Αφηρημένο

Σκοπός

Αν και η χειρουργική εκτομή είναι ο ακρογωνιαίος λίθος της θεραπείας του καρκίνου, τοπικές και απομακρυσμένες υποτροπές εξακολουθούν να επηρεάζουν αρνητικά την έκβαση σε ένα σημαντικό ποσοστό ασθενών. Απόδειξη ότι μια εναλλακτική στρατηγική debulking περιλαμβάνουν εκτομή ραδιοσυχνότητας (RFA) επάγει ανοσία κατά του όγκου ώθησε την τρέχουσα έρευνα της αποτελεσματικότητας της εκτέλεσης RFA πριν τη χειρουργική εκτομή (προ-resectional RFA) σε ένα προκλινικό μοντέλο ποντικού.

Πειραματικός σχεδιασμός

Η θεραπευτική αποτελεσματικότητα και συστημικές ανοσοαποκρίσεις αξιολογήθηκαν μετά από προ-resectional θεραπεία RFA της CT26 αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου ποντικών.

Αποτελέσματα

Η θεραπεία με προ-resectional RFA καθυστερήσει σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου και τη βελτίωση της συνολική επιβίωση σε σύγκριση με την εικονική χειρουργική επέμβαση, η RFA, ή εκτομή μόνο. Ποντίκια στην προ-resectional ομάδα RFA που πέτυχαν πλήρη ανταπόκριση αποδεικνύεται ανθεκτική αντικαρκινική ανοσία κατά του όγκου εκ νέου πρόκληση. Η αποτυχία να επιτευχθεί ένα θεραπευτικό όφελος σε ανοσοανεπαρκείς ποντικούς επιβεβαίωσε ότι ο έλεγχος του όγκου με προ-resectional RFA εξαρτάται από μία ανέπαφη προσαρμοστική ανοσολογική απόκριση παρά μεταβολές φυσικών παραμέτρων που καθιστούν αφαιρεμένου όγκους περισσότερο επιδεκτική σε μια πλήρη χειρουργική εκτομή. RFA προκαλεί σημαντική αύξηση στην ενδοογκική CD8 διήθηση

+ Τ λεμφοκυττάρων, ενισχύοντας έτσι σημαντικά την αναλογία των CD8

+ Τ κύτταρα τελεστές: FoxP3

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα. Σημαντικά, προ-resectional RFA αυξάνει σημαντικά τον αριθμό των αντιγονο-ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα εντός του μικροπεριβάλλοντος του όγκου και του όγκου-αποστράγγιση λεμφαδένα, αλλά δεν είχε καμία επίδραση στις διήθηση από μυελοειδή προερχόμενα κατασταλτικά κύτταρα, μακροφάγα Μ1 ή μακροφάγων Μ2 στο καρκινικές περιοχές ή σε περιφερικά λεμφικά όργανα (δηλαδή, σπλήνα). Τέλος, προ-resectional RFA πρωτοπαθών όγκων καθυστέρησε την ανάπτυξη των όγκων μακρινό μέσω ενός μηχανισμού που εξαρτάται από συστημική CD8

+ Τ κυττάρων με τη μεσολάβηση αντικαρκινική ανοσία.

Συμπέρασμα

Η βελτιωμένη επιβίωση και αντικαρκινική συστημική ανοσία που προκλήθηκε από την προ-resectional RFA υποστήριξη της μεταφραστικής δυνατότητες αυτής της εισαγωγικής θεραπείας για τους ασθενείς με καρκίνο με υψηλού κινδύνου των τοπικών και συστηματικών υποτροπή

Παράθεση:. Ito F, Ku AW, Bucsek MJ, Muhitch JB, Vardam -Kaur T, Kim M, et al. (2015) ανοσοενισχυτικό Δραστηριότητα της Προ-Resectional Καυτηρίαση Προστατεύει από την τοπική και συστηματική υποτροπή σε Επιθετική ποντικών Καρκίνος του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (11): e0143370. doi: 10.1371 /journal.pone.0143370

Επιμέλεια: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Ιταλία

Ελήφθη: 10 του Φλεβάρη 2015? Αποδεκτές: 4 Νοέμβρη 2015? Δημοσιεύθηκε: 23 Νοέμβρη του 2015

Αυτό είναι ένα ανοικτό άρθρο πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 δημόσιο τομέα αφοσίωση

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση: Το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (CA79765 και AI082039 για να SS Evans? CA098156 και CA109480 να SO Gollnick? και P30CA016056 στο Roswell Park Cancer Institute)? και η Linscott Ίδρυμα Οικογένειας Tietgen Jennifer (J.J. Skitzki και S.S. Evans). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Χειρουργική παραμένει η πρώτη γραμμή θεραπείας και την καλύτερη θεραπευτική επιλογή για τους ασθενείς με καρκίνο με χειρουργήσιμη νόσο. Ο στόχος της χειρουργικής εκτομής είναι πλήρης αφαίρεση των όγκων με μικροσκοπική καρκίνο χωρίς περιθώρια. Δυστυχώς, πολλοί ασθενείς αναπτύσσουν τοπική ή συστηματική υποτροπή παρά τις προόδους στη χειρουργική τεχνική και επικουρική χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία. Στην παχέος ηπατικών μεταστάσεων, για παράδειγμα, τα ποσοστά υποτροπής είναι έως και 60% σε ασθενείς που υποβάλλονται σε δυνητικά θεραπευτική εκτομή, προφανώς λόγω μικροσκοπική υπολειμματικής νόσου ή μικρομεταστάσεων παρόντα κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης [1-3]. Αποδεικτικά στοιχεία μιας υψηλό ποσοστό υποτροπής και μεταστατική διάδοση σε ασθενείς μετά από χειρουργική επέμβαση περαιτέρω δείχνει ότι αν και συστημική αντικαρκινική ανοσία είναι εμφανής σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο, η σταθερή κατάσταση ανοσολογική απόκριση είναι ανεπαρκής για να παρέχει επαρκή έλεγχο του όγκου [4]. Μέχρι τη στιγμή που οι όγκοι είναι ανιχνεύσιμοι έχουν ήδη αναπτύξει μηχανισμούς για να ξεφύγουν από την ανοσολογική αναγνώριση και εξάλειψη [4]. Έτσι, εκτομή δείγματα όγκων συχνά δείχνουν αραιή διήθηση από CD3

+ Τ λεμφοκύτταρα, συμπεριλαμβανομένων CD8

+ κυτταροτοξικά Τ κύτταρα τελεστές, η οποία συσχετίζεται με κακή πρόγνωση σε πολλαπλούς τύπους όγκου ιστολογικά συμπεριλαμβανομένου του ορθοκολικού καρκίνου [5-7].

In situ

τεχνικές θερμικής κατάλυσης, όπως η καυτηρίαση με ραδιοσυχνότητες (RFA), έχουν αναδειχθεί ως πολλά υποσχόμενη επιλογές θεραπείας για ανεγχείρητο στερεών κακοηθών όγκων [8, 9]. RFA έχει εγκριθεί από τον Αμερικανικό Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) για την εκτομή των πρωτογενών και μεταστατικών όγκων, και έχει εφαρμοστεί στη θεραπεία μιας ποικιλίας νεοπλασμάτων συμπεριλαμβανομένων του ήπατος, του παχέος εντέρου, του πνεύμονα, του προστάτη, του νεφρού, του μαστού, του εγκεφάλου, του θυρεοειδούς, μελάνωμα, και των οστών όγκους [9]. Στη διαχείριση του καρκίνου του παχέος εντέρου ηπατικές μεταστάσεις, η RFA έχει χρησιμοποιηθεί πιο συχνά

μέσω

ανοικτή, λαπαροσκοπική, ή διαδερμική προσεγγίσεις απεικονιστικά καθοδηγούμενη και μπορεί να γίνει με γενική ή τοπική αναισθησία με ελάχιστες επιπλοκές [8, 9]. RFA χρησιμοποιείται επίσης σε συνδυασμό με χειρουργική εκτομή σε ασθενείς με πολλαπλές βλάβες του ήπατος στην οποία πλήρης εκτομή δεν είναι εφικτή λόγω της εγγύτητας του όγκου σε ζωτικές δομές (π.χ., τα αιμοφόρα αγγεία ή χοληφόρων οδών) ή ανεπαρκή παρέγχυμα για την υποστήριξη της λειτουργίας μετα-ηπατεκτομή [2, 10].

Η ενέργεια που παραδίδονται από RFA προκαλεί ιοντική διέγερση η οποία μετατρέπεται από την τριβή σε εστιακό υπερθερμία υψηλής θερμοκρασίας (≥50 ° C), προκαλώντας έτσι ανεπανόρθωτη κυτταρική βλάβη και νέκρωση [8]. Εκτός από την άμεση αυτή κυτταρομειωτική αντικαρκινική δράση, η RFA έχει δειχθεί ότι προκαλούν ανοσοτροποποιητικές επιδράσεις σε προκλινικές και κλινικές μελέτες [8, 11]. Σε αντίθεση με χειρουργική εκτομή, το κατεστραμμένο ιστό όγκου μετά από RFA παραμένει

in situ

και παρέχει μια πηγή αντιγόνων όγκων. Αυτά τα αντιγόνα παραλαμβάνεται και επεξεργάζεται από τοπικές δενδριτικά κύτταρα (DC) και παρουσιάζονται σε Τ λεμφοκύτταρα σε όγκο λεμφαδένες παροχέτευσης (TdLN), οδηγώντας έτσι στην επέκταση ενός όγκου-ειδικά CD8

+ πισίνα Τ κυττάρου τελεστή [8 , 12, 13]. Συγκεκριμένα, ένα πυκνό CD3

+ διήθηση Τ κυττάρων έχει αναφερθεί σε θέσεις όγκου μετά RFA, σύμφωνα με τις τοπικές αντικαρκινική ανοσολογική αντιδραστικότητα [14, 15]. Περαιτέρω απόδειξη της RFA που προκαλείται από συστημική ανοσία πηγάζει από προκλινικές και κλινικές αναφορές abscopal αποτελέσματα που αφορούν αυθόρμητη παλινδρόμηση των μακρινών μεταστατικών βλαβών μετά την πρωτογενή εκτομή του όγκου [16-20]. Ωστόσο, η εξαρτώμενη από κύτταρα Τ κατά του όγκου ανοσοαπόκριση που δημιουργείται από RFA σε ασθενείς και μοντέλα ποντικών φαίνεται να είναι σχετικά ασθενής [11, 14, 15], και ένα σημαντικό πρόβλημα παραμένει το υψηλό ποσοστό τοπικής υποτροπής στη θέση θεραπευτικής αγωγής, ειδικά για όγκους & gt ? 3 εκατοστά ή κοντά σε μείζονα αγγειακά δίκτυα, όπου εισροή αίματος όρια θερμικής συγκέντρωση στον ιστό-στόχο μέσω των επιδράσεων της ψύκτρας [2, 8]

Οι ανησυχίες σχετικά με regrowth των όγκων στη μεταβατική ζώνη του υποθανατηφόρας υπερθερμία (≤45. ° C) που περιβάλλει την κεντρική νεκρωτική ζώνη έχουν περιορίσει τη χρήση της RFA κυρίως στην ανακούφιση ή σε ασθενείς οι οποίοι δεν μπορούν να ανεχθούν resectional χειρουργική επέμβαση. Εδώ, ελέγξαμε την υπόθεση ότι η τοπική χειρουργική έκβαση θα μπορούσε να βελτιωθεί εάν RFA χρησιμοποιήθηκε ως προ-resectional ανοσογόνος στρατηγική για την ενίσχυση ανοσία κατά του όγκου. Αναφέρουμε ότι οι τοπικές και συστημικές έλεγχο όγκου και συνολική επιβίωση ήταν σημαντικά βελτιωμένη, ως αποτέλεσμα της επαγωγής μιας CD8

+ κυττάρων Τ με τη μεσολάβηση προσαρμοστική ανοσολογική απόκριση μετά από προ-resectional RFA σε ένα μοντέλο ποντικού για καρκίνο του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

ποντίκια

Γυναίκα BALB /c και C57BL /6 ποντίκια (8-12 εβδομάδων) ήταν από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου ή Charles River. Σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια ποντικούς (CbySmn.CB17-Prkdc

scid /J SCID /BALB /c? Jackson Laboratory) και κλώνος 4 διαγονιδιακών ποντικών (CBy.Cg-

Thy1a

Tg (TCRA (C14, TcrbC14) 1Shrm /ShrmJ) που εκφράζουν έναν υποδοχέα κυτταρικής α /β Τ ειδικά για αιμοσυγκολλητίνη γρίπης (ΗΑ?. από Linda Sherman, Scripps Research Institute, La Jolla, CA) εκτράφηκαν στο πάρκο Τμήμα Roswell του Εργαστηρίου ζώων Πόρων ποντίκια διατηρήθηκαν σε παθογόνα συνθήκες χωρίς εμπόδιο. Όλα τα ζωικά φροντίδα και διαδικασίες ήταν σύμφωνα με τις θεσμικές πολιτικές για την υγεία των ζώων και την ευημερία και εγκριθεί από την φροντίδα των ζώων και τη χρήση επιτροπής Roswell Park Cancer θεσμική (IACUC).

Μεταμοσχεύσιμα μοντέλα όγκων και CD8

+ Τ κυττάρων εξάντληση

όγκου (κύτταρα αδενοκαρκινώματος κόλου CT26 και το παράγωγο CT26-HA επιμολυσμένα με ένα γονίδιο που κωδικοποιεί αιμοσυγκολλητίνης [21, 22] συγγενή προς BALB /c ή SCID ποντίκια? Β16.Ρ10 μελάνωμα συγγενικά προς C56BL /6 ποντίκια) καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% θερμο-απενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό (Life Technologies, Carlsbad, CA), 2 mM L-γλουταμίνη, 100 U /ml πενικιλλίνη, 50 μg /ml στρεπτομυκίνη, 50 μΜ β-μερκαπτοαιθανόλη, και G418 (400 μg /ml? για CT26-HA). Κύτταρα όγκου (10

6 για CT26 ή 3×10

5 για Β16? σε 100 μι PBS) εγχύθηκαν υποδορίως στο πλευρό συγγενικών ποντικών, εκτός εάν υποδεικνύεται διαφορετικά. Οι όγκοι των όγκων (που κυμαίνονται από 150-500 mm

3) δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων αποδίδεται κατά το χρόνο της αρχικής θεραπείας. Οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν με τον προσδιορισμό του μήκους του μικρού (

l

) και μακρά (

L

) διάμετρο (όγκος = l

2 x L /2). Πειραματικό τελικά σημεία επιτεύχθηκαν όταν οι όγκοι υπέρβαση διαμέτρου 20 mm ή όταν τα ποντίκια έγιναν ετοιμοθάνατα και έδειξε σημάδια πλευρικής recumbancy, καχεξία, η έλλειψη απάντησης σε επιβλαβή ερεθίσματα, ή παρατηρήσιμη απώλεια βάρους. Η ομόπλευρη βουβωνικό κόμβος ταυτοποιήθηκε ως το TdLN-δείκτες με εντοπισμό του Evans blue χρωστικής 1 λεπτό μετά την ένεση της βαφής κοντά στο s.c. θέση του όγκου. Για το μοντέλο τέλος μετάσταση στάδιο πνεύμονα, 10

5 CT26 κύτταρα ενέθηκαν στην φλέβα της ουράς 7 ημέρες μετά τον αρχικό, s.c. ένεση του όγκου? 30 ημέρες αργότερα, CT26 οζίδια απαριθμήθηκαν από τους ερευνητές γνώριζαν την ταυτότητα δείγμα στη διογκωμένη πνεύμονες χρωματίστηκαν με ένα διάλυμα 15% της Ινδίας μελάνι, και λευκασμένο με διάλυμα Fekete του. Για εξάντληση των CD8

+ Τ κύτταρα in vivo, τα ποντίκια ενέθηκαν ί.ρ. με 400 μg αντι-CD8α mAb (53-6.72, BioXCell) κάθε 7 ημέρες αρχίζουν θεραπεία αμέσως μετά την RFA. CD8

+ εξάντληση των κυττάρων Τ επιβεβαιώθηκε με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας αντι-CD8β mAb (YTS156.7.7, Pe-Cy7) (BioLegend)? & Lt? 2% των CD3

+ Τ κύτταρα CD8

+ μετά από θεραπεία με αντίσωμα

RFA

Ποντίκια αναισθητοποιούνται με εισπνεόμενη ισοφλουράνη αερίου (4% ισοφλουράνιο για επαγωγή αναισθησίας?. 1.5% για τη συντήρηση). Οι ποντικοί τοποθετούνται επιρρεπείς σε επιθέματος γείωσης της ηλεκτρικής ενέργειας αγώγιμο, και η περιοχή του όγκου ήταν υγρό με απεσταγμένο νερό πριν από την εισαγωγή του καθετήρα StarBurst SDE (AngioDynamics) στο κέντρο του όγκου. Maintining θερμοκρασία άκρο του καθετήρα 90 ° C για 1 λεπτό χρησιμοποιώντας τη γεννήτρια RFA RITA 1500 (AngioDynamics) προσομοίωση κλινικό περιβάλλον επανεμφάνισης όγκου μετά RFA, όπως περιγράφηκε προηγουμένως από τους Johnson et al [23]. Sham RFA εκτελέστηκε με την εισαγωγή του καθετήρα μέσα στον όγκο χωρίς ηλεκτρικό ρεύμα. Για πρόσθετες ομάδες ελέγχου RFA χορηγήθηκε στο δέρμα λίγο έξω από την s.c. όγκου (δηλαδή, πάνω μέρος της πλάτης). Οι ποντικοί ανακτήθηκαν σε μια θερμαινόμενη κουβέρτα και δεδομένου αναλγητικό (βουπρενορφίνη 0,05 mg /kg σωματικού βάρους) s.c. για τον έλεγχο του πόνου.

Η χειρουργική εκτομή

Οι ποντικοί αναισθητοποιούνται με εισπνεόμενη ισοφλουράνη αέριο και οι όγκοι αποκόπηκαν με περιθώρια 1 mm γύρω από το ορατό περίγραμμα του όγκου. Περιτονίας έγινε εκτομή μαζί με όγκο (

en bloc

) σε όλες τις περιπτώσεις για την ελαχιστοποίηση υποτροπής από το βαθύ περιθώριο. Παθολογική αξιολόγηση της διεπαφής όγκου /στρωματικών κατά τη στιγμή της εκτομής σε φρουρού ποντικούς αποκάλυψε διηθητική όγκου στα σύνορα σε 40-60% των ποντικών ανεξάρτητα από το αν προ-resectional RFA χορηγήθηκε. Τομές κλείστηκαν με 4-0 Vicryl® καθ ράμμα (Ethicon, Inc., Somerville, NJ) και /ή συνδετήρες από χάλυβα πληγή που απομακρύνθηκαν σε 7-10 ημέρες. Ως χειρουργικό ελέγχου ψευδή, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε τομή 1 cm δέρμα και το κλείσιμο στο ετερόπλευρο πλευρό χωρίς χειρισμό του θέση του όγκου. Σε επιλεγμένα πειράματα, μερική εκτομή πραγματοποιήθηκε, ταξινομημένα ανά ανιχνεύσιμη μακροσκοπικές και μικροσκοπικές υπολειμματικής νόσου στην οποία αποκόπηκε ~ 50% της μάζας του όγκου. Οι ποντικοί ανακτήθηκαν σε μια θερμαινόμενη κουβέρτα και δεδομένου αναλγητικό (βουπρενορφίνη 0,05 mg /kg σωματικού βάρους) s.c. για τον έλεγχο του πόνου.

θετή μεταφορά του κλώνου 4 CD8

+ Τ κύτταρα

Τα συγκεντρωμένα σπληνοκύτταρα και κύτταρα λεμφαδένα (LN) από κλώνο 4 υποδοχέα των Τ-κυττάρων διαγονιδιακά ποντίκια θετικά εμπλουτισμένα με μαγνητική κυττάρων διαλογή χρησιμοποιώντας ένα CD8α Τ κιτ απομόνωσης κυττάρων (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Απομονωμένοι πληθυσμοί αποτελούνταν από ~ 85-90% L-σελεκτίνη

hi CD44

χαμηλές αφελής CD8

+ Τ κυττάρων όπως προσδιορίζεται ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Ισοδύναμους αριθμούς των Κλώνος 4 CD8

+ Τ κύτταρα (5-10 x 10

6) επισημαίνονται με την παρακολούθηση χρωστική (4 μΜ TRITC? Molecular Probes) [22, 24] εγχύθηκε ενδοφλεβίως σε ατομικά ποντίκια 6 ώρες μετά την RFA ή εικονική θεραπεία. TdLN και καρκινικών ιστών πάγωσαν στην βέλτιστη θερμοκρασία κοπής ένωση (Sakura Finetek).

ορού IFN-γ ανάλυση

Ο ορός αποκτήθηκε από ποντίκια 1 ημέρα και 7 ημέρες υστέρων RFA ή εικονική θεραπεία μέσω οπισθοκογχική αφαίμαξη. Τα δείγματα αποθηκεύτηκαν κατεψυγμένα στους -80 ° C έως τον ποσοτικό προσδιορισμό με εμπορικά ELISA για ΙΡΝ-γ (R &? D Systems).

Ανοσοϊστοχημεία και ανοσοφθορισμό ιστολογία

για ανοσοϊστοχημική ανάλυση, σειριακές τομές κρυοστάτη 9 μm του TdLN ή όγκου σταθεροποιήθηκαν σε ακετόνη, δεσμεύτηκαν με Superblock ρυθμιστικό διάλυμα φραγμού (Pierce), και χρωματίστηκαν με μονοκλωνικά αντισώματα αντι-ποντικού αρουραίου ειδικό για CD8α (53-6.7? BD Biosciences) [22]. Τα ανοσοσύμπλοκα έγιναν ορατά με τη χρήση των κιτ Vectastain Elite υπόστρωμα ABC και ϋΑΒ (Vector Laboratories). Για ανοσοφθορισμό ιστολογία, 9 μm κρυοτομές σταθεροποιήθηκαν στους -20 ° C σε μεθανόλη /ακετόνη (3: 1), και χρωματίστηκαν με μονοκλωνικά αντισώματα (αντι-ποντικού αντίσωμα PNAd, MECA-79? Αντι-ποντικού CD31 αντίσωμα, MEC 13.3, BD Biosciences) και δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα (Jackson ImmunoResearch) όπως περιγράφεται [22, 24]. Ψηφιακές εικόνες των ≥10 τυχαία επιλεγμένα πεδία (μονάδα επιφάνειας = 0.34 mm

2 ανά πεδίο) συνελήφθησαν από παρατηρητές τύφλωσε για να δοκιμάσετε την ταυτότητα χρησιμοποιώντας ένα Olympus BX50 μικροσκόπιο φθορισμού όρθια εξοπλισμένο με SPOT RT κάμερα (Spectra Services). Ο αριθμός τους με θετή μεταφορά κυττάρων που βρίσκονται εντός του παρεγχύματος του TdLN ή όγκων (π.χ., που ορίζεται από την τοποθεσία του φθορίζοντος επισημασμένου Τ κύτταρα εκτός PNAd

+ ή CD31

+ σκάφη, αντίστοιχα) μετρήθηκε ποσοτικά με το λογισμικό ImageJ όπως περιγράφεται [ ,,,0],21, 24, 25].

η κυτταρομετρία ροής

CT26 όγκους από 1,100-1,700 mm

3 χρησιμοποιήθηκαν για τη θεραπεία RFA, ώστε να έχουν επαρκή υπολειμματική ιστού του όγκου για την ανάλυση με κυτταρομετρία ροής . Οι όγκοι ή σπλήνες αναλύονται (Medimachine, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) και φαινοτυπική ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας πολυπαραμετρική κυτταρομετρία ροής μετά από χρώση με μονοκλωνικά αντισώματα: αντι-CD8α (53-6.7, Pe-Cy7), αντι-CD4 (RM4- 5, PerCP ή V450), αντι-CD25 (PC61, APC), αντι-L-σελεκτίνης (Mel-14, APC ή ΡΕ), αντι-CD44 (IM7, FITC), αντι-CD3 (17A2, FITC), αντι -CD11b (Μ1 /70, Pe-Cy7), αντι-Gr-1 (RB6-8C5, APC), αντι-F4 /80 (T45-2342, ΡΕ), αντι-MHC II (2G9, FITC), αντι- CD45 (30-F11, BUV395) (BD Biosciences)? αντι-FoxP3 (FJK-16, PE) (eBioscience)? αντι-CD8β (YTS156.7.7, Pe-Cy7), και αντι-CD206 (C068C2, BV421) (BioLegend). Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα LSR II ή LSRFortessa με λογισμικό FACSDiva (BD Biosciences) και το πρόγραμμα επεξεργασίας WinList (Verity Software House).

Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική σημαντικότητα της ανάπτυξης του όγκου προσδιορίστηκε με 2-way ANOVA για επαναλαμβανόμενες μετρήσεις. Επιβίωση αναλύθηκε με την μέθοδο Kaplan-Meier και οι ομάδες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία log-rank ή από τη δοκιμή Gehan-Breslow-Wilcoxon. Όλες οι άλλες διαφορές ομάδα αξιολογήθηκαν από 2-tailed αταίριαστο Μαθητή

t-test

. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SEM και

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Pre-resectional RFA βελτιώνει τον τοπικό έλεγχο του όγκου και της επιβίωσης

για να προσδιοριστεί εάν η θεραπεία RFA πριν από την χειρουργική εκτομή θα μπορούσε να μειώσει τοπική υποτροπή και να βελτιώσει την επιβίωση, χρησιμοποιήσαμε ένα μοντέλο ποντικού για αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου CT26 για να προσομοιώσουν την κλινικό περιβάλλον όπου RFA παρέχει αρχικό έλεγχο του όγκου, αλλά συχνά ακολουθείται από τοπική υποτροπή. Σε πιλοτικές μελέτες έχουμε βελτιστοποιήσει το μέγεθος του όγκου κατά τη στιγμή της αφαίρεσης, μαζί με τη θερμοκρασία και τη διάρκεια της RFA. Για τις μελέτες αυτές s.c. CT26 όγκους περίπου ισοδύναμη μεγέθους (~ 150-500 mm

3 κατ ‘όγκο) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με RFA (1 λεπτό από εκτομή στους 90 ° C) κατά την ημέρα 10 μετά την εμφύτευση. Εκτομή της ίδιας βλάβης εκτελέστηκε την ημέρα 17, όπως υποδεικνύεται στο σχηματικό δείχνεται στο Σχήμα 1Α και 1Β. Έχουμε εκλεγεί για να χρησιμοποιήσετε αυτό το χρονικό διάστημα 7 ημερών μεταξύ RFA και η χειρουργική επέμβαση για να δοθεί επαρκής χρόνος για την πρωταρχική αντικαρκινική ανοσολογική απόκριση που θα προκύψουν μετά από εκτομή [11, 13, 26]. ποντίκια ελέγχου είχαν εκτομή ή RFA μόνο την ημέρα 10 ακολουθούμενη από ψευδο-επέμβαση (εκτός της περιοχής του όγκου) κατά την ημέρα 17, ή χειρουργικές επεμβάσεις εικονική τόσο την ημέρα 10 και 17 (Σχήμα 1Α).

(Α) Ώρα χρονοδιάγραμμα που περιγράφει η διαφορετικές θεραπείες που χρησιμοποιούνται. BALB /c ποντικοί (10-12 ποντικοί /ομάδα) ενέθηκαν υποδορίως με 10

6 CT26 κυττάρων στο αριστερό πλευρό την ημέρα 0. Οι θεραπείες διεξήχθησαν 10 ημέρες μετά τον εμβολιασμό του όγκου. Πρωτογενή όγκοι αντιμετωπίζονται ως υποδεικνύεται με ψευδο-επέμβαση, εκτομή (Rxn), ή RFA τις ημέρες 10 ή 17. (Β) Σχηματική παρουσίαση αλληλουχία χορήγησης RFA (90 ° C για 1 λεπτό) 7 ημέρες πριν την χειρουργική εκτομή. καμπύλες ανάπτυξης όγκου (C) και καμπύλες επιβίωσης (D) των ποντικών που φέρουν όγκους CT26 σε διαφορετικές ομάδες θεραπείας. Στο (C), ο αριθμός των μακροχρόνια επιζώντες χωρίς υποτροπή του όγκου σε 150 ημέρες που υποδεικνύονται για κάθε πειραματική ομάδα? για (D) *

P

& lt? 0,001 για προ-resectional ομάδα RFA σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες. (Ε) Επιβίωση ποντικών (n = 9) στο προ-resectional ομάδα RFA επανα-προκλήθηκαν με 10

Τα 6 CT26 κυττάρων στον αντίπλευρο πλευρό (δεξιά) κατά την ημέρα 150. καμπύλες ανάπτυξης όγκου απεικονίζονται στο οποίο

T

= 0 αντιστοιχεί στο χρόνο της ένεσης των δευτερογενών όγκων. Ως μάρτυρας, η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε μετά τον εμβολιασμό της ίδιας δόσης των κυττάρων του όγκου σε μη-όγκου (ΝΤ) -experienced παρθένα ποντίκια BALB /c (n = 10)? *

P

& lt? 0.005 όπως προσδιορίζεται με ανάλυση Kaplan-Meier. Ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα ≥ τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Χρησιμοποιώντας αυτό το πειραματικό σχέδιο βρήκαμε ότι η επεξεργασία των CT26 με RFA και μόνο ως αποτέλεσμα 60-80% νέκρωση μεμονωμένων καρκινικών βλαβών που ακολουθείται από ≥ 75% του όγκου επανάληψης αν καμία πρόσθετη θεραπεία δόθηκε (Σχήμα 1 C). Παρομοίως, η χειρουργική εκτομή και μόνο συνδέθηκε με έναν τοπικό ποσοστό υποτροπής ≥ 75%. Σε αντίθεση, ο συνδυασμός των RFA που ακολουθείται από εκτομή καθυστερεί σημαντικά την ανάπτυξη όγκων σε σύγκριση με τις ομάδες μόνο θεραπεία ή ψευδο ομάδων ελέγχου εκτομή (Εικ 1C). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η επανεμφάνιση όγκου δεν ανιχνεύθηκε για περισσότερο από 150 ημέρες σε ~ 80% (9 από 11 ποντικοί) των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με το συνδυασμό της RFA και μετέπειτα χειρουργική επέμβαση. RFA που ακολουθείται από εκτομή περαιτέρω έδειξαν σημαντικά βελτιωμένη επιβίωση σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες σε αυτό το μοντέλο θανατηφόρου όγκου CT26 (Σχήμα 1D). Σε αυτό το πλαίσιο, η RFA που ακολουθείται από εκτομή οδήγησε σε ~ 80% των τοπικών επιβίωσης χωρίς υποτροπή σε σύγκριση με ~ 20% επιβίωση μετά από εφάπαξ θεραπεία είτε με RFA ή εκτομή και μόνο. ​​

Επιπλέον πειράματα αποκλειστεί το ενδεχόμενο ότι η παρατηρούμενη θεραπευτικό όφελος συνδυασμένων RFA και εκτομή θα μπορούσε να αποδοθεί σε

(1)

διαφορές στο συνολικό χρόνο ο ξενιστής εκτέθηκε σε αντιγόνα του όγκου σε διαφορετικές ομάδες θεραπείας (δηλαδή, 10 ημέρες για την εκτομή ακολουθούμενη από ψευδο-επέμβαση ομάδα έναντι 17 ημερών για την ομάδα εκτομή) RFA +,

(2)

πιο αποτελεσματική χειρουργική επέμβαση, λόγω της αρχικής debulking όγκου κατά τη διάρκεια της προ-resectional RFA, ή

(3)

φλεγμονή προκαλείται από καθετήρα εισαγωγής (S1 Α Σχήμα). Για τα πειράματα αυτά, παρατηρήσαμε καμία βελτίωση στην CT26 καθυστέρηση ανάπτυξης όγκου ή την επιβίωση και αν η αρχική όγκο debulking επιτεύχθηκε κατά την ημέρα 10 με μερική εκτομή (δηλαδή, 50% μείωση του όγκου του όγκου) που ακολουθείται από εκτομής εκτομή την ημέρα 17 ή μετά την απάτη RFA σε την οποία ο καθετήρας κατάλυσης εισήχθη σε όγκους χωρίς ηλεκτρικό ρεύμα (S1B και S1c σχήμα). Πρόσθετες μελέτες σε Β16 μελανώματος σε συγγενικούς ποντικούς C57BL /6 (S2A-S2C σχήμα) απέδειξε ότι το RFA στην νεοεπικουρική πριν τη χειρουργική επέμβαση έχει ένα παρόμοιο θεραπευτικό όφελος, όπως παρατηρείται για όγκων του παχέος εντέρου CT26. Έτσι, οι προστατευτικές δραστηριότητες προ-resectional RFA δεν περιορίζεται σε ένα συγκεκριμένο τύπο του όγκου ιστολογικά.

Ένα χαρακτηριστικό της προσαρμοστικής ανοσίας είναι η ανάπτυξη ανοσολογικής μνήμης ορίζεται από την ικανότητα της προηγούμενης έκθεσης σε αντιγόνα του όγκου για να προκαλέσει μια Υπενθυμίζουμε απόκριση κατά την επανέκθεση. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε αν τα ποντίκια επιβιώνουν μετά από συνδυασμό RFA και εκτομή των όγκων CT26 αναπτυχθεί αντικαρκινική δραστικότητα από τη νέα δοκιμασία μακροχρόνια επιζώντες (δηλαδή, 150 ημέρες μετά την πρωτογενή εμφύτευση του όγκου) με υποδόρια CT26 όγκου στο ετερόπλευρο πλευρό. Ίδιας ηλικίας, χωρίς θεραπεία μη-όγκου (ΝΤ) -experienced αφελή ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Όπως φαίνεται στο Σχ 1Ε, μια σημαντική καθυστέρηση στην έκφυση του CT26 όγκου παρατηρήθηκε σε ποντικούς σε νέα πρόκληση που είχαν προηγουμένως υποβληθεί σε θεραπεία με RFA που ακολουθείται από χειρουργική εκτομή. Στο σύνολό τους, τα στοιχεία αυτά είναι συνεπή με την ανάπτυξη μιας προσαρμοστικής ανοσολογικής απόκρισης μετά από προ-resectional RFA που μειώνει τοπικής υποτροπής και βελτιώνει την επιβίωση με την προώθηση μακράς διαρκείας, συστημική ανοσία.

Επιβίωση όφελος των προ-resectional RFA εξαρτάται για προσαρμοστική ανοσία

για να διερευνηθεί επίσημα αν RFA ενεργοποίηση ενός όγκου-ειδική προσαρμοστική ανοσολογική απάντηση πριν από την χειρουργική εκτομή είναι αιτιώδης για τον περιορισμό της ανάπτυξης του όγκου που εξέτασαν τις επιδράσεις αυτής της συνδυασμένης θεραπευτικής αγωγής για την εξέλιξη του όγκου CT26 σε σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια (SCID) ποντικούς που έχουν έλλειψη λειτουργικών Τ και Β κύτταρα (Σχήμα 2Α). Η επιβίωση χρησιμοποιήθηκε ως το πρωτεύον τελικό σημείο για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας, δεδομένου ανάλυση της πρωτογενούς όγκου του όγκου δεν ήταν κατατοπιστική σε ανοσοανεπαρκείς ποντικούς που συχνά υπέκυψαν στην ασθένεια διαδίδεται (δηλαδή, στο περιτόναιο), ανεξαρτήτως του πρωτογενούς μεγέθους του όγκου ή το είδος της θεραπείας. Σε έντονη αντίθεση προς όφελος επιβίωσης που παρατηρείται σε ανοσοεπαρκείς ποντικούς (Σχήμα 1D), μπορούμε απέτυχε να ανιχνεύσει κανένα πλεονέκτημα επιβίωσης σε SCID ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με συνδυασμένη RFA και εκτομή, σε σύγκριση με είτε μόνη θεραπεία (Σχήμα 2Β). Αυτή η εξάρτηση από την προσαρμοστική ανοσολογική απόκριση παρέχει επιπλέον αποδείξεις ότι το όφελος της προ-resectional RFA δεν μπορεί να εξηγηθεί αποκλειστικά με βάση τις κυτταρομειωτικών επιπτώσεις της θερμικής εκτομής.

(Α) Χρονοδιάγραμμα περιγράφοντας τις ομάδες θεραπείας. SCID ποντικοί (5 ποντικοί /ομάδα) εμφυτεύθηκαν υποδορίως με 10

6 CT26 κύτταρα σε αριστερό πλευρό την ημέρα 0. Οι ομάδες αγωγής incuded ψευδο-επέμβαση, εκτομή (Rxn), ή RFA τις ημέρες 10 ή 17. καμπύλες (Β) επιβίωση είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων? ns, δεν είναι σημαντική, όπως προσδιορίζεται από την ανάλυση Kaplan-Meier.

Η

Pre-resectional RFA αυξάνει κυκλοφορούν Th1 /CD8

+ Τ κυττάρων που κατευθύνεται κυτοκινών και η αναλογία των CD8

+ Τ κύτταρα για ρυθμιστικά Τ κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου

για να αποκτήσουν εικόνα για το ρόλο της ανοσολογικής απόκρισης στη διαμεσολάβηση της αντικαρκινική δραστικότητα των προ-resectional RFA αξιολογήσαμε κυκλοφορούντων ανοσοσυμπλεγμάτων επίπεδα κυτοκινών μετά τη χορήγηση του RFA σε όγκους CT26. Βρήκαμε μια τάση προς αύξηση των κυκλοφορούντων συγκεντρώσεων του πρωτοτύπου Th1 /CD8

+ Τ κυττάρων που κατευθύνεται κυτοκίνης IFN-γ ήδη από την 1η ημέρα μετά-RFA σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν placebo και ακόμη ισχυρότερη επαγωγή ΙΡΝ-γ ήταν εμφανής 7 ημέρες μετά τη θεραπεία RFA (Σχήμα 3Α). Αυτά τα δεδομένα είναι σύμφωνα με τις συνεισφορές των Th1 /CD8

+ Τ κυττάρων που κατευθύνεται κυτοκίνες στη δημιουργία μιας συστημικής αντικαρκινικής ανοσοαπόκρισης.

(Α) προφίλ της ΙΡΝ-γ στον ορό του CT26 ποντικούς που φέρουν όγκο σε 1 και 7 ημέρες θεραπείας μετά RFA. *

P

& lt? 0.02, εικονική σχέση με RFA. (Β) Εκπρόσωπος μικροφωτογραφίες ανοσοχρωματίστηκε ενδογενή CD8

+ Τ κύτταρα και ποσοτικοποίηση των CD8

+ διείσδυση Τ κυττάρων σε τομές ιστών όγκου 7 ημέρες μετά εικονική χειρουργική επέμβαση ή RFA. μπαρ κλίμακα, 100 μm. (C)

Αριστερό πλαίσιο

, ποσοτικοποίηση διηθητικά λευκοκύτταρα σε όγκους 7 ημέρες μετά την αγωγή με κυτταρομετρία ροής? CD8

+ Τ κυττάρων (CD3

+ CD8

+), CD4

+ Τ κυττάρων (CD3

+ CD4

+), ρυθμιστικά Τ κύτταρα (CD3

+ CD4

+ Foxp3

+ CD25

+ T

reg), μυελοειδή που προέρχονται κατασταλτικά κύτταρα (CD11b

+ Gr-1

+ F4 /80

-)? M1 (CD11b

+ Gr-1

-F4 /80

+ CD206

loMHCII

hi) και Μ2 (CD11b

+ Gr-1

-F4 /80

+ CD206

hiMHCII

lo) μακροφάγα. Τα στοιχεία είναι για 10

3 συνολικά κύτταρα σε δείγματα όγκων.

δεξί πάνελ

, αναλογία CD8

+ ενεργά Τ κύτταρα (Τ

ΕΤΑ, L-σελεκτίνη

χαμηλή CD44

hi): Τ

reg σε όγκους που καθορίζεται από τη ροή κυτταρομετρία. (D)

Αριστερό πλαίσιο

, ποσοτικοποίηση των συνολικών λευκοκυττάρων σε σπλήνες ποντικών που φέρουν όγκο στις 7 ημέρες μετά τη θεραπεία RFA με κυτταρομετρία ροής.

δεξί πάνελ

, αναλογία CD8

+ ενεργά Τ κύτταρα (Τ

ΕΤΑ, L-σελεκτίνη

χαμηλή CD44

hi): Τ

reg στο σπλήνα. Δεδομένων (Β-D) είναι αντιπροσωπευτικά των ≥ 2 ανεξάρτητων πειραμάτων (

n

= 3-5 ποντικοί ανά ομάδα)? όγκοι του όγκου κυμαίνονταν από 1,100-1,700 mm

3) κατά τη στιγμή της θεραπείας RFA. *

P

& lt? 0,05, εικονική σχέση με RFA? ns, δεν είναι σημαντική.

Η

Τα ευρήματα αυτά, σε συνδυασμό με στοιχεία για μακροχρόνιο έλεγχο του όγκου μετά από συνδυασμό RFA και τη χειρουργική επέμβαση, μας οδήγησε να υποθέσουμε ότι η ενισχυμένη τοπικό έλεγχο του όγκου μπορεί να περιλαμβάνει αλλαγές στην αναλογία των εντός του όγκου Τ κυττάρων υποσύνολα που δεν είχε διερευνηθεί προηγουμένως ακόλουθη RFA. Οι προκλινικές μελέτες σε κουνέλια ανέφεραν αυξημένη εντός του όγκου διείσδυση του CD3

+ Τ κυττάρων σε θεραπεία βλαβών μετά RFA, αν και ειδικά CD4

+ ή CD8

υποσύνολα + Τ κυττάρων δεν εξετάστηκαν [14, 27]. Κλινικές μελέτες έχουν δείξει επιπλέον αύξηση του κυκλοφορούντος όγκου-ειδικά CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) στις 4 εβδομάδες μετά τη θεραπεία RFA [15]. Αντιστρόφως, η RFA φέρεται προκαλεί μείωση των κυκλοφορούντων CD4

+ CD25

+ Foxp3

+ ανοσοκατασταλτική ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Τ

reg) 30 ημέρες μετά τη θεραπεία σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα η οποία είναι αξιοσημείωτο αφού Τ

reg εξουδετερώσει τη λειτουργία των κυτταροτοξικών CD8

+ ενεργά Τ κύτταρα [6, 28]. Επιπλέον, τα υψηλά επίπεδα κυκλοφορίας των ανοσοκυττάρων κατασταλτικής συμπεριλαμβανομένων Τ

reg ή μυελοειδή προερχόμενα καταστολέα κύτταρα (MDSC) έχουν πρόσφατα δειχθεί ότι είναι προγνωστική της υποτροπής του όγκου μετά RFA στον καρκίνο του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου (NSCLC) ασθενείς και HCC ασθενείς [29, 30]. Ωστόσο, οι επιπτώσεις αυτών των αποτελεσμάτων έχουν παραμείνει ασαφής, δεδομένου διακυμάνσεις στα κυκλοφορούντα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος δεν είναι απαραίτητα ανακλαστικά του επιπέδου τους εντός του όγκου εντοπισμού μετά RFA.

Για να προσδιορίσετε αν προ-resectional RFA επηρεάζεται εντός του όγκου διείσδυση από συγκεκριμένες υποσυνόλων ανοσοκυττάρων κατά το χρόνο της χειρουργικής εκτομής, εμείς ποσοτικοποιηθεί CD8

+ Τ κύτταρα 7 ημέρες μετά την εκτομή σε εκτομή όγκων CT26, καθώς και στη σπλήνα ως παράδειγμα ενός περιφερειακού λεμφοειδούς οργάνου το οποίο είναι ένα σημείο της ενεργοποίησης του ανοσοποιητικού συστήματος. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ελάχιστη βασική γραμμή εντός του όγκου διείσδυση από ενδογενή CD8

+ Τ κυττάρων σε ποντίκια που έλαβαν placebo (Σχήμα 3Β), σύμφωνα με τις εκθέσεις από την ομάδα μας και τους άλλους που CT26 όγκοι δεν είναι ανεκτική σε συσσώρευση έντασης Τ κυττάρων [21, 22 , 31]. Ωστόσο, μια σημαντική αύξηση της εντός του όγκου CD8

+ διήθηση των κυττάρων Τ ανιχνεύθηκε μετά τη θεραπεία RFA σε σύγκριση με τους μάρτυρες προσομοίωσης (Σχήμα 3Β). Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε περαιτέρω ότι η διείσδυση από τα CD8

+ Τ κύτταρα σε σχέση με τον συνολικό πληθυσμό εντός του όγκου των κυττάρων βελτιώθηκε σημαντικά 7 ημέρες μετά RFA ενώ η σχετική πυκνότητα του συνολικού CD4

+ Τ κυττάρων ή του CD4

+ CD25

+ Foxp3

+ T

reg υποσύνολο παρέμεινε αμετάβλητος (Σχήμα 3C)

Εμείς εξέτασε τον αντίκτυπο της RFA σε CD8

κυττάρων + Τ:. Τ

αναλογίες reg μέσα όγκων δεδομένου ότι αυτό φέρεται να είναι ένας ισχυρός προγνωστικός δείκτης του ευνοϊκού αποτελέσματος στον μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου [32]. RFA βρέθηκε να αυξάνει τη συνολική αναλογία των CD8

+ τελεστή (L-σελεκτίνη

χαμηλή CD44

hi) Τ κυττάρων: Τ

reg μέσα σε RFA θεραπεία των όγκων (Σχήμα 3C). Μία σημαντική αύξηση του CD8

+ Τ κυττάρων: αναλογία Treg παρατηρήθηκε επίσης στον σπλήνα 7 ημέρες μετά την RFA (Σχήμα 3D)? Ωστόσο, αυτή η ευνοϊκότερη αναλογία ήταν συνέπεια μιας γενικής μείωσης του ποσοστού των Τ

reg εντός του σπληνός διαμέρισμα και όχι μια αύξηση σε CD8

+ Τ κύτταρα όπως παρατηρήθηκε στο μικροπεριβάλλον του όγκου (Σχήμα 3C). Μειωμένη Τ

reg στο σπλήνα θα μπορούσε ενδεχομένως να αντικατοπτρίζει το μειωμένο φορτίο όγκου που προκύπτει από τη θεραπεία με εκτομή. Η σχετική πυκνότητα των μυελοειδή κύτταρα που εκφράζουν φαινοτυπική δείκτες για CD11b

+ Gr1

+ MDSC, CD11b

+ Gr-1

-F4 /80

+ CD206

loMHCII

hi M1 μακροφάγα, ή CD11b

+ Gr-1

-F4 /80

+ CD206

hiMHCII

lo M2 μακροφάγα υποσύνολα ήταν αμετάβλητη από τη θεραπεία RFA είτε εντός των όγκων ή της σπλήνας. (Σχήμα 3C και 3D). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι η RFA-επιφέρει αλλαγές στο ανοσοποιητικό contexture ευνοώντας Th1 /CD8

+ ενεργοποίηση των Τ κυττάρων εντός των μικροπεριβάλλον του όγκου και περιφερειακά λεμφοειδή όργανα συμβάλλουν στην βελτιωμένη τοπική και συστημική έλεγχο του όγκου μετά από χειρουργική εκτομή.

εξαρτώμενο από αντιγόνο επέκταση των CD8

+ Τ κυττάρων λαμβάνει χώρα σε όγκο λεμφαδένες παροχέτευσης και το μικροπεριβάλλον του όγκου μετά από προ-resectional RFA

αιτιολογημένη ότι η αύξηση σε CD8

+ Τ κύτταρα τελεστές ανιχνεύθηκαν σε όγκους μετά RFA θα μπορούσαν να προκύψουν από τη δημιουργία ενός αντιγόνου-ειδική προσαρμοστική ανοσολογική απόκριση, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [11, 14, 15], ή εναλλακτικά από την αύξηση της μη-αντιγόνου-περιορισμένο εντοπισμός λόγω της οξείας φλεγμονής που επακολουθεί μετά η καταστροφική θάνατο των κυττάρων που προκαλείται από τη θερμική εκτομή. Για να γίνει διάκριση μεταξύ αυτών των πιθανοτήτων, τα ποντίκια εμφυτεύθηκαν s.c. με CT26 αδενοκαρκίνωμα κόλου ποντικού γενετική μηχανική για να εκφράζουν ένα υποκατάστατο που σχετίζεται με όγκο αντιγόνου, αιμοσυγκολλητίνη (CT26-HA), έτσι επιτρέποντας μας να παρακολουθεί ο όγκος-αντιγόνου (ΗΑ) -ειδικές CD8

+ Τ κυτταρική απόκριση. Μια δεύτερη ομάδα ποντικών εμφυτεύτηκε με την γονική γραμμή όγκου CT26 στερείται αντιγόνου ΗΑ. *

P

& lt? *

P

& lt?