκινικό ιστό. Μεγέθυνση, × (amp A &? Β) 20. Κλίμακα μπαρ, 20 μm

Η

(Α) H & amp?. Ε χρώση εικόνα που παρουσιάζουν τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του πνεύμονα και το γύρω φυσιολογικό ιστό. Μεγέθυνσης, × 20. (Β) Η &? Χρώση Ε (άνω) και FISH εικόνας (κατώτερο) μιας περιοχής μεγέθυνσης στο (Α). Τ, καρκινικό ιστό? NT, μη καρκινικό ιστό. Μεγέθυνση, × 40. Κλίμακα μπαρ, 20 μm

Η

(Α) H & amp?. Ε χρώση εικόνα που παρουσιάζουν τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του NPC και τον περιβάλλοντα ιστό. Μεγέθυνσης, × 20. (Β & amp? C) H & amp? Χρώση Ε (άνω) και FISH εικόνα (κάτω) από τους μεγεθύνονται περιοχές (Α). Τ, καρκινικό ιστό. Μεγέθυνση, × 40. Κλίμακα μπαρ, 20 μm

Η

(Α) H & amp?. Ε χρώση εικόνα που παρουσιάζουν τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά του καρκίνου της ουροδόχου κύστης και τον περιβάλλοντα ιστό. Μεγέθυνσης, × 20. εικόνες (Β) FISH του μεγεθύνονται περιοχών στο (Α). Τ, καρκινικό ιστό? NT, μη καρκινικό ιστό. Η μεγέθυνση, × 40.

Η

Για να αξιολογηθεί το κατά πόσον BMDCs μπορούν να συντηχθούν με κύτταρα όγκου, αναλύσαμε τον αριθμό των Χ και Υ σήματα BMDCs στους όγκους και περιβάλλοντες ιστούς τους. Δεν κύτταρα σύντηξης που προέρχονται από καρυότυπο (XXY, XXXY) βρέθηκαν στη μελέτη μας. Αυτό το αποτέλεσμα είναι σύμφωνο με πολλά άλλα ευρήματα [6], [11], [15], [16] και προτείνει ότι η σύντηξη των κυττάρων δεν είναι η κύρια συμβολή της BMDCs σε κακοήθη παθογένεια.

Συζήτηση

Αν και η υπόθεση του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων παραμένει συζητήθηκε, πολλοί επιστήμονες πιστεύουν ότι οι καρκίνοι περιέχουν ένα μικρό αριθμό των καρκινικών βλαστικών κυττάρων (ΚΕΠ). Αυτά τα ΚΕΠ είναι σε θέση να αυτο-ανανέωση, τη διαφοροποίηση, και να αντισταθούν χημειοθεραπεία και έτσι να διατηρήσει την ανάπτυξη του καρκίνου. Μέχρι σήμερα, η προέλευση των ΚΕΠ παραμένει ένα μυστήριο. Τουλάχιστον τρεις πιθανές προελεύσεις των ΚΕΠ έχουν προταθεί, συμπεριλαμβανομένης 1) ιστο-ειδικά βλαστικά κύτταρα [17]? 2) BMDCs [6], [15]? και 3) τα κύτταρα που προέρχονται από τη σύντηξη BMDCs και ιστο-ειδικό προγονικών ή βλαστικών κυττάρων [18] – [20]. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μια μεταμόσχευση μυελού των οστών ζωικό μοντέλο για τη διερεύνηση της προέλευσης των ΚΕΠ σε χημικά επαγόμενη (DEN) όγκους. DEN είναι καρκινογόνος που μπορεί να επάγει όγκους σε διάφορα όργανα, συμπεριλαμβανομένου του ήπατος και του δέρματος και στο γαστρεντερικό, το αναπνευστικό και αιμοποιητικών συστημάτων σε ποντικούς. Όταν μεταβολίζεται, DEN σε μετατρέπεται σε ένα ηλεκτρόφιλο ethyldiazonium ιόν που μπορεί να αντιδράσει με βάσεις του DNA και ενώσεις προσθήκης μορφή και έτσι μπορεί να προκαλέσει μεταλλάξεις του DNA και τα διαλείμματα κλώνου που συμβάλλουν τελικά στην παθογένεση [21]. Στο μοντέλο μας, χρησιμοποιήσαμε μια υψηλή δόση του DEN (60 ppm) στο πόσιμο νερό για 12 εβδομάδες για να αυξήσει τη συχνότητα και συντόμευση της περιόδου του σχηματισμού όγκου. Χρησιμοποιώντας αυτή τη στρατηγική, οι όγκοι επιτυχώς προκαλείται στο ήπαρ, πνεύμονα, της ουροδόχου κύστης και του ρινοφάρυγγα.

BMDCs έχουν την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε επιθηλιακά κύτταρα κατά την επισκευή των ιστών σε πολλά όργανα, συμπεριλαμβανομένου του ήπατος [22], [23] , τους πνεύμονες, το δέρμα, τα μάτια, γαστρεντερική οδό και τα νεφρά [24]. Ωστόσο, εάν και πώς BMDCs ευθύνονται για την επιδιόρθωση των ιστών συζητείται ακόμα. Παρά το γεγονός ότι ο αριθμός των BMDCs ήταν μεταβλητή, οι περισσότεροι δημοσιεύσεις δείχνουν ότι BMDCs προσλήφθηκαν στις περιοχές βλάβης των ιστών [25] – [28], ενώ άλλες έκθεση δημοσίευση ότι BMDCs δεν ανιχνεύθηκαν στα μοντέλα που χρησιμοποιούνται [29], [30]. Στο ήπαρ ποντικού και τα μοντέλα του παγκρέατος όγκων, οι πιο προχωρημένους όγκους είχαν μεγαλύτερη τάση να προσλάβει BMDCs [31]. Στο μοντέλο μας, βρήκαμε ότι τα ποσοστά BMDCs τόσο του όγκου και των φυσιολογικών ιστών ήταν πολύ χαμηλή (& lt? 1%)? Ωστόσο, BMDCs βρέθηκαν στον ιστό που περιβάλλει τον όγκο. Αυτή η περιοχή είναι infilitrated με φλεγμονώδη κύτταρα, υποδηλώνοντας ότι αυτές οι BMDCs συνδέθηκαν με φλεγμονή. Το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει ότι BMDCs ήταν λιγότερο πιθανό να μετατραπεί σε κακοήθη κύτταρα, καθώς κανένας από τους όγκους στο μοντέλο μας περιέχονται συγκεντρωμένα Y + κύτταρα.

Πρόσφατα ευρήματα έδειξαν ότι BMDCs μπορεί να ενσωματώσει στο συκώτι και τα έντερα μέσω σύντηξης κυττάρων [18] – [20], η οποία αύξησε την πιθανότητα ότι BMDCs μπορεί να παίζει κάποιο ρόλο στην αναγέννηση και ογκογένεση με σύντηξη με προγονικά ή βλαστικά κύτταρα του οργάνου-στόχου. Ωστόσο, πολλές εκθέσεις υποστηρίζουν ότι δεν υπάρχουν σαφείς αποδείξεις για να αποδείξει ότι η σύντηξη των κυττάρων λαμβάνει χώρα μεταξύ BMDCs και κύτταρα-στόχους οργάνων στα μοντέλα τους [6], [11], [15], [16]. Στην παρούσα μελέτη, επιβεβαίωσε την έλλειψη στοιχείων που να αποδεικνύουν τη σύντηξη των κυττάρων τόσο σε όγκους και σε περιβάλλοντα φυσιολογικό ιστό με FISH. Αξίζει να σημειωθεί ότι, αν και BMDCs βρέθηκαν ενσωματωθεί στο εντερικό αδένωμα σε APC μεταλλαγμένη πολλαπλούς εντερικούς ποντίκια νεοπλασία, κανένα από τα αδενώματα πανταχού αποτελείτο από BMDCs [20], υποδηλώνοντας ότι ο μηχανισμός με τον οποίο BMDCs συμβάλλουν στην παθογένεση δεν ήταν πιθανό να είναι κυτταρική σύντηξη. Εν περιλήψει, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι αν και BMDCs μπορεί να συνεισφέρει στην εξέλιξη του όγκου, η πιθανότητα ότι BMDCs είναι η προέλευση του ίδιου του όγκου είναι εξαιρετικά χαμηλή.

Υλικά και Μέθοδοι

Μεταμόσχευση Μυελού των Οστών (ΒΜΤ )

έξι έως οκτώ εβδομάδων αρσενικά και θηλυκά C57BL /6J ποντίκια αγοράστηκαν από το Πρότυπο Κέντρο Έρευνας ζώων του Πανεπιστημίου Nanjing (Nanjing, Κίνα). Τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος, καθώς και η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Zhejiang University (ID Έγκριση: SYXK2004-0050). Για την ΒΜΤ, η συνολική του μυελού των οστών απομονώθηκε από τα μηριαία οστά και κνημιαία οστά αρσενικών δότη ποντικών, πλύθηκε, λειοτριβήθηκε χρησιμοποιώντας μια βελόνα 20-gauge και διέρχονται μέσω ενός 40-μm σουρωτήρι κύτταρο νάιλον πλέγμα (Becton Dickson, Franklin Lakes, NJ) για να παραχθεί ένα ενιαίο-κυτταρικό εναιώρημα σε PBS σε πυκνότητα 1,5 × 10

7 κύτταρα /ml. Ο παραλήπτης θηλυκούς C57BL /6J ποντικοί ακτινοβολήθηκαν με 900 rads από ένα

60Co ακτινοβολίας, ανασυσταθεί με 3 × 10

6 κύτταρα μυελού δότη μέσω ένεσης φλέβας της ουράς ή οπισθοκογχική δειγματοληψία αναισθητοποιημένων ποντικών 36 ώρες αργότερα και χρησιμοποιήθηκαν για πειράματα 4-5 εβδομάδες μετά την ανάρρωση. Για να επιβεβαιωθεί επιτυχής μεταμόσχευση κυττάρων μυελού των οστών του δότη, τον δέκτη περιφερικού αίματος και τα κύτταρα του μυελού των οστών ελήφθησαν 4 εβδομάδες μετά την ΒΜΤ και εξετάστηκαν για την παρουσία του χρωμοσώματος Υ με φθορισμό

in situ

υβριδισμός (FISH).

χημικά επαγόμενων Carcinogenesis με Ν-νιτροζοδιαιθυλαμίνη (DEN)

Περίπου 4-5 εβδομάδες μετά την ΒΜΤ, 60 ποντικοί δέκτες ταΐστηκαν DEN (60 ppm σε πόσιμο νερό, Sigma, St Louis, ΜΟ) για 12 εβδομάδων για δύο συνεδρίες με διάστημα διαχωρισμού των 2 εβδομάδων για την έναρξη της διαδικασίας της καρκινογένεσης. Τα ποντίκια που επιβίωσαν θυσιάστηκαν στις 30 εβδομάδες.

Η ιστολογική και Παθολογικής Μελέτη

όγκους DEN επαγόμενη αφαιρέθηκαν και μονιμοποιήθηκαν σε 4% φορμαλίνη για όλη τη νύχτα. Μετά την αφυδάτωση, ο ιστός του όγκου εμπεδώθηκε σε παραφίνη. Ο ιστός του όγκου σε παραφίνη εν σειρά τομές (5 μm σε πάχος) και επιλέξτε πλακίδια συνήθη χρώση με αιματοξυλίνη-ηωσίνη (Η &? Ε). Όλα τα τμήματα των όγκων εξετάστηκαν με τυφλό τρόπο από δύο έμπειρους παθολόγους.

φθορισμού

in situ υβριδισμός

Δύο βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα (BAC) κλώνοι (RP24-0090J19 επιλέχθηκαν και RP24-185C22) που περιέχει το SRY γονίδιο του χρωμοσώματος Υ ποντίκι για την ταυτοποίηση κυττάρων που προέρχονται από τα αρσενικά ποντίκια. Οι BACs που περιέχουν το θραύσμα DNA από την περιοχή ποντικού X7A.1 (RP23-0170B5 και RP23-0011C16) χρησιμοποιήθηκαν ως ανιχνευτές ελέγχου για το χρωμόσωμα Χ ποντικού. Επιλέχθηκαν τα τμήματα E-χρωματίστηκαν για ανίχνευση FISH? εγκλεισμένα σε παραφίνη τομές ιστών δίπλα στο Η & amp. Τμήματα αποπαραφινοποιήθηκαν, πέψη με πρωτεάση Κ, και στη συνέχεια υβριδοποιήθηκαν με τον επισημασμένο με φθοροφόρο ανιχνευτές BAC σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως [32]. Τα αποτελέσματα FISH παρατηρήθηκαν και κατέλαβε χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού εξοπλισμένο με ένα ψυχόμενο CCD κάμερα. Τα σήματα FISH συγκρίθηκαν με την H & amp?. Ε χρώση ίδια περιοχή σε μια διαδοχική τομή όγκου

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω τον Δρ Μέι Jin και ο Δρ Jing-Yao Xu για την εμπειρία τους κατά την αναθεώρηση των τμημάτων του όγκου.